Антинематодозная композиция для ветеринарии и способ ее получения Российский патент 2021 года по МПК A61K31/4245 A61K31/66 A61P33/10 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а именно – к противопаразитарным средствам, и может быть использовано в качестве антигельминтного препарата с профилактической или терапевтической целью в отношении сельскохозяйственных, домашних и диких птиц (куры, утки, индоутки, перепела, индейки, голуби, воробьи и др.).

Далее в тексте заявителем приведены термины, которые необходимы для облегчения однозначного понимания сущности заявленных материалов и исключения противоречий и/или спорных трактовок при выполнении экспертизы по существу.

Нематоды – круглые черви (аскариды, эзофагостомы, анкилостомы, токсокары, власоглавы, острицы и др.) являются наиболее распространенной группой гельминтов и причиной основных паразитарных заболеваний сельскохозяйственных и домашних животных, в том числе птиц.

Нематодозы – паразитарные болезни (гельминтозы) человека, животных и растений, вызываемые нематодами https://ru.wikipedia.org/wiki/Нематоды].

Инвазионные болезни – это заболевания человека и животных, вызываемые паразитическими червями [https://vet.astrobl.ru/press-release/invazionnye-bolezni-opasnost-dlya-cheloveka].

Энзоотия – вспышка инфекционной или инвазионной болезни животных, привязанная к определённой местности [https://ru.wikipedia.org/wiki/Энзоотия].

Нематодозы имеют широкое распространение и являются одним из наиболее часто встречающихся инвазионных болезней птиц. Они наносят большой экономический ущерб, который складывается из падежа и вынужденного убоя заболевших животных; переболевший молодняк плохо развивается, отстает в росте и развитии, у взрослых птиц снижается продуктивность, ухудшается качество мяса и яиц.

Симптомы многих нематодозов неспецифичные. Течение бывает хроническое, субклиническое и в виде энзоотии. Болезнь может зависеть от интенсивности инвазии, условий содержания и кормления и многих других факторов. По месту нахождения паразита в организме бывают кишечные и внекишечные нематодозы, возбудителями которых могут являться круглые черви – нематоды.

Организм хозяина подвержен ряду отрицательных воздействий от нематодов: механическому, токсическому, аллергическому и трансмиссивному. Механическое воздействие (травмирование органов и тканей) происходит при фиксации к слизистой оболочке нематодов, их локализации в органах и тканях, миграции личинок, скоплении нематодов в просвете желудочно-кишечного тракта с последующей закупоркой, разрывом и кровоизлияниями. Токсическое воздействие происходит в результате процесса жизнедеятельности нематодов, продуктов обмена веществ – метаболитов и секрета желез. Аллергическое воздействие (реакция на присутствие чужеродного белка) происходит, когда организм хозяина сенсибилизируется нематодами и продуктами их обмена, обладающими антигенными свойствами. Трансмиссивное воздействие происходит в результате переноса нематодами различных возбудителей.

Основным методом борьбы с нематодозами птиц является дегельминтизация. Несмотря на широкий ассортимент ветеринарных антигельминтных препаратов на рынке, актуальной задачей остается разработка безопасных, малотоксичных антигельминтных, конкретно – антинематодозных средств с широким спектром действия.

По химической формуле все антигельминтные препараты подразделяются на производные бензимидазола (мебендазол, медамин и др.), этаноламина (нафтамон, дифезил и др.), салициламида (фенасал и др.), имидазотиазола (левамизол) и солей пиперазина. Также на дату подачи настоящей заявки существуют карбонилоксицианометильные производные и производные мибемицина, тетрагидрофуроизоксола. Известны и многокомпонентные глистогонные средства, которые включают в своем составе фенбендазол, сульфадимезин, клозантел, серу, цеолит, новокаин, альбендазол, поливинил пирродилон, медный купорос и ацетилцеллюлозу. Все эти препараты можно найти в справочнике Машковского [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16 изд., - М.: Новая волна, 2010. – 1216 с.].

Основными недостатками известных препаратов являются завышенные лечебные дозы, побочное токсическое действие и низкая эффективность воздействия на яиц, личинок, цист и взрослых особей гельминтов.

Наиболее близким по количеству общих признаков и заявленному техническому результату, выбранным заявителем в качестве прототипа по отношению к композиции и по отношению к способу ее получения, является изобретение по патенту РФ № 2413513 «Антинематодозная композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана».

Сущностью прототипа по отношению к композиции является антинематодозная композиция, содержащая н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид и 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан в качестве активных компонентов при их весовом соотношении 1:10 и глюкозу как вспомогательное вещество.

