Фармацевтическая композиция для ветеринарии и медицины, обладающая противопаразитарной эффективностью Российский патент 2023 года по МПК A61K31/4245 A61K31/662 A61K47/10 A61K47/26 A61K47/44 A61P33/10 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а именно – к паразитологии, более конкретно – к лечению инвазионных болезней животных с использованием фармацевтической композиции, состоящей из двух хлорнирозамещенных фуроксанов и четвертичной соли фосфония с высшим алкильным радикалом в качестве действующих веществ, а также льняной муки, подсолнечного масла, полиэтиленгликоля 1500 и глюкозы в качестве вспомогательных веществ.

Известно, что тяжелые формы паразитозов у животных чаще регистрируются на фоне иммунодефицитных состояний. В организме животных и птиц, больных эймериозом, происходит интоксикация продуктами обмена паразитов и гнилостной микрофлоры с кровавыми выделениями, что ведет к нарушению функции нервной системы, вызывая угнетение животных и птиц, вплоть до коматозного состояния, тремора мышц и паралича конечностей.

Гельминтозы имеют широкое распространение и являются одним из наиболее часто встречающихся инвазионных болезней животных и птиц. Симптомы многих гельминтозов неспецифичные. Течение бывает хроническое, субклиническое и в виде энзоотии, может зависеть от интенсивности инвазии, условий содержания и кормления и других факторов. По месту нахождения паразита в организме бывают кишечные и вне кишечные гельминтозы, возбудителями которых могут являться круглые черви (нематоды), плоские черви (цестоды) и сосальщики (трематоды).

Организм хозяина подвержен ряду отрицательных воздействий от гельминтов: механическое, токсическое, трансмиссивное и аллергическое. Механическое воздействие (травмирование органов и тканей) происходит при фиксации к слизистой оболочке гельминтов, их локализации в органах и тканях, миграции личинок, скоплении гельминтов в просвете желудочно-кишечного тракта с последующей закупоркой, разрывом и кровоизлияниями. Продукты обмена веществ – метаболиты и секреты желез оказывают токсическое влияние на организм хозяина (животного или человека). Аллергическое воздействие (реакция на присутствие чужеродного белка) происходит, когда организм хозяина стабилизируется паразитами и продуктами их обмена, обладающими антигенными свойствами.

При этом животные и птицы теряют в весе, мясо переболевших животных имеет низкую питательную ценность и быстро портится при хранении. У птиц снижается яйценоскость.

При сильной степени инвазии возбудители паразитозов, особенно эймериозы, могут вызывать массовую гибель животных [Латыпов Д.Г., Тимербаева Р.Р., Кириллов Е.Г. Паразитология и инвазионные болезни жвачных животных. – Санкт-Петербург: Лань, 2019. – 476с.].

Известны лекарственные препараты, обладающие антиэймериозной активностью для лечения эймериозов животных и птиц: трихопол, химкокцид, салиномицил, байкокс, нитрофурановые (фуракриллин, фуразолан, фуразолидон) и сульфаниламидные препараты (сульфадимезин, сульфадиметоксин, сульфапередозин, норсульфазол, фталазол), а также мономиецин, левомецетин и т.д. [Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев Р.М. Паразитология и инвазионные болезни животных. – М.: Колос С, 2008. – 776с.].

Недостатком известных лекарственных препаратов является: высокая цена, токсичность, кумуляция в съедобных тканях животных, иммунодепрессивное действие, опасность развития резистентных штаммов возбудителя.

Известно изобретение по патенту РФ № 2234932 «Способ лечения коров, больных эймериозом», сущностью является способ лечения коров, больных эймериозом, включающий введение с кормом кокцидина, отличающийся тем, что животным дополнительно вводят подкожно однократно 10%-ный раствор эраконда в дозе 4,5-5,5 мг/кг массы тела.

Известно изобретение по патенту РФ № 2322235 «Способ профилактики и лечения эймериоза животных и птиц», сущностью является способ профилактики и лечения эймериоза у животных и птиц, включающий введение лекарственных средств, отличающийся тем, что в качестве лекарственных средств используют ксимедон или ксимедонгидрохлорид, которые вводят двукратно с интервалом 5 дней в дозе не менее 30 мг/кг массы тела мелким животным и птицам, и не менее 10 мг/кг массы тела крупным животным. Способ по п.1, отличающийся тем, что при лечении эймериоза у животных им дополнительно вводят фуразолидон в дозе 20 мг/кг массы тела пятидневным курсом с интервалом 3 дня.

