ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ Российский патент 2022 года по МПК A61K35/51 A61P27/02 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к офтальмологической композиции для лечения патологий роговицы.

Уровень техники

Лекарственные препараты для лечения патологий роговицы и других болезненных состояний глаза известны.

Например, искусственные слезы представляют собой синтетические композиций, задача которых заключается в поддержании увлажнения поверхности глаза. Они находятся в жидкой или гелевой форме, включающей гиалуроновую кислоту, гелеобразующий полимер, такой как карбоксиметилцеллюлоза, или другие аналогичные производные и соли. Они также могут включать жиры и фосфолипиды для того, чтобы имитировать композицию жидкости мейбомиевых желез.

Кроме того, были предложены офтальмологические композиции, включающие сыворотку крови; сыворотку крови определяют как жидкую часть крови, лишенную фибриногена.

В частности, использование аутологичной сыворотки крови считается предпочтительным для более высокой совместимости и снижает риск передачи патогенных микроорганизмов по сравнению с аллогенной сывороткой.

Однако имеется ряд недостатков из-за присутствия измененных медиаторов воспаления, таких как провоспалительные цитокины, и аутоантител, которые могут присутствовать, тем самым пациент подвергается риску воздействия возможных вредных веществ.

Кроме того, в ряде случаев сбор образца крови может быть затруднен, например, от пожилых пациентов или от пациентов-детей.

В последнее время также было предложено применять сыворотку пуповинной крови для получения глазных капель.

В публикации предшествующего уровня техники Kyung-Chul Yoon et al. (Cornea, 2006) было описано эффективное применение глазных капель с сывороткой пуповинной крови для лечения 31 пациента, пораженного тяжелым синдромом сухого глаза.

В работе Han-Jin Oh et al. (Current Eye Research, 2012) раскрыли эксперименты, проведенные с глазными каплями, включавшими сыворотку пуповинной крови, в модели на мышах с химическим ожогом глаз.

В работе Versura et al. (Cornea, April 2013) раскрыли контроль качества и способы получения стандартизированных глазных капель из сыворотки пуповинной крови для применения у пациентов, страдающих от патологий роговицы.

Цель настоящего изобретения заключается в обеспечении альтернативного источника биологического материала для получения офтальмологической композиции для лечения патологических состояний глаза.

Раскрытие изобретения

Было неожиданно обнаружено, что плазма из пуповинной крови может быть применена в качестве источника для получения офтальмологических композиций для лечения патологий роговицы.

Объекты изобретения

Первый аспект настоящего изобретения раскрывает применение плазмы из пуповинной крови в качестве лекарственного средства для лечения патологий роговицы.

В частности, плазму применяют для медицинских или ветеринарных приложений.

Другой аспект настоящего изобретения раскрывает офтальмологические композиции, включающие плазму пуповинной крови.

Еще один аспект настоящего изобретения раскрывает способ получения лекарственного препарата, включающего плазму пуповинной крови.

Осуществление изобретения

В первом воплощении раскрыто применение плазмы из пуповинной крови в качестве лекарственного средства для лечения патологий роговицы.

В частности, лекарственное средство может быть применено для млекопитающих и, предпочтительно, для людей.

В альтернативном воплощении изобретения лекарственное средство также может быть применено для лечения млекопитающих, не представляющих собой человека, предпочтительно выбираемых из группы, включающей собак, кошек и лошадей.

В настоящем изобретении плазму определяют как жидкую часть крови.

В настоящем изобретении патологии роговицы включают, например: синдром сухого глаза; болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD); повреждения, вызванные химическими ожогами; нейротрофический кератит; синдром Шегрена; системный склероз; ревматоидный артрит и аутоиммунная реакция.

В предпочтительном воплощении синдром сухого глаза сопровождается одним или несколькими другими болезненными состояниями, такими как: уменьшение слезной жидкости; дефицит слезоточивости; ксероз глаза; сухой кератоконъюнктивит; синдром Стивенса–Джонсона; пемфигоид глаза; маргинальный блефарит; аллергический конъюнктивит; изъязвление, или может быть следствием вирусного конъюнктивита, хирургического воздействия на роговицу, включая лазерный in situ кератомилез (LASIK), операцию по удалению катаракты, ношения контактных линз, работы с терминалом видеодисплея или, возможно, связан с возрастом.

Источником плазмы согласно настоящему изобретению служит кровь, оставшаяся в плаценте после родов.

В случае если изобретение применяют к человеку, источник плазмы представляет собой пуповинную кровь, оставшуюся в плаценте после родов.

Для применения в лечении патологий роговицы она должна быть обработана в соответствии с одним из воплощений изобретения.