Сущностью прототипа по отношению к способу является способ, заключающийся в том, что сначала получают первый компонент известной композиции - н-гексадецилтрифенил фосфоний бромид путем взаимодействия раствора гексадецилбромида и трифенилфосфина, реакционную смесь нагревают в течение 15 часов при температуре 120 С. Выпавший осадок отфильтровывают и многократно промывают этиловым эфиром от исходных соединений. Затем получают второй компонент - 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан путем взаимодействия 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана в этиловом спирте и 3-нитроанилина в этиловом спирте. Реакционную смесь охлаждают, кристаллическую массу ярко-красного цвета отделяют и перекристаллизовывают из смеси этанол-ацетонитрил. Затем получают антинематодозную композицию и лекарственный препарат на его основе следующим образом: смешивают и растирают глюкозу, гексадецилтрифенилфосфоний бромид и 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан до получения однородного порошка красного цвета, которым наполняют облатки (дозированные закрывающиеся контейнеры из крахмала). Пероральная лекарственная форма весом 0.5 г содержит 0,025 г соли фосфония, 0.250 г 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксана и 0.225 г глюкозы.

Недостатками прототипа по сравнению с заявленным техническим решением по отношению к композиции является:

– отсутствие пролонгированного действия в результате отсутствия в составе прототипа активированного угля;

– отсутствие антиаллергенного действия в результате отсутствия в составе прототипа активированного угля;

– большее токсическое действие в результате отсутствия в составе прототипа активированного угля;

– худшее смешение и растворимость компонентов в результате отсутствия в составе прототипа полиэтиленгликоля 1500;

– неудобная лекарственная форма известной композиции – облатка (крупный контейнер из крахмала около 10 мм длиной), в результате чего препарат пригоден только для крупных животных, например, коров, свиней, лошадей, и не пригоден для птиц.

Недостатками прототипа по сравнению с заявленным техническим решением по отношению к способу получения является отсутствие таких действий, как:

– смешивание глюкозы и н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида;

– расплавление полиэтиленгликоля 1500 и смешивание его с 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксаном;

– смешивание двух описанных выше смесей;

– добавление активированного угля;

– пропускание смеси через сито.

Так как способ получения антинематодозной композиции по прототипу не включен в формулу прототипа, второй независимый пункт формулы составлен без ограничительной части.

Задачей заявленного технического решения является разработка малотоксичного и эффективного антинематодозного препарата пролонгированного действия нового поколения, который обладает широким спектром действия, низкой терапевтической дозой, высокой антигельминтной (терапевтической) активностью, с удобным способом введения препарата птицам в виде крошек диаметром 2 мм.

Техническим результатом заявленного технического решения является расширение арсенала известных средств указанного назначения, повышение эффективности профилактики и лечения нематодозов сельскохозяйственных, домашних и диких птиц (кур, индеек, индоуток, уток, перепелов, голубей, воробьев и др.) путем:

создания антинематодозной композиции, обладающей:

– пролонгированным высвобождением композиции, что приводит к более эффективному, но более мягкому и менее травмирующему излечению, путем введения в состав композиции активированного угля

– антиаллергенным действием путем введения в состав композиции активированного угля;

– дезинтоксикационным действием путем введения в состав композиции активированного угля;

– более удобной лекарственной формой в виде небольших гранул в результате пропускания через сито, что позволяет использовать заявленную композицию для лечения птиц;

– лучшим смешением компонентов путем введения в состав композиции полиэтиленгликоля 1500;

– улучшенной растворимостью компонента 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксана при растворении в расплавленном полиэтиленгликоле 1500.

При этом заявленная композиция обладает высокой эффективностью в отношении нематодов, а также отсутствием токсического действия, что в совокупности обеспечивает расширение арсенала известных средств указанного назначения.

• разработки способа получения заявленной композиции, имеющего, по мнению заявителя, новизну и изобретательский уровень, так как заявленная последовательность действий не выявлена заявителем из уровня техники и не выявлено влияние совокупности признаков на заявленный технический результат.

Сущностью заявленного технического решения является антинематодозная композиция для ветеринарии, содержащая 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, глюкозу, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит активированный уголь, и полиэтиленгликоль 1500, при следующем соотношении компонентов (вес. части): 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксан – 10; н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид – 1; активированный уголь – 10; полиэтиленгликоль 1500 – 20 ; глюкоза – 9. Способ получения антинематодозной композиции по п.1, заключающийся в том, что готовят первую смесь, для чего растирают 9 весовых частей глюкозы, добавляют при перемешивании 1 весовую часть н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида; затем готовят вторую смесь, для чего расплавляют при 65 °С 20 весовых частей полиэтиленгликоля 1500, добавляют к нему при перемешивании 10 весовых частей 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксана, далее обе смеси смешивают при 65 °С, добавляют 10 весовых частей активированного угля, смесь перемешивают до получения однородной массы, пропускают через сито с диаметром пор 2 мм, полученные гранулы сушат при комнатной температуре и расфасовывают.

Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг.1 – Фиг.4.

