КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ МЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ, ВКЛЮЧАЮЩАЯ ТАКРОЛИМУС Российский патент 2021 года по МПК A61K31/436 A61K47/06 A61K47/14 A61K9/00 A61K9/107 A61P17/00 A61P17/06 

Настоящее изобретение относится к композиции для местного применения. Конкретнее изобретение относится к композиции для местного применения, включающей такролимус, обладающей улучшенным проникновением в глубокие слои кожи, стабильностью и комплаентностью.

Атопический дерматит представляет собой распространенное, хронически рецидивирующее, воспалительное заболевание кожи. Точная причина заболевания является предметом спора, но оно характеризуется экзематозными поражениями, сухой кожей и сильным зудом (чесотка). Имеются также убедительные доказательства того, что распространенность атопического дерматита в последние годы растет. Состояние может варьироваться от легкого до тяжелого с последующим вредом для качества жизни.

Существующие программы лечения включают использование смягчающих кремов, а затем пошаговое дополнение этого другими терапиями. Обычно следующим шагом является местное нанесение мягкого кортикостероида, такого как ацетат гидрокортизона, при этом более мощные кортикостероиды используют только в случае необходимости. Однако существует ряд потенциальных недостатков, связанных с местными кортикостероидами. Эти недостатки, которые особенно относятся к более сильным кортикостероидам, могут включать истончение кожи, тахифилаксию и феномен возврата. Из-за этих и других потенциальных побочных эффектов кортикостероиды не рекомендуются для применения в области лица. Это несмотря на то, что атопический дерматит, который развивается на лице, может быть самым пагубным для качества жизни пациента.

В последнее время при лечении атопического дерматита от средней степени тяжести до тяжелого используют макролактамовые иммунодепрессанты для местного применения. В отличие от кортикостероидов, эти соединения обычно имеют хороший профиль переносимости и поэтому могут использоваться в области лица.

Такролимус относится к макролактамовым иммуносупрессорам класса аскомицинов. Что касается механизма действия, такролимус непосредственно не ингибирует клеточный процесс, а вместо этого образует комплекс со специфическим цитоплазматическим белком цис-транс-пролилизомеразой FKBP12 (также известным, как FK506-связывающий белок), членом семейства белков иммунофилинов. Именно этот образующийся комплекс впоследствии ингибирует воспалительный ответ.

В случае такролимуса, образовавшийся комплекс ингибирует кальциневрин, предотвращая дефосфорилирование ядерного фактора активированных Т-клеток (NF-АТ) и тем самым уменьшая активность генов, кодирующих IL-2 и родственные цитокины в этих клетках.

При том, что такролимус представляет явные преимущества по сравнению с кортикостероидами с точки зрения его профиля переносимости, формулирование такролимуса для местного применения оказалось сложным. Первой трудностью, которая возникает, является получение химически и физически стабильного продукта. Вторая трудность, которая возникает, заключается в обеспечении доставки достаточного количества активного вещества через внешний кожный барьер, чтобы оно было эффективным. Проникновению такролимуса препятствует его молекулярный размер (804 Да), который намного превышает общепризнанный размер для легкого проникновения 500 Да. Несмотря на то, что болезненное состояние в некоторой степени ухудшает кожный барьер, остается необходимость в стратегиях улучшения проникновения такролимуса в кожу.

В продажу были выпущены 0,03% и 0,1% безводные мази такролимуса (Протопик™ от Astellas). Оба коммерческих продукта содержат полярный растворитель (пропиленкарбонат), диспергированный в среде, включающей жидкий парафин, белый мягкий парафин, твердый парафин и пчелиный воск. Пропиленкарбонат действует как носитель и усилитель проникновения для лекарственных средств. Хотя растворитель служит для доставки такролимуса к более глубоким слоям кожи, он также разрушает уже поврежденный кожный барьер и, следовательно, вызывает раздражение кожи. Отсутствие воды ограничивает возможности химического распада из-за гидролиза или pH несовместимости, и окклюзионный характер основной массы эксципиентов создает высокую степень окклюзии, способствуя проникновению активного вещества. Однако, подобно большинству мазей, недостаток воды и наличие парафиновых и восковых компонентов придают лекарственным формам очень плохой эстетический профиль (S.E. Wolverton, Comprehensive Dermatologic Drug Therapy 3^rd Edition (2012), p13). Это может серьезно ограничить комплаентность.

Известно несколько отличных от мазей лекарственных форм такролимуса. Например, US 2005/0249757 раскрывает фармацевтическую композицию в виде крема, включающую макролидный иммунодепрессант, один или несколько кремообразующих агентов и эффективное количество одного или нескольких усилителей проникновения через кожу.

US 2012/0184511 раскрывает жидкую микроэмульсию макролидного иммунодепрессанта. Композиции включают высокие уровни поверхностно-активных веществ и полярных смешиваемых с водой жидкостей в качестве усилителей проникновения.

EP 2596788 раскрывает включающую кремообразную композицию типа масло-в-воде, включающую такролимус, в которой диизопропилсебацинат можно использовать в масляной фазе. Длительная стабильность композиции при повышенных температурах (например, 40°С) не раскрыта.

Несмотря на то, что известные не-мазевые лекарственные формы, вероятно, имеют лучший эстетический профиль, чем препараты Протопик™, они, как правило, не имеют такой же химической стабильности активного вещества. Кроме того, для достижения достаточного проникновения активного вещества обычно необходимо включать большое количество поверхностно-активного вещества и/или полярной смешивающейся с водой жидкости. Это проиллюстрировано в US 2005/0249757, US 2012/0184511 и EP 2596788. Из-за большого количества таких компонентов эти не-мазевые лекарственные формы имеют тенденцию к раздражению кожи.

Следовательно, одной целью настоящего изобретения является обеспечение композиции, которая может доставлять такролимус в кожу, с лучшими органолептическими свойствами, чем композиции предшествующего уровня техники, являясь при этом настолько щадящей для кожного барьера, насколько это возможно. Другими словами, одной целью настоящего изобретения является обеспечение композиции такролимуса, имеющей лучшую комплаентность пациентов, чем композиции предшествующего уровня техники.

Альтернативной и/или дополнительной целью является обеспечение композиции такролимуса, обладающей лучшим проникновением через кожу, чем композиции предшествующего уровня техники, или, по меньшей мере, обеспечение коммерчески полезной альтернативы.

Альтернативной и/или дополнительной целью является обеспечение композиции, которая обеспечивает улучшенную химическую стабильность такролимуса по сравнению с существующими лекарственными формами.

В соответствии с первым аспектом, настоящее изобретение обеспечивает композицию для местного нанесения, включающую:

первую дисперсную фазу, включающую первое масло и такролимус;

вторую дисперсную фазу, включающую второе масло; и

дисперсионную водную среду;

где первое масло отличается от второго масла.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиции, раскрытые в настоящей заявке, в отличие от не-мазевых лекарственных форм предшествующего уровня техники, не требуют высоких уровней полярных смешивающихся с водой жидкостей или высоких уровней поверхностно-активных веществ для достижения хорошего проникновения через кожу. Это дает ряд преимуществ. Во-первых, композиция меньше раздражает кожу, обеспечивая улучшенную комплаентность пациентов. Это особенно благоприятно, когда кожа пациента уже воспаленная. Во-вторых, композиция обладает превосходной эффективностью в vivo, как испытано в модели воспаления у свиней. Более того, такролимус неожиданно обладает более высокой химической стабильностью, чем во многих существующих лекарственных формах, особенно не-мазевых лекарственных формах. Это будет объяснено более подробно ниже.

Настоящее изобретение будет описано далее. В следующих разделах различные аспекты/варианты осуществления изобретения определены более подробно. Каждый аспект/вариант осуществления, определенный таким образом, может быть объединен с любым другим аспектом/вариантом осуществления или аспектами/вариантами осуществления, если явно не указано обратное. В частности, любой признак, указанный как предпочтительный или преимущественный, может быть объединен с любым другим признаком или признаками, указанными как предпочтительные или преимущественные.

Настоящее изобретение обеспечивает композицию для местного применения. Композиция для местного применения определена в настоящей заявке как композиция, которая является подходящей для непосредственного нанесения на часть тела человека или животного. Предпочтительно, композиция является подходящей для непосредственного нанесения на кожу, например, лицо, кожу головы, ноги, конечности или туловище.

Композиция настоящего изобретения включает первую дисперсную фазу, вторую дисперсную фазу и дисперсионную водную среду. Другими словами, композиция включает дисперсию первой дисперсной фазы и второй дисперсной фазы в дисперсионной водной среде. Термин ʺдисперсная фазаʺ в контексте настоящей заявки относится к множеству дискретных областей, представляющих собой масляные капельки, которые образуют эту конкретную масляную фазу. Он не используется для обозначения одной капли масла. Фазы физически и химически различаются. Следует понимать, что первая дисперсная фаза не диспергирована во второй дисперсной фазе или наоборот. Другими словами, композиция не содержит сложную дисперсную фазу, например, как раскрыто в WO 2005/082515. Простая схематическая диаграмма, показывающая структуру композиции в соответствии с настоящим изобретением, представлена на Фиг. 1. Включение дисперсионной водной среды в композицию по настоящему изобретению позволяет обеспечить композицию в форме лосьона или крема, в противоположность мази. Таким образом, композиция по настоящему изобретению имеет улучшенный органолептический профиль по сравнению с мазями предшествующего уровня техники, тем самым улучшая комплаентность пациентов. Предпочтительно, композиция представлена в форме лосьона или крема.

Первая дисперсная фаза и вторая дисперсная фаза включают первое масло и второе масло, соответственно. Первое масло отличается, то есть химически отлично, от второго масла. Предпочтительно, первое масло и/или второе масло представляют собой фармацевтически приемлемое масло. Примеры масел, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают кокосовое масло, сквалан, изопропилмиристат, изопропилизостеарат, изопропилпальмитат, модифицированные триглицериды, глицериды каприловой/каприновой кислоты, фракционированные триглицериды, глицерилтрикапрат, глицерилтрикапроат, глицерилтрикаприлат, глицерил- трикаприлат/капрат, глицерил- трикаприлат/капрат, глицерил- трикаприлат/капрат/лаурат, глицерил- трикаприлат/капрат/линолеат, глицерил- трикаприлат/капрат/стеарат, глицерилтрилаурат, глицерилтрилинолеат, глицерилтрилиноленат, глицерилтриолеат, глицерилтриундеканоат, глицериды линолевой кислоты, насыщенные полигликолизированные глицериды, синтетический среднецепочечный триглицерид, содержащий преимущественно C₈-C₁₂ жирнокислотные цепи, среднецепочечные триглицериды, длинноцепочечные триглицериды, модифицированные триглицериды, фракционированные триглицериды, изостеарилизостеарат, диизопропиладипат, минеральное масло, диметикон, циклометикон, гидрированный полиизобутен, гептаметилнонан и их смеси. Предпочтительно, композиция не включает восковой компонент, который является твердым при 25°C.

