МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ АНЕМОЗИДА B4 ПРОТИВ ОСТРОГО ПОДАГРИЧЕСКОГО АРТРИТА Российский патент 2022 года по МПК A61K31/704 A61K36/71 A61P19/02 A61P19/06 

Перекрестные ссылки на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно заявке №201811214694.3, поданной 18 октября 2018 г. и озаглавленной «Медицинское применение анемозида В4 против острого подагрического артрита», содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение в целом относится к области медицины, и в частности относится к новому медицинскому применению анемозида В4.

Уровень техники

Термин «подагра» объединяет группу заболеваний, для которых долговременные нарушения метаболизма пуринов и повышение уровня мочевой кислоты в крови вызывают повреждения тканей. Острый подагрический артрит представляет собой типичный симптом подагры как характерную острую воспалительную реакцию, вызванную отложением кристаллов уратов в суставах и периартикулярных тканях (в особенности в голеностопных суставах и стопе). Приступы часто возникают в ночное время, и пациент может проснуться от боли и потом не может заснуть всю ночь. Острый подагрический артрит часто рецидивирует и со временем может перейти в полиартрит или в мигрирующий артрит. Пораженные суставы краснеют, опухают, для пальпации горячие и болезненные, их подвижность ограничена, что серьезно влияет на качество жизни пациентов. В Китае, для непрерывным улучшении жизненного уровня населения, вследствие увеличения потребления продуктов с высоким содержанием пуринов, белков и жиров не только быстро возросла заболеваемость подагрой, но и сама болезнь постепенно «помолодела», и теперь встречаются пациенты даже подросткового возраста. По прогнозам, на протяжении последующих 10 лет подагра выйдет на второе место по распространенности среди метаболических расстройств в Китае, уступив только диабету.

В настоящее время общеупотребительными лекарственными средствами для лечения острого подагрического артрита являются нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (такие как диклофенак натрия, и т.д.), колхицин и глюкокортикоиды. Хотя эти лекарственные средства достигают определенных клинических результатов, неизбежны сопутствующие побочные эффекты и неблагоприятные реакции, такие как желудочно-кишечные реакции на традиционные нестероидные противовоспалительные лекарственные средства; неблагоприятные реакции на применение ингибиторов ЦОГ-2 в сердечно-сосудистой системе; супрессия костного мозга, поражение печени, аллергические реакции и нейротоксичность колхицина; рикошетный эффект отмены глюкокортикоидов, и т.д. Поэтому одним из наиболее активных направлений исследований в области медицины стал поиск новых лекарственных средств для лечения острого подагрического артрита.

Средство традиционной китайской медицины Radix Pulsatillas представляет собой высушенный корень прострела китайского {Pulsatilla chinensis (Bge.) Regel, растения из рода Pulsatilla семейства Ranunculaceae, и было впервые описано в классическом фармакологическом сочинении о травах и лекарственных препаратах «Канон Шэнь-нуна о корнях и травах». Его природа и вкус - горькие и холодные, и оно обладает способностью к устранению жара и детоксикации, к охлаждению крови для прекращения диареи, к иссушению влажности и уничтожению насекомых, и т.д. Его применяют для нейтрализации термолабильных токсинов, лечения дизентерии с кровавым поносом, тропической малярии, перемежающейся лихорадки, носового кровотечения и геморроя. В ходе современных фармакологических исследований было обнаружено, что Radix Pulsatillae характеризуется более разнообразным действием, в том числе бактерицидным действием широкого спектра, противоопухолевым, противовоспалительным действием, повыш ает иммунную функцию, и так далее.

Radix Pulsatillae богат содержанием тритерпеновых сапонинов. Анемозид В4 относится к пентацикпическим тритерпеновым сапонинам люпинового типа со структурной формулой, показанной на Фиг. 1.

