ВАКЦИНА ДЛЯ ЗАЩИТЫ СВИНЕЙ ОТ ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE Российский патент 2021 года по МПК A61K39/102 A61P31/04 

ОБЛАСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение, главным образом, относится к вакцине для защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к вакцине, направленной против плевропневмонии свиней - распространенного по всему миру заболевания, вызывающего значительные экономические потери в свиноводстве. Этиологическим фактором плевропневмонии свиней является Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) - грамотрицательная бактерия, принадлежащая семейству Pasteurellaceae. Заболевание передается капельным путем или посредством прямого контакта с инфицированной свиньей и характеризуется геморрагическими, фибринозными и некротическими очагами в легких. Клиническая картина может находиться в диапазоне от молниеносной до хронической, и бессимптомные свиньи-переносчики могут передавать заболевание при поступлении в неинфицированные стада. Исходя из капсульных полисахаридов и компонентов O-цепи липополисахарида (LPS), было описано 15 сероваров. Серотипирование и другие способы генетического типирования для Actinobacillus pleuropneumoniae внесли значительный вклад в мониторинговые и эпидемиологические исследования. Эти инструменты предоставили важную информацию для принятия решения в программах контроля, нацеленных на устранение вирулентных типов этих бактерий. В Северной Америке серовары 1, 5 и 7 описаны как наиболее распространенные, в то время как серовары 2 и 9 наиболее часто выделяются в Европе, и серовар 15 является преобладающим изолятом австралийских свиней.

Факторы вирулулентности, описанные для Actinobacillus pleuropneumoniae, включают LPS, капсульные полисахариды, токсины Apx I-IV (также называемые повторами в токсинах или токсинами RTX), наружные мембранные белки (OMP) и различные системы усвоения железа. Токсины RTX Actinobacillus pleuropneumoniae (токсины Apx I, II и III) описаны Frey в Trends in Microbiology 257, Vol. 3, No. 7, July 1995. Позднее был обнаружен четвертый RTX-токсин APP (названный Apx IV) (см. Dreyfus et al. in Veterinary Microbiology, 2004, April 19; 99 (3-4): 227-238). Однако общий вклад каждого компонента в процесс инфицирования остается неясным, также как и механизмы патогенеза бактерий. Практически все из доступных в настоящее время вакцин против A. pleuropneumoniae представляют собой либо инактивированные цельноклеточные бактерины, либо комбинации субъединиц токсинов и белков Apx, необязательно в комбинации с фракциями наружной мембраны. В любом случае стало хорошо понятно, что для достижения достаточной защиты в вакцине должен присутствовать липополисахарид (LPS) (Julien Gouré et al., BMC Genomics 2009, 10:88, опубликованная 24 февраля 2009 года; Dubreuil et al., Animal Health Research Reviews 1(2): 73-93, декабрь 2000 года). Действительно, известно, что специфическое связывание между LPS и токсинами Apx играет основную роль в повышении иммуногенности токсинов (см., среди прочего, Ramjeet et al. in Molecular Biology, 2008, 70(1), pp 221-235), которая может объяснять достаточную защиту комбинированной субъединичной вакцины, где присутствует токсин Apx в комплексе с LPS.

Серьезным недостатком липополисахарида является его эндотоксическая природа, и, таким образом, он ассоциирован с множеством нежелательных побочных эффектов, таких как выраженная вялость, диарея, рвота, потеря аппетита или даже смерть. На первый взгляд, это, таким образом, наводит на мысль о снижении количества LPS в вакцине или об обезвреживании LPS. Однако достаточная вакцина против APP зависит от присутствия LPS и, таким образом, как широко известно, снижение количества LPS имманентно снижает эффективность вакцин. Альтернативно, негативное влияние LPS может быть устранено добавлением в вакцину антибиотика полимиксина, как известно из WO2011/015614. Однако с нормативной точки зрения добавление антибиотика в вакцину строго ограничено. Таким образом, это решение не может быть использовано ввиду юрисдикции в области регулирования.