Должно быть понятно, что первое масло и второе масло образуют две разные дисперсные фазы. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления первое масло и второе масло являются по существу несмешиваемыми. Однако в равной степени возможно образование двух различных дисперсных фаз из двух смешивающихся или, по меньшей мере, частично смешивающихся масел. Это может быть достигнуто путем диспергирования первого масла и второго масла по отдельности в дисперсионной среде без предварительного смешивания масел. Предпочтительно, первая дисперсная фаза не включает второе масло, а вторая дисперсная фаза не включает первое масло.

Первая дисперсная фаза включает такролимус. Должно быть понятно, что термин ʺтакролимусʺ охватывает как безводный такролимус, так и такролимус гидрат. Такролимус является макролидом и относится к поликетидному классу природных продуктов. Он является иммунодепрессантом и известным средством для лечения кожных заболеваний. Источником такролимуса, используемым в настоящем изобретении, предпочтительно является безводный такролимус, хотя будет понятно, что можно использовать другие источники такролимуса, такие как такролимус гидрат. Количество такролимуса, которое должно быть включено в композиции по настоящему изобретению, определено в расчете на безводную форму такролимуса. Специалист в данной области техники сможет скорректировать количество, используемое для получения композиции, в зависимости от используемого источника для обеспечения требуемого количества в конечной композиции.

Предпочтительно, первое масло включает диизопропиладипат. Как показано в примерах, диизопропиладипат, диэтилсебацинат и дибутиладипат - все имеют одинаковый профиль растворимости такролимуса. Однако включение диизопропиладипата как части первого масла к удивлению приводит к значительно более высокой химической стабильности такролимуса, чем при включении диэтилсебацината или дибутиладипата. Не желая быть связанными теорией, считают, что две сложноэфирные связи, присутствующие во всех трех маслах, больше защищены в диизопропиладипате путем пространственного затруднения, вызванного близостью/конформацией метильных групп вблизи связи. Считают, что разрушение этой связи может затем повлиять на стабильность активного вещества, объясняя таким образом повышенную стабильность при включении диизопропиладипата. Выгодно, когда первая дисперсная фаза включает масло, обладающее высокой растворяющей способностью для такролимуса, поскольку это позволяет ограничить количество первого масла для установленной общей концентрации такролимуса. Поскольку композиции, раскрытые в настоящей заявке, содержат две дисперсные фазы, использование масла с плохой растворяющей способностью для такролимуса в первой дисперсной фазе приведет к высокому общему содержанию масла для лекарственной формы, что дает плохие, с ощущением жира, органолептические свойства. Количество первого масла имеет существенное влияние на общий уровень масла в композиции, где первое и второе масла используют в предпочтительных соотношениях. Предпочтительно, композиция включает меньше чем 1% масс. диэтилсебацината и/или меньше чем 1% масс. дибутиладипата. Предпочтительно, композиция не включает диэтилсебацинат и/или не включает дибутиладипат.

Другое масло с хорошим профилем растворимости для такролимуса представляет собой этиленгликоль салицилат. Это масло часто используется в системах предшествующего уровня техники. Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что физическая стабильность композиций по настоящему изобретению значительно выше, когда используют диизопропиладипат, чем когда используют этиленгликоль салицилат. Не желая быть связанными теорией, считают, что диизопропиладипат, который имеет более высокое logP значение, чем этиленгликоль салицилат, и поэтому является менее ʺполярнымʺ, обладает меньшей тенденцией к разделению в водной фазе. Предпочтительно, композиция включает меньше чем 1% масс. этиленгликоль салицилата в расчете на массу композиции. Более предпочтительно, композиция не включает этиленгликоль салицилат.

Предпочтительно, в дополнение к диизопропиладипату, первое масло включает триглицериды каприловой/каприновой кислоты в комбинации с изопропилмиристатом и/или изопропилпальмитатом. Альтернативно, первое масло может включать касторовое масло и/или сквалан в дополнение к диизопропиладипату. Эти масла повышают вязкость диизопропиладипата, таким образом улучшая его технологические свойства. Они также могут улучшать физическую стабильность композиции, особенно когда используют низкие уровни поверхностно-активного вещества. Предпочтительно, первое масло включает и/или состоит из диизопропиладипата и/или изопропилмиристата и/или триглицеридов каприловой/каприновой кислоты.

Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что триглицериды каприловой/каприновой кислоты и/или изопропилмиристат имеют приемлемый профиль растворимости для такролимуса, а также обеспечивают смягчающую функцию. Таким образом, особенно предпочтительно, когда первое масло включает и/или состоит из диизопропиладипата в комбинации с триглицеридами каприловой/каприновой кислоты и/или изопропилмиристатом.

Предпочтительно, первое масло включает от 10 до 40% масс. диизопропиладипата и/или от 10 до 40% масс. изопропилмиристат и/или от 20 до 80% масс. триглицеридов каприловой/каприновой кислоты, в расчете на массу первого масла. Еще более предпочтительно, первое масло включает от 20 до 30% масс. диизопропиладипата и/или от 20 до 30% масс. изопропилмиристата и/или от 40 до 60% масс. триглицеридов каприловой/каприновой кислоты, в расчете на массу первого масла. Предпочтительно, первое масло состоит из диизопропиладипата и/или изопропилмиристата и/или триглицеридов каприловой/каприновой кислоты, предпочтительно в указанных выше количествах.

Предпочтительно, второе масло включает или состоит из смягчающего масла, более предпочтительно масла, выбранного из группы, состоящей из минерального масла, диметикона, циклометикона, гидрированного полиизобутана, гептаметилнонана и смеси двух или более из вышеуказанных. Наиболее предпочтительно, второе масло включает или состоит из минерального масла. Второе масло способствует получению смягчающих свойств препарата, также обеспечивая окклюзивный слой для промотирования диффузии такролимуса. Таким образом, диффузионные свойства композиции повышаются. Предпочтительно, такролимус по существу нерастворим во втором масле. Другими словами, второе масло предпочтительно действует как нерастворяющая масляная фаза.

Предпочтительно, первая дисперсная фаза включает первое масло в количестве по меньшей мере 90% масс. в расчете на массу первой дисперсной фазы, более предпочтительно по меньшей мере 95% масс., еще более предпочтительно по меньшей мере 97,5% масс., и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% масс. Предпочтительно, первая дисперсная фаза включает не более 99,75% масс. первого масла в расчете на массу первой дисперсной фазы. Предпочтительно, первая дисперсная фаза включает такролимус в количестве 0,025-10% масс. в расчете на массу дисперсной фазы, более предпочтительно от 0,05 до 5% масс., еще более предпочтительно от 0,25 до 2,5% масс., и наиболее предпочтительно около 0,5% масс. Предпочтительно, первая дисперсная фаза состоит из первого масла и такролимуса, более предпочтительно в указанных выше количествах.

Предпочтительно, вторая дисперсная фаза включает второе масло в количестве по меньшей мере 90% масс. в расчете на массу второй дисперсионной среды, более предпочтительно по меньшей мере 95% масс., еще более предпочтительно по меньшей мере 99% масс., и наиболее предпочтительно вторая дисперсная фаза состоит из второго масла.

Предпочтительно, такролимус преимущественно находится в первой дисперсной фазе. ʺПреимущественно в первой дисперсной фазеʺ означает, что по меньшей мере 90% масс. такролимуса находится в этой дисперсной фазе, предпочтительно по меньшей мере 95% масс., и более предпочтительно по меньшей мере 99% масс. Это свойство композиции является результатом использования одного или нескольких масел в первой дисперсной фазе, которые имеют хороший профиль растворимости для такролимуса, и нерастворяющего масла во второй дисперсной фазе. Предпочтительно, такролимус является по существу растворимым в первом масле и/или по существу нерастворимым во втором масле. ʺПо существу растворимыйʺ означает имеющий растворимость по меньшей мере 0,1% масс. при 25°C, предпочтительно по меньшей мере 0,2% масс. ʺПо существу нерастворимыйʺ означает имеющий растворимость меньше чем 0,1% масс. при 25°C, предпочтительно меньше чем 0,05% масс.

В результате выбора масляных фаз дисперсионная водная среда по настоящему изобретению не должна обязательно включать высокие уровни полярных смешивающихся с водой жидкостей, таких как спирты и гликоли, для достижения эффективного проникновения через кожу или сольватации такролимуса. Эти жидкости типично требуются в качестве усилителей проникновения в традиционных лекарственных формах такролимуса. Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает меньше чем 10% масс., в расчете на массу композиции, C₁-C₄ спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната или их смесей. Другими словами, эти компоненты необязательно должны присутствовать в композиции, но, когда один или несколько из них присутствуют, общее количество этих компонентов составляет меньше чем 10% масс. в расчете на массу композиции. Более предпочтительно, композиция включает меньше чем 5% масс. в расчете на массу композиции композиции C₁-C₄ спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната или их смесей, еще более предпочтительно меньше чем 2% масс., еще более предпочтительно меньше чем 1% масс., еще более предпочтительно меньше чем 0,5% масс., еще более предпочтительно меньше чем 0,2% масс., и наиболее предпочтительно меньше чем 0,1% масс. в расчете на массу композиции. Предпочтительно, эти соединения не присутствуют в композиции.

Использование только низких уровней полярных смешивающихся с водой жидкостей (или вообще никаких) облегчается за счет использования первой и второй дисперсных фаз, описанных в настоящей зявке, и минимизирует раздражение кожи, вызываемое композицией. Это особенно выгодно, когда у пациента уже есть воспаление кожи. Тот факт, что такие низкие уровни полярных смешивающихся с водой жидкостей могут быть использованы, является неожиданным, поскольку препараты такролимуса и, в частности, не-мазевые препараты, как правило, требуют высокого уровня этих растворителей в качестве усилителей проницаемости.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество может быть включено в одну или несколько дисперсных фаз и/или дисперсионную водную среду. Подходящие поверхностно-активные вещества включают алкилполигликолевый простой эфир, алкилполигликолевый сложный эфир, этоксилированный спирт, сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты, сложный эфир полиоксиэтилена и жирной кислоты, ионное или неионное поверхностно-активное вещество, аддукт гидрированного касторового масла/полиоксиэтиленгликоля, содержащий 25-60 этокси групп, аддукт касторового масла/полиоксиэтиленгликоля, содержащий 25-45 этокси групп, сложный эфир сорбитана и жирной кислоты (например, Span 20 или Span 80), блок-сополимер этиленоксида и пропиленоксида (например, Pluronic L121 или Pluronic F68) или их смесь. Альтернативно, можно использовать полимерные поверхностно-активные вещества на основе модифицированных сшитых сополимеров акриловой кислоты, такие как Pemulen Tr-1 и Pemulen Tr-2 (Lubrizol Corporation). Должно быть понятно, что можно использовать другие подходящие поверхностно-активные вещества.

