Противовирусное средство в жидкой форме и способ его приготовления Российский патент 2022 года по МПК A61K9/08 A61K38/21 A61K47/02 A61K47/10 A61K47/18 A61K47/58 A61P31/12 

Изобретение относится к фармакологии, а именно к технологии приготовления интерферонсодержащих композиций, способных сохранять свою биологическую активность, которые могут найти применение как лекарства для интраназального применения, например, в виде капель или спрея.

Широко известно использование препаратов интерферонов как природного, так и рекомбинантного или генно-инженерного происхождения. Препараты интерферонов обладают не только противовирусной активностью, но и выраженным иммуномодулирующим действием, обуславливающим целый ряд положительных сдвигов в гомеостазе, противоопухолевым эффектом и т.д. (RU 2057544).

В нашей стране с 70-х годов в практике здравоохранения для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ нашел широкое применение природный человеческий лейкоцитарный интерферон, сырьем для изготовления которого служат дорогостоящие лейкоциты донорской крови (RU 2033180, RU 2108804).

Также известно противовирусное средство для интраназального применения (RU 2095081), содержащее человеческий интерферон, биологически совместимый полимер -полиглюкин 6%-ный раствор и буферную смесь при следующем содержании компонентов в 1 мл раствора:

Интерферон, ME - (1-6,6)⋅106

Биологически совместимый полимер (полиглюкин) - 5-30

Буферная смесь - до рН раствора 7,0-7,6.

Препараты лейкоцитарного происхождения, как любые другие препараты крови, потенциально небезопасны с точки зрения контаминации вирусами (гепатитов, герпесвирусной, цитомегаловирусной инфекций, СПИДа, медленных инфекций и т.д.), а также весьма дороги в производстве.

В связи с этим все шире в практике здравоохранения используются рекомбинантные или генно-инженерные препараты интерферонов, как наиболее очищенные - степень очистки не менее 98% (ФС 42-3279-96; ВФС 42-2989-97; RU 2073522)

Эти препараты результативны в онкологической практике при парентеральном применении массивных доз (от 3 до 10 и более миллионов ME в сутки) длительными и многократными курсами. Но такие дозировки вызывают зачастую побочные эффекты - нарушение кроветворения, угнетения иммунной системы, образование антител к интерферону и др.

Однако накопленный в последние годы опыт клинического применения интерферонов свидетельствуют о возможности повышения их эффективности применением соответствующих лекарственных форм (с учетом патогенетических особенностей конкретных заболеваний) с целью обеспечения высоких уровней интерферона в очаге вирусного поражения. При этом интерферон оказывает противовирусное, иммуномодулирующее действие, но не проявляется ни цитастатический, ни другие побочные эффекты. Это обуславливает целесообразность разработки различных лекарственных форм интерферонов для местного применения (свечи, мази, капли, спреи, аэрозоли и др.)

В настоящее время одной из сложнейших проблем белоксодержащих медицинских препаратов, в частности, препаратов интерферона, является их стабильность.

Подобно другим протеинам интерферон подвергается, особенно в водных растворах, модификации и химическому разложению за счет протекания процессов протеолиза, окисления, дисульфидного обмена и т.д. Кроме того на его биологическую активность негативно воздействуют такие факторы, как агрегация, осаждение и адсорбция.

Для предотвращения снижения активности интерферона в состав лекарственной формы вводят различные стабилизирующие добавки.

Известен лиофилизированный препарат с иммуномодулирующей и противовирусной активностью "Неоферон", включающий рекомбинантный интерферон альфа-2 человека, гибридный белок Т-ФНО-Т, рекомбинантный интерферон гамма, стабилизирующую добавку, содержащую плазмозамещающий раствор полиглюкин, солевую буферную систему с рН 7,0-7,2 и воду апирогенную (RU 2129878). Препарат рекомендуется хранить при +4°С.

Недостатком препарата является то, что стабилизирующий состав не обеспечивает длительное хранение препарата в жидком виде, а также необходимость хранения при достаточно низких температурах - не выше +4°С.

