ЛЕЧЕНИЕ ВНУТРИПЕЧЕНОЧНОГО ХОЛЕСТАЗА И РОДСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ Российский патент 2021 года по МПК A61K35/74 A61P1/16 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится, главным образом, к медицине. В частности, изобретение относится к способам и продуктам для пробиотикотерапии млекопитающих при опасности развития или появления внутрипеченочного холестаза во время беременности.

Предпосылки создания изобретения

Внутрипеченочный холестаз беременных (ICР) является заболеванием, которое появляется на поздней стадии беременности, с зудом (пруритусом) и осложнениями со стороны плода. Он является наиболее распространенным специфическим для беременности заболеванием печени и ассоциируется с повышенной опасностью вредных последствий для плода, включая преждевременные роды и внутриутробную смерть. Кроме того, ICР ассоциируется с повышенной опасностью преэклампсии, заболевания щитовидной железы, диабета и рака. Следующие факторы могут повысить опасность развития ICP у женщины:

- родственная близость с имеющим ICP;

- ICP, перенесенный при предыдущих беременностях;

- беременность двойнями, тройнями и т.д. (многоплодная беременность);

- наличие в истории болезни повреждения печени;

- лечение методом оплодотворения in-vitro (IVF).

Диагностические критерии ICP изменялись со временем и включают клинические проявления желтухи, тяжесть пруритуса и повышенные уровни желчных кислот. В настоящее время наиболее подходящим лабораторным параметром для диагноза ICP является повышение желчных кислот (≥10 мкмоль/л) в комбинации с необъяснимым пруритусом.

Доступным фармакологическим лечением для больных ICP является урсодезоксихолевая кислота (UDCA). Действие UDCA исследовали на женщинах с ICP в двойном слепом испытании с контролем плацебо. Подвергали произвольно 130 женщин лечению UDCA, лечению дексаметазоном и лечению плацебо. Зуд и биохимические маркеры холестаза анализировали при инклюзии и после 3 недель лечения. Также регистрировали осложнения со стороны плода. Лечение UDCA улучшает некоторые биохимические маркеры ICP, не зависящие от тяжести заболевания, но существенное ослабление зуда и заметное снижение сывороточных желчных кислот обнаружено только у пациенток с тяжелым ICP (уровни желчных кислот ≥40 мкмоль/л), и, следовательно, существует потребность в более эффективном лечении. Настоящее изобретение, как предполагается, решает эту проблему.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к способам, применениям и продуктам (или композициям) для пробиотикотерапии млекопитающих при опасности развития или появления внутрипеченочного холестаза, в том числе, но без ограничения, внутрипеченочного холестаза беременных.

Настоящее изобретение относится к способам, применениям и продуктам (или композициям) для пробиотикотерапии млекопитающих, основанных на некоторых бактериях с желательными характеристиками.

Изобретение раскрывает способ модуляции сывороточного уровня желчных кислот у млекопитающего при опасности развития или появления внутрипеченочного холестаза беременных.

Изобретение раскрывает способ ослабления зуда у млекопитающего, имеющего внутрипеченочный холестаз беременных. Изобретение также раскрывает способ предупреждения зуда у млекопитающего при опасности развития внутрипеченочного холестаза беременных.

Изобретение относится к способу облегчения и/или предупреждения опасности для плода млекопитающих при опасности развития или появления внутрипеченочного холестаза беременных.

Первостепенным предметом изобретения являются бактерии, например, пробиотические бактерии, со способностью к деконъюгации/гидролизу и/или 7-эпимеризации желчных кислот для применения при лечении внутрипеченочного холестаза беременных (и других заболеваний, также описанных в настоящем описании в другом месте). В некоторых воплощениях используют два или более различных бактериальных штаммов, которые вместе проявляют указанные способности. Так как эпимеризация включает две реакции – окисление 7α-гидроксильной группы 7α-гидроксистероиддегидрогеназой (HSDH) и стереоспецифическое восстановление 7-кетофункциональности с помощью 7β-HSDH, другим предметом изобретения является выбор двух различных пробиотических бактериальных штаммов или видов для получения реакции 7-эпимеризации, причем один включает ферментативную активность7α-HSDH, а другой включает ферментативную активность7β-HSDH. В другом воплощении изобретения при лечении также можно использовать сульфатвосстанавливающие пробиотические бактерии. В некоторых воплощениях изобретение включает использование нескольких бактериальных штаммов, которые вместе проявляют способности, описанные выше. С другой стороны, можно использовать один бактериальный штамм.

Подавляющее большинство встречающихся в природе солей желчных кислот являются конъюгированными, наиболее часто с глицином или таурином. Такие желчные соли, когда присутствуют в тонкой кишке, активно реабсорбируются через апикальный натрий-зависимый переносчик желчных кислот (ASBT), расположенный в подвздошной кишке. Деконъюгированные желчные кислоты таким путем активно не реабсорбируются, и часть их в конечном счете будет выделяться в фекалиях. Кроме того, деконъюгированные желчные кислоты являются более гидрофобными, чем их конъюгированные аналоги, поэтому менее реабсорбируемы через кишечник, что также приводит к более высокой экскреции в фекалиях. Иными словами, деконъюгация желчных кислот (также называемая в настоящем описании гидролизом желчных кислот) ослабляет кишечно-печеночную рециркуляцию желчных кислот и посредством этого снижает общее количество желчных кислот, включая, например, сывороточные или плазменные уровни желчных кислот. В желчи человека конъюгаты с глицином, как правило, присутствуют в большей пропорции, чем конъюгаты таурина (3:1). Следовательно, в некоторых аспектах изобретение включает введение бактериального штамма или вида, который включает гидролизующую ферментативную активность. В некоторых воплощениях гидролизующая ферментативная активность или активность деконъюгации желчных кислот бактериального штамма может иметь более высокую аффинность в отношении конъюгатов с глицином, чем, например, конъюгатов с таурином. Таким образом, без желания привязываться к какой-либо теории, полагают, что способностью бактериальных штаммов является достижение или стимуляция деконъюгации желчных кислот, которая приводит к пониженной реабсорбции или повышенной экскреции указанных желчных кислот, которые в свою очередь приводят к пониженным сывороточным уровням желчных кислот. Таким образом, штаммы с такой активностью находят терапевтическую применимость при заболеваниях или расстройствах, характеризующихся повышенными сывороточными уровнями желчных кислот.

В некоторых аспектах гидролизующий бактериальный штамм (или штамм, включающий активность деконъюгации желчных кислот) может включать штамм Bifidobacterium, например, Bifidobacterium longum, например, Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

В другом воплощении изобретения гидролизующие бифидобактерии (или другой вид бактерий или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот, описанный в настоящем описании в любом другом месте) могут вводиться млекопитающему вместе с пребиотиком, например, усиливающим активность бифидобактерий (или других бактерий). Пребиотиком может являться, но без ограничения, инулин, крахмал, фруктоолигосахариды (FOS) или галактоолигосахариды (GOS).

Урсодезоксихолевую кислоту (UDCA) используют для лечения ICP в течение ряда лет. Абсорбция урсодезоксихолевой кислоты происходит медленно и не полностью из-за ее плохой растворимости, и она конкурентно ингибирует абсорбцию других желчных кислот. Некоторые виды бактерий могут превращать хенодезоксихолевую кислоту в урсодезоксихолевую кислоту через реакцию 7-эпимеризации. Таким образом, вместо добавления урсодезоксихолевой кислоты авторы изобретения используют ферментативную активность бактерий и способность изменять композицию желчных кислот. Это приведет, например, к сниженному количеству желчных кислот в кровотоке. Также можно получить сниженные уровни литохолевой кислоты. Эпимеризация включает две реакции – окисление 7α-гидроксильной группы 7α-гидроксистероиддегидрогеназой (HSDH) и стереоспецифическое восстановление 7-кетофункциональности 7β-HSDH.

