СОЕДИНЕНИЕ ИМИДАЗОПИРИДАЗИНА Российский патент 2022 года по МПК C07D487/22 A61K31/5025 A61K31/519 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к соединению имидазопиридазина и его применению и, в частности, к соединению имидазопиридазина, обладающему ингибирующей активностью в отношении роста клеток, и к содержащей его фармацевтической композиции для предупреждения или лечения рака или опухоли.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Киназа опосредует реакцию переноса высокоэнергетической молекулы, в частности, фосфатной группы АТФ (англ. ATP, adenosine triphosphate - аденозинтрифосфат), на субстрат. Киназа выполнят функцию стабилизации фосфорноангидридной связи и повышения скорости реакции путем размещения субстрата и фосфатной группы в определенном положении. В большинстве случаев переходное состояние, возникающее при взаимодействии с отрицательно заряженной фосфатной группой, электростатически стабилизируется через посредство положительно заряженных соседних аминокислот, а некоторые киназы образуют координационную связь с фосфатной группой с помощью металлического кофактора.

В зависимости от субстрата и характеристик киназы можно подразделить на различные группы, такие как протеинкиназы, липидкиназы или карбогидраткиназы. Белки, жиры или углеводы могут различаться по своей активности, реакционной способности и способности связываться с другими молекулами в зависимости от статуса фосфорилирования. Киназа обладает широким спектром действия на внутриклеточную сигнальную трансдукцию и регулирует сложные биологические механизмы внутри клетки. Активность некоторых молекул усиливается или подавляется при посредстве фосфорилирования, а их способность взаимодействовать с другими молекулами можно контролировать. Поскольку многие киназы реагируют на условия окружающей среды или сигналы, клетка при посредстве киназ может управлять молекулами внутри клетки в зависимости от обстоятельств. Соответственно, киназа играет очень важную роль в росте, дифференцировке, пролиферации клеток, в клеточном выживании, метаболизме, сигнальной трансдукции, клеточном транспорте, секреции и многих других путях клеточных реакций.

Киназы были обнаружены в различных видах от бактерий до грибов, насекомых и млекопитающих, и на сегодняшний день в организме человека выявлено более 500 киназ.

Протеинкиназа повышает или понижает активность белка, стабилизирует или становится маркером расщепления белка, направляет белок в определенный клеточный компартмент либо инициирует или нарушает взаимодействия с другими белками. Известно, что протеинкиназа охватывает большую часть всех киназ и является важным предметом исследований. Вместе с фосфатазой протеинкиназа участвует в регуляции белков и ферментов, а также в процессах клеточной сигнальной трансдукции. Клеточный белок является целевым объектом для многочисленных ковалентных связей, однако поскольку существует не очень много обратимых ковалентных связей, таких как реакция фосфорилирования, фосфорилирование белков выполняет регуляторную функцию. Протеинкиназа часто имеет много субстратов, и в некоторых случаях конкретный белок может выступать в качестве субстрата для одной или более киназ. По этой причине протеинкиназу называют, используя фактор, регулирующий ее собственную активность. Например, кальмодулин-зависимая протеинкиназа регулируется кальмодулином. Иногда киназы делят на подгруппы. Например, цАМФ-зависимые (англ. AMP, adenosine monophosphate - аденозинмонофосфат) протеинкиназы первого и второго типа состоят из одинаковых ферментных субъединиц, но регулируются другими регуляторными субъединицами, связывающимися с циклическим АМФ.

Протеинкиназа является ферментом, катализирующим фосфорилирование гидроксильной группы, расположенной на тирозиновых, сериновых и треониновых остатках белка, и выполняет важную роль в трансдукции сигнала фактора роста, индуцирующего рост, дифференцировку и пролиферацию клеток (Irena Melnikova and James Golden, Nature Reviews Drug Discovery 3, 993, 2004), а аномальная экспрессия или мутация специфической киназы, как сообщалось, часто встречается в раковых клетках.

По оценкам, существует 518 видов человеческих протеинкиназ, что соответствует приблизительно 1,7% от общего числа генов человека (Manning et al., Science, 2002, 298, 1912), человеческие протеинкиназы в основном делят на тирозиновые протеинкиназы (90 видов или более) и серин/треониновые протеинкиназы. Тирозиновую протеинкиназу можно разделить на 58 видов рецепторных тирозинкиназ, которые делятся на 20 подтипов, и 32 вида цитоплазменных/нерецепторных, которые делятся на 10 подтипов, при этом тирозинкиназа (TK) относится к типу ферментов, переносящих одну фосфатную группу с АТФ к гидроксифенильной группе тирозина. Тирозинкиназы, несомненно, играют важную роль в нормальном клеточном росте, который непосредственно участвует в процессе клеточной сигнальной трансдукции.