Известен препарат на основе рекомбинантного альфа-2 интерферона человека для инъекций в сухой лиофилизированной форме, включающий субстанцию рекомбинантного альфа-2 интерферона человека, солевую буферную систему и стабилизирующую добавку, содержащую плазмозамещающий раствор, согласно изобретению дополнительно содержит многоатомный спирт и мочевину или ЭДТА, а в качестве плазмозамещающего раствора - полиглюкин, или реополиглюкин, или гемодез, или смесь указанных компонентов в любых соотношених. Хранение данного препарата возможно при комнатной температуре (RU 2236866).

Известна композиция препарата интерферона, стабильного для хранения как в сухом, так и в жидком виде, в том числе после приготовления раствора для инъекций, глазных капель жидких аэрозолей и т.п. Данная композиция содержит на 1-100 млн ME интерферона-2 0,05-0,1 мг ацетата - токоферола, 0,02-10 мг органической кислоты и буферобразующие соли, обеспечивающие в водном растворе рН 7,4. В качестве органической кислоты используют органические кислоты, способные кристаллизоваться без разложения, такие как аскорбиновая, лимонная, глициновая, мочевая, янтарная и т.п. В качестве буферного раствора используют 1М фосфатный, ацетатный, карбонатный или трис буферные растворы (RU 2218934).

Недостатками известных композиций выступают сложный набор компонентов, в том числе консервантов (кислот, мочевины, спиртов), включаемых в состав для обеспечения стабильности противовирусных свойств жидких форм и наличие других аллергенных вспомогательных веществ (ацетата - токоферола, ацетатных буферов, плазмозамещающих растворов и пр.) может вызвать аллергические реакции у пациентов, это ограничивает терапевтические возможности таких жидких лекарственных форм (Калявина Е.А. Технология и исследование лекарственных форм интерферона. Дисс. на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. М., 1991 г. ).

Широко известен серийно выпускаемый препарат в жидкой форме «Гриппферон», содержащий интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный и вспомогательные вещества: динатрия эдетата дигидрат; натрия хлорид; натрия гидрофосфата додекагидрат; калия дигидрофосфат; повидон; макрогол 4000; вода очищенная (https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_14719.htm). Данный состав не имеет побочных негативных эффектов.

Основным недостатком данного состава является срок хранения не более 2 лет в невскрытой упаковке и не более 30 дней при вскрытой упаковке. Учитывая, что препараты интерферона включены в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов для медицинского применения (Распоряжение Правительства РФ от 12 октября 2019 года N 2406-р с изменениями, внесенными распоряжениями Правительства РФ от 26 апреля 2020 года N 1142-р, от 12 октября 2020 года N 2626-р, от 23 ноября 2020 года N 3073-р, от 23 ноября 2020 года N 3073-р), необходимо обеспечивать достаточный запас данных лекарств. Поэтому увеличение срока хранения без снижения активности интерферона и без применения аллергенных консервантов и стабилизаторов, является актуальной задачей.

Техническим результатом данного изобретения является повышение срока хранения без снижения активности интерферона.

Технический результат достигается технологией приготовления противовирусного средства в жидкой форме характеризующийся тем, что для приготовления используют следующий состав, мг в одном мл:

генно-инженерный интерферон, ME 1000-500000 повидон 5-100 макрогол 10-600 динатрия эдетата дигидрат 0,1-0,8 натрия гидрофосфат додекагидрат 5-20 калия дигидрофосфат 1-10 натрия хлорид 1-10 вода остальное,

при этом приготовление осуществляют в два этапа, на первом из которых последовательно растворяют в воде при комнатной температуре натрия гидрофосфат додекагидрат, калия дигидрофосфат, натрия хлорид, динатрия эдетата дигидрат, повидон и макрогол, причем кинематическую вязкость раствора поддерживают в пределах 2,5-4,5 мм²/сек, регулируя количество и соотношение повидона и макрогола, после чего раствор фильтруют и стерилизуют, а на втором этапе генно-инженерный интерферон нагревают до температуры 19-21°С, в асептических условиях постепенно вводят в раствор первого этапа ламинарным потоком и перемешивают.

При реализации данного способа приготовления получают препарат, который обеспечивает его хранение при температуре от 2 до 8°С не менее 2,5 года в герметичной упаковке.

В результате данных последовательностей, характера и режимов смешивания, в получаемом препарате формируется особым образом структурированная композиция интерферона и полимеров в присутствии комплекса солей, стабилизирующая свойства белка и сохраняющая активность интерферона длительное время. Данный результат термодинамической и химической устойчивости композиции получен после многочисленных экспериментов и, по-видимому, связан со способностью макромолекул к конформациям под воздействием внешних факторов и взаимовлиянию различных типов макромолекул при таких конформациях с образованием устойчивых по своим свойствам структур в жидких растворах (Г. Моравец. Макромолекулы в растворе. М., «Мир», 1967 г.; М.С. Аржаков, А.Е. Жирнов, А.А. Ефимова и др. «Высокомолекулярные соединения». http://vmsmsu.ru/vmsbaku.pdf).

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Предварительно очищают воду в системе Millipore Elix, где сочетаются две технологии очистки: обратный осмос на высокопроизводительных полиамидных мембранах и непрерывная электродеионизация на синтетических ионообменных смолах.

В емкость смешения заливают 100 л воды очищенной, включают мешалку и последовательно растворяют ингредиенты: 2,388 кг натрия гидрофосфат додекагидрата; 0,908 кг калия дигидрофосфата; 0,820 кг натрия хлорида; 0,100 кг динатрия эдетата дигидрата; 20,0 кг макрогола 4000; 2,0 кг поливинилпирролидона низкомолекулярного. Перемешивают до полного растворения реагентов, доводят объем до 200 л водой очищенной, перемешивают и отбирают пробу для контроля рН и вязкости полученного раствора. Водородный показатель раствора должен быть в пределах 6,0-7,0. Кинематическая вязкость раствора 3,5 мм²/сек. (контроль проводят вискозиметром ВПЖ-2, диаметр капилляра 0,56 мм).

Полученный раствор фильтруют через фильтрующую установку с фильтрующими элементами: на входе номинальный порог удерживания 5,0 мкм, на выходе номинальный порог удерживания 0,5 мкм.

Профильтрованный раствор стерилизуют в реакторе типа БИОР подачей пара в рубашку реактора БИОР (режим стерилизации раствора: температура 123°С, давление 0,3 МПа, продолжительность стерилизации 45 мин. После стерилизации раствор охлаждают до температуры 17°С. Охлаждение проводят при постоянном перемешивании.

Флаконы с замороженной субстанцией генно-инженерного интерферона из холодильной камеры помещают в водяную баню, размораживают и нагревают до температуры 20°С, периодически перемешивая.

В качестве генно-инженерного интерферона могут быть использованы альфа-, бета-, гамма-интерферон или их смесь в любом сочетании.

Специально подготовленный генно-инженерный интерферон в количестве 10000 МЕ/мл с соблюдением условий стерильности вводят ламинарным потоком в реактор БИОР с раствором первого этапа. После введения всего заданного количества интерферона, раствор перемешивают. Готовый препарат направляют на расфасовку.

Пример 2

Предварительно очищают воду в системе Millipore Elix обратным осмосом на высокопроизводительных полиамидных мембранах и непрерывной электродеионизацией на синтетических ионообменных смолах.

В емкость смешения заливают 100 л воды очищенной, включают мешалку и последовательно растворяют ингредиенты: 2,388 кг натрия гидрофосфат додекагидрата; 0,908 кг калия дигидрофосфата; 0,820 кг натрия хлорида; 0,100 кг динатрия эдетата дигидрата; 20,0 кг макрогола 4000; 2,0 кг поливинилпирролидона низкомолекулярного. Перемешивают до полного растворения реагентов, доводят объем до 200 л водой очищенной, перемешивают и отбирают пробу для контроля рН и вязкости полученного раствора. Водородный показатель раствора должен быть в пределах 6,0-7,0. Кинематическая вязкость раствора 3,5 мм²/сек. (контроль проводят вискозиметром ВПЖ-2, диаметр капилляра 0,56 мм).

Полученный раствор фильтруют через установку с фильтрующими элементами: на входе номинальный порог удерживания 5,0 мкм, на выходе номинальный порог удерживания 0,5 мкм.

Предварительно профильтрованный раствор стерилизуют фильтрацией через мембраны с порогом удерживания 0,22 мкм в предварительно простерилизованный реактор БИОР. Скорость фильтрации поддерживают в пределах 0,8-10,0 л/мин.

Флаконы с замороженной субстанцией генно-инженерного интерферона из холодильной камеры помещают в водяную баню, размораживают и нагревают до температуры 20°С, периодически перемешивая.

В качестве генно-инженерного интерферона могут быть использованы альфа-, бета-, гамма-интерферон или их смесь в любом сочетании.

Специально подготовленный генно-инженерный интерферон в количестве 10000 МЕ/мл с соблюдением условий стерильности вводят ламинарным потоком в реактор БИОР со стерильным раствором первого этапа. После введения всего заданного количества интерферона, раствор перемешивают. Готовый препарат направляют на расфасовку в виде назальных капель или спрея.

Пример 3

Приготовление противовирусного средства в форме назальных капель или спрея осуществляют аналогично примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 1,0 кг натрия гидрофосфат додекагидрата; 1,9 кг калия дигидрофосфата; 0,20 кг натрия хлорида; 0,02 кг динатрия эдетата дигидрата; 60,0 кг макрогола 4000; 1,0 кг поливинилпирролидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 3,2 мм /сек. Раствор первого этапа охлаждают до 13°С, а интерферон в количестве 100000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 21°С.

Пример 4

Приготовление осуществляют аналогично примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 4,0 кг натрия гидрофосфата додекагидрата; 0,2 кг калия дигидрофосфата; 2,0 кг натрия хлорида; 0,16 кг динатрия эдетата дигидрата; 120,0 кг макрогола 4000; 1,6 кг повидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 4,5 мм²/сек. Раствор первого этапа охлаждают до 15°С, а интерферон в количестве 500000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 19°С.

Пример 5

Приготовление осуществляют аналогично примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 1,0 кг натрия гидрофосфата додекагидрата; 2,0 кг калия дигидрофосфата; 1,0 кг натрия хлорида; 0,08 кг динатрия эдетата дигидрата; 2,0 кг макрогола 4000; 20 кг повидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 3,8 мм²/сек. Раствор первого этапа охлаждают до 17°С, а интерферон в количестве 300000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 20°С.

Пример 6

Приготовление осуществляют аналогично примеру 1, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 2,5 кг натрия гидрофосфата додекагидрата; 1,0 кг калия дигидрофосфата; 0,2 кг натрия хлорида; 0,02 кг динатрия эдетата дигидрата; 40 кг макрогола 4000; 10 кг повидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 2,5 мм²/сек. Раствор первого этапа охлаждают до 14°С, а интерферон в количестве 1000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 20°С.

Пример 7

Приготовление противовирусного средства в жидкой форме в виде назальных капель или спрея осуществляют аналогично примеру 2, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 1,0 кг натрия гидрофосфат додекагидрата; 1,9 кг калия дигидрофосфата; 0,20 кг натрия хлорида; 0,02 кг динатрия эдетата дигидрата; 60,0 кг макрогола 4000; 1,0 кг поливинилпирролидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 3,2 мм²/сек. Интерферон в количестве 100000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 21°С.

Пример 8

Приготовление осуществляют аналогично примеру 2, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 4,0 кг натрия гидрофосфата додекагидрата; 0,2 кг калия дигидрофосфата; 2,0 кг натрия хлорида; 0,16 кг динатрия эдетата дигидрата; 120,0 кг макрогола 4000; 1,6 кг повидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 4,5 мм²/сек. Специально подготовленный интерферон в количестве 500000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 19°С.

Пример 9

Приготовление осуществляют аналогично примеру 2, но ингредиенты берут в следующем количестве на 200 литров воды: 2,5 кг натрия гидрофосфата додекагидрата; 1,0 кг калия дигидрофосфата; 0,2 кг натрия хлорида; 0,02 кг динатрия эдетата дигидрата; 40 кг макрогола 4000; 10 кг повидона низкомолекулярного. Вязкость раствора 2,5 мм²/сек. Интерферон в количестве 1000 МЕ/мл перед введением в раствор нагревают до 20°С.

В результате приготовления противовирусного средства в соответствии с приведенными примерами получают прозрачный бесцветный жидкий препарат, который может применяться в качестве назальных капель или спрея. Готовый препарат проверяют по следующим показателям: прозрачность, цветность, водородный показатель, вязкость, стерильность, специфическая активность интерферона.

Препарат хранится в течение 30 месяцев при температуре от 2 до 8°С без потери лечебных свойств (специфической активности генно-инженерного интерферона) и других показателей качества готового продукта.

Коэффициент вариации значений данных показателей, измеренных по истечении 30 месяцев хранения, относительно значений этих показателей, определенных у свежеприготовленных капель по всем вариантам состава и режимам приготовления не превысил 7%. Цвет и прозрачность препарата остались без изменений.

Таким образом, приготовление противовирусного средства по предложенной технологии позволяет получить такую структуру и свойства препарата, при которой активность интерферона в водном растворе не ухудшается при хранении не менее 30 месяцев.

Группа изобретений относится к технологии приготовления интерферонсодержащих композиций, способных сохранять свою биологическую активность, которые могут найти применение как лекарства для интраназального применения, например, в виде капель или спрея. Предлагаемый способ приготовления противовирусного средства в жидкой форме характеризуется тем, что для приготовления используют следующий состав, мг в одном мл: генно-инженерный интерферон, ME 1000-500000, повидон 5-100, макрогол 10-600, динатрия эдетата дигидрат 0,1-0,8, натрия гидрофосфат додекагидрат 5-20, калия дигидрофосфат 1-10, натрия хлорид 1-10, вода - остальное, при этом приготовление осуществляют в два этапа, на первом из которых последовательно растворяют в воде при комнатной температуре натрия гидрофосфат додекагидрат, калия дигидрофосфат, натрия хлорид, динатрия эдетата дигидрат, повидон и макрогол, причем кинематическую вязкость раствора поддерживают в пределах 2,5-4,5 мм²/с, регулируя количество и соотношение повидона и макрогола, после чего раствор фильтруют и стерилизуют, а на втором этапе генно-инженерный интерферон нагревают до температуры 19-21°С, затем в асептических условиях постепенно вводят в раствор первого этапа ламинарным потоком и перемешивают. Предлагается также противовирусное средство в жидкой форме, полученное указанным выше способом. Техническим результатом является повышение срока хранения без снижения активности интерферона, который достигается технологией приготовления противовирусного средства. 2 н.п. ф-лы, 9 пр.

1. Способ приготовления противовирусного средства в жидкой форме, характеризующийся тем, что для приготовления используют следующий состав, мг в одном мл:

генно-инженерный интерферон, ME 1000-500000 повидон 5-100 макрогол 10-600 динатрия эдетата дигидрат 0,1-0,8 натрия гидрофосфат додекагидрат 5-20 калия дигидрофосфат 1-10 натрия хлорид 1-10

вода - остальное,

при этом приготовление осуществляют в два этапа, на первом из которых последовательно растворяют в воде при комнатной температуре натрия гидрофосфат додекагидрат, калия дигидрофосфат, натрия хлорид, динатрия эдетата дигидрат, повидон и макрогол, причем кинематическую вязкость раствора поддерживают в пределах 2,5-4,5 мм²/с, регулируя количество и соотношение повидона и макрогола, после чего раствор фильтруют и стерилизуют, а на втором этапе генно-инженерный интерферон нагревают до температуры 19-21°С, затем в асептических условиях постепенно вводят в раствор первого этапа ламинарным потоком и перемешивают.

2. Противовирусное средство в жидкой форме, характеризующееся тем, что получено способом по п. 1.