Бактериальные штаммы, имеющие способность к 7-эпимеризации, включают, но без ограничения, такие бактерии, как Clostridium, например, Clostridium baratii, например, Clostridium baratii ATCC 27638. В другом воплощении изобретения можно выбрать два различных вида бактерий – один, способный к стереоспецифическому восстановлению 7-кетофункциональности с помощью 7β-HSDH, и другой, имеющий ферментативную активность 7α-HSDH. Неограничивающие примеры пробиотических бактериальных штаммов, имеющих ферментативную активность 7α-HSDH, включают виды Bacteroides, например, Bacteroides fragilis (например, Bacteroides fragilis ATCC 25285) и Bacteroides thetaiotaomicron (например, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079), и неограничивающий пример штамма, имеющего 7β-HSDH ферментативную активность, включает вид Collinsella, например, Collinsella aerofaciens (например, Collinsella aerofaciens ATCC 25986).

Так как из-за введения гидролизующего бактериального штамма в деконъюгированной форме могут находиться еще другие желчные кислоты, может происходить повышение концентрации свободного таурина. Поэтому другим предметом изобретения является введение сульфатвосстанавливающих бактерий, причем посредством этого отменяется вредное действие повышения концентрации таурина. Такие сульфатвосстанавливающие бактерии включают, но без ограничения, вид Desulfovibrio, например, Desulfovibrio piger (например, Desulfovibrio piger DSM 32187). В некоторых воплощениях использование таких сульфатвосстанавливающих бактерий предпочтительно.

Подробное описание изобретения

Таким образом, настоящее изобретение относится вообще к применению пробиотических бактериальных штаммов для лечения или предупреждения (снижения опасности) внутрипеченочного холестаза. Такие лечения основаны на отборе одного или нескольких бактериальных штаммов (или видов), которые имеют активность деконъюгации (или гидролиза) и/или активность 7-эпимеризации желчных кислот. Предпочтительно один или несколько штаммов, используемых в терапевтических способах, будут иметь как активность деконъюгации желчных кислот, так и активность 7-эпимеризации или в одном и том же штамме вместе или предоставленные в виде комбинации штаммов. Такие один или несколько штаммов можно использовать для лечения или предупреждения (снижения опасности) других заболеваний, где-либо описанных в настоящем описании. Такие терапевтические лечения, главным образом, основаны на способности указанных бактериальных штаммов модулировать и предпочтительно снижать сывороточный уровень желчных кислот. Таким образом, изобретение также относится к способам модуляции (например, снижения) уровня желчных кислот, например, уровня желчных кислот в жидкостях организма, такого как сывороточный уровень желчных кислот.

Теперь вышеуказанные и другие аспекты настоящего изобретения будут описываться подробнее в отношении описания и методологий, предлагаемых в настоящем описании. Следует иметь в виду, что изобретение можно воплотить в различных формах, и оно не должно рассматриваться как ограниченное воплощениями, представленными в настоящем описании. Скорее эти воплощения приводятся так, что настоящее раскрытие будет доскональным и полным, и даст представление специалистам в данной области техники об изобретении в полном объеме.

Терминология, используемая в описании изобретения, имеет целью только описание определенных воплощений и не предназначена для ограничения изобретения.

Предполагается, что используемые в описании воплощений изобретения единственные формы также включают множественные формы, если контекст явно не указывает иное. Также использование «и/или» относится и охватывает обе и все возможные комбинации одного или нескольких ассоциированных перечисленных предметов.

Кроме того, термин «примерно», используемый в настоящем описании, когда относится к измеряемой величине, такой как количество соединения, доза, время, температура и т.п., относится к вариациям в 20%, 10%, 5%, 1%, 0,5% или даже 0,1% конкретного количества.

Когда используют интервал (например, интервал от х до у), это означает, что измеряемая величина представляет собой интервал от примерно х до примерно у или любой интервал между ними, такой как от примерно х₁ до примерно у₁, и т.д.

Также будет понятно, что термины «включать» и/или «включающий», когда используются в настоящем описании, конкретизируют присутствие установленных признаков, целых чисел, стадий, операций, элементов и/или компонентов, но не препятствуют присутствию или добавлению одного или нескольких других признаков, целых чисел, стадий, операций, элементов, компонентов и/или их групунктов.

В некоторых воплощениях изобретения композиции, например, не содержат каких-либо активных ингредиентов или компонентов, кроме конкретизированных, например, состоят из таких активных ингредиентов или компонентов. Так, например, когда в настоящем описании описываются композиции, включающие определенные бактериальные штаммы, в некоторых воплощениях композиции будут состоять из этих бактериальных штаммов и не будут содержать какие-либо другие бактериальные штаммы. В других воплощениях такие композиции не будут содержать какие-либо другие или дополнительные активные ингредиенты или компоненты.

Если не определяются иначе, все термины, включая технические и научные термины, используемые в описании, имеют те значения, какие им обычно придают специалисты в данной области техники, к которым имеет отношение настоящее изобретение.

«Эффективное количество» или «дозировка» при использовании в настоящем описании обозначают количество бактериальной композиции по изобретению, которое является достаточным для получения желательного действия, которое может являться терапевтическим и/или благоприятным действием. Эффективное количество или дозировка будут изменяться с возрастом, общим состоянием субъекта, тяжестью состояния, от которого лечат, определенной вводимой композицией, длительностью лечения, характером любого одновременного лечения, используемым фармацевтически приемлемым носителем и подобными факторами в рамках знаний и опыта специалистов в данной области техники. Соответственно, «эффективное количество» или дозировку в любом отдельном случае может определить специалист в данной области техники, обратившись к соответствующим пособиям и литературе и/или используя обычные экспериментальные методы.

Терминами «лечить», «лечащий» или «лечение» (и их грамматическими вариациями) обозначается, что тяжесть состояния субъекта ослабевает, по меньшей мере частично улучшается или облегчается, и/или что достигается некоторое облегчение, смягчение или ослабление по меньшей мере в одном клиническом симптоме и/или имеется задержка в развитии заболевания или расстройства.

Как будет ясно из раскрытия в другом месте настоящего описания, способы и применения по настоящему изобретению подходят для снижения опасности заболевания или предупреждения заболевания, а также активного лечения заболеваний (например, лечения доклинической стадии болезни). Таким образом, изобретение также охватывает профилактическое лечение.

Такие превентивные (или защитные) аспекты обычно осуществляют со здоровыми или нормальными субъектами или субъектами, находящимися в зоне риска, и они включают как полное предотвращение, так и существенное предотвращение. Подобным образом, существенное предотвращение может включать сценарий, где тяжесть заболевания или симптомы заболевания ослабляются (например, измеримо или значимо ослабляются) по сравнению с тяжестью или симптомами, которые ожидались бы, если лечение не поступало.

«Терапевтически эффективное» количество при использовании в настоящем описании является количеством, которое является достаточным для лечения (как определено в настоящем описании) субъекта. Специалистам в данной области техники следует иметь в виду, что терапевтические действия необязательно являются полными или лечебными, пока субъекту предоставляется некоторое благоприятное действие.

Используемые в настоящем описании термины «модуляция», «модулировать», «модулирует» или их грамматические вариации обозначают изменение, например, в количестве или уровне компонента в жидкости организма (например, крови, сыворотке и т.п.) субъекта, при введения субъекту терапевтически эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный, например, пробиотический бактериальный вид или штамм, так что посредством этого повышается или снижается количество или уровень компонента. В воплощениях изобретения, когда модулируют уровни желчных кислот в жидкости организма, например, крови или сыворотке, тогда предпочтительно количество или уровень желчных кислот снижают или уменьшают.