В качестве одного из общих способов распознавания клеткой внешних стимулов известно распознавание посредством тирозинкиназы, рецептора, встроенного в клеточную мембрану. Рецепторная тирозинкиназа (RTK) состоит из внеклеточной области, экспонированной за пределы внешней поверхности клетки, внутриклеточной области, экспонированной в цитоплазму внутри клетки, и трансмембранной области, проходящей через плазматическую мембрану, расположенную посередине. Внеклеточная область рецептора является частью, с которой связывается специфический лиганд, а внутриклеточная область выполняет функцию трансдукции активных сигналов рецептора, активированного лигандом, в клетку. В рецепторной тирозинкиназе присутствует домен, обладающий тирозинкиназной активностью на C-концевом участке, экспонированном в клетке, так что при связывании специфического лиганда с внеклеточной областью активируется фермент киназа тирозинкиназного домена на C-концевом участке, экспонированном в цитоплазматическую область рецепторного белка, дуплексно фосфорилируя тирозин по C-концевому участку друг друга. Такой процесс фосфорилирования тирозина становится наиболее важным процессом трансдукции сигналов внеклеточной стимуляции в клетку. Рецепторы, обладающие тирозинкиназной активностью, трансдуцирующие внеклеточную стимуляцию в клетку по такому механизму, хорошо известны. Типичные примеры таких рецепторов могут включать SRC-1 (англ. steroid receptor - стероидный рецептор), EGFR (англ. epidermal growth factor receptor - рецептор эпидермального фактора роста), PDGFR (англ. platelet-derived growth factor receptor - рецептор тромбоцитарного фактора роста), IR (англ. intracellular receptor - внутриклеточный рецептор), IGFR (insulin-like growth factor receptor - рецептор инсулиноподобного фактора роста), ген рецептора макрофаг колоние-стимулирующего фактора (c-fms), VEGFR (англ. vascular endothelial growth factor receptor - рецептор фактора роста сосудистого эпителия), FGFR (англ. fibroblast growth factor receptor - рецептор фактора роста фибробластов) и тому подобное.

В клетке существует множество систем сигнальной трансдукции, каждая из которых органически связана друг с другом для регулирования пролиферации, роста, гибели клеток и тому подобного посредством формирования сложного механизма (William G. Kaelin Jr, Nature Reviews Cancer 5, 689, 2005). Соответственно, когда внутриклеточная регуляторная функция выходит из равновесия вследствие генетических воздействий или влияния внешней среды, усиление или ослабление аномальной сигнальной трансдукции может привести к нарушению системы сигнальной трансдукции (главным образом, состояния, при котором сигнальная трансдукция продолжается in-vivo), что вызывает различные заболевания, такие как рак, воспаление, заболевания обмена веществ или заболевания головного мозга.

Документы предшествующего уровня техники

Irena Melnikova and James Golden, Nature Reviews Drug Discovery 3, 993, 2004;

Manning et al., Science, 2002, 298, 1912;

William G. Kaelin Jr, Nature Reviews Cancer 5, 689, 2005.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая задача

Настоящее изобретение направлено на обеспечение нового соединения имидазопиридазина, обладающего высокой ингибирующей активностью в отношении роста клеток.

Настоящее изобретение также направлено на обеспечение фармацевтической композиции, содержащей соединение в качестве активного ингредиента.

Настоящее изобретение также направлено на обеспечение фармацевтической композиции, содержащей соединение в качестве активного ингредиента, для профилактики или лечения рака или опухоли.