Анемозид В4 характеризуются сильным действием - в частности, в китайской заявке на выдачу патента на изобретение с номером публикации CN 105213410 А (дата публикации 6 января 2016 г. ) раскрыто применение анемозида В4 в качестве иммуномодулятора в лекарственных средствах для лечения острого воспаления. Воспаление включает острое повреждение почек, острое повреждение печени и острое повреждение легких, вызванное сверхэкспрессией воспалительных факторов. Другой пример - китайская заявка на выдачу патента на изобретение с номером публикации CN 105535004 А (опубликована 4 мая 2016 г.), в которой раскрыто применение данных соединений в качестве ингибитора вируса EV71 для получения лекарственных средств против вирусной пузырчатки полости рта и конечностей. Однако до сих пор не было сообщений о применении анемозида В4 для лечения острого подагрического артрита.

Сущность изобретения

Стремясь восполнить недостатки предыдущего уровня техники, согласно настоящему изобретению обеспечено новое медицинское применение анемозида В4 для лечения острого подагрического артрита.

Для достижения вышеуказанных технических результатов настоящее изобретение включает следующие технические решения:

Применение анемозида В4 для получения лекарственных средств для лечения острого подагрического артрита.

В качестве предпочтительного варианта реализации настоящего изобретения предложено применение анемозида В4 в качестве единственного активного фармацевтического ингредиента для получения лекарственных средств для лечения острого подагрического артрита.

В качестве еще одного предпочтительного варианта реализации согласно настоящему изобретению предложено применение анемозида В4 и других активных фармацевтических ингредиентов для получения лекарственных средств для лечения острого подагрического артрита, в котором другие активные фармацевтические ингредиенты выбирают из одного или более нестероидного противовоспалительного лекарственного средства, колхицина и глюкокортикоида.

Указанное нестероидное противовоспалительное лекарственное средство включает без ограничения ибупрофен, индометацин, нимесулид, напроксен, набуметон, диклофенак натрия, локсопрофен натрия, рофекоксиб, целекоксиб, эторикоксиб, и т.п.

Указанный глюкокортикоид включает без ограничения преднизон, мепреднизон, бетаметазон, беклометазон дипропионат, дипроспан, преднизолон, гидрокортизон и дексаметазон.

Предпочтительно, лекарственное средство также содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

Предпочтительно, лекарственное средство выбирают из одного или более пероральных лекарственных препаратов и парентеральных лекарственных препаратов.

Предпочтительно, указанный парентеральный лекарственный препарат выбирают из одного или более инъектируемых лекарственных препаратов, лекарственных препаратов для ректального введения и лекарственных препаратов для ингаляционного (пульмонального) введения, более предпочтительно, выбирают из одного или более инъектируемых лекарственных препаратов и лекарственных препаратов для ректального введения.

Указанный инъектируемый лекарственный препарат выбирают из одного или более лекарственных препаратов для подкожных инъекций, внутримышечных инъектируемых лекарственных препаратов и внутривенных инфузионных лекарственных препаратов; и

Лекарственный препарат для ректального введения выбирают из ректальных суппозиториев и/или ректальных инфузионных лекарственных препаратов.

Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества по настоящему изобретению включают без ограничения (1) разбавители, такие как крахмал, сахарная пудра, декстрин, лактоза, предварительно желатинизированный крахмал, микрокристаллические волокна, неорганические соли кальция (такие как сульфат кальция, гидрофосфат кальция, медицинский карбонат кальция и т.д.), маннитол, растительное масло, полиэтиленгликоль, масло какао, полусинтетические или полностью синтетические глицериды жирных кислот, глицерожелатин и т.д.; (2) связующие вещества, такие как дистиллированная вода, этанол, крахмальная суспензия, повидон, карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилцеллюлоза, метилцеллюлоза и этилцеллюлоза, гипромеллоза и т.д.; (3) разрыхлители, такие как сухой крахмал, карбоксиметилкрахмал натрия, низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза, поперечно сшитый поливинилпирролидон, кроскармеллоза натрия, кросповидон и т.д.; (4) лубриканты, такие какстеарат магния, тонкодисперсный силикагель, тальк, гидрогенизированное растительное масло, полиэтиленгликоли, лаурилсульфат магния и т.д.; (5) растворители, такие как вода для инъекций, этанол и т.д.; (6) консерванты, такие как бензойная кислота и ее соли, сорбиновая кислота и ее соли, парабены и т.д.