Термины «увеличивать», «увеличивающий», «увеличенный», «более высокий», «усиливать», «усиленный», «усиливающий» и «усиление» (и их грамматические вариации), используемые в настоящем описании, описывают повышение, например, повышение количества или уровня компонента в жидкости организма (например, крови, сыворотке и т.п.) субъекта (например, повышение по меньшей мере примерно на 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 350%, 300%, 350%, 400%, 450%, 500% или больше). Такое увеличение экспрессии, количества или уровня можно наблюдать, например, сравнивая количество или уровень компонента в жидкости организма субъекта с количеством или уровнем того же компонента в жидкости организма контрольного субъекта, которому, например, не вводили терапевтически эффективное количество композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный, например, пробиотический бактериальный, вид или штамм, описанный в настоящем описании.

Используемые в настоящем описании термины «уменьшать», «уменьшенный», «уменьшающий», «уменьшение», «убавлять», «подавлять» и «снижать» (и их грамматические вариации) описывают, например, снижение количества или уровня компонента в жидкости организма (например, крови, сыворотке и т.п.) субъекта, например, по сравнению с контролем, описанным в настоящем описании. Таким образом, такое снижение количества или уровня можно наблюдать, например, сравнивая количество или уровень компонента в жидкости организма субъекта с количеством или уровнем того же компонента в жидкости организма контрольного субъекта, которому, например, не вводили терапевтически эффективное количество композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный, например, пробиотический бактериальный, вид или штамм, описанный в настоящем описании. В предпочтительных воплощениях изобретения получают снижение уровней желчных кислот в жидкости организма субъекта (например, сывороточных уровней желчных кислот), например, по сравнению с контрольным субъектом.

Соответствующие контрольные субъекты могут быть легко идентифицированы специалистом в данной области техники и могут включать не подвергавшегося лечению или получавшего плацебо субъекта (или его популяцию) или могут включать уровень определенного параметра, например, уровень желчных кислот, у того же отдельного субъекта, измеренный в более ранний момент времени, например, до лечения (например, сравнение с «базовым» уровнем у такого субъекта). Предпочтительно увеличение или снижение (в соответствующем случае) будет значимым, например, клинически или статистически значимым, например, со значением вероятности ≤0,5 при сравнении с соответствующим контрольным уровнем или значением.

«Субъект» в изобретении включает любое животное, которое имеет или восприимчиво к внутрипеченочному холеостазу (или любому другому заболеванию или расстройству для лечения по настоящему изобретению, описанному в настоящем описании в другом месте). В некоторых воплощениях субъект может представлять собой млекопитающее. Субъекты млекопитающие включают, но без ограничения, людей, приматов, не относящихся к человеку (например, гориллу, обезьяну, бабуина и шимпанзе и т.д.), собак, кошек, коз, лошадей, свиней, крупный рогатый скот, овец и т.п., и лабораторных животных (например, крыс, морских свинок, мышей, песчанок, хомячков и т.п.). Подходящие субъекты включают как самцов, так и самок, и субъектов любого возраста, включая эмбрионы (например, in utero или in ovo или плод), детей, юношей, подростков, взрослых и стареющих субъектов. В некоторых воплощениях субъектом в настоящем изобретении является человек. В типичных воплощениях субъектом является женщина. В других типичных воплощениях субъектом является беременная женщина и/или ее плод или будущий ребенок, который может страдать от вредного действия внутрипеченочного холестаза (или других заболеваний или расстройств, описанных в настоящем описании).

«Субъект» или «нуждающийся субъект» в способах по изобретению может являться субъектом, о котором известно, что он имеет или предполагается, что имеет, или если существует опасность развития у него холестаза, например, внепеченочного холестаза или внутрипеченочного холестаза. В типичных воплощениях субъект или нуждающийся субъект может являться субъектом, о котором известно, что он имеет или предполагается, что имеет, или если существует опасность развития у него внутрипеченочного холестаза беременных (ICP). Субъект или нуждающийся субъект также может являться субъектом, о котором известно, что он имеет, предполагается, что имеет, или если существует опасность развития у него пруритуса (в частности, пруритуса, появляющегося как симптом внутрипеченочного холестаза, например, ICP). В некоторых воплощениях субъект или нуждающийся субъект может являться субъектом, о котором известно, что он имеет, предполагается, что имеет, или если существует опасность развития у него желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита, гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

Способы и применения по изобретению также можно использовать для лечения, облегчения (ослабления или успокоения) или предупреждения (уменьшения опасности) симптомов или побочного действия вышеуказанных заболеваний, например, пруритуса, в случае внутрипеченочного холестаза или ICP (или конечно любого другого заболевания, описанного в настоящем описании).

В предпочтительных воплощениях субъект или нуждающийся субъект является субъектом, о котором известно, что он имеет, или предполагается, что имеет, или в опасности развития внутрипеченочного холестаза, в частности, внутрипеченочного холестаза беременных. В целом способы по изобретению можно использовать для лечения или уменьшения опасности любого заболевания, ассоциированного с или характеризующегося измененным или предпочтительно повышенным уровнем желчных кислот, в частности, сывороточным уровнем желчных кислот, например, сывороточными уровнями желчных кислот ≥10 мкмоль/л (например, 10 - 39 мкмоль/л), или ≥40 мкмоль/л (например, 40-79 мкмоль/л), или ≥80 мкмоль/л. В некоторых воплощениях предпочтительны субъекты с сывороточными уровнями желчных кислот ≥10 мкмоль/л и <40 мкмоль/л.

Используемый в настоящем описании термин «сопутствующее введение» или «комбинированное введение» композиции, терапевтического средства или известного лекарственного средства (например, пребиотика) с бактериальной композицией по настоящему изобретению означает введение известного лекарственного лечения или лекарственного средства и, кроме того, одного или нескольких бактериальных видов или штаммов по изобретению в такое время, что как известное лекарственное средство, так и вид бактерий или штамм будут иметь терапевтический эффект. В некоторых случаях такой терапевтический эффект будет синергетическим. Такое сопутствующее введение может включать одновременное (т.е. в одно и то же время, параллельно в одно и то же время), предшествующее или последующее введение (например, последовательное) известного лекарственного средства относительно введения бактериальной композиции по настоящему изобретению. Такое одновременное или комбинированное введение также может относиться к введению соединения (например, бактериального штамма вида) по изобретению различными путями введения по отдельности (например. по меньшей мере спустя 2 или больше часов), последовательно (например, в пределах примерно 2 часов, например, примерно 15 с, 30 с, 45 с, 1 мин, 2 мин, 3 мин, 4 мин, 5 мин, 6 мин, 7 мин, 8 мин, 9 мин, 10 мин, 11 мин, 12 мин, 13 мин, 14 мин, 15 мин, 16 мин, 17 мин, 18 мин, 19 мин, 20 мин, 21 мин, 22 мин, 23 мин, 24 мин, 25 мин, 26 мин, 27 мин, 28 мин, 29 мин, 30 мин, 35 мин, 40 мин, 45 мин, 50 мин, 55 мин, 60 мин, 65 мин, 70 мин, 75 мин, 80 мин, 85 мин, 90 мин, 95 мин, 100 мин, 105 мин, 110 мин, 115 мин, и т.п., и любого интервала или величины в указанных пределах) и/или параллельно в одно и то же время (например, одновременно) для того, чтобы достичь эффективного количества или дозировки. Специалист в данной области техники не будет иметь затруднений при определении соответствующего промежутка времени, последовательности и дозировок для введения определенных лекарственных средств и бактериальных композиций по настоящему изобретению.