Техническое решение

С учетом изложенного выше, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение имидазопиридазина следующей химической Формулы 1 или его оптический изомер:

Химическая Формула 1

В химической Формуле 1

R₁ представляет собой H или галоген;

L выбран из группы, состоящей из -CH=CH-, -(CH₂)p- и -(CH₂)p-O-;

p является целым числом от 1 до 3;

R₂ представляет собой связь или -(CH₂)n-, -CO-, -NR₄-(CH₂)n- или -O-(CH₂)n-;

n является целым числом от 0 до 3;

R₄ представляет собой H или C_1-6алкил;

W представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный 5-8-членный незамещенный или замещенный моноциклический гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O и S; и

R₃ выбран из группы, состоящей из H, галогена, линейного или разветвленного C_1-6алкила, линейного или разветвленного C_2-10алкенила, C_3-10циклоалкила, галоген-С_1-5алкила, гидрокси-С_1-6алкила, аминогруппы, моно- или ди-(C_1-6алкил)амино, гидрокси, C_1-6алкокси, C_3-10циклоалкил-C_1-6алкила, (моно- или ди-(C_1-6алкил)амино)гетероциклоалкила, (гидрокси-С_1-6алкил)гетероциклоалкила, гетероциклоалкила и гидроксигетероциклоалкила.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения предлагает фармацевтическую композицию и фармацевтический состав, содержащие соединение в качестве активного ингредиента.

Полезные эффекты

Соединение имидазопиридазина химической Формулы 1 в соответствии с настоящим изобретением может проявлять ингибирующую активность в отношении роста клеток, а значит, его можно использовать в качестве агента для профилактики или лечения рака или опухоли.

Способ раскрытия

Соединение имидазопиридазина следующей химической Формулы 1 или его оптический изомер:

Химическая Формула 1

В химической Формуле 1

R₁ представляет собой H или галоген;

L выбран из группы, состоящей из -CH=CH-, -(CH₂)p- и -(CH₂)p-O-;

p является целым числом от 1 до 3;

R₂ представляет собой связь или -(CH₂)n-, -CO-, -NR₄-(CH₂)n- или -O-(CH₂)n-;

n является целым числом от 0 до 3;

R₄ представляет собой H или C_1-6алкил;

W представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный 5-8-членный незамещенный или замещенный моноциклический гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O и S; и

R₃ выбран из группы, состоящей из H, галогена, линейного или разветвленного C_1-6алкила, линейного или разветвленного C_2-10алкенила, C_3-10циклоалкила, галоген-С_1-5алкила, гидрокси-С_1-6алкила, амино, моно- или ди-(C_1-6алкил)амино, гидрокси, C_1-6алкокси, C_3-10циклоалкил-C_1-6алкила, (моно- или ди-(C_1-6алкил)амино)гетероциклоалкила, (гидрокси-С_1-6алкил)гетероциклоалкила, гетероциклоалкила и гидроксигетероциклоалкила.

Представленные ниже определения представляют собой определения различных терминов, используемых для описания настоящего изобретения. Если не ограничено иное, данные определения используются во всем объеме патентного описания по отдельности либо как часть включающих их терминов.

Термин “галоген”, используемый в настоящем патентном описании, означает, если не указано иное, любой галоген из фтора, хлора, брома, йода или их всех.

Термин “алкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к насыщенному линейному или разветвленному углеводородному радикалу, который может быть описан с помощью химической формулы C_nH_2n+1, когда он имеет n атомов углерода, и, в частности, относится к насыщенному линейному или разветвленному углеводородному радикалу, каждый из которых содержит от 1 до 6, от 1 до 8, от 1 до 10 или от 1 до 20 атомов углерода. Примеры таких радикалов включают радикалы метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, неопентил, н-гексил, гептил и октил, но не ограничиваются перечнем.

Термин “алкенил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к одновалентной группе, полученной из ненасыщенного линейного или разветвленного углеводорода, содержащего по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, группа может быть описана с помощью химической формулы C_nH_2n-1, когда содержит n атомов углерода, и, в частности, относится к ненасыщенной линейной или разветвленной одновалентной группе, каждая из которых содержит от 2 до 6, от 2 до 8, от 2 до 10 или от 2 до 20 атомов углерода. Примеры таких радикалов включают радикалы этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, гептенил и октенил, но не ограничиваются перечнем.

Термин “циклоалкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к одновалентной углеродной группе, полученной из моноциклического или полициклического насыщенного или ненасыщенного карбоциклического соединения. Например, примеры C₃-C₈-циклоалкила включают, не ограничиваясь перечнем, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопентил и циклооктил; а примеры C₃-C₁₂-циклоалкила включают, не ограничиваясь перечнем, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, бицикло[2,2,1]гептил и бицикло[2,2,2]октил. Также рассматривается одновалентная группа, полученная из моноциклического или полициклического соединения, содержащего по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, полученную удалением одного атома углерода. Примеры такой группы включают, не ограничиваясь перечнем, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил, циклооктенил и тому подобное.

