ПРИМЕНЕНИЕ АМФИДИНОЛА С ФУНГИЦИДНОЙ И(ИЛИ) БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ ГРИБОВ, ООМИЦЕТОВ И(ИЛИ) ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ РАСТЕНИЙ И СЕМЯН Российский патент 2023 года по МПК A01N31/04 A01N31/06 A01N43/16 A01N65/03 A01P1/00 A01P3/00 

Изобретение относится к области противогрибковых и антибактериальных агентов для семян.

После второй мировой войны для удовлетворения запросов растущей численности населения стартовала «зеленая революция», комплекс современных программ селекции видов, орошения, применения удобрений и синтетических пестицидов, внедрявшихся с целью контролирования плодородия почвы и борьбы с патогенными организмами. Эти меры позволили практически утроить производство продуктов питания за какие-то сорок лет. На сегодняшний день перед сельским хозяйством стоит задача обеспечить продовольствием 9 миллиардов людей к 2050 году и продолжать наращивать производство на единицу площади, учитывая все большее ограничение в ресурсах и нарастание сдерживающих факторов. Например, возможные потери из-за биотических стрессов и отсутствия способов защиты урожая могут достигать более половины производства зерновых. Таким образом, стандартные фитосанитарные продукты являются неотъемлемой частью защиты культур во всем мире с целью ограничения потерь. Однако, эти химические продукты оказывают сильное отрицательное влияние на здоровье человека и окружающую среду, побуждая применять другие средства борьбы с инфекционными заболеваниями, такие как биологический контроль (совокупность способов защиты растений с применением естественных механизмов). Задачей данного изобретения является применение одноклеточных водорослей, происходящих из фитопланктона, в качестве источника новых природных молекул, способных действовать в качестве «биологического пестицида», непосредственно воздействуя на выживаемость фитопатогенов, поражающих важнейшие сельскохозяйственные культуры, такие как пшеница и виноград.

Фузариозы

В Европе несколько заболеваний, поражающих пшеницу (Triticum aestivum), отвечают за потери урожая и плохое фитосанитарное состояние зерна. Одним из наиболее важных является септориозная пятнистость листьев зерновых (возбудитель Septoria spp.). Фузариоз связан с комплексом видов, объединяющим два рода фитопатогенных грибов, Fusarium и Microdochium (1). Эти два рода включают приблизительно 19 видов, способных вызывать фузариоз колосьев пшеницы. Наиболее распространенными видами в Европе являются F. graminearum, F. culmorum, F. avenaceum, F. poae, M. nivale и M. majus. Род Fusarium относится к отделу аскомицеты и семейству Nectriaceae. Род Microdochium относится к семейству Tuberculariaceae и включает два вида, М. nivale и М. majus, вызывающие появление таких же симптомов на колосьях и листьях, как и Fusarium. Несколько видов Fusarium, из которых Fusarium graminearum является наиболее широко распространенным, могут совместно обнаруживаться на определенном участке или делянке или початке, образуя таким образом, комплекс патогенов, вызывающих фузариоз. Агрессивность, встречаемость и распространенность каждого из видов варьирует в зависимости от географической локализации, климатических особенностей и практики культивирования. Наличие нескольких таких видов в одном початке вероятно изменяет их равновесие и их динамику продуцирования токсинов.

Фузариоз пшеницы может погубить культуру за несколько недель до сбора. Он может быть связан с большими потерями урожая (недозрелость и низкая масса зерен), снижением всхожести семян или снижением их качества из-за присутствия в зернах токсинов. Действительно, грибы рода Fusarium, но не рода Microdochium способны вырабатывать токсичные вторичные метаболиты, микотоксины, чье присутствие увеличивает заболеваемость сельскохозяйственных культур и представляет важнейшую угрозу экономике и здоровью населения. Основные средства борьбы с фузариозом включают практики культивирования, устойчивость видов и химическую борьбу с сорняками. В настоящее время всего лишь несколько видов пшеницы являются устойчивыми к фузариозу. Однако, существуют и выносливые виды с частичной устойчивостью, которая ограничивает потери урожая и накопление токсинов при сборе. После того как культура установилась, возврат к химическим способам борьбы возможен, однако эффективность их ограничена. Разнообразие патогенов и их различная чувствительность к активным веществам усложняет такую борьбу. Например, грибы рода Fusarium чувствительны к триазолам, тогда как грибы рода Microdochium чувствительны к стробилуринам.

Септориозы

Септориоз представляет собой заболевание пшеницы, приводящее к значительным потерям урожая и существенным экономическим потерям в мировом масштабе, особенно во влажных жарких регионах. Выделяют две основные формы септориоза: септориоз колоса (возбудитель Phaeosphaeria nodorum) и септориоз листьев (возбудитель Mycosphaerella graminicola). Во Франции септориоз колоса в основном встречается в континентальных регионах, тогда как септориоз листьев в основном встречается в северо-западных областях и прибрежных регионах, где гриб находится в климатических условиях, благоприятствующих его развитию.