Предпочтительно, композиция включает два или больше поверхностно-активных веществ, например, первое поверхностно-активное вещество, включенное в первую и/или вторую дисперсную фазу, и второе, отличное от первого поверхностно-активное вещество, включенное в дисперсионную водную среду. Первое и второе поверхностно-активные вещества предпочтительно выбраны из перечисленных выше. Первое поверхностно-активное вещество легко растворяется или диспергируется в первом и/или втором масле, и предпочтительно выбрано из группы, состоящей из Laureth-4 (полиоксиэтилен (4) монододециловый эфир), полисорбата 80, Span 80 и смеси двух или более из вышеуказанных. Второе поверхностно-активное вещество легко растворяется или диспергируется в дисперсионной водной среде, и предпочтительно выбрано из группы, состоящей из Полисорбата 20, Pluronic L121, Pluronic F68, ПЭГ-40 гидрированного касторового масла, Span20 и смеси двух или более из вышеуказанных. Наиболее предпочтительно, первое поверхностно-активное вещество представляет собой Laureth-4 (полиоксиэтилен (4) монододециловый эфир), а второе поверхностно-активное вещество представляет собой Полисорбат 20.

Альтернативно, композиция может включать только одно поверхностно-активное вещество. В этом варианте осуществления поверхностно-активное вещество предпочтительно представляет собой полимерное поверхностно-активное вещество на основе модифицированного сшитого сополимера акриловой кислоты. Подходящими поверхностно-активными веществами являются Pemulen Tr-1 и Pemulen Tr-2 (Lubrizol Corporation). Наряду с тем, что такие поверхностно-активные вещества растворяются в первой и/или второй дисперсной фазе в процессе получения композиции, поверхностно-активное вещество распределяется между дисперсной фазой(фазами) и дисперсионной водной средой в полученной композиции.

Предпочтительно, композиция, раскрытая в настоящей заявке, имеет общее содержание поверхностно-активного вещества меньше чем 5% масс. в расчете на массу композиции, более предпочтительно меньше чем 2,5% масс., еще более предпочтительно меньше чем 2% масс., еще более предпочтительно меньше чем 1% масс., и наиболее предпочтительно меньше чем 0,5% масс. Предпочтительно, общее содержание поверхностно-активного вещества составляет по меньшей мере 0,1% масс. В контексте настоящей заявки, термин ʺобщее содержание поверхностно-активного веществаʺ относится к сумме массовых процентов всех поверхностно-активных веществ, присутствующих в композиции. Как указано выше, поверхностно-активное вещество(вещества) может быть включено в одну или несколько дисперсных фаз и/или дисперсионную водную среду.

Использование низких уровней поверхностно-активного вещества облегчается за счет использования первой и второй дисперсных фаз, описанных в настоящей заявке, и минимизирует раздражение кожи, вызываемое композицией. Это особенно выгодно, когда у пациента уже есть воспаление кожи. Тот факт, что такие низкие уровни поверхностно-активного вещества могут быть использованы, является неожиданным, поскольку типичные препараты такролимуса в форме крема (не-мазевые) нуждаются в очень высоких уровнях поверхностно-активного вещества, чтобы оно действовало как усилитель проницаемости или обеспечивало образование физически стабильного продукта.

Другим преимуществом использования предпочтительных низких уровней полярных смешивающихся с водой жидкостей и/или поверхностно-активного вещества является то, что такролимус неожиданно обладает более высокой химической стабильностью, чем в известных препаратах. Не желая связывать себя теорией, авторы настоящего изобретения считают, что полярные смешивающиеся с водой жидкости и поверхностно-активные вещества влияют на распределение такролимуса между масляной и водной фазами. Такролимус является маслорастворимым. Однако присутствие полярных смешивающихся с водой жидкостей и поверхностно-активных веществ повышает совместимость такролимуса с водной фазой. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что это может приводить к значительно большей подвеженности такролимуса водному воздействию, вызывающему его разложение. Напротив, в настоящей композиции предпочтительные низкие уровни полярных смешивающихся с водой жидкостей и/или поверхностно-активного вещества означают, что такролимус меньше поддвержен водному воздействию и, следовательно, имеет более высокую химическую стабильность.

Предпочтительно, такролимус является химически стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев при 5°C±3°C, как измерено при 60% RH±5%. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. Под ʺхимически стабильнымʺ подразумевается ВЭЖХ анализ, показывающий 100%±5%, по сравнению с измерением при t=0.

Предпочтительно, такролимус является химически стабильным в течение по меньшей мере 12 месяцев при 25°C±2°C, как измерено при 60% RH±5%. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. Также как указано выше, под ʺхимически стабильнымʺ подразумевается ВЭЖХ анализ, показывающий 100%±5%, по сравнению с измерением при t=0.

Предпочтительно, такролимус является химически стабильным в течение по меньшей мере 6 месяцев при 40°C±3°C. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. ʺХимически стабильныйʺ имеет такое же значение,как указано выше.

Предпочтительно, композиция включает от 0,005 до 2% масс. такролимуса в расчете на массу композиции, более предпочтительно от 0,01 до 1% масс., еще более предпочтительно от 0,03 до 0,5% масс., и наиболее предпочтительно около 0,1% масс. Предпочтительно, настоящее изобретение обеспечивает возможность сопоставимой нагрузки такролимуса для известных мазевых препаратов при достижении улучшенных органолептических свойств и комплаентности.

Предпочтительно, композиция включает от 5 до 40% масс. первой дисперсной фазы в расчете на массу композиции, предпочтительно от 10 до 30% масс., более предпочтительно от 10 до 25% масс., еще более предпочтительно от 15 до 25% масс. и наиболее предпочтительно около 20% масс.

Предпочтительно, композиция включает от 5 до 40% масс. второй дисперсной фазы в расчете на массу композиции, предпочтительно от 10 до 30% масс., более предпочтительно от 10 до 25% масс., еще более предпочтительно от 15 до 25% масс., и наиболее предпочтительно около 20% масс. К удивлению, проникновение лекарственной формы максимизируется, когда количество второй дисперсной фазы относительно низкое. Это продемонстрировано в in vitro модели в примерах.

Предпочтительно, первое масло присутствует в количестве от 5 до 40% масс. в расчете на массу композиции, более предпочтительно от 10 до 30% масс., еще более предпочтительно от 10 до 25% масс., еще более предпочтительно от 15 до 25% масс., и наиболее предпочтительно около 20% масс. Предпочтительно, второе масло присутствует в количестве от 5 до 40% масс. в расчете на массу композиции, более предпочтительно от 10 до 30% масс., еще более предпочтительно от 10 до 25% масс., еще более предпочтительно от 15 до 25% масс., и наиболее предпочтительно около 20% масс.

Предпочтительно, композиция имеет массовое отношение второго масла к первому маслу от 1:3 до 3:1, более предпочтительно от 1:2 до 2:1, еще более предпочтительно от 2:3 до 3:2, и наиболее предпочтительно около 1:1. Как продемонстрировано в примерах, авторы настоящего изобретения обнаружили, что отношение второго масла к первому маслу не должно быть слишком высоким, если проникновение лекарственной формы должно быть максимизировано. Это продемонстрировано в in vitro модели в примерах.

Предпочтительно, композиция включает по меньшей мере 10% масс. воды в расчете на массу композиции, предпочтительно по меньшей мере 20% масс., более предпочтительно по меньшей мере 30% масс., еще более предпочтительно по меньшей мере 40% масс., и наиболее предпочтительно по меньшей мере 50% масс. Предпочтительно, композиция включает не более 70% масс. воды в расчете на массу композиции. Отличная растворимость такролимуса в первой дисперсной фазе означает, что можно использовать относительно высокие уровни воды, не вызывая чрезмерного водного воздействия на активное вещество. Относительно высокие уровни воды обеспечивают меньшее ощущение замаслянности кожи, еще более улучшая комплаентность.

Предпочтительно, композиция включает не более двух дисперсных фаз. Предпочтительно, композиция не включает никаких масел помимо первого и второго масел, описанных в настоящей заявке.

Предпочтительно, композиция дополнительно включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению имеет средний диаметр капель (то есть, диаметр капель дисперсной фазы) от 1 до 30 мкм, предпочтительно от 1 до 20 мкм. Такие диаметры капель отличаются от микроэмульсий, которые типично имеют средний диаметр капель от 1 до 100 нм. В контексте настоящего изобретения, диаметр капель измеряют с использованием лазерного дифракционного аализатора размеров частиц Malvern Mastersizer 2000.

Композиция по настоящему изобретению может быть в форме макроэмульсии. Макроэмульсии известны из уровня техники и отличаются от микроэмульсий тем, что они имеют бóльший средний диаметр капель. Кроме того, в отличие от микроэмульсий, макроэмульсии термодинамически нестабильны. Как результат этой относительной термодинамической нестабильности, макроэмульсии типично получают способом, отличным от получения микроэмульсий. Например, для образования макроэмульсии обычно требуется перемешивание/сдвиговое усилие, тогда как микроэмульсии эффективно образуются спонтанно.

Альтернативно, композиция по настоящему изобретению может быть в форме полиафронной дисперсии. Полиафронные дисперсии известны из уровня техники и раскрыты в следующей справочной литературе Sebba: Sebba: "Biliquid Foams", J. Colloid and Interface Science, 40 (1972) 468-474 и "The Behaviour of Minute Oil Droplets Encapsulated in a Water Film", Colloid Polymer Sciences, 252 (1979) 392-396, Hicks "Investigating the Generation, Characterisation, and Structure of Biliquid Foams", PhD Thesis, University of Bristol, 2005, Crutchley "The Encapsulation of Oils and Oil Soluble Substances Within Polymer Films", PhD Thesis, The University of Leeds, 2006 и Lye and Stuckey, Colloid and Surfaces, 131 (1998) 119-136. Афроны также раскрыты в US-A-4486333 и WO 97/32559. Подходящие способы получения полиафронных дисперсий описаны в WO 03/064024.