В частности, сначала изолированный образец пуповинной крови собирают и приводят в контакт с антикоагулянтом или смесью антикоагулянтов.

В соответствии с предпочтительным воплощением указанный антикоагулянт выбирают из группы, включающей цитрат, фосфат, декстрозу.

В соответствии с предпочтительным воплощением, смесь включает цитрат, фосфат и декстрозу (известна как раствор CPD).

Более конкретно, раствор CPD может иметь следующий состав:

Компонент Количество
(г на 100 мл смеси антикоагулянтов) Цитрат натрия дигидрат 2,63 Цитрат натрия гидрат 0,327 Мононатрия дигидрат фосфат 0,251 Декстроза моногидрат 2,55 Вода для инъекций q.b. до 100 мл

Количества указанных антикоагулянтов или смеси антикоагулянтов составляют примерно 10-60% (объем/объем) композиции.

В предпочтительном воплощении количества указанного антикоагулянта или смеси антикоагулянтов составляют примерно 15 или 20 или 25 или 30 или 35 или 40 или 45 или 50 или 55% (объем/объем) и, еще более предпочтительно, примерно 50% (объем/объем).

Затем композицию подвергают центрифугированию.

В соответствии с первым воплощением изобретения, центрифугирование выполняют при скорости, равной примерно 1500-2500 g, предпочтительно, примерно 1700-2300 g и, еще более предпочтительно, примерно 1900-2100 g.

В предпочтительном воплощении, указанную стадию выполняют в течение примерно 10-20 минут, предпочтительно, примерно 13-17 минут и, еще более предпочтительно, примерно 14-16 минут.

Затем супернатант плазмы, из которого получают офтальмологические композиции изобретения, переносят в пустой мешок (имеющий подходящие свойства для хранения и для содержания такого продукта).

Например, препарат плазмы пуповинной крови предпочтительно разбавляют до концентрации эпидермального фактора роста (EGF), равной примерно 0,10-0,20 нг/мл.

В предпочтительном воплощении, разбавление выполняют для того, чтобы получить конечную концентрацию EGF, равную примерно 0,15 нг/мл.

В приведенных выше конечных концентрациях учитывают разбавление, которое происходит в собранном образце в связи с добавлением препарата антикоагулянта.

Указанное разбавление предпочтительно находится в диапазоне от 1:2 до 1:1,3.

В соответствии с альтернативным воплощением, получение образца плазмы представляет собой двухстадийный способ, включающий, перед описанной выше стадией, предварительное центрифугирование.

В частности, указанную предварительную стадию выполняют при скорости примерно 100-400 g, предпочтительно, примерно 120-350 g и более предпочтительно, примерно 150-250 g.

В предпочтительном воплощении стадию центрифугирования выполняют в течение примерно 5-20 минут, предпочтительно, примерно 7-15 минут и, еще более предпочтительно, примерно 9-11 минут.

В качестве преимущества альтернативный двустадийный способ позволяет получить не только плазму пуповинной крови, но также концентрат тромбоцитов, подходящий для получения тромбоцитарного геля пуповинной крови.

Препарат, полученный в соответствии с раскрытыми способами может быть использован для лечения патологий роговицы, таких как, например, синдром сухого глаза, болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD), повреждения, вызванные химическими ожогами, нейротрофический кератит, синдром Шегрена, системный склероз, ревматоидный артрит и аутоиммунная реакция.

В частности, он может быть предназначен для людей и млекопитающих, не представляющих собой человека, таких как, например, кошки, собаки и лошади.

Следовательно, настоящее изобретение также может найти применение в области ветеринарии.

В соответствии с дополнительным воплощением изобретение обеспечивает композиции для лечения патологий роговицы.

В частности, указанные композиции могут быть изготовлены в виде глазных капель, мази, спрея или других подходящих композиций.

В предпочтительном воплощении, офтальмологические композиции расфасованы в виде однократных доз, каждая из которых подходит для самостоятельного введения.

Для этого предпочтительно готовят дозы препарата плазмы, равные примерно 2 мл, особенно для глазных капель.

Способ получения офтальмологической композиции изобретения включает подходящие начальные стадии перед центрифугированием или предварительным центрифугированием.

Фактически, необходимо выбрать доноров, и должны быть выполнены тесты на образцах для проверки на отсутствие патологий и/или на наличие специфических маркеров.

Например, должны быть проведены тесты для идентификации маркеров сифилиса, ВИЧ, вируса гепатита С, вируса гепатита В, бактерий и грибов.

В соответствии с предпочтительным воплощением изобретения, фактически, образец пуповинной крови, который применяют в качестве источника для получения офтальмологических композиций изобретения, представляет с собой образец, который не подходит для гемопоэтической трансплантации.

В частности, после сбора образца пуповинной крови и исключения наличия стандартных критериев, которые запрещали бы клиническое применение образца, проверяют количество биологических компонентов и затем, если общее количество ядросодержащих клеток (применяемое вместо количества гемопоэтических стволовых клеток) недостаточно для целей гемопоэтической трансплантации, образец обрабатывают в соответствии с приведенным выше описанием.

В частности, число гематопоэтических стволовых клеток считается недостаточным для целей трансплантации, если общее количество ядросодержащих клеток перед обработкой ниже 1000-1500 x 10⁶.

В любом случае, предпочтительно, чтобы образец пуповинной крови, обрабатываемый в соответствии с настоящим изобретение, был равен, по меньшей мере, 40-50 мл.

В соответствии с дополнительным воплощением изобретения раскрывают применение плазмы пуповинной крови при лечении патологий роговицы у млекопитающих, не представляющих собой человека.

Для указанной цели пуповинную кровь получают от млекопитающего, не представляющего собой человека, которого в предпочтительном воплощении выбирают из группы, включающей собаку, кошку и лошадь.

Для получения указанных композиций может быть применен тот же раскрытый выше способ.

Пример

Состав глазной композиции из плазмы пуповинной крови

Образец пуповинной крови человека собирали у подходящего донора в мешок, содержащий антикоагулянт:

Компонент Количество
(г на 100 мл) Цитрат натрия дигидрат 2,63 Цитрат натрия гидрат 0,327 Мононатрия дигидрат фосфат 0,251 Декстроза моногидрат 2,55 Вода для инъекций q.b. до 100 мл

После проверки того, что присутствующих биологических компонентов недостаточно для гемопоэтической трансплантации, образец подвергали первому центрифугированию при низкой скорости (220 g в течение 10-ти минут).

Затем отделяли эритроциты, и супернатант плазмы, обогащенный тромбоцитами, подвергали центрифугированию при высокой скорости (2000 g в течение 15-ти минут).

Обогащенную тромбоцитами фракцию отделяли и в бедной тромбоцитами фракции плазмы проверяли концентрацию EGF.

Разбавление образца проводили до конечной концентрации EGF, равной 0,15 нг/мл.

Аликвоты, по 2 мл каждая, подготавливали для применения.

Преимущества предлагаемого изобретения будут сразу видны из приведенного далее описания.

В частности, плазма пуповинной крови представляет собой на удивление превосходный биологический источник факторов роста, что способствует неожиданному увеличению скорости заживления.

В дополнение к этому, таким образом можно избежать сбора периферической аутологичной крови от пациентов.

Соответственно, многие проблемы, связанные с плохим соблюдением некоторыми категориями пациентов инструкций по приему препарата, успешно преодолеваются.

В качестве дополнительного преимущества настоящего изобретения препарат глазных капель или другие офтальмологические композиции из плазмы пуповинной крови будет полностью и лучше интегрирован в ежедневные процедуры в больницах.

Фактически, собранная пуповинная кровь от донорства может служить лишь в ограниченной степени для целей трансплантации, потому что только в 10% случаев количество гемопоэтических стволовых клеток в образце делает его подходящим для лечения заболеваний крови.

Поэтому важное преимущество настоящего изобретения заключается в возможности использования образцов крови, которые, в противном случае, остались бы в 90% случаев неиспользованными.

Еще одно важное преимущество настоящего изобретения заключается в том, что оно не требует модификации существующих протоколов сбора образцов, что, с другой стороны, необходимо для сбора и обработки образов сыворотки.

В частности, могут быть использованы условия, включающие применение известных мешков, включающих антикоагулянты.

Кроме того, способ получения раскрытого образца плазмы может, в то же время, позволить получить препарат тромбоцитарного геля пуповинной крови, представляющий собой продукт, который может быть использован для других полезных целей.

Как раскрыто выше, изобретение может найти применение для лечения патологий как в области медицины, так и области ветеринарии.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к офтальмологии. Применение изолированной плазмы пуповинной крови в присутствии антикоагулянта в качестве офтальмологической композиции для лечения патологий роговицы. Способ получения офтальмологической композиции включает стадию контакта образца изолированной пуповинной крови с антикоагулянтом или смесью антикоагулянтов, стадию ионного центрифугирования этой смеси с получением препарата надосадочной плазмы пуповинной крови, и далее получение офтальмологической композиции. 3 н. и 17 з.п. ф-лы., 2 табл., 1 пр.