Известно изобретение по патенту РФ № 2473334 «Антиэймериозная фармацевтическая композиция на основе соли четвертичного фосфония и замещенного динитробензофуроксана», сущностью является антиэймериозная фармацевтическая композиция, содержащая н-тетрадецилтри-н-бутилфосфоний хлорид и 5,7-бис-(м-нитроанилино)-4,6-динитробензофуроксан в качестве активных компонентов при их весовом соотношении 1:10 и глюкозу как вспомогательное вещество.

Известную композицию «Депрот-14» используют 2-х кратно с интервалом в 24 часа в дозе 4 мг/кг (в пересчете на действующее вещество – соль фосфония) при ЛД₅₀ 2500 мг/кг.

По химической формуле все антигельминтные препараты подразделяются на производные:

- бензимидазола (мебендазол [https://ru.wikipedia.org/wiki/ Мебендазол], медамин [https://medside.ru/medamin?ysclid=l92t3tqw5q855032559] и др.);

- этаноламина (нафтамон [https://www.webapteka.ru/drugbase/name984.html], дифезил [https://www.webapteka.ru/drugbase/name2174.html] и др.),

- салициламида (фенасал [https://medside.ru/fenasal?ysclid=l92t82wxda191480888] и др.),

- имидазотиазола (левамизол [https://www.rlsnet.ru/active-substance/levamizol-581?ysclid=l92t8gvwhr532541769]),

- солей пиперазина [https://www.rlsnet.ru/active-substance/piperazina-adipinat-507?ysclid=l92t98m6bz5340202050].

Также на дату подачи настоящей заявки известны:

- карбонилоксицианометильные производные [патент РФ 2296747];

- производные милбемицина [патент РФ 2226531];

- производные тетрагидрофуроизоксазола [патент РФ 1586154].

Известны композиционные антигельминтные средства, включающие:

– фенбендазол, сульфадимезин, серу и цеолит [патент РФ 2302864],

– клозантел, новокаин, поливинилпирролидон [патент РФ],

– альбендазол, медный купорос и ацетилцеллюлозу [патент РФ 2195280].

Известно изобретение по патенту РФ № 2629316 «Средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии», сущностью является средство для лечения нематодозов и эймериозов в ветеринарии, содержащее н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид в качестве активного компонента и подсолнечное масло при их весовом соотношении 1:99. Известное средство малотоксично (ЛД₅₀ 225 мг/кг – III опасности), обладает высокой терапевтической эффективностью при низких лечебных дозах.

Известно изобретение по патенту РФ 2758054 «Антинематодозная композиция для ветеринарии и способ ее получения», сущностью является антинематодозная композиция для ветеринарии, содержащая 5,7-динитро-4,6-бис-(3-нитрофениламино)бензофуроксан, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид, глюкозу, отличающаяся тем, что дополнительно содержит активированный уголь и полиэтиленгликоль 1500 при следующем соотношении компонентов (вес. части): 5,7-динитро-4,6-бис(3-нитрофениламино)бензофуроксан – 10, н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид – 1, активированный уголь – 10, полиэтиленгликоль 1500 – 20, глюкоза – 9.

Общими недостатками указанных выше препаратов являются завышенные лечебные дозы, побочное токсичное действие и низкая эффективность воздействия на яйца, личинки, цисты и взрослых особей гельминтов.

Таким образом, изыскание новых препаратов и схем их применения для лечения эймериозов и гельминтозов животных и птиц, воздействующих на различные звенья патологического процесса, является актуальной задачей как фармации, так и ветеринарии.

Техническим результатом заявленного технического решения является расширение арсенала средств указанного назначения путем создания эффективной нетоксичной противопаразитарной фармацевтической композиции для ветеринарии с низкими лечебными дозами.

Сущностью заявленного технического решения является фармацевтическая композиция, обладающая антиэймериозной и антинематодозной активностью при лечении сельскохозяйственных и домашних животных, содержащая, вес. ч.:

4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан
5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан
н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид
льняная мука
подсолнечное масло
полиэтиленгликоль 1500
вода очищенная
глюкоза 2,0
8,0
0,1
20,0
20,0
10,0
30,0
9,9

Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг. 1 – Фиг. 4.