Предпочтительно, композиция находится в форме лосьона или крема. Лосьоны и кремы в контексте настоящего изобретения следует отличать, например, от пен для бритья, которые имеют гораздо более высокое содержание поверхностно-активного вещества, чтобы получить желаемую пену при использовании. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что использование двух дисперсных фаз, как описано в настоящей заявке, позволяет обеспечить физически и химически стабильную композицию такролимуса в форме лосьона или крема с хорошей переносимостью и органолептическими свойствами, хорошей эффективностью и низким уровнем раздражения.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению диспергируется в воде. Предпочтительно композиция по настоящему изобретению может быть разбавлена в воде. Это увеличивает гибкость использования изобретения, например, что касается улучшения нанесения композиции на кожу головы через волосы, оставляя волосы влажными, или промывки препарата с любой поверхности, на которую он был нанесен, при желании или необходимости, или легкого удаления путем смывания продукта с места случайного загрязнения одежды. Эти преимущества улучшают ощущения пользователей в процессе использования и улучшают комплаентность.

Предпочтительно, композиция имеет pH от 3,5 до 6, более предпочтительно от 4 до 5,5, еще более предпочтительно от 4,5 до 5,25, и наиболее предпочтительно от 4,5 до 5. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что при контролировании pH композиции в этих пределах улучшается стабильность такролимуса и композиции в целом. Это удивительно, поскольку в предшествующем уровне техники обычно используют низкое значение pH (см., например, US 2011/0201639 и US 8574562). Должно быть понятно, что можно использовать любую подходящую кислоту или основание для доведения pH до подходящего значения или диапазона pH. Выгодно и предпочтительно стабилизировать pH композиции путем включения подходящего буфера в дисперсионную водную среду. Подходящие буферные системы, имеющие pH в определенном диапазоне, должны быть известны специалистам в данной области.

Предпочтительно, композиция является физически стабильной в течение по меньшей мере 12 месяцев при 5°C±3°C, как измерено при 60% RH±5%. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. ʺФизически стабильнаяʺ означает, что композиция выглядит как гомогенный крем, без каких-либо явных существенных изменений реологии или внешнего вида от t=0.

Предпочтительно, композиция является физически стабильной в течение по меньшей мере 12 месяцев при 25°C±2°C, как измерено при 60% RH±5%. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. Аналогично вышеуказанному, ʺфизически стабильныйʺ означает, что композиция выглядит как гомогенный крем, без каких-либо явных существенных изменений реологии или внешнего вида от t=0.

Предпочтительно, такролимус является физически стабильным в течение по меньшей мере 6 месяцев при 40°C±3°C, как измерено при 60% RH±5%. Стабильность измеряют после хранения в герметично закрытом сосуде из темного стекла. Сосуд запечатывают на воздухе. ʺФизически стабильныйʺ имеет такое же значение, как указано выше.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению дополнительно включает гелеобразующий агент и/или модификатор реологии, такой как модификатор вязкости. Гелеобразующий агент, например, может быть выбран из альгинатных камедей или их солей, гуаровой камеди, камеди рожкового дерева, ксантановой камеди, аравийской камеди, желатина, гидроксиметилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксипропилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы или ее солей, бентонитов, алюмосиликатов магния, "Карбомеров" (соли сшитых полимеров акриловой кислоты) или глицерилполиметакрилатов или их дисперсий в гликолях. Должно быть понятно, что можно использовать другие подходящие гелеобразующие агенты. Кроме того, было обнаружено, что некоторые из гелеобразующих агентов (например, карбомеры) также могут функционировать как химические буферные агенты, предотвращая, таким образом, нежелательные изменения pH композиции в процессе хранения и использования. Когда используют модификатор вязкости, он предпочтительно представляет собой полимерный целлюлозный загуститель. Включение гелеобразующего агента и/или модификатора реологии обеспечивает дополнительную стабильность против расслоения и обеспечивает равномерное распределение концентрации активного вещества по всей композиции. Использование этих компонентов описано в WO97/32559. Выбор гелеобразующих агентов/загустителей также обеспечивает возможность контроля изменения вязкости лекарственной формы от жидкого лосьона, который является свободнотекучим, до густого крема с существенным сопротивлением текучести.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению включает от 0,05 до 5,0% масс. гелеобразующего агента, предпочтительно от 0,1 до 2,0% масс., и более предпочтительно от 0,2 до 1,0% масс., в расчете на массу композиции. В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция имеет консистенцию геля.

Композиции по настоящему изобретению также могут содержать другие добавки, такие как консерванты (например, для предотвращения загрязнения микроорганизмами), буферные агенты (для контроля pH и избежания нестабильности и повреждения кислотной мантии кожи) и антиоксиданты. Когда используют консервант, он предпочтительно присутствуют в количестве от 0,5 до 1% масс., более предпочтительно от 0,6 до 0,8% масс., в расчете на массу композиции. Консервант предпочтительно выбирают из группы, состоящей из бензилового спирта, феноксиэтанола, бензоата натрия и комбинаций двух или более из вышеуказанных. Более предпочтительно консервант представляет собой феноксиэтанол. Эти добавки могут быть включены в дисперсионную среду или дисперсную фазу полиафронной дисперсии. Должно быть понятно, что включение этих добавок следует осуществлять с использованием уровней и типов веществ, которые определены как эффективные и полезные. Следует быть осторожным при выборе и определении количества этих добавок, чтобы предотвратить негативное влияние на другие выгодные эксплуатационные характеристики настоящего изобретения.

В особенно предпочтительном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению включает первую дисперсную фазу, содержащую диизопропиладипат и такролимус;

вторую дисперсную фазу, содержащую минеральное масло; и

дисперсионную водную среду;

предпочтительно, где такролимус по существу присутствует в первой дисперсной фазе;

где композиция включает меньше чем 1% масс. поверхностно-активного вещества в расчете на массу композиции;

где композиция включает меньше чем 5% масс., в расчете на массу композиции, C₁-C₄ спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната и смесей двух или более из вышеуказанных; и

где композиция находится в форме лосьона или крема.

Еще в одном особенно предпочтительном варианте осуществления композиция по настоящему изобретению включает первую дисперсную фазу, содержащую диизопропиладипат и такролимус;

вторую дисперсную фазу, содержащую минеральное масло; и

дисперсионную водную среду;

предпочтительно, где такролимус по существу присутствует в первой дисперсной фазе;

где композиция включает меньше чем 1% масс. поверхностно-активного вещества в расчете на массу композиции;

где композиция включает меньше чем 1% масс., в расчете на массу композиции, C₁-C₄ спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната и смесей двух или более из вышеуказанных; и

где композиция находится в форме лосьона или крема.

В соответствии со вторым аспектом, обеспечивается композиция, описанная в настоящей заявке, для применения в лечении псориаза или атопического дерматита.

В соответствии с третьим аспектом, обеспечивается композиция, описанная в настоящей заявке, для применения в получении лекарственного средства для лечения псориаза или атопического дерматита.

В соответствии с четвертым аспектом, обеспечивается композиция, описанная в настоящей заявке, для применения в способе лечения человека или животного при помощи терапии.

В соответствии с пятым аспектом, обеспечивается способ лечения псориаза или атопического дерматита у пациента, которым является человек или животное, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, описанной в настоящей заявке.

Композицию, описанную в настоящей заявке, можно наносить на кожу головы или другую кожную поверхность через волосы. Предпочтительно в этом варианте осуществления волосы смачивают (например, водой с использованием или без шумпуня и затем сушат полотенцем). Продукт затем можно наносить на кожу головы в подходящем количестве и затем вмассировать в кожу головы через волосы. Волосы затем можно оставить сушиться естественным путем или высушить с использованием фена. Предпочтительно, вододиспергируемая форма лекарственного средства обеспечивает равномерное распределение активных веществ на коже с использованием этого способа. Альтернативно или кроме того, композицию можно вмассировать в кожу головы через сухие волосы и оставить в течение подходящего периода времени (который может составлять 8-12 часов), после этого избыток или оставшееся количество можно сполоснуть водой с использованием или без шумпуня. Предпочтительно, композицию применяют для человека или животного в стандартной лекарственной форме.

В соответствии с шестым аспектом, настоящее изобретение обеспечивает упаковку, включающую композицию, раскрытую в настоящей заявке. Предпочтительно, упаковка представляет собой тюбик или вакуумный насос. Например, тюбик можно сдавливать для местного нанесения композиции.

В соответствии с седьмым аспектом, настоящее изобретение обеспечивает способ получения композиции для местного нанесения, включающий:

(i) обеспечение первого масла, включающего такролимус;

(ii) обеспечение второго масла;

(iii) обеспечение водного компонента; и

(iv) диспергирование первого масла и второго масла в водном компоненте с образованием композиции для местного применения, включающей первую дисперсную фазу, содержащую первое масло и такролимус, вторую дисперсную фазу, содержащую второе масло, и дисперсионную водную среду;

где первое масло отличается от второго масла.

Предпочтительно, композиция, полученная таким способом, представляет собой композицию, описанную выше. Способы для получения таких масло-в-воде дисперсий известны из уровня техники, например, G. Godwin, Harry's Cosmeticology 7^th Edition, 1982. Специалистам в данной области должно быть понятно, что можно использовать другие способы получения, которые будут подходящими.

Как указано выше, композиция может представлять собой полиафронную дисперсию. Подходящие способы для получения полиафронных дисперсий описаны в US-A-4486333. Специалистам в данной области должно быть понятно, что можно использовать другие способы получения, которые будут подходящими.

Предпочтительно, способ дополнительно включает упаковку композиции.

Описанные выше аспекты можно свободно комбинировать с любыми из аспектов, раскрытых в настоящей заявке.

Настоящее изобретение далее будет описано в связи со следующими неограничивающими чертежами:

Фиг. 1 представляет простую схематическую диаграмму, показывающую структуру композиции в соответствии с настоящим изобретением. Более светлые кружки представляют первую дисперсную фазу (включающую первое масло и такролимус), более темные кружки представляют вторую дисперсную фазу (включающую второе масло), а фон представляет дисперсионную водную среду.

Фиг. 2 представляет ВЭЖХ хроматограмму эталонного такролимуса при t=0, используемого в Примере 1. Наблюдаются пики для такролимуса (19,863 минут), такролимуса 19-эпимера (16,803 минут) и аскомицина (18,976 минут). ВЭЖХ условия: Колонка: колонка Luna C18(2), размер частиц 3 мкм, 4,6 × 150 мм (Waters), Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура колонки: 25°C.

Фиг. 3 представляет ВЭЖХ хроматограмму Образца 1 Примера 1 при t=0. ВЭЖХ условия: Колонка: колонка Luna C18(2), размер частиц 3 мкм, 4,6 × 150 мм (Waters), Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура колонки: 25°C.