Термин “циклоалкилалкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к одновалентному углеводородному радикалу, в котором один или более атомов водорода алкильной группы в соответствии с определением, описанным выше, замещены циклоалкильной группой в соответствии с определением, описанным выше. Примеры C_3-10циклоалкил-C_1-6алкильных групп включают, не ограничиваясь перечнем, циклопропилметил, циклопропилэтил, циклогексилметил и тому подобное.

Термин “арил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к моно- или полициклическому углеводородному радикалу, содержащему конденсированные или неконденсированные одно или более ароматических колец и, не ограничиваясь перечнем, включает фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инденил, иденил и тому подобное.

Термин “гетероциклический радикал”, используемый в настоящем патентном описании, включает ненасыщенные, насыщенные, ароматические, алифатические группы и тому подобное, такие как содержащие гетероатом циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкинил или гетероарил.

Термин “арилалкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к радикалу, в котором один или более атомов водорода алкильной группы в соответствии с определением, описанным выше, замещены арильной группой и, не ограничиваясь перечнем, примеры арилалкила включают бензил, фенетил и тому подобное.

Термин “гетероциклоалкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к насыщенному или частично ненасыщенному 3-10-членному моно- или полициклическому заместителю, содержащему один или более гетероатомов, например, от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O и S. Примеры моноциклического гетероциклоалкила могут включать пиперидинил, морфолинил, тиаморфолинил, пирролидинил, имидазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперазинил и аналогичные им группы, но не ограничиваются перечнем.

Термин “гетероарил”, используемый в настоящем патентном описании, означает, если не указано иное, 5-12-членный моно- или полициклический ароматический одновалентный радикал, содержащий один или более гетероатомов, например, от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из O, N и S. Примеры моноциклического гетероарила могут включать тиазолил, оксазолил, тиофенил, фуранил, пирролил, имидазолил, изоксазолил, пиразолил, тиазолил, тиадиазолил, тетразолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил и аналогичные им группы, но не ограничиваются перечнем. Примеры бициклического гетероарила могут включать индолил, бензотиофенил, бензофуранил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензотиазолил, хинолинилизохинолинил, фуринил, фуропиридинил и аналогичные им группы, но не ограничиваются перечнем.

Термин “гетероарилалкил”, используемый в настоящем патентном описании, если не указано иное, относится к радикалу, в котором один или более атомов водорода алкильной группы в соответствии с определением, описанным выше, замещены гетероарильной группой и, не ограничиваясь перечнем, примеры гетероарилалкила включают пиридинилметил, пиримидинилэтил и тому подобное.

В настоящем описании выражение, содержащее количество атомов углерода перед названием функциональной группы, например, C_6-12 в C_6-12арил, показывает, что соответствующая функциональная группа (арил) содержит указанное число (от 6 до 12) атомов углерода. Такое выражение, содержащее количество атомов углерода, может также использоваться для представления сложной функциональной группы, полученной путем связывания с несколькими функциональными группами, например, C_6-12арил-C_1-6алкил означает, что один атом водорода алкильной группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, замещен C_6-12арилом.

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно.

Настоящее изобретение относится к соединению имидазопиридазина и, в частности, к соединению имидазопиридазина, обладающему ингибирующей активностью в отношении роста клеток.

В частности, настоящее изобретение предлагает соединение имидазопиридазина следующей химической Формулы 1 или его оптический изомер.

Химическая Формула 1

В химической Формуле 1

R₁ представляет собой H или галоген;

L выбран из группы, состоящей из -CH=CH-, -(CH₂)p- и -(CH₂)p-O-;

p является целым числом от 1 до 3;

R₂ представляет собой связь или -(CH₂)n-, -CO-, -NR₄-(CH₂)n- или -O-(CH₂)n-;

n является целым числом от 0 до 3;

R₄ представляет собой H или C_1-6алкил;

W представляет собой насыщенный или частично ненасыщенный 5-8-членный незамещенный или замещенный моноциклический гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O и S; и

R₃ выбран из группы, состоящей из H, галогена, линейного или разветвленного C_1-6алкила, линейного или разветвленного C_2-10алкенила, C_3-10циклоалкила, галоген-С_1-5алкила, гидрокси-С_1-6алкила, амино, моно- или ди-(C_1-6алкил)амино, гидрокси, C_1-6алкокси, C_3-10циклоалкил-C_1-6алкила, (моно- или ди-(C_1-6алкил)амино)гетероциклоалкила, (гидрокси-С_1-6алкил)гетероциклоалкила, гетероциклоалкила и гидроксигетероциклоалкила.