«Пробиотики» представляют собой живые микроорганизмы, которые при введении в адекватных количествах, благоприятствуют здоровью хозяина.

Внутрипеченочный холестаз беременных (ICP) обычно имеет место во время последнего триместра беременности. Он может запускать тяжелый пруритус, в особенности на руках и ногах (часто без покраснения), но редко затрагивает здоровье матери надолго. Однако он может вызывать тяжелые осложнения со стороны плода, такие как преждевременные (ранние) роды, патологическое состояние плода, вдыхание мекония во время родов, приводящее к затруднениям дыхания (например, синдрому аспирации мекония) и также внутриутробной смерти или мертворождению. Таким образом, способами и применениями по изобретению можно лечить или уменьшить опасность таких осложнений со стороны плода, а также лечить или уменьшить опасность ICP и его синдромы у матери. Женщины, которые перенесли ICP ранее, имеют более высокий риск развития ICP во время их более поздних беременностей; также женщины, родственницы которых имели ICP, имеют повышенный риск развития ICP. Другими факторами риска, связанными с развитием ICP, являются многоплодные беременности, история болезни с повреждением печени и оплодотворение in vitro (IVF). Такие женщины являются дополнительными примерами субъектов или нуждающихся субъектов (например, субъектов в опасности), которых можно лечить согласно настоящему изобретению.

Диагностические критерии ICP изменились со временем и включают клинические проявления желтухи, тяжесть пруритуса и повышенные уровни желчных кислот, как правило, в крови, например, сыворотке или плазме. В настоящее время наиболее подходящим лабораторным параметром для диагностики ICP является повышение желчных кислот (≥10 мкмоль/л) в комбинации с необъяснимым пруритусом. В предстоящем когортном исследовании в Швеции найдено, что частота ICP составляет 1,5%. Умеренную форму ICP (81% больных ICP) можно определить как уровни желчных кислот <40 мкмоль/л (но ≥10 мкмоль/л), и тяжелую форму ICP можно определить как уровни желчных кислот ≥40 мкмоль/л, что также ассоциируется с большей степенью осложнений со стороны плода. Вероятность осложнений со стороны плода возрастает на 1%-2% на мкмоль/л общего возрастания желчных кислот. Любые формы ICP можно лечить способами по настоящему изобретению. Например, в предпочтительном воплощении лечат умеренные формы ICP, определенные выше. В других воплощениях лечат тяжелые формы ICP, определенные выше.

В последнем триместре гормоны беременности, в частности, прогестерон, вызывают расслабление мышечной ткани, что будет готовить родовой канал к родам. Это также может влиять на собственную функцию желчного пузыря, цель которой хранение желчи.

Желчные кислоты/соли играют критическую роль в активации пищеварительных ферментов и солюбилизации жиров и жирорастворимых витаминов, и вовлекаются в заболевания печени, билиарные и кишечные заболевания. Желчные кислоты синтезируются в печени многостадийным с участием многих органелл путем. Желчные кислоты выносятся гепатоцитами в канальцы с образованием желчи. Канальцы дренируют в правый и левый протоки, и желчь течет в желчный пузырь. Желчь высвобождается из желчного пузыря и направляется в двенадцатиперстную кишку, где она вносит вклад в метаболизм и разложение жира.

Обычные желчные кислоты различаются в первую очередь числом и ориентацией гидроксильных групп на циклической структуре стерола. Термин «первичные желчные кислоты» относится к кислотам, синтезированным de novo печенью. У людей первичные желчные кислоты включают холевую кислоту (3α,7α,12α-тригидрокси-5β-холановая кислота) («CA») и хенодезоксихолевую кислоту (3α,7α-дигидрокси-5β-холановая кислота) («CDCA»). Дегидроксилирование этих желчных кислот интестинальными бактериями дает более гидрофобные вторичные желчные кислоты, дезоксихолевую кислоту (3α,12α-дигидрокси-5β-холановая кислота) («DCA») и литохолевую кислоту (3α-гидрокси-5β-холановая кислота) («LCA»). Эти четыре желчные кислоты CA, CDCA, DCA и LCA, как правило, составляют более 99% пула желчных солей у людей. Вторичные желчные кислоты, которые метаболизированы печенью, иногда обозначают как третичные желчные кислоты.

Кетожелчные кислоты продуцируются у людей вторично как следствие окисления гидроксильных групп желчной кислоты, в частности, 7-гидроксильной группы, бактериями толстой кишки. Однако кетожелчные кислоты быстро восстанавливаются печенью до соответствующих α– или β–гидроксижелчных кислот. Например, соответствующей кетокислотой CDCA является 7-кетолитохолевая кислота, и одним из продуктов ее восстановления соответствующей бета-гидроксикислотой является урсодезоксихолевая кислота (3α-7β-дигидрокси-5β-холановая кислота) («UDCA») – третичная желчная кислота.

UDCA, основной компонент медвежьей желчи, используется как фармацевтическое средство для лечения и защиты от многих типов болезни печени чуть больше 70 лет. Ее медицинские применения включают растворение радиопрозрачных желчных конкрементов, лечение билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С. Желчные кислоты других видов млекопитающих, содержащие 6β-гидроксильную группу, которые обнаружены у крыс и мышей, известны как мурихолевая кислота, и 6α-гидроксижелчные кислоты, продуцируемые свиньями, названы гиохолевой кислотой и гиодезоксихолевыми кислотами. 23-Гидроксихолевые кислоты водных млекопитающих известны как фоцехолевая и фоцедезоксихолевая кислоты.

Обычно более 99% встречающихся в природе желчных солей, секретируемых в желчь человека, являются конъюгированными. Конъюгаты представляют собой желчные кислоты, в которых второй органический заместитель (например, глицин, таурин, глюкуронат, сульфат или, изредка, другие заместители) присоединен к боковой цепи карбоновой кислоты или к одной из циклических гидроксильных групп через сложноэфирную или амидную связь. Конъюгированные желчные кислоты являются менее цитотоксичными, чем свободные желчные кислоты.

Примерно 95% желчных солей, которые высвобождаются в тонкий кишечник, активно абсорбируются повторно. Реабсорбция желчных солей, в частности, конъюгированных желчных кислот, происходит через апикальный натрий-зависимый транспортер желчных кислот (ASBT), присутствующий в мембране щеточной каймы энтероцита. Как только желчные соли пройдут базолатеральную мембрану, они транспортируются в кровь. Небольшой процент желчных солей не реабсорбируется активно и претерпевает деконъюгацию микробиотой тонкого кишечника или абсорбируясь или превращаясь во вторичные желчные кислоты, дезоксихолат (DCA, из холата) и литохолат и урсодезоксихолат (LCA и UDCA, из хенодезоксихолата). Вторичные желчные кислоты или пассивно абсорбируются или выделяются в фекалиях. Асборбированные первичные и вторичные желчные кислоты и соли снова транспортируются в печень, где большинство, но не все, активно транспортируются в гепатоциты. Как только в печени желчные кислоты реконъюгируются, они затем ресекретируются вместе с вновь синтезированными желчными солями. Весь этот процесс составляет один цикл, который называют энтерогепатической циркуляцией. В просвете тонкой кишки концентрации желчных кислот изменяются, причем основной объем повторного поглощения происходит в дистальном отделе тонкой кишки. Желчные кислоты/соли изменяют рост бактериальной флоры в кишке. Пул желчных кислот содержит примерно 2-4 г желчных кислот, и этот пул возвращается в цикл через энтерогепатическую циркуляцию порядка шесть-десять раз каждый день. Из общего пула желчных солей примерно 0,2-0,6 г выделяются в фекалиях каждый день. Эта последняя часть желчных солей восполняется через синтез de novo желчных кислот из холестерина.