Фиг. 4 представляет ВЭЖХ хроматограмму Образца 1 Примера 1 при t=6 месяцев при 40°C. ВЭЖХ условия: Колонка: колонка Luna C18(2), размер частиц 3 мкм, 4,6 × 150 мм (Waters), Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура колонки: 25°C.

Фиг. 5 представляет ВЭЖХ хроматограмму Образца 9 Примера 1 при t=0. ВЭЖХ условия: Колонка: колонка Luna C18(2), размер частиц 3 мкм, 4,6 × 150 мм (Waters), Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура колонки: 25°C.

Фиг. 6 представляет ВЭЖХ хроматограмму Образца 9 Примера 1 при t=6 месяцев при 40°C. ВЭЖХ условия: Колонка: колонка Luna C18(2), размер частиц 3 мкм, 4,6 × 150 мм (Waters), Скорость потока: 1,5 мл/мин. Температура колонки: 25°C.

Фиг. 7 представляет столбиковую диаграмму, показывающую эффект композиций Образцов 1, 2, 3 и 6 на оценку эритемы через 48 часов после начального нанесения композиций. Планки погрешностей показывают стандартную ошибку среднего.

Фиг. 8 представляет столбиковую диаграмму, показывающую диффузию Образцов 1, 13, 14 и 15 в мкг/см² in vitro. y-ось показывает среднее кумулятивное количество диффундированного такролимуса в мкг/см². Планки погрешностей показывают стандартное отклонение.

Фиг. 9 представляет график доза-ответ для Образцов 1, 22, 23 и 24 (при концентрациях такролимуса 0,1%, 0,03%, 0,01% и 0,003%, соответственно) по сравнению с соответствующими вариантами мази такролимуса в модели аллергического контактного дерматита у свиней ландрас. Черные кружки: варианты мази такролимуса; серые кружки: Образец 1 варианты такролимуса; пунктирная линия: Образец 21 (носитель в качестве контроля). x-ось представляет концентрацию такролимуса, а y-ось представляет оценку эритемы в день 10 (24 часа после нанесения средства). Планки погрешностей показывают стандартное отклонение.

Настоящее изобретение далее будет описано со ссылкой на следующие неограничивающие примеры.

Пример 1

Были получены следующие композиции, и стабильность такролимуса измеряли как в исходном анализе, так и через 6 месяцев при 40°C:

Компонент Образец 1 Образец 2 Образец 3 Образец 4 Образец 5 Образец 6 Образец 7 Образец 8 Образец 9 Образец 10 Такролимус 3 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 Минеральное масло 2 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00 Пропиленгликоль 1&4* - 20,00 - 30,00 - 10,00 - - - - Транскутол P™ 1&4* - - 20,00 - - 10,00 - - - - Гексиленгликоль 1&4* - - - - 12,00 - - - - - Пентиленгликоль 1&4* - - - - - - - - 20,00 - Триглицериды каприловой/каприновой кислоты - Miglyol 812™ 3 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 10,00 Диизопропиладипат 3 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 - - 5,00 5,00 Диэтилсебацинат 3 - - - - - - 5,00 - - - Дибутиладипат 3 - - - - - - - 5,00 - - Изопропилмиристат 3 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 Карбомер - Ultrez 10™ 4 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 Феноксиэтанол 4 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 0,70 Лаурет 4 2&3* 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 9,40 Гидроксиэтилцеллюлоза - Natrosol 250L™ 4 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 Цитрат натрия 4 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 0,164 Бутилированный гидрокситолуол 3 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10 Лимонная кислота 4 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 0,095 Полисорбат 20 1 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 Гидроксид натрия (20% водный раствор) 5 q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. Вода 1 и 4 (5 если потребуется) q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. q.s. Итого 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Исходный анализ 103,6 102,4 102,7 103,9 103,2 100,4 101,0 99,7 98,2 97,8 Анализ через 6 месяцев @40°C 101,3 90,9 83,9 79,7 89,6 83,7 91,6 93,1 55,5 88,2

Ключ к компонентам:

1) Дисперсионная водная фаза

2) API нерастворяющая масляная фаза

3) API растворяющая масляная фаза

4) Гель/загуститель

5) регулирование pH/воды

Компоненты получают по отдельности, а затем последовательно добавляют при перемешивании подходящим образом. Компоненты 1-3 в комбинации составляли 50% масс. конечной композиции в каждом случае, компонент 4 составлял 48% масс., а компонент 5 составлял 2% масс.

*Вещество распределяют пропорционально между двумя фазами в зависимости от относительного размера фаз. Например, если две масляные фазы имеют одинаковую массу, к каждой масляной фазе добавляют одинаковую массу поверхностно-активного вещества. Если первая масляная фаза имеет массу, которая в два раза больше массы второй масляной фазы, поверхностно-активное вещество распределяют в массовом соотношении 2:1 между двумя фазами.

Каждый образец хранили в закрытом, герметичном стеклянном контейнере со свободным объемом над продуктом, составляющим не более чем 5% об. от общего полезного объема контейнера. Каждый контейнер, содержащий образец, хранили при постоянной температуре 40°C в стандартном лабораторном инкубаторе (например, инкубатор Memmert IF260PLUS). Период хранения для каждого образца составлял шесть месяцев, по прошествии которых измеряли химическую стабильность.

Полученное в анализе стабильности значение 100±5% показывает, что такролимус был химически стабильным в течение шести месяцев при 40°C. Полученное в анализе стабильности значение 100±2% показывает, что химическая стабильность такролимуса была особенно высокой.

Химическую стабильность такролимуса в каждом образце после периода хранения измеряли методом ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ представлял собой следующее:

ВЭЖХ система Фотодиодный матричный детектор Waters
Сепарационный модуль Waters
Программа обработки данных Empower2 или Empower3 Waters Колонка Luna C18(2), 150 × 4,6мм, 3мкм Предколонка SecurityGuard C18 4 × 3,0 мм Детекция 220 нм Температура образца 5°C Температура колонки 60°C Скорость потока 1,5 мл/мин Подвижная фаза Подвижная фаза A: Раствор A: Раствор B (80:20)
Подвижная фаза B: Раствор A: Раствор B (20:80)
Объем вводимой пробы 50мкл Время анализа 50 мин

Получение подвижной фазы:

Раствор A: Получают раствор 6 мМ ортофосфорной кислоты в воде путем добавления 0,4 мл в 1000 мл очищенной воды (типично получают 3 л).

Раствор B: Получают смесь ацетонитрила и трет-бутил метилового эфира в соотношении 81:19%, соответственно (типично получают 3 л).

Подвижные фазы A и B получали в виде смеси растворов A и B в соотношении, показанном в таблице выше.

Получение образца:

Ацетонитрил используют в качестве разбавителя для образца.

Растворы получают в лабораторной посуде из темного стекла.

Процедура:

1. Аккуратно отвесить приблизительно 1,0 г образца в 10 мл волюметрическую колбу, чтобы в горлышке колбы было как можно меньше образца.

2. Добавить приблизительно 5 мл разбавителя для образца в волюметрическую колбу и перемешивать вихревым способом в течение 2 минут.

3. Дать уравновеситься до комнатной температуры и затем смесь в волюметрической колбе довести до нужного объема разбавителем для образца. Тщательно смешать путем перемешивания в течение 1 часа

4. Перенести аликвоту раствора в 2 мл центрифужную пробирку и центрифугировать в течение 10 минут при 13000 об/мин.

5. Фильтровать через 0,45 мкм PTFE шприцевой фильтр

Получение эталонного препарата:

Раствор такролимуса в ацетонитриле получали при концентрации 100 мкг/мл.

ВЭЖХ хроматограмма для эталонного такролимуса с использованием этого способа показана на Фиг. 2. ВЭЖХ хроматограммы для Образца 1 показаны на Фиг. 3 (t=0) и Фиг. 4 (t=6 месяцев при 40°C). ВЭЖХ хроматограммы для Образца 9 показаны на Фиг. 5 (t=0) и Фиг. 6 (t=6 месяцев при 40°C).

Приблизительное время удерживания:

Такролимус 19-эпимер 16,1 минут Аскомицин 18,3 минут Такролимус 19,1 минут Такролимус 8-пропил аналог 20,9 минут

Обсуждение результатов стабильности

Как можно видеть из данных стабильности, Образец 1 (в котором используются диизопропиладипат, изопропилмиристат и триглицериды каприловой/каприновой кислоты для первой дисперсной фазы и который не содержит полярные смешивающиеся с водой жидкости) является наиболее стабильной композицией с точки зрения стабильности такролимуса.

В Образце 2, 3, 4, 5 и 9 такролимус был менее стабилен. Эти композиции содержат различные полярные смешивающиеся с водой жидкости (пропиленгликоль, Транскутол P™, гексиленгликоль или пентиленгликоль) при 12-30% масс. Считают, что эта более низкая стабильность является результатом использования полярных не-водных растворителей, влияющих на распределение такролимуса между масляной и водной фазами. В частности, считают, что воздействие водной среды на такролимус больше в Образце 2, 3, 4, 5 и 9, чем в Примере 1, что приводит к повышенному разрушению такролимуса. Повышенную химическую стабильность Образца 1 по сравнению с Образцом 9 можно видеть на Фиг. 3-6.

Образец 10 является таким же, как Образец 1, за исключением того, что он имеет повышенный уровень поверхностно-активного вещества Лаурета 4 (9,4% масс.). Измеренная стабильность такролимуса была значительно ниже, чем в Образце 1. Также как и предыдущем случае, считают, что это из-за поверхностно-активного вещества, влияющего на распределение такролимуса между масляной и водной фазами. В частности, считают, что воздействие водной среды на такролимус больше в Образце 10, чем в Образце 1, что приводит к повышенному разрушению такролимуса.

Сравнение Образцов 1, 7 и 8 показывает, что использование диизопропиладипата в первой дисперсной фазе (Пример 1) приводит к большей стабильности такролимуса, чем использование диэтилсебацината или дибутиладипата в первой дисперсной фазе (Образец 7 и 8, соответственно). Это удивительно, поскольку все три масла имеют одинаковый профиль растворимости для такролимуса (см. обсуждение в Примере 2).

Согласно наблюдениям, все образцы были физически стабильными после 6 месяцев при 40°C, т.е. каждый образец выглядел как гомогенный крем, без каких-либо явных существенных изменений реологии или внешнего вида от t=0.

Пример 2

В этом Примере измеряли растворимость такролимуса в различных масляных растворителях методом ВЭЖХ.