На Фиг. 1 представлена Таблица 1, в которой приведена сравнительная эффективность заявленной фармацевтической композиции и препарата «Байкокс 2,5%» при лечении эймериоза кроликов.

На Фиг. 2 представлена Таблица 2, в которой приведена сравнительная эффективность заявленной фармацевтической композиции и препарата ампролиум при лечении эймериоза ягнят.

На Фиг. 3 представлена Таблица 3, в которой приведена сравнительная антигельминтная эффективность заявленной фармацевтической композиции и препарата тетрамизол 20% при лечении фазанов, зараженных Heterakis gallinarum.

На Фиг. 4 представлена Таблица 4, в которой приведена сравнительная антигельминтная эффективность заявленной фармацевтической композиции и препаратов тетрамизол и альбендазол при лечении кишечных стронгилятоз крупного рогатого скота (телята).

Далее заявителем приведено описание заявленного технического решения.

Заявленный технический результат достигается разработкой эффективной и нетоксичной противопаразитарной фармацевтической композиции, состоящей из двух хлорнирозамещенных фуроксанов и четвертичной соли фосфония с высшим алкильным радикалом в качестве действующих веществ, а также льняной муки, подсолнечного масла, полиэтиленгликоля 1500, глюкозы и воды в качестве вспомогательных веществ, в соотношении, вес. ч.:

4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан
5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан
н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид
льняная мука
подсолнечное масло
полиэтиленгликоль 1500
вода очищенная
глюкоза 2,0
8,0
0,1
20,0
20,0
10,0
30,0
9,9

Заявленную фармацевтическую композицию (далее – композиция) вводят перорально в дозе 15 мг/кг живого веса животного дважды с интервалом в 2 дня.

Заявленная композиция может быть использована в качестве противопаразитарного – антиэймериозного и антинематодозного препарата в ветеринарии для лечения сельскохозяйственных и домашних животных.

Заявленная композиция обладает высокой противопаразитарной эффективностью и отсутствием токсичности (ЛД50 3000 мг/кг). Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения.

Далее заявителем приведено подробное описание фармацевтического действия компонентов заявленной композиции.

4,6-Динитро-5,7-дихлорбензофуроксан и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан – генерируют NO in vivo, что вызывает спастические судороги нематод, и в итоге парализует мышечную ткань паразитов. Одновременно подавляют микробную инфекцию, сопровождающую воспалительные процессы при глистных инвазиях.

н-Гексадецилтрифенилфосфоний бромид – способствует проникновению через мембраны кутикулы нематод действующих веществ препарата, что приводит к гибели нематод и патогенной микрофлоры, а также за счет проникновения пищеварительных соков хозяина внутрь нематоды.

Льняная мука, вола и подсолнечное масло являются хорошими связующими антинематодозного препарата и маскировочными агентами входящих в состав действующих веществ, придают лекарству приятный съедобный запах.

Полиэтиленгликоль 1500 (ПЭГ 1500) обеспечивает лучшее смешивание и способствует усилению растворимости гидрофобных фуроксановых компонентов в воде - 4,6-динитро-5,7-хлорбензофуроксана и 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксана и загущению смеси входящих в композицию компонентов, усилению антинематодозного действия. Кроме этого, известно, что ПЭГ 1500 мало восприимчив к воздействию бактерий и обладает дополнительным противовоспалительным действием, что помогает ускорить заживление ран (в том числе и инфицированных), устраняет раздражение, вызванное действием нематод. При этом он не оказывает токсического действия на организм животных и человека и легко смывается водой.

Глюкоза обеспечивает маскировку вкуса, а также служит для приманивания и обманки нематодов, так как их основным питанием является глюкоза.

Далее заявителем описано получение отдельных компонентов заявленной композиции:

н-Гексадецилтрифенилфосфоний бромид формулы I получают по способу, описанному, например, в [Старкс Ч.М. Межфазный катализ. Химия, катализаторы и применение / Ред. Ч.М.Старкс. М.: Химия, 1991.- 157с.]

.

4,6-Динитро-5,7-дихлорбензофуроксан формулы II получают по способу, описанному, например, в [патент РФ 2752080 «Способ получения 4,6-динитро-5,7-дихлорбензолфуроксана», 2020 г.]

II.

5-Нитро-4,6-дихлорбензофуроксан формулы III получают по методике [Бузыкин Б.И., Губайдуллин А.Т.,Литвинов И.А., Юсупова Л.М. Молекулярная и кристаллическая структура 4,6-дихлор-5-нитробенз-2,1,3-оксадиазол-1-оксид, Бутлеровские сообщения, 2005, Т. 6, № 2. С. 29-32].

III.

Льняная мука является товарным продуктом, ГОСТ 222б.

Подсолнечное масло является товарным продуктом, ГОСТ – 1129-93.

Полиэтиленгликоль 1500 (ПЭГ 1500, Макрогол) фармацевтический, пищевая добавка Е 1521, является товарным продуктом.

Глюкоза кристаллическая медицинская, является товарным продуктом, ГОСТ 975-88 (производитель Днепропетровский крахмально-паточный комбинат).

Далее заявителем приведены примеры осуществление заявленного технического решения.

Пример 1. Получение заявленной фармацевтической композиции.

Заявленную фармацевтическую композицию получают следующим образом.

Сначала готовят первую смесь, для чего растирают 9,9 весовых частей глюкозы, 20 частей льняной муки, добавляют при перемешивании 0,1 весовую часть н-гексадецилтрифенилфосфоний бромида.

Затем готовят вторую смесь, для чего расплавляют при 65°С 10 весовых частей полиэтиленгликоля 1500, добавляют к нему при перемешивании 2 весовых части 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксана, 8 весовых частей 5-динитро-4,6-дихлорбензофуроксана, вливают воду и подсолнечное масло.

Затем обе смеси перемешивают при 65°С до получения однородной массы и пропускают через сито с диаметром пор 2 мм.

Полученные гранулы сушат при комнатной температуре и расфасовывают. Получают готовый продукт.

Далее заявителем приведены примеры изучения противопаразитарной эффективности заявленной фармацевтической композиции: антиэймериозной – Примеры 2 и 3, и антинематодозной – Примеры 4 и 5.

Пример 2. Изучение антиэймериозной эффективности заявленной фармацевтической композиции при эймериозе кроликов.

В опыте использовали 27 крольчат 2-х месячного возраста весом 2 - 2,5 кг, которые содержались в виварии кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ.

В результате копроскопического исследования проб фекалий методом Котельникова-Хренова было установлено, что животные заражены эймериозом. Источником инвазии явились больные кролики, которые ранее содержались в этом помещении. Дезинвазия не была проведена. Это способствовало естественному заражению кроликов.

Перед началом опыта у животных выборочно брали свежие пробы фекалий, которые помещали в пробирки и увлажняли 2%-ным раствором двухромовокислого калия. Пробирки этикетировали и доставляли на кафедру эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ. Пробы исследовали по методу Котельникова-Хренова. Видовую принадлежность эймерий изучали по пробам фекалий, используя определительную таблицу М.В. Крылова. При рассмотрении каждого вида эймерий обращали внимание на форму и цвет оболочек, наличие в ооцисте и споре остаточных тел, вели наблюдение за процессом спорогонии. Размеры ооцист, спор, спорозоитов, толщину оболочек ооцист и величину шапочки определяли путем промеров по 150 ооцист каждого вида с помощью винтового микрометра, который фиксировали на окуляр микроскопа. Подсчет спорулированных ооцист проводили в сетке для подсчета яиц гельминтов,ооцист простейших (по М.Ш.Акбаеву). см. Акбаев, М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных / М.Ш. Акбаев, Ф.И.Василевич и др. // М: Изд. Колос, 2008.- С. 63.

В результате исследований было установлено, что кролики заражены смешанной культурой ооцист следующих видов: Eimeria stiedae, Eimeria perforans, Eimeria magna.

После этого кроликов разделили на три группы:

– кроликам первой группы (опытной) давали заявленную композицию в виде водного раствора в дозе 15 мг/кг дважды с интервалом в 2 дня;

– кроликам второй группы (сравнения) давали известный препарат «Байкокс 2,5%» в виде водного раствора в дозе 7 мг/кг два дня подряд;

– кроликов третьей группы (контрольной) не лечили.

Кролики каждой группы во время эксперимента содержались в индивидуальных клетках. Условия содержания и кормления соответствовали зоогигиеническим нормам. Кормили сухим кормом для кроликов.

Результаты определения интенсивности инвазии, интенсэффективности и экстенсэффективности через 3, 7, 14 и 21 день представлены в Таблице 1 на Фиг.1.

Из Таблицы 1 видно, что до лечения все кролики были заражены эймериозом. Интенсивность инвазии колебалась от 159±3,8 до 167±6,2 ооцист эймерий в 1 г фекалий.

У кроликов первой группы (опытной), получавших заявленную композицию:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии значительно снизилась и составила около 26±0,8 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 84,5% и 77,7% соответственно;

– через 7 суток произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии до 9±1,0 ооцист эймерий, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 94,4% и 88,8% соответственно;

– через 14 суток организм кроликов полностью освободился от ооцист эймерий. Аппетит, общее состояние кроликов, консистенция фекалий в этот период нормализовались. Падежа отмечено не было, но у некоторых особей наблюдался жидкий стул. Интенс- и экстенсэффективности на уже на 14 сутки составили 100%, что говорит об эффективном действии заявленной композиции при эймериозе кроликов.

У кроликов второй группы (сравнения), получавших Байкокс 2,5%:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 39±4,0 ооцист эймерий, интенсэффективность составила 75,5%, экстенсэффективность – 55,5%;

– через 7 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 26±1,0 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 83,7% и 66,6% соответственно;

– через 14 суток интенсивность инвазии составила 24 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 85% и 77,7% соответственно;

– на 21 сутки интенсивность инвазии составила 16 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 90% и 88,8% соответственно.

Таким образом, известный препарат Байкокс 2,5% показал более низкую противопаразитарную эффективность по сравнению с заявленной композицией на протяжении всего времени эксперимента.

У кроликов третьей группы (контрольной) без лечения:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 172±5,6 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– на через 7 суток интенсивность инвазии увеличилась и составила 192±6,0 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 14 суток интенсивность инвазии увеличилась и составила 199±8,6 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 21 сутки интенсивность инвазии составила 228±7,3 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

При этом у животных контрольной группы к концу опыта падеж составил 20% от общего поголовья, наблюдались выраженные клинические признаки эймериоза: вялость, потеря в весе, жидкие фекалии с примесью крови, понижение аппетита (на утро корм оставался в кормушке), анемичность слизистых оболочек глаз, носовой и ротовой полостей.

Таким образом, анализ приведенных исследований показывает, что заявленная композиция в дозе 15 мг/кг при двукратном введении с интервалом 2 дня полностью освобождает организм кроликов через 14 суток после лечения и обладает более высокой противоэймериозной эффективностью.

Пример 3. Изучение антиэймериозной эффективности заявленной фармацевтической композиции при эймериозе ягнят.

В опыте использовали 18 ягнят 3-4 месячного возраста из частного подворья фермера Исаншина А.П., расположенного в деревне Таканыш Мамадышского района Республики Татарстан.

Перед началом опыта у животных выборочно брали свежие пробы фекалий, которые помещали в пробирки и увлажняли 2%-ным раствором двухромовокислого калия. Пробирки этикетировали и доставляли на кафедру эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО КГАВМ. Пробы исследовали по методу Котельникова-Хренова. Видовую принадлежность эймерий изучали по пробам фекалий, используя определительную таблицу М.В. Крылова. При рассмотрении каждого вида эймерий обращали внимание на форму и цвет оболочек, наличие в ооцисте и споре остаточных тел, вели наблюдение за процессом спорогонии. Размеры ооцист, спор, спорозоитов, толщину оболочек ооцист и величину шапочки определяли путем промеров по 150 ооцист каждого вида с помощью винтового микрометра, который фиксировали на окуляр микроскопа. Подсчет спорулированных ооцист проводили в сетке для подсчета яиц гельминтов,ооцист простейших (по М.Ш.Акбаеву) см. Акбаев, М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных / М.Ш. Акбаев, Ф.И.Василевич и др. // - М. Издат. Колос, 2008.- С. 63.

В исследованных пробах были выявлены ооцисты следующих видов: Eimeria faurei, Eimeria truncata, Eimeria ninaekohljakimovae.

После этого ягнята были разделены на 3 группы по 6 голов в каждой:

– ягнятам первой группы (опытной) давали заявленную композицию в виде водного раствора в дозе 15 мг/кг дважды с интервалом в 2 дня;

– ягнятам второй группы (сравнения) давали известный препарат ампролиум 30% в дозе 240 мг действующего вещества на 1 литр воды в течение 7 дней;

– ягнят третьей группы (контрольной) не лечили.

Перед введением препаратов ягнят в течение 12 часов выдерживали на голодной диете, водопой не ограничивали.

Результаты определения интенсивности инвазии, интенсэффективности и экстенсэффективности через 7, 15 и 30 день представлены в Таблице 2 на Фиг.2.

Из Таблицы 2 видно, что до лечения все ягнята были заражены эймериозом. Интенсивность инвазии колебалась от 106±1,1 до 113±2,1 ооцист эймерий в 1 г фекалий.

У ягнят первой группы (опытной), получавших заявленную композицию:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии значительно снизилась и составила около 57±1,8 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 46,3% и 75% соответственно;

– через 15 суток произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии до 53± 1,5 ооцист эймерий, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 50% и 83,3% соответственно;

– через 30 суток произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии до 2,0± 1,3 ооцист эймерий, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 98,2% и 91,6% соответственно.

У кроликов второй группы (сравнения):

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 69±1,9 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 39 и 50% соответственно;

– через 15 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 67±1,6 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 40,8% и 60% соответственно;

– через 30 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 19,8±1,4 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 82,5% и 70% соответственно.

Таким образом, известный препарат ампролиум 30% показал более низкую противоэймериозную эффективность по сравнению с заявленной композицией на протяжении всего времени эксперимента.

У кроликов третьей группы (контрольной) без лечения:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии повысилась и равнялась 118±2,3 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 15 суток интенсивность инвазии еще увеличилась и составила 123± 1,8 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 30 суток интенсивность инвазии еще увеличилась и составила 126±2,6 ооцист эймерий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%.

У ягнят контрольной группы отмечалось угнетенное состояние, ухудшение аппетита, фекалии были жидкие с примесью крови и слизи с неприятным запахом, животные в основном лежали и у них проявлялась жажда.

Пример 4. Изучение антинематодозной активности заявленной фармацевтической композиции в отношении нематодозов птиц.

Антинематодозная активность заявленной фармацевтической композиции на примере нематод Heterakis gallainarum исследовали на молодняке фазанов в условиях вивария кафедры эпизоотологии и паразитологии ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины». Фазаны во время эксперимента содержались в клетках и питались промышленным комбикормом.

В опыте использовали 30 фазанов в возрасте 60 суток, которых заразили инвазионными яйцами нематоды Heterakisgallinarum в дозе 500 яиц на голову. Перед заражением исследовали помет птиц методом Котельникова-Хренова. После этого фазанов разделили на три группы по 10 голов в каждой, с учетом пола и живой массы. После достижения личинками половозрелой стадии (через 40 суток после заражения) птиц начали лечить, при этом:

– первой группе фазанов задавали заявленную композицию в виде водного раствора в дозе 15 мг/кг дважды с интервалом в 2 дня.

– фазанам второй (сравнительной) группы давали известный препарат тетрамизол 20% однократно, в смеси с комбикормом, в дозе 100 мг на 1 кг массы птицы;

– фазанов третьей (контрольной) группы не лечили.

Гельминтоовоскопическое исследование по методу Котельникова - Хренова проводили на 3, 7 и 15 сутки после лечения.

Результаты исследований приведены в Таблице 3 на Фиг.3.

Из Таблицы 3 видно, что до лечения все фазаны были заражены нематодозом. Интенсивность инвазии колебалась от 12±0,8 до 20±0,4 яиц Heterakis gallinarum в 1 г фекалий.

У фазанов первой группы (опытной), получавших заявленную композицию:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии значительно снизилась и составила около 3,0±,0,3 яиц, интесэффективность и экстенсэффективность составили 1,3% и 90% соответственно;

– через 7 суток яиц Heterakis gallinarum не обнаружено.

У фазанов второй группы (сравнения), получавших тетрамизол 20%:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 5±0,2 яиц, интенсэффективность составила 5,0%, экстенсэффективность – 70%;

– через 7 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 1± 0,6 яиц интесэффективность и экстенсэффективность составили 86,2% и 0% соответственно;

– через 14 суток интенсивность инвазии составила 1,8± 0,1 яиц, интесэффективность и экстенсэффективность составили 90,5% и 90% соответственно.

Таким образом, известный препарат тетрамизол 20% показал более низкую противопаразитарную эффективность по сравнению с заявленной композицией на протяжении всего времени эксперимента.

У фазанов третьей группы (контрольной) без лечения:

– через 3 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 12± 0,3 яиц, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– на через 7 суток интенсивность инвазии увеличилась и составила 20± 0,8 яиц, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 14 суток интенсивность инвазии увеличилась и составила 22± 0,5 яиц, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%.

Таким образом, анализ приведенных исследований показывает, что заявленная композиция в дозе 15 мг/кг при двукратном введении с интервалом 2 дня полностью освобождает организм фазанов через 7 суток после лечения и обладает более высокой противонематодозной эффективностью, на 10-20% выше известного препарата тетрамизол 20%.

Следовательно, антинематодозная эффективность заявленной композиции выше, чем у препарата тетрамизола гранулята.

Пример 5. Изучение антигельминтной активности заявленной фармацевтической композиции в отношении кишечных стронгилятов крупного рогатого скота (КРС).

Антигельминтную эффективность заявленной композиции при стронгилятозах крупного рогатого скота исследовали на телятах. В опыте использовали 40 телят 6-месячного возраста, естественно зараженных кишечными стронгилятами. Животные принадлежали СХПК им. Ленина Атнинского района РТ. До лечения у всех животных брали пробы фекалий для определения интенсинвазированности и экстенсинвазированности. Для копроовоскопии использовали метод Котельникова – Хренова.

Исследования проводили в сравнении с известными препаратами тетрамизол гранулят и альбендазол в форме 10% суспензии. Препараты вводили индивидуально внутрь.

Животных разделили на 4 группы, по 10 голов в каждой:

– телятам первой (опытной) группы давали заявленную композицию в виде водного раствора в дозе 15 мг/кг дважды с интервалом в 2 дня;

– телятам второй (сравнительной) группы давали известный препарат – 10% тетрамизолгранулят в дозе 0,15г/1,0 кг живой массы;

– телятам третьей (сравнительной) группы давали известный препарат – 10% суспензию альбендазола в дозе 0,75 мл/10,0 кг массы тела;

– телят четвертой (контрольной) группы не лечили.

За телятами вели наблюдение в течение 30 дней после введения препаратов. Результаты сравнительной антигельминтной эффективности различных препаратов при стронгилятозах крупного рогатого скота представлены в Таблице 4 на Фиг. 4.

Из Таблицы 4 видно, что до лечения интенсивность инвазии у животных варьировала от 134,0±2,5 до 141,0±3,9 яиц в 1 г фекалий. Экстенсинвазированность в каждой группе составила 100%.

У телят первой группы (опытной), получавших заявленную композицию:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии значительно снизилась и составила около 17,8±1,0 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 85,3% и 70% соответственно;

– через 15 суток произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии до 7,0±0,5 яиц в 1 г фекалий, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 93 и 80% соответственно;

– через 30 суток произошло дальнейшее снижение интенсивности инвазии до 5,0±05 яиц в 1 г фекалий, интенсэффективность и экстенсэффективность составили 94,5 и 90% соответственно.

У телят второй группы (сравнения) с лечением тетрамизол гранулята:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 47,4±3,2 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 65 и 50% соответственно;

– через 15 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 26,0±2,5 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 79,9% и 60% соответственно;

– через 30 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 22,5±9,6 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 82,4 и 70% соответственно.

Таким образом, известный препарат тетрамизол показал более низкую противоэймериозную эффективность по сравнению с заявленной композицией на протяжении всего времени эксперимента.

У телят третьей группы (сравнения) с лечением альбендазолом:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии равнялась 30,6±2,8 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 75,5 и 60% соответственно;

– через 15 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 13,0±4,6 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 85,5 и 70% соответственно;

– через 30 суток интенсивность инвазии снизилась и составила 11,0±0,5 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 89,9 и 80% соответственно.

Таким образом, известный препарат альбендазол показал более низкую противоэймериозную эффективность по сравнению с заявленной композицией на протяжении всего времени эксперимента.

У телят четвертой группы (контрольной) без лечения:

– через 7 суток после начала лечения интенсивность инвазии повысилась и равнялась 143±2,1 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 15 суток интенсивность инвазии еще увеличилась и составила 149,0±1,4 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%;

– через 30 суток интенсивность инвазии еще увеличилась и составила 165,0±1,2 яиц в 1 г фекалий, интесэффективность и экстенсэффективность составили 0%.

Таким образом, при стронгилятозах крупного рогатого скота заявленная фармацевтическая композиция является более эффективной, чем известные препараты тетрамизол гранулят и альбендазол. Через 30 дней после дегельминтизации интесэффективность и экстенсэффективность заявленной фармацевтической композиции составили 94,5 и 90%, против 82,4 и 70% у тетрамизол гранулята и 89,9 и 80% у альбендазола.

Пример 6. Определение острой токсичности заявленной фармацевтической композиции.

Работа выполнялась на кафедре эпизоотологии и паразитологии ФГБОУВО «Казанская ГАВМ» в ноябре и декабре 2021 года.

Острая токсичность заявленной фармацевтической композиции была изучена на 42 белых крысах Вистар обоих полов с живой массой 200-220 г.

Крысы были разделены по принципу аналогов на 7 групп, где были 6 опытных групп и 1 контрольная. При выборе доз, кратности и метода введения пользовались Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств (Миронов А.Н., 2012).

В начале опыта крыс выдерживали на 12-ти часовой голодной диете. Из заявленной композиции готовили водные растворы различных концентраций и вводили внутрижелудочно с помощью зонда. Крысам опытных групп соединение вводили заявленную композицию в следующих дозах: 200 мг/кг, 600 мг/кг, 1000 мг/кг, 2000 мг/кг, 3000 мг/кг и 5000 мг/кг. Крысам контрольной группы внутрижелудочно задавали изотонический раствор NaCl. Животных допускали к приёму пиши не раньше, чем через 3 часа после введения средства, питьё не ограничивали.

Наблюдение за крысами вели в течение 14 дней. Учитывались подвижность животных, состояние их волосяного покрова, видимых слизистых оболочек, аппетита, интоксикации, её тяжесть и обратимость, а также сроки выздоровления.

В течение всего времени проведения опыта клиническое состояние крыс 6-ти опытных групп не отличалось от животных контрольной группы. Крысы поедали корм, адекватно реагировали на тактильные, звуковые, болевые и световые раздражители. Состояние кожного покрова и слизистых оболочек соответствовало крысам контрольной группы.

На 3 и 7 дни опыта было проведено вскрытие по одному животному от каждой группы. Видимых изменений в органах грудной и брюшной полостей у крыс как опытных, так и контрольной группы не обнаружилось.

Среднесмертельная доза ЛД50 была вычислена и равнялась 3000 мг/кг. Максимальная доза антипаразитарной фармацевтической композиции, введённая крысам, составила 5000 мг/кг. По ГОСТу 121.007 -76 вещества, у которых ЛД50 более 2500 мг/кг, по своим токсикологическим свойствам относятся к IV классу опасности, по Измерову «нетоксичное соединение».

Таким образом, из изложенного выше можно сделать вывод, что заявителем достигнут заявленный технический результат, а именно: расширен арсенал средств указанного назначения путем создания эффективной нетоксичной противопаразитарной фармацевтической композиции для ветеринарии с низкими лечебными дозами.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного заявителем уровня техники не выявлена совокупность признаков, приведенная в независимом пункте формулы изобретения.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, так как из исследованного заявителем уровня техники не выявлена совокупность приведенных в независимом пункте формулы изобретения признаков и совокупность полученных технических результатов.

Заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям, так как его возможно реализовать в промышленности посредством применения известных из уровня техники материалов, оборудование и технологий.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, а именно к фармацевтической композиции, которая обладает антиэймериозной и антинематодозной активностью при лечении сельскохозяйственных и домашних животных. Фармацевтическая композиция содержит, вес. ч.: 4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан 2,0; 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан 8,0; н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид 0,1; льняная мука 20,0; подсолнечное масло 20,0; полиэтиленгликоль 1500 10,0; вода очищенная 30,0; глюкоза 9,9. Вышеописанное решение позволяет расширить арсенал средств указанного назначения путем создания эффективной нетоксичной противопаразитарной фармацевтической композиции для ветеринарии с низкими лечебными дозами. 4 ил., 6 пр.

Фармацевтическая композиция, обладающая антиэймериозной и антинематодозной активностью при лечении сельскохозяйственных и домашних животных, содержащая, вес. ч.:

4,6-динитро-5,7-дихлорбензофуроксан 2,0 5-нитро-4,6-дихлорбензофуроксан 8,0 н-гексадецилтрифенилфосфоний бромид 0,1 льняная мука 20,0 подсолнечное масло 20,0 полиэтиленгликоль 1500 10,0 вода очищенная 30,0 глюкоза 9,9