НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ РНК SARS-COV-2 МЕТОДОМ ПЕТЛЕВОЙ ИЗОТЕРМИЧЕСКОЙ АМПЛИФИКАЦИИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ (КОВИГЕН-LAMP) Российский патент 2022 года по МПК C12N15/11 C12Q1/68 

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и биотехнологии и может быть использовано для специфической клинической лабораторной диагностики коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19), а именно для обнаружения РНК коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2) в мазках из носоглотки.

COVID-19 - острое вирусное заболевание с преимущественным поражением верхних дыхательных путей, вызываемое одноцепочечным РНК-содержащим вирусом острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2) семейства Coronaviridae, рода Betacoronavirus, подрода Sarbecovirus.

По характеру всемирного распространения согласно решению ВОЗ данная инфекция была признана пандемией [Электронный ресурс] URL: https://www.who.int/ru/director-general/speeches/detail/who-director-general-s-opening-remarks-at-the-media-briefing-on-covid-19-11-march-2020/ (дата обращения 11.01.2022)]. По состоянию на 10 января 2022 года зарегистрировано свыше 300 млн подтвержденных случаев заболевания по всему миру и более 5,0 млн летальных исходов, что делает пандемию COVID-19 одной из самых смертоносных в истории [Электронный ресурс] URL: https:// http://jrhs.umsha.ac.ir/index.php/JRHS/article/view/6368/pdf (дата обращения 17.01.2022)].

Геном SARS-CoV-2 секвенирован, структура генома сходна с другими коронавирусами, гомология с SARS-CoV составляет 79,5%, a MERS-CoV - 50%. [Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding [Электронный ресурс] URL: https:// https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(20)30251-8/fulltext (дата обращения 10.01.2022)].

Молекулярно-генетический анализ коронавируса SARS-CoV-2 имеет решающее значение при создании эффективных средств обнаружения возбудителя РНК SARS-CoV-2 и специфической клинической лабораторной диагностики COVID-19.

При отсутствии эффективных средств этиотропной терапии коронавирусной инфекции COVID-2019, недостаточном уровне достижения коллективного иммунитета с помощью специфической иммунопрофилактики и продолжающимся распространением коронавирусной инфекции в мире, приоритетным направлением совершенствования системы биологической защиты населения Российской Федерации остается разработка экспрессных средств специфической клинической лабораторной диагностики коронавирусной инфекции COVID-19. Метод полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР РВ) считается «золотым стандартом» диагностики коронавирусной инфекции COVID-19 благодаря высокой чувствительности и специфичности [Электронный ресурс] URL: https://rnajournal.cshlp.org/content/26/7/771 (дата обращения 11.01.2022)]. Разновидностью данного метода является петлевая изотермическая амплификация (Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP), при которой не требуются температурные циклы денатурации-отжига-элонгации. Амплификация нуклеотидных последовательностей происходит при постоянной температуре с использованием полимеразы с геликазной активностью, что позволяет сократить время анализа, повысить специфичность и чувствительность, упростить интерпретацию результатов. [Электронный ресурс] URL: ttps://virusjour.elpub.ru/jour/article/view/473?locale=ru_RU (дата обращения 10.01.2022)].

Целью настоящего изобретения является разработка набора реагентов для обнаружения РНК SARS-CoV-2 методом петлевой изотермической амплификации в реальном времени для клинической лабораторной диагностики COVID-19 без этапа подготовки проб и выделения РНК.

Для достижения поставленной цели были проведены следующие исследования:

- изучена структура генома вируса SARS-CoV-2;

- на основе изученного генома вируса SARS-CoV-2 разработаны уникальные олигонуклеотидные праймеры;

- обоснован состав набора;

- обоснованы параметры проведения реакции петлевой изотермической амплификации в реальном времени;

- определена аналитическая чувствительность 1,0⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл, специфичность, воспроизводимость набора реагентов.

Сущность изобретения заключается в том, что обнаружение РНК SARS-CoV-2 возбудителя COVID-2019, осуществляется методом одностадийной обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификацией в реальном времени с использованием разработанных олигонуклеотидных праймеров, что позволяет осуществлять воспроизводимое обнаружение РНК SARS-CoV-2 в клинических образцах с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл без этапа подготовки проб и выделения РНК.

Известен коммерческий «Набор для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 в биологическом материале методом изотермической амплификации в режиме реального времени», разработанный ООО «Эвотек-Мирай Геномикс», зарегистрированный Росздравнадзором (19.06.2020 г., № РЗН 2020/10088) имеет аналогичное предназначение и может считаться аналогом представляемого изобретения [Электронный ресурс] URL: https://evotech-mg.com/products/nabor-dlia-vyiavleniia-rnk-koronavirusa-SARS (дата обращения 17.01.2022)].

К признаку представляемого изобретения, отличающим его от аналога, следует отнести:

- набор-аналог имеет в составе жидкие компоненты, что требует специальных условий хранения и транспортировки при температуре Цельсия от минус 80 до минус 20°С, заявляемый набор хранят при температуре от плюс 2 до плюс 8°С. Суммарный срок хранения при температуре от плюс 9 до плюс 20°С не может превышать 14 суток в течение срока годности набора реагентов.

На отечественном рынке реализуется «Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 тяжелого острого респираторного синдрома (COVID-19) методом изотермической амплификации (АмплиТест SARS-CoV-2 LAMP)», разработанный ФГБУ «ЦСП» ФМБА России, зарегистрированный Росздравнадзором (06.04.2021 г., № РЗН 2021/13956) имеет аналогичное предназначение и может считаться аналогом представляемого изобретения [Электронный ресурс] URL: https://https://amplitest.ru/ (дата обращения 17.01.2022)].

К признакам представляемого изобретения, отличающимся от аналога, следует отнести:

- в заявляемом наборе реагентов в качестве фермента используется SD-полимераза, которая сохраняет стабильность при температуре 94°С, что позволяет проводить изотермическую амплификацию с предварительным прогревом для увеличения специфичности реакции, Bst-полимераза в наборе-аналоге активна при температуре ниже 68°С;

- чувствительность заявляемого набора составляет 1⋅10³ Г-Э⋅см³. Согласно паспортным данным, чувствительность набора-аналога составляет 5⋅10³ ГЭ⋅/мл. Меньшая чувствительность набора-аналога может привести к получению ложноотрицательных результатов.

Известен «Набор реагентов для выявления РНК SARS-CoV-2 методом изотермической амплификации «Изотерм SARS-CoV-2 РНК-скрин», разработанный АО «Генериум», зарегистрированный Росздравнадзором (26.11.2020 г., № РЗН 2020/9957), имеет аналогичное предназначение и может считаться аналогом представляемого изобретения [Электронный ресурс] URL: https:// https://www.generium.ru/products/izoterm-sars-cov-2-rnk-skrin/ (дата обращения 17.01.2022)].

К признакам представляемого изобретения, отличающимся от аналога, следует отнести:

- в заявляемом наборе реагентов в качестве фермента используется SD-полимераза, которая сохраняет стабильность при температуре 94°С, что позволяет проводить изотермическую амплификацию с предварительным прогревом для увеличения специфичности реакции, Bst-полимераза в наборе-аналоге активна при температуре ниже 68°С;

- заявляемый набор реагентов возможно транспортировать при температуре от 9 до 20°С не более 14 суток, транспортирование набора-аналога производят в соответствии при температуре от 2 до 8°С.

Технический результат изобретения заключается в том, что обнаружение РНК коронавируса SARS-CoV-2 осуществляется методом одностадийной реакции обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификацией в реальном времени с использованием разработанных уникальных олигонуклеотидных праймеров, находящихся в лиофильно высушенном состоянии, с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл, без этапов подготовки проб и выделения РНК.

Указанный технический результат изобретения достигается за счет включения в состав набора реагентов лиофилизированных олигонуклеотидных праймеров, в том числе флуоресцентно-меченых, позволяющих в реакции петлевой изотермической амплификации в реальном времени достоверно обнаруживать специфические нуклеотидные последовательности РНК SARS-CoV-2 возбудителя COVID-2019, имеющих структуру нуклеотидных последовательностей, которые входят в состав реакционной смеси аналитической в стрипованных микропробирках вместе с обратной транскриптазой MMLV-ревертазой, SD-полимеразой и эквимолярной смесью дезоксинуклеозидтрифосфатов:

стрипованные микропробирки с лиофильно высушенной реакционной смесью контрольной, состоящей из эквимолярной смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов, обратной транскриптазы MMLV, SD-полимеразы, искусственной контрольной РНК, праймеров, фланкирующих последовательность искусственной контрольной кДНК:

а также в отдельных микропробирках: разбавитель, положительный контрольный образец, представляющий лиофильно высушенную искусственно синтезированную последовательность фрагмента гена 7V, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, отрицательный контрольный образец, буфер для экстрагирования биологического образца, зонд медицинский одноразовый стерильный по ТУ 32.50.13-002-28731857-2020 РЗН №2021/13989 от 12.04.2021 г.

Примечание: BHQ2, BHQ1 - присоединенные к 3'-концевому нуклеотиду темновые гасители флуоресценции; FAM, ROX - флуоресцентные красители, присоединенные к 5'-концевому нуклеотиду соответствующего праймера.

Структура олигонуклеотидных праймеров, специфичных по отношению к геному вируса SARS-CoV-2, представленная в данном наборе, в мире аналогов не имеет.

Разработанные праймеры являются видоспецифичными в отношении коронавируса SARS-CoV-2. Праймеры синтезированы путем твердофазного химического синтеза с последующей очисткой методами электрофореза в полиакриламидном геле и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предлагаемые к патентованию в составе набора реагентов олигонуклеотидные праймеры фланкируют уникальные участки фрагмента гена N, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2. Использование в комплекте с праймерами соответствующих флуоресцентно-меченных праймеров позволяет производить детекцию продуктов петлевой изотермической амплификации в режиме реального времени.

Состав заявляемого набора реагентов приведен в таблице 1

Реакционная смесь аналитическая в стрипованных микропробирках расфасована в микропробирки в стрипах объемом 0,2 мл, в составе: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих фрагмент гена N, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, включая два праймера, меченных флуоресцентным красителем ROX, обратная транскриптаза MMLV, SD-полимераза.

Реакционная смесь контрольная в стрипованных микропробирках, расфасована в микропробирки в стрипах объемом 0,2 мл, в составе: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, искусственная контрольная РНК, олигонуклеотидные праймеры, фланкирующие последовательность кДНК, включая два праймера, меченных флуоресцентным красителем FAM, обратная транскриптаза MMLV, SD-полимераза.

Положительный контрольный образец представляет искусственно синтезированную последовательность гена N, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2.

Контрольная РНК в реакционной смеси контрольной представляет собой искусственно синтезированную последовательность следующего нуклеотидного состава:

Буфер для экстрагирования биологического образца предназначен для инактивации и экстракции РНК SARS-CoV-2 в анализируемых пробах, благодаря чему этапы подготовки проб и выделения РНК не требуются.

Постановка обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификации в реальном времени проводится в соответствии с разработанной инструкцией по применению набора реагентов на детектирующих амплификаторах, имеющих каналы детекции, соответствующие красителям FAM и ROX либо их спектральным аналогам с характеристиками λ_{макс.возб.}/λ_{макс.эм.} равными 490 нм/520 нм и 580 нм/605 нм:

- устройство компьютеризированное четырехканальное для обнаружения в режиме реального времени флюоресцентной детекцией специфической последовательности нуклеиновых кислот методом полимеразной цепной реакции «АНК» по ТУ 9443-003-04699534-2005 (РУ на МИ от 21.08.2015 г. № ФСР 2010/08892);

- амплификатор детектирующий «ДТпрайм» по ТУ 9443-004-96301278-2010 в следующих модификациях: 4М1, 4М3, 4М6, 5М3, 5М6, 6М1, 6М3, 6М6, 4X1, 5X1, 6X1 (РУ на МИ от 03.03.2011 г. № ФСР 2011/10229);

- термоцикл ер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с принадлежностями (РУ на МИ от 21.06.2016 г. № ФСЗ 2008/03399).

Подготовка проб к анализу и выделение РНК SARS-CoV-2 не требуется.

Интерпретация результатов проводится с использованием специализированного программного обеспечения используемого детектирующего амплификатора согласно руководству по эксплуатации.

Регистрация сигнала флуоресценции в каждой микропробирке осуществляется после каждого «цикла» амплификации. Накопление продуктов амплификации в микропробирке реакционной смеси аналитической сопровождается ростом сигнала по каналу ROX, в микропробирке реакционной смеси контрольной - по каналу FAM.

Результаты анализа не подлежат учету в случае регистрации:

- роста сигнала в пробирке с отрицательным контрольным образцом (ложноположительный результат всего эксперимента);

- отсутствия роста сигнала в пробирке с положительным контрольным образцом (ложноотрицательный результат всего эксперимента);

- отсутствия роста сигнала для анализируемого образца в контрольной пробирке реакционной смеси контрольной при отсутствии роста сигнала для этого же образца в пробирке реакционной смеси аналитической (ложноотрицательный результат отдельной пробы);

Результаты анализа подлежат учету в случае регистрации:

- отсутствия роста сигнала в пробирке с отрицательным контрольным образцом;

- роста сигнала в пробирке с положительным контрольным образцом;

- роста сигнала в пробирках реакционной смеси контрольной и реакционной смеси аналитической.

- роста сигнала в пробирке реакционной смеси аналитической и отсутствия роста сигнала в пробирке реакционной смеси контрольной.

- роста сигнала в пробирках реакционной смеси контрольной и отсутствия роста сигнала в пробирке реакционной смеси аналитической.

Интерпретация результатов анализа проводится согласно таблице 2.

Предлагаемое техническое решение является новым, поскольку в общедоступных источниках в Российской Федерации неизвестен набор реагентов, включающий все необходимые компоненты, обеспечивающие обнаружение РНК SARS-CoV-2 методом одностадийной реакции обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификацией, с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл без этапов подготовки проб и выделения РНК.

Предлагаемое техническое решение имеет изобретательский уровень, поскольку разработанные уникальные олигонуклеотидные праймеры для обнаружения РНК SARS-CoV-2 были разработаны в результате выбора и синтеза праймеров, фланкирующих фрагмент гена N, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, что обеспечивает обнаружение РНК указанного вируса методом петлевой изотермической амплификации с получением воспроизводимых результатов в образцах с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл без этапов подготовки проб и выделения РНК, буфер для экстрагирования позволяет избежать этапов подготовки проб и выделения РНК.

Определение аналитической чувствительности набора реагентов определяли с использованием специализированного контрольного образца предприятия-производителя. Аналитическая чувствительность составила 1,0⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл анализируемой пробы.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующим примером.

Пример 1. Клинико-лабораторные испытания аналитической специфичности и воспроизводимости при использовании разработанного набора реагентов

Для определения аналитической специфичности и воспроизводимости набора реагентов в клинико-лабораторных испытаниях использовали 25 положительных образцов от больных коронавирусной инфекцией COVID-19 (носоглоточные мазки, содержащие РНК SARS-CoV-2) и 25 отрицательных образцов (пробы не содержащие РНК SARS-CoV-2, включая образцы, в которых было подтверждено наличие возбудителей респираторных инфекций: вируса гриппа А, вируса гриппа В, аденовируса, метапневмовируса, вируса парагриппа, риновируса, сезонного коронавируса (не SARS-CoV-2), Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae type В, а также образцы от людей без признаков ОРВИ, часть из которых была нагружена возбудителями респираторных инфекций из состава панели инактивированных возбудителей респираторных инфекций (суррогатные образцы с охарактеризованными музейными штаммами из Государственной коллекции вирусов ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России на основе представленных паспортов штаммов (с биологической активностью не менее 1,0×1⁵ БОЕ на мл).

Результаты клинико-лабораторных испытаний представлены в таблице 3.

Данные, представленные в таблице 3, показывают, что суммарное количество положительных определений для концентрации 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл составляет 25 из 25 положительных образов, что соответствует воспроизводимости не менее 95%, и подтверждает специфичность испытываемого набора реагентов в отношении вируса SARS-CoV-2 [Генес B.C. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. - М.: Наука, 1967. - 208 с.].

Воспроизводимость оценивали на трех положительных на РНК SARS-CoV-2 образцах и одном отрицательном в 5 пяти повторениях каждый.

Таким образом, разработанный набор реагентов позволяет в одностадийной реакции обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификацией в реальном времени с использованием разработанных уникальных олигонуклеотидных праймеров, находящихся в лиофильно высушенном состоянии, обнаруживать РНК SARS-CoV-2 с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл, без этапов подготовки проб и выделения РНК.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Олигонуклеотидные праймеры, в том числе и флуоресцентно-меченые, предназначенные для обнаружения РНК SARS-CoV-2 методом методом петлевой изотермической амплификации в реальном времени, имеют представленную ниже структуру нуклеотидных последовательностей:

в аналитической реакционной смеси:

SEQ ID NO 1 прямой внешний праймер SARS-CoV-2_F3:

5'-ACCAGGAACTAATCAGACAAGGA-3';

SEQ ID NO 2 обратный внешний праймер SARS-CoV-2_В3:

5'-GACTTGATCTTTGAAATTTGGATCTTT-3';

SEQ ID NO 3 прямой внутренний праймер SARS-CoV-2_LB:

5'-ACCTTCGGGAACGTGGTTGA-3';

SEQ ID NO 4 обратный внутренний праймер SARS-CoV-2_LF:

5'-CTGGGGGCAAATTGTGCAATT-3';

SEQ ID NO 5 меченный флуоресцентным красителем ROX прямой праймер:

5'-(5ROX-C8-N3 PR)-CGCGCATTGGCATGGAAGTCACAATTTGATGGCACCTG(dT-BHQ2)GTA-3';

SEQ ID NO 6 меченный флуоресцентным красителем ROX обратный праймер:

5'-(5ROX-C8-N3 PR)-CATTCCGAAGAACGCTGAAGCGGAACTGATTACAAACA(dT-BHQ2)TGGCC-3';

SEQ ID NO 7 прямой внутренний праймер SARS-CoV-2_BIP:

5'-CGCGCATTGGCATGGAAGTCACAATTTGATGGCACCTGTGTA-3';

SEQ ID NO 8 обратный внутренний праймер SARS-CoV-2_FIP:

5'-CATTCCGAAGAACGCTGAAGCGGAACTGATTACAAACATTGGCC-3'.

в контрольной реакционной смеси:

SEQ ID NO 9 прямой внешний праймер F3:

5'-TGAGTGAGTGAAGTTTGCGT-3';

SEQ ID NO 10 обратный внешний праймер В3:

5'-TCAGTTTCCAAAGCCTCCAA-3';

SEQ ID NO 11 прямой внутренний праймер LB:

5'-GTTGAATTCGATGAAGCTTCGAAAG-3';

SEQ ID NO 12 меченный флуоресцентным красителем FAM прямой праймер:

5'-(FAM)GGCCAATTGTCGCCGTAATGCCGTTTGCGT(T-BHQ1)TGCGAAGG-3';