Предпочтительно, подходящим субъектом является млекопитающее, и более предпочтительно человек.

Для субъектов-людей количество анемозида В4 для введения обычно составляет 0,4-1,6 мг/кг массы тела в сутки для взрослых (с массой тела 70 кг), более предпочтительно 0,4-1,6 мг/кг массы тела в общей сложности один или несколько раз в сутки.

Согласно настоящему изобретению дополнительно обеспечен способ лечения острого подагрического артрита, который включает стадию введения анемозида В4 нуждающемуся пациенту.

Предпочтительно, способ, применяемый для лечения острого подагрического артрита, включает стадию введения анемозида В4 нуждающемуся пациенту подкожной инъекцией, внутримышечной инъекцией или внутривенной инфузией.

Предпочтительно, нуждающийся пациент представляет собой млекопитающее, более предпочтительно человека.

Предпочтительно, способ лечения острого подагрического артрита включает стадию введения анемозида В4 в дозе 0,4-1,6 мг/кг массы тела нуждающемуся лицу один или несколько раз в сутки.

В качестве предпочтительного варианта реализации настоящего изобретения предложен способ лечения острого подагрического артрита, который включает стадию введения анемозида В4 в дозе 0,4-1,6 мг/кг массы тела нуждающемуся пациенту один или несколько раз в сутки подкожной инъекцией, внутримышечной инъекцией или внутривенной инъекцией.

Авторы настоящего изобретения доказали путем многочисленных экспериментов на животных, что внутривенная, подкожная или внутримышечная инъекция анемозида В4 может значительно ослаблять опухание суставов, вызванное острым подагрическим артритом. Поэтому ожидается, что инъекция анемозида В4 обеспечит новую, альтернативную стратегию лечения острого подагрического артрита.

Лучший вариант осуществления настоящего изобретения

Здесь и далее настоящее изобретение будет иллюстрировано на конкретных примерах. Специалистам в данной области техники будет понятно, что эти примеры приведены только с целью проиллюстрировать настоящее изобретение и никоим образом не ограничивают объем охраны настоящего изобретения.

Все методики проведения эксперимента в нижеследующих примерах, если не оговорено иное, являются общепринятыми методиками. Все исходное сырье, реагенты, материалы и т.д., используемые в нижеследующих примерах, являются коммерчески доступными продуктами, если не оговорено иное.

Пример 1 Предварительное исследование воздействия анемозида В4 на протекание индуцированного уратом натрия острого подагрического артрита у крыс

1. Экспериментальные материалы

1.1 Исследуемые лекарственные средства: лекарственный препарат для инъекций анемозида В4 (полученный для внутреннего использования, в дальнейшем именуемый «инъекционный раствор В4»); колхицин, номер партии: 171116, Xishuangbanna Banna Pharmaceutical Co., Ltd.

Вышеупомянутый инъекционный раствор В4 приготавливали следующим способом:

Точно отвешивали предварительно определенное количество сырья анемозида В4, к которому затем добавляли подходящее количество воды для инъекций, а затем сырье анемозида В4 полностью растворяли для перемешивания магнитной мешалкой, к раствору добавляли активированный уголь в количестве 0,10% от массы раствора. Смесь нагревали в водяной бане для температуре 100°С и перемешивали в течение 15 минут, затем разбавляли до 100 мл водой для инъекций. Полученный раствор взбалтывали и профильтровывали через микропористую мембрану 0,22 мкм для удаления активированного угля. Точно отмеряли 2 мл промежуточной жидкости и переносили в ампулу объемом 5 мл, с последующей стерилизацией для 115°С в течение 30 минут с получением инъекционного раствора В4.