Отвешивали приблизительно 40 мг такролимуса и добавляли известное количество (1-2 г) масла и перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Если при визуальном наблюдении такролимус не растворился, добавляли дополнительное количество масла вплоть до 10 г максимально. Если было видно, что такролимус полностью растворился, когда количество масла было меньше 10 г, тогда образец составляли при 4°C в течение ночи. Если такролимус осаждался после хранения в холоде, добавляли дополнительное количество масла и указанные стадии повторяли вплоть до растворения или пока количество добавляемого масла не достигнет 10 г. Все образцы затем центрифугировали, чтобы обеспечить полное удаление нерастворившегося такролимуса, и супернатант анализировали при помощи ВЭЖХ, как описано в Примере 1.

Охлаждение масляных растворителей обеспечивает уверенность, что такролимус будет оставаться в растворе в случае, если конечная композиция будет подвергаться охлаждению или воздействию холодных температур. Вполне резонно предположить для коммерческого продукта воздействие таких условий. Важно, чтобы такролимус не осаждался из раствора. Такое осаждение может привести к физически или химически нестабильному продукту или к негомогенному распределению такролимуса.

Результаты:

Данные растворимости для такролимуса в масляных растворителях, как измерено в соответствии с описанным выше способом, представлены ниже:

Растворитель Растворимость (% масс.) Диэтилсебацинат 3,26* Дибутиладипат 3,24* Диизопропиладипат 3,08* Касторовое масло 1,44 Триглицериды каприновой/каприловой кислоты 0,44 Изопропилпальмитат 0,26 Изопропилмиристат 0,25 Изопропилизостеарат 0,19 Гептилметилнонан 0,006 Циклометикон 0,004 Диметикон 0,004 Минеральное масло 0,003

*ВЭЖХ анализ в пределах 95% от теоретического экспериментального максимума. Возможно максимальная растворимость больше, чем указано.

На основе приведенных выше данных, масла можно подразделить на три класса: хорошие растворители (растворяющая способность >1%), средние (растворяющая способность 0,15-1%) и по существу не являющиеся растворителями (<0,1%).

Принимая во внимание, что такролимус имеет одинаковую растворимость в диэтилсебацинате, диизопропиладипате и дибутиладипате, удивительно, что диизопропиладипат значительно более эффективен при стабилизации такролимуса, чем диэтилсебацинат или дибутиладипат (см. Пример 1).

Не желая быть связанными теорией, считают, что две сложноэфирные связи, присутствующие во всех трех маслах, больше защищены в диизопропиладипате путем пространственного затруднения, вызванного близостью/конформацией метильных групп вблизи связи. Считают, что разрушение этой связи может затем повлиять на стабильность активного вещества, объясняя таким образом повышенную стабильность Примера 1.

Пример 3

В эксперименте in vivo с использованием модели аллергического контактного дерматита у свиней ландрас (пять свиней) сравнивали Протопик™ (такролимус 0,1%), вазелин в качестве контроля и Образцы 1-3 и 6.

Способ включал введение Динитрофторбензола (DNFB) и Динитрохлорбензола (DNCB) в кожные пластыри, чтобы вызвать контактную аллергию, с последующим лечением одним из Протопика™ (такролимус 0,1%), вазелина в качестве контроля и Образцов 1-3 и 6.

Способ основан на протоколе, описанном в Mollison et al. J Invest Dermatol. 1999 May; 112(5):729-38: a macrolactam inhibitor of T helper type 1 and T helper type 2 cytokine biosynthesis for topical treatment of inflammatory skin diseases.

Способ:

Day 0: Нанесение 100 мкл 10% Динитрофторбензола (DNFB) в ацетоне/DMSO/оливковом масле (45/5/50 об/об/об) на каждую из внешних сторон обоих ушей и билатерально внизу живота ≈20 см².

День 3: Нанесение 100 мкл 5% Динитрофторбензола (DNFB) в ацетоне/DMSO/оливковом масле (45/5/50 об/об/об) на внутреннюю ушную раковину обоих ушей и билатерально в нижней части грудной клетки ≈20 см².

День 9: Нанесение 61 мкл 0,6% Динитрохлорбензола (DNCB) в ацетоне/оливковом масле (95/5 об/об) на 18 прямоугольных теституемых областей - по 9 на каждом боку свиньи (3,5 × 3,5 см, 12,25 см² ).

День 9+ 30 минут: Нанесение 61 мкл испытываемых композиций на теституемые области (3,5 × 3,5 см, 12,25 см² ).

Балльную оценку/тестирование и затем повторное нанесение испытываемых композиций предпринимали через 24 и 30 часов после начального нанесения испытываемой композиции. Последующую балльную оценку осуществляли через 48 часов.

Пятна оценивали следующим образом:

0 - отсутствие эритемы

0,5 - неочевидная эритема

1 - бледная или рассеянная эритем

2 - умеренная эритема без затвердения

3 - сильная эритема с очагами отека или затвердения

4 - чрезмерная эритема с равномерным затвердением или отеком

Результаты:

24 часа 30 часов 48 часов 48 часов стандартное отклонение 48 часов стандартная ошибка Вазелиновый носитель в качестве контроля 3,1 3,1 2,5 0,4 0,18 Протопик (такролимус 0,1%) 2,3 2,2 1,9 0,2 0,09 Образец 1 1,5 1,4 1,2 0,5 0,22 Образец 2 1,7 1,6 1,4 0,4 0,18 Образец 3 1,4 1,4 1,2 0,3 0,13 Образец 6 1,5 1,3 1,1 0,2 0,09

Свиней, получивших оценку 3 или больше при оценке через 24 часа для вазелина в качестве контроля, использовали для сравнительных целей. Свиньи, которые не реагировали в сильной степени на сенсибилизацию, не могли обеспечить возможность достаточной дифференциации при определении эффективности композиций активного вещества.

Результаты, полученные через 48 часов, также показаны на Фиг. 7 (планки погрешностей показывают стандартную ошибку среднего). Как видно из Фиг. 7 и таблицы выше, оценка эритемы в точке времени 48 часов одинакова для Образцов 1-3 и 6. Эти оценки эритем значительно ниже, чем для вазелина, используемого в качестве контроля, и Протопика^TM. Таким образом, препараты по настоящему изобретению имеют более высокую in vivo эффективность по сравнению с существующими препаратами в форме мази, такими как Протопик^TM_.

Пример 4

Дополнительные композиции были получены с использованием других поверхностно-активных систем. Для сравнения в таблицу включена композиция Образца 1.

Компонент Образец 1 Образец 11 Образец 12 Такролимус 3 0,10 0,10 0,10 Минеральное масло 2 20,00 20,00 20,00 Триглицериды каприловой/каприновой кислоты - Miglyol 812™ 3 10,00 10,00 10,00 Диизопропиладипат 3 5,00 5,00 5,00 Изопропилмиристат 3 5,00 5,00 5,00 Карбомер - Ultrez 10™ 4 1,00 0,20 0,20 Лаурет 4 2&3* 0,40 - 0,40 Pemulen TR2 2&3* - 0,60 - Span 20 2&3* - - 1,00 ПЭГ-20 цетиловый эфир 2&3* - - 1,00 Феноксиэтанол 4 0,70 0,70 0,70 Гидроксиэтилцеллюлоза - Natrosol 250L™ 4 0,20 0,20 0,20 Цитрат натрия 4 0,164 0,164 0,164 Бутилированный гидрокситолуол 3 0,10 0,10 0,10 Лимонная кислота 4 0,095 0,095 0,095 Полисорбат 20 1 0,04 - 0,04 Гидроксид натрия (20% водный раствор) 5 q.s. q.s. q.s. Вода 1 и 4 (5 если потребуется) q.s. q.s. q.s. Итого 100,00 100,00 100,00 Исходный анализ 103,6 104,5 102,7 Анализ через 6 месяцев @ 40°C 101,3 - -

Нумерация и количественное соотношение компонентов (1-5) такие же, как в Примере 1.

*Вещество распределяют пропорционально между двумя фазами в зависимости от относительного размера фаз. Например, если две масляные фазы имеют одинаковую массу, одинаковую массу поверхностно-активного вещества добавляют к каждой масляной фазе. Если первая масляная фаза имеет массу, которая в два раза больше массы второй масляной фазы, поверхностно-активное вещество распределяют в массовом соотношении 2:1 между двумя фазами.

Компоненты для обоих Примеров 11 & 12 нагревали до 70°C перед объединением. В случае Примера 12, использовали ротостартерное устройство с высоким сдвиговым усилием (Silverson) при 7000 об/мин.

Пример 5

Получали композиции, в которых второе масло и его количества вирьировались. Для сравнения в таблицу включена композиция Образца 1.

Компонент Образец 1 Образец 13 Образец 14 Образец15 Такролимус 3 0,10 0,10 0,10 0,10 Минеральное масло 2 20,00 - 32,00 - Диметикон 350 сСт 2 - 20,00 - - Триглицериды каприловой/каприновой кислоты - Miglyol 812™ 3 10,00 10,00 10,00 10,00 Диизопропиладипат 3 5,00 5,00 5,00 5,00 Изопропилмиристат 3 5,00 5,00 5,00 5,00 Карбомер - Ultrez 10™ 4 1,00 1,00 1,00 1,00 Лаурет 4 2&3* 0,40 0,40 0,52 0,20 Феноксиэтанол 4 0,70 0,70 0,70 0,70 Гидроксиэтилцеллюлоза - Natrosol 250L™ 4 0,20 0,20 0,20 0,20 Цитрат натрия 4 0,164 0,164 0,164 0,164 Бутилированный гидрокситолуол 3 0,10 0,10 0,10 0,10 Лимонная кислота 4 0,095 0,095 0,095 0,095 Полисорбат 20 1 0,04 0,04 0,05 0,02 Гидроксид натрия (20% водный раствор) 5 q.s. q.s. q.s. q.s. Вода 1 и 4 (5 если потребуется) q.s. q.s. q.s. q.s. Итого 100,00 100,00 100,00 100,00

Образец 13: Минеральное масло заменено диметиконом

Образец 14: Избыточное количество минерального масла

Образец 15: Нет второй дисперсной фазы (сравнительный)

*Вещество распределяют пропорционально между двумя фазами в зависимости от относительного размера фаз. Например, если две масляные фазы имеют одинаковую массу, одинаковую массу поверхностно-активного вещества добавляют к каждой масляной фазе. Если первая масляная фаза имеет массу, которая в два раза больше массы второй масляной фазы, поверхностно-активное вещество распределяют в массовом соотношении 2:1 между двумя фазами.