Согласно одному из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, L может представлять собой -CH=CH- или -(CH₂)₂-.

Согласно одному из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, R₁ может представлять собой H или галоген.

Согласно одному из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, R₂ в химической Формуле 1 может представлять собой -O-(CH₂)n-, а n может быть равен 0, 1 или 2.

Согласно одному из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, W может представлять собой пиперидинил, пиперазинил, имидазолил, пирролидинил или морфолин, незамещенный или замещенный одинаковыми или разными заместителями одного или более типов, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, линейного или разветвленного C_1-6алкила, C_3-10циклоалкила, галоген-С_1-5алкила, гидрокси-С_1-6алкила, амино, моно- или ди-C_1-6алкиламино, оксо, гидрокси, C_1-6алкокси и сульфонила, не ограничиваясь перечнем.

Согласно одному из конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, соединение химической Формулы 1 может представлять собой 1-(2-(((1⁵Z,5Z)-2⁵-фтор-3-аза-1(3,6)-имидазо[1,2-b]пиридазин-2(4,2)пиримидин-4(1,3)-бензолциклогексапан-5-ен-4⁵-ил)окси)этил)пиперидин-4-олом, но не ограничивается этим.

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры получения и примеры, однако все они предназначены исключительно для иллюстративных целей и не ограничивают объем настоящего изобретения.

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Пример 1

1-(2-(((1⁵Z,5Z)-2⁵-фтор-3-аза-1(3,6)-имидазо[1,2-b]пиридазин-2(4,2)пиримидин-4(1,3)-бензолциклогексапан-5-ен-4⁵-ил)окси)этил)пиперидин-4-ол

Стадия 1)

Получение 2-амино-3-бром-5-нитофенола

2-Амино-5-нитофенол (25 г, 162 ммоль) растворяли в ацетонитриле (1,0 л) и медленно добавляли к нему N-бромсукцинимид (28,8 г, 170 ммоль). Полученную реакционную массу перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре, после чего удаляли растворитель в вакууме. Остаток размешивали в смеси этилацетат/гексан (1:1), полученный осадок отфильтровывали и получали целевое соединение (31,5 г, 83%).

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ 10,66 (с, 1H), 7,83 (с, 1H), 7,46 (с, 1H), 6,15 (с, 2H).

Стадия 2)

Получение 3-бром-5-нитофенола

2-Амино-3-бром-5-нитофенол (75,6 г, 0,32 ммоль), приготовленный на стадии 1), растворяли в этаноле (1,5 л), и смесь охлаждали до температуры -10°C. В смесь добавляли серную кислоту (62,3 мл, 1,17 ммоль) в течение 30 минут при температуре от -10°C до -2°C. Температура реакционной смеси повышалась до 50°C - 55°C, и в нее медленно в течение 30 минут добавляли нитрит натрия. Температура реакционной смеси повышалась до 80°C, после чего полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 часов. После завершения реакции удаляли в вакууме растворитель, и в остаток добавляли воду и этилацетат. Органический слой трижды экстрагировали и промывали соленой водой. Экстракт сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (этилацетат:гексан=0,5:10 (об/об)) и получали целевое соединение (60 г, выход 85%).

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ 10,90 (с, 1H), 7,75 (с, 1H), 7,51 (с, 1H), 7,36 (с, 1H).

Стадия 3)

Получение 3-нитро-5-винилфенола

3-Бром-5-нитофенол (5 г, 22,93 ммоль), приготовленный на стадии 2), винилтрифторборат калия (9 г, 68,80 ммоль), Pd(dppf)Cl₂-CH₂Cl₂ (1,8 г, 2,29 ммоль) и триэтиламин (9,5 мл, 68,80 ммоль) растворяли в смеси пропанол-2/ТГФ(англ. THF, tetrahydrofuran - тетрагидрофуран) (5:1, 60 мл), и реакционную смесь продували азотом. Реакционную смесь герметизировали и после повышения температуры до 100°C перемешивали при кипении с обратным холодильником в течение 12 часов. После завершения реакции реакционную массу охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через фильтр, заполненный целитом, и промывали этилацетатом. Органический слой отделяли, промывали соленой водой и сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли в вакууме, остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (этилацетат:гексан=1:10 (об./об.)) и получали целевое соединение (3,27 г, 43%).