1.2 Реагент: урат натрия, Sigma company; артикул: U2875-5G; номер партии: BCBS7438

1.3 Животные: 60 крыс линии Спрег-Доули, самцы, 180~220 г, закупленные в компании Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd., были использованы для экспериментов через одну неделю после адаптивного кормления.

1.4 Измерительный прибор: Прибор для измерения объема пальцев лап, модель: YLS-7 В, Huaibei Zhenghua Biological Instrument Equipment Co., Ltd.

2. Методика проведения эксперимента

2.1 Получение кристаллов и суспензии (однозамещенного) урата натрия: 5 мл раствора NaOH 1 моль/л и 800 мг урата натрия добавляли к 155 мл депирогенизированной стерилизованной воды для инъекций и нагревали до кипения. Урат натрия полностью растворяли и затем естественным образом охлаждали для перемешивания. После этого закапывали HCl 1 моль/л до достижения рН 7,0, для этом раствор становился молочно-белым, и немедленно центрифугировали для 3000 об/мин в течение 2 минут. Кристаллы собирали, высушивали в суховоздушном термостате в 60°С, помещали в пробирку типа Эппендорф, и хранили при 4°С. Перед применением кристаллы однозамещенного урата натрия обрабатывали в автоклаве при 121°С в течение 30 минут, и диспергировали в фосфатно-солевом буферном растворе до получения требуемой концентрации, т.е. получения суспензии однозамещенного урата натрия. Выполняли препарат-мазок суспензии, и под оптическим микроскопом наблюдали длинные веретенообразные кристаллы.

2.2 Группирование, введение препарата и моделирование: 60 крыс рандомизированным образом разделяли на 6 групп по показателям массы тела, по 10 крыс в каждой группе: (1) эталонная группа; (2) группа колхицина (0,3 мг/кг); (3) группа раствора В4 для подкожных инъекций (5 мг/кг*2); (4) группа раствора В4 для внутривенных инъекций (5 мг/кг*2); (5) группа раствора В4 для внутримышечных инъекций в высоких дозах (5 мг/кг*2); (6) группа раствора В4 для внутримышечных инъекций в низких дозах (2.5 мг/кг*2); нормальная группа (5 крыс). Нормальной группе и эталонной группе инъецировали один и тот же объем физиологического раствора, а каждой из групп В4 давали соответствующие лекарственные средства соответствующим путем введения в течение 3 дней, два раза в сутки, с промежутком 4 часа между двумя введениями.

Способ построения модели: в день моделирования модель начинали выстраивать через 1 ч после введения лекарственных средств в медикаментозных группах. В том числе:

(1) Эталонная группа: каждой крысе инъецировали 40 мг/мл суспензии однозамещенного урата натрия в заднюю часть правого голеностопного сустава в дозе 0,2 мл/крысу;

(2) Группа колхицина: группе колхицина препарат вводили однократно в день моделирования, а через 1 ч после введения каждой крысе инъецировали 40 мг/мл суспензии однозамещенного урата натрия с дорсальной стороны правого голеностопного сустава в дозе 0,2 мл/крысу;

(3)~(6) группы В4: через 1 ч после последнего введения каждой крысе инъецировали 40 мг/мл суспензии однозамещенного урата натрия с дорсальной стороны правого голеностопного сустава в дозе 0,2 мл/крысу, а через 3 ч после моделирования каждой подопытной группе дополнительно однократно вводили препарат.

2.3 Измерение опухания сустава: перед моделированием и через 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 12 ч, 24 ч после моделирования измеряли объем правого голеностопного сустава, и вычисляли степень опухания объединенным объемом по соотношению объема сустава после моделирования и объема сустава до моделирования.

3. Результаты экспериментов

См. Таблицу 1.