Композиции испытывали в эксперименте по оценке диффузии in vitro с использованием диффузионной ячейки Франца через искусственную мембрану. Используемая мембрана представляла собой мембрану Strat-M от Merck Millipore, и она описана как синтетическая, не-животная модель для испытания трансдермальной диффузии, которая предсказывает диффузию в человеческой коже. Фосфатно-солевой буферный раствор с 5% бычьего сывороточного альбумина и 5% изопропилового спирта использовали в качестве рецепторной фазы. Использовали ячейки с площадью поверхности 0,64 см² и объем рецептора приблизительно 2 см³. Приблизительно 40 мг композиции наносили в точке времени 0, 24 и 48 часов и перемешивали и инкубировали при 37°C на протяжении всего эксперимента. Брали образцы рецепторной фазы и фазу заменяли через 24, 48 и 72 часов. Концентрацию такролимуса определяли при помощи ВЭЖХ в соответствии с описанным выше способом и корректировали в соответствии с объемом индивидуальной рецепторной ячейки. Среднее кумулятивное значение такролимус на см² мембраны для каждого образца затем наносили на график (см. Фиг. 8).

Из данных можно видеть, что Образец 1 и Образец 13 лучше с точки зрения диффузионных свойств in vitro. Это композиции с одинаковым отношением второй дисперсной фазы к первой дисперсной фазе, но с минеральным маслом в противоположность диметикону. Образец 15 (нет второй дисперсной фазы) значительно хуже Образца 1 и Образца 13, и это показывает, что присутствие второй масляной фазы приводит к значительному улучшению проникновения. Однако Образец 14 показывает, что чрезмерные количества второй дисперсной фазы могут иметь вредный эффект, что касается in vitro диффузии. Таким образом, существует оптимальный уровень второй дисперсной фазы, который максимизирует диффузию композиции in vitro.

Кроме того, следует отметить, что нет статистически значимой разницы между результатами для Образцов 1 и 13. Диметикон по-видимому имеет гораздо меньший потенциал для смешивания с API масляной фазой при нанесении, поскольку известно, что диметикон имеет более низкую смешиваемость с другими маслами по сравнению с минеральным маслом. Отсутствие статистически значимой разницы между Образцами и 13 поэтому говорит о том, что улучшенное проникновение по сравнению с системой с одной API масляной фазой (Образец 15) в основном достигается не из-за смешивания масел при нанесении, вызывающего изменение в насыщении полученной смеси такролимусом.

Пример 6

Различные упрощенные композиции были получены с использованием разных уровней смешиваемой с водой жидкости (Транскутол P ^TM) в водной фазе.

Ингредиент % масс./масс. Масляная фаза Такролимус 0,13 Триглицериды каприновой/каприловой кислоты 12,73 Диизопропиладипат 6,36 Изопропилмиристат 6,36 Бутилированный гидрокситолуол 0,13 Водная фаза Феноксиэтанол 0,89 Цитрат натрия 0,209 Лимонная кислота 0,121 Транскутол P ^TM x Вода q.s. (до 100)

(Транскутол P ^TM=моноэтиловый эфир диэтиленгликоля)

Никакое поверхностно-активное вещество не включали. Это обеспечивает возможность интенсивного смешивания масляной фазы и водной фазы, но они могут легко разделяться при выстаивании в течение ночи, что делает отбор проб и анализ более простым. Кроме того, не включали никакой минеральной масляной фазы или гелеобразующего вещества, и это также делает отбор проб и анализ более простым.

Композиции получали путем смешивани двух фаз при интенсивном встряхивании вручную. Их затем оставляли выстаиваться в течение ночи, затем масляную фазу отсасывали пипеткой. Две фазы центрифугировали и анализировали на такролимус с использованием способа ВЭЖХ, описанного в настоящей заявке.

Полученные образцы и соответствующие уровни выхода такролимуса (API) показаны в следующей таблице:

Образец x/% масс. API % в масляной фазе API % в водной фазе Общий выход API 16 0 97,7 0,09 97,7 17 5 96,5 0,20 96,7 18 10 95,8 0,95 96,8 19 20 91,5 9,24 100,8

Из таблицы можно видеть, что чем выше уровень полярного не-водного растворителя, включенного в водную фазу, тем больше степень выделения такролимуса в водную фазу. Считают, что это повышенное воздействие водной среды частично объясняет тенденции химической стабильности, наблюдаемые в Примере 1.

Пример 7

Еще одну композицию получали с использованием бензоата натрия в качестве консерванта вместо феноксиэтанола.

Компонент Образец 20 Такролимус гидрат 3 0,10 Минеральное масло 2 20,00 Триглицериды каприловой/каприновой кислоты - Miglyol 812™ 3 10,00 Диизопропиладипат 3 5,00 Изопропилмиристат 3 5,00 Карбомер - Ultrez 10™ 4 1,00 Лаурет 4 2&3* 0,40 Бензоат натрия 5 0,20 Гидроксиэтилцеллюлоза - Natrosol 250L™ 4 0,20 Цитрат натрия 4 0,164 Бутилированный гидрокситолуол 3 0,10 Лимонная кислота 4 0,095 Полисорбат 20 1 0,04 Гидроксид натрия (20% водный раствор) 6 q.s. Вода 1, 4, 5 (6 если потребуется) q.s. Итого 100,00

Ключи к компонентам:

1) Дисперсионная водная фаза

2) API нерастворяющая масляная фаза

3) API растворяющая масляная фаза

4) Гель/загуститель

5) Консервант

6) Регулирование pH/воды

Компоненты получают по отдельности, а затем последовательно добавляют при перемешивании подходящим образом. Компоненты 1-3 в комбинации составляли 50% масс. конечной композиции в каждом случае, компонент 4 составлял 43% масс., компонент 5 составлял 5% масс., и компонент 6 составлял 2% масс.

*Вещество распределяют пропорционально между двумя фазами в зависимости от относительного размера фаз. Например, если две масляные фазы имеют одинаковую массу, одинаковую массу поверхностно-активного вещества добавляют к каждой масляной фазе. Если первая масляная фаза имеет массу, которая в два раза больше массы второй масляной фазы, поверхностно-активное вещество распределяют в массовом соотношении 2:1 между двумя фазами.

Пример 8

Испытание на местную переносимость на мини свинках осуществляли для оценки местной переносимости двух содержащих такролимус кремов для местного применения в соответствии с настоящим изобретением и коммерчески подходящей мази и для определения количества такролимуса в коже после нанесения два раза в день на кожу мини свинок в течение 4 недель.

Способ:

В испытании использовали (4) самцов мини свинок Göttingen. Для нанесения использовали (8) участков размером 2,5 × 2,5 см каждый на спине каждого животного и каждый из препаратов: Образец 1 - носитель, Образец 1 с такролимусом 0,03%, Образец 1 с такролимусом 0,1% и Протопик® с такролимусом 0,1% в форме мази наносили на два разных участка нанесения на каждом животном.

Дозирование животным осуществляли в соответствии со схемой, представленной ниже.

Лечение Доза Общая суточная доза Доза Количество животных (мг API/животное/участок нанесения) (мг API/животное/день) (мг API/см²) Образец 21 (Носитель - идентичен Образцу 1, но без такролимуса) 0,0 0,0 0 4 Образец 22 (идентичен Образцу 1, но содержащий 0,03% такролимус) 0,047 0,188 0,0075 Образец 1 (содержащий 0,1% такролимус) 0,156 0,625 0,025 Протопик® 0,1% 0,156 0,625 0,025

Оценивали следующее: смертность, клинические признаки, масса тела и некропсия с данными макроскопических наблюдений обработанной и необработанной кожи и гистопатология. Биопсии кожи для биоанализа брали в День 28, через 4 часа после первого дозирования и при вскрытии. Кроме того, участки нанесения исследовали на реакции на лечение и оценивали на эритемы, отеки и другие кожные реакции.

Биопсии брали для биоанализа со всех участков нанесения через 4 часа +/- 10 минут после первого дозирования в последний день дозирования (день 28) и при некропсии. В каждое время взятия образцов брали две (одна дублирующая) биопсии из каждого участка нанесения. В общей сложности 16 биопсий от каждого животного в каждой точке времени взятия образцов. Биопсии брали приблизительно на расстоянии 5 мм от краев участков нанесения. Перед сбором образцов кожи роговой слой отделяли от кожи на участке нанесения, где брали биопсии, по 40 полосок на две биопсии, используя коммерческую липкую ленту.

Биопсии брали с использованием иглы для биопсии кожи диаметром 5 мм. Из биопсий удаляли эпидермис путем отделения от дермы как можно лучше при помощи скальпеля. После этого подкожную ткань удаляли из дермы при помощи скальпеля, а затем отбрасывали. Биопсии взвешивали и немедленно замораживали, используя жидкий азот, и хранили при -80°C или ниже до анализа. Образцы тканей анализировали на уровни такролимуса с использованием проверенного биоаналитического анализа.

Результаты:

Наносимые на кожу мини свинкам в течение четырех недель два раза в день три разных местных препарата такролимуса в форме кремов: Образец 21 (носитель), Образец 22 (0,03% такролимус), Образец 1 (0,1% такролимус) и Протопик® 0,1% мазь - все хорошо переносились, и не наблюдали никаких связанных с испытываемым средством кожных реакций или гистопатологических изменений.

Биоаналитический анализ показал, что испытываемые образцы были преимущественно локализованы в эпидермисе и лишь меньшеe количество было обнаружено в дерме. Уровни такролимуса были примерно в три раза выше после обработки Образцом 0,1% крема такролимуса, чем после обработки Образцом 1 0,03% крема такролимуса, указывая на взаимосвязь доза-ответ. Обработка препаратом Протопик® (0,1% мазь такролимуса) приводила к уровням экспозиции приблизительно на 30% ниже, чем обработка Образцом 1 (0,1% крем такролимуса). Поэтому можно сделать вывод, что при данной нагрузке такролимуса композиции по настоящему изобретению демонстрируют лучшее проникновение через кожу in vivo, чем существующие препараты в форме мази, такие как Протопик^TM. Данные представлены в таблице ниже.

Таблица:.