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 7,84 (с, 1H), 7,57 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 6,64 (дд, 1H), 5,82 (д, 1H), 5,41 (д, 1H).

Стадия 4)

Получение 1-(2-(3-нитро-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ола

3-Нитро-5-винилфенол (15 г, 83,71 ммоль), приготовленный на стадии 3), и 1,2-дибромэтан (8,6 мл, 100,46 ммоль) растворяли в ацетонитриле (150 мл) и добавляли Cs₂CO₃ (40,9 г, 125,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 12 часов при комнатной температуре. После завершения реакции в реакционную массу добавляли воду и этилацетат. Органический слой отделяли, промывали соленой водой, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в ДМФА (англ. DMF, dimethyl formamide - диметилформамид) (150 мл) и добавляли 4-гидроксипиперидин (16,9 г, 167,4 ммоль) и карбонат калия (23,1 г, 167,4 ммоль). После повышения температуры до 90°C реакционную массу перемешивали в течение 2 часов. По завершении реакции в реакционную массу добавляли воду и этилацетат. Органический слой отделяли, дважды промывали водой, промывали соленой водой, затем сушили над безводным сульфатом натрия, после чего удаляли растворитель в вакууме. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (дихлорметан:метанол=10:1 (об./об.)) и получали целевое соединение (15 г, выход 58%).

Стадия 5)

Получение 1-(2-(3-амино-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ола

50% этанола прибавляли к железу (Fe порошок, 1,59 г, 28,4 ммоль), и после медленного добавления в смесь концентрированной соляной кислоты (конц. HCl, 0,24 мл, 0,27 ммоль) полученную реакционную массу кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа при температуре 120°C для активации. В активированную смесь железа добавляли 1-(2-(3-нитро-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ол (1,66 г, 5,68 ммоль), приготовленный на стадии 4), после чего реакционную массу кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа при температуре 120°C. После завершения реакции реакционную массу фильтровали через фильтр, заполненный целитом, и к фильтрату прибавляли смесь хлороформ/пропанол-2 (4:1) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Органический слой отделяли, промывали соленой водой, сушили над безводным сульфатом натрия, концентрировали в вакууме и получали целевое соединение (1,2 г, выход 81%).

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,61~6,52 (м, 1H), 6,39 (с, 1H), 6,34 (с, 1H), 6,17~6,16 (м, 1H), 5,69~5,63 (м, 1H), 5,21~5,17 (м, 1H), 4,08~4,04 (т, 2H), 3,71~3,65 (м, 3H), 2,88~2,83 (м, 2H), 2,80~2,76 (т, 2H), 2,31~2,24 (м, 2), 1,93~1,87 (м, 2H), 1,66~1,58 (м, 3H).

Стадия 6)

Получение (E)-4-(2-бутоксивинил)-2-хлор-5-фторпиримидина

2,4-Дихлорпиримидин (25 г, 149,7 ммоль) добавляли в ПЭГ400 (англ. PEG, polyethyleneglycol - полиэтиленгликоль) (150 мл), и к смеси прибавляли триэтиламин (22 мл, 157,2 ммоль), бутилвиниловый эфир (20,4 мл, 157,2 ммоль) и ацетат палладия (2,36 г, 10,48 ммоль). Реакционную массу перемешивали в течение 2 часов при температуре 80°C. После завершения реакции реакционную массу охлаждали до температуры 0°C, добавляли в нее диэтиловый эфир. Органический слой отделяли, трижды промывали водой, промывали соленой водой, сушили над безводным сульфатом магния, после чего удаляли растворитель в вакууме. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (н-гексан:этилацетат=20:1 (об./об.)) и получали целевое соединение (13,7 г, выход 40%).

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 8,20 (м, 1H), 8,00~7,96 (д, 1H), 5,91~5,87 (д, 1H), 4,02~3,98 (т, 2H), 1,77~1,70 (м, 2H), 1,50~1,40 (м, 1H), 0,98~0,93 (т, 3H).