Симптомы, вызываемые М. graminicola, развиваются последовательно, в форме хлороза, светло-зеленых пятен, а затем некроза, когда пятна приобретают коричневую окраску. Такие участки некроза склонны к слиянию (коалесценции). Затем на этих участках некроза появляются пикнидии, черные плодовые тела, едва различимые невооруженным глазом. Несколько групп исследователей изучали урон, наносимый септориозом, по таким критериям, как снижение фотосинтеза, роста или урожая. Так, можно оценить урон в количественном выражении, отражая влияние заболевания на содержание белка в собранных зернах.

М. graminicola представляет собой гемибиотрофный гриб, первая биотрофная фаза которого сопровождается развитием инфекции в живых тканях, а затем следует некротрофная фаза, во время которой гриб вырабатывает токсины, вызывающие гибель обсемененных тканей. В зависимости от внешних условий М. graminicola воспроизводится либо половым (образование аскоспор), либо бесполым (образование пикнидиоспор) путем. Аскоспоры, распространяемые ветром на большие расстояния, способствуют выживанию гриба в отсутствие растения-хозяина и считаются основным источником первичного инокулума, инициирующего заболевание. Пикнидиоспоры, в свою очередь, образуются в основном в ходе эпидемии заболевания, в течение нескольких последовательных инфекционных циклов. Эти споры разбрызгиваются на небольшие расстояния с каплями дождя. Возможные потери урожая более значительны при поражении заболеванием последних листов под колосом, участвующих в наливе зерна. Потери урожая вследствие поражения септориозом согласно оценкам, составляют в среднем 1-2 тонны на гектар, доходя до 3-3,5 тонн на гектар, что соответствует потерям до 40% урожая.

Способы борьбы с М. graminicola основаны на применении фунгицидов и устойчивых культиваров. Однако, за последние годы эффективность фунгицидов существенно снизилась из-за сильного отбора патогенов, например, обладающих устойчивостью к семейству стробилуринов, а также недавнего снижения полевой эффективности триазолов.

Болезни винограда

Сегодня виноград выращивают во всем мире, и он играет центральную роль в экономике многих стран. Его потребляют как в виде столовых сортов, так и в виде соков, однако основным его применением остается винодельческое производство. Евросоюз является основным производителем вина и крупнейшим мировым экспортером виноматериалов. Вклад данного сектора в экономику стран Евросоюза оценивается приблизительно в 15 миллиардов евро ежегодно (www.ceev.be). В 2010 году винодельни занимали почти 865000 гектаров во Франции или почти 3% орошаемых земель, что сделало Францию мировым лидером по производству вина с показателем 51,1 миллионов гектолитров. Виноград должен противостоять атакам различных патогенов, включая криптогамные болезни. Когда они поражают лигнифицированные части растения, их обозначают «болезнями древесины», примерами которых являются эска, пятнистый некроз и эутипиоз. Грибы, поражающие ягоды и травянистые части винограда (листья, стебли и т.д.), вызывают «криптогамные болезни листвы», включая серую гниль, черную гниль, ложную мучнистую росу и мучнистую росу.

Эска

Тогда как ложная мучнистая роса, мучнистая роса и серая гниль являются тремя основными криптогамными болезнями, поражающими виноградники во всем мире, болезни древесины, вызванные грибковыми агентами, становятся факторами, лимитирующими производство винограда. Виноградари сталкиваются с двумя основными проблемами, касающимися указанных болезней древесины: недостаток способов борьбы и плохое знание различных биотических и абиотических факторов.

Наиболее распространенными в мире видами грибов, вызывающими заболевание эска, являются аскомицеты Diplodia seriata, Diplodia mutila, Neofusicoccum parvum и Neofusicoccum luteum. Во Франции наиболее изолированными видами являются Diplodia seriata и Botryosphaeria dothidea. Многие другие виды грибов, включая некоторые патогены, часто выделяют из участков некроза растений, пораженных эска. Это касается Eutypa lata, агента, отвечающего за эутипиоз. Данное заболевание имеет две формы: медленная форма и апоплексическая форма. Симптомы, проявляющиеся на листьях, характерны для медленной формы, хотя они могут присутствовать и при апоплексической форме. Для медленной формы характерна специфическая окраска листьев: желтоватые междужилковые пятна на белых сортах винограда и междужилковые пятна с красной каймой на черных сортах винограда, при этом жилки остаются зелеными. Эти пятна постепенно приобретают коричневую окраску и засыхают. Симптомы, проявляющиеся на листьях при медленной форме, могут быть заметны на виноградных кустах в течение одного года и исчезнуть на следующий год. Апоплексическая форма характеризуется быстрым засыханием надземных органов, побегов, листьев и гроздей как всех кустов винограда, так и их части. Данный симптом обычно появляется при жарком лете, приводя к гибели винограда всего за несколько дней, без каких-либо настораживающих симптомов. Разнообразие источников инокулума и очень медленное и незаметное развитие грибов в древесине винограда очень затрудняют внедрение способов борьбы. Кроме того, изменения в нормативных требованиях к фитосанитарным продуктам в Европе привели к запрету химических препаратов на основе арсенита натрия из-за канцерогенного влияния на человека и высокой токсичности этих продуктов для окружающей среды. Во всем мире проводятся многочисленные исследования для тестирования новых молекул, которые могли бы применяться в питомниках или виноградниках.

