ПРЕПАРАТ САПОНИНА B4 ИЗ PULSATILLA CHINENSIS (BGE.) REGEL ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ ЧЕРЕЗ СЛИЗИСТУЮ ОБОЛОЧКУ ПРЯМОЙ КИШКИ И СПОСОБ ЕГО ИЗГОТОВЛЕНИЯ Российский патент 2022 года по МПК A61K31/704 A61K36/71 A61K47/14 A61K47/32 A61K9/02 A61K9/10 A61P13/12 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармацевтических препаратов и, в частности, относится к новому препарату сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки и способу его изготовления.

Уровень техники

В традиционной китайской медицине (ТКМ) Pulsatilla chinensis - это сухие корни растения Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel, принадлежащего к роду Pulsatilla семейства Ranunculaceae.

P. Chinensis. Оно впервые упоминается в классическом описании трав Шень-нуна как растение, широко применяемое в ТКМ. Это растение обладает функциями отвода тепла и детоксикации, охлаждения крови и остановки дизентерии, удаления влаги, уничтожения паразитов и так далее. Таким образом, P. chinensis используют для лечения теплового токсина и дизентерии крови, теплой малярии, озноба и лихорадки, носовых кровотечений и кровяного геморроя. Благодаря современным фармакологическим исследованиям было обнаружено, что P. chinensis обладает большим количеством свойств, таких как антибактериальная активность широкого спектра, противоопухолевая, противовоспалительная, усиливающая иммунную функцию активность и так далее.

Pulsatilla chinensis содержит много тритерпеноидных сапонинов. Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis относится к пентациклическим тритерпеноидным сапонинам люпинового типа и имеет структуру, описанную формулой 1.

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis обладает более сильной активностью. Например, в китайской заявке на патент на изобретение номер CN105213410 A (Дата публикации: 6 января 2016 г.) раскрыто применение сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в качестве иммуномодулятора в препаратах для лечения острого воспалительного процесса. Указанное острое воспаление включает острое повреждение почек, острое повреждение печени и острое повреждение легких, вызванное чрезмерной экспрессией воспалительных факторов. Например, китайская заявка на патентна изобретение с номером публикации CN105535004 A (дата публикации: 4 мая 2016 г.) раскрывает использование указанного соединения в качестве ингибитора вируса EV71 при изготовлении препаратов против HFMD.

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis содержит пять гликозильных групп и хорошо растворим в воде. Если соединение вводят перорально (например, через желудочный зонд в экспериментах на животных), эффективная доза велика, в результате чего окно безопасности узкое. Поэтому изобретатель подал заявку на патент на изобретение (заявка №CN201710551726.8), озаглавленную «Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для инъекций». Однако инъекция может вызвать гемолиз, поэтому исследование и разработка нового препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения не пероральным путем имеет положительное значение.

Помимо введения путем инъекции, пути не перорального введения включают пути через слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку носа, легкие, кожу, слизистую оболочку прямой кишки, глаза и так далее. Из упомянутых путей слизистая оболочка прямой кишки отличается богатым кровоснабжением и высокой скоростью всасывания лекарственных средств, также при данном пути введения существует меньше препятствующих факторов по сравнению с пероральным путем введения, например, на лекарственное средство не влияет значение pH в желудочно-кишечном тракте. Если лекарственное средство напрямую попадает в нижние геморроидальные вены через слизистую оболочку, можно избежать эффекта первого прохождения через печень.

До настоящего времени не было сообщений о препаратах сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки.

Сущность изобретения

Для преодоления недостатков предшествующего уровня техники, в настоящем изобретении предложен новый препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки.

Для реализации вышеуказанной цели в настоящем изобретении использована следующая техническая схема:

Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки, содержащий сапонин B4 из Pulsatilla chinensis и фармацевтически приемлемую основу;

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis предпочтительно является единственным активным компонентом препарата, доставляемого через слизистую оболочку прямой кишки;

Указанные в настоящем изобретении фармацевтически приемлемую основу предпочтительно выбирают из одной или нескольких следующих групп: акриловых смол, производных целлюлозы, полимеров этилена, натуральных камедей и основ жировых суппозиториев;

Более предпочтительно, указанную фармацевтически приемлемую основу выбирают из одной или нескольких следующих групп: карбомеров, гидроксипропилметилцеллюлоз, натрийкарбоксиметилцеллюлоз и смешанных глицеридов.

Форму препарата для введения через слизистую оболочку прямой кишки предпочтительно выбирают из одной или двух следующих форм: ректального геля и ректального суппозитория.

В качестве предпочтительного варианта реализации в настоящем изобретении предложен препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, имеющий значение pH6~7 и включающий эффективное количество сапонина B4 из Pulsatilla chinensis, а так же фармацевтически приемлемую основу, выбранные из одной или нескольких следующих групп: карбомеров, гидроксипропилметилцеллюлоз и натрий-карбоксиметилцеллюлоз, совместно с увлажнителем, агентом, регулирующим pH, и водой.

В настоящем изобретении также предложен способ получения препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, включающий следующие процедуры:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют; указанные в настоящем изобретении фармацевтически приемлемую основу и увлажнитель добавляют при перемешивании для получения однородной дисперсии; указанный в настоящем изобратении агент, регулирующий pH, добавляют для доведения pH до 6~7 с получением ректального геля;

В указанном в настоящем изобретении препарате сапонина В4из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля указанная фармацевтически приемлемая основа представляет собой карбопол, более предпочтительно - один или два из следующих: карбопола 941 и карбопола 980; наиболее предпочтительно - карбопола 941;

Кроме того, исходя из общей массы препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент карбопола 941 предпочтительно составляет 0,25%~1%, более предпочтительно составляет 0,25%~0,5% и наиболее предпочтительно составляет0,4%~0,6%.

В указанном в настоящем изобретении препарате сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля указанный увлажнитель предпочтительно выбирают из одного или двух следующих: глицерина и пропиленгликоля, и более предпочтительно, указанный увлажнитель представляет собой глицерин;

Кроме того, исходя из общей массы препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент глицерина предпочтительно составляет 5~15%, и более предпочтительно - 5~10%.

Указанный в настоящем изобретении агент, регулирующий pH, предпочтительно выбирают из одного или нескольких следующих: триэтаноламина, натрия гидроксида, этилендиамина, лауриламина и натрия бикарбоната; более предпочтительно указанным в настоящем изобретении агентом, регулирующим pH, является триэтаноламин;

Кроме того, исходя из общей массы препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент триэтаноламина предпочтительно составляет 0,25%~1%, и более предпочтительно - 0,25%~0,5%.

В качестве особенно предпочтительного варианта реализации настоящее изобретение предлагает препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, имеющий значение pH 6~7 и содержащий сапонин B4 из Pulsatilla chinensis, карбомпол 941, глицерин, триэтаноламин и воду; исходя из общей массы препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент каждого ингредиента составляет:

1%~20% для сапонина B4 из Pulsatilla chinensis, 0,25%~0,5% для карбопола 941, 5%~10% для глицерина, 0,25%~5% для триэтаноламина и оставшиеся проценты для воды;

В вышеуказанном препарате сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля массовое отношение карбопола 941 к триэтаноламину предпочтительно составляет 1:1.

В вышеуказанном препарате сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля массовое отношение карбопола 941 к глицерину предпочтительно составляет 1:15~25, более предпочтительно - 1:20.