Стадия 7)

Получение 6-хлор-3-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)имидазо[1,2-b]пиридазина

(E)-4-(2-бутоксивинил)-2-хлор-5-фторпиримидин (2 г, 8,67 ммоль), приготовленный на стадии 6), растворяли в смеси 1,4-диоксан/дистиллированная вода (3:1, 40 мл) и добавляли N-бромсукцинимид (1,54 г, 8,67 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После добавления 3-амино-6-хлорпиридазина (1,12 г, 8,67 ммоль) реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов после повышения температуры до 85°C. По завершении реакции полученную смесь охлаждали до комнатной температуры, нейтрализовали (до pH=7) добавлением насыщенного раствора бикарбоната натрия и перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Полученный осадок отфильтровывали, сушили и получали целевое соединение (1,3 г, выход 53%).

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,03 (м, 1H), 8,47 (м, 1H), 8,45~8,41 (д, 1H), 7,66~7,63 (д, 1H).

Стадия 8)

Получение 1-(2-(3-((4-(6-хлоримидазо[1,2-b]пиридазин-3-ил)-5-фторпиримидин-2-ил)амино)-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ола

1-(2-(3-Амино-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ол (260 мг, 0,99 ммоль) и 6-хлор-3-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)имидазо[1,2-b]пиридазин (282 мг, 0,99 моль), приготовленные на стадиях 5) и 7), соответственно, растворяли в 2-бутаноле и добавляли п-толуолсульфокислоту (p-TsOH; 189 мг, 0,99 моль). Реакционную смесь кипятилис обратным холодильником в течение 17 часов при температуре 120°C. После завершения реакции полученную смесь охлаждали до комнатной температуры. и добавляли смесь хлороформ/пропанол-2 (4:1) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Органический слой отделяли, промывали соленой водой, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (CHCl₃:MeOH=10:1 (об./об.)) и получали целевое соединение (185 мг, выход 37%).

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 8,46 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 8,07~8,04 (д, 1H), 7,40 (м, 1H), 7,29~7,21 (м, 3H), 6,73~6,63 (м, 2H), 5,76~5,70 (д, 1H), 5,27~5,24 (д, 1H), 4,16~4,12 (м, 2H), 3,77~3,72 (м, 1H), 2,90~2,81 (м, 3H), 2,35~2,28 (м, 2H), 1,95~1,90 (м, 2H), 1,69~1,65 (м, 3H).

Стадия 9)

Получение 1-(2-(((1⁵Z,5Z)-2⁵-фтор-3-аза-1(3,6)-имидазо[1,2-b]пиридазин-2(4,2)пиримидин-4(1,3)-бензолциклогексапан-5-ен-4⁵-ил)окси)этил)пиперидин-4-ола

1-(2-(3-((4-(6-Хлоримидазо[1,2-b]пиридазин-3-ил)-5-фторпиримидин-2-ил)амино)-5-винилфенокси)этил)пиперидин-4-ол (55 мг, 0,108 ммоль), приготовленный на стадии 8), растворяли в ПЭГ400 (2 мл) и добавляли триэтиламин (16 мкл, 0,113 ммоль) и ацетат палладия (2 мг, 0,008 ммоль). Реакционную массу перемешивали в течение 4 часов при температуре 85°C. После завершения реакции реакционную массу охлаждали до комнатной температуры, добавляли в нее воду, и полученную смесь трижды экстрагировали этилацетатом. Органический слой отделяли, промывали соленой водой, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали при помощи колоночной хроматографии (CHCl₃:MeOH=10:1 (об./об.)) и получали целевое соединение (12 мг, выход 24%).

MS: [M+H]⁺ m/z 473,2;

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ11,14 (уш.с, 1H), 9,86 (с, 1H), 8,63~8,61 (д, 1H), 8,50~8,49 (д, 1H), 8,31~8,28 (м, 1H), 7,62~7,59 (м, 1H), 6,95~6,90 (м, 1H), 6,75~6,60 (м, 3H), 4,60 (м, 1H), 4,05~4,01 (м, 2H), 2,79~2,71 (м, 2H), 2,67~2,63 (т, 2H), 2,15~2,07 (м, 2H), 1,71~1,67 (м, 2H), 1,39~1,35 (м, 3H).

Тестовый пример

Для соединений, приготовленных согласно примеру, результаты ингибирующей активности в отношении роста клеток были получены следующим образом.

