КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ РАКА, ВКЛЮЧАЮЩАЯ РАЗРУШАЮЩЕЕ СОСУДЫ СРЕДСТВО И ТАКСАНОВОЕ СОЕДИНЕНИЕ Российский патент 2021 года по МПК A61K31/427 A61K31/4545 A61K31/337 A61K31/4196 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к композиции для профилактики или лечения рака, включающей разрушающее сосуды средство (VDA) и таксановое соединение.

Предпосылки создания изобретения

Разрушающее сосуды средство (VDA) нацелено на селективное разрушение цитоскелетных микротрубочек клеток сосудистого эндотелия и, таким образом, на быстрое и селективное разрушение кровеносных сосудов опухоли, образовавшихся в ней, при этом VDA также может индуцировать ишемический некроз клеток, находящихся в центре опухоли. Таким образом, недавно появился способ для разрушения кровеносных сосудов с использованием разрушающего сосуды средства (VDA) в качестве новой противораковой стратегии. Соответственно, авторы настоящего изобретения разработали соединение следующей формулы 1 в качестве такого разрушающего сосуды средства (международная публикация не прошедшей экспертизу патентной заявки № WO 2009-119980).

[Формула 1]

Соединение формулы 1, представленное выше, представляет собой ингибитор полимеризации тубулина, обладающий двойным механизмом действия, вызывающим: быстрое разрушение уже существующих опухолевых кровеносных сосудов, вызываемое дестабилизацией микротрубочек; и апоптоз, вызываемый остановкой клеточного цикла. Однако в случае лечения только разрушающим сосуды средством (VDA), включающим соединение формулы, представленное выше, существует проблема, состоящая в том, что опухоль может быстро вырасти снова из жизнеспособного окружения, таким образом, уменьшая терапевтическую применимость таких лекарственных средств.

Соответственно, авторами настоящего изобретения были предприняты различные исследования для обеспечения композиции, способной лечить рак, а также способа для лечения рака, полностью используя преимущества разрушающего сосуды средства в качестве противоракового лекарственного средства и решая проблему повторного роста опухоли.

Ссылочный документ предшествующего уровня техники

Патентный документ

WO2009/119980

Подробное описание изобретения

Техническая задача

Целью настоящего изобретения является обеспечение композиции для профилактики или лечения рака, включающей разрушающее сосуды средство и таксановое соединение.

Другой целью настоящего изобретения является обеспечение способа для лечения рака, включающего введение разрушающего сосуды средства и таксанового соединения субъекту, нуждающемуся в этом.

Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение применения разрушающего сосуды средства и таксанового соединения для получения лекарственного средства для лечения рака.

Техническое решение

Как результат исследовательских работ, направленных на достижение указанных целей, авторы настоящего изобретения создали фармацевтическую композицию для профилактики или лечения рака, включающую разрушающее сосуды средство (VDA) и таксановое соединение.

Разрушающее сосуды средство (VDA) нацелено на селективное разрушение цитоскелетных микротрубочек клеток сосудистого эндотелия и, таким образом, на быстрое и селективное разрушение кровеносных сосудов опухоли, образовавшихся в ней, при этом VDA также может индуцировать ишемический некроз клеток, находящихся в центре опухоли.

В настоящем изобретении разрушающее сосуды средство представляет собой (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид, представленный следующей формулой 2, или его фармацевтически приемлемые соли.

[Формула 2]

В настоящем изобретении представленное выше соединение формулы 2 можно получить, например, с использованием способа, раскрытого в международной патентной публикации WO 2009-119980, но не ограничиваясь этим.