Настоящее изобретение основано на принципе, что комбинации некоторых бактерий снижают сывороточный уровень желчных кислот и успокаивают пруритус у женщин, страдающих от внутрипеченочного холестаза беременных. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам, применениям и продуктам пробиотикотерапии млекопитающих с опасностью развития или имеющих или предположительно имеющих внутрипеченочный холестаз, включая, но без ограничения, внутрипеченочный холестаз беременных. Также предполагается лечение или предупреждение других заболеваний, описанных где-либо в настоящем описании. Настоящее изобретение можно осуществить различными путями, в различных формах и воплощениях, и оно не ограничивается тем, что описано в настоящем описании.

Отдельные воплощения изобретения относятся к способу модуляции (например, снижению) сывороточного уровня желчных кислот и способу лечения или ослабления пруритуса или опасности пруритуса у субъекта, например, млекопитающего, предпочтительно, имеющего внутрипеченочный холестаз, включая, но без ограничения, млекопитающих или субъектов с опасностью развития или имеющих или предположительно имеющих внутрипеченочный холестаза беременных.

В одном воплощении указанному субъекту, например, млекопитающему, вводят пробиотические бактерии. Пробиотические бактерии, имеющие способность к деконъюгации/гидролизу желчных кислот и 7-эпимеризации желчных кислот являются предпочтительными для применения при лечении внутрипеченочного холестаза беременных. В родственных воплощениях пробиотические бактерии могут включать один бактериальный штамм или вид, имеющий способности к деконъюгации/гидролизу желчных кислот и 7-эпимеризации желчных кислот, или комбинацию нескольких бактериальных штаммов или видов (т.е. более одного, например, 2, 3, 4, 5, 6 и т.п. бактериальных штаммов или видов), которые вместе проявляют или обеспечивают способности, описанные выше.

Как описано в настоящем описании в другом месте, деконъюгированные желчные кислоты активно не реабсорбируются ASTB, и часть их в итоге будет выделяться в фекалиях. Кроме того, деконъюгированные желчные кислоты являются более гидрофобными, чем их конъюгированные аналоги, поэтому они слабее реабсорбируются через тонкую кишку, что также приводит к более высокой экскреции в фекалии. Иными словами, деконъюгация желчных кислот уменьшает энтерогепатическую рециркуляцию желчных кислот, посредством этого уменьшая общий пул желчных кислот. Абсорбция урсодезоксихолевой кислоты (UDCA) является медленной и неполной из-за плохой растворимости, и она конкурентно ингибирует абсорбцию других желчных кислот. Некоторые виды бактерий могут превращать хенодезоксихолевую кислоту в урсодезоксихолевую кислоту через реакцию 7-эпимеризации. Эпимеризация включает две реакции – окисление 7α-гилроксильной группы 7α-гидроксистероиддегидрогеназой (HSDH) и стереоспецифическое восстановление 7-кетофункциональности 7β-HSDH.

В одном воплощении комбинация пробиотических штаммов может включать один штамм со способностью к деконъюгации/гидролизу желчных кислот и другой штамм, имеющий способность к 7-эпимеризации. В некоторых воплощениях гидролизующий бактериальный штамм может включать Bifidobacterium, например, Bifidobacterium longum, например, Bifidobacterium longum ATCC BAA-999. В человеческой желчи конъюгаты глицина, как правило, составляют более высокую пропорцию, чем конъюгаты таурина (3:1); поэтому в некоторых воплощениях деконюгирующая/гидролизующая активность желчных кислот бактериального штамма может иметь более высокую аффинность в отношении конъюгатов глицина, например, чем в отношении конъюгатов таурина. В некоторых воплощениях бактериальный штамм, имеющий активность 7-эпимеризации, может включать Clostridium, например, Clostridium baratii, например, Clostridium baratii ATCC 27638.

В другом воплощении указанная комбинация пробиотических штаммов может включать один штамм и/или вид, включающий ферментативную активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот и более одного штамма и/или вида, обеспечивающего ферментативную активность 7-эпимеризации, например, другой штамм и/или вид, включающий ферментативную активность 7α-HSDH, и еще один штамм и/или вид, включающий ферментативную активность 7β-HSDH. Эпимеризация гидроксильных групп желчных кислот является обратимым изменением в стереохимии от конфигурации α до β (или наоборот). В контексте настоящего изобретения активность 7-эпимеризации может привести к обратимому изменению CDCA до UDCA. Степень обратимого окисления и восстановления гидроксильных групп желчных кислот HSDH зависит частично от редокс-потенциала окружающей среды в кишке. Более высокий редокс-потенциал, благоприятствующий окислению с помощью 7α-HSDH, обнаружен на поверхности слизистой оболочки, и более низкий редокс-потенциал, благоприятствующий восстановлению 7β-HSDH, обнаружен в просвете тонкой кишки. При применении двух различных штаммов (одного с ферментативной активностью 7α-HSDH и другого с ферментативной активностью 7β-HSDH) для осуществления реакции 7-эпимеризации используют преимущество применения изменяющегося редокс-потенциала. В некоторых воплощениях гидролизующий штамм/вид может включать Bifidobacterium, например, Bifidobacterium longum, например, Bifidobacterium longum ATCC BAA-999. В некоторых воплощениях примеры бактериальных видов или штаммов, имеющих ферментативную активность 7α-HSDH, могут включать Bacteroides, например, Bacteroides fragilis, например, Bacteroides fragilis ATCC 25285, и Bacteroides thetaiotaomicron, например, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079. Collinsella, например, Collinsella aerofaciens, например, Collinsella aerofaciens ATCC 25986, является неограничивающим примером штамма или вида с ферментативной активностью 7β-HSDH.

В некоторых воплощениях, когда больше желчных кислот могут находиться в деконъюгированной форме из-за введения гидролизующего бактериального штамма/вида, вероятно может происходить повышение концентрации свободного таурина. Некоторые патогенные бактерии имеют уникальную способность метаболизировать таурин до сероводорода H₂S, который является высокотоксичным. Таким образом, в другом воплощении изобретения могут вводиться сульфатвосстанавливающие бактерии для того, чтобы пересилить метаболическую активность таких патогенных бактерий, избегая, таким образом, негативного действия высвобожденного таурина. Desulfovibrio, например, Desulfovibrio piger, например, Desulfovibrio piger DSM 32187, является одним из примеров штамма с подходящими сульфатвосстанавливающими способностями.

В одном воплощении изобретения неограничивающим примером комбинации штаммов/видов пробиотических бактерий могут являться Bifidobacterium, Bacteroides и Collinsella, или Bifidobacterium и Clostridium. Примеры соответствующих бактерий включают одну или больше или все (например, 2 или 3) из Bifidobacterium longum, Bacteroides fragilis и Collinsella aerofaciens, или одну или больше или все (например, 2 или 3) из Bifidobacterium longum, Bacteroides thetaiotaomicron и Collinsella aerofaciens. Примеры соответствующих бактерий также включают одну или обе из Bifidobacterium longum и Clostridium baratii. Любая из этих комбинаций может дополнительно включать бактерии Desulfovibrio, например, Desulfovibrio piger.

Предпочтительными примерами штаммов, которые используют в вышеописанных комбинациях, являются один или более или все (например, 2 или 3 или 4) из Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285, Collinsella aerofaciens ATCC 25986, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079, Clostridium baratii ATCC 27638 или Desulfovibrio piger DSM 32187.