Тестовый пример 1: оценочное испытание для клеточной линии SK-CO-1

Клеточную линию SK-CO-1, приобретенную в Американской коллекции типовых культур (англ. ATCC, США), культивировали при температуре 30°C в среде EMEM (англ. Eagle's minimal essential medium - минимальная эссенциальная среда Игла) (содержащей 10% FBS (англ. Fetal bovine serum - фетальная бычья сыворотка), 1% пенициллина/стрептомицина) в присутствии 5% CO₂. Культивируемую клеточную линию SK-CO-1 готовили в 5x10⁴/100 мкл, помещали в 96-луночный планшет и культивировали в течение дня. После этого испытываемое соединение ступенчато разводили в соотношении 1/10 до концентраций от 10 мкМ до 0,1 нМ , используя ту же среду EMEM, и затем культивировали в течение 3 дней. Для измерения жизнеспособности клетки использовали колориметрический анализ с помощью сульфородамина-B (англ. SRB, Sigma Cat. S1402). После удаления среды в каждую лунку добавляли по 0,1 мл 10% трихлоруксусной кислоты (TCA, Sigma Cat. T0699), и клеточную линию фиксировали в течение от 30 минут до 1 часа, затем промывали дистиллированной водой и оставляли на воздухе для сушки планшета. После этого в каждую лунку добавляли по 100 мкл 0,4% раствора SRB, и клеточную линию окрашивали в течение 30 минут при комнатной температуре, после чего планшет промывали дистиллированной водой и 1% уксусной кислотой и сушили на воздухе. В каждую лунку вводили по 150 мкл 10 нМ основного раствора Trizma, и после растворения в нем SRB измеряли оптическую плотность при 540 нм с помощью микропланшетного ридера. Показатель ингибирования роста (GI₅₀) клеточной линии вычисляли с помощью программного обеспечения GraphPad Prism. Результаты представлены в следующей Таблице 1.

Таблица 1

Ингибирующая клеточный рост активность соединения имидазопиридазина

Соединение GI₅₀, нМ Пример 1 21

Как показано в Таблице 1, было отмечено, что соединение по настоящему изобретению обладает достаточно высокой ингибирующей активностью в отношении роста клеток.

Выше настоящее изобретение было описано со ссылкой на примеры, однако следует понимать, что эти примеры предназначены исключительно для иллюстративных целей и, согласно настоящему изобретению, различные модификации, а также другие эквивалентные примеры, очевидные для специалистов в данной области, могут быть осуществлены в рамках прилагаемой формулы изобретения.

Настоящее изобретение относится к соединению имидазопиридазина и его применению, в частности, к соединению имидазопиридазина, обладающему ингибирующей активностью в отношении роста клеток, и к содержащей его фармацевтической композиции для предупреждения или лечения рака или опухоли.

Настоящее изобретение относится к соединению имидазопиридазина химической Формулы 1, где в химической Формуле 1: R₁ представляет собой галоген, L представляет собой -CH=CH-, R₂ представляет собой -O-(CH₂)n-, n является целым числом от 1 до 3, W представляет собой насыщенный 6-членный незамещенный или замещенный гидроксигруппой моноциклический гетероциклоалкил, содержащий 1 атом N, и R₃ представляет собой H или гидрокси. Также предложена фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении роста клеток SK-CO-1, содержащая соединение химической Формулы 1 в качестве активного ингредиента. Предложенное соединение имидазопиридазина обладает высокой ингибирующей активностью в отношении роста клеток и, таким образом, может с успехом применяться в качестве профилактического или терапевтического средства против рака или опухоли. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

Химическая Формула 1

1. Соединение имидазопиридазина следующей химической Формулы 1:

Химическая Формула 1

,

где в химической Формуле 1

R₁ представляет собой галоген;

L представляет собой -CH=CH-;

R₂ представляет собой -O-(CH₂)n-;

n является целым числом от 1 до 3;

W представляет собой насыщенный 6-членный незамещенный или замещенный гидроксигруппой моноциклический гетероциклоалкил, содержащий 1 атом N; и

R₃ представляет собой H или гидрокси.

2. Соединение по п. 1, где R₂ представляет собой -O-(CH₂)n-, а n равно 1 или 2.

3. Соединение по п. 1, где W представляет собой пиперидинильную группу.

4. Соединение по п. 1, где соединение химической Формулы 1 представляет собой 1-(2-(((1⁵Z,5Z)-2⁵-фтор-3-аза-1(3,6)-имидазо[1,2-b]пиридазин-2(4,2)пиримидин-4(1,3)-бензолциклогексапан-5-ен-4⁵-ил)окси)этил)пиперидин-4-ол.

5. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении роста клеток SK-CO-1, содержащая соединение по любому из пп. с 1 по 4 в качестве активного ингредиента.