SEQ ID NO 13 меченный флуоресцентным красителем FAM обратный праймер:

5'-(FAM)TGCAACACACACGACCAGGTAAGCGAATCAAATGC(T-BHQ1)GCTG-3';

SEQ ID NO 14 внутренний обратный праймер FIP:

5'-GGCCAATTGTCGCCGTAATGCCGTTTGCGTTTGCGAAGG-3';

SEQ ID NO 15 внутренний прямой праймер BIP:

5'-TGCAACACACACGACCAGGTAAGCGAATCAAATGCTGCTG-3';

SEQ ID NO 16 искусственная контрольная РНК:

TAATACGACTCACTATAGGGAGAGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGCAC

CAACCAACCAACCAACCAACCAACCAACTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTT

CAGTCAGTCAGTCAGTCAGTCAGTCAGTCAGTGAGTGAGTGAGTGAGTGAGTGAT

GAGTGAAGTTTGCGTTTGCGTTTGCGTTTGCGAAGGCTCTTGGCAATCAGCTGTTAT

AGCATTACGGCGACAATTGGCCAGCTCTAGTTTGCAACACACACGACCAGGTTGA

GTTGAATTCGATGAAGCTTCGAAAGCAGCAGCATTTGATTCGCTTTATAGTTATGC

AATTATAATTGGAGGCTTTGGAAACTGATTAATTCCACTTATAATCGGAGCACCT.

Примечание - BHQ1, BHQ2 - темновые гасители флуоресценции; FAM, ROX - флуоресцентные красители.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и биотехнологии. Представлен набор реагентов для обнаружения РНК SARS-CoV-2 методом петлевой изотермической амплификации в реальном времени с использованием одностадийной реакции обратной транскрипции, совмещенной с петлевой изотермической амплификацией в реальном времени с использованием разработанных уникальных олигонуклеотидных праймеров, находящихся в лиофильно высушенном состоянии, с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл, без этапов подготовки проб и выделения РНК. Набор содержит расфасованную в стрипованные микропробирки лиофильно высушенную реакционную смесь аналитическую, расфасованную в стрипованные микропробирки лиофильно высушенную реакционную смесь контрольную, разбавитель, положительный контрольный образец, отрицательный контрольный образец, буфер для экстрагирования биологического образца, зонд медицинский одноразовый стерильный. Изобретение может быть использовано для специфической клинической лабораторной диагностики коронавирусной инфекции COVID-19, а именно для обнаружения РНК коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома 2 SARS-CoV-2 в анализируемых образцах. 3 табл.,1 пр.

Набор реагентов для обнаружения РНК SARS-CoV-2 методом петлевой изотермической амплификации в реальном времени, отличающийся тем, что позволяет обнаруживать РНК SARS-CoV-2 с аналитической чувствительностью 1⋅10³ копий РНК SARS-CoV-2 в 1 мл без этапов подготовки проб и выделения РНК, имеет в составе расфасованную в стрипованные микропробирки лиофильно высушенную реакционную смесь аналитическую, состоящую из эквимолярной смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов, обратной транскриптазы MMLV, SD-полимеразы, видоспецифичных праймеров, фланкирующих фрагмент гена N, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2:

расфасованную в стрипованные микропробирки лиофильно высушенную реакционную смесь контрольную, состоящую из эквимолярной смеси дезоксинуклеозидтрифосфатов, обратной транскриптазы MMLV, SD-полимеразы, праймеров, фланкирующих последовательность кДНК искусственной контрольной РНК:

искусственную контрольную РНК:

а также в отдельных микропробирках: разбавитель, положительный контрольный образец, представляющий лиофильно высушенную искусственно синтезированную последовательность фрагмента гена 7V, кодирующего нуклеокапсидный белок SARS-CoV-2, отрицательный контрольный образец, буфер для экстрагирования биологического образца, зонд медицинский одноразовый стерильный.