В одном воплощении изобретения неограничивающим примером комбинации штаммов/видов пробиотических бактерий могут являться Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187. В другом воплощении изобретения неограничивающий пример комбинации пробиотических бактерий включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187. В еще одном воплощении изобретения комбинация пробиотических бактерий включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Clostridium baratii ATCC 27638 и Desulfovibrio piger DSM 32187. Другими примерами могут являться такие комбинации без Desulfovibrio piger DSM 32187.

Композиции или продукты или препараты или наборы, включающие вышеуказанные комбинации бактериальных штаммов или видов, являются еще одним аспектом изобретения. Такие комбинации могут принимать форму фармацевтических композиций или питательных композиций. Некоторые примеры композиций приводятся в разделе «Примеры».

В родственном воплощении изобретения бифидобактерии (или другие бактерии, обсуждаемые выше) могут быть введены вместе с пребиотиком, который может усилить активность бифидобактерий (или других бактерий). Пребиотик может включать, но без ограничения, инулин. Другие примеры пребиотиков описаны в настоящем описании где-либо в другом месте.

В одном воплощении изобретения штамм или комбинация штаммов пробиотических бактерий, описанные в настоящем описании, могут предназначаться для применения к млекопитающим (или субъектам) в опасности развития ICP. Факторы риска включают перенесенный ранее ICP, родственниц, которые имели ICP (например, генетические факторы), многоплодные беременности, историю болезни с повреждением печени и оплодотворение in-vitro (IVF). В некоторых воплощениях введение может осуществляться примерно один, два или три раза в день, и лечение может начинаться, когда млекопитающее становится беременным. Введение также может начинаться, когда млекопитающее планирует беременность, если указанное млекопитающее находится в опасности развития ICP. В другом воплощении введение может осуществляться примерно один, два или три раза в день, и лечение может начинаться во втором триместре (примерно 13 недель беременности).

В другом воплощении изобретения штамм или комбинация штаммов пробиотических бактерий, описанные в настоящем описании, могут предназначаться для применения к млекопитающим (или субъектам), имеющим ICP. В некоторых воплощениях лечебная группа включает млекопитающее, имеющее уровни желчных кислот, которые превышают 10 мкмоль/л (или 40 мкмоль/л или 80 мкмоль/л) и необъяснимый пруритус, или пациентов с умеренным или тяжелым ICP, описанными в настоящем описании где-либо в другом месте. В некоторых воплощениях введение может осуществляться один, два или три раза в день и длиться в течение одного, двух или трех месяцев или до тех пор, пока указанное млекопитающее беременно или до рождения ребенка.

В некоторых воплощениях изобретения штамм или комбинация штаммов пробиотических бактерий, описанные в настоящем описании, могут предназначаться для применения к млекопитающим (или субъектам) с опасностью развития или имеющим ICP (например, группе субъектов с ICP, определенных в настоящем описании в другом месте) для того, чтобы снизить опасность для плода и/или ребенка. Пониженная опасность для плода может включать, но без ограничения, пониженную опасность преждевременных родов, вдыхания мекония во время родов, приводящего к затруднениям дыхания, и/или внутриутробной смерти или мертворождению.

В некоторых воплощениях изобретения штамм или комбинация штаммов пробиотических бактерий, описанные в настоящем описании, могут предназначаться для применения при заболеваниях, включая, но без ограничения, холестаз (например, внепеченочный или внутрипеченочный холестаз), внутрипеченочный холестаз (например, внутрипеченочный холестаза беременных), желчнокаменную болезнь, лечения билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или родственных заболеваний печени. В некоторых таких воплощениях лечебная группа включает млекопитающее, имеющее повышенные уровни желчных кислот, например, уровни желчных кислот, в частности, сывороточные уровни желчных кислот, которые превышают 10 мкмоль/л (или 40 мкмоль/л или 80 мкмоль/л), например, сывороточные уровни желчных кислот ≥10 мкмоль/л (например, 10-39 мкмоль/л или ≥10 мкмоль/л и <40 мкмоль/л), или ≥40 мкмоль/л (например, 40-79 мкмоль/л или ≥40 мкмоль/л и <80 мкмоль/л), или ≥80 мкмоль/л.

Предпочтительные продукты или композиции, описанные в настоящем описании, включают замороженные, высушенные вымораживанием, лиофилизованные (например, лиофилизованный порошок) или сухие бактерии и предпочтительно находятся в формате стандартной лекарственной формы, например, капсуле (например, желатиновой капсуле) или таблетке или геле или саше. Соответствующие соотношения и дозы (например, в форме чисел бактерий или КОЕ) для применения в таких продуктах и т.д. описаны в настоящем описании в другом месте и в примерах. В такие продукты также могут быть включены другие компоненты, например, консерванты (например, глицерин), осушители, стабилизаторы, желирующие вещества и/или криопротекторы. В некоторых воплощениях такие дополнительные компоненты являются неприродными веществами. В некоторых воплощениях будет включен пребиотик. Примеры пребиотиков описаны в настоящем описании в другом месте.

В одном воплощении изобретения штамм или комбинация штаммов пробиотических бактерий, описанные в настоящем описании, могут находиться в форме капсулы или саше или других подходящих формах и могут вводиться млекопитающему (или субъекту) перорально. В некоторых воплощениях введение может осуществляться один, два или три раза в день и длиться в течение одного, двух или трех месяцев или так долго, пока указанное млекопитающее продолжает страдать от заболевания, от которого лечат.

Соответствующие дозы видов или штаммов для применения по изобретению можно выбрать в зависимости от заболевания, от которого лечат, способа введения и выбранного препарата. Например, дозировку и схему приема выбирают так, что пробиотические бактерии (или комбинация бактерий), введенные субъекту согласно настоящему изобретению, могут привести к терапевтическому или благоприятному для здоровья действию. Таким образом, в воплощениях изобретения, где вводят два или больше различных штаммов бактерий, соответствующую дозу каждой бактерии выбирают таким образом, что терапевтическое или благоприятное для здоровья действие наблюдают, когда присутствуют все штаммы. Например, можно использовать ежедневные дозы одной или каждой бактерии 10⁴ – 10¹², например, 10⁵ – 10¹⁰, или 10⁶ – 10⁸, или 10⁷ – 10⁹, или 10⁸ – 10¹⁰ всех КОЕ. Предпочтительная ежедневная доза одной или каждой бактерии составляет около 10⁸ или 10⁹ всех КОЕ, например, 10⁷ – 10¹⁰ или 10⁸ – 10¹⁰ или 10⁸ – 10⁹. Такие дозы могут быть в форме КОЕ/г или КОЕ/стандартная лекарственная форма (например, на саше, капсулу, таблетку и т.д.).

Примерные схемы приводятся в примерах.

Способы и применения по изобретению можно осуществлять для любого животного или субъекта или пациента. В некоторых воплощениях животное или субъект может представлять собой млекопитающее. В характерных воплощениях животным или субъектом может являться человек.

Таким образом, некоторые воплощения относятся к способу лечения или снижения опасности внутрипеченочного холестаза у субъекта, нуждающегося в этом, включающим введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, причем посредством этого лечится или снижается опасность внутрипеченочного холестаза у субъекта, нуждающегося в этом.

Таким образом, при рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение относится к композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для применения в способе лечения или снижения опасности внутрипеченочного холестаза у субъекта.

При рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение также относится к применению композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для изготовления лекарственного средства (или композиции) для лечения или снижения опасности внутрипеченочного холестаза у субъекта.