Действительно, в настоящее время понятно, что для достижения такого высокого уровня защиты в вакцине должен присутствовать по меньшей мере один токсин Apx, причем токсин присутствует в иммунологическом комплексе с гетеромолекулой, такой как LPS. Хотя известно, что очищенные токсины Apx могут обеспечить некоторый уровень защиты (см., среди прочего, Bhatia et al. в Veterinary Microbiology, 29, 1991, 147- 158), понятно, что для достижения достаточной защиты использования очищенного токсина Apx в качестве антигена в вакцине недостаточно. Известны многие примеры токсина Apx, экспрессируемого в грамотрицательных бактериях E. coli. Хотя иногда его называют "очищенным" рекомбинантным токсином Apx при продуцировании в E. coli, в каждом из этих случаев токсин находится в комплексе с LPS в результате контакта с LPS, содержащимися в клеточной стенке бактерий E. coli. Также в данной области известны более экзотические экспрессирующие системы для получения действительно очищенного токсина Apx не в комплексе с LPS или другим гетеротоксином. Kyung-Yeol Lee et al. описали в FEMS Immunol Med Microbiol 48, 2006, 381-389, индукцию защитного иммунного ответа против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae посредством рекомбинантного токсина Apx, продуцированного в трансгенном растении табака. Однако не было показано защиты у свиней. Также вакцину необходимо было вводить посредством четырех последовательных доз, вводимых перорально. Для практики вакцинации свиней это не является реалистичной возможностью. Соответственно, Mi-Young Kim et al. показали в Protein Expression and Purification 132, 2017, 116-123, что токсин Apx мог экспрессироваться в трансгенном каллюсе риса, и что очищенный токсин при введении интраназально мог обеспечить по меньшей мере некоторую защиту против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae у мышей. Однако защита у свиней не была показана, не говоря уже о защите на уровне, сравнимом с коммерчески доступными вакцинами для защиты против APP.

ЗАДАЧА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является предоставление альтернативной вакцины для достаточной защиты поросят от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, предпочтительно на уровне, сравнимом с защитой, которой достигают при использовании коммерчески доступной вакцины против APP.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для выполнения задачи изобретения была разработана вакцина для защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, причем вакцина содержит токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, и фармацевтически приемлемый носитель.

Неожиданно, данная вакцина, содержащая выделенный токсин без LPS или другого гетеротоксина, может обеспечивать достаточную защиту даже на уровне, сравнимом с защитой, которую достигают с использованием вакцины, такой как Porcilis® APP (MSD Animal Health, Boxmeer, Нидерланды). Хотя бакуловирусная экспрессия по существу широко известна и используется многие годы для экспрессии иммуногенов либо вирусных, либо бактериальных патогенов, ее не использовали для обеспечения достаточной вакцины против APP посредством экспрессии одного или нескольких токсинов RTX. Бакуловирусы представляют собой ДНК-вирусы, способные инфицировать более 600 видов насекомых. Наиболее часто используемым бакуловирусом в биотехнологии является Autographa californica. Бакуловирус имеет кольцевую двухцепочечную ДНК (∼134 т.п.н.), которая упакована в стержневидный нуклеокапсид, и имеет оболочку, состоящую из мембраны, происходящей из клеток-хозяев. После инфицирования насекомых бакуловирус может высвобождаться из клеток в форме почек или может быть заключен в полиэдр, состоящий из экспрессируемого вирусом полиэдрина и белков p10. Полиэдрин и белки p10 экспрессируются в большом количестве, однако они не являются обязательными для репликации бакуловируса, таким образом, можно клонировать гетерологичные гены под контроль промотора полиэдрина или p10 для получения рекомбинантного бакуловируса. Полученный рекомбинантный бакуловирус можно использовать для инфицирования культивируемых клеток насекомых для устойчивой экспрессии белка, как известно с 1980-х годов. На сегодняшний день разработаны различные коммерческие системы бакуловирусных векторов (например, Bac-to-Bac^TM, Invitrogen; BaculoDirect^TM, Invitrogen; ProEasy^TM, AB Vector), позволяющие клонирование генов и конструирование рекомбинантного бакуловируса по типу "включай и работай" (см., например, Lin SY, Chen GY, Hu YC. Recent Pat Biotehnol 2011; 5:1-11). Более того, был разработан ряд сконструированных бакуловирусных векторов, таких как flashBAC^TM и flashBACGOLD^TM (Oxford Expression Technologies Ltd) для повышения экспрессии рекомбинантных белков путем делеции определенных вирусных генов (например, chiA и v-cath) в геноме бакуловируса (например, см. Hitchman RB, Possee RD, King LA. Recent Pat Biotechnol 2009;3:46-54). Кроме того, система MultiBac^TM (Geneva Biotech) позволяет быстрое и универсальное конструирование бакуловируса с множеством экспрессирующих кассет для генов путем встраивания эндонуклеазы и перестановки Cre-loxP. Напротив, система SweetBac^TM на основе MultiBac разработана для решения проблем гликозилирования в клетках насекомых и экспрессии белков, преобразованных в белки млекопитающих (например, см. Palmberger D, Klausberger M, Berger I, et al. Bioengineered 2013;4:78-83).

Также изобретение обеспечило токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом для применения в способе защиты свиней от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения животному вакцины, содержащей токсин RTX и фармацевтически приемлемый носитель.

Далее, изобретение позволяет использовать токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, для получения вакцины для защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем смешения токсина RTX с фармацевтически приемлемым носителем, и способа защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем введения вакцины, содержащей токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, и фармацевтически приемлемый носитель, свинье.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Вакцина представляет собой фармацевтическую композицию, которая является безопасной для введения рассматриваемому животному и способна индуцировать защитный иммунитет у этого животного против патогенного микроорганизма, т.е. индуцировать успешную защиту против инфицирования микроорганизмом. Как правило, вакцину можно составлять с использованием известных в данной области способов, которые в основном включают смешение одного или нескольких антигенов (живых или инактивированных, цельноклеточных, экстракта, очищенной фракции или субъединицы) с фармацевтически приемлемым носителем, например, жидким носителем, таким как (необязательно забуференная) вода или твердый носитель, такой как обычно используют для получения лиофилизированных вакцин. Необязательно добавляют другие вещества, такие как адъюванты, стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств вакцины.

Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой биологически совместимую среду, а именно, среду, которая после введения не индуцирует значительных неблагоприятных реакций у рассматриваемого животного и способна презентировать антиген иммунной системе животного-хозяина после введения вакцины. Такой фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой, например, жидкость, содержащую воду, и/или любой другой биологический совместимый растворитель или твердый носитель, такой как носители, обычно используемые для получения лиофилизированных вакцин (на основе сахаров и/или белков), необязательно содержащий иммуностимулирующие вещества (адъюванты). Необязательно добавляют другие вещества, такие как стабилизаторы, модификаторы вязкости или другие компоненты, в зависимости от предполагаемого применения или требуемых свойств соответствующей вакцины.

Защита против инфекции микроорганизмом представляет собой способствование предупреждению, смягчению или излучению инфекции этим микроорганизмом или нарушения, возникающего в результате этой инфекции, например, предупреждению или снижению одного или нескольких клинических признаков в результате инфицирования патогеном.

Системное введение вакцины означает, что вакцина достигает кровеносной системы организма, т.е. системы, включающей сердечно-сосудистую и лимфатическую систему, таким образом, влияя на организм в целом вместо конкретного места, такого как желудочно-кишечный тракт. Системное введение можно проводить, например, посредством введения вакцины в мышечную ткань (внутримышечное), в дерму (интрадермальное), под кожу (подкожное), под определенную слизистую оболочку (подслизистое), в вены (внутривенное) и т.д.

Токсины RTX Actinobacillus pleurpneumoniae (токсины Apx) представляют собой белковые токсины, продуцируемые Actinobacillus pleurpneumoniae, которые вносят значительный вклад в патогенез плевропневмонии свиней. ApxI (приблизительно 105 кДа) является в высокой степени гемолитическим и цитотоксическим для лейкоцитов, и кодируется геном apxIA (1023 кодона), который является частью оперона apxI-CABD. ApxII (приблизительно 105 кДа) является слабо гемолитическим и умеренно цитотоксическим. Оперон apxII содержит структурный ген apxIIA (956 кодонов) и ген apxIIC. ApxIII (приблизительно 120 кДа), кодируемый геном apxIIIA (1052 кодона), является не гемолитическим, но в высокой степени цитотоксическим в отношении легочных макрофагов свиней. ApxIV кодируется геном apxIVA, длина которого варьируется от приблизительно 1382 до приблизительно 1805 в различных серотипах. ApxIV обладает значительным сходством последовательности с регулируемыми железом белками RTX Neisseria meningitidis, FrpA и FrpC. Как широко известно, рекомбинантная экспрессия токсина RTX APP может обеспечивать белок, который представляет собой только часть встречающегося в природе токсина Appx (без частей, которые не являются необходимыми для достижения достаточного иммунного ответа) и имеет идентичность последовательность в перекрывающейся области, которая составляет менее 100% с встречающимся в природе токсином, предпочтительно имеет идентичность более 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 вплоть до 100% с любым из встречающихся в природе ApxI, ApxII, ApxIII или ApxIV. Идентичность последовательностей можно определять с использованием программы BLAST с помощью алгоритма blastp с параметрами по умолчанию. Как правило, иммуногенная фракция Apx имеет длину по меньшей мере приблизительно 35% от полноразмерного белка (см. Infection and Immunity, Vol. 70, No. 11, Nov. 2002, p 6464-6467), например, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 вплоть до 100%, однако было показано, что даже фракции меньше 35% являются потенциально эффективными в качестве иммуногенов (см. Vaccine, 17 (1999), 441-447).

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом варианте осуществления вакцина содержит токсин RTX ApxI. ApxI продуцируется многими сероварами APP и, таким образом, посредством наличия только этого токсина в вакцине может быть достигнута широкая защита.

В другом варианте осуществления вакцину вводят системно, например, посредством внутримышечного или внутрикожного введения.

Изобретение далее объяснено с использованием следующих неограничивающих примеров.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Рекомбинантная экспрессия ApxI

Конструирование вектора для переноса pFastbac-ApxIA

Ген rApxIA синтезировали на основе аминокислотной последовательности ApxIA Actinobacillus pleuropneumoniae штамма 4074, номер доступа Swiss prot: P55128. Ген подвергали оптимизации кодонов для использования вместо полиэдрина бакуловируса и включали последовательность Козак (TATAAAT) и 3’-гексагистидиновую метку. Ген rApxIA-His клонировали после промотора полиэдрина плазмиды pFastbac1 (Life Technologies, Carlsbad, США) в качестве фрагмента BamHI с получением плазмиды pFastbac-ApxIA TAT.

Получение рекомбинантного бакуловируса BacdCCApxIA-TAT

Рекомбинантный бакуловирус получали с использованием плазмиды, как описано в настоящем описании выше, в системе Bac to Bac (Life Technologies, Carlsbad, США) в соответствии с протоколом изготовителя. Клетки E. coli, использованные для трансформации, содержали родительский бакуловирус с делецией генов хитиназы и v-катепсина (Kaba SA, Salcedo AM, Wafula PO, Vlak JM, van Oers MM. J Virol Methods. 2004 Dec 1;122(1):113-8.). Бактерии E.coli выращивали в среде без животных компонентов (ACF).

ДНК BacdCCApxIA-TAT выделяли из E.coli и использовали для трансфекции в клетки Spodoptera frugiperda (Sf)9-900. Клетки Sf9-900 выращивали в среде, свободной от животных компонентов. Экспрессию белка ApxIA 110 кДа подтверждали с использованием гелей SDS-PAGE, вестерн-блоттинга и иммунофлуоресцентного анализа с использованием моноклонального антитела против гистидиновой метки. Супернатанты после трансфекции один раз амплифицировали и полученную исходную вирусную культуру использовали для всех дальнейших вирусных культур.

Очистка продуцированного бакуловирусом ApxIA с использованием His-метки

Клетками Sf9-900 инфицировали бакуловирус BacdCCApxIA-TAT с множественностью инфекции 0,1, а затем проводили культивирование в течение от 4 до 5 суток при 27,5°C. Из этих клеток очищали белок rApxIA-His с использованием системы для очистки белка AKTA Avant (GE Healthcare Life Sciences, Cleveland, США) с использованием колонки HIStrap FF. Получали лизаты из клеток насекомых, инфицированных BacdCCApxIA-TAT, с использованием лизирующего буфера Triton X114 (0,15 M NaCl, 10 мМ Tris-HCl pH8, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT, 1% triton X114). После центрифугирования осадок ресуспендировали в промывочном буфере (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 6 M мочевина, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT) и фильтровали с использованием 0,45-мкм фильтра перед внесением в AKTA Avant. После уравновешивания колонки денатурирующим промывочным буфером образец два раза вносили в колонку со скоростью 3 мл/мин. Белок, связавшийся с колонкой, ренатурировали с использованием окислительно-восстановительного буфера (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2, 0,1% окисленный глутатион, 0,01% восстановленный глутатион, 1 мМ DTT) и элюировали из колонки посредством линейного градиента имидазола с использованием элюирующего буфера (50 мМ Tis pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2, 1 мМ DTT, 500 мМ имидазол). Очищенный белок ApxI подвергали диализу против буфера для диализа (50 мМ Tris pH=8, 300 мМ NaCl, 2,5 мМ CaCl2) с использованием кассет Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes (Thermo Scientific, Waltham, США) с несколькими заменами буфера.

Пример 2: Эффективность вакцины

Вакцинный состав

Для исследования получали две различных вакцины. Первая вакцина содержала очищенный экспрессированный бакуловирусом ApxI, полученный способом, описанным в примере 1. Вторая вакцина для применения в качестве положительного контроля была сравнима с коммерчески доступной вакциной Porcilis® APP, содержащей ApxI и ApxII, очищенные из культурального супернатанта A. pleuropneumoniae (и, таким образом, в комплексе с LPS), также обозначаемые как "нативные ApxI+ApxII". Исследуемая вакцина отличалась от коммерчески доступной вакцины Porcilis® APP тем, что она не содержала токсин ApxIII. Однако для нагрузки полевым изолятом серотипа 10 это не имеет значения (серотип 10 не продуцирует ApxIII). Антигены смешивали с адъювантом, содержавшим минеральное масло (XSolve, доступный от MSD Animal Health, Boxmeer, Нидерланды) в конечной концентрации 25 мкг/мл для каждого антигена.

Протокол вакцинации

Использовали три группы по восемь поросят из стада, свободного от A. pleuropneumoniae. Эти две вакцины вводили внутримышечно в качестве дозы 2 мл в возрасте пять и девять недель. Остальным восьми поросятам инъецировали PBS, и их использовали в качестве невакцинированной группы отрицательного контроля. Проводили взятие образцов крови с регулярными интервалами для серологии.

Нагрузка путем инфицирования A. pleuropneumoniae серотипа 10

В возрасте приблизительно 12 недель всем 24 поросятам давали нагрузку путем инфицирования.

Заражение проводили посредством полевого изолята серотипа 10 (штамм HV211) A. pleuropneumoniae. Заражающую культуру получали непосредственно перед заражением. Поросят заражали A. pleuropneumoniae через аэрозоль. Аэрозоль вводили посредством небулайзера Devilbis Nebulizer (общее количество 30 мл). Заражающую дозу определяли путем подсчета бляшек, и было обнаружено, что суспензия содержала 7,0×10⁸ б.о.е./мл.

После заражения оценивали респираторное заболевание и другие аномалии в течение периода, составляющего семь суток, после чего выживших животных умерщвляли, и проводили их вскрытие.

Использованная оценочная система была следующей:

0= нормальный

1= дрожание

2= подавленность

3= увеличенная частота дыхания

4= рвота

5= диарея

6= кашель

7= брюшное дыхание

8= диспноэ

Для соответствия гуманному обращению с животными, животных, которых считали умирающими, умерщвляли.

Свиней, которые погибли или которых умертвили исследовали в отношении типичных очагов Actinobacillus pleuropneumoniae, степень которых на долю легкого оценивали по шкале 0-5 (максимальный показатель на животное: 35). Также легкие выживших животных оценивали на седьмые сутки после заражения.

Результаты

Все свиньи были серологически негативными в начале эксперимента и во время заражения происходила сероконверсия вакцинированных животных по ApxI, при определении посредством ELISA с нативным ApxI в качестве наносимого антигена. Основные титры антител составляли log₂ 12,9±1,6 и 13,1±1,1 для групп Baculo-ApxI и нативных ApxI+ApxII, соответственно. В таблице 1 представлено обобщение результатов заражения и в таблице 2 представлены клинические аномалии, наблюдаемые для отдельных свиней.

Таблица 1 Защита поросят

Вакцина Смертность
[n/n_tot] Средний показатель очагов повреждения легкого Baculo-ApxI 2/8* 1,5 ± 3,1* Нативные ApxI+ApxII 1/8* 0,4 ± 1,1* PBS 8/8 20,3 ± 5,7

*: значимо отличались от контролей (p<0,05,точный критерий Фишера для уровня смертности и U-критерий Манна-Уитни для показателей очагов повреждения)

Таблица 2 Клинические аномалии на группу

Baculo-ApxI Нативные ApxI+ApxII PBS свинья Аномалия¹ День смерти² Аномалия¹ День смерти² Аномалия¹ День смерти² 1 2 - 2 - 2,3,7,8 1 2 2,7 3 2,3,7 1 2,3,7,8 1 3 0 - 0 - 2,3,7,8 1 4 2,5 - 0 - 2,3,7,8 1 5 0 - 0 - 2,3,7,8 1 6 2,3,7 3 0 - 2,3,7,8 1 7 0 - 2,7 - 2,3,7,8 1 8 0 - 0 - 2,3,7,8 1

¹ Наблюдаемые клинические аномалии (оцененные как описано для нагрузки путем инфицирования)

² Умершие/умерщвленные на указанные сутки после заражения

Наблюдали значительное уменьшение клинических признаков, смертности и повреждения легких для обеих вакцинированных групп. Различие между двумя группами вакцин не были статистически значимыми. Таким образом, можно сделать заключение, что вакцина, содержащая токсин RTX, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, обеспечивает защиту, сходную с защитой, обеспечиваемой коммерческой вакциной Porcilis® APP.

Группа изобретений относится к области ветеринарии, а именно к инфектологиии и иммунологии, и предназначенна для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. Вакцина для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae содержит токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI. В других воплощениях представлены применения токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, и способ защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. Использование группы изобретений позволяет повысить эффективность защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

1. Вакцина для защиты свиньи против инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, содержащая токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.

2. Применение токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, в способе защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения животному вакцины, содержащей токсин RTX, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.

3. Применение по п.2, отличающееся тем, что вакцину вводят системно.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что вакцину вводят либо внутримышечно, либо интрадермальным путем.

5. Применение токсина RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемого бакуловирусом, для получения вакцины для защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae, путем смешения токсина RTX с адъювантом и фармацевтически приемлемым носителем, причем токсин RTX представляет собой ApxI.

6. Способ защиты свиньи от инфекции Actinobacillus pleuropneumoniae путем введения свинье вакцины, содержащей токсин RTX Actinobacillus pleuropneumoniae, рекомбинантно экспрессируемый бакуловирусом, адъювант и фармацевтически приемлемый носитель, причем токсин RTX представляет собой ApxI.