1. Применение изолированной плазмы пуповинной крови в присутствии антикоагулянта в качестве офтальмологической композиции для лечения патологий роговицы.

2. Применение по п. 1, где в офтальмологической композиции концентрация эпидермального фактора роста (EGF) составляет 0,10-0,20 нг/мл, предпочтительно концентрация EGF равна 0,15 нг/мл.

3. Применение по п. 1 или 2, где офтальмологическая композиция представляет собой лекарственное средство для лечения патологий роговицы у людей.

4. Применение по п. 1 или 2, где офтальмологическая композиция представляет собой лекарственное средство для лечения патологий роговицы у млекопитающих, не являющихся человеком.

5. Применение по п. 4, в котором указанное млекопитающее, не являющееся человеком, выбирают из группы, включающей кошку, собаку и лошадь.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где указанные патологии роговицы включают синдром сухого глаза, болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD), повреждения, вызванные химическими ожогами, нейротрофический кератит, синдром Шегрена, системный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунную реакцию.

7. Офтальмологическая композиция для лечения патологий роговицы, включающая антикоагулянт в количестве 10-60 об.% и изолированную плазму пуповинной крови – остальное, при этом указанный антикоагулянт выбирают из группы, включающей: цитрат, фосфат, декстрозу или их смесь.

8. Офтальмологическая композиция по п. 7, в которой указанный антикоагулянт имеет следующий состав в г на 100 мл смеси: цитрат натрия дигидрат - 2,63, цитрат натрия гидрат - 0,327, мононатрия дигидрат фосфат - 0,251, декстроза моногидрат - 2,55, вода для инъекций до 100 мл.

9. Офтальмологическая композиция по п. 7 или 8, в которой количество указанного антикоагулянта равно 15, или 20, или 25, или 30, или 35, или 40, или 45, или 50, или 55 об.%, более предпочтительно 50 об.%.

10. Офтальмологическая композиция по любому из пп. 7-9, в которой концентрация EGF составляет 0,10-0,20 нг/мл, предпочтительно концентрация EGF равна 0,15 нг/мл.

11. Офтальмологическая композиция по любому из пп. 7-10, объем которой составляет 1,5-2,5 мл, предпочтительно 2 мл.

12. Офтальмологическая композиция по любому из пп. 7-11 в качестве лекарственного средства при лечении патологий роговицы у людей.

13. Офтальмологическая композиция по любому из пп. 7-11 в качестве лекарственного средства при лечении патологий роговицы у млекопитающих, не являющихся человеком.

14. Офтальмологическая композиция по п. 13, в которой указанное млекопитающее, не являющееся человеком, выбирают из группы, включающей кошку, собаку и лошадь.

15. Офтальмологическая композиция по любому из пп. 7-14, в которой указанные патологии роговицы включают синдром сухого глаза, болезнь «трансплантат против хозяина» (GVHD), повреждения, вызванные химическими ожогами, нейротрофический кератит, синдром Шегрена, системный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунную реакцию.

16. Способ получения офтальмологической композиции по любому из пп. 7-15, включающий стадию контакта образца изолированной пуповинной крови с антикоагулянтом или смесью антикоагулянтов, стадию ионного центрифугирования этой смеси с получением препарата надосадочной плазмы пуповинной крови, и далее получение офтальмологической композиции.

17. Способ по п. 16, в котором ионное центрифугирование выполняют при скорости 1500-2500 g, предпочтительно 1700-2300 g, более предпочтительно 1900-2100 g, в течение 10-20 минут, предпочтительно 13-17 минут, более предпочтительно 14-16 минут.

18. Способ по п. 16 или 17, в котором ионному центрифугированию дополнительно предшествует предварительная стадия центрифугирования при скорости вращения 100-400 g, предпочтительно, 150-350, более предпочтительно, 150-250 g, в течение 5-20 минут, предпочтительно 7-15 минут, более предпочтительно 9-11 минут.

19. Способ по любому из пп. 16-18, в котором концентрация EGF офтальмологической композиции составляет 0,10-0,20 нг/мл, предпочтительно EGF равна 0,15 нг/мл.

20. Способ по любому из пп. 16-19, дополнительно включающий перед стадией ионного центрифугирования или стадией предварительного центрифугирования стадию отбора образцов изолированной пуповинной крови, которая включает проверку общего количества ядросодержащих клеток вместо количества гемопоэтических стволовых клеток, подходящих для трансплантации и, необязательно, тестирование на наличие маркеров сифилиса, ВИЧ, вируса гепатита С, вируса гепатита В, бактерий, грибов.