Данные, приведенные в Таблице 1, показали, что по сравнению с нормальной группой суставы у крыс в эталонной группе значительно опухали через 2 ч после моделирования, опухание достигало пика через 8 ч~12 ч после моделирования, и спонтанно уменьшалось в объеме через 24 ч после моделирования. По сравнению с эталонной группой степень опухания суставов в каждой группе с введением препаратов уменьшалась в различной мере. В том числе, через 2~6 ч после моделирования в группе В4 для подкожных инъекций, через 2~4 ч после моделирования в группе В4 для внутримышечных инъекций и через 4~6 ч после моделирования в группе В4 для внутривенных инъекций, и через 4 ч после моделирования в группе колхицина, степень опухания суставов значительно уменьшалась с существенными различиями. Между группами В4 и группой колхицина значительной разницы не наблюдали, что указывает на то, что для использования соответствующего пути введения и дозировки в эксперименте воздействие В4 на уменьшение острого опухания суставов у крыс, индуцированного кристаллами однозамещенного урата натрия, было эквивалентно воздействию колхицина.

4. Заключение по результатам эксперимента

Результаты данного эксперимента показали, что В4 способен в значительной мере снимать опухание суставов при остром подагрическом артрите путем подкожных инъекций, внутримышечных инъекций и внутривенных инъекций.

Пример 2 Дополнительное исследование воздействия анемозида В4 на протекание у крыс острого подагрического артрита, индуцированного уратом натрия

На основании Примера 1, дозировка анемозида В4 была уменьшена, и дополнительно исследовали воздействие на снятие опухания суставов у крыс при остром подагрическом артрите, индуцированном уратом натрия.

1. Экспериментальные материалы: те же, что в разделе 1 в Примере 1.

2. Методика проведения эксперимента

2.1 Получение кристаллов и суспензии однозамещенного урата натрия: то же, что в разделе 2.1 в Примере 1.

2.2. Группирование, введение, и создание модели:

2.2.1 Группирование: 50 крыс рандомизированным образом разделяли на 5 групп по показателям массы тела, по 10 крыс в каждой группе:

(1) эталонная группа; (2) группа колхицина (0,15 мг/кг); (3) группа В4 для подкожных инъекций (2,5 мг/кг*2); (4) группа В4 для внутримышечных инъекций (2,5 мг/кг*2); (5) группа В4 для внутривенных инъекций (2,5 мг/кг*2).

2.2.2 Введение: эталонной группе инъецировали один и тот же объем физиологического раствора, а каждой подопытной группе (включая группы В4 и группу колхицина) препарат вводили только в день создания модели. В том числе группе колхицина препарат вводили однократно, а каждой группе В4 препарат последовательно вводили два раза с интервалом 4 ч.

2.2.3 Создание модели и измерение опухания суставов: модель начинали выстраивать через 1 ч после введения препарата в медикаментозных группах, и методика была той же, что и в Примере 1. Перед моделированием и через 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч и 12 ч после моделирования, измеряли объем правого голеностопного сустава, и вычисляли степень опухания по соотношению объема сустава после моделирования и объема сустава до моделирования.

3. Результаты экспериментов:

См. Таблицу 2.

Данные, приведенные в Таблице 2, показали, что степень опухания в эталонной группе достигала пика через 8 ч~12 ч после моделирования. По сравнению с эталонной группой степень опухания суставов в каждой медикаментозной группе уменьшалась в различной мере, в частности, через 6~12 ч после моделирования в группе В4 для подкожных инъекций, через 8~12 ч после моделирования в группе В4 для внутримышечных инъекций и через 8~12 ч после моделирования в группе В4 для внутривенных инъекций, и через 6~12 ч после моделирования в группе колхицина, степень опухания суставов очевидно уменьшалась и значительно отличалась по сравнению с эталонной группой. Между группами В4 и группой колхицина значительной разницы не наблюдали, что указывает на то, что при использовании соответствующего пути введения и дозировки в эксперименте воздействие В4 на уменьшение опухания суставов при остром подагрическом артрите у крыс, индуцированном уратом натрия, было эквивалентно воздействию колхицина. Хотя значительной разницы не наблюдали, степень опухания суставов в группе В4 для подкожных инъекций была наименьшей во всех группах через 2~8 ч после моделирования, а степень опухания суставов в группе В4 для внутримышечных инъекций была наименьшей во всех группах через 12 ч после моделирования, что указывает на несколько более высокую эффективность.