В вышеуказанном препарате сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля массовое отношение карбополаа 941 к воде предпочтительно составляет 1:150~200, более предпочтительно - 1:180.

В настоящем изобретении также предложен способ получения указанного препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, включающий следующие процедуры:

В соответствии с заданным массовым соотношением для использования предложены карбопол 941, глицерин, триэтаноламин и вода; в зависимости от содержания действующего вещества в ректальном геле, подготавливают сапонин B4 из Pulsatilla chinensis; сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют с получением водного раствора сапонина B4 из Pulsatilla chinensis; к полученному раствору при перемешивании медленно добавляют карбопол 941 и смесь осторожно перемешивают; смесь далее перемешивают и добавляют глицерин; в конце добавляют триэтаноламин для доведения pH до 6-7; перемешивание продолжают до тех пор, пока набухание не станет однородным и не будет изготовлен ректальный гель.

В качестве другого предпочтительного варианта реализации настоящее изобретение предлагает препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория, включающий эффективное количество сапонина B4 из Pulsatilla chinensis и смешанные глицериды;

Настоящее изобретение также предлагает способ изготовления препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория, включающий следующие процедуры:

Указанные в настоящем изобретении смешанные глицериды извлекают, нагревают до тех пор, пока 2/3~3/4 из них не будут плавиться, затем прекращают нагревание и перемешивают до тех пор, пока температура основы не будет снижена до 50±2°C, к основе добавляют сапонин B4 из Pulsatilla chinensis. Смесь перемешивают для равномерного диспергирования и вводят в форму для суппозитория, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляет около 20°), и после охлаждения в течение 30 минут избыточную часть соскабливается с получением ректального суппозитория;

Смешанный глицерид предпочтительно выбирают из одной или нескольких следующих групп: смешанных глицеридов 34, смешанных глицеридов 36 и смешанных глицеридов 38; более предпочтительно выбирают из одной или двух следующих групп: смешанных глицеридов 34 или смешанных глицеридов 36; наиболее предпочтительно выбирают из смешанных глицеридов 36.

Настоящее изобретение также предлагает предпочтительный способ изготовления ректального суппозитория с сапонином B4 из Pulsatilla chinensis, включающий следующие процедуры:

Указанные в настоящем изобретении смешанные глицериды 36 извлекают, нагревают до температуры 55~60° до тех пор, пока 2/3~3/4 из них не будут плавиться, затем прекращают нагревание и перемешивают до тех пор, пока температура основы не будет снижена до 50±2°, к основе добавляют сапонин B4 из Pulsatilla chinensis. Смесь перемешивают для равномерного диспергирования и вводят в форму для суппозитория, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляет около 20°), и после охлаждения в течение 30 минут избыточную часть соскабливают с получением ректального суппозитория;

Настоящее изобретение также предлагает использование препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки при изготовлении лекарственных средств для лечения острого повреждения почек.

Субъект, получающий препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку для лечения острого повреждения почек, является млекопитающим, предпочтительно человеком.

Использование, согласно настоящему изобретению, включает следующее: эффективную дозу препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки вводят нуждающемуся в этом субъекту, предпочтительно в прямую кишку человека на глубину 2±1 см от анального отверстия.

Когда препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки, согласно настоящему изобретению, используют для лечения острого повреждения почек, доза составляет 8~32 мг/кг веса тела, предпочтительно 16~32 мг/кг веса тела.

В настоящем патентном описании, если не указано иное, упомянутый «сапонин B4 из Pulsatilla chinensis» включает тот (с содержанием ≥90%, определенным с помощью ВЭЖХ), который экстрагирован, выделен и очищен из растений, а также композицию, в основном состоящую из сапонина B4 из Pulsatilla chinensis (содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis не менее 90%, определенное с помощью ВЭЖХ), или сапонин, полученный путем химического синтеза (с содержанием ≥90%, определенным с помощью ВЭЖХ).

В настоящем патентном описании, если не указано иное, упомянутая «вода» представляет собой очищенную воду, которая может быть использована для препаратов для введения через слизистые оболочки, включая, помимо прочего, деионизированную воду, повторно дистиллированную воду, воду для инъекций и так далее.

В настоящем патентном описании, если не указано иное, слово «приблизительно» использовано для выражения приблизительного значения конкретного значения, которое также может обеспечивать эквивалентные результаты или эффекты. В этом контексте «приблизительно» может относиться к значениям в пределах ±20%.

Примеры

Далее настоящее изобретение проиллюстрировано со ссылкой на конкретные примеры. Специалистам в данной области техники должно быть понятно, что эти примеры использованы только для иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.

Если не указано иное, экспериментальные способы в следующих примерах являются общепринятыми. Лекарственное сырье, реагенты и так далее, используемые в следующих примерах, являются коммерчески доступными, если не указано иное. Подробнее некоторые из указанных реагентов представляют собой следующие:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis (с содержанием 98%, определенным методом ВЭЖХ): Jiangxi Bencao Tiangong Technology Co., Ltd., партия №20170301;

Карбопол 941 (КП-941): Beijing Guoren Yikang Technology Co., Ltd., партия №:20120325;

Карбопол 980 (КП-980): Anhui Newman Fine Chemical Co., Ltd;

Гидроксипропилметилцеллюлоза (ГПМЦ): Anhui Shanhe Pharmaceutical Accessories Co., Ltd., партия №:120602;

Натрий-карбоксиметилцеллюлоза (КМЦ-Na): Anhui Shanhe Pharmaceutical Accessories Co., Ltd., номер партии: 130601;

Смешанный глицерид типа 34, смешанный глицерид типа 36 и смешанный глицерид типа 38: Hubei Zhongliao Chemical Co., Ltd., партия №:160325;

Глицерин: Xilong Chemical Co., Ltd., партия №:120914.

Экспериментальный пример 1. Исследование ректального геля сапонина B4 из Pulsatilla chinensis

Предварительно определили, что рецептура ректального геля сапонина B4 из Pulsatilla chinensis включает:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis (здесь и далее сокращенно до «B4»), основу, глицерин (увлажнитель), триэтаноламин (агент, регулирующий pH), деионизированную воду.

Способ изготовления препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля в данном экспериментальном примере выглядит следующим образом:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяли в воде и фильтровали с получением водного раствора сапонина B4 из Pulsatilla chinensis; к полученному раствору при перемешивании медленно добавляли основу и смесь осторожно перемешивали; смесь далее перемешивали, добавляли в нее глицерин; в конце добавляли триэтаноламин для доведения pH до 6-7; перемешивание продолжали до тех пор, пока набухание не стало однородным и не был изготовлен ректальный гель.

1. Скрининг основы

Ингредиенты предоставляли в соответствии с рецептурным составом, представленным в Таблице 1, и гель изготовливали в соответствии с тем же способом. КП-941, КП-980, ГПМЦ и КМЦ-Na исследовали, используя в качестве критериев оценки внешний вид, вязкость, способность к растеканию и стабильность геля. Результаты представлены в Таблице 1.