Некоторые воплощения относятся к способу модуляции уровня желчных кислот, например, сывороточного уровня желчных кислот, у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, причем посредством этого модулируется уровень желчных кислот, например, сывороточный уровень желчных кислот, у субъекта, нуждающегося в этом. В отдельных воплощениях субъект имеет или находится в опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

Таким образом, при рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение относится к композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для применения в способе модуляции уровня желчных кислот, например, сывороточного уровня желчных кислот, у субъекта. В отдельных воплощениях субъект имеет или находится в опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

При рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение также относится к применению композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для изготовления лекарственного средства (или композиции) для модуляции уровня желчных кислот, например, сывороточного уровня желчных кислот, у субъекта. В отдельных воплощениях субъект имеет или если есть опасность развития у него холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

В предпочтительных воплощениях такая модуляция или модулирование является способом уменьшения или снижения уровня желчных кислот.

Таким образом, еще одно воплощение настоящего изобретения относится к способу лечения или снижения опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, причем посредством этого лечится или снижается опасность указанного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом.

Таким образом, при рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение относится к композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для применения в способе лечения или снижения опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени у субъекта.

При рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение также относится к применению композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для изготовления лекарственного средства (или композиции) для лечения или снижения опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени у субъекта.

Некоторые воплощения относятся к способу лечения или снижения опасности пруритуса у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот. В отдельных воплощениях субъект имеет или имеется опасность развития у него холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

Таким образом, при рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение относится к композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для применения в способе лечения или снижения опасности развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени у субъекта. В конкретных вариантах осуществления субъект имеет или имеет риск развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, проявления билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита, гепатита С, и / или другие связанные с печенью заболевания.

При рассмотрении с другой стороны, настоящее изобретение также относится к применению композиции, включающей по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза и активность 7-эпимеризации желчных кислот, для изготовления лекарственного средства (или композиции) для лечения или снижения опасности пруритуса у субъекта. В отдельных воплощениях субъект имеет или имеет опасность развития холестаза, внутрипеченочного холестаза (например, внутрипеченочного холестаза беременных), желчнокаменной болезни, билиарной диспепсии, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, хронического активного гепатита и гепатита С и/или других родственных заболеваний печени.

В некоторых воплощениях пруритус ассоциируется с, например, симптомом или является побочным действием при одном или нескольких таких заболеваниях. В частности, пруритус может быть связан с внутрипеченочным холестазом, предпочтительно внутрипеченочным холестазом беременности.

В некоторых воплощениях внутрипеченочный холестаз включает внутрипеченочный холестаз беременных.

В некоторых воплощениях субъектом является млекопитающее. В некоторых воплощениях субъектом является человек. В характерных воплощениях субъектом является женщина, например, беременная женщина.

Любой подходящий бактериальный вид или штамм, например, любой подходящий пробиотический бактериальный вид или штамм, можно использовать в способах и применениях по настоящему изобретению, при условии, что они имеют функциональные свойства, описанные в настоящем описании.

Применение по меньшей мере одного бактериального вида или штамма в комбинации особенно предпочтительно в способах и применениях по настоящему изобретению (например, можно использовать 1, 2, 3, 4 или 5 видов или штаммов). В воплощениях, где используют более одного штамма, такие штаммы могут являться штаммами одного или различных видов бактерий. В равной степени, в некоторых воплощениях можно использовать более одного вида бактерий.

Можно видеть, что в некоторых воплощениях изобретения вводят комбинацию или смесь бактериальных штаммов или видов (комбинированная терапия). Такие смеси или комбинации бактерий можно вводить вместе в единой (одной и той же) композиции или вводить отдельно (например, в различных продуктах или композициях). Если введение осуществляют раздельно, тогда такое введение может быть последовательным или одновременным. Однако раздельное введение образует часть одного и того же режима или способа лечения.

В воплощениях, в которых введение двух или больше штаммов или видов является раздельным или последовательным, предпочтительно, чтобы введения осуществлялись в разумной временной рамке одно относительно другого, как описано в настоящем описании в другом месте. Например, раздельное введение предпочтительно осуществлять в пределах часов (например, одного часа) или минут (например, в пределах 15 или 30 мин) одно за другим, наиболее предпочтительно в настолько короткой временной рамке, насколько возможно (включая одновременное или фактически одновременное введение). Предпочтительно два или больше штаммов или видов бактерий вводят совместно в единой композиции.

В воплощениях, в которых используют более одного штамма пробиотических бактерий в смеси или единой композиции, или где более одного штамма пробиотических бактерий используют, но вводят раздельно, можно использовать любое соответствующее соотношение бактерий при условии, что желательная функция штаммов (например, активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот или активность 7-эпимеризации или сульфатвосстанавливающая активность) сохраняется в применимой степени. Такие соотношения может легко определить специалист в данной области техники. Например, такую комбинацию из двух или больше штаммов или видов можно использовать при соотношении 1:10, 1:5, 1:1, 5:1 или 10:1 или любом другом между указанными границами, например, 1:1. Такие соотношения также можно использовать в продуктах, наборах, композициях и т.д. по изобретению, описанных в настоящем описании в другом месте.

Такие виды или штаммы, как правило, являются выделенными видами или штаммами или чистыми культурами, которые затем можно смешивать вместе, если используют комбинацию видов или штаммов. В некоторых воплощениях такие штаммы не будут соответствовать штаммам, встречающимся в природе.

В некоторых воплощениях по меньшей мере один бактериальный вид или штамм включает по меньшей мере два бактериальных вида или штамма, причем по меньшей мере два бактериальных вида или штамма включают первый бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот, и второй бактериальный вид или штамм, включающий активность 7-эпимеризации.

В некоторых воплощениях по меньшей мере один бактериальный вид или штамм включает по меньшей мере три бактериальных вида или штамма, причем по меньшей мере три бактериальных вида или штамма включают первый бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот, второй бактериальный вид или штамм, включающий активность 7α-гидроксистероиддегидрогеназы (HSDH), и третий бактериальный вид или штамм, включающий активность 7β-HSDH.

В некоторых воплощениях композиция также может включать по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включающий сульфатвосстанавливающую активность. Такая активность может обеспечиваться одним или несколькими одними и теми же бактериальными видами или штаммами, которые обеспечивают активность деконъюгации или 7-эпимеризации желчных кислот, или может обеспечиваться по меньшей мере одним дополнительным (или другим) бактериальным видом или штаммом. В некоторых воплощениях бактериальный вид или штамм, включающий сульфатвосстанавливающую активность, может представлять собой Desulfovibrio piger DSM 32187. Этот штамм Desulfovibrio piger для применения в настоящем изобретении депонирован по Будапештскому соглашению в DSMZ (Leibniz Institute DSMZ – Немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany) 20 октября 2015.

В некоторых воплощениях бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот, может представлять собой бифидобактерии. В характерных воплощениях, бактериальный вид или штамм, включающий активность деконъюгации/гидролиза желчных кислот, может представлять собой Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

В некоторых воплощениях бактериальный вид или штамм, включающий активность 7-эпимеризации, может представлять собой Clostridium baratii ATCC 27638.

В некоторых воплощениях бактериальный вид или штамм, включающий активность 7α-HSDH, может представлять собой Bacteroides fragilis ATCC 25285 и/или Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079, и/или бактериальный вид или штамм, включающий активность 7β-HSDH, может представлять собой Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный штамм или вид, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285 и Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный штамм или вид, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079 и Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный штамм или вид, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999 и Clostridium baratii ATCC 27638.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

В некоторых воплощениях композиция, включающая по меньшей мере один бактериальный вид или штамм, включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Clostridium baratii ATCC 27638 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

В некоторых воплощениях способ по изобретению также включает введение субъекту пребиотика, например, в форме композиции, включающей терапевтически эффективное количество пребиотика. В некоторых воплощениях пребиотик вводят до, одновременно или после введения пробиотических бактерий. В некоторых воплощениях пребиотик может представлять собой инулин. Другие примеры пребиотиков описаны в настоящем описании в другом месте.