4. Заключение по результатам эксперимента

Результаты данного эксперимента показали, что аналогично результатам из Примера 1, инъекционный раствор В4 оказывает значительное воздействие на снятие опухания суставов при остром подагрическом артрите.

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики и может быть использована для лечения острого подагрического артрита. Предложено применение анемозида B4 для получения лекарственного средства для лечения острого подагрического артрита, а также способ лечения острого подагрического артрита, включающий стадию введения анемозида В4 нуждающемуся пациенту. Изобретение обеспечивает новую альтернативную стратегию лечения острого подагрического артрита. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

1. Применение анемозида B4 для получения лекарственного средства для лечения острого подагрического артрита.

2. Применение по п.1, характеризующееся применением анемозида В4 в качестве единственного активного фармацевтического ингредиента для получения лекарственного средства для лечения острого подагрического артрита.

3. Применение по п.1, характеризующееся применением анемозида В4 и других активных фармацевтических ингредиентов для получения лекарственного средства для лечения острого подагрического артрита, в котором другие активные фармацевтические ингредиенты выбраны из одного или более нестероидного противовоспалительного лекарственного средства, колхицина и глюкокортикоида.

4. Применение по п.3, характеризующееся тем, что нестероидное противовоспалительное лекарственное средство выбрано из группы, включающей одно или более из следующих средств: ибупрофен, индометацин, нимесулид, напроксен, набуметон, диклофенак натрия, локсопрофен натрия, рофекоксиб, целекоксиб и эторикоксиб.

5. Применение по п.3, характеризующееся тем, что глюкокортикоид выбран из одного или более следующих средств: преднизона, мепреднизона, бетаметазона, дипропионата беклометазона, дипроспана, преднизолона, гидрокортизона и дексаметазона.

6. Применение по любому из пп.1-5, характеризующееся тем, что лекарственное средство дополнительно содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

7. Применение по любому из пп.1-6, характеризующееся тем, что лекарственное средство выбрано из одного или более пероральных лекарственных препаратов и парентеральных лекарственных препаратов.

8. Применение по п.7, характеризующееся тем, что парентеральный лекарственный препарат выбран из одного или более инъектируемых лекарственных препаратов, лекарственных препаратов для ректального введения и лекарственных препаратов для ингаляционного введения и предпочтительно выбран из одного или более инъектируемых лекарственных препаратов и лекарственных препаратов для ректального введения.

9. Применение по п.8, характеризующееся тем, что инъектируемый лекарственный препарат выбран из одного или более из следующих препаратов: лекарственных препаратов для подкожных инъекций, лекарственных препаратов для внутримышечных инъекций и лекарственных препаратов для внутривенных инфузий; и лекарственный препарат для ректального введения выбран из ректальных суппозиториев и/или лекарственных препаратов для ректальных инфузий.

10. Применение по любому из пп.1-9, характеризующееся тем, что субъектом является млекопитающее, предпочтительно человек.

11. Способ лечения острого подагрического артрита, включающий стадию введения анемозида В4 нуждающемуся пациенту в дозировке 2,5 или 5,0 мг/кг массы тела два раза в сутки.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что способ включает стадию введения анемозида В4 нуждающемуся пациенту путем подкожной инъекции, внутримышечной инъекции или внутривенной инфузии.

13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что нуждающийся пациент представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека.