КОМБИНАЦИИ ИНГИБИТОРОВ LSD1 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2022 года по МПК A61K31/135 A61K31/00 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к комбинациям ингибиторов LSD1, прежде всего ORY-1001, с другими противораковыми агентами. Комбинации являются особенно ценными для лечения гематологических злокачественных заболеваний.

Предпосылки создания изобретения

Аберрантная генная экспрессия в пораженной ткани по сравнению со здоровой тканью является общей характеристикой многих заболеваний человека, включая рак. Схемы генной экспрессии контролируются на нескольких уровнях в клетке. Контроль генной экспрессии может происходить посредством модификаций ДНК: метилирование промотора ДНК ассоциировано с подавлением генной экспрессии. Несколько ингибиторов метилирования ДНК одобрены для клинического применения, включая наиболее популярный из них Vidaza™. Другой класс модификаций включает гистоны, которые формируют белковый каркас, с которым ДНК в норме ассоциирована (свернута спиралью вокруг) в эукариотических клетках. Гистоны играют решающую роль в организации ДНК, и регуляция скручивания и раскручивания ДНК вокруг гистонов играет решающую роль для контроля генной экспрессии - спиральная молекула ДНК, как правило, является непригодной для транскрипции гена. Обнаружено несколько модификаций гистонов, включая ацетилирование гистонов, метилирование лизина гистонов, метилирование аргинина гистонов, убиквитинилирование гистонов и сумоилирование гистонов, многие из которых модифицируют доступность к ассоциированной ДНК с помощью имеющегося в клетках механизма транскрипции. Эти варианты гистонов, представляющие собой молекулярные метки (гистоновые метки), служат для рекрутинга различных белковых комплексов, участвующих в транскрипции и подавлении. В постоянно возрастающем количестве исследований описана сложная картина того, как различные комбинации гистоновых меток контролируют генную экспрессию специфическим для типа клеток образом, и для обозначения этой концепции предложен новый термин: гистоновый код.

Прототипической гистоновой меткой является ацетилирование гистонов. Гистонацетилтрансфераза и деацетилазы гистонов представляют собой каталитические «аппараты», участвующие в модуляции указанного гистонового маркера, хотя, как правило, эти ферменты являются частями мультибелковых комплексов, которые содержат другие белки, участвующие в считывании и модификации гистоновых меток. Компоненты указанных белковых комплексов, как правило, являются специфическими для типа клеток и, как правило, содержат регуляторы транскрипции, репрессоры, корепрессоры, рецепторы, ассоциированные с модуляцией генной экспрессии (например, эстрогеновый или андрогеновый рецептор). Ингибиторы деацетилазы гистонов изменяют профиль ацетилирования гистонов хроматина. Таким образом, установлено, что ингибиторы деацетилазы гистонов типа вориностата (SAHA), трихостатина А (TSA) и многие другие изменяют генную экспрессию на различных моделях in vitro и животных моделях in vivo. В клинических условиях продемонстрировано, что ингибиторы деацетилазы гистонов обладают активностью в отношении регулирования рака, и они проходят исследование для онкологических показаний, а также неврологических состояний и других заболеваний.

Другой модификацией, которая участвует в регуляции генной экспрессии, является метилирование гистонов, включая метилирование лизина и аргинина. В настоящее время установлено, что статус метилирования лизинов гистонов является важным для динамического регулирования генной экспрессии.

Группа ферментов, известных как метилтрансферазы лизина гистонов и деметилазы лизина гистонов, участвуют в модификациях лизина гистонов. Один конкретный фермент, такой как деметилаза лизина гистонов человека, обозначенный как лизинспецифическая деметилаза-1 (LSD1), как описано в настоящее время¹, участвует в этой имеющей решающее значение модификации гистонов. LSD1 характеризуется высокой степенью структурного сходства и идентичностью/гомологией аминокислот с полиаминоксидазами и моноаминоксидазами, которые все (т.е. МАО-А, МАО-В и LSD1) представляют собой флавинзависимые аминоксидазы, катализирующие окисление азот-водородных связей или/или азот-углеродных связей. Установлено, что LSD1 является представляющей интерес мишенью для разработки новых лекарственных средств, предназначенных для лечения рака, неврологических заболеваний и других состояний.

Известно, что циклопропиламинсодержащие соединения ингибируют ряд важных с медицинской точки зрения мишеней, включая аминоксидазы типа моноаминоксидазы А (МАО-А; или МАОА), моноаминоксидазы В (МАО-В; или МАОВ), и лизинспецифической деметилазы-1 (LSD1). Известно, что транилципромин (известный также как 2-фенилциклопропиламин), который является действующим веществом Parnate® и одним из наиболее хорошо изученных примеров циклопропиламина, ингибирует все указанные ферменты. Поскольку ингибирование МАО-А может обусловливать нежелательные побочные действия, существует необходимость в идентификации производных циклопропиламина, которые обладают выраженной ингибирующей активностью в отношении LSD1, но при этом у них отсутствует или они обладают в значительной степени пониженной способностью ингибировать МАО-А.

В связи с отсутствием отвечающих всем требованиям методов лечения состояний, таких как рак, существует огромная потребность в модифицирующих заболевание лекарственных средствах и лекарственных средствах, механизм действия которых состоит в ингибировании новых мишеней. Таким образом, существует необходимость в улучшенных методах и композициях, которые можно применять для лечения гиперпролиферативных заболеваний, прежде всего гематологических злокачественных заболеваний.

В международной заявке на патент WO 2013/057322² описан ряд ингибиторов LSD1, включая соединение формулы (I):

которое обозначают также ORY-1001 или (транс)-N1-((1R,2S)-2-фенилциклопропил)циклогексан-1,4-диамин.

Краткое изложение сущности изобретения

Изобретение основано по меньшей мере частично, на открытии того, что аддитивное или синергетическое действия в отношении ингибирования роста раковых клеток можно получать путем введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в комбинации с некоторыми другими конкретными агентами. Комбинация и способы могут быть ценными при лечении гиперпролиферативных нарушений, прежде всего гематологических злокачественных заболеваний.

Настоящее изобретение относится к комбинациям ингибиторов LSD1, в частности, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли

с одним или несколькими терапевтическими агентами, выбранными из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей.

Таким образом, в настоящем изобретении предложена комбинация, содержащая соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей.

Другим объектом настоящего изобретения является комбинация, содержащая соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначенная для применения при лечении гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, включая миелоидные гематологические злокачественные заболевания и лимфоидные гематологические злокачественные заболевания, например, описанные более подробно ниже.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, у пациента, который нуждается в этом, включающий введение указанному пациенту в терапевтически эффективном количестве соединения формулы (I):

или его фармацевтически приемлемой соли, и одного или нескольких терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, у пациента, который нуждается в этом, включающий введение указанному пациенту в терапевтически эффективном количестве комбинации, которая содержит соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, у пациента, который нуждается в этом, включающий введение указанному пациенту фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, которая содержит соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль, и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, состоящей из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Краткое описание чертежей

На чертежах показано:

на фиг. 1 - структура планшетов для анализов на матрице 9×9, которые применяли в примерах 1 и 2;

на фиг. 2 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации (combo) ORY-1001/ATRA с использованием клеток MV(4;11) (фиг. А) и MOLM-13 (фиг. 2Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.2.1;

на фиг. 3 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/ARA-C с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 3А), OCI-AML3 (фиг. 3Б) и MOLM-13 (фиг. 3В), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.3.1;

на фиг. 4 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/EPZ5676 с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 4А) и MOLM-13 (фиг. 4Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.4.1;

на фиг. 5 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/ SAHA с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 5А) и MOLM-13 (фиг. 5Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.6.1;

на фиг. 6 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/росилиностат с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 6А), OCI-AML3 (фиг. 6Б) и MOLM-13 (фиг. 6В), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.7.1;

на фиг. 7 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/азацитидин с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 7А) и MOLM-13 (фиг. 7Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.9.1;

на фиг. 8 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/децитабин с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 8А) и MOLM-13 (фиг. 8Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.10.1;

на фиг. 9 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/квизартиниб с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 9А) и MOLM-13 (фиг. 9Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.11.1;

на фиг. 10 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/ABT737 с использованием клеток MV(4;11) (фиг. 10А) и MOLM-13 (фиг. 10Б), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.12.1;

на фиг. 11 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/нутлин3А с использованием клеток MOLM-13, согласно процедуре, описанной в примере 1.2.13.1;

на фиг. 12 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/дасатиниб с использованием клеток MV(4;11), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.14;

на фиг. 13 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/JQ1 с использованием клеток MV(4;11), согласно процедуре, описанной в примере 1.2.15;

на фиг. 14 - кривая доза-ответ для клеток MV(4;11), обработанных гидроксимочевиной (HU) в комбинации с ORY-1001, согласно процедуре, описанной в примере 1.2.16;

на фиг. 15 - кривая доза-ответ для клеток MV(4;11), обработанных As₂O₃ (мышьяк) в комбинации с ORY-1001, согласно процедуре, описанной в примере 1.2.17;

на фиг. 16 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/ARA-C с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.2;

на фиг. 17 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/SAHA с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.3;

на фиг. 18 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/росилиностат с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.4;

на фиг. 19 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/энтиностат с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.5;

на фиг. 20 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/азацитидин с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.6;

на фиг. 21 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY-1001/децитабин с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.7;

на фиг. 22 - коэффициенты совместного действия, рассчитанные для комбинации ORY1001/ABT737 с использованием клеток MOLT-4, согласно процедуре, описанной в примере 2.2.8.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение основано на открытии того, что соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и другие терапевтические агенты, указанные в настоящем описании, можно применять в комбинации для лечения гематологических злокачественных заболеваний с получением результатов, превышающих те, которые достигаются при лечении только соединением формулы (I) или только другим терапевтическим агентом.

Более конкретно, в настоящем изобретении предложена комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из аналога ретиноевой кислоты, нуклеозидного аналога, ингибитора DOT1L, ингибитора HDAC, деметилирующего агента, ингибитора FLT3, ингибитора BCL2, ингибитора MDM2, ингибитора c-KIT, ингибитора BET, антрациклина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей.

Другим объектом настоящего изобретения является комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из аналога ретиноевой кислоты, нуклеозидного аналога, ингибитора DOT1L, ингибитора HDAC, деметилирующего агента, ингибитора FLT3, ингибитора BCL2, ингибитора MDM2, ингибитора c-KIT, ингибитора BET, антрациклина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначенная для применения в качестве терапевтически активной субстанции.

Другим объектом настоящего изобретения является комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначенная для применения при лечении гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, включающей введение в терапевтически эффективном количестве соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и в терапевтически эффективном количестве одного или нескольких терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, включающей введение указанному пациенту в терапевтически эффективном количестве комбинации, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является применение комбинации, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из аналога ретиноевой кислоты, нуклеозидного аналога, ингибитора DOT1L, ингибитора HDAC, деметилирующего агента, ингибитора FLT3, ингибитора BCL2, ингибитора MDM2, ингибитора c-KIT, ингибитора BET, антрациклина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для лечения гематологических злокачественных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Следующим объектом настоящего изобретения является применение комбинации, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из аналога ретиноевой кислоты, нуклеозидного аналога, ингибитора DOT1L, ингибитора HDAC, деметилирующего агента, ингибитора FLT3, ингибитора BCL2, ингибитора MDM2, ингибитора c-KIT, ингибитора BET, антрациклина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения гематологических злокачественных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, включающей введение указанному пациенту комбинации, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Следующим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов c-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

ORY-1001:

Соединение формулы (I)

[рег. № CAS 1431304-21-0], известное также как ORY-1001 или (транс)-N1-((1R,2S)-2-фенилциклопропил)циклогексан-1,4-диамин, описано, например, в примере 5 международной заявки на патент WO 2013/057322². В ней описаны также его фармацевтически приемлемые соли, включая соли соляной кислоты [рег. № CAS 431303-72-8, дигидрохлорид]. Наиболее предпочтительной фармацевтически приемлемой солью является дигидрохлорид. Соединение формулы (I) является селективным ингибитором LSD1.

Аналоги ретиноевой кислоты:

Третиноин [рег. № CAS 302-79-4], известный также и обозначенный как полностью транс-ретиноевая кислота, описан, например, в US Patent US 2709712³ или в перечне рекомендованных INN⁴. Третиноин вызывает дифференцировку незрелых промиелоцитов. ATRA представляет собой один из существующих в настоящее время стандартов лечения острого лейкоза.

Описанные в литературе производные ATRA, обладающие противораковой, прежде всего антилейкозной активностью, можно применять также в комбинациях, предлагаемых в изобретении.

Нуклеозидные аналоги:

Нуклеозидные аналоги представляют собой нуклеозиды, которые содержат аналог нуклеиновой кислоты и сахар, и их применяют в качестве терапевтических лекарственных средств против широко спектра нарушений, включая те, которые нашли применение в химиотерапии. Предпочтительным для применения в комбинациях, предлагаемых в изобретении, нуклеозидным аналогом является цитарабин.

Цитарабин [рег. № CAS 147-94-4], известный также и обозначенный как ARA-C или арабинофуранозилцитидин, описан, например, в Chu M.Y. и др.⁵ или в перечне рекомендованных INN 6⁶. Цитарабин быстро превращается в цитозинарабинозидтрифосфат, которые повреждает ДНК, когда клеточный цикл находится на S-фазе в процессе синтеза ДНК. ARA-C представляет собой один из существующих в настоящее время стандартов лечения острого лейкоза, как правило, в сочетании с антрациклином, таким как даунорубицин

Другие нуклеозидные аналоги, которые можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении, включают (но не ограничиваясь только ими) сапацитабин, клофарабин, элацитарабин, флударабин, цитарабина окфосфат, гемцитабин, 2-хлор-2-дезоксиаденозин (известный также как 2-CDA), троксацитабин, фородезин и неларабин.

Ингибиторы DOT1L:

DOT1L представляет собой метилтрансферазу гистонов, которая, как установлено, принимает участие в лейкозе, прежде всего определенных подтипов AML и ALL, ингибиторы DOT1L исследуются в качестве агентов для лечения лейкоза. Любой известный ингибитор DOT1L можно в принципе применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Примеры ингибиторов DOT1L, которые можно применять, включают (но не ограничиваясь только ими) пинометостат, EPZ-004777 и SGC-0946. Предпочтительным ингибитором DOT1L для применения в комбинациях, предлагаемых в изобретении, является пинометостат.

Пинометостат [рег. №CAS 1380288-87-8], известный также и обозначенный как EPZ-5676, описан, например, в международной заявке на патент WO 2012075381⁷ или в перечне предложенных INN 112⁸. Пинометостат является ингибитором DOT1L.

EPZ-004777 [рег. № CAS 1338466-77-5], известный также как 7-[5-дезокси-5-[[3-[[[[4-(1,1-диметилэтил)фенил]амино]карбонил]амино]пропил](1-метилэтил)амино]-β-D-рибофуранозил]-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амин, описан, например, у Daigle S.R. и др.⁹. EPZ-004777 является ингибитором DOT1L.

SGC0496 (рег. № CAS 1561178-17-3) представляет собой 1-[3-[[[(2R,3S,4R,5R)-5-(4-амино-5-бром-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-3,4-дигидрокситетрагидрофуран-2-ил]метил](изопропил)амино]пропил]-3-[4-(2,2-диметилэтил)фенил]мочевину, и это соединение описано, например, у Yu и др.¹⁰. SGC0496 имеет следующую химическую структуру:

Ингибиторы HDAC

Ингибиторы деацетилазы гистонов (HDAC) представляют собой класс соединений, которые воздействуют на функцию деацетилазы гистонов, они одобрены или проходят клинические испытания для лечения нескольких видов рака. Любой известный ингибитор HDAC можно в принципе применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Предпочтительными ингибиторами HDAC для применения в комбинациях, предлагаемых в изобретении, являются белиностат, панобиностат, вориностат, риколиностат, энтиностат, моцетиностат, абексиностат, ресминостат, гивиностат или квизиностат.

Вориностат [рег. №CAS 149647-78-9], известный также и обозначенный как SAHA или суберанилогидроксамовая кислота, описан, например в международной заявке на патент WO 9307148¹¹ или в перечне рекомендованных INN 56¹². Вориностат является ингибитором деацетилазы гистонов (HDAC).

Риколиностат [рег. № CAS 1316214-52-4], известный также как росилиностат и обозначенный ACY-1215, описан, например, в международной заявке на патент WO 2011091213¹³ или в перечне рекомендованных INN 71¹⁴. Риколиностат является ингибитором деацетилазы гистонов (HDAC).

Энтиностат [рег. № CAS 209783-80-2], известный также как SNDX-275, описан в японской заявке на JP 10152462¹⁵ или в перечне рекомендованных INN 61¹⁶. Энтиностат является ингибитором деацетилазы гистонов (HDAC).

Белиностат (рег. №866323-14-0), известный также как (22Е)-N-гидрокси-3-[3-(фенилсульфамоил)фенил]проп-2-енамид, описан в WO 2009/040517¹⁷. Соединение имеет следующую химическую структуру:

Панобиностат (рег. № CAS 404950-80-7), известный также как (2E)-N-гидрокси-3-[4-({[2-(2-метил-1Н-индол-3-ил)этил]амино}метил)фенил]акриламид, описан в WO 02/022577¹⁸. Соединение имеет следующую химическую структуру:

Деметилирующие агенты

Агенты, известные также в качестве гипометилирующих агентов, представляют собой лекарственные средства, ингибирующие метилирование ДНК, прежде всего путем блокады активности ДНК-метилтрансферазы (ингибиторы DNMT). В настоящее время два представителя этого класса (децитабин и азацитидин) одобрены FDA для лечения миелодиспластического синдрома и проходят исследование для применения при нескольких видах опухолей, включая AML¹⁹. Ингибиторы DNMT, которые можно применять согласно изобретению, включают (но не ограничиваясь только ими):

Децитабин [рег. № CAS 2353-33-5], известный также как 5-аза-2'-дезоксицитидин, описан, например, у Wolfrom I.M.L. и др.²⁰ или в перечне рекомендованных INN 30²¹

Азацитидин [рег. № CAS 320-67-2] описан, например, в немецком патенте DE 1140941²² или в перечне рекомендованных INN 19²³. Азацитидин представляет собой один из стандартов лечения, применяемых в настоящее время при остром лейкозе

Гуадецитабин известен также как SGI-110. Это соединение представляет собой децитабин, сцепленный через фосфодиэфирную связь с гуанозином и действующий в качестве пролекарства децитабина. После метаболической активации путем фосфорилирования и включения в ДНК гуадецитабин ингибирует ДНК-метилтрансферазу, вызывая тем самым полногеномное и неспецифическое гипометилирование и индуцируя прекращение клеточного цикла на S-фазе. Этот агент является устойчивым к цитидиндеаминазе, поэтому может приводить к постепенному высвобождению децитабина как вне, так и внутри клетки, что обеспечивает более длительную экспозицию децитабина.

Другими ингибиторами DNMT, которые можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении, являются зебуларин, 5-фтор-2'-дезоксицитидин, 2'-дезокси-5,6-дигидро-5,6-азацитид, гидралазин, прокаинамид, EGCG и RG108.

Ингибиторы FLT3:

FMS-подобная тирозинкиназа 3 (FLT3) является протоонкогеном. Мутации в рецепторе FTL3 могут приводить к развитию лейкоза и фактически являются одним из наиболее часто встречающихся мутантных генов при AML. Ингибиторы FLT3 проходят исследование для применения при лечении нескольких типов рака. Любой известный ингибитор FLT3 можно в принципе применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Предпочтительные ингибиторы FLT3 для применения в комбинациях, предлагаемых в изобретении, включают квизартиниб, сорафениб, сунитиниб и лестауртиниб.

Квизартиниб [рег. № CAS 950769-58-1] описан, например, в международной заявке на патент WO 2007109120²⁴ или в перечне рекомендованных INN 99²⁵.

Ингибиторы BCL2:

Bcl2 (В-клеточная лимфома 2) считается важным антиапоптозным белком и классифицируется как онкоген. Установлено, что изменения в гене BCL2 вызывают несколько видов рака, и ингибиторы Bcl2 исследуются для применения в противораковой терапии. Любой известный ингибитор Bcl2 можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Предпочтительные ингибиторы Bcl2 включают АВТ-737, навитоклакс (также известный как (aka) АВТ-263), венетоклакс (aka ABT-199) и обатоклакс.

АВТ-737 [рег. № CAS 852808-04-9], известный также как 4-[4-[[2-(4-хлорфенил)фенил]метил]пиперазин-1-ил]-N-[4-[[(2R)-4-(диметиламино)-1-фенилсульфанилбутан-2-ил]амино]-3-нитрофенил]сульфонилбензамид, описан, например, в международной заявке на патент WO 2005049594²⁶.

Навитоклакс [рег. № CAS 923564-51-6], известный также как АВТ-263 или 4-(4-{[2-(4-хлорфенил)-5,5-диметил-1-циклогексен-1-ил]метил}-1-пиперазинил)-N-[(4-{[(2R)-4-(4-морфолинил)-1-(фенилсульфанил)-2-бутанил]амино}-3-[(трифторметил)сульфонил]фенил)сульфонил]бензамид, описан, например, в US 20070027135²⁷.

Обатоклакс [рег. № CAS 803712-67-6], известный также как 2-(2-((3,5-диметил-1Н-пиррол-2-ил)метилен)-3-метокси-2Н-пиррол-5-ил)-1Н-индол, описан, например, в международной заявке на патент WO 2004106328²⁸.

Венетоклакс [рег. № CAS 1257044-40-8], известный также как АВТ-199 или 4-[4-[[2-(4-хлорфенил)-4,4-диметилциклогекс-1-ен-1-ил]метил]пиперазин-1-ил]-N-[[3-нитро-4-[[(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)метил]амино]фенил]сульфонил]-2-[(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-5-ил)окси]бензамид, описан, например, в международной заявке на патент WO 2010138588²⁹.

Ингибиторы MDM2:

Гомолог мышиного гена double minute 2 (MDM2) рассматривается в качестве важного негативного регулятора супрессора опухолей р53, среди других его функций, при раке. Ингибиторы Mdm2 представляют собой соединения, которые ингибируют взаимодействие между Mdm2 и р53 и включают среди прочего нутлины. Наиболее предпочтительным ингибитором Mdm2 является нутлин-3А.

Нутлин-3А [рег. № CAS 675576-98-4], известный также как 4-[[(4S,5R)-4,5-бис(4-хлорфенил)-4,5-дигидро-2-[4-метокси-2-(1-метилэтокси)фенил]-1Н-имидазол-1-ил]карбонил]-2-пиперазинон, описанный, например, в заявке на патент США US 20050282803³⁰.

Ингибиторы с-KIT:

c-KIT (известный также как рецептор фактора роста тучных/стволовых клеток (SCGFR) или CD117) представляет собой белок рецепторной тирозинкиназы, который у людей представляет собой протоонкоген. Активирующие мутации в этом гене ассоциированы с несколькими видами рака, включая острый миелоидный лейкоз. Любой известный ингибитор c-KIT можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Пригодным ингибитором c-KIT является дасатиниб или иматиниб.

Дасатиниб (рег. № CAS 302962-49-8) представляет собой N-(2-хлор-6-метилфенил)-2-[[6-[4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил]-2-метил-4-пиримидинил]амино]-5-тиазолкарбоксамид, имеющий формулу:

Дасатиниб одобрен в качестве терапии первой линии для применения на пациентах с хроническим миелогенным лейкозом (CML) и острым лимфобластным лейкозом (ALL).

Иматиниб (рег. № CAS 152459-95-5) представляет собой 4-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-N-(4-метил-3-{[4-(пиридин-3-ил)пиримидин-2-ил]амино}фенил)бензамид, имеющий формулу:

Иматиниб представляет собой ингибитор тирозинкиназы, который применяют при лечении многих типов рака, включая позитивный по филадельфийской хромосоме CML.

Ингибиторы BET:

Ингибиторы BET представляют собой класс лекарственных средств, обладающих противораковой, иммуносупрессорным и другими видами активности, которые в настоящее время проходят клинические испытания. Эти молекулы обратимо связываются с бромодоменами содержащих бромодомены и вне-концевой мотив (BET) белков BRD2, BRD3, BRD4 и BRDT, и предупреждают белок-белковые взаимодействия между ВЕТ-белками и ацетилированными гистонами и факторами транскрипции. Любой известный ингибитор BET можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении. Примеры ингибиторов BET включают (но не ограничиваясь только ими):

JQ1 (рег. № CAS 1268524-70-4) представляет собой (S)-трет-бутил-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)ацетат, и он описан в WO 2011143651³¹.

GSK1210151A (I-BET 151) (рег. № CAS 1300031-49-5) представляет собой 7,3,5-диметил-4-изоксазолил-1,3-дигидро-8-метокси-1-[1R-1-(2-пиридинил)этил]-2Н-имидазо[4,5-с]хинолин-2-он и описан в WO 2011054843³².

MS 436 (рег. № CAS 1395084-25-9) представляет собой 4-[(1Е)-2-(2-амино-4-гидрокси-5-метилфенил)диазенил]-N-2-пиридинилбензолсульфонамид и описан в WO 2012116170³³.

I-BET 762 (GSK525762) имеет формулу:

ОТХ-015 (рег. № CAS о 202590-98-5) представляет собой (6S)-4-(4-хлорфенил)-N-(4-гидроксифенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ацетамид и описан в US 5712274³⁴.

CPI-203 (рег. № CAS 1446144-04-2) представляет собой (6S)-4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ацетамид и описан в WO 2014134583³⁵.

GSK1324726A (I-BET726) (рег. № CAS 1300031-52-0) представляет собой 4-[(2S,4R)-1-ацетил-4-[(4-хлорфенил)амино]-1,2,3,4-тетрагидро-2-метил-6-хинолинил]бензойную кислоту и описан в WO 2011054843³⁶.

Другие ингибиторы BET, которые можно применять в комбинации с соединением формулы (I), включают ABBV-075, BAY1238097, CPI-0610 и TEN-010.

Антрациклины:

Антрациклины (или антрациклиновые антибиотики) представляют собой класс лекарственных средств, применяемых в химиотерапии рак, полученный из бактерии Streptomyces, такой как Streptomyces peucetius var. caesius. Эти соединения применяют для лечения многих видов рака, включая лейкозы. Примеры антрациклинов, которые можно применять в комбинациях, предлагаемых в изобретении, включают доксорубицин, идарубицин и даунорубицин.

Антрациклины, такие как даунорубицин, доксорубицин и идарубицин, как правило, применяют для лечения определенных типов лейкозов (например, острого миелоидного лейкоза и острого лимфоцитарного лейкоза), обычно в комбинации с другими химиотерапевтическими лекарственными средствами, такими как цитарабин.

Триоксид мышьяка:

Триоксид мышьяка представляет собой химиотерапевтическое средство, одобренное FDA США для лечения острого промиелоцитарного лейкоза, который является нечувствительным к агентам «первой линии», таким как ATRA. Было установлено, что Триоксид мышьяка индуцирует апоптоз раковых клеток. Его применяют в качестве цитостатического средства при лечении устойчивого промиелоцитарного (М3) подтипа острого миелоидного лейкоза. Комбинированная терапия на основе триоксида мышьяка и полностью транс-ретиноевой кислоты (ATRA) одобрена FDA для лечения некоторых лейкозов. Разработана жидкая форма триоксида мышьяка, которую можно применять орально

Гидроксимочевина:

Гидроксимочевина (рег. № CAS 127-07-1), известная также как гидроксикарбамид, представляет собой антинеопластическое лекарственное средство, которое применяют при миелопролиферативных нарушениях, включая CML. Гидроксикарбамид снижает производство дезоксирибонуклеотидов посредством ингибирования фермента рибонуклеотидредуктазы путем освобождения от свободных радикалов тирозила, поскольку они участвуют в восстановлении НДФ.

ATRA, ARA-C (необязательно в комбинации с антрациклином, таким как даунорубицин или идарубицин) и азацитидин представляют собой современные стандарты лечения острого лейкоза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог ретиноевой кислоты представляет собой третиноин.

В некоторых вариантах осуществления изобретения нуклеозидный аналог представляет собой цитарабин.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор DOT1L выбирают из пинометостата и EPZ-004777.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор HDAC выбирают из вориностата, риколиностата и энтиностата.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор DNMT выбирают из децитабина и азацитидина.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор FLT3 представляет собой квизартиниб.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор BCL2 представляет собой АВТ-737.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор MDM2 представляет собой нутлин-3А.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор с-KIT представляет собой дасатиниб.

В некоторых вариантах осуществления изобретения ингибитор BET представляет собой JQ-1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения антрациклин представляет собой даунорубицин.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В конкретном варианте осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. В конкретном варианте осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначенной для применения в качестве терапевтически активной субстанции. В конкретном варианте осуществления изобретения комбинация, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначена для применения в качестве терапевтически активной субстанции.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203. GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначенной для применения для лечения гиперпролиферативного нарушения. В конкретном варианте осуществления изобретения комбинация, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, предназначена для применения для лечения гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим вариантом осуществления изобретения является способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, указанный способ включает введение в терапевтически эффективном количества комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или нескольких терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, указанному пациенту. В конкретном варианте осуществления изобретения способ включает введение в терапевтически эффективном количестве комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим вариантом осуществления изобретения является применение комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или нескольких терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для лечения гематологического злокачественного заболевания. В конкретном варианте осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для лечения гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другим вариантом осуществления изобретения является применение комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или нескольких терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, сапацитабина, клофарабина, элацитарабина, флударабина, цитарабина осфосфата, гемцитабина, 2-хлор-2-дезоксиаденозина (известного также как 2-CDA), троксацитабина, фородезина, неларабина, пинометостата, EPZ-004777, SGC-0946, белиностата, панобиностата, вориностата, риколиностата, энтиностата, моцетиностата, абексиностата, ресминостата, гивиностата, квизиностата, децитабина, азацитидина, гуадецитабина, квизартиниба, сорафениба, сунитиниба, лестауртиниба, АВТ-737, навитоклакса, венетоклакса, обатоклакса, нутлина-3А, дасатиниба, иматиниба, JQ1, GSK1210151A, MS 436, GSK525762, ОТХ-015, CPI-203, GSK1324726A, даунорубицина, доксорубицина, идарубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для приготовления лекарственных средств, которые можно применять для лечения гематологического злокачественного заболевания. Конкретным вариантом осуществления изобретения является применение комбинации, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, EPZ-00477, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, АВТ-737, нутлин-3А, дасатиниба, JQ1, даунорубицина, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, для приготовления лекарственных средств, которые можно применять для лечения гематологического злокачественного нарушения. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, указанной в настоящем описании, содержащей один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, указанной в настоящем описании, предназначенной для применения в качестве терапевтически активной субстанции.

Другой вариант осуществления изобретения относится к комбинации, указанной в настоящем описании, предназначенной для применения при лечении гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другой вариант осуществления изобретения относится к способу лечения гематологического злокачественного заболевания, указанный способ включает введение в эффективном количестве комбинации, указанной в настоящем описании, человеку или животному. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другой вариант осуществления изобретения относится к применению комбинации, указанной в настоящем описании, для лечения гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

Другой вариант осуществления изобретения относится к применению комбинации, указанной в настоящем описании, для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения гематологического злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание. В некоторых вариантах осуществления изобретения указанное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гематологическое злокачественное заболевания связано с LSD1 или модулируется ингибиторами LSD1.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML).

В некоторых вариантах осуществления изобретения гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый лимфоидный лейкоз (ALL).

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и аналог ретиноевой кислоты или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и нуклеозидный аналог или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор DOT1L или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор HDAC или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор DNMT или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор FLT3 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор BCL2 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор MDM2 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор c-KIT или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор BET или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и антрациклин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и триоксид мышьяка.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и гидроксимочевину.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и третиноин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и цитарабин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и пинометостат или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и EPZ-004777 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и вориностат или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и риколиностат или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и энтиностат или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и квизартиниб или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и АВТ-737 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и нутлин-3А или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и дасатиниб или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и иматиниб или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и JQ1 или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и даунорубицин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и идарубицин или его фармацевтически приемлемую соль.

В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинация содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, цитарабин и антрациклин, предпочтительно выбранный из даунорубицина, идарубицина и их фармацевтически приемлемых солей.

В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтически приемлемая соль описанного выше соединения формулы (I) представляет собой дигидрохлорид.

В способах, предлагаемых в изобретении, которое представлено в настоящем описании, пациент представляет собой человека или животное, предпочтительно человека.

Если не указано иное, то все технические и научные понятия, применяемые в настоящем описании, имеют общепринятые значения, известные обычному специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя для воплощения на практике или тестирования можно использовать методы и материалы, сходные или эквивалентные указанным в настоящем описании, ниже описаны приемлемые методы и материалы.

Все публикации, заявки на патент, патенты и другие ссылки, указанные в настоящем описании, полностью включены в качестве ссылки.

Применяемая в указанной заявке номенклатура основана на систематической номенклатуре ИЮПАК, если не указано иное.

Любая открытая валентность, указанная на атоме углерода, кислорода, серы или азота в представленных в настоящем описании структурах, свидетельствует о присутствии водорода, если не указано иное.

Понятие «необязательный» или «необязательно» означает, что описанный/описанное далее случай или событие может иметь место, но это не является обязательным, и что описание включает варианты, в которых случай или событие имеет место, и варианты, в которых он/оно не имеет места.

Понятие «фармацевтически приемлемые соли» означает соли, которые не являются нежелательными с позиции биологии или иных позиций.

Фармацевтически приемлемые соли включают как кислотно-аддитивные соли, так и соли присоединения оснований.

Понятие «фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль» означает фармацевтически приемлемые соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, угольная кислота, фосфорная кислота, и с органическими кислотами, выбранными из классов алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоновых органических кислот, таких как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, аспарагиновая кислота, аскорбиновая кислота, глутаминовая кислота, антраниловая кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, эмбоновая кислота, фенилуксусная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота и салициловая кислота.

Понятие «фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований» означает фармацевтически приемлемые соли, образованные с органическим или неорганическим основанием. Примеры приемлемых неорганических оснований включают соли натрия, калия, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди и алюминия. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органический нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, включая встречающиеся в естественных условиях замещенные амины, циклические амины и щелочные ионообменные смолы, такие как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, 2-диэтиламиноэтанол, триметамин, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, пурины, пиперазин, пиперидин, N-этилпиперидин, и полиамидные смолы.

Определения и условные обозначения стереохимии, применяемые в настоящем описании, как правило, соответствуют предложенным S.P. Parker³⁷ (³⁷McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, под ред. S.P. Parker, изд-во McGraw-Hill Book Company, New York, 1984) и Eliel Е. и Wilen S.³⁸ (³⁸ Eliel E. и Wilen S., «Stereochemistry of Organic Compounds», изд-во John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994). При описании оптически активных соединений дескрипторы D и L или R и S применяют для обозначения абсолютной конфигурации молекулы вокруг ее хирального(ых) центра(ов). Заместители, присоединенные к хиральному центру, ранжируются согласно правилу последовательности (старшинства) Канна-Ингольда-Прелога³⁹ (³⁹ Cahn и др., Angew. Chem. Inter. Edit., 5, 1966, 385; список опечаток 511). Дескрипторы D и L или (+) и (-) применяют для обозначения направления вращения плоскости поляризации поляризованного света соединением, при этом, (-) или L означает, что соединение является левовращающим. Соединение, имеющее дескриптор (+) или D, является правовращающим.

Понятия «фармацевтическая композиция» и «фармацевтическая препаративная форма» (или «препаративная форма) используются взаимозаменяемо и обозначают смесь или раствор, содержащую/содержащий в терапевтически эффективном количестве активный фармацевтический ингредиент в сочетании с фармацевтически приемлемыми эксципиентами, подлежащие введению млекопитающему, например, человеку, который нуждается в этом.

Понятие «фармацевтически приемлемый» означает свойства материла, который применяют для приготовления фармацевтической композиции, который, как правило, является безопасным, нетоксичным и не является нежелательным с биологической или иной точки зрения и пригоден для применения в ветеринарии, а также предназначенной для человека фармацевтике.

Понятия «фармацевтически приемлемый эксципиент», «фармацевтически приемлемый носитель» и «терапевтически инертный эксципиент» можно применять взаимозаменяемо, и они обозначают любой фармацевтически приемлемый ингредиент в фармацевтической композиции, который не обладает терапевтической активностью и является нетоксичным для индивидуума, которому его вводят, такой как разрыхлители, связывающие агенты, наполнители, растворители, буферы, изменяющие тоничность агенты, стабилизаторы, антиоксиданты, поверхностно-активные вещества, носители, разбавители или замасливатели, применяемые для приготовления фармацевтических продуктов.

Понятие «ингибитор» означает соединение, которое конкурирует, снижает или предотвращает связывание конкретного лиганда с конкретным рецептором или ферментом и/или которое снижает или предупреждает активность конкретного белка, например, рецептора или фермента.

«Индивидуум» или «субъект» представляет собой млекопитающее. Млекопитающее включает (но не ограничиваясь только ими) домашних животных (например, коровы, овцы, кошки, собаки и лошади), приматов (например, человек и приматы кроме человека, такие как обезьяны), кроликов и грызунов (например, мыши и крысы). В некоторых вариантах осуществления изобретения индивидуум или субъект представляет собой человека.

Понятие «животное», как его применяют в настоящем описании, включает человека и животных кроме человека. В одном из вариантов осуществления изобретения «животное кроме человека» представляет собой млекопитающее, например, грызуна, такого как крыса или мышь. В одном из вариантов осуществления изобретения животное кроме человека представляет собой мышь.

Понятие «полумаксимальная эффективная концентрация» (EC₅₀) означает концентрацию в плазме конкретного соединения или молекулы, требуемую для достижения 50% от максимального конкретного действия in vivo.

Понятие «терапевтически эффективное количество» (или «эффективное количество») означает количество соединения или молекулы, предлагаемого/предлагаемой в настоящем изобретении, которое при введении индивидууму (I) лечит или предупреждает конкретное заболевание, состояние или нарушение, (II) ослабляет, облегчает или элиминирует один или несколько симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения или (III) предупреждает или замедляет возникновение одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, состояния или нарушения, указанного в настоящем описании. Терапевтически эффективное количество должно варьироваться в зависимости от соединения, состояния заболевания, подлежащего лечению, серьезности подлежащего лечению заболевания, возраста и относительного состояния здоровья индивидуума, пути и формы введения, рекомендации лечащего врача или ветеринара и других факторов.

Понятие «лечить» или «лечение» болезненного состояния включает ингибирование болезненного состояния, т.е. прекращение развития болезненного состояния или его клинических симптомов, или ослабление болезненного состояния, т.е. достижение временного или постоянного регресса болезненного состояния или его клинических симптомов.

Понятие «транслокация» или «хромосомная транслокация» означает тип хромосомной аномалии, вызванной реаранжировкой участков между негомологичными хромосомами. Транслокации могут быть сбалансированными (при которых даже обмен материала не приводит к появлению дополнительной генетической информации или ее утрате) или несбалансированными (при которых обмен хромосомного материала является неравным, приводя к образованию генов с дополнительным (лишним) фрагментом или с утраченным фрагментом). Хромосомные транслокации могут происходить либо в процессе гаметогенеза из-за ошибок при мейозе, либо в процессе клеточного деления соматических клеток из-за ошибок в митозе. Последний вариант приводит к хромосомной аномалии, характерной для всех клеток потомства, которые являются носителями транслокации. С другой стороны, соматические транслокации приводят к аномалиям, характерным только для пораженной клеточной линии.

Понятие «реаранжировка (перестройка)» или «хромосомная реаранжировка» означает тип хромосомной аномалии, вызванной изменением в структуре нативной хромосомы из-за делеций, дупликаций, инверсий или транслокаций. Реаранжировки обусловливаются разрывом в двойных спиралях ДНК в двух различных местоположениях с последующим повторным соединением разорванных концов с образованием новой хромосомной организации генов, отличной от порядка генов хромосом до их разрыва. Понятие «сложные хромосомные реаранжировки (CCR)» означает структурные хромосомные реаранжировки по меньшей мере с тремя точечными разрывами, что приводит к обмену генетического материала между двумя или большим количеством хромосом.

Другим вариантом осуществления изобретения являются фармацевтические композиции или лекарственные средства, содержащие комбинации соединения формулы (I), указанного в настоящем описании, и фармацевтически приемлемого эксципиента, а также способы применения соединения формулы (I) для приготовления указанных комбинаций, композиций и лекарственных средств.

Композиции включают в состав препаративных форм, дозируют и вводят в соответствии с надлежащей клинической практикой. Рассматриваемые в этом контексте факторы включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину нарушения, область введения агента, метод введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим медработникам.

Соединение формулы (I) и другой терапевтический агент, предназначенный для применения в комбинациях, указанных в настоящем описании, а также фармацевтические композиции, указанные в настоящем описании, можно вводить любыми приемлемыми путями, включая оральное, местное (включая трансбуккальное и подъязычное), ректальное, вагинальное, чрескожное, парентеральное, подкожное, внутрибрюшинное, внутрилегочное, внутрикожное, подоболочечное и эпидуральное и интраназальное введение, и при необходимости, в случае местного применения, введение внутрь повреждения. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение.

Соединение формулы (I) и другой терапевтический агент, предназначенный для применения в комбинациях, указанных в настоящем описании, а также фармацевтические композиции, указанные в настоящем описании, можно вводить в виде любой удобной для введения формы, например, таблеток, порошков, капсул, растворов, дисперсий, суспензий, сиропов, спреев, суппозиториев, гелей, эмульсий, пластырей (патчи) и т.д. Указанные композиции могут содержать компоненты, общепринятые для фармацевтических препаратов, например, разбавители, носители, модификаторы pH, консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подслащивающие вещества, красители, корригенты, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты, антиоксиданты и другие активные агенты. Они могут содержать также и другие ценные для терапии субстанции.

Типичную препаративную форму получают путем смешения терапевтической комбинации, указанной в настоящем описании, и фармацевтически приемлемого экципиента. Приемлемые эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области и описаны подробно, например, у Ansel H.C. и др.⁴⁰ (⁴⁰ Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, изд-во Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, 2004); Gennaro A.R. и др.⁴¹ (⁴¹ Remington: The Science and Practice of Pharmacy, изд-во Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, 2000) и Rowe R.C.⁴² (⁴² Handbook of Pharmaceutical Excipients, изд-во Pharmaceutical Press, Chicago, 2005). В препаративные формы можно включать также один или несколько буферов, стабилизаторов, поверхностно-активных веществ, смачивающих агентов, замасливателей, эмульгаторов, суспендирующих агентов, консервантов, антиоксидантов, опакеров (кроющие, маскирующие агенты), веществ, обеспечивающих скольжение, процессирующих добавок, красителей, подслащивающих веществ, отдушек, корригентов, разбавителей и других известных добавок, которые обеспечивают удобную форму представления лекарственного средства (т.е. соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, или его фармацевтической композиции) или способствуют приготовлению фармацевтического продукта (т.е. лекарственного средства).

Доза, в которой можно вводить соединение формулы (I) и другие терапевтические агенты, указанные в настоящем описании, может варьироваться в широких пределах и, естественно, ее следует регулировать в зависимости от индивидуальных требований в каждом конкретном случае.

Как указано в настоящем описании, соединение формулы (I) представляет собой высокоэффективный активный фармацевтический ингредиент (HPAPI). Таким образом, его ожидаемая суточная доза должна быть очень низкой, т.е. менее 10 мг в день. Таким образом, загрузка лекарственного средства в твердую форму также должна быть очень низкой, т.е. составлять мене 10 мг API на 100 мг таблетки.

В целом, в случае орального введения приемлемой может являться суточная доза, составляющая примерно 0,01-10 мг на особь соединения формулы (I), указанного в настоящем описании, хотя при необходимости можно применять дозу, превышающую верхний предел.

Дополнительное соединение в комбинации можно вводить в количествах, эффективных для поставленной цели. Приемлемые дозы любого из описанных выше вводимых совместно агентов представляют собой принятые в настоящее время для применения дозы, и они могут быть снижены благодаря совместному действию (синергизм) идентифицированного впервые агента и других химиотерапевтических агентов или вариантов обработок, что приводит к повышению терапевтического индекса или уменьшению токсичности или других побочных действий или последствий.

Приведенная в качестве примера приемлемая оральная форма соединения формулы (I) представляет собой таблетку, которая содержит примерно от 0,01 до 10 мг соединения формулы (I), указанного в настоящем описании, которое компаундировано примерно с 90-30 мг безводной лактозы, примерно 5-40 мг натриевой соли кроскармеллозы, примерно 5-30 мг поливинилпирролидона (ПВП) К30 и примерно 1-10 мг стеарата магния. Порошкообразные ингредиенты сначала смешивают друг с другом, а затем смешивают с раствором ПВП. Полученную композицию можно сушить, гранулировать, смешивать со стеаратом магния и прессовать с получением таблетированной формы с помощью общепринятого оборудования.

Комбинации, указанные в настоящем описании, можно применять в режиме одновременного или последовательного введения. При последовательном введении комбинацию можно применять в виде двух или большего количества введений. Комбинированное введение включает совместное введение с использованием различных препаратов и последовательное введение в любом порядке, но предпочтительно в течение периода времени, когда оба (или все) активные агенты одновременно проявляют их биологическую активность. Комбинации, предлагаемые в изобретении, можно вводить также в виде одной фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтический(ие) агент(ы).

В конкретном варианте терапии комбинацию можно объединять с хирургическим лечением и лучевой терапией. Для достижения требуемого совместного терапевтического действия следует выбирать соответствующее количество комбинации и относительную синхронность введения.

Соединения можно вводить любым путем, пригодным для подлежащего лечению состояния. Приемлемые пути включают оральное, парентеральное (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрартериальный, ингаляционный, внутрикожный, подоболочечный, эпидуральный пути введения и введение путем инфузии), чрескожное, ректальное, назальное, местное (включая трансбуккальное и подъязычное), вагинальное, внутрибрюшинное, внутрилегочное и интраназальное введение. Местное применение может включать также применение чрескожного введения, например, с помощью чрескожных пластырей или устройств для ионофореза. Для местного иммуносупреесорного лечения соединения можно применять путем введения в повреждение, включая перфузию или другой путь приведения в контакт трансплантата с ингибитором перед трансплантацией.

Как должно быть очевидно, предпочтительный путь может варьироваться в зависимости, например, от состояния реципиента. Если соединение вводят оральным путем, то его можно приготавливать в виде любой препаративной формы, такой как пилюля, капсула, таблетка и т.д. в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, веществом, обеспечивающим скольжение, или эксципиентом. Если соединение вводят парентерально, то его приготавливать в сочетании с фармацевтически приемлемым для парентерального применения наполнителем или разбавителем и в виде стандартной дозируемой пригодной для инъекции форме, что подробно будет описано ниже.

Комбинации, указанные в настоящем описании, можно применять для лечения гиперпролиферативного заболевания или нарушения, прежде всего гематологических злокачественных заболеваний. В контексте настоящего описания гематологические злокачественные заболевания включают миелоидные злокачественные заболевания и лимфоидные злокачественные заболевания. В контексте настоящего описания миелоидные злокачественные заболевания и лимфоидные злокачественные заболевания включают также предзлокачественные миелоидные или лимфоидные гематологические нарушения и ненеопластические или незлокачественные миелопролиферативные или лимфопролиферативные нарушения.

В частности, комбинации, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для лечения или предупреждения:

- миелоидных гематологических злокачественных заболеваний, таких как острый миелоидный лекоз (AML) (например, эритролейкоз, острый мегакариобластный лейкоз, острый эозинофильный лейкоз, острый базофильный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз, острый миелобластный лейкоз); хронический миелогенный лейкоз; миелодиспластический синдром; хронический миеломоноцитарный лейкоз; и миелопролиферативные заболевания (например, миелофиброз, острый бифенотипический лейкоз, полицитемия истинная, хронический эозинофильный лейкоз/гиперэозинофильный синдром, эссенциальный тромбоцитоз и хронический эозинофильный лейкоз/гиперэозинофильный синдром),

- лимфоидных гематологических злокачественных заболеваний, таких как острый лимфобластный лейкоз (ALL), Т-клеточный лимфобластный лейкоз/ лимфома.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения комбинации, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют для лечения миелоидных гематологических злокачественных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинации, предлагаемые в изобретении, применяют для лечения острого миелоидного лейкоза. В некоторых вариантах осуществления изобретения комбинации, предлагаемые в изобретении, предпочтительно применяют для лечения миелоидных или лимфоидных гематологических злокачественных заболеваний с транслокацией или реаранжировками, включающими MLL, AF9, AF4, AF10, AML1, ETO, CALM; или с мутацией в NPM1 или Notch 1, или сверхэкспрессией LSD1.

Одним из конкретных вариантов осуществления изобретения является способ лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, где способ включает сенсибилизацию путем введения ингибитора LSD1 с последующим введением в эффективном количестве комбинации, указанной в настоящем описании, человеку или животному.

Одним из конкретных вариантов осуществления изобретения является способ лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания, где способ включает сенсибилизацию путем введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с последующим введением в эффективном количестве комбинации, указанной в настоящем описании, человеку или животному.

Другим вариантом осуществления изобретения является изделие или «набор», содержащее/содержащий комбинацию, которую можно применять для лечения указанных выше заболеваний и нарушений.

В одном из вариантов осуществления изобретения изделие содержит контейнер и комбинацию, указанную в настоящем описании.

Одним из вариантов осуществления изобретения является изделие, содержащее комбинацию, указанную в настоящем описании, которую можно применять для лечения гиперпролиферативного нарушения, прежде всего гематологического злокачественного заболевания.

Набор может дополнительно содержать этикетку или листовку-вкладыш в упаковку, которая размещена на контейнере или прилагаются к нему. Понятие «листовка-вкладыш в упаковку» применяют для описания инструкций, которые обычно включают в поступающие в продажу упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировании, введении, противопоказаниях и/или мерах предосторожности при применении указанных терапевтических продуктов. Приемлемыми контейнерами являются, например банки, пузырьки, шприцы, блистерные упаковки и т.д. Контейнеры можно изготавливать из различных материалов, таких как стекло или пластмасса. Контейнер может содержать комбинацию или ее препаративную форму, которая является эффективной для лечения состояния, и может иметь стерильный порт доступа (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенного раствора или пузырек, снабженный пробкой, которую можно прокалывать с помощью иглы для подкожных инъекций). На этикетке или листовке-вкладыше в упаковку указано, что композицию применяют для лечения выбранного состояния, такого как гиперпролиферативные нарушения, прежде всего гематологические злокачественные заболевания. В одном из вариантов осуществления изобретения на этикетке или листовке-вкладыше в упаковку указано, что композицию, содержащую комбинацию, можно применять для лечения нарушения, являющегося результатом аномального роста клеток. На этикетке или листовке-вкладыше в упаковку может также быть указано, что композицию можно применять для лечения других нарушений. В альтернативном или дополнительном варианте изделие может дополнительно включать второй контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (БСВИ), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, оно может включать другие материалы, желательные с коммерческой точки зрения и с точки зрения потребителя, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Набор может дополнительно содержать указания по введению комбинации и, если она присутствует, второй фармацевтической препаративной формы. Например, если набор содержит первую композицию, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и вторую фармацевтическую композицию, которая содержит один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, то набор может дополнительно содержать руководства по одновременному, последовательному или раздельному введению первой и второй фармацевтических композиций пациенту, который нуждается в этом.

В другом варианте осуществления изобретения наборы можно применять для поставки твердых оральных форм комбинации, таких как таблетки или капсулы. Указанный набор предпочтительно включает несколько стандартных доз лекарственного средства. Указанные наборы включают карточку с указанием доз, расположенных в том порядке, в котором их следует применять. Примером такого набора является «блистерная упаковка». Блистерные упаковки хорошо известны в упаковочной индустрии и их широко используют для упаковывания фармацевтических стандартных дозируемых форм. При необходимости, можно включать памятку, например, в форме чисел, букв или других знаков или с календарем, с обозначением дней в схеме лечения, в которые следует принимать дозы.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения набор может содержать (а) первый контейнер с находящемся в нем соединением формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солью; (б) второй контейнер с одним из терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, и (в) третий контейнер с содержащейся в нем третьей фармацевтической композицией, где третья фармацевтическая композиция содержит другое соединение с антигиперпролиферативной активностью, выбранное из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей. В альтернативном или дополнительном варианте набор может дополнительно включать другой контейнер с фармацевтически приемлемым буфером, таким как бактериостатическая вода для инъекций (БСВИ), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, он может включать другие материалы, желательные с коммерческой точки зрения и необходимые с точки зрения потребителя материалов, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.

Если набор содержит композицию соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из группы, которая состоит из аналогов ретиноевой кислоты, нуклеозидных аналогов, ингибиторов DOT1L, ингибиторов HDAC, деметилирующих агентов, ингибиторов FLT3, ингибиторов BCL2, ингибиторов MDM2, ингибиторов с-KIT, ингибиторов BET, антрациклинов, триоксида мышьяка, гидроксимочевины и их фармацевтически приемлемых солей, то набор может содержать контейнер, который содержит отдельные композиции, такой как разделенную на части банку или разделенный на части пакет из фольги, однако отдельные композиции могут находиться также в одном неразделенном на части контейнере. Как правило, набор содержит руководства по введению отдельных компонентов. Форма в виде набора является особенно целесообразной, когда отдельные компоненты предпочтительно применяют в виде различных дозируемых форм (например, оральной и парентеральной), вводят дозы через различные интервалы времени, или, когда согласно предписанию лечащего врача требуется титрование индивидуальных компонентов комбинации.

Примеры

Указанные ниже примеры даны с целью иллюстрации изобретения. Они не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения, а являются лишь репрезентативными для изобретения.

Пример 1: Матричные анализы для оценки синергизма между ORY-1001 и другими терапевтическими агентами с использованием линий клеток острого миелоидного лейкоза

Целью данного примера являлась оценка синергизма, имеющего место между ORY-1001 и другими терапевтическими агентами. В таблице 1 обобщены сведения о соединениях, тестируемых в комбинированной терапии, и применяемых линиях клеток.

*Известно также как риколиностат и ACY-1215

1.1 План эксперимента

1.1.1 Линии клеток и условия культивирования

Линии клеток AML поддерживали в среде RPMI, содержащей 10% FBS, при 37°С во влажной камере в атмосфере с контролируемым содержанием 5% CO₂. Замораживание и оттаивание клеток осуществляли согласно рекомендациям АТСС. Генетические профили применяемых линий клеток представлены в таблице 2.

1.1.2 Анализы жизнеспособности (96 ч)

Клетки высевали с оптимальной ранее определенной плотностью (для гарантии линейного роста в процессе обработки) (4000 клеток/лунку, за исключением 16000 клеток/лунку в случае клеток KASUMI-1) в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды. По три лунки резервировали для каждого экспериментального условия; добавляли также контроли, содержащие только среду и обработанные наполнителем для поправки на фон и стандартизации соответственно. После посева к клеткам добавляли 50 мкл среды, содержащей 8 серийных разведении (1:3) ORY-1001 (или любых других кандидатов для комбинаторной обработки). Затем клетки инкубировали в течение 96 ч при 37°С в атмосфере с контролируемым содержанием 5% CO₂ после чего оценивали жизнеспособность клеток путем окрашивания с помощью Alamar Blue^® (фирма ThermoFisher Scientific, Валтам, шт. Массачусетс/США). Alamar Blue® является индикатором жизнеспособности клеток, в котором используется естественная восстановительная способность живых клеток, позволяющая превращать резазурин во флуоресцентную молекулу, резоруфин⁴³ (⁴³ Al-Nasiry и др., Hum Reprod 22, 2007, cc. 1304-1309). В целом, метод состоял в следующем: маточный раствор Alamar Blue разводили в соотношении 1:20 в культуральной среде и после инкубации в течение 3 ч определяли флуоресценцию с помощью планшет-ридера TECAN Infinity 2000 (фирма Tecan Group Ltd., Меннедорф, Швейцария; длина волны возбуждения 540-570 нм, длина волны испускания 580-610 нм). Для каждого условия рассчитывали среднюю флуоресценцию по 3 техническим повторностям; поправку на фон рассчитывали по флуоресценции в содержащих только среду контролях. Данные анализировали с использованием GraphPad PRISM®, версия 5.01 (фирма GraphPad Software, Inc., Ла-Холья, шт. Калифорния/США) для расчета наилучшей выбранной кривой и величины ЕС₅₀.

1.1.3 Анализы жизнеспособности на матрице 9×9

Каждый матричный анализ осуществляли на 2 планшетах согласно схеме, проиллюстрированной ниже на фиг. 1.

Клетки высевали с оптимальной плотностью (4000 клеток/лунки, как определено ранее) в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды; на краях планшетов оставляли лунки, заполненные 100 мкл среды без клеток, для поправки на фон. Каждое из двух соединений добавляли в объеме 25 мкл, что приводило к конечному объему среды 100 мкл. Как продемонстрировано на фиг. 1, матрицу создавали с использованием возрастающих концентраций ORY-1001 слева направо и возрастающих концентраций представляющего интерес соединения (см. таблицу 1) сверху вниз. Первый и последний ряды планшета №1 повторяли на планшете №2 (что обозначено красными стрелками на фиг. 1) для подтверждения воспроизводимости данных на двух планшетах. Протестированные концентрации обоих соединений покрывали 256-кратный диапазон, полученный с помощью 8 стадий разведении 1:2, созданный так, чтобы величины ЕС₅₀ обоих соединений находились в центре горизонтального и вертикального ряда на матрице (ЕС₅₀ ORY-1001 и другого соединения соответствовали 5-ой лунке справа и снизу, как продемонстрировано на фиг. 1). Величины ЕС₅₀ тестируемых с помощью матричного анализа соединений определяли предварительно путем анализов индивидуальных агентов, осуществление которых описано подробно в разделе 1.1.2. Для соединений, которые тестировали в широком диапазоне концентраций (децитабин, азацитидин и нутлин-3A), серийные разведения осуществляли в соотношении 1:3.

Затем определяли жизнеспособность с помощью окрашивания Alamar Blue, что подробно описано в разделе 1.1.2.

1.1.3.1 Анализы жизнеспособности на матрице 9×9 (анализ данных)

Затем для каждого матричного анализа данные стандартизовали относительно обработанных наполнителем контролей (<0,4% ДМСО, верхний левый угол) с получением уровня в процентах относительной жизнеспособности согласно следующей формуле:

% относительной жизнеспособности = RFU обработанных клеток/RFU обработанного наполнителем контроля × 100

Уровни жизнеспособности в процентах затем анализировали с помощью GraphPad PRISM®, версия 5.01 (фирма GraphPad Software, Inc., Ла-Холья, шт. Калифорния/США) для расчета наилучшей выбранной кривой и величин ЕС₅₀.

На этом этапе рассчитывали долю пораженных клеток (Fraction affected (Fa)) с помощью следующей формулы

Fa = 1 - (% относительной жизнеспособности/100)

для следующих условий:

- клетки, обработанные серийными разведениями ORY-1001 в качестве индивидуального агента (среднее значение для первого ряда первого и второго планшетов в каждом матричном анализе),

- клетки, обработанные серийными разведениями представляющего интерес соединения в качестве индивидуального агента (в первой колонке матрицы, на которой осуществляли анализ),

- клетки, обработанные ORY-1001 и представляющим интерес соединением в фиксированном соотношении, соответствующем соотношению величин ЕС₅₀ (величины % относительной жизнеспособности на диагонали матрицы, на которой осуществляли анализ; выделены на фиг. 1).

Указанные выше величины Fa затем усредняли для двух технических повторностей до осуществления анализа с помощью программного обеспечения Calcusyn.

Программное обеспечение Calcusyn (http://www.biosoft.com/w/calcusyn.htm, фирма Biosoft, Кэмбридж, Великобритания) разработано для определения природы (синергетическое, аддитивное или антагонистическое) взаимодействия между двумя соединениями на основе принципа медианного эффекта (Median Effect Principle) и теоремы о коэффициенте совместного действия (Combination Index Theorem)⁴⁴ (⁴⁴ T.C. Chou, Pharmacol Rev. 2006). Для получения информативных результатов данные, прошедшие обработку с помощью Calcusyn (как для индивидуальных агентов, так и для комбинации лекарственных средств), необходимо аппроксимировать с помощью указанных теоретических моделей. По этой причине имеет решающее значение удаление возможных выбросов и экспериментальных данных, которые плохо соответствуют принципу медианного эффекта (Median Effect Principle⁴⁵) (⁴⁵ T.C. Chou и Р. Talalay, Trends Pharmacol. Sci., 2006). Для достижения этого адаптировали следующую стратегию для фильтрации данных.

На первой стадии снижали дисперсию данных путем удаления точек, отличающихся тем, что:

1) Fa<0,1

2) превышением Fa<0,03 по сравнению с предыдущей точкой (если Fa>0,9).

Эти условия определяют плато на кривой дозовой зависимости, на котором клетки обрабатывали очень низкими или очень высокими концентрациями соединений (или комбинаций), что приводило к снижению жизнеспособности до уровня, близкого к 0% или 100% (эквивалентно величине Fa, близкой к 0 или 1 соответственно). Следует отметить, что в этих областях на кривой дозовой зависимости изменения сигнала Alamar Blue являются очень малыми и наиболее вероятно являются результатом случайного шума, характеризуясь очень незначительной биологической значимостью.

Затем для каждой экспериментальной точки рассчитывали Log₁₀(концентрации) и Log₁₀(Fa/(1-Fa)) и строили точечный график, на котором первую величину откладывали на x-оси, а вторую на y-оси. Затем с помощью программы Excel строили линию регрессии (соответствующую уравнению медианного эффекта).

На этом этапе рассчитывали расстояние от линии регрессии для каждой экспериментальной точки с помощью следующего уравнения:

расстояние (ax+by+c=0; X, Y)=(aX+bY+с)/√(a²+b²)

Выбросы идентифицировали на основе их расстояния от уравнения медианного эффекта, используя критерий Граббса. Для каждой экспериментальной точки критерий Граббса применяли к абсолютной величине расстояния согласно следующей формуле (следует отметить, что переменную для критерия Граббса можно обозначать взаимозаменяемо как G, так и Z):

G=(X_n-Х_{среднее})/s,

где X_n обозначает абсолютную величину расстояния каждой из точек от линии регрессии; X_{среднее} означает среднюю всех величин X_n, a s обозначает стандартное отклонение. Величины G, превышающие G_crit (рассчитано для a=0,2, как описано ниже), свидетельствуют о выбросах, не соответствующих уравнению медианного эффекта. Указанные экспериментальные точки удаляли для успешного расчета коэффициента совместного действия с помощью Calcusyn.

Если это возможно, то опыт повторяли более одного раза для удаления множества выбросов до тех пор пока:

1. не идентифицированы никакие дополнительные выбросы или

2. R²>0,95. Для оценки качества данных рассчитывали также величину R с помощью программного обеспечения Calcusyn (удовлетворительные данные характеризуются величиной R, превышающей 0,95⁴⁶) (⁴⁶ T.C. Chou, Cancer Research, 2010).

1.1.3.2 Определение выбросов с помощью Calcusyn

На x-оси откладывали данные о проценте (доле) воздействия (что в контексте настоящего описания обозначают также как доля пораженных (клеток), т.е. Fa), представляющие собой долю клеток, на которых оказала воздействие обработка (в случае цитотоксической обработки процент воздействия соответствует снижению жизнеспособности по сравнению с обработанным наполнителем контролем, где 1 соответствует 100%). На y-оси отложены данные о коэффициенте совместного действия, которое может быть либо синергетическим (CI<1), либо аддитивным (CI=1), либо антагонистическим (CI>1). Кресты обозначают точки, соответствующие экспериментальным данным, центральная линия представляет собой CI-кривую, верхняя и нижняя линия обозначают диапазон 1,96 стандартных отклонений (SD) выше и ниже CI.

1.1.4 Комбинаторные обработки дасатинибом/ORY-1001 и JQ1/ORY-1001

Клетки высевали с плотностью 2500 клеток/лунку в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды; на краях планшетов оставляли лунки, заполненные 100 мкл среды без клеток, для поправки на фон. Каждое из двух соединений добавляли в объеме 25 мкл, что приводило к конечному объему среды 100 мкл. Клетки обрабатывали совместно серийными разведениями 1:3 ORY-1001 и либо дасатиниба, либо JQ-1. Соотношение ORY-1001/дасатиниб и ORY-1001/JQ1 составляло соответственно 1:1000 и 1:200.

Затем определяли жизнеспособность с помощью окрашивания Alamar Blue, что подробно описано в разделе 1.1.2.

1.1.4.1 Комбинаторные обработки дасатинибом/ORY-1001 и JQ1/ORY-1001 (анализ данных)

Анализ данных осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3.1.

1.1.4.2 Определение выбросов с помощью Calcusyn

Выбросы определяли с помощью программного обеспечения Calcusyn согласно методу, описанному в разделе 1.1.3.2.

1.1.5 Комбинаторная обработка ORY-1001/гидроксимочевиной

Клетки высевали с плотностью 4000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды; на краях планшетов оставляли лунки, заполненные 100 мкл среды без клеток, для поправки на фон. Каждое из двух соединений добавляли в объеме 25 мкл, что приводило к конечному объему среды 100 мкл. Клетки обрабатывали совместно серийными разведениями 1:3 гидроксимочевины в присутствии фиксированной концентрации либо ORY-1001 (5 нМ), либо наполнителя (0,05%).

Затем определяли жизнеспособность с помощью окрашивания Alamar Blue, что подробно описано в разделе 1.1.2. Данные анализировали с помощью GraphPad PRISM®, версия 5.01 (фирма GraphPad Software, Inc., Ла-Холья, шт. Калифорния/США) для расчета наилучшей выбранной кривой и величин EC₅₀.

1.1.6 Комбинаторная обработка ORY-1001/As₂O₃

Клетки высевали с плотностью 2500 клеток/лунку в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды; на краях планшетов оставляли лунки, заполненные 100 мкл среды без клеток, для поправки на фон. Каждое из двух соединений добавляли в объеме 25 мкл, что приводило к конечному объему среды 100 мкл. Клетки обрабатывали совместно серийными разведениями 1:3 As₂O₃ в присутствии фиксированной концентрации либо ORY-1001 (5 нМ), либо наполнителя (0,05%).

Затем определяли жизнеспособность с помощью окрашивания Alamar Blue, что подробно описано в разделе 1.1.2. Данные анализировали с помощью GraphPad PRISM®, версия 5.01 (фирма GraphPad Software, Inc., Ла-Холья, шт. Калифорния/США) для расчета наилучшей выбранной кривой и величин EC₅₀.

1.2 Результаты

1.2.1 ORY-1001 в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 ORY-1001 (диапазон от 0,015 до 100 нМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. За исключением OCI-AML2, в изученных линиях клеток AML ORY-1001 индуцировал снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями), что характеризовалось величинами ЕС₅₀ в субнаномолярном диапазоне.

1.2.2 ATRA в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 ATRA (диапазон от 0,015 до 100 нМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1 (EC₅₀ = 1,7 нМ), MV (4; 11) (EC₅₀ = 2,8 нМ), HL-60 (EC₅₀ = 2,7 нМ), OCI-AML2 (EC₅₀ = 5,9 нМ), OCI-AML3 (EC₅₀ = 0,8 нМ) и MOLM-13 (ЕС₅₀ =4,8 нМ).

1.2.2.1 Комбинация ORY-1001/ATRA

Матричные обработки клеток MV (4; 11) и MOLM-13 ATRA (0,16-40 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 2А и 2Б.

В изученных условиях синергизм (CI<1) обнаружен между ORY-1001 и ATRA, при этом величина Fa превышала 0,5 для клеток MV (4; 11) (n=2) и 0,8 для клеток MOLM-13 (n=2).

1.2.3 ARA-C в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 ARA-C (диапазон от 0,15 до 1000 нМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток THP-1 (EC₅₀=251,7 нМ), MV (4; 11) (EC₅₀ = 198 нМ), HL-60 (EC₅₀ = 43,5 нМ), OCI-AML2 (EC₅₀ = 26,5 нМ), OCI-AML3 (EC₅₀ = 144,8 нМ), KASUMI-1 (EC₅₀ = 28,7нМ) и MOLM-13 (EC₅₀ = 78,5 нМ).

1.2.3.1 Комбинация ORY-1001/ARA-C

Матричные обработки клеток MV (4-11), OCI-AML3 и MOLM-13 ARA-C (6,25-1600 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 3А, 3Б и 3В.

В изученных условиях соединение ORY-1001 синергетически повышало ответ клеток MV (4; 11) на ARA-C при Fa>0,5 (n=1). При изучении на клетках OCI-AML3 и MOLM-13 обнаружен синергизм между ARA-C и ORY-1001 при Fa>0,7 и Fa>0,6 соответственно (n=2).

1.2.4 EPZ5676 в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как THP-1, MV( 4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 EPZ5676 (диапазон от 1,5 нМ до 10 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток MV (4; 11) (EC₅₀ = 16 нМ) и MOLM-13 (EC₅₀ = 44,7 нМ).

1.2.4.1 Комбинация ORY-1001/EPZ5676

Матричные обработки клеток MV(4-11) и MOLM-13EPZ5676 (1,25-320 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 4А и 4Б.

В изученных условиях обнаружен синергизм между ORY-1001 и EPZ56756 при Fa>0,4 для клеток MV (4; 11) (n=2) и Fa>0,3 для клеток MOLM-13 (n=2).

1.2.5 EPZ004777 в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как THP-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,2%), либо с серийными разведениями 1:3 EPZ004777 (диапазон от 2,5 нМ до 16,7 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток MV (4; 11) (EC₅₀ = 118 нМ) и MOLM-13 (ЕС₅₀ = 108,3 нМ).

1.2.6 SAHA в качестве индивидуальнрго агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 SAHA (диапазон от 1,5 нМ до 10 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML2, OCI-AML3, KASUMI-1 и MOLM-13 (EC₅₀ в диапазоне от 100-1000 нМ).

1.2.6.1 Комбинация ORY-1001/SAHA

Матричные обработки клеток MV (4-11) и MOLM-13 SAHA (6,25-1600 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 5А и 5Б.

В изученных условиях обнаружен синергизм между ORY-1001 и SAHA, для клеток MV (4; 11) величины Fa находились в диапазоне от 0,3 до 0,8 (n=2) MV (4; 11), а для клеток MOLM-13 Fa>0,4 (n=1).

1.2.7 Росилиностат в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 росилиностата (диапазон от 1,5 нМ до 10 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML2, OCI-AML3, KASUMI-1 и MOLM-13 (EC₅₀ в диапазоне от 0,5-3 мкМ).

1.2.7.1 Комбинация ORY-1001/росилиностат

Матричные обработки клеток MV (4-11), OCI-AML3 и MOLM-13 росилиностатом (15,6-4000 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 6А, 6Б и 6В.

В изученных условиях соединение ORY-1001 синергетически взаимодействовало с росилиностатом при Fa>0,6 для клеток MV (4; 11) (n=2) и при Fa>0,4 для клеток OCI-AML3 (n=2). Для клеток MOLM-13 обнаружен синергизм при Fa>0,8 (n=2).

1.2.8 Энтиностат в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,1%), либо с серийными разведениями 1:3 энтиностата (диапазон от 7,6 нМ до 50 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1 (ЕС₅₀ = 230 нМ), MV (4; 11) (EC₅₀ = 98,5 нМ), HL-60 (ЕС₅₀ = 42 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 106,5 нМ), OCI-AML3 (ЕС₅₀ = 55,2 нМ), KASUMI-1 (ЕС₅₀ = 167,5 нМ) и MOLM-13 (ЕС₅₀ = 52 нМ).

1.2.9 Азацитидин в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 азацитидина (диапазон от 15 нМ до 100 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1 (ЕС₅₀ = 2881,5 нМ), MV (4; 11) (ЕС₅₀ = 1112 нМ), HL-60 (ЕС₅₀ = 1812 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 1851,7 нМ), OCI-AML3 (ЕС₅₀ = 889,4 нМ), KASUMI-1 (ЕС₅₀ = 2281,7 нМ) и MOLM-13 (ЕС₅₀ = 322,8 нМ).

1.2.9.1 Комбинация ORY-1001/азацитидин

Матричные обработки клеток MV (4-11) и MOLM-13 азацитидином (9,5 нМ - 62,3 мкМ) и ORY-1001 (0,001-8 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 7А и 7Б.

В изученных условиях на обеих линиях клеток MV (4; 11) и MOLM-13 соединение ORY-1001 синергетически взаимодействовало с азацитидином при Fa>0,3 (n=2).

1.2.10 Децитабин в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 децитабина (диапазон от 1,5 нМ до 10 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1 (EC₅₀ = 95 нМ), MV (4; 11) (ЕС₅₀ = 79,5 нМ), HL-60 (EC₅₀ = 42,1 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 36 нМ), OCI-AML3 (ЕС₅₀ = 100,5 нМ), KASUMI-1 (ЕС₅₀ = 24 нМ) и d MOLM-13 (ЕС₅₀ =12,6 нМ).

1.2.10.1 Комбинация ORY-1001/децитабин

Матричные обработки клеток MV (4-11) и MOLM-13 децитабином (0,4-2430 нМ) и ORY-1001 (0,004-24,3 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 8А и 8Б.

В изученных условиях синер готическое действие между ORY-1001 и децитабином обнаружено при Fa>0,5 (n=2) для обеих линий клеток MV (4; 11) и MOLM-13.

1.2.11 Квизартиниб в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 квизартиниба (диапазон от 2,3 нМ до 15 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Из-за повышенной чувствительности диапазон для клеток MV (4; 11) устанавливали на уровне 0,0015-10 нМ, а для клеток MOLM-13 - 0,01-60 нМ. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток MV (4; 11) (ЕС₅₀ < 1 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 830 нМ) и MOLM-13 (EC₅₀ < 1 нМ).

1.2.11.1 Комбинация ORY-1001/квизартиниб

Матричные обработки клеток MV (4-11) и MOLM-13 квизартинибом (0,031-8 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 9А и 9Б.

В изученных условиях на клетках MV (4; 11) и MOLM-13 (обе линии несут мутацию FLT3-ITD) коэффициент совместного действия для комбинации ORY-1001/квизартиниб оказался ниже 1 (синергетическое взаимодействие) при Fa>0,2 (n=2).

1.2.12 АВТ737 в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 АВТ737 (диапазон от 0,15 нМ до 1 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток MV (4; 11) (ЕС₅₀ = 6,3 нМ), HL-60 (EC₅₀ = 113,4 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 14 нМ), KASUMI-1 (ЕС₅₀ = 124 нМ) и MOLM-13 (EC₅₀ = 25 нМ).

1.2.12.1 Комбинация ORY-1001/ABT737

Матричные обработки клеток MV(4-11) и MOLM-13 АВТ373 (0,3-80 нМ) и ORY-1001 (0,006-1,6 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 10А и 10Б.

Синергизм между ORY-1001 и АВТ737 обнаружен при Fa>0,7 и Fa>0,9 соответственно для клеток MV (4; 11) (n=2) и MOLM-13 (n=1).

1.2.13 Нутлин-3А в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста линий клеток AML, таких как ТНР-1, MV (4; 11), HL-60, OCI-AML3, KASUMI-1, OCI-AML2 и MOLM-13, их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,2%), либо с серийными разведениями 1:3 нутлина-3А (диапазон от 0,6 нМ до 4 мкМ) согласно методу, описанному в разделе 1.1.2. Снижение жизнеспособности более чем на 20% (по сравнению с обработанными наполнителем контролями) обнаружено для клеток ТНР-1 (ЕС₅₀ = 323,7 нМ), OCI-AML2 (ЕС₅₀ = 446,5нМ), OCI-AML3 (ЕС₅₀ = 659нМ) и MOLM-13 (ЕС₅₀ = 127,7 нМ).

1.2.13.1 Комбинация ORY-1001/нутлина-3А

Матричные обработки клеток MOLM-13 нутлином-3А (1,1-7290 нМ) и ORY-1001 (0,001-8,1 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 11.

В изученных условиях на клетках MOLM-13 соединение ORY-1001 обладало синергетическим взаимодействием с нутлином-ЗА при величинах Fa, превышающих 0,8 (n=2).

1.2.14 Комбинация ORY-1001/дасатиниб

Обработку клеток MV (4; 11) комбинацией дасатиниба (6 нМ - 40 мкМ) и ORY-1001 (0,006-40 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.4. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.4.1. Полученные результаты представлены на фиг. 12.

В изученных условиях на клетках MV (4; 11) соединение ORY-1001 обладало синергетическим взаимодействием с дасатинибом при величинах Fa от 0,4 до 0,9 (n=1).

1.2.15 Комбинация ORY-1001/JQ1

Обработку клеток MV (4; 11) комбинацией JQ1 (0,9-6000 нМ) и ORY-1001 (0,004-30 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.4. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 1.1.4.1. Полученные результаты представлены на фиг. 13.

В изученных условиях на клетках MV (4; 11) соединение ORY-1001 обладало синергетическим взаимодействием с JQ1 при величинах Fa от 0,6 до 0,9 (n=3).

1.2.16 Комбинация ORY-1001/гидроксимочевина

Обработку клеток MV (4; 11) серийными разведениями гидроксимочевины (0,076-500 нМ) осуществляли в присутствии либо ORY-1001 (5 нМ), либо наполнителя (ДМСО 0,05%) согласно методу, описанному в разделе 1.1.5. Полученные результаты представлены на фиг. 14.

В изученных условиях соединение ORY-1001 потенциировало ответ клеток MV (4; 11) на гидроксимочевину (n=1).

1.2.17 Комбинация ORY-1001/As₂O₃

Обработку клеток MV (4; 11) серийными разведениями As₂O₃ (0,039-10 нМ) осуществляли в присутствии либо ORY-1001 (5 нМ), либо наполнителя (ДМСО 0,05%) согласно методу, описанному в разделе 1.1.6. Полученные результаты представлены на фиг. 15.

В изученных условиях соединение ORY-1001 потенциировало ответ клеток MV (4; 11) на As₂O₃ (n=1).

Пример 2: Матричные анализы для определения синергизма между ORY-1001 и другими представляющими интерес соединениями при исследовании клетках MOLT4 (острый лимфоидный лейкоз)

Целью данного примера являлась оценка синергизма, имеющего место между ORY-1001 и другими терапевтическими агентами при исследовании на клетках MOLT4. В таблице 3 обобщены сведения о соединениях, тестируемых в комбинированной терапии, и применяемых линиях клеток.

*Известно также как риколиностат и ACY-1215

2.1 План эксперимента

2.1.1 Линии клеток и условия культивирования

Клетки MOLT4 поддерживали в среде RPMI, содержащей 10% FBS, при 37°С во влажной камере в атмосфере с контролируемым содержанием 5% CO₂. Замораживание и оттаивание клеток осуществляли согласно рекомендациям АТСС. Генетический профиль применяемых линий клеток представлен в таблице 4.

2.1.2 Анализы жизнеспособности (10 дней)

Воздействия ORY-1001 на жизнеспособности клеток MOLT-4 оценивали после обработки в течение 10 дней, поскольку обработка в течение более короткого периода времени (96 ч) не влияла на жизнеспособность указанной линии клеток (данные не представлены).

Клетки MOLT4 высевали с оптимальной ранее определенной плотностью (5000 клеток/лунку) в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды. По три лунки резервировали для каждого экспериментального условия; добавляли также контроли, содержащие только среду и обработанные наполнителем для поправки на фон и стандартизации соответственно. После посева к клеткам добавляли 50 мкл среды, содержащей 8 серийных разведении (1:3) ORY-1001 (диапазон 0,015-100 нМ). Затем клетки инкубировали в течение 6 дней при 37°С в атмосфере с контролируемым содержанием 5% СО₂. На шестой день к клеткам добавляли 100 мкл среды с серийными разведениями ORY-1001 (указанными выше) или наполнитель. Среду без соединения (100 мкл) добавляли для контроля фона.

После 4 дополнительных дней инкубации жизнеспособность клеток оценивали с помощью окрашивания Alamar Blue^® согласно методу, подробно описанному в разделе 1.1.2.

2.1.3 Анализ жизнеспособности на матрице 9×9 с предварительной обработкой 100 нМ ORY-1001

Каждый матричный анализ осуществляли на 2 планшетах согласно методу, описанному в разделе 1.1.3. Матричный анализ адаптировали согласно особенностям, указанным в разделе (2.1.2) выше.

Клетки MOLT4 высевали с оптимальной плотностью (5000 клеток/лунки, как определено ранее) в 96-луночные планшеты с 50 мкл среды. На краях планшета лунки заполняли только 100 мкл среды для поправки на фон. Для начальной предварительной обработки ORY-1001 в клетки добавляли 50 мкл среды, что приводило к конечному объему среды 100 мкл. Предварительную обработку в течение 6 дней осуществляли с использованием диапазона концентраций ORY-1001, полученного с помощью 8 стадий разведении 1:2, созданного так, чтобы величина ЕС₅₀ ORY-1001 находилась в центре вертикального ряда на матрице. Для соединений, которые тестировали в более широком диапазоне концентраций (децитабин и азацитидин), серийные разведения осуществляли в соотношении 1:3. Затем клетки инкубировали в течение 6 дней в атмосфере с контролируемым содержанием 5% CO₂.

На шестой день в каждую лунку добавляли дополнительно 100 мкл среды, содержащей серийные разведения как ORY-1001, так и представляющего интерес соединения (конечный объем 200 мкл). Как описано выше, для поправки на фон добавляли также 100 мкл среды без клеток в лунки на краях планшета (конечный объем 200 мкл). Как продемонстрировано на фиг. 1, матрицу создавали с использованием возрастающих концентраций ORY-1001 слева направо и возрастающих концентраций представляющего интерес соединения сверху вниз. Первый и последний ряды планшета №1 повторяли на планшете №2 (что обозначено красными стрелками на фиг. 1) для подтверждения воспроизводимости данных на двух планшетах. Протестированные концентрации обоих соединений покрывали 256-кратный диапазон, полученный с помощью 8 стадий разведении 1:2, созданный так, чтобы величины EC₅₀ обоих соединений находились в центре горизонтального и вертикального ряда на матрице (EC₅₀ ORY-1001 и другого соединения соответствовали 5-ой лунке справа и снизу, как продемонстрировано на фиг. 1). Для соединений, которые тестировали в более широком диапазоне концентраций (децитабин, азацитидин, нутлин-3А), серийные разведения осуществляли в соотношении 1:3. На этом этапе клетки инкубировали в течение еще 96 ч с обоими соединениями.

После совместной обработки в течение 4 дней ORY-1001 и представляющим интерес соединением (день 10) маточный раствор Alamar Blue разводили в соотношении 1:20 в культуральной среде и после инкубации в течение 3 ч определяли флуоресценцию с помощью планшет-ридера TECAN Infinity 2000 (фирма Tecan Group Ltd., Меннедорф, Швейцария; длина волны возбуждения 540-570 нм, длина волны испускания 580-610 нм). Для каждого условия рассчитывали поправку на фон по флуоресценции в содержащих только среду контролях. Матричные анализы осуществляли с использованием двух технических повторностей.

2.1.3.1 Анализы жизнеспособности на матрице 9×9 с предварительной обработкой 100 нМ ORY-1001 (анализ данных)

Анализ данных осуществляли согласно методу, описанному в разделе 1.1.3.1.

2.1.3.2 Определение выбросов с помощью Calcusyn

Выбросы определяли с помощью программного обеспечения Calcusyn согласно методу, описанному в разделе 1.1.3.2.

2.2 Результаты

2.2.1 ORY-1001 в качестве индивидуального агента

После определения оптимальных условий для роста клеток MOLT4 их инкубировали либо с наполнителем (ДМСО 0,05%), либо с серийными разведениями 1:3 ORY-1001 (диапазон от 0,015 до 100 нМ) согласно методу, описанному в разделе 2.1.2. В изученных условиях снижение жизнеспособности при использовании ORY-1001 в наиболее высокой концентрации (100 нМ) составляло более 20% (по сравнению с наполнителями), что характеризовалось величиной ЕС₅₀ в субнаномолярном диапазоне.

2.2.2 Комбинация ORY-1001/ARA-C

Матричную обработку клеток MOLT-4 ARA-C (6,25-1600 нМ) и ORY-1001 (0,08-20 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 16.

В изученных условиях на клетках MOLT4 соединение ORY-1001 синергетически повышало действия ARAC при величинах Fa, превышающих 0,2 (n=2).

2.2.3 Комбинация ORY-1001/SAHA

Матричную обработку клеток MOLT-4 SAHA (12,5-3200 нМ) и ORY-1001 (0,08-20 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 17.

В изученных условиях обнаружено синергетические взаимодействие между ORY-1001 и SAHA при величинах Fa, составляющих от 0,3 до 0,8 (n=2).

2.2.4 Комбинация ORY-1001/росилиностат

Матричную обработку клеток MOLT-4 росилиностатом (31,25-8000 нМ) и ORY-1001 (0,08-20 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 18.

В изученных условиях, аналогично установленному ранее для SAHA, синергизм между ORY-1001 и росилиностатом обнаружен при величинах Fa, составляющих от 0,2 до 0,6 (n=1).

2.2.5 Комбинация ORY-1001/энтиностат

Матричную обработку клеток MOLT-4 энтиностатом (15,6-4000 нМ) и ORY-1001 (0,08-20 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 19.

В изученных условиях, аналогично установленному ранее для SAHA, синергизм между ORY-1001 и энтиностатом обнаружен при величинах Fa, составляющих от 0,2 до 0,9 (n=2).

2.2.6 Комбинация ORY-1001/азацитидин

Матричную обработку клеток MOLT-4 азацитидином (13,72 нМ - 90 мкМ) и ORY-1001 (0,012-81 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 20.

В изученных условиях синергизм между азацитидином и ORY-1001 обнаружен только в узком диапазоне величин Fa, составляющем от 0,2 до 0,4 (n=2).

2.2.7 Комбинация ORY-1001/децитабин

Матричную обработку клеток MOLT-4 децитабином (1,5 нМ - 10 мкМ) и ORY-1001 (0,012-81 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 21.

В изученных условиях установлено, что действие децитабина сильно синергизировалось ORY-1001 в широком диапазоне величин Fa (величины Fa от 0,1 до 0,9; n=1).

2.2.8 Комбинация ORY-1001/ABT737

Матричную обработку клеток MOLT-4 ABT737 (19,53-5000 нМ) и ORY-1001 (0,008-20 нМ) осуществляли согласно методу, описанному в разделе 2.1.3. Метод анализа данных и расчета коэффициентов совместного действия описан в разделе 2.1.3.1. Полученные результаты представлены на фиг. 22.

В изученных условиях на клетках MOLT4 синергизм между ORY-1001 и ABT737 обнаружен при величинах Fa, превышающих 0,6 (n=2).

Группа изобретений относится к области лечения гиперпролиферативных нарушений, прежде всего гематологических злокачественных заболеваний. Заявлена комбинация для лечения гиперпролиферативного нарушения, содержащая соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль и терапевтический агент, выбранный из третиноина, цитарабина, пинометостата, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, нутлина-3A, дасатиниба, JQ1 и их фармацевтически приемлемых солей. Заявлены фармацевтическая композиция и набор для лечения гиперпролиферативного нарушения, содержащие указанную комбинацию, а также способ лечения гематологических злокачественных заболеваний и применение комбинации для приготовления лекарственного средства. Изобретения обеспечивают синергетический терапевтический эффект. 7 н. и 23 з.п. ф-лы, 22 ил., 4 табл., 2 пр.

1. Комбинация для лечения гиперпролиферативного нарушения, содержащая соединение формулы (I):

или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько терапевтических агентов, выбранных из третиноина, цитарабина, пинометостата, вориностата, риколиностата, энтиностата, децитабина, азацитидина, квизартиниба, нутлина-3A, дасатиниба, JQ1 и их фармацевтически приемлемых солей.

2. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и третиноин или его фармацевтически приемлемую соль.

3. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и цитарабин или его фармацевтически приемлемую соль.

4. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и пинометостат или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и вориностат, риколиностат, энтиностат или их фармацевтически приемлемую соль.

6. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.

7. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль.

8. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и квизартиниб или его фармацевтически приемлемую соль.

9. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и нутлин-3A или его фармацевтически приемлемую соль.

10. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и дасатиниб или его фармацевтически приемлемую соль.

11. Комбинация по п. 1, содержащая соединение формулы (I):

или егo фармацевтически приемлемую соль и JQ1 или его фармацевтически приемлемую соль.

12. Комбинация по одному из пп. 1-11, содержащая соединение формулы (I) в виде дигидрохлоридной соли.

13. Фармацевтическая композиция для лечения гиперпролиферативного нарушения, содержащая комбинацию по одному из пп. 1-12 и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

14. Набор для лечения гиперпролиферативного нарушения, содержащий контейнер и комбинацию по одному из пп. 1-12.

15. Способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, где способ включает введение в синергетически эффективном количестве комбинации по одному из пп. 1-12 указанному пациенту.

16. Способ лечения гематологического злокачественного заболевания у пациента, который нуждается в этом, где способ включает введение в синергетически эффективном количестве фармацевтической композиции по п. 13 указанному пациенту.

17. Применение комбинации по одному из пп. 1-12 для лечения гематологического злокачественного заболевания.

18. Применение комбинации по одному из пп. 1-12 для приготовления лекарственного средства для лечения гематологического злокачественного заболевания.

19. Комбинация по одному из пп. 1-12, фармацевтическая композиция по п. 13 или набор по п. 14, где гиперпролиферативное нарушение представляет собой гематологическое злокачественное заболевание.

20. Набор по п. 19, способ по п. 15 или 16, применение по п. 17 или 18, комбинация по п. 19 или фармацевтическая композиция по п. 19, где гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание.

21. Набор по п. 20, способы по 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз.

22. Набор по п. 20, способы по п. 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где миелоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой хронический миелогенный лейкоз.

23. Набор по п. 20, способы по п. 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где миелоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелодиспластический синдром.

24. Набор по п. 20, способы по п. 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где миелоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелопролиферативное заболевание.

25. Набор по п. 20, способы по п. 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где миелопролиферативное заболевание выбирают из группы, состоящей из миелофиброза, острого бифенотипического лейкоза, полицитемии истинной, эссенциального тромбоцитоза и хронического эозинофильного лейкоза/гиперэозинофильного синдрома.

26. Набор по п. 20, способы по п. 20, применения по п. 20, комбинация по п. 20 или фармацевтическая композиция по п. 20, где миелоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой миелоидное гематологическое злокачественное заболевание с транслокацией или реаранжировками, включающими MLL, AF9, AF4, AF10, AML1, ETO, CALM; или мутацией в NPM1 или Notch1, или сверхэкспрессией LSD1.

27. Набор по п. 19, способ по п. 15 или 16, применение по п. 17 или 18, комбинация по п. 19 или фармацевтическая композиция по п. 19, где гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание.

28. Набор по п. 27, способы по п. 27, применения по п. 27, комбинация по п. 27 или фармацевтическая композиция по п. 27, где лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый лимфобластный лейкоз.

29. Набор по п. 27, способы по п. 27, применения по п. 27, комбинация по п. 27 или фармацевтическая композиция по п. 27, где лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание представляет собой лимфоидное гематологическое злокачественное заболевание с транслокацией или реаранжировками, включающими MLL, AF9, AF4, AF10, AML1, ETO, CALM; или мутацией в NPM1 или Notch1, или сверхэкспрессией LSD1.

30. Способ по одному из пп. 15, 16 или 20-29, в котором пациент представляет собой человека.