Таблица 1. Влияние различных основ на гель Основа 0.5%^a КП-941 0.5%^a КП-980 0.5%^a ГПМЦ 0.5%^a КМЦ-Na B4 1.2% 1.2% 1.2 1.2 Глицерин 10% 10% 10 10 Триэтаноламин 0.5% 0.5% 0.5% 0.5% Деионизированная вода Добавлена до 100% Добавлена до 100% Добавлена до 100% Добавлена до 100% 55°C/6 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения нет расслоения -20°C/24 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения нет расслоения 3000 оборотов/15 мин. нет расслоения нет расслоения нет расслоения нет расслоения Вязкость удовлетворительно более вязкий плохо плохо Способность к растеканию хорошо трудно наносить очень жидкий очень жидкий Внешний вид бесцветный прозрачный полутвердый обладает ярким цветом бесцветный прозрачный полутвердый слегка шероховатая поверхность бесцветный прозрачный жидкий бесцветный прозрачный жидкий ^a: массовый процент, аналогично для остальных компонентов.

Как видно из Таблицы 1, ГПМЦ и КМЦ-Na не могут образовывать гели при указанной концентрации, поскольку их вязкость мала, что соответствует жидкому состоянию; в то же время КП-941 и КП-980 имеют хорошую пластичность, но гель, образованный КП-980, более толстый и трудно распределяется, также его поверхность немного шероховатая по сравнению с КП-941. Следовательно, полный порядок предпочтений при изготовлении ректального геля, в состав которого входят различные основы, следующий: КП-941 > КП-980 > ГПМЦ ≈ КМЦ-Na. Таким образом, в настоящем изобретении КП-941 и КП-980 предпочтительно выбирают в качестве основы препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, и наиболее предпочтительно основой является КП-941.

2. Скрининг количества КП-941

Каждый ингредиент предоставляли в соответствии с рецептурным составом препарата, представленным в Таблице 2, и гель изготавливали таким же способом. Исследовали количество КП-941 (0,25%, 0,5%, 1%), в качестве критериев оценки использовали внешний вид, вязкость, способность к растеканию и стабильность геля.

Таблица 2. Исследование количества КП-941 No. 1 2 3 B4 (%) 1.2 1.2 1.2 КП-941 (%) 0.25 0.5 1.0 Глицерин (%) 10 10 10 Триэтаноламин (%) 0.25 0.5 1.0 Деионизированная вода (%) Добавлена до 100% Добавлена до 100% Добавлена до 100% 55 °C/6 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения -20 °C/24 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения 3000 оборотов / 15 мин нет расслоения нет расслоения нет расслоения Вязкость более жидкий удовлетворительно более вязкий Способность к растеканию легко наносить, но влажный хорошо трудно наносить Внешний вид бесцветный прозрачный бесцветный прозрачный бесцветный полупрозрачный ^a: массовый процент

Как видно из Таблицы 2, когда количество использованного карбопола 941 составляло 0,25% или 1%, вязкость геля была соответственно меньше или больше, и способность к растеканию была плохой. При использовании 0,5% карбопола 941 как вязкость, так и способность к растеканию геля выше, чем у геля, полученного при использовании 0,25% и 1% карбопола 941. Следовательно, рейтинг для гелей, полученных с использованием различного количества карбопола 941, следующий: 0,5%> 0,25%> 10%, и наиболее подходящее количество карбопола 941 составляет приблизительно 0,5%.

3. Скрининг количества глицерина

Каждый ингредиент предоставляли в соответствии с рецептурным составом препарата, представленным в Таблице 3, и гель изготавливали таким же способом. Исследовали количество глицерина, используя в качестве критериев оценки геля внешний вид, вязкость, способность к растеканию, стабильность и удержание влаги. Результаты представлены в Таблицах 3 и 4.

Таблица 3. Исследование количества глицерина No. 1 2 3 B4 (%) 1.2 1.2 1.2 КП-941 (%) 0.25 0.5 1.0 Глицерин (%) 5 10 15 Триэтаноламин (%) 0.5 0.5 0.5 Деионизированная вода (%) Добавлена до 100% Добавлена до 100% Добавлена до 100% 55°C/6 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения -20°C/24 ч. нет расслоения нет расслоения нет расслоения 3000 оборотов/15 мин. нет расслоения нет расслоения нет расслоения Вязкость удовлетворительно удовлетворительно удовлетворительно Способность к растеканию хорошо хорошо хорошо Внешний вид бесцветный прозрачный бесцветный прозрачный бесцветный прозрачный ^a: массовый процент

Как видно из Таблицы 3, вязкость, способность к растеканию и стабильность для 3 партий приготовленных гелей аналогичны.

Таблица 4. Влияние содержания глицерина на скорость потери воды гелем (n3, ± s) Содержание глицерина (%) 0.5 ч. 1.0 ч. 2.0 ч. 4.0 ч. 6.0 ч. 5 3.7±0.8 4.4±0.9 6.8±1.0 10.5±1.6 18.1±2.1 10 4.2±0.7 4.0±0.5 6.1±1.6 9.4±0.9 15.2±1.1 15 5.3±1.4 4.5±0.8 7.9±0.5 13.2±1.5 21.5±1.2

Однако как видно из Таблицы 4, принимая в качестве критерия оценки скорость потери воды (чем ниже скорость потери воды, тем лучше удержание влаги), рейтинг гелей с различным содержанием глицерина составляет: 10% глицерин > 5% глицерин > 15% глицерин. Следовательно, в препарате сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, согласно настоящему изобретению, количество увлажнителя глицерина может составлять приблизительно 5-15% (массовый процент), предпочтительно - приблизительно 5-10% (массовый процент) и наиболее предпочтительно - приблизительно 10% (массовый процент).

4. Заключение

При использовании в качестве критериев оценки внешний вид, вязкость, способность к растеканию, стабильность и удерживание влаги геля скрининг показал, что лучшей основой геля был карбопол 941, количество которого составляло 0,25%~0,5% от общей массы геля, предпочтительно 0,4%~0,6%. Количество глицерина составляло 5%~15%, предпочтительно 5%~10%.

Исходя из полученных данных, оптимальная рецептура препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля следующая:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis, карбопол 941, глицерин, триэтаноламин и вода, pH 6-7; где, исходя из общей массы препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент карбопола 941 составляет 0,25%~0,5%, массовый процент глицерина составляет 5%~15%, и массовое соотношение карбопола 941, триэтаноламина и глицерина составляет 1:1:15~1:1:25.

Кроме того, состав препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля предпочтительно представляет собой:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis, карбопол 941, глицерин, триэтаноламин и вода, pH 6-7; где, исходя из общей массы препарата сапонина B4 Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент карбопола 941 составляет 0,4%~0,6%, массовый процент глицерина составляет 5%~12%, а массовое соотношение карбопола 941, триэтаноламина и глицерина - 1:1:20.

Пример 1. Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 1,2 г

Карбопол 941 0,4 г

Глицерин 8 г

Триэтаноламин 0,4 г

Деионизированная вода 72 мл

Способ изготовления:

Точно взвесили/отмерили каждый компонент в соответствии с рецептурой: сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворили в деионизированной воде (при магнитном перемешивании) и фильтровали, в результате чего получили водный раствор сапонина B4 из Pulsatilla chinensis; к полученному раствору медленно добавляли карбопол 941 при перемешивании в течение 20 минут до хорошего состояния перемешивания; затем добавляли глицерин и смесь перемешивали еще 3 мин.; в конце добавляли триэтаноламин для доведения pH до 6-7 и смесь дополнительно перемешивали для получения препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме гидрогеля (65 мл), в котором содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis составляло около 17,46 мг/мл.

Пример 2. Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 2,0 г

Карбопол 941 0,25 г

Глицерин 5 г

Триэтаноламин 0,25 г

Деионизированная вода 91,5 мл

Способ изготовления:

Способ изготовления был таким же, как в Примере 1, получили 80 мл препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме гидрогеля, в котором содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis составляло приблизительно 23,92 мг/мл.