Пребиотик может находиться в той же композиции, что и пробиотические бактерии, или вводится отдельно, например, в другой композиции.

Примеры

Теперь настоящее изобретение будет описываться с обращением к примерам, приведенным далее. Следует иметь в виду, что эти примеры приводятся с целью пояснения аспектов настоящего изобретения и не ограничивают объем изобретения, определенный формулой изобретения.

Пример 1

Разрабатывают продукт (продукт А), который содержит следующие бактериальные штаммы:

1) Bifidobacterium longum ATCC BAA-999;

2) Clostridium baratii ATCC 27638;

3) Desulfovibrio piger DSM 32187.

Бактериальные штаммы в продукте находятся в концентрации 1⋅10⁸ кое/г бактериального штамма и в форме лиофилизованного порошка в стандартной желатиновой капсуле на 500 мг.

Пример 2

Разрабатывают продукт (продукт В) и получают в форме саше, содержащего композицию из

1) Bifidobacterium longum ATCC BAA-999: 1⋅10⁸ кое/саше;

2) Bacteroides fragilis ATCC 25285: 1⋅10⁸ кое/саше;

3) Collinsella aerofaciens ATCC 25986: 1⋅10⁸ кое/саше;

4) инулин: 3000 мг/саше.

Композицию при комнатной температуре в боксе LAF засыпают в пакеты из алюминиевой фольги, известные из уровня техники, с осушителем (10 см × 12 см, с использованием упаковочного материала РЕТ12/РЕ/ALU 12/РЕ/РЕ+осушитель от Alcan) (Holten Laminair Model S-2010 1.2 от Heto-Holten A/S, Дания). В каждый пакет загружают 3 г порошка с B. longum ATCC BAA-999, B. fragilis ATCC 25285 и C. aerofaciens ATCC 25986 и инулином с использованием весов XP-600 от Denver Instrument GmbH, Германия. Затем наполненные пакеты из алюминиевой фольги запаивают с помощью устройства для склеивания пленки, модель F460/2, от Kettenbaum Folienschweisstechnik GmbH & Co. KG, Германия.

Пример 3

Испытываемую группу беременных женщин с умеренным ICP (уровни желчных кислот ≥10 мкмоль/л и <40 мкмоль/л) включают в исследование и назначают пробиотик продукт В (описанный в примере 2). Лечение происходит три раза в день и длится в течение трех месяцев или до родов. Перед лечением женщин обследуют, получая образцы крови и регистрируя переносимую тяжесть пруритуса/зуда. Образцы крови анализируют на концентрацию желчных кислот.

После лечения женщин снова обследуют, как описано выше. Женщины, которых лечили пробиотиком продуктом В, показывают пониженные уровни желчных кислот в крови и испытывают облегчение пруритуса/зуда.

Следует иметь в виду, что примеры и воплощения, описанные в настоящем описании, приводятся только в целях пояснения, и в их свете будут предполагаться их различные модификации или изменения со стороны специалистов в данной области техники, и они охватываются сущностью и содержанием настоящей заявки и объемом прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и заявки на патент, цитированные в настоящем описании, включены путем ссылок в настоящее описание полностью.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для лечения или предупреждения внутрипеченочного холестаза беременных у субъекта. Для этого используют применение композиции, включающей пробиотические бактериальные штаммы, один из которых имеет активность деконъюгации желчной кислоты, второй имеет активность 7-эпимеризации или имеет активность 7α-гидроксистероиддегидрогеназы (HSDH) и третий имеет активность 7β-HSDH. Также предложены лекарственное средство и применение лекарственного средства. Группа изобретений обеспечивает лечение или предупреждение внутрипеченочного холестаза у нуждающихся в этом пациентов. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 3 пр.

1. Применение композиции, включающей:

(i) по меньшей мере два пробиотических бактериальных штамма, причем указанные два бактериальных штамма включают

(a) первый бактериальный штамм, имеющий активность деконъюгации желчной кислоты, и

(b) второй бактериальный штамм, имеющий активность 7-эпимеризации; или

(ii) по меньшей мере три пробиотических бактериальных штамма, причем указанные бактериальные штаммы включают

- первый бактериальный штамм, имеющий активность деконъюгации желчной кислоты,

- второй бактериальный штамм, имеющий активность 7α-гидроксистероиддегидрогеназы (HSDH), и

- третий бактериальный штамм, имеющий активность 7β-HSDH,

при лечении или предупреждении внутрипеченочного холестаза беременных у субъекта.

2. Применение по п. 1, причем указанное применение включает лечение или предупреждение зуда у субъекта.

3. Применение композиции по любому из пп. 1, 2, дополнительно включающей по меньшей мере один бактериальный штамм, имеющий сульфатвосстанавливающую активность.

4. Применение по любому из пп. 1-3, в котором бактериальный штамм, имеющий активность деконъюгации желчной кислоты, представляет собой Bifidobacterium longum ATCC BAA-999.

5. Применение по любому из пп. 1-4, в котором бактериальный штамм, имеющий активность 7-эпимеризации, представляет собой Clostridium baratii ATCC 27638.

6. Применение по п. 1, в котором бактериальный штамм, включающий активность 7α-HSDH, представляет собой Bacteroides fragilis ATCC 25285 и/или Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079.

7. Применение по п. 1, в котором бактериальный штамм, имеющий активность 7β-HSDH, представляет собой Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

8. Применение по п. 3, в котором бактериальный штамм, имеющий сульфатвосстанавливающую активность, представляет собой Desulfovibrio piger DSM 32187.

9. Применение по п. 1 или 2, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285 и Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

10. Применение по п. 1 или 2, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079 и Collinsella aerofaciens ATCC 25986.

11. Применение по любому из пп. 1 или 2, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999 и Clostridium baratii ATCC 27638.

12. Применение по любому из пп. 1-3, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides fragilis ATCC 25285, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

13. Применение по любому из пп. 1-3, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Bacteroides thetaiotaomicron DSM 2079, Collinsella aerofaciens ATCC 25986 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

14. Применение по любому из пп. 1-3, в котором композиция включает Bifidobacterium longum ATCC BAA-999, Clostridium baratii ATCC 27638 и Desulfovibrio piger DSM 32187.

15. Применение по любому из предшествующих пунктов, причем указанная композиция дополнительно включает пребиотик.

16. Применение по п. 15, где пребиотик представляет собой инулин.

17. Применение по любому из предшествующих пунктов, в котором субъектом является млекопитающее.

18. Применение по п. 17, в котором субъектом является человек.

19. Лекарственное средство для лечения или предупреждения внутрипеченочного холестаза у субъекта, нуждающегося в этом, содержащее композицию, включающую терапевтически эффективное количество бактериального штамма, имеющего активность деконъюгации желчной кислоты, и по меньшей мере один дополнительный бактериальный штамм, причем композиция является такой, как определена в любом из пп. 1-18.

20. Лекарственное средство по п. 18, композиция которого дополнительно включает по меньшей мере один бактериальный штамм, имеющий сульфатвосстанавливающую активность.

21. Применение лекарственного средства, содержащего композицию, включающую бактериальный штамм, имеющий активность деконъюгации желчной кислоты, и по меньшей мере один дополнительный бактериальный штамм, для лечения или предупреждения внутрипеченочного холестаза у субъекта, который в этом нуждается, путем введения субъекту терапевтически эффективного количества лекарственного средства, где композиция лекарственного средства, внутрипеченочный холестаз, субъект такие, как определено в любом из пп. 1-18.