Уровень такролимуса, измеренный в биопсиях кожи мини свинок после нанесения испытываемых продуктов два раза в день в течение 28 дней

Испытываемый продукт Точка времени Дерма
(нг API/г ткани) Эпидермис
(нг API/г ткани) Общее содержание в коже
(нг API/г ткани) Отношение продукта к препарату Протопик
(Общее содержание в коже) Образец 22 (такролимус 0,03% крем) День 28, 4ч после последнего дозирования 62,5 3100 763 0,4 Образец 1 (такролимус 0,1% крем) 266 9560 2610 1,5 Протопик 0,1% мазь такролимуса 180 6240 1740 1,0 Образец 22 (такролимус 0,03% крем) Некроскопия, 14ч после последнего дозирования 91,9 1950 539 0,4 Образец 1 (такролимус 0,1% крем) 197 6650 1740 1,3 Протопик 0,1% мазь такролимуса 113 5440 1340 1,0

Пример 9

Эксперимент in vivo с использованием модели аллергического контактного дерматита у свиней ландрас (восемь самок) осуществляли для сравнения доза-ответ коммерчески доступной мази такролимуса с композициями в соответствии с настоящим изобретением с разными концентрациями такролимуса. Сравнивали следующие испытываемые композиции: Протопик™ (0,1% мазь такролимуса), Протопик™ (0,03% мазь такролимуса), такролимус 0,01% мазь, такролимус 0,003% мазь, Образец 1 (содержащий такролимус 0,1%), Образцы 21 и 22 (идентичны Образцу 1, но без такролимуса и с такролимусом 0,03%, соответственно) и Образец 23 (идентичен Образцу 1, но содержит такролимус 0,01%) и Образец 24 (идентичен Образцу 1, но содержит такролимус 0,003%). 0,01% и 0,003% мази такролимуса были получены в соответствии с Примером 1 EP1093371B1 (с использованием способа, раскрытого в Примере 1 EP-A-0474126) с соответственно уменьшенными количествами такролимуса.

Способ включал введение динитрофторбензола (DNFB) и динитрохлорбензола (DNCB) в кожные пластыри для индукции контактной аллергии, с последующим лечением одним из испытываемых препаратов.

Способ основан на протоколе, описанном в Mollison et al. J Invest Dermatol. 1999 May; 112(5):729-38: a macrolactam inhibitor of T helper type 1 and T helper type 2 cytokine biosynthesis for topical treatment of inflammatory skin diseases.

Способ:

День 0: Нанесение 100 мкл 10% динитрофторбензола (DNFB) в ацетоне/DMSO/оливковом масле (45/5/50 об/об/об) на каждую из внешних сторон обоих ушей и билатерально внизу живота ≈20 см².

День 3: Нанесение 100 мкл 5% динитрофторбензола (DNFB) в ацетоне/DMSO/оливковом масле (45/5/50 об/об/об) на внутреннюю ушную раковину обоих ушей и билатерально в нижней части грудной ≈20см².

День 9: Нанесение 60 мкл 0,6% динитрохлорбензола (DNCB) в ацетоне/оливковом масле (95/5 об/об) на 18 прямоугольных теституемых областей - по 9 на каждом боку свиньи (3,5 × 3,5 см, 12,25 см² ).

День 9+ 30минут и 6 часов: Нанесение 60 мкл испытываемых композиций на теституемые области (3,5 × 3,5 см, 12,25 см² ).

Балльную оценку и затем повторное нанесение испытываемых композиций осуществляли через 24 и 30 часов после начального нанесения испытываемой композиции. Эритему оценивали через 24 и 48 часов.

Теституемые области оценивали на эритему, образовавшуюся в результате аллергического контактного дерматита, следующим образом:

0 - отсутствие эритемы

0,5 - неочевидная эритема

1 - бледная или рассеянная эритем

2 - умеренная эритема без затвердения

3 - сильная эритема с очагами отека или затвердения

4 - чрезмерная эритема с равномерным затвердением или отеком

Результаты:

Лекарственная форма 24 часа SD 48 часов SD Протопик (такролимус 0,1%) Мазь 1,7 0,5 1,0 0,3 Протопик (такролимус 0,03%) Мазь 1,9 0,3 1,1 0,5 Такролимус 0,01% Мазь 2,1 0,5 1,2 0,3 Такролимус 0,003% Мазь 2,0 0,5 1,3 0,4 Образец 1 (такролимус 0,1%) Крем 1,3 0,3 0,7 0,2 Образец 22 (такролимус 0,03%) Крем 1,5 0,4 0,9 0,3 Образец 23 (такролимус 0,01%) Крем 1,8 0,3 0,9 0,3 Образец 24 (такролимус 0,003%) Крем 1,7 0,4 1,0 0,2 Образец 25: носитель Крем 1,8 0,5 1,0 0,3

Результаты на момент времени 24 часа также показаны на Фиг. 9 (планки погрешностей показывают стандартное отклонение). Для исследуемого Образца 1 и мази такролимуса был сделан следующий вывод:

1. Очевидно, не было никакого эффекта самых низких концентраций такролимуса (0,003% и 0,01%) ни в образцах крема ни в вариантах мази.

2. Базовый уровень ниже для образцов крема в соответствии с настоящим изобретением, чем для мази, что дает основание предположить, что носитель крем может иметь независимый благоприятный эффект на воспаление по сравнению с мазью.

3. Доза-ответ тенденция наблюдается для противовоспалительного эффекта такролимуса в композициях по настоящему изобретению, что сопоставимо с такролимусом в вариантах мазей.

Представленное выше подробное описание представлено посредством пояснения и иллюстрации и не предназначено для ограничения объема прилагаемой формулы изобретения. Многие варианты в предпочтительных вариантах осуществления, проиллюстрированных в настоящей заявке, будут очевидны специалистам в данной области техники и охватываются объемом прилагаемой формулы изобретения и ее эквивалентов.

Группа изобретений касается композиции для местного применения, содержащей такролимус, и способа ее изготовления. Композиция для местного применения включает: первую дисперсную фазу, включающую первое масло и такролимус; вторую дисперсную фазу, включающую второе масло; дисперсионную водную среду и поверхностно-активное вещество. При этом первое масло отличается от второго масла и фазы химически и физически различны. Первое масло включает диизопропиладипат и/или изопропилмиристат и/или триглицериды каприловой кислоты. Второе масло включает масло, выбранное из группы, состоящей из минерального масла, диметикона, циклометикона, гидрированного полиизобутана, гептаметилнонана и смесей двух или более из них. Композиция имеет общее содержание поверхностно-активного вещества менее 5 мас.% от массы композиции. Полярная смешивающаяся с водой жидкость, если она присутствует, то в количестве менее 5 мас.% от массы композиции. Способ получения композиции включает:(i) обеспечение первого масла, включающего такролимус;(ii) обеспечение второго масла; (iii) обеспечение водного компонента и (iv) диспергирование первого масла и второго масла в водном компоненте с образованием указанной выше композиции для местного применения. Использование двух различных масляных фаз указанного выше состава обеспечивают эффективное проникновение через кожу и сольватацию такролимуса без использования высоких уровней полярных смешивающихся с водой жидкостей, таких как спирты и гликоли, в составе дисперсионной водной среды, что, в свою очередь, минимизирует раздражение кожи, вызываемое композицией. Состав композиции демонстрирует лучшее проникновение через кожу in vivo, чем существующие препараты в форме мази, такие как Протопик^TM, при одинаковой концентрации такролимуса в составе средства. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 12 табл., 9 пр., 9 ил.

1. Композиция для местного применения, включающая:

первую дисперсную фазу, включающую первое масло и такролимус;

вторую дисперсную фазу, включающую второе масло;

дисперсионную водную среду и

поверхностно-активное вещество;

где первое масло отличается от второго масла и фазы химически и физически различны,

где первое масло включает диизопропиладипат и/или изопропилмиристат и/или триглицериды каприловой кислоты,

где второе масло включает масло, выбранное из группы, состоящей из минерального масла, диметикона, циклометикона, гидрированного полиизобутана, гептаметилнонана и смесей двух или более из них,

где композиция имеет общее содержание поверхностно-активного вещества менее 5 мас.% от массы композиции и

где полярная смешивающаяся с водой жидкость, если она присутствует, присутствует в количестве менее 5 мас.% от массы композиции.

2. Композиция по п.1, где композиция содержит полярную смешивающуюся с водой жидкость, выбранную из С1-С4 спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната и их смесей.

3. Композиция по п.1 или 2, имеющая общее содержание поверхностно-активных веществ меньше чем 1 мас.%, более предпочтительно меньше чем 0,5 мас.%.

4. Композиция по любому из пп.1-3, содержащая меньше чем 1 мас.% в расчете на массу полярной смешивающейся с водой жидкости, предпочтительно меньше чем 0,5 мас.%.

5. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция имеет массовое соотношение второго масла и первого масла от 1:3 до 3:1, предпочтительно от 2:3 до 3:2, более предпочтительно около 1:1.

6. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция включает от 10 до 30 мас.% второй дисперсной фазы в расчете на массу композиции, предпочтительно от 15 до 25 мас.%.

7. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция включает по меньшей мере 10 мас.% воды в расчете на массу композиции, предпочтительно по меньшей мере 50 мас.%.

8. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция включает не более двух дисперсных фаз.

9. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция имеет средний диаметр капель от 1 до 30 мкм, предпочтительно от 1 до 20 мкм.

10. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция имеет pH от 3,5 до 6, предпочтительно от 4 до 5,5, более предпочтительно от 4,5 до 5.

11. Композиция по любому из предшествующих пунктов, включающая:

первую дисперсную фазу, включающую диизопропиладипат и такролимус;

вторую дисперсную фазу, включающую минеральное масло; и

дисперсионную водную среду;

предпочтительно, где такролимус по существу присутствует в первой дисперсной фазе;

где композиция включает меньше чем 1 мас.% поверхностно-активного вещества в расчете на массу композиции;

где композиция включает меньше чем 5 мас.%, в расчете на массу композиции, C₁-C₄ спиртов, полиэтиленгликоля, этиленгликоля, пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля, глицерина, моноэтилового эфира диэтиленгликоля, пропиленкарбоната и смесей двух или более из вышеуказанных; и

где композиция находится в форме лосьона или крема.

12. Композиция по любому из предшествующих пунктов для применения в лечении кожи человека и/или животного путем местного нанесения.

13. Способ получения композиции для местного применения по любому из пп. 1-11, включающий:

(i) обеспечение первого масла, включающего такролимус;

(ii) обеспечение второго масла;

(iii) обеспечение водного компонента и

(iv) диспергирование первого масла и второго масла в водном компоненте с образованием композиции для местного применения,

где указанная композиция включает

- первую дисперсную фазу, содержащую первое масло и такролимус;

- вторую дисперсную фазу, содержащую второе масло;

- дисперсионную водную среду и

- поверхностно-активное вещество;

где первое масло отличается от второго масла и фазы химически и физически различны,

где первое масло включает диизопропиладипат и/или изопропилмиристат и/или триглицериды каприловой кислоты,

где второе масло включает масло, выбранное из группы, состоящей из минерального масла, диметикона, циклометикона, гидрированного полиизобутана, гептаметилнонана и смесей двух или более из них,

где композиция имеет общее содержание поверхностно-активного вещества менее 5 мас.% от массы композиции и

где полярная смешивающаяся с водой жидкость, если она присутствует, присутствует в количестве менее 5 мас.% от массы композиции.