Пример 3. Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 0,75 г

Карбопол 941 0,4 г

Глицерин 8 г

Триэтаноламин 0,4 г

Деионизированная вода 90,45 мл

Способ изготовления:

Способ изготовления был таким же, как в Примере 1, получили 79 мл препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме гидрогеля, в котором содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis составляло около 8,73 мг/мл.

Пример 4. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 2,5 г

Карбопол 941 0,25 г

Глицерин 5 г

Триэтаноламин 0,25 г

Деионизированная вода 91,5 мл

Способ изготовления:

Способ изготовления был таким же, как в Примере 1, получили 80 мл препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме гидрогеля, в котором содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis составляло около 29,75 мг/мл.

Пример 5. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 1,8 г

Карбопол 941 0,6 г

Глицерин 12 г

Триэтаноламин 0,6 г

Деионизированная вода 85 мл

Способ изготовления:

Способ изготовления был таким же, как в Примере 1, получили 74 мл препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме гидрогеля, в котором содержание сапонина B4 из Pulsatilla chinensis составляло около 22,42 мг/мл.

Экспериментальный пример 2. Исследование препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме суппозитория

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis обладает хорошей растворимостью в воде, и для лучшего всасывания лекарственного средства в полости и предотвращения деформации суппозитория или роста микроорганизмов, таких как мицеты, вызванного поглощением влаги лекарственным средством, в суппозитории по настоящему изобретению использовали масляную основу. В масляной основе смешанный глицерид был нетоксичным, не раздражающим, стабильным по своей природе, подходящим по цене, надежным при поставке и имел разные точки плавления, так что основа могла быть выбрана в соответствии с требованиями лекарственного средства. Таким образом, смешанный глицерид использовали в качестве основы суппозитория по настоящему изобретению. На данном экспериментальном примере исследовали и проверяли модель смешанных глицеридов и технологию получения.

1. Скрининг основы

В данном эксперименте для исследования трех различных типов основы, то есть типов 34, 36 и 38 смешанных глицеридов, в качестве критериев оценки использовали внешний вид, время плавления и температуру плавления продукта.

4 г каждого из вышеупомянутых трех типов основ взвешивали, помещали в чашу для выпаривания и нагревали на водяной бане при 55° для полного расплавления, после чего при перемешивании добавляли 450 мг порошков сырья сапонина В4 из Pulsatilla chinensis соответственно. Затем смесь вводили в форму (с температурой приблизительно 20°), которая была равномерно покрыта жидким парафином, охлаждали в течение 30 минут и соскабливали избыточную часть с получением ректального суппозитория.

При оценке внешнего вида полученный суппозиторий помещали под белую глянцевую бумагу и наблюдали внешний вид суппозитория при дневном свете. Критерии оценки при наблюдении включали однородность цвета, гладкость суппозитория и удобство касания руками. При измерении времени плавления три суппозитория каждого типа помещали соответственно на нижние слои трех круглых металлических пластин после выдерживании в течение 30 мин при комнатной температуре, затем пластину устанавливали в соответствующие решетки из нержавеющей стали и регулярно переворачивали. При этом температуру поддерживали на уровне 37° для изменения времени плавления. В это же время точку плавления определяли согласно второму из 0612 методов определения точки плавления в четвертой части Фармакопеи 2015. Результаты представлены в Таблице 5.

Таблица 5. Результаты определения и проверки различных типов матриц Критерий оценки Тип 34 Тип 36 Тип 38 Внешний вид Равномерный и гладкий Равномерный и гладкий Несколько вогнутых точек Время плавления (мин) 24 20 18 Точка плавления °C 35.5°C 36.8°C 37.2°C

Согласно результатам, приведенным в Таблице 5, смешанные эфиры глицерина и жирных кислот типов 36 и 34 имеют очевидные преимущества в отношении внешнего вида продуктов, и температура плавления суппозитория, приготовленного с использованием основы типа 36, составляет около 37°, что соответствует общим требованиям.

Таким образом, основу препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме суппозитория предпочтительно выбирают из одного или двух из следующих смешанных глицеридов: смешанных глицеридов 34 или 36, и более предпочтительно - из смешанных глицеридов 36.

2. Выбор температуры нагревания основы

Температура при нагревании не должна быть слишком высокой для плавления полусинтетических глицеридов. После расплавления двух третей или трех четвертей следует прекратить нагревание и оставить основу для расплавления, обеспечивая температуру после полного плавления приблизительно 50°. Перед введением в форму необходимо поддерживать температуру около 40°. Если температура слишком высока, время охлаждения будет увеличено, и в течение этого времени порошок может выпасть в осадок, в результате чего его содержание становится неравномерным. Таким образом, в данном эксперименте исследовали влияние нагревания и температуры плавления основы на формирование суппозитория.

Были извлечены три части основ из смешанных эфиров глицерина и жирных кислот (тип 36), каждая по 4 г, и когда примерно три четверти основ были расплавлены при 55°, 60° и 65° соответственно, нагревание прекратили, при этом перемешивание продолжали. После того, как температура была понижена до 50°C и основы были почти полностью расплавлены, в расплавленную основу соответственно добавляли 450 мг порошков сырья сапонина B4 из Pulsatilla chinensis. После тщательного перемешивания смесь вводили в форму, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы приблизительно 20°). После охлаждения в течение 30 мин избыточную часть соскабливали с получением суппозитория. Для выбора наилучшей температуры нагревания основы наблюдали внешний вид. Результаты представлены в Таблице 6.

Таблица 6. Исследование температуры нагревания основы Температура нагревания 55 ° 60 ° 65 ° Внешний вид Равномерный и гладкий Равномерный и гладкий Равномерный и гладкий

Согласно результатам, предаставленным в Таблице 6, во время нагревания при трех температурах испытания все основы были расплавлены, а затем охлаждены приблизительно до 50°С для формования. Полученные суппозитории выглядели гладкими и однородными без значительных различий. Таким образом, аналогичный эффект может быть достигнут при нагревании и плавлении смешанного глицерида типа 36 при 55~65°. Для сокращения времени, в течение которого температуру подложки снижают до 50°, может быть выбрана температура нагревания приблизительно 55°.

3. Заключение

По настоящему изобретению для ректального суппозитория с сапонином B4 из Pulsatilla chinensis основа является масляной и ее предпочтительно выбирают из одного или двух типов смешанных глицеридов - 34 и 36, и более предпочтительно - из типа 36 смешанных глицеридов. Процесс изготовления и условия следующие:

Указанные в настоящем изобретении основы нагревают до температуры 55~65° до тех пор, пока 2/3~3/4 из них не будут плавиться, затем прекращают нагревание и перемешивают до полного расплавления основ. Когда температура основы снижается до 50±2°, добавляют сапонин B4 из Pulsatilla chinensis. Смесь перемешивают для равномерного диспергирования и вводят в форму для суппозитория, которая равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляет приблизительно 20°C). После охлаждения в течение 30 минут излишнюю часть соскабливают с получением ректального суппозитория;

Более предпочтительно, указанный процесс изготовления и условия являются следующими:

Указанные в настоящем изобретении основы нагревают до температуры приблизительно 55°С до тех пор, пока 2/3~3/4 из них не будут плавиться, затем нагревание прекращают и перемешивают до полного расплавления основ. Когда температура основы снижается до 50±2°, добавляют сапонин B4 из Pulsatilla chinensis. Смесь перемешивают для равномерного диспергирования и вводят в форму для суппозитория, которая равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляет приблизительно 20°C). После охлаждения в течение 30 минут излишнюю часть соскабливают с получением ректального суппозитория;

Для вышеуказанного препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория содержание B4 в каждом суппозитории может составлять 50~200 мг.

Пример 6. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 4500 мг,

Смешанные глицериды (тип 36) 40 г.

Способ изготовления:

Каждый ингредиент взвешивали в соответствии с рецептурой, смешанные глицериды (тип 36) помещали в чашу для выпаривания и нагревали до 55°C до тех пор, пока приблизительно 3/4 из них не плавились, затем прекращали нагревание и продолжали перемешивание. После снижения температуры приблизительно до 50°С добавляли сапонин B4 из Pulsatilla chinensis к полностью расплавленным основам. Смесь перемешивали для равномерного диспергирования и вводили в форму для суппозитория, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляла приблизительно 20°C). После охлаждения в течение 30 минут излишнюю часть соскабливали с получением ректального суппозитория.

Всего изготовили 40 суппозиториев, вес каждого составлял приблизительно 1 г. Поверхность была гладкой и однородной, и каждый суппозиторий содержал сапонин B4 из Pulsatilla chinensis в количестве 112,5 мг/суппозиторий.

Пример 7 Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 5400 мг,

Смешанные глицериды (тип 36) 40 г.

Способ изготовления:

Каждый ингредиент взвешивали в соответствии с рецептурой, смешанные глицериды (тип 36) помещали в чашу для выпаривания и нагревали до 60°C, пока примерно 2/3 из них не плавились, затем прекращали нагревание и продолжали перемешивание. После снижения температуры приблизительно до 50°С сапонин B4 из Pulsatilla chinensis добавляли к полностью расплавленным основам. Смесь перемешивали для равномерного диспергирования и вводили в форму для суппозитория, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляла приблизительно 20°C). После охлаждения в течение 30 минут излишнюю часть соскабливали с получением ректального суппозитория.

Всего было изготовлено 40 суппозиториев, вес каждого составлял приблизительно 1 г. Поверхность была гладкой и однородной, и каждый суппозиторий содержал сапонин B4 из Pulsatilla chinensis в количестве 135 мг/суппозиторий.

Пример 8. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального суппозитория

Рецептура:

Сапонин B4 из Pulsatilla chinensis 4500 мг,

Смешанные глицериды (тип 34) 40 г.

Способ изготовления:

Каждый ингредиент взвешивали в соответствии с рецептурой, смешанные глицериды (тип 34) помещали в чашу для выпаривания и нагревали до 65°, пока приблизительно 2/3 из них не плавились, затем прекращали нагревание и продолжали перемешивание. После снижения температуры примерно до 50°С сапонин B4 из Pulsatilla chinensis добавляли к полностью расплавленным основам. Смесь перемешивали для равномерного диспергирования и вводили в форму для суппозитория, которая была равномерно покрыта жидким парафином (температура формы составляла приблизительно 20°C). После охлаждения в течение 30 минут излишнюю часть соскабливали с получением ректального суппозитория.

Всего изготовили 40 суппозиториев, вес каждого составлял приблизительно 1 мг. Поверхность была гладкой и однородной, и каждый суппозиторий содержал сапонин B4 из Pulsatilla chinensis в количестве 112,5 мг/суппозиторий.

Экспериментальный пример 3. Фармакодинамическое исследование препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки в соответствии с настоящим изобретением

1. Влияние различных препаратов B4 на вызванное гентамицином острое повреждение почек у крыс

Модель индуцированной гентамицином острой почечной недостаточности (ОПН) в основном вызывала повреждение клеток почечных канальцев, влияя на липидный метаболизм мембраны эпителиальных клеток почечных канальцев и ингибируя энергетический метаболизм митохондрий. Острая почечная недостаточность, вызванная гентамицином, в основном проявлялась в повышении уровня креатинина и азота мочевины, но механизм нефротоксичности, вызванной гентамицином, все еще оставался неясным. В данном эксперименте два вида препаратов сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для введения через слизистую оболочку прямой кишки в соответствии с настоящим изобретением вводили через анальное отверстие для наблюдения профилактических и терапевтических эффектов тестируемых лекарственных средств на индуцированную гентамицином ОПН у крыс, и сравнивали с пероральным (через желудочный зонд) введением сапонина B4 из Pulsatilla chinensis.

1.1 Экспериментальные животные и экспериментальные материалы

1.1.1 Животное: крысы SD, класс SPF, 180-200 г, самцы, Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd., номер лицензии: SCXK (Xiang) 2016-0002.

1.1.2 Реагент: инъекция гентамицина сульфата, Henan Runhong Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии продукта: 1610202, 2 мл/80 мг каждая.

1.1.3 Лекарственное средство: препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме геля, изготовленный в Примере 1 (сокращенно «гель В4»); препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме суппозитория, приготовленный в Примере 6 (сокращенно «суппозиторий B4»); сапонин B4 из Pulsatilla chinensis (сокращенно «порошок сырья B4»); Дексаметазон, 0,75 г / таблетка, Anhui Golden Sun Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: 16032521.

Раствор дексаметазона: 4 таблетки дексаметазона измельчали и растворяли в 100 мл бидистиллированной воды, и затем разбавляли до концентрации 0,03 мг/мл.

Раствор порошка сырья B4: 2000 мг порошка сырья B4 взвешивали, измельчали и растворяли в 100 мл бидистиллированной воды с получением раствора с концентрацией 20 ммл.

1.1.4 Аппарат: тихоходная настольная центрифуга; автоматический биохимический анализатор; иммуноферментный анализ (ELISA).

1.2 Экспериментальный способ

1.2.1 Подготовка перед моделированием

Все животные были пронумерованы и взвешены, данные были зарегистрированы.

1.2.2 Метод моделирования

Крысам в экспериментальных группах делали внутрибрюшинную инъекцию раствора гентамицина сульфата в дозе 140 мг / кг, в то время как крысам в контрольной группе делали внутрибрюшинную инъекцию равного объема физиологического раствора, введение раствора гентамицина сульфата продолжали в течение 7 дней для создания модели.

1.2.3 Формирование групп и введение препаратов

Животные были случайным образом разделены на контрольную группу; модельную группу; положительную по препарату группу (группу дексаметазона); группы с введением В4 геля в высокой, средней и низкой дозе; группы с введением суппозиториев B4 в высокой, средней и низкой дозе; группу с введением порошка В4; по 10 животных в каждой группе. Животные в группах с введением геля В4 получали гель через прямую кишку в дозе 0,3 мл/100 г веса тела; животные в группах с введением суппозиториев B4 получали суппозиторий через прямую кишку; животным в группе с введением порошка сырья В4 и положительной группе вводили соответствующие препараты через желудочный зонд из расчета 10 мл/кг массы тела. Животным из модельной группы и контрольной группы через зонд вводили одинаковый объем бидистиллированной воды. Лекарственное средство вводили непрерывно в течение 7 дней со второго дня моделирования.

1.2.4 Определение индексов

Белки в моче определяли с использованием Кумасси бриллиантового синего. После анестезии изофлураном из глазных яблок крыс брали образцы крови. Сыворотку отделяли. Общий белок (ОБ), азот мочевины крови (АМК) и креатинин (CREA) определяли с помощью автоматического биохимического анализа.

1.3 Результаты экспериментов

1.3.1 Влияние различных препаратов на сывороточные индексы при остром повреждении почек у крыс, вызванном гентамицином.

Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7. Влияние различных препаратов B4 на сывороточные индексы при остром повреждении почек у крыс, вызванном гентамицином (стандартное отклонение ± среднее) Группы Дозы мг/кг ОБ (г/л) АМК (мг/дл) CREA (мкмоль/л) Контрольная группа / 59.7±1.6 10.4±2.2 22.8±2.1 Модельная группа / 51.2±3.8^## 156.9±38.4^## 291.7±100.9^## Группа дексаметазона 0.3 65.7±5.8** 79.3±33.6** 83.2±31.9** Гель В4 в высокой дозе 200 58.0±3.0**^ΔΔ 52.3±22.8**^ΔΔ 120.7±53.0**^ΔΔ Гель В4 в средней дозе 100 55.9±3.3* 84.5±37.7** 126.8±45.5** Гель В4 в низкой дозе 50 54.8±4.1* 110.9±33.7* 244.8±86.0 Суппозиторий В4 в высокой дозе 200 57.0±1.8**^ΔΔ 62.9±37.1**^ΔΔ 139.2±50.1**^Δ Суппозиторий В4 в средней дозе 100 55.8±2.3* 89.3±21.4** 149.5±46.3** Суппозиторий В4 в низкой дозе 50 55.5±3.1* 118.7±42.8* 262.6±105.0 Порошок сырья В4 200 53.2±4.3 126.4±37.6 268.7±56.2

Примечание: по сравнению с контрольной группой ^#P <0.05, ^##P <0.01; по сравнению с модельной группой *P <0.05, **P <001;

По сравнению с группой с введением порошка сырья B4, ^ΔP <0.05, ^ΔΔP <0.01.

Согласно данным, представленным в Таблице 7:

(1) Через семь дней после моделирования, по сравнению с контрольной группой, в модельной группе значения показателей АМК и CREA в сыворотке значимо увеличились (P <0.01), в то время как ОБ значимо снизился (P <0.01), что указывает на то, что модель была создана успешно.

(2) По сравнению с модельной группой, группы с введением геля B4 (включая высокие, средние и низкие дозы) и группы с введением суппозиториев B4 (включая высокие, средние и низкие дозы) показали значимое или чрезвычайно значимое увеличение уровня ОБ (P <0.05 или P <0.01), в то время как для группы с введением порошка сырья B4 не было показано значимое различие. Кроме того, по сравнению с группой с введением порошка сырья B4, в группах с введением высоких доз геля B4 и суппозитория B4 повышенный уровень ОБ имел значимую разницу (P <0,01); Для групп с введением средних доз геля B4 и суппозитория B4 не было показано значимых различий по сравнению с группой с введением порошка сырья B4, но уровни ОБ в двух группах с введением через прямую кишку были выше, чем в группе с пероральным введением.

(3) По сравнению с модельной группой, группы с введением геля B4 (включая высокие, средние и низкие дозы) и группы с введением суппозиториев B4 (включая высокие, средние и низкие дозы) показали значимое или чрезвычайно значимое снижение уровня АМК (P <0.01 или P <0.05), и также в группе с введением порошка сырья B4 было отмечено значимое снижение уровня АМК (P <0.05); Однако уровень АМК в группах со всеми дозировками B4 с ректальным введением был ниже, чем у группы с пероральным введением, и уровень АМК в группах с введением высоких доз геля B4 и суппозитория B4 снизился сильнее и показал значимую разницу (P <0.01) по сравнению с группой с введением порошка сырья B4.

(4) По сравнению с модельной группой, группы с введением высоких и средних доз геля B4 и суппозитория B4 показали чрезвычайно значимое снижение уровня CREA (P <0.01), и группа с введением порошка сырья B4 также продемонстрировала значимое снижение уровня CREA (P <0.05); Однако уровень CREA в группах с различными дозировками B4 и ректальным введением был ниже, чем у группы с пероральным введением, и уровень CREA в группах с введением высоких доз геля B4 и суппозитория B4 снизился сильнее и показал значимое или чрезвычайно значимое различие (P < 0.05 или P <0.01) по сравнению с группой с введением порошка сырья B4.

Заключение:

Основываясь на приведенных выше результатах, при одинаковой дозировке гель В4 и суппозиторий В4 по настоящему изобретению оказывали лучший защитный эффект на функцию почек, чем порошок сырья, вводимый перорально. Что еще более важно, дозировка геля B4 и суппозитория B4 составляет лишь половину от дозировки порошка сырья, но оба препарата обращали вспять вызванное гентамицином острое повреждение почек у крыс, и эффекты были эквивалентны действию вводимого перорально порошка сырья или даже были немного лучше.

1.3.2 Влияние различных препаратов B4 на белок в моче при остром повреждении почек у крыс, вызванном гентамицином

Результаты представлены в Таблице 8.

Таблица 8. Влияние различных препаратов B4 на белок в моче при остром повреждении почек крыс, вызванном гентамицином Группа Доза (мг/кг) Белок в моче (мг/мл) 5 день введения 6 день введения 7 день введения Контрольная группа / 3.46±0.66 2.51±0.69 2.93±0.54 Модельная группа / 5.46±0.58^## 5.51±0.67^## 5.98±1.31^## Группа дексаметазона 0.3 5.15±0.89 5.52±1.36 5.63±0.58 Гель В4 в высокой дозе 200 4.13±1.08*^Δ 4.26±1.16**^Δ 4.24±1.54**^Δ Гель В4 в средней дозе 100 4.57±1.24* 4.61±1.41* 4.73±0.84* Гель В4 в низкой дозе 50 4.84±1.23 5.10±1.12 5.24±0.44 Суппозиторий В4 в высокой дозе 200 4.19±1.38*^Δ 4.27±0.99*^Δ 4.60±0.77**^Δ Суппозиторий В4 в средней дозе 100 4.58±1.11* 4.66±1.26* 4.81±1.19* Суппозиторий В4 в низкой дозе 50 4.99±1.16 5.07±1.22 5.23±1.20 Порошок сырья В4 200 4.86±1.22 5.18±1.15 5.38±0.92

Примечание: по сравнению с контрольной группой ^#P <0.05, ^##P <0.01; по сравнению с модельной группой *P <0.05, **P <0.01;

По сравнению с группой с введением порошка сырья B4, ΔP <0.05, ΔΔP <0.01.

Согласно данным, представленным в Таблице 8:

(1) На 5-й, 6-й и 7-й дни введения, по сравнению с контрольной группой, содержание белка в моче в модельной группе было значимо увеличено (P <0.01), что указывает на то, что модель была создана успешно.

(2) По сравнению с модельной группой, животные в группах с введением высокой и средней дозы геля B4, а также в группах с введением суппозиториев B4 с высокой и средней дозой имели значимо более низкое содержание белка в моче на 5-й, 6-й, 7-й дни введения (P <0.01 или P <0.05), и все они показали значимую разницу по сравнению с группой с введением порошка сырья B4 (P <0.05).

(3) Уровни белка в моче в группе с введением низкой дозы геля В4, в группе с введением низкой дозы суппозитория В4 и в группе с введением порошка сырья В4 показали тенденцию к снижению на пятый, шестой и седьмой дни введения, однако это снижение не было статистически значимым по сравнению с модельной группой.

Вывод:

Согласно приведенным выше результатам, гель B4 и суппозиторий B4 могут значимо снизить уровень белка в моче у крыс с острым повреждением почек, вызванным гентамицином, в то время как пероральное введение B4 не может обратить вспять увеличение белка в моче. Таким образом, эффект препарата B4 для ректального введения по настоящему изобретению значимо лучше, чем эффект препарата B4 для перорального введения.

1.4 Заключение

Согласно приведенным выше результатам, гель B4 и суппозиторий B4 могут значимо улучшить функцию почек (креатинин и азот мочевины) у крыс с острым повреждением почек, вызванным гентамицином, уменьшить выведение белка с мочой, увеличить общее содержание белка в сыворотке (общий белок ) и оказывают лучший защитный эффект на крыс с острым повреждением почек. Для порошка сырья B4 (пероральное введение) была продемонстрирована тенденция улучшать функцию почек у крыс с острым повреждением почек. По сравнению с этими дозированными формами (различные пути введения) было обнаружено, что терапевтические эффекты геля B4 и суппозитория B4 по настоящему изобретению, вводимых через прямую кишку, были намного лучше, чем у порошка сырья B4, вводимого перорально, и дозировка геля B4 и суппозитория B4 была ниже. Это указывает на то, что препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для ректального введения в соответствии с настоящим изобретением может повысить эффективность при уменьшенной дозировке, тем самым увеличивая окно безопасности клинического лечения.

2. Влияние различных препаратов B4 на вызванное цисплатином острое повреждение почек у мышей

После внутрибрюшинного введения цисплатина он оказывал токсическое действие на различные части почек. Такое действие может вызвать изменения в функции и морфологии клубочков и почечных канальцев. Цисплатин может вызывать сужение почечных сосудов, снижать почечный кровоток и скорость клубочковой фильтрации и, таким образом, вызывать протеинурию, нарушение функции почек и другие симптомы. В данном исследовании B4 вводили разными путями (ректально и перорально), для наблюдения профилактических и терапевтических эффектов B4 на индуцированную цисплатином ОПН у мышей.

2.1 Экспериментальные материалы

2.1.1 Животное: мыши ICR, 16-18 г, самцы, Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd., номер лицензии: SCXK (Xiang) 2016-0002.

2.1.2 Реагент: цисплатин, исходный раствор 5 мг/кг. Перед использованием цисплатин смешивали с подходящим количеством физиологического раствора для приготовления раствора с концентрацией 1,5 мг/мл для использования.

2.1.3 Лекарственное средство: препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме геля, изготовленный в Примере 1 (сокращенно «гель В4»); сапонин B4 из Pulsatilla chinensis в форме суппозитория, изготовленный в Примере 6 (сокращенно «суппозиторий B4»); сапонин B4 из Pulsatilla chinensis (сокращенно «порошок сырья B4»); Дексаметазон, 0,75 г/таблетка, Anhui Golden Sun Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: 16032521.

Раствор дексаметазона: 4 таблетки дексаметазона измельчали и растворяли в 100 мл бидистиллированной воды, а затем разводили до концентрации 0,03 мг/мл.

Раствор порошка сырья B4: 1000 мг порошка сырья B4 взвешивали, измельчали и растворяли в 100 мл бидистиллированной воды с получением раствора с концентрацией 10 мг/мл.

2.1.4 Аппарат: тихоходная настольная центрифуга; автоматический биохимический анализатор

2.2 Экспериментальный метод

2.2.1 Подготовка перед моделированием

Все животные были пронумерованы и взвешены, данные были зарегистрированы.

2.2.2 Метод моделирования

Модель была создана с помощью цисплатина в дозировке 15 мл/кг. Животным контрольной группы делали внутрибрюшинную инъекцию физиологического раствора, животным из других групп делали внутрибрюшинную инъекцию цисплатина.

2.2.3 Формирование групп и введение препаратов

Животных случайным образом разделили на контрольную группу; модельную группа; положительную по препарату группу (группа дексаметазона); группы с введением В4 геля в высокой, средней и низкой дозе; группы с введением суппозиториев B4 в высокой, средней и низкой дозе; группу с введением порошка В4; по 10 животных в каждой группе. Животные в группах с введением геля В4 получали гель через прямую кишку в дозе 0,3 мл/100 г веса тела; животные в группах с введением суппозитория B4 получали суппозиторий через прямую кишку; животным в группе с введением порошка сырья В4 и положительной группе вводили соответствующие препараты через желудочный зонд из расчета 20 мл/кг массы тела. Животным в модельной группе и контрольной группе через зонд вводили одинаковый объем бидистиллированной воды. Препарат вводили непрерывно в течение 4 дней со дня моделирования. Перед введением на 4 день животных не кормили в течение 16-18 часов.

2.2.4 Определение индексов

Через час после последнего введения мочу собирали для измерения белка в моче. Образцы крови были взяты из глазных яблок для отделения сыворотки. Общий белок (ОБ), азот мочевины крови (АМК) и креатинин (CRE) определяли с помощью автоматического биохимического анализа.

2.3 Результаты экспериментов: см. Таблицу 9

Таблица 9. Влияние различных препаратов B4 на вызванное цисплатином острое повреждение почек у мышей (стандартное отклонение ± среднее) Группы Дозы мг/кг ОБ (г/л) АМК (мг/дл) CREA (мкмоль/л) Белок в моче мг/мл Контрольная группа / 51.61±2.31 25.14±4.34 25.56±4.00 0.89±0.11 Модельная группа / 45.26±2.19^## 61.95±11.03^## 41.69±3.66^## 1.76±0.27^## Группа дексаметазона 0.6 52.90±2.50** 42.97±17.45** 30.10±3.93** 1.00±0.24** Гель В4 в высокой дозе 400 49.79±2.01**^Δ 43.58±16.95** 31.88±8.13** 1.19±0.19** Гель В4 в средней дозе 200 48.87±2.36* 49.79±17.68* 34.40±7.07* 1.35±0.16** Гель В4 в низкой дозе 100 46.58±2.25 54.40±14.30 38.10±375 1.53±0.39 Суппозиторий В4 в высокой дозе 400 49.43±2.50**^Δ 44.26±15.76* 29.27±5.66** 1.18±0.20** Суппозиторий В4 в средней дозе 200 48.36±2.10* 50.89±17.87* 35.00±4.24* 1.21±0.41* Суппозиторий В4 в низкой дозе 100 46.25±1.83 54.84±25.27 39.70±4.52 1.48±0.41 Порошок сырья В4 400 46.12±2.27 55.86±13.91 38.11±9.56 1.55±0.45

Примечание: по сравнению с контрольной группой ^#P <0.05, ^##P <0.01; по сравнению с модельной группой *P <0.05, **P <0.01;

По сравнению с группой с введением порошка сырья B4, ^ΔP <0.05.

Согласно данным, представленным в таблице 9:

(1) По сравнению с контрольной группой, уровни АМК, CREA в сыворотке и белка в моче в модельной группе были значимо увеличены (P <0.01), в то время как содержание общего сывороточного белка (ОБ) было значимо снижено (P <0,01), что указывает на то, что модель была успешно создана.

(2) По сравнению с модельной группой, в группах с введением высоких и средних доз геля B4, а также в группах с введением суппозиториев B4 в высоких и средних дозах могло быть значимо или чрезвычайно значимо увеличено содержание ОБ в сыворотке у мышей с острым повреждением почек (P <0.01 или P <0.05). Содержание ОБ в группах с низкими дозами геля B4 и суппозитория B4, а также в группе с введением порошка сырья B4 показало слабую тенденцию к увеличению. По сравнению с группой с введением порошка сырья B4, для содержания ОБ в группах с высокими дозами геля B4 и суппозитория B4 было показано значимое различие (P <0.05).

(3) По сравнению с модельной группой, в группах с введением высоких и средних доз геля B4 и суппозитория B4 могли быть значимо или чрезвычайно значимо снижены уровни АМК и CREA в сыворотке мышей с острым повреждением почек (P <0.01 или P <0.05); уровни АМК и CREA в сыворотке животных из групп с введением низких доз геля B4 и суппозитория B4, а также из группы с введением порошка сырья B4 были в некоторой степени снижены, однако значимой разницы отмечено не было.

(4) По сравнению с модельной группой, в группах с введением высоких и средних доз геля B4 и суппозитория B4 могли быть значимо или чрезвычайно значимо снижены уровни белка в моче у мышей с острым повреждением почек (P <0.01 или P <0.05); уровни белка в моче в группах с введением низких доз геля B4 и суппозитория B4, а также в группе с введением порошка сырья B4 были в некоторой степени снижены, но значимой разницы отмечено не было.

2.4 Заключение

Согласно приведенным выше результатам, гель B4 и суппозиторий B4 могут значительно улучшить функцию почек у мышей с острым повреждением почек, вызванным цисплатином: снизить уровень креатинина в сыворотке и азота мочевины, уменьшить количество белка в моче и увеличить общее содержание белка в сыворотке, и они оказывают лучший защитный эффект на мышей с острым повреждением почек. Порошок сырья B4 (пероральное введение) демонстрировал тенденцию к снижению содержания АМК, CREA в сыворотке и белка в моче, и также демонстрировал тенденцию к увеличению общего белка сыворотки, однако значимых различий отмечено не было по сравнению с модельной группой. При сравнении различных путей введения было обнаружено, что терапевтические эффекты геля B4 и суппозитория B4 по настоящему изобретению, вводимых через прямую кишку, были намного лучше, чем у порошка сырья B4, вводимого перорально, и эффективная доза была ниже. Это указывает на то, что ректальное введение препарата сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в соответствии с настоящим изобретением может эффективно снижать его дозу, увеличивая окно безопасности.

Таким образом, препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis для ректального введения через слизистую оболочку прямой кишки, предложенный в настоящем изобретении, оказывает лучший эффект на обращение и/или улучшение острого повреждения почек, вызванного гентамицином и цисплатином, чем препарат для перорального введения, и имеет низкую эффективную дозу и повышенную безопасность, поэтому у него есть очевидные преимущества.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к препарату в форме ректального геля для лечения острого повреждения почек. Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля для лечения острого повреждения почек, имеющий значение pH 6~7, который содержит эффективное количество сапонина B4 из Pulsatilla chinensis и фармацевтически приемлемую основу, содержащую карбопол, увлажнитель, агент, регулирующий pH, и воду. Способ приготовления препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, включающий следующие операции: сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют; указанную фармацевтически приемлемую основу и увлажнитель добавляют при перемешивании для получения однородной дисперсии; указанный агент, регулирующий pH, добавляют для доведения pH до 6~7, с получением ректального геля; причем указанный способ приготовления включает следующие операции: в соответствии с заданным массовым соотношением, для применения предложены карбопол 941, глицерин, триэтаноламин и вода; сапонин B4 из Pulsatilla chinensis готовят в соответствии с содержанием действующего вещества в ректальном геле; сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют с получением водного раствора сапонина B4 из Pulsatilla chinensis; к полученному раствору при перемешивании медленно добавляют карбопол 941 и смесь осторожно перемешивают; смесь дополнительно перемешивают и добавляют глицерин; наконец, добавляют триэтаноламин для доведения pH до 6-7; перемешивание продолжают до тех пор, пока набухание не станет однородным, обеспечивая получение ректального геля. Применение препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля при изготовлении лекарственных средств для лечения острого повреждения почек. Вышеописанный препарат обеспечивает улучшенную биодоступность, характеризуется более низкой эффективной дозой и оказывает лучший терапевтический эффект для лечения острого повреждения почек. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 9 табл., 8 пр.

1. Препарат сапонина B4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля для лечения острого повреждения почек, имеющий значение pH 6~7 и содержащий эффективное количество сапонина B4 из Pulsatilla chinensis и фармацевтически приемлемую основу, содержащую карбопол, увлажнитель, агент, регулирующий pH, и воду.

2. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 1, отличающийся тем, что указанный карбопол выбран из одного или обоих из: карбопола 941 и карбопола 980.

3. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 2, отличающийся тем, что указанная фармацевтически приемлемая основа представляет собой карбопол 941.

4. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 3, отличающийся тем, что, исходя из общей массы препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент карбопола 941 составляет 0,25%~1%, более предпочтительно составляет 0,25%~0,5%, и наиболее предпочтительно составляет 0,4%~0,6%.

5. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанный увлажнитель выбран из одного или обоих: глицерина и пропиленгликоля, и более предпочтительно, указанный увлажнитель представляет собой глицерин.

6. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 5, отличающийся тем, что указанный увлажнитель представляет собой глицерин.

7. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный агент, регулирующий pH, выбран из одного или более из: триэтаноламина, натрия гидроксида, этилендиамина, лауриламина и натрия бикарбоната.

8. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 7, отличающийся тем, что указанный агент, регулирующий pH, представляет собой триэтаноламин.

9. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по п. 8, отличающийся тем, что, исходя из общей массы препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент триэтаноламина составляет 0,25%~1%, и более предпочтительно составляет 0,25%~0,5%.

10. Препарат сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что карбопол представляет собой карбопол 941, увлажнитель представляет собой глицерин, агент, регулирующий pH, представляет собой триэтаноламин, причем, исходя из общей массы препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля, массовый процент каждого ингредиента составляет:

1%~20% для сапонина B4 из Pulsatilla chinensis, 0,25%~0,5% для карбопола 941, 5%~10% для глицерина, 0,25%~0,5% для триэтаноламина и оставшееся процентное содержание - для воды;

при этом массовое отношение карбопола к триэтаноламину составляет 1:1.

11. Способ приготовления препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по любому из пп. 1-10, включающий следующие операции:

сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют; указанную фармацевтически приемлемую основу и увлажнитель добавляют при перемешивании для получения однородной дисперсии; указанный агент, регулирующий pH, добавляют для доведения pH до 6~7, с получением ректального геля;

причем указанный способ приготовления включает следующие операции:

в соответствии с заданным массовым соотношением, для применения предложены карбопол 941, глицерин, триэтаноламин и вода; сапонин B4 из Pulsatilla chinensis готовят в соответствии с содержанием действующего вещества в ректальном геле; сапонин B4 из Pulsatilla chinensis растворяют в воде и фильтруют с получением водного раствора сапонина B4 из Pulsatilla chinensis; к полученному раствору при перемешивании медленно добавляют карбопол 941 и смесь осторожно перемешивают; смесь дополнительно перемешивают и добавляют глицерин; наконец, добавляют триэтаноламин для доведения pH до 6-7; перемешивание продолжают до тех пор, пока набухание не станет однородным, обеспечивая получение ректального геля.

12. Применение препарата сапонина В4 из Pulsatilla chinensis в форме ректального геля по любому из пп. 1-10 при изготовлении лекарственных средств для лечения острого повреждения почек.