На Фиг.1 представлена Таблица 1, в которой приведена сравнительная эффективность лекарственных средств при лечении аскаридиоза индеек.

На Фиг.2 представлена Таблица 2, в которой приведена сравнительная эффективность лекарственных средств при лечении томинксоза кур.

На Фиг.3 представлена Таблица 3, в которой приведена сравнительная эффективность лекарственных средств при лечении гетеракиоза индоуток.

На Фиг.4 представлена Таблица 4, в которой приведена оценка пролонгированного и антиаллергенного действия исследованных композиций.

Далее заявителем приведено подробное описание фармацевтического действия отдельных компонентов заявленной композиции.

5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан – генерирует NO in vivo и вызывает спастические судороги нематодов, что в итоге парализует мышечную ткань нематодов.

Н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид - проникает через мембраны кутикулы, что приводит к гибели нематодов и патогенной микрофлоры за счет доступности пищеварительных соков хозяина внутрь нематоды.

Активированный уголь обеспечивает как антиаллергическое и дезинтоксикационное действие, так и пролонгированное действие заявленной композиции. Поскольку антинематодозная композиция действует, в основном, путем прямого контакта с нематодами в желудочно-кишечном тракте, а именно, в основном в тонком кишечнике, очень важно, чтобы доза антинематодозной композиции оставалась в кишечнике как можно дольше, в течение более длительного времени, благодаря чему будет обеспечено пролонгированное действие.

Пролонгированное высвобождение заявленной композиции достигается путем введения в композицию активированного угля, имеющего пористую структуру с внутренней поверхностью примерно 500-1500 м²/г и площадью поверхности, соответственно, BET примерно до 5000 м²/г. Известно, что активированный уголь всасывает лекарственные соединения из желудочно-кишечного тракта в случае интоксикации за счет их адсорбции. Однако также хорошо известно, что адсорбция не является однонаправленным процессом, так как этот процесс всегда сопровождается десорбцией лекарственного средства с активированного угля, что использовано заявителем для обеспечения пролонгированного высвобождения заявленной композиции в желудочно-кишечном тракте.

Полиэтиленгликоль 1500 (ПЭГ 1500) обеспечивает лучшее смешивание и способствует усилению растворимости гидрофобного фураксанового компонента - 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксана и загущению смеси входящих в композицию компонентов, усилению антинематодозного действия. Кроме этого, известно, что ПЭГ 1500 мало восприимчив к воздействию бактерий и обладает противовоспалительным действием, что помогает ускорить заживление ран (в том числе инфицированных), устраняет раздражение, вызванное действием нематодов. При этом он не оказывает токсического действия на организм и легко смывается водой.

Глюкоза обеспечивает маскировку вкуса, а также служит для приманивания и обманки нематодов, так как их основным питанием является глюкоза.

При этом заявитель считает, что заявленное техническое решение не является суммированием известных технических решений как в отношении композиции, так и в отношении способа ее получения, по следующим основаниям.

В отношении композиции.

Подобранный заявителем состав композиции и соотношение ее компонентов является неочевидным для специалиста из данной области техники, так как заявителем из исследованного уровня техники не выявлены составы, в которых одновременно использовались бы заявленные компоненты в заявленном соотношении и в заявленном назначении, а именно – в составе антинематодозной композиции. При этом соотношение компонентов было подобрано заявителем опытным путем.

В отношении способа.

В выявленных источниках отсутствует заявленная последовательность действий.

Далее заявителем описано получение отдельных компонентов заявленной композиции:

1. Н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид формулы I

получают по способу, описанному в [Старкс Ч.М. Межфазный катализ. Химия, катализаторы и применение / Ред. Ч.М.Старкс. М.: Химия, 1991.- 157с.]:

2. 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан формулы II получают по методике [Л.М.Юсупова, С.Ю.Гармонов, И.М.Захаров и др. Средства биологической защиты многоцелевого назначения на основе хлорпроизводных нитробензофуроксана. /Вестник Казанского технологического университета, 2005 г., №1, С. 103-111.]:

3. Активированный уголь, например, БАУ-А ГОСТ 6217-74, является товарным продуктом.

4. Полиэтиленгликоль 1500 (ПЭГ 1500, Макрогол) фармацевтический, пищевая добавка Е 1521, является товарным продуктом.

5. Глюкоза кристаллическая медицинская, например, по ГОСТ 975-88 (производитель Днепропетровский крахмально-паточный комбинат), является товарным продуктом.

Заявленное техническое решение осуществляется следующим образом.

Пример 1. Получение заявленной композиции.

Сначала готовят первую смесь, для чего в ступку, например, фарфоровую, помещают 9 весовых частей (например, 2,25 г) глюкозы, тщательно растирают. Затем добавляют при перемешивании 1 весовую часть (например, 0,25 г) н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида.

Затем готовят вторую смесь, для чего берут 20 весовых частей (например, 5,0 г) полиэтиленгликоля 1500, расплавляют при 65 °С, например, в термическом стакане. Далее небольшими порциями добавляют к нему при перемешивании 10 весовых частей (например, 2,5 г) 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксана и медленно перемешивают до растворения.

Далее обе смеси смешивают, например, в термическом стакане, при 65 °С, добавляют 10 весовых частей (например, 2,5 г) активированного угля, смесь перемешивают до получения однородной массы, пропускают через сито с диаметром пор 2 мм. Полученные гранулы сушат при комнатной температуре. Получают заявленную композицию.

Гранулы расфасовывают в пакетики по 0.5 г, получают расфасованный лекарственный препарат.

Пероральная лекарственная доза заявленной композиции весом 0.5 г содержит:

0.1 г 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксана,

0.01 г н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида,

0.1 г активированного угля,

0.2 г полиэтиленгликоля 1500,

0.09 г глюкозы

при их весовом соотношении 10 : 1 : 10 : 20 : 9.

Пример 2. Изучение антинематодозной эффективности заявленной композиции при аскаридиозе индеек.

Испытание антинематодозной эффективности заявленной композиции проводили в четырех опытах.

Антинематодозную эффективность при Ascaridia galli исследовали на индейках в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» в августе-сентябре 2020 года.

В опыте были использованы 40 спонтанно зараженных индеек белой широкогрудой породы в возрасте 89 дней. Индейки были разделены на 4 группы по принципу аналогов по 10 голов в каждой:

в 1-й группе – использовали заявленную композицию однократно перорально в дозе 10 мг/кг;

во 2-й группе – использовали известный препарат фебтал гранулят однократно перорально в дозе 0,45 г/10 кг согласно инструкции;

в 3-й группе – использовали известный препарат тетрамизол 20% однократно перорально в дозе 0,1 г/ кг согласно инструкции;

4-я группа – лекарственные средства не получала и являлась контролем.

Индейки содержались в одинаковых условиях, в клетках, кормление проводилось согласно требованиям настоящего стандарта ГОСТ 18221-2018. Во время проведения исследования у индеек брали пробы помета и исследовали методом Фюллеборна до лечения и на 7, 15, 30 и 60 дни после лечения. Результаты исследования представлены в Таблице 1 на Фиг.1.

Результаты, представленные в Таблице 1, показывают следующее.

До начала лечения интенсивность инвазии (ИИ) у индеек варьировала от 40±0,1 до 43±0,3 яиц в 1 поле зрения микроскопа. Экстенсивность инвазии равнялась 100%.

Через 7 дней после начала лечения у индеек 1-й группы, принимавших заявленную композицию в дозе 10 мг/кг, интенсивность инвазии составила 20±0,1яиц в 1 поле зр., интенс- и экстенсэффективность равнялись 52,4% и 80% соответственно.

Во 2-й группе индеек, получавших фебтал гранулят в дозе 0,45 г/10 кг, ИИ равнялась 27±0,8 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ -37,3% и 60% соответственно.

В 3-й группе индеек, получавших тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/ кг, ИИ равнялась 25±0,5 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 39,1% и60% соответственно.

В 4-й контрольной группе у индеек ИИ незначительно увеличилась и составила 41±1,4яиц в 1 поле зрения.

Через 15 дней после начала лечения у индеек 1-ой группы ИИ снизилась и составила 8±0,3 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 60% и 90% соответственно.

Во 2-й группе ИИ снизилась незначительно и равнялась 19±0,4 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ -29,7% и 70% соответственно.

В 3-й группе ИИ равнялась 20±0,1 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 20,0% и 80% соответственно.

В 4-й контрольной группе индеек ИИ равнялась 44±0,2 яиц в 1 поле зрения.

Через 30 дней после начала лечения у индеек 1-ой группы организм был полностью был освобожден от Ascaridia galli.

У индеек 2-й группы ИИ снизилась незначительно и составила 15±1,5яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 21,1% и 70% соответственно.

В 3-й группе ИИ равнялась 12±0,6 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 40,0% и 80% соответственно.

В 4-й группе интенсивность зараженности у индеек составила 47±0,4яиц в 1 поле зрения.

Через 60 дней после начала лечения у индеек 1-ой группы результаты копрологического исследования помета были отрицательные.

У индеек 2 - ой группы интенсивность зараженности снизилась и равнялась 7±0,1 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 53,4% и 80% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 5±0,3 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 58,4% и 80% соответственно.

У индеек 4-ой группы ИИ достигла 48±0,3яиц в 1 поле зрения.

Таким образом, при аскаридиозе индеек заявленная композиции в дозе 10 мг/кг является более эффективным, чем препарат фебтал гранулят в дозе 0,45г/10 кг и тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/ кг. Важно отметить, что высокая антигельминтная эффективность заявленной композиции была сохранена до 60 дней (срок наблюдения).

Пример 3. Изучение антинематодозной эффективности заявленной композиции при томинксозе кур.

Антинематодозную эффективность заявленной композиции изучали также при томинксозе кур. Это заболевание вызывается нематодой Thominx соllaris, которая паразитирует в слепых кишках.

В опыте были использованы 40 спонтанно зараженных кур белой русской породы в возрасте 70 дней, которые содержались в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» в июне-июле 2020 года.

Куры по принципу аналогов были разделены на 4 группы по 10 голов в каждой:

в 1-й группе – использовали заявленную композицию однократно перорально в дозе 10 мг/кг;

во 2-й группе – использовали фебтал гранулят однократно перорально в дозе 0,45 г/10 кг согласно инструкции;

в 3-й группе – использовали тетрамизол 20% однократно перорально в дозе 0,1 г/ кг согласно инструкции;

4-я группа – являлась контролем и лекарственных средств не получала.

Куры содержались в одинаковых условиях, в клетках, кормление проводилось согласно требованиям настоящего стандарта ГОСТ 18221-2018. У кур брали пробы фекалий и исследовали методом Фюллеборна до лечения и на 7, 15, 30 и 60 дни после лечения. Результаты исследования представлены в Таблице 2 на Фиг. 2.

Результаты, представленные в Таблице 2, показывают следующее.

До начала лечения интенсивность инвазии (ИИ) у кур варьировала от 23±0,2 до 26±1,2 яиц в 1 поле зрения микроскопа. Экстенсивность инвазии равнялась 100%.

Через 7 дней после начала лечения у кур в 1-ой группе, принимавшие заявленную композицию в дозе 10 мг/кг, ИИ составила 14±0,2яиц в 1 поле зр., интенс- и экстенсэффективность соединения равнялись 46,2% и 80% соответственно.

Во 2-й группе, получавшей фебтал гранулят в дозе 0,45 г/10 кг, ИИ равнялась 17±1,3 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 26,1% и 50% соответственно.

В 3-й группе, получавшей тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/ кг, ИИ равнялась 12±0,6 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 50,0% и 40% соответственно.

В 4-й контрольной группе ИИ незначительно увеличилась и составила 27±0,5 яиц в 1 поле зрения.

Через 15 дней после начала лечения в 1-й группе ИИ снизилась и составила 7±1,1 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 50% и 90% соответственно.

Во 2-ой группе кур ИИ снизилась незначительно и равнялась 13±0,3 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 23,6% и 60% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 9±2,0яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 25,0% и70% соответственно.

В 4-й контрольной группе кур ИИ равнялась 31±0,4 яиц в 1 поле зрения.

Через 30 дней после начала лечения у 1-й группы организм кур полностью был освобожден от Thominx соllaris.

У кур 2-ой группы ИИ снизилась и составила 6±0,8 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 53,9% и 60% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 5±0,7 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 44,5% и70% соответственно.

В 4-й контрольной группе интенсивность зараженности у кур составила 34±0,5 яиц в 1 поле зрения.

Через 60 дней после начала лечения в 1-й группе яйца Thominx соllaris не выявлены.

У кур 2-й группы интенсивность зараженности снизилась и равнялась 2±1,2 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 66,7% и 90% соответственно.

В 3-й группе ИИ равнялась 2±0,8 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 60,0% и90% соответственно.

В 4-й контрольной группе ИИ достигла 37±0,7яиц в 1 поле зрения.

Таким образом, при томинксозе кур заявленная композиция в дозе 10 мг/кг является более эффективной, чем известные препараты фебтал гранулят в дозе 0,45 г/10 кг и тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/кг. Продолжительность антигельминтного действия составила 60 дней (срок наблюдения).

Пример 4. Изучение антинематодозной эффективности заявленной композиции при гетеракиозе индоуток.

Одним из широко распространенных инвазионных болезней птиц с высокой интенсивностью инвазии является гетеракиоз. Возбудителем является нематода Heterakis gallinarum, которая относится к семейству Heterakidae, подотряда Oxyurata. Гельминт паразитирует в слепых кишках.

Антинематодную эффективность заявленной композиции при гетеракиозе изучали на 40 спонтанно зараженных индоутках белой породы в возрасте 89 дней, которые содержались в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» в сентябре-октябре 2020 года.

Индоутки были разделены на 4 группы по принципу аналогов по 10 голов в каждой:

в 1-й группе – использовали заявленную композицию однократно перорально в дозе 10 мг/кг;

во 2-й группе – использовали фебтал гранулят однократно перорально в дозе 0,45 г/10 кг согласно инструкции

в 3-й группе – использовали тетрамизол 20% однократно перорально в дозе 0,1 г/кг согласно инструкции;

4-я группа – являлась контролем и лекарственных средств не получала.

Индоутки содержались в одинаковых условиях, в клетках, кормление проводилось согласно требованиям ГОСТ 18221-2018. У индоуток брали пробы фекалий и исследовали методом Фюллеборна до лечения и на 7, 15, 30 и 60 дни после лечения.

Результаты исследования представлены в Таблице 3 на Фиг. 3.

Результаты, представленные в Таблице 2, показывают следующее.

До начала лечения интенсивность инвазии (ИИ) у индоуток варьировала от 11±0,3 до 17±1,0 яиц в 1 поле зрения микроскопа. Экстенсивность инвазии равнялась 100%.

Через 7 дней после начала лечения у группы ИИ составила 5±0,3 яиц в 1 поле зр., интенс- и экстенсэффективность соединения равнялись 64,3% и 90% соответственно.

Во 2-й группе, получавшей фебтал гранулят в дозе 0,45 г/10 кг, ИИ равнялась 10±1,4 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 41,2% и70% соответственно.

В 3-ей группе, получавшей тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/кг, ИИ равнялась 13±0,7 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 13,4% и60% соответственно.

В 4-й контрольной группе ИИ незначительно увеличилась и составила 13±0,5 яиц в 1 поле зрения

Через 15 дней после начала лечения в 1-й группе ИИ снизилась и составила 2±0,1 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 60% и 90% соответственно.

Во 2-й группе индоуток ИИ равнялась 5±0,5 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 50% и 70% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 8±0,4яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 38,5% и 80% соответственно.

В 4-й контрольной группе ИИ равнялась 14±1,6 яиц в 1 поле зрения.

Через 30 дней после начала лечения у 1-й группы организм индоуток был полностью освобожден от Heteraki sgallinarum.

Во 2-й группе ИИ снизилась и составила 3±2,4 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 40% и 90% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 5±1,1 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 37,5% и 80% соответственно.

В 4-й контрольной группе интенсивность зараженности составила 17±1,2 яиц в 1 поле зрения.

Через 60 дней после начала лечения в 1-й группе копрологическим методом ни в одной пробе помета индоуток яица Heterakis gallinarum не выявлены.

Во 2-й группе ИИ снизилась и равнялась 1±0,5 яиц в 1 поле зр., при интенс- и экстенсэффективности 66,7% и 90% соответственно.

В 3-ей группе ИИ равнялась 2±0,2 яиц в 1 поле зр., а ИЭ и ЭЭ - 60,0% и 90% соответственно.

В 4-й контрольной группе ИИ составила 19±0,6 яиц в 1 поле зрения.

Таким образом, при гетеракиозе индоуток заявленная композиция в дозе 10 мг/кг является наиболее эффективной, чем известный препарат фебтал гранулят в дозе 0,45 г/10 кг и тетрамизол 20% в дозе 0,1 г/кг. Важно отметить, что высокая антинематодоз эффективность заявленной композиции была сохранена в течение 60 дней (срок наблюдения).

Пример 5. Изучение пролонгированного и антиаллергического действия заявленной композиции при томинксозе кур.

Пролонгированное и антиаллергическое действие заявленной композиции изучали при томинксозе кур. Это заболевание вызывается нематодой Thominx соllaris, которая паразитирует в слепых кишках.

В опыте были использованы 10 спонтанно зараженных кур белой русской породы в возрасте 70 дней, которые содержались в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» в июне-июле 2020 года.

Куры по принципу аналогов были разделены на 2 группы по 5 голов в каждой:

в 1-й группе – использовали заявленную композицию, состоящую из всех пяти компонентов;

во 2-й группе – использовали композицию, состоящую из четырех компонентов – аналогичную заявленной, но не содержащую активированный уголь,.

При исследовании пролонгированного и антиаллергенного действия композиции вводили курам перорально в виде гранул весом 0.5 г с кормом 2 раза в день – утром и вечером, в дозе 10 мг/кг.

Оценка пролонгированного и антиаллергенного действия исследованных композиций проводилась визуально и по исследованию крови и представлена в Таблице 4 на Фиг. 4.

Результаты, представленные в Таблице 4, показывают следующее.

В 1-й группе, принимавшей заявленную композицию из всех пяти компонентов, процесс дегельминтизации прошел в течение 5 дней с дальнейшим 3-х недельным постепенным очищением организма от остатков нематодов и мертвых яиц, что свидетельствует о пролонгированном действии заявленной композиции.

Практически отсутствовала аллергия и кашель, что свидетельствует об антиаллергенном действии заявленной композиции.

Показатели крови полностью нормализовались уже через неделю, исчезла анемия, лейкопения, эритроцитопения и эозинофилия, что свидетельствует об отсутствии аллергического, интоксикационного, воспалительного процессов.

Во 2-й группе использовали композицию из четырех компонентов, аналогичную заявленной, но не содержащую активированный уголь, который обеспечивает пролонгированное и антиаллергенное действие.

При этом процесс дегельминтизации во 2-й группе прошел в течение 1-2 дней (по сравнению с 5 днями в 1-й группе), с дальнейшим 2-х недельным постепенным очищением организма от остатков нематод и мертвых яиц (по сравнению с 3-х недельным в 1-й группе), что свидетельствует об отсутствии пролонгированного действия композиции, не содержащей активированный уголь.

У кур 2-й группы наблюдался кашель, что свидетельствует об интоксикационном и аллергическом процессах, наблюдались сильные кожные аллергические реакции. Указанное свидетельствует об отсутствии антиаллергенного действии композиции, не содержащей активированный уголь.

Таким образом, по сравнению с курами 1-й группы, во 2-й группе снизился пролонгированный и антиаллергенный эффект действия композиции.

По сравнению с курами 2-й группы, в 1-й группе куры после дегельминтизации были наиболее активными, резвились и играли, поноса и каких-либо других побочных эффектов от приема заявленной композиции не наблюдалось. Необходимо отметить улучшение общего состояния кур и хороший аппетит после приема заявленной композиции.

Таким образом, можно сделать вывод, что введение в состав заявленной композиции активированного угля позволило достигнуть заявленный технический результат – создать композицию, обладающую, помимо антинематодозного, также пролонгированным и антиаллергическим действием.

Пример 6. Изучение острой и хронической токсичности заявленной композиции.

Работа выполнялась на кафедре эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанская ГАВМ» в ноябре и декабре 2020 года.

Острая токсичность была изучена на 42 белых крысах Вистар обоего пола с живой массой 200-220 г. Крысы были разделены по принципу аналогов на 7 групп, из них 6 опытных групп и 1 контрольная. При выборе доз, кратности и метода введения пользовались «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (Миронов А.Н., 2012).

В начале опыта крыс выдерживали на 12-ти часовой голодной диете. Из заявленной композиции готовили водный раствор и вводили внутрижелудочно с помощью зонда.

Крысам опытных групп заявленную композицию вводили в следующих дозах:

1-й группе – 50 мг/кг,

2-й группе – 300 мг/кг,

3-й группе – 500 мг/кг,

4-й группе – 700 мг/кг,

5-й группе – 1000 мг/кг

6-й группе – 2000 мг/кг.

7-й контрольной группе внутрижелудочно вводили изотонический раствор NaCl.

Крыс допускали к приему пищи не раньше, чем через 3 часа после введения средств, питье не ограничивали. Наблюдение за крысами вели в течение 14 дней. Учитывали подвижность животных, состояние их волосяного покрова, видимых слизистых оболочек, аппетита, интоксикации, ее тяжесть и обратимость, а также сроки выздоровления.

По результатам наблюдения можно сделать вывод, что клиническое состояние крыс всех 6-ти опытных групп не отличалось от животных контрольной группы. В течение всего срока наблюдения все крысы поедали корм, адекватно реагировали на тактильные звуковые, болевые и световые раздражители. Состояние кожного покрова и слизистых оболочек крыс опытных групп соответствовало крысам контрольной группы.

В ходе проведения опыта было проведено вскрытие по одному животному от каждой группы на 3-й и 7-й дни опыта. По результатам вскрытия видимых изменений в органах грудной и брюшной полостей у крыс опытных и контрольной групп не обнаружилось.

Среднесмертельная доза ЛД₅₀ не была вычислена из-за отсутствия падежа крыс во всех 6-ти опытных группах. При этом максимальная доза заявленной композиции, введенная крысам, составила 2000 мг/кг.

Таким образом, заявленная композиция в дозе 2000 мг/кг не обладает токсическим действием и относится к IV классу опасности.

Хроническая токсичность заявленной композиции при длительном введении в организм животных и изучения обратимости вызываемых им повреждений, изучена на 24 белых мышах с массой 20-22 г и 24 крыс с массой 200-220 г. Животные были разделены по принципу аналогов на 4 группы, по 6 голов в каждой. Животных перед введением заявленной композиции в течение 12 часов выдерживали на голодной диете.

Соединение животным вводили зондом внутрижелудочно в виде водного раствора.

Хроническая токсичность изучалась в трех дозах. Были использованы данные, полученные при изучении острой токсичности:

– животные 1-й группы получали 1/10 часть максимальной дозы заявленной композиции – 200 мг/кг,

– животные 2-й группы получали 1/20 часть максимальной дозы заявленной композиции – 100 мг/кг;

– животные 3-й группы получали терапевтическую дозу – 20 мг/кг.

– животные контрольной группы внутрь получали изотонический раствор NaCl. Разовая доза для мышей составляла 0,5 мл, для крыс – 5,0 мл.

Мышам и крысам всех групп дозы вводили однократно, ежедневно в течение 6 дней согласно «Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (Миронов А.Н., 2012).

Для изучения влияния заявленной композиции на физиологические процессы в организме, «до» и «после» применения заявленной композиции у крыс опытных и контрольной групп проводили биохимическое исследование крови.

Результаты проведенных испытаний показали, что у животных опытных групп отмечается незначительное снижение количества общего белка, глюкозы, амилазы. Также установлено незначительное повышение количества креатинина, мочевины, билирубина, АСТ, АЛТ и щелочной фосфатазы. Таким образом, заявленная композиция при длительном воздействии незначительно влияет на работу печени и почек.

Исходя из проведенных исследований, можно сделать заключение, что заявленная композиция в дозе 2000 мг/кг не обладает токсическим действием на организм животных. Это позволяет отнести его к IV классу опасности.

Таким образом, из описанного выше можно сделать вывод, что заявителем достигнуты поставленные задачи и заявленный технический результат, превышающий технический результат прототипа, а именно:

• создана антинематодозная композиция для ветеринарии, включающая пять компонентов – 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксан, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, активированный уголь, полиэтиленгликоль 1500 и глюкозу при их весовом соотношении 10 : 1 : 10 : 20 : 9, которая обладает:

– пролонгированным высвобождением композиции, что приводит к более эффективному, но более мягкому и менее травмирующему излечению, путем введения в состав композиции активированного угля – см. Пример 5 и Таблицу 4 на Фиг.4;

– антиаллергенным действием путем введения в состав композиции активированного угля – см. Пример 5 и Таблицу 4 на Фиг.4;

– дезинтоксикационным действием путем введения в состав композиции активированного угля – см. Пример. 6;

– более удобной лекарственной формой в виде небольших гранул в результате пропускания через сито, что позволяет использовать заявленную композицию для лечения птиц;

– лучшим смешением компонентов путем введения в состав композиции полиэтиленгликоля 1500;

– улучшенной растворимостью компонента 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксана при растворении в расплавленном полиэтиленгликоле 1500.

При этом заявленная композиция обладает высокой эффективностью в отношении нематодов, а также отсутствием токсического действия, что в совокупности обеспечивает расширение арсенала известных средств указанного назначения.

• разработан способ получения заявленной композиции, имеющий, по мнению заявителя, новизну и изобретательский уровень, так как заявленная последовательность действий не выявлена заявителем из уровня техники и не выявлено влияние совокупности признаков на заявленный технический результат.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как на дату предоставления заявочных материалов заявителем из исследованного уровня техники не выявлены источники, обладающие совокупность признаков, идентичными совокупности признаков заявленного технического решения.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, т. к. совокупность заявленных признаков обеспечивает получение неочевидных для специалиста технических результатов, превышающих технический результат прототипа. Заявителем из исследованного уровня техники не выявлены составы, в которых одновременно использовались бы заявленные компоненты в заявленном соотношении и в заявленном назначении, а именно – в составе антинематодозной композиции. При этом соотношение компонентов было подобрано заявителем опытным путем. В выявленных источниках также отсутствует последовательность действий заявленного способа, следовательно, заявленный способ не является очевидным для специалиста в анализируемой области техники.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость» предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленная композиция может быть получена посредством использования известных компонентов с применением стандартного оборудования и известных приемов.

Группа изобретений относится к области ветеринарной медицины, а именно к противопаразитарным средствам, и может быть использована в качестве антигельминтного препарата с профилактической или терапевтической целью в отношении сельскохозяйственных, домашних и диких птиц. Антинематодозная композиция для ветеринарии содержит 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, глюкозу, активированный уголь и полиэтиленгликоль 1500 при следующем соотношении компонентов (вес. части): 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксан – 10; н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид – 1; активированный уголь – 10; полиэтиленгликоль 1500 – 20; глюкоза – 9. Предложен также способ получения указанной композиции. Группа изобретений обеспечивает получение малотоксичного и эффективного антинематодозного препарата пролонгированного действия, который обладает широким спектром действия, низкой терапевтической дозой, высокой антигельминтной активностью, а также удобной формой. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.

1. Антинематодозная композиция для ветеринарии, содержащая 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, глюкозу, отличающаяся тем, что дополнительно содержит активированный уголь и полиэтиленгликоль 1500 при следующем соотношении компонентов (вес. части):

5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксан 10 н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид 1 активированный уголь 10 полиэтиленгликоль 1500 20 глюкоза 9

2. Способ получения антинематодозной композиции по п.1, заключающийся в том, что готовят первую смесь, для чего растирают 9 весовых частей глюкозы, добавляют при перемешивании 1 весовую часть н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида; затем готовят вторую смесь, для чего расплавляют при 65 °С 20 весовых частей полиэтиленгликоля 1500, добавляют к нему при перемешивании 10 весовых частей 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксана, далее обе смеси смешивают при 65 °С, добавляют 10 весовых частей активированного угля, смесь перемешивают до получения однородной массы, пропускают через сито с диаметром пор 2 мм, полученные гранулы сушат при комнатной температуре и расфасовывают.