В настоящем изобретении фармацевтически приемлемые соли представленного выше соединения формулы 2 означают соли, традиционно используемые в фармацевтической промышленности. Например, существуют соли неорганических ионов, полученные из кальция, калия, натрия, магния или т.п.; соли неорганических кислот, полученные из хлористоводородной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты, бромноватой кислоты, иодноватой кислоты, перхлорной кислоты, серной кислоты или т.п.; соли органических кислот, полученные из уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, щавелевой кислоты, бензойной кислоты, винной кислоты, фумаровой кислоты, миндальной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, гликолевой кислоты, глюконовой кислоты, галактуроновой кислоты, глутаминовой кислоты, глутаровой кислоты, глюкуроновой кислоты, аспарагиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, угольной кислоты, ванилиновой кислоты или т.п.; соли сульфоновых кислот, полученные из метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, нафталинсульфоновой кислоты или т.п.; соли аминокислот, полученные из глицина, аргинина, лизина и т.д.; соли аминов, полученные из триметиламина, триэтиламина, аммиака, пиридина, пиколина и т.д.; или подобные, но типы соли, предназначенные для настоящего изобретения, не ограничиваются перечисленными выше солями.

В частности, соль (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида может представлять собой гидрохлорид.

В настоящем изобретении активный метаболит соединения формулы 2, представленной выше, может представлять собой (4-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)фенил)(3,4,5-триметоксифенил)метанон, представленный следующей формулой 3. Термин “активный метаболит” означает вещество, которое действительно демонстрирует фармакологическую активность в организме субъекта, которого лечат, в числе веществ, возникающих в результате метаболического процесса анаболизма или катаболизма в организме.

[Формула 3]

В настоящем изобретении соединение формулы 2, содержащееся в фармацевтической композиции для профилактики или лечения рака, присутствует в виде соединения формулы 3, представленной выше, в соответствии с метаболическим процессом у субъекта и, таким образом, может проявлять эффект предотвращения, регрессии или лечения рака.

Соединение формулы 2 в соответствии с настоящим изобретением может быстро и селективно разрушать опухолевые кровеносные сосуды и, таким образом, вызывать ишемический некроз клеток, находящихся в центре опухоли. Однако разрушающее сосуды средство, такое как соединение формулы 2, представленной выше, и т.п., может оставлять возможность быстрого повторного роста опухоли, таким образом, снижая терапевтическую пользу лекарственных средств.

Однако в композиции по настоящему изобретению, в случае совместного введения (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида или его фармацевтически приемлемых солей с таксановым соединением, которое является противораковым средством, имеющим другой терапевтический механизм, было установлено, что противораковая терапевтическая активность становится превосходной благодаря синергетическому и комплементарному эффекту.

Таксановое соединение означает соединение природного происхождения на основе дитерпена, которое широко используется в химиотерапии. Соединение таксана обладает эффектом, приостанавливающим деление клетки путем нарушения продукции микротрубочек, которые доставляют хромосомы к обоим полюсам во время деления клетки, и, таким образом, проявляет эффект ингибирования пролиферации раковых клеток, которые делятся чаще, чем нормальные клетки.

В настоящем изобретении таксановое соединение может представлять собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, включающей паклитаксел, доцетаксел, кабазитаксел, ларотаксел, ортатаксел и тезетаксел. В частности, таксановое соединение может представлять собой паклитаксел или доцетаксел.

Фармацевтически приемлемые соли таксанового соединения означают соли, обычно используемые в фармацевтической промышленности. Например, существуют соли неорганических ионов, полученные из кальция, калия, натрия, магния или т.п.; соли неорганических кислот, полученные из хлористоводородной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты, бромноватой кислоты, иодноватой кислоты, перхлорной кислоты, серной кислоты или т.п.; соли органических кислот, полученные из уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, лимонной кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, щавелевой кислоты, бензойной кислоты, винной кислоты, фумаровой кислоты, миндальной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, гликолевой кислоты, глюконовой кислоты, галактуроновой кислоты, глутаминовой кислоты, глутаровой кислоты, глюкуроновой кислоты, аспарагиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, угольной кислоты, ванилиновой кислоты или т.п.; соли сульфоновых кислот, полученные из метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, нафталинсульфоновой кислоты или т.п.; соли аминокислот, полученные из глицина, аргинина, лизина и т.д.; соли аминов, полученные из триметиламина, триэтиламина, аммиака, пиридина, пиколина и т.д.; или подобные, но типы соли, педназначенные для настоящего изобретения, не ограничиваются перечисленными выше солями. Кроме того, таксановое соединение может не содержать соли.

Композиция по настоящему изобретению может представлять собой композицию, содержащую (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемые соли и таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли; комбинацию, содержащую (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемые соли и таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли; или композицию, содержащую указанную комбинацию. Таким образом, в настоящем изобретении указанная композиция может использоваться смешанной с комбинацией.

Композицию по настоящему изобретению можно эффективно использовать для профилактики или лечения рака. В качестве рака можно указать различные виды рака организма человека, гинекологические опухоли, рак эндокринной системы, опухоль центральной нервной системы, рак мочеточника и т.д. В частности, рак включает рак легких, рак желудка, рак печени, рак кости, рак поджелудочной железы, рак кожи, рак головы и шеи, меланому кожи, рак матки, рак яичников, рак прямой кишки, рак толстой кишки, рак толстой кишки, рак молочной железы, саркому матки, карциному фаллопиевых труб, карциному внутреннего эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному вульвы, рак пищевода, рак гортани, новообразование тонкой кишки, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, саркому мягких тканей, рак уретры, рак полового члена, рак предстательной железы, множественную миелому, хронический или острый лейкоз, детскую солидную опухоль, лимфому (дифференцированную лимфому и первичную лимфому центральной нервной системы), рак мочевого пузыря, рак почек, почечно-клеточную карциному, карциному почечной лоханки, опухоль оси позвоночника, глиому ствола головного мозга или аденому гипофиза. Более конкретно, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно использовать для лечения колоректального рака, меланомы кожи, рака легких, рака желудка, лимфомы или множественной миеломы и, еще более конкретно, можно использовать для лечения рака легких.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно сформулировать в виде препарата с использованием фармацевтически приемлемого носителя в соответствии со способом, легко осуществимым специалистами в области техники, к которой относится настоящее изобретение, таким образом, такую композицию можно получить в стандартной лекарственной форме или в форме, включенной в многодозовый контейнер.

Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой носитель, обычно используемый для формулирования препарата, включая, но не ограничиваясь этим, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и т.п. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может также содержать смазывающее вещество, увлажнитель, подсластитель, ароматизатор, эмульгатор, суспендирующий агент, консервант и т.д. в дополнение к вышеуказанным компонентам. Подходящие фармацевтически приемлемые носители и препараты подробно описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (19-е изд., 1995).

Композиция по настоящему изобретению может содержать два типа отдельных препаратов, а также может состоять из одного препарата.

В композиции по настоящему изобретению (S)-N-(4-3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемые соли и таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить одновременно или в разное время. После введения (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида или его фармацевтически приемлемых солей таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить в то же самое время или через один-пять дней, в частности одновременно или через один-три дня, и более конкретно одновременно или на следующий день. Термин “одновременно” включает: введение таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей вместе с введением (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида или его фармацевтически приемлемых солей; и введение отдельно таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей не позднее чем через день, т.е. в тот же самый день после введения (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида или его фармацевтически приемлемых солей.

Композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально (например, применять внутривенно, подкожно, интраперитонеально или местно) в зависимости от намеченного способа.

В настоящем изобретении (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить перорально или парентерально.

В настоящем изобретении таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить парентерально.

В композиции по настоящему изобретению подходящая доза эффективных компонентов может варьироваться в определенных пределах в зависимости от массы тела, возраста, пола, состояния здоровья, режима питания пациента, времени введения, способа введения, скорости экскреции, тяжести заболевания и т.д. Суточная доза (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида по изобретению или его фармацевтически приемлемых солей составляет от около 1 мг/м² до 20 мг/м², предпочтительно от 5 мг/м² до 15 мг/м². Также, суточная доза таксанового соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемых солей может быть одинаковой или отличаться в зависимости от типа таксанового соединения. В частности, суточная доза доцетаксела составляет от около 20 мг/м² до 150 мг/м², предпочтительно от 40 мг/м² до 80 мг/м². Суточная доза паклитаксела составляет от около 100 мг/м² до 300 мг/м², предпочтительно от 150 мг/м² до 250 мг/м².

Также, в композиции по настоящему изобретению подходящий цикл введения эффективных компонентов может быть определен в зависимости от дозы. (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид по изобретению или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить от одного раза в день до одного раза в три недели, в частности от одного раза в день до одного раза в неделю, но не ограничиваясь этим.

Также, таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли можно вводить от одного раза в день до одного раза в три недели, в частности от одного раза в неделю до одного раза в три недели.

Настоящее изобретение обеспечивает способ для лечения рака, включающий введение (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида, представленного формулой 2, или его фармацевтически приемлемых солей и таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей субъекту, нуждающемуся в этом.

В частности, обеспечивается способ для лечения рака, включающий следующие стадии: введение (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида, представленного формулой 2, или его фармацевтически приемлемых солей субъекту, нуждающемуся в этом; и введение таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей субъекту, нуждающемуся в этом.

В контексте настоящей заявки термин “субъект” включает млекопитающих, в частности человека. Терапевтический способ включает введение в терапевтически эффективном количестве, а термин “терапевтически эффективное количество” относится к количеству (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида по изобретению, представленного формулой 2, или его фармацевтически приемлемых солей и таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей, которое эффективно для лечения рака.

Настоящее изобретение обеспечивает применение (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида, представленного формулой 2, или его фармацевтически приемлемых солей и таксанового соединения или его фармацевтически приемлемых солей для получения лекарственного средства для лечения рака.

Композицию, содержащую (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид по изобретению, представленный формулой 2, или его фармацевтически приемлемые соли и таксановое соединение или его фармацевтически приемлемые соли, которые используют для получения лекарственного средства, может быть смешана с приемлемым носителем и т.п. и также содержать другие дополнительные средства.

Признаки изобретения, указанные в применении, композиции и способе лечения по настоящему изобретению, в равной степени применимы, если только они не противоречат друг другу.

Полезные эффекты

Композиция по настоящему изобретению показывает активность, направленную на пррофилактику или лечение рака, поскольку содержит разрушающее сосуды средство и таксановое соединение, и обладает удивательно отличным противораковым эффектом по сравнению с отдельным эффективным компонентом. Таким образом, композицию по настоящему изобретению можно применять для профилактики, регрессии или лечения рака.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет график, показывающий, что объем опухоли существенно уменьшался в группе, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, по сравнению с группой, которой вводили отдельно CKD-516 или доцетаксел, как результат сравнения объемов опухолей (H1975) после завершения эксперимента.

Фиг. 2 представляет график, показывающий, что группа, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, показывает не только эффект ингибирования роста раковой ткани, но также эффект уменьшения объема опухоли, как результат сравнения объемов опухолей (H1975) в период осуществления эксперимента.

Фиг. 3 представляет график, показывающий, что объем опухоли существенно уменьшался в группе, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, по сравнению с группой, которой вводили отдельно CKD-516 или доцетаксел, как результат сравнения объемов опухолей (A549) после завершения эксперимента.

Фиг. 4 представляет график, показывающий, что группа, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, показывает удивительно замечательный эффект ингибирования роста раковой ткани, как результат сравнения объемов опухолей (A549) в период осуществления эксперимента.

Фиг. 5 представляет график, показывающий, что объем опухоли существенно уменьшался в группе, которой вводили CKD-516 и паклитаксел вместе, по сравнению с группой, которой вводили отдельно CKD-516 или паклитаксел, как результат сравнения объемов опухолей (H460) после завершения эксперимента.

Фиг. 6 представляет график, показывающий, что группа, которой вводили CKD-516 и паклитаксел вместе, показывает удивительно замечательный эффект ингибирования роста раковой ткани, как результат сравнения объемов опухолей (H460) в период осуществления эксперимента.

Способ осуществления изобретения

Далее конфигурация и эффекты настоящего изобретения будут описаны более подробно посредством Примеров. Следующие Примеры представлены только в целях иллюстрации настоящего изобретения, и, таким образом, объем настоящего изобретения не ограничивается ими.

<Пример 1> Определение синергетического эффекта между соединением формулы 2 и доцетакселом (1)

1. Способ осуществления эксперимента

Получение опухолевой клеточной линии

В качестве человеческой опухолевой клеточной линии, клеточную линию рака легкого, т.е. клеточные линии H1975 закупали у American Type Culture Collections (ATCC). Один флакон, содержащий клеточные линии, вносили в среду RPMI1640 (Gibco, 22400), содержащую термоинактивированную 10% фетальную бычью сыворотку (FBS; Gibco, 10082-742), и культивировали в 5% CO₂ инкубаторе при 37°С. Полученные клетки промывали PBS, после этого к ним добавляли 10-кратное разведение 2,5% Трипсин-EDTA (Gibco, 15090) для выделения клеток из среды. Затем осуществляли центрифугирование (при 1000 об/мин в течение 5 мин), затем супернатант сливали и получали клеточную суспензию с использованием новой среды. Выживаемость определяли при помощи микроскопа с получением препарата в количестве 1,0×10⁷ клеток/мл.

Получение животной модели

Пятинедельных самцов бестимусных мышей (Hsd: Athymic Nude-Foxn1^nu) закупали у Saeron Bio Inc. (провинция Gyeonggi в Южной Корее).

Полученные таким образом опухолевые клеточные линии подкожно (п/к) вводили в объеме 0,2 мл (2×10⁶ клеток) в спину мышей с использованием шприца с иглой 26 размера. Примерно через три-четыре недели после инъекции отбирали животных, у которых размер опухоли достигал 170 мм³-220 мм³, и использовали для эксперимента.

Получение эффективного компонента

Соединение формулы 2, т.е. CKD-516, растворяли в 0,9% физиологическом растворе (эксципиент 1) и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 1.

Доцетаксел растворяли в эксципиенте (эксципиент 2), который получали путем смешивания кремофора, этанола и физиологического раствора при соотношении 1:1:8, и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 1.

Таблица 1 Вводимое вещество Вводимая доза
(мг/кг) Количество вводимого раствора
(мл/кг) Способ введения Отрицательный контроль (эксципиент 2) - 10 и/п Положительный контроль (доцетаксел) 6 10 и/п CKD-516 3 10 и/п CKD-516+Доцетаксел 3+6 10+10 и/п

Введение лекарственного средства и определение противораковой активности

Противораковый эффект CKD-516 и доцетаксела оценивали с использованием полученной животной модели. Животных разделяли на экспериментальные группы рандомизированно, как показано в таблице 1 выше.

- Эксципиент 2: Два раза в неделю, интраперитонеальное (и/п) введение; в течение трех недель

- Доцетаксел: 6 мг/кг, два раза в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение;

- CKD-516: 3 мг/кг, два раза в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение; и

- CKD-516+Доцетаксел: CKD-516 (3 мг/кг, два раза в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение) должен вводиться первым+Доцетаксел (6 мг/кг, два раза в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение) должен вводиться на следующий день.

Противораковую активность определяли на основании объема опухоли. Объем опухоли получали путем измерения длинной оси и короткой оси опухоли с использованием электронных циркулей (CD-15CPX, Mitutoyo Corp., Japan) и путем расчета с использованием измеренных значений в соответствии со следующим уравнением (один раз в неделю):

Объем опухоли (мм³) = (Длина длинной оси × Длина короткой оси²) / 2.

Статистическая обработка

Сравнение между группой положительного контроля и группами, которым вводили испытываемое вещество, относительно группы отрицательного контроля, и сравнение между группой положительного контроля и группами, которым вводили испытываемое вещество, верифицировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа. При этом, допуская, что значимость принята, осуществляли ретроспективный анализ с критерием Дункана, если принято равенство дисперсий, и критерием Даннетта, если равенство дисперсий не принято. Если p-значение равно 0,05 или меньше, значимость была принята, и использовали SPSS 10.1, обычно используемую статистическую программу.

2. Экспериментальные результаты - Противораковая активность

Объем опухоли в группе отрицательного контроля, которой вводили только эксципиент, построянно увеличивался со временем. В случае группы, которой вводили только доцетаксел в качестве положительного контрольного вещества, рост опухоли со временем уменьшался по сравнению с группой отрицательного контроля, но объем опухоли построянно увеличивался. Также, группа, которой вводили только CKD-516, также показала такую же тенденцию, как группа, которой вводили доцетаксел. Однако, для группы, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, было определено, что объем опухоли существенно не отличается от начального объема опухоли, но объем опухоли удивительно небольшой в конце эксперимента по сравнению с группой, которой вводили только доцетаксел или только CKD-516 (Таблица 2 и Фиг. 1). Также было определено, что объем опухоли, который обычно увеличивался после третьего введения, уменьшился (Таблица 2 и Фиг. 2).

Это говорит о том, что совместное введение CKD-516 и доцетаксела показывает эффект уменьшения объема опухоли, который не был показан при отдельном введении, благодаря синергетическому действию между разрушающим кровеносные сосуды действием CKD-516 и эффектом доцетаксела, приостанавливающим деление клеток.

Таблица 2 Группа Объем опухоли (мм³) 4/7 4/10 4/14 4/17 4/21 4/24 Эксципиент среднее значение 123,6 172,5 353,3 711,2 1286,0 1820,3 SD 34,7 44,7 69,4 180,1 434,5 688,1 Доцетаксел среднее значение 123,4 178,0 309,6 460,5 500,2^*** 513,9^*** SD 32,9 49,1 116,0 181,3 191,2 187,7 CKD-516 среднее значение 121,8 146,3 321,3 432,4^* 504,9^*** 790,7^*** SD 31,0 49,7 167,2 173,4 149,8 233,5 Совместное введение среднее значение 121,3 150,8 218,7 172,2^*** 150,0^*** 138,1^*** SD 29,2 41,0 94,5 49,1 44,6 38,6

<Пример 2> Определение синергетического эффекта между соединением формулы 2 и доцетакселом (2)

1. Способ осуществления эксперимента

Получение животной модели

Четырехнедельных самцов бестимусных мышей Balb/c закупали у Central Lab Animal Inc.

A-549 раковые клеточные линии (1×10⁷ клеток), которые представляют собой клеточные линии рака легких человека, закупали у ATCC и подкожно вводили мышам. В частности, кончик иглы вводили мышам в левый бок перед введением раковых клеток и передвигали из стороны в сторону для введения раковых клеток и установления, что вводимый раствор не вытек наружу, чтобы таким образом наблюдалось образование опухоли. Животных, у которых размер опухоли достигал 100 мм³-250 мм³, отбирали и использовали для эксперимента.

Получение эффективного компонента

Соединение формулы 2, т.е. CKD-516, растворяли в очищенной воде и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 3.

Доцетаксел растворяли в эксципиенте (эксципиент 3), который получали путем смешивания этанола, Tween 80 и физиологического раствора при соотношении 1:1:8, и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 3.

Таблица 3 Вводимое вещество Вводимая доза
(мг/кг) Количество вводимого раствора
(мл/кг) Способ введения Отрицательный контроль (вода) - 10 п/о Положительный контроль (доцетаксел) 2.5 5 и/п CKD-516 4 10 п/о CKD-516+Доцетаксел 4+2.5 10+5 п/о+и/п

Введение лекарственного средства и определение противораковой активности

Противораковый эффект CKD-516 и доцетаксела оценивали с использованием полученной животной модели. Животных разделяли на экспериментальные группы рандомизированно, как показано в таблице 3 выше.

- Носитель: Ежедневно в течение восьми недель, пероральное (п/о) введение;

- Доцетаксел: 2,5 мг/кг, один раз в неделю в течение восьми недель, интраперитонеальное введение;

- CKD-516: 4 мг/кг, ежедневно в течение восьми недель, пероральное введение; и

- CKD-516+Доцетаксел: CKD-516 (4 мг/кг, ежедневно в течение восьми недель, пероральное введение) должен вводиться первым+Доцетаксел (2,5 мг/кг, один раз в неделю в течение восьми недель, интраперитонеальное введение).

Противораковую активность определяли на основании объема опухоли. Объем опухоли получали путем измерения длинной оси и короткой оси опухоли с использованием электронных циркулей (CD-15CPX, Mitutoyo Corp., Japan) и путем расчета с использованием измеренных значений в соответствии со следующим уравнением (два раза в неделю):

Объем опухоли (мм³) = (Длина длинной оси × Длина короткой оси²) / 2.

Статистическая обработка

Для объема опухоли, статистическую обработку осуществляли с использованием программы для статистической обработки (GraphPad PRISM® Version 5.0, GraphPad Software, the U.S.).

2. Экспериментальные результаты - Противораковая активность

Объем опухоли в группе отрицательного контроля, которой вводили только эксципиент, построянно увеличивался со временем. В случае группы, которой вводили только доцетаксел в качестве положительного контрольного вещества, рост опухоли со временем уменьшался по сравнению с группой отрицательного контроля, но объем опухоли построянно увеличивался, и не было никакой существенной разницы, что касается скорости роста опухоли, по сравнению с группой отрицательного контроля. В случае группы, которой вводили только CKD-516, опухоль почти не росла. Для группы, которой вводили CKD-516 и доцетаксел вместе, было определено, что объем опухоли почти не увеличился по сравнению с ранней стадией эксперимента, но объем опухоли удивительно небольшой в конце эксперимента по сравнению с группой, которой вводили только доцетаксел или только CKD-516 (Фиг. 3). Также, было определено, что объем опухоли почти не увеличивается, но остается на определенном уровне для каждого периода эксперимента, и объем опухоли удивительно небольшой по сравнению с группой, которой вводили только доцетаксел или только CKD-516 на протяжении всех экспериментальных периодов (Фиг. 4).

Это говорит о том, что совместное введение CKD-516 и доцетаксела показывает эффект прерывания роста раковых тканей, предотвращая дальнейший рост раковых тканей, благодаря синергетическому действию между действием CKD-516, разрушающим кровеносные сосуды, и эффектом доцетаксела, приостанавливающим деление клеток.

<Пример 3> Определение синергетического эффекта между соединением формулы 2 и паклитакселом

1. Способ осуществления эксперимента

Получение животной модели

Четырехнедельных самцов бестимусных мышей Balb/c закупали у Central Lab Animal Inc.

H460 раковые клеточные линии, которые представляют собой клеточные линии рака легких человека, пролиферирующих in vitro, вводили мышам подкожно, чтобы такие клеточные линии пролиферировали in vivo. Через 20-25 дней мышей подвергали эвтаназии путем цервикальной дислокации, после чего солидный рак, пролиферировавший у мышей, стерильно выделяли для получения свежих раковых тканей, из которых удаляли соединительные ткани, некротические ткани, кожу и т.д.

Раковые ткани разделяли по 50 мг в стерильном состоянии и подкожно трансплантировали мышам с использованием троакара 16 размера. Через 12 дней после трансплантации отбирали мышей, у которых раковые ткани пролиферировали до определенного размера, и использовали их для эксперимента.

Получение эффективного компонента

Соединение формулы 2, т.е. CKD-516, растворяли в 0,9% физиологическом растворе (эксципиент 1) и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 4.

Паклитаксел растворяли в эксципиенте (эксципиент 2), который получали путем смешивания кремофора, этанола и физиологического раствора при соотношении 1:1:8, и подготавливали в соответствии с вводимой дозой для каждой группы, как показано в следующей таблице 4.

Таблица 4 Вводимое вещество Вводимая доза
(мг/кг) Количество вводимого раствора
(мл/кг) Способ введения Отрицательный контроль (эксципиент 1) - 10 и/п Положительный контроль (паклитаксел) 20 10 в/в CKD-516 2,5 10 и/п CKD-516+Паклитаксел 2,5+20 10+10 и/п+в/в

Введение лекарственного средства и определение противораковой активности

Противораковый эффект CKD-516 и паклитаксела оценивали с использованием полученной животной модели опухоли. Разделение на экспериментальные группы осуществляли, как показано в таблице 4 выше.

- Эксципиент 1: Один раз в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение;

- Паклитаксел: 20 мг/кг, один раз в неделю в течение трех недель, внутривенное введение (в/в);

- CKD-516: 2,5 мг/кг, один раз в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение; и

- CKD-516+Паклитаксел: CKD-516 (2,5 мг/кг, один раз в неделю в течение трех недель, интраперитонеальное введение) должен вводиться первым+Паклитаксел (20 мг/кг, один раз в неделю в течение трех недель, внутривенное введение) должен вводиться три дня спустя.

Противораковую активность определяли на основании объема опухоли. Объем опухоли получали путем измерения длинной оси и короткой оси опухоли с использованием электронных циркулей (CD-15CPX, Mitutoyo Corp., Japan) и путем расчета с использованием измеренных значений в соответствии со следующим уравнением (два раза в неделю):

Объем опухоли (мм³) = (Длина длинной оси × Длина короткой оси²) / 2.

Статистическая обработка

Все экспериментальные результаты представляли в виде среднего значения ± стандартное отклонение (Среднее значение ± SD), и сравнение осуществляли между каждой экспериментальной группой и контрольной группой с использованием t-критерия Стьюдента для определения эффекта в каждой экспериментальной группе.

2. Экспериментальные результаты - Противораковая активность

Объем опухоли в группе отрицательного контроля, которой вводили только эксципиент, построянно увеличивался со временем. В случае группы, которой вводили только паклитаксел в качестве положительного контрольного вещества, рост опухоли со временем уменьшался по сравнению с группой отрицательного контроля, но объем опухоли построянно увеличивался. Также, группа, которой вводили только CKD-516, также показала такую же тенденцию, как группа, которой вводили паклитаксел. Однако, для группы, которой вводили CKD-516 и паклитаксел вместе, было определено, что объем опухоли почти не увеличивается по сравнению с ранней стадией эксперимента, но объем опухоли удивительно небольшой в конце эксперимента по сравнению с группой, которой вводили только паклитаксел или только CKD-516 (Фиг. 5). Также было определено, что объем опухоли почти не увеличивается, но остается на определенном уровне на протяжении экспериментального периода (Фиг. 6).

Это говорит о том, что совместное введение CKD-516 и паклитаксела показывает эффект прерывания роста раковых тканей, предотвращая дальнейший рост раковых тканей, благодаря синергетическому действию между действием CKD-516, разрушающим кровеносные сосуды, и эффектом доцетаксела, приостанавливающим деление клеток.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к области онкологии, и предназначена для профилактики и лечения рака легких. Представлена комбинация для профилактики или лечения рака легких терапевтически эффективного количества (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида, представленного следующей формулой 2, или его фармацевтически приемлемой соли и терапевтически эффективного количества доцетаксела или его фармацевтически приемлемой соли. Также представлен способ лечения рака легких, включающий введение указанной выше комбинации и применение комбинации для получения лекарственного средства для лечения рака легких. Технический результат: представленная группа изобретений обеспечивает эффективный способ лечения рака легких. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 3 пр.

формула 2

1. Комбинация для профилактики или лечения рака легких терапевтически эффективного количества (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида, представленного следующей формулой 2, или его фармацевтически приемлемой соли; и терапевтически эффективного количества доцетаксела или его фармацевтически приемлемой соли:

[Формула 2]

.

2. Комбинация по п. 1, где фармацевтически приемлемая соль (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамида представляет собой гидрохлорид.

3. Комбинация по п. 1, где активный метаболит соединения, представленного выше формулой 2, представляет собой (4-(2-аминотиазол-4-ил)-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)фенил)(3,4,5-триметоксифенил)метанон, представленный следующей формулой 3:

[Формула 3]

4. Способ для лечения рака легких, включающий введение комбинации по п. 1 в терапевтически эффективном количестве субъекту, нуждающемуся в этом.

5. Применение комбинации по п. 1 для получения лекарственного средства для лечения рака легких.

6. Способ по п. 4, где (S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально или парентерально.

7. Способ по п. 4, где доцетаксел или его фармацевтически приемлемую соль вводят парентерально.

8. Способ по п. 4, в котором ((S)-N-(4-(3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-4-(3,4,5-триметоксибензоил)фенил)тиазол-2-ил)-2-амино-3-метилбутанамид или его фармацевтически приемлемую соль вводят от одного раза в день до одного раза в три недели.

9. Способ по п. 4, в котором доцетаксел или его фармацевтически приемлемую соль вводят от одного раза в неделю до одного раза в три недели.