Серая гниль

Серая гниль представляет собой криптогамную болезнь, возбудителем которой является гриб аскомицет под названием Botrytis cinerea. Он относится к классу Leotiomycetes, отряду Helotiales и семейству Sclerotiniaceae. В. cinerea является некротрофным грибом, способным колонизировать как здоровые, уже зараженные ткани растения, так и омертвевшие ткани (сапрофитизм). На листьях симптомы проявляются в виде коричневых пятен с сероватым пушком на нижней стороне (плодоношение гриба), которые склонны увеличиваться и захватывать всю листовую пластину. Гроздья могут быть поражены до цветения и засохнуть. Они особенно чувствительны на стадии созревания, при этом ягоды винограда белых сортов приобретают темную окраску и покрываются толстым серым пушком. Конидии распространяются ветром и проникают в неодревесневшие органы либо непосредственно, либо через раны. Этим объясняется, почему разрыв ягод, вызванный мучнистой росой, способствует заражению В. cinerea. Это заболевание не только приводит к потерям урожая, достигающим 40% (данные Viniflhor, 2006), но и снижает органолептические качества вина. При этом, Botrytis cinerea также ответственна за «благородную гниль», необходимую для получения некоторых сладких вин.

Ложная мучнистая роса

Два заболевания, наиболее тяжело поражающие виноградники в настоящее время, это ложная мучнистая роса и мучнистая роса. Агент, вызывающий ложную мучнистую росу, оомицет Plasmospora viticola, принадлежащий к отряду Peronosporales, является облигатным паразитом: чтобы оставаться жизнеспособным и размножаться ему необходимы живые листья винограда. Р. viticola поражает все неодревесневшие ткани винограда, а также гроздья. Он вызывает опадение листьев, приобретение коричневой окраски и высыхание ягод и побегов. В отсутствие лечения и при благоприятных климатических условиях ложная мучнистая роса может погубить до 75% сезонного урожая.

Жизненный цикл P. viticola включает половую и бесполую фазы. Бесполая фаза приводит к образованию спор, необходимых для вторичного заражения и для распространения патогена на небольшие расстояния, тогда как в ходе половой фазы образуются спящие и устойчивые к холоду ооспоры, позволяющие пережить зиму и опосредующие первичное заражение. Первыми макроскопическими проявлениями ложной мучнистой росы на винограде является появление бледно-желтых пятен неправильной формы (масляных пятен), распространяющихся по верхней или адаксиальной поверхности листьев. По мере разрастания мицелия внутри, развитие белых ватообразных наростов на нижней стороне листа под маслянистыми пятнами становится боле выраженным. При запущенной инфекции эти симптомы сопровождаются появлением омертвевшей ткани коричневого цвета. Борьба с ложной мучнистой росой в основном представляет собой превентивные мероприятия с распылением фунгицидов. Если атаку возможно остановить, то повреждения соцветий и гроздей уже необратимы.

Мучнистая роса

Мучнистая роса винограда (Erysiphe necator) является облигатным биотрофным аскомицетом, относящимся к отряду Erysiphales. Гриб обсеменяет поверхность всех зеленых органов винограда, особенно верхнюю поверхность листьев, и распространяется на ягоды. Половая фаза, которая характеризуется образованием клейстотеций, содержащих аскоспоры, чередуется с бесполой фазой, приводящей к образованию конидиофор, несущих конидии. Фазу зимнего отдыха винограда гриб переживает в виде гифы в спящих почках или в виде клейстотеций на поверхности растения. Споры, находящиеся в клейстотециях, высвобождаются весной и прорастают на поверхности почек и молодых листьев. Первичная гифа развивается на поверхности листа, затем поверхность листа покрывается все более и более сложной и разветвленной сетью мицелия. Затем в начале стадии споруляции из мицелия дифференцируются конидиофоры и обсеменяют другие зеленые ткани растения, вызывая вторичное заражение.

Из-за присутствия мицелия и конидиофор, несущих конидии, поверхность инфицированных тканей хозяина приобретает серовато-белый припудренный вид. На бутонах развивается белый пушок, они засыхают. Мучнистая роса поражает только молодые ягоды с содержанием сахара <8%. Инфекции подвержены все поверхности листьев, независимо от их возраста. Молодые инфицированные листья вначале становятся темно-зелеными, а затем деформируются и становятся чахлыми. Верхняя поверхность листьев может иметь хлорозные пятна более светлой окраски, схожие с маслянистыми пятнами ложной мучнистой росы. В настоящее время основным средством борьбы с наиболее тяжелыми заболеваниями, поражающими виноград, является применение больших количеств пестицидов и фунгицидов. Таким образом, фитосанитарное давление в виноградарстве является особенно сильным.

Обработка фунгицидами, направленная на борьбу с ложной мучнистой росой и мучнистой росой, проводится в соответствии с четким графиком для предупреждения повреждений, вызываемых заболеванием. В Евросоюзе (ЕС) для борьбы с заболеваниями винограда ежегодно применяют приблизительно 68000 тонн фунгицидов, что составляет 65% всех используемых в сельском хозяйстве фунгицидов, тогда как виноградники занимают только 3,3% от общей площади земель, пригодных для сельскохозяйственного производства (Евростат, 2007). Для ограничения сильного давления химических продуктов на окружающую среду и здоровье необходимо выделить молекулы естественного происхождения, которые будут играть роль в защите культур от инфекционных заболеваний с целью замещения химических фитосанитарных продуктов, применяемых в настоящее время.

Парша яблок

Парша, наряду с коричневой гнилью и мучнистой росой является одной из основных грибковых заболеваний, поражающих яблони (род Malus). Ее вызывают гриб аскомицет под названием Venturia inaequelis, у которого существует несколько тысяч штаммов, вызывающих черные или коричневые поражения поверхности листьев, бутонов или фруктов и иногда даже древесины. Плоды и нижняя часть листьев наиболее чувствительны к ней.

Гриб переживает зиму на листьях, опавших с пораженных деревьев, в форме перитеций. Весной, когда почки распускаются, перитеции наполняются аскоспорами. Аскоспоры выбрасываются в воздух в садах во влажные дни и достигают деревьев с воздушными потоками. Такой выход аскоспор начинается с распусканием почек и продолжается от 6 до 10 недель, чаще всего до конца июня. Когда аскоспоры достигают листвы, а листья оказываются влажными в течение какого-то периода времени, они начинают прорастать и проникают в листья: так происходит первичное заражение. В зависимости от влажности и температуры грибковая инфекция становится заметна на различных частях дерева через 1-3 недели. Темно-оливковые или коричневые пятна размером приблизительно 5 мм появляются на листьях и иногда могут покрывать лист целиком. Зараженные листья могут опадать. Заражение плодов прежде всего можно распознать по серым пятнам на плодоножке.

После первичного заражения и до конца лета гриб развивается и производит конидии, которые являются другой формой репродуктивных органов. При отделении конидий происходит вторичное заражение. Конидии могут инфицировать любую часть дерева, а те из них, которые образовались поздним летом могут даже расти на собранных плодах. Сильный дождь распыляет конидии.

Болезнь редко убивает своего хозяина, но может существенно (до 100%) снизить качество фруктов и плодоношение в отсутствие обработки фунгицидами. После превентивных мер, заключающихся в уборке опавших листьев осенью, стратегия борьбы требует эффективных действий весной, чтобы предупредить инфицирование деревьев высвобождающимися спорами или их развитие на деревьях. Традиционный способ защиты заключался в том, что фунгициды начинали применять при распускании почек и повторно применяли примерно каждые семь дней до конца июня для защиты новых побегов. Яблоневые сады больше всех подвергаются обработке фунгицидами и инсектицидами, что в среднем составляет 28,8 обработок фунгицидами в год, из которых 19 направлены на борьбу с паршой (данные Национального института агрономических исследований INRA).

Микроводоросли

Молекулы естественного происхождения, обладающие новым механизмом действия и способные преодолеть устойчивость, развившуюся у патогенов, имеют большое будущее для разработки новых фитосанитарных продуктов, безвредных для окружающей среды. В океанах представлено большое разнообразие организмов (бактерий, микроводорослей, водорослей, позвоночных и беспозвоночных животных), которые являются источником новых биоактивных молекул, которые до сих пор не нашли широкого применения (2). Например, морские микроорганизмы накапливают биоактивные вторичные метаболиты, уникальная структура которых не встречается у наземных организмов. Таким образом, указанные метаболиты потенциально являются новыми молекулами, представляющими большой интерес. Описаны некоторые вещества, происходящие из морских организмов, обладающие противогрибковой активностью или активностью естественных защитных веществ, однако исследования этих молекул все еще недостаточны (3).

Микроводоросли представляют собой одноклеточные организмы, которые играют ключевую роль в водных экосистемах. Производя органические вещества, они играют важную экологическую роль, поскольку находятся в основании пищевой цепочки морской среды. Однако их невероятная способность заселять все пространство мирового океана позволяет предположить, что они разработали стратегии, позволяющим им эффективно бороться с патогенами, в частности, благодаря выработке естественных пестицидов. Например, массивная пролиферация в прибрежных водах микроводорослей, вырабатывающих биотоксины, отвечает за вредоносное цветение водорослей (НАВ, от англ. harmful algal blooms), оказывающее существенное влияние на пищевые цепи.

Среди микроводорослей динофлагелляты, принадлежащие к отряду Gymnodiniales и семейству Gymnodiniacae, существуют в морской воде средних широт и тропиков, обитая в свободной форме или в симбиозе с беспозвоночными (например, кораллами). Динофлагелляты синтезируют большое количество вторичных метаболитов, обозначаемых поликетидами (соединения с биологической или фармакологической активностью, которые могут быть токсичными для обеспечения преимущества в борьбе за выживание), многие из которых были охарактеризованы, в том числе отвечающие за НАВ (4). Например, типичный представитель динофлагеллят, Amphidinium carterae, вырабатывает огромное количество различных биоактивных соединений, многие из которых имеют потенциал стать терапевтическими агентами (5). Поликетиды, вырабатываемые видами Amphidinium, очень разнообразны по структуре и образуют три категории: макролиды, поликетиды с линейной структурой и длинноцепочечные поликетиды. Например, амфидинолы представляют собой полигидрокси-полиены (длинноцепочечные поликетиды), которые обладают выраженной противогрибковой и гемолитической активностью. Так, они увеличивают мембранную проницаемость, связываясь с липидами мембраны (6). Из различных штаммов Amphidinium были выделены амфидинол-подобные соединения с длинной полигидроксильной цепью, такие как лингшуйолы, каратунгиолы, картераол Е, лютеофанолы, колопсинолы и амфезонол А (5).

Для ограничения сильного давления химических продуктов на окружающую среду и здоровье необходимо выделить молекулы естественного происхождения, которые будут играть роль в защите культур от инфекционных заболеваний с целью замещения химических фитосанитарных продуктов, применяемых в настоящее время. Эти «биологические пестициды» могут непосредственно влиять на выживаемость фитопатогенов, поражающих важнейшие агрономические культуры, такие как пшеница и виноград.

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что одной из молекул, отвечающих за фунгицидное действие клеточного экстракта Amphidinium carterae в отношении многих патогенных грибов растений, является амфидинол 18.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Первая задача изобретения относится к применению молекулы следующей формулы (I):

где:

R₁ выбран из группы, состоящей из:

где:

- R₃ представляет собой Н или SO₃Na,

- R₄ представляет собой Н или ОН,

- представляет собой одинарную или двойную связь,

- n принимает значения 0 или 1 и

- m принимает значения 0 или 1;и

R₂ выбран из группы, состоящей из:

и

с фунгицидной и(или) бактерицидной активностью в отношении грибов, оомицетов и(или) патогенных бактерий культурных растений и семян.

Другая задача изобретения относится к способу борьбы с патогенными грибами, оомицетами и(или) бактериями культурных растений и семян, включающему применение молекулы формулы (I) у культурных растений и(или) для покрытия семян.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1. Фракционирование экстракта D на колонке С18 для обращенно-фазовой хроматографии и анализ активности различных фракций экстракта D, полученных при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

A. Анализ in vitro ингибирования роста F. graminearum экстрактом D в концентрации 5 г/л, полученным после экстракции метанолом

Б. Жидкостная хроматограмма экстракта D. Образцы объединяли во фракции, как показано пунктирными линиями, полученные фракции обозначали F1-F5.

B. Анализ in vitro ингибирования роста F. graminearum фракциями F1-F5 в концентрации 5 г/л.

В. Анализ in vitro ингибирования роста F. graminearum фракцией F1 в концентрациях 0,5 г/л, 0,75 г/л, 1 г/л, 1,5 г/л, 2,5 г/л и 5 г/л.

- отрицательный контроль: споры инкубировали в присутствии только буфера

Фиг. 2. Фракционирование фракции F1 на колонке С18 для обращенно-фазовой хроматографии и анализ активности различных фракций, полученных при помощи ВЭЖХ

А. Жидкостная хроматограмма, полученная после инжектирования фракции F1. Образцы объединяли во фракции, как показано пунктирными линиями, полученные 5 фракций обозначали F1-1 - F1-5.

Б. Анализ in vitro ингибирования роста F. graminearum фракциями F1-F5 в концентрации 5 г/л.

В. Анализ in vitro ингибирования роста F. graminearum фракцией F1-2 в концентрациях от 0,0005 г/л до 1 г/л.

- отрицательный контроль: споры инкубировали в присутствии только буфера

Фиг. 3. Масс-спектрометрический анализ фракции F1-2.

А. Масс-спектр, полученный при ионизации электрораспылением с регистрацией положительно заряженных ионов представляющей интерес молекулы из фракции F1-2

Б. Тандемный масс-спектр 1381,8276 Да иона, детектированного в А. Выделены пики, соответствующие обнаруженным в АМ18, согласно Nuzzo et al., 2014 (7)

Фиг. 4. ЯМР анализ фракции F1-2.

А. ¹Н ЯМР спектр (растворитель MeOD₄), полученный для молекулы из фракции F1-2, полученной из экстракта D

Б. ¹³С DEPT135 ЯМР спектр (растворитель MeOD₄), полученный для молекулы из фракции F1-2, полученной из экстракта D

Фиг. 5. Структурная формула молекулы амфидинола 18, полученной из фракции F1-2 экстракта D

Все корреляции COSY и TOCSY между каждым из протонов показаны жирным шрифтом.

СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Первая задача изобретения относится к применению молекулы следующей формулы (I):

где:

R₁ выбран из группы, состоящей из:

где:

- R₃ представляет собой Н или SO₃Na,

- R₄ представляет собой Н или ОН,

- представляет собой одинарную или двойную связь,

- n принимает значения 0 или 1 и

- m принимает значения 0 или 1;и

R₂ выбран из группы, состоящей из:

и

с фунгицидной и(или) бактерицидной активностью в отношении грибов, оомицетов и(или) патогенных бактерий культурных растений и семян.

Предпочтительно, R₁ представляет собой:

где R₃ представляет собой Н или SO₃Na.

Предпочтительно, R₂ представляет собой:

Предпочтительно, молекула формулы (I) представляет собой амфидинол 18 или амфидинол 19:

Молекула формулы (I) представляет собой амфидинол.

Молекула формулы (I) может быть синтетического происхождения или может быть выделена из клеток одной или более чем одной микроводоросли рода Amphidinium.

Виды Amphidinium

Подходящие виды Amphidinium выбраны из группы, состоящей из Amphidinium achromaticum, Amphidinium aculeatum, Amphidinium acutissimum, Amphidinium acutum, Amphidinium alinii, Amphidinium aloxalocium, Amphidinium amphidinioides, Amphidinium asymmetricum, Amphidinium aureum, Amphidinium belauense, Amphidinium bidentatum, Amphidinium bipes, Amphidinium boekhoutensis, Amphidinium boggayum, Amphidinium caerulescens, Amphidinium carbunculus, Amphidinium carterae, Amphidinium celestinum, Amphidinium chattonii, Amphidinium coeruleum, Amphidinium conradii, Amphidinium conus, Amphidinium coprosum, Amphidinium corallinum, Amphidinium corpulentum, Amphidinium crassum, Amphidinium cristatum, Amphidinium cucurbita, Amphidinium cucurbitella, Amphidinium cupulatisquama, Amphidinium curvatum, Amphidinium cyaneoturbo, Amphidinium dentatum, Amphidinium discoidale, Amphidinium dubium, Amphidinium eilatiensis, Amphidinium emarginatum, Amphidinium fastigium, Amphidinium filum Bohm, Amphidinium flagellans, Amphidinium flexum, Amphidinium galbanum, Amphidinium gibbosum, Amphidinium glaucovirescens, Amphidinium glaucum, Amphidinium globosum, Amphidinium hadai, Amphidinium herdmanii, Amphidinium incoloratum, Amphidinium inflatum, Amphidinium kesselitzii, Amphidinium kesslitzii, Amphidinium klebsii, Amphidinium lacunarum, Amphidinium lanceolatum, Amphidinium lefevrei, Amphidinium lilloense, Amphidinium lissae, Amphidinium longum, Amphidinium luteum, Amphidinium machapungarum, Amphidinium macrocephalum, Amphidinium mammillatum, Amphidinium manannini, Amphidinium mananninii, Amphidinium massartii, Amphidinium mootonorum, Amphidinium mucicola, Amphidinium nasutum, Amphidinium obliquum, Amphidinium obrae, Amphidinium oceanicum, Amphidinium oculatum, Amphidinium operculatum, Amphidinium operculatum var. steinii, Amphidinium ornithocephalum, Amphidinium ovoideum, Amphidinium ovum, Amphidinium pacificum, Amphidinium pelagicum, Amphidinium phthartum, Amphidinium psammophila, Amphidinium psittacus, Amphidinium purpureum, Amphidinium pusillum, Amphidinium rhynchocephalum, Amphidinium roseolum, Amphidinium ruttneri, Amphidinium salinum, Amphidinium schilleri, Amphidinium schroederi, Amphidinium scissum, Amphidinium sphagnicola, Amphidinium sphenoides, Amphidinium steinii, Amphidinium stellatum, Amphidinium stigmatum, Amphidinium sulcatum, Amphidinium tortum, Amphidinium trochodinioides, Amphidinium trochodinoides, Amphidinium trulla, Amphidinium truncatum, Amphidinium turbo, Amphidinium vernal, Amphidinium vigrense, Amphidinium vitreum, Amphidinium vittatum, Amphidinium wigrense, Amphidinium yoorugurrum, Amphidinium yuroogurrum.

Предпочтительно, молекула формулы (I) выделена из Amphidinium carterae. В коллекциях существует несколько штаммов Amphidinium carterae, таких как штаммы ССМР 124, 1314, 3177 (ССМР, от англ. Culture Collection of Marine Phytoplankton, коллекция культур морского фитопланктона), АС 208, 792 (АС, от фр. Algobank Cean, банк водорослей Исследовательского центра по применению ядерной энергии), ВЕА 01198 (ВЕА, от исп. Banco de Algas, Испанский банк водорослей).

Предпочтительно, применяемый по изобретению штамм Amphidinium carterae представляет собой ССМР 1314, АС208 или АС792.

Выделение

Указанный экстракт может быть получен любым способом экстракции из клеток, известным специалисту в области техники, экстракцией твердого вещества жидкостью или экстракцией жидкости жидкостью, например, экстракцией неорганическим или органическим растворителем, который может быть выбран из группы, состоящей из воды, водных растворов, углеводородных растворителей (алифатических, ароматических), кислород-содержащих растворителей (спиртов, кетонов, кислот, простых и сложных эфиров), галоген-содержащих растворителей (дихлорметана, хлороформа) и их смесей в любой пропорции, обеспечивающей смешивание указанных растворителей.

Предпочтительными растворителями будут вода или кислородсодержащие растворители, предпочтительно, спирты, наиболее предпочтительно, С1-С4 спирты, такие как метанол или этанол.

Наиболее предпочтительными являются С1-С4 спирты.

Предпочтительно, указанный экстракт является водорастворимой фракцией.

Концентрация

Предпочтительно, молекулу формулы (I) применяют в количестве от 0,1 до 5 мг/мл, предпочтительно от 0,5 до 3 мг/мл, наиболее предпочтительно от 0,75 до 1 мг/мл.

Способ действия

Указанная фунгицидная активность в отношении патогенных грибов и/или оомицетов культурных растений и семян может в частности реализоваться через ингибирование прорастания спор или ингибирование роста грибов и/или оомицетов.

Активность реализуется через литическую активность, направленную на клеточную стенку и клеточные мембраны, приводящую к лизису клеток.

Культурные растения

Указанные культурные растения, в частности, выбраны из группы, состоящей из злаков, таких как пшеница, кукуруза, ячмень, рис, соя, фруктов и овощей, таких как картофель, морковь, яблоня, персик, абрикос, томат, редис, бобы, виноград, и декоративных растений.

Указанные культурные растения, в частности, выбраны из группы, состоящей из родов Abelmoschus, Acacia, Achras, Agave, Agrostis, Aleurites, Allium, Anacardium, Ananas, Annona, Apium, Arachis, Areca, Armoracia, Arracacia, Artocarpus, Asparagus, Aspidosperma, Avena, Bertholletia, Beta, Boehmeria, Borassus, Brassica, Cajanus, Camellia, Cannabis, Capsicum, Carica, Carthamus, Carum, Carya, Castanea, Ceiba, Ceratonia, Chenopodium, Chrysanthemum, Cicer, Cichorium, Cinchona, Cinnamomum, Citrullus, Citrus, Cocos, Coffea, Cola, Colocasia, Corchorus, Corylus, Crotalaria, Cucumis, Cucurbita, Cydonia, Cymbopogon, Cynara, Dactylis, Daucus, Dioscorea, Diospyros, Echinochloa, Elaeis, Elettaria, Eleusine, Eragrostis, Eriobotrya, Eugenia, Fagopyrum, Ficus, Foeniculum, Fragaria, Furcraea, Glycine, Glycyrrhiza, Gossypium, Guizotia, Helianthus, Hevea, Hibiscus, Hordeum, Humulus, Ilex, Indigofera, Ipomoea, Jasminum, Juglans, Lactuca, Lagenaria, Lavandula, Lawsonia, Lens, Lepidium, Lespedeza, Linum, Litchi, Lolium, Lopmoea, Lotus, Lupinus, Lycopersicon, Lygeum, Macadamia, Malus, Mangifera, Manihot, Maranta, Medicago, Mentha, Mespilus, Metroxylon, Moringa, Musa, Myristica, Nicotiana, Olea, Onobrychis, Oryza, Panicum, Papaver, Pastinaca, Pelargonium, Pennisetum, Persea, Phaseolus, Phleum, Phoenix, Phormium, Pimpinella, Piper, Pistacia, Pisum, Prunus, Psidium, Punica, Pyrus, Raphanus Rheum, Ribes, Ricinus, Rose, Rubus, Saccharum, Scorzonera, Secale Sechium, Sesamum, Setaria, Solanum, Sorghum, Spinacia, Theobroma, Tragopogon, Trifolium, Trigonella, Triticum, Urena, Vaccinium, Valerianella, Vanilla, Vicia, Vigna, Vitellaria, Vitis, Xanthosoma, Zea, Zingiber.

Патогены

Указанные патогенные грибы культурных растений и семян представляют собой аскомицеты или базидиомицеты, предпочтительно, аскомицеты.

Указанные патогенные грибы культурных растений и семян представляют собой патогенные грибы культурных растений и семян родов:

Acrocalymma, Acrocalymma medicaginis,

Fusarium, Fusarium affine, Fusarium arthrosporioides, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium moniliforme, Fusarium incarnatum, Fusarium solani, Fusarium langsethiae, Fusarium mangiferae, Fusarium oxysporum f. sp. albedinis, Fusarium oxysporum f. sp. asparagi, Fusarium oxysporum f. sp. batatas, Fusarium oxysporum f. sp. betae, Fusarium oxysporum f. sp. cannabis, Fusarium oxysporum f. sp. carthami, Fusarium oxysporum f. sp. cattleyae, Fusarium oxysporum f. sp. ciceris, Fusarium oxysporum f. sp. coffea, Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Fusarium oxysporum f. sp. cyclaminis, Fusarium oxysporum f. sp. dianthi, Fusarium oxysporum f. sp. lentis, Fusarium oxysporum f. sp. lini, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, Fusarium oxysporum f. sp. medicaginis, Fusarium oxysporum f. sp. pisi, Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici, Fusarium oxysporum f. sp. spinacia, Fusarium oxysporum, Fusarium pallidoroseum, Fusarium patch, Fusarium proliferatum, Fusarium redolens, Fusarium sacchari, Fusarium solani, Fusarium subglutinans, Fusarium sulphureum, Fusarium tricinctum, Fusarium wilt,

Botrytis, Botrytis allii, Botrytis anthophila, Botrytis cinerea, Botrytis fabae, Botrytis narcissicola,

Alternaria, Alternaria alternata, Alternaria brassicae, Alternaria brassicicola, Alternaria carthami, Alternaria cinerariae, Alternaria dauci, Alternaria dianthi, Alternaria dianthicola, Alternaria euphorbiicola, Alternaria helianthi, Alternaria helianthicola, Alternaria japonica, Alternaria leucanthemi, Alternaria limicola, Alternaria linicola, Alternaria padwickii, Alternaria panax, Alternaria radicina, Alternaria raphani, Alternaria saponariae, Alternaria senecionis, Alternaria solani, Alternaria tenuissima, Alternaria triticina, Alternaria zinniae,

Erisyphe, Erisyphe necator, Erysiphe betae, Erysiphe brunneopunctata, Erysiphe cichoracearum, Erysiphe cruciferarum, Erysiphe graminis f. sp. Avenae, Erysiphe graminis f. sp. tritici, Erysiphe heraclei, Erysiphe pisi,

Claviceps, Claviceps fusiformis, Claviceps purpurea, Claviceps sorghi, Claviceps zizaniae,

Gaeumannomyces, Gaeumannomyces graminis,

Leptosphaeria, Leptosphaeria nodorum, Leptosphaeria acuta, Leptosphaeria cannabina, Leptosphaeria coniothyrium, Leptosphaeria libanotis, Leptosphaeria lindquistii, Leptosphaeria maculans, Leptosphaeria musarum, Leptosphaeria pratensis, Leptosphaeria sacchari, Leptosphaeria woroninii,

Microdochium, Microdochium spp.Microdochium bolleyi, Microdochium dimerum, Microdochium panattonianum, Microdochium phragmitis,

Mycosphaerella, Mycosphaerella arachidis, Mycosphaerella areola, Mycosphaerella berkeleyi, Mycosphaerella bolleana, Mycosphaerella brassicicola, Mycosphaerella caricae, Mycosphaerella caryigena, Mycosphaerella cerasella, Mycosphaerella coffeicola, Mycosphaerella confusa, Mycosphaerella cruenta, Mycosphaerella dendroides, Mycosphaerella eumusae, Mycosphaerella gossypina, Mycosphaerella graminicola, Mycosphaerella henningsii, Mycosphaerella horii, Mycosphaerella juglandis, Mycosphaerella lageniformis, Mycosphaerella linicola, Mycosphaerella louisianae, Mycosphaerella musae, Mycosphaerella musicola, Mycosphaerella palmicola, Mycosphaerella pinodes, Mycosphaerella pistaciarum, Mycosphaerella pistacina, Mycosphaerella platanifolia, Mycosphaerella polymorpha, Mycosphaerella pomi, Mycosphaerella punctiformis, Mycosphaerella pyri,

Oculimacula, Oculimacula acuformis, Oculimacula yallundae,

Blumeria, Blumeria graminis,

Pyrenophora, Pyrenophora avenae, Pyrenophora chaetomioides, Pyrenophora graminea, Pyrenophora seminiperda, Pyrenophora teres, Pyrenophora teres f. maculata, Pyrenophora teres f. teres, Pyrenophora tritici-repentis,

Ramularia, Ramularia collo-cygni, Ramularia beticola, Ramularia coryli, Ramularia cyclaminicola, Ramularia macrospora, Ramularia menthicola, Ramularia necator, Ramularia primulae, Ramularia spinaciae, Ramularia subtilis, Ramularia tenella, Ramularia vallisumbrosae,

Rhynchosporium, Rhynchosporium secalis,

Cochliobolus, Cochliobolus, Cochliobolus carbonum, Cochliobolus cymbopogonis, Cochliobolus hawaiiensis, Cochliobolus heterostrophus, Cochliobolus lunatus, Cochliobolus miyabeanus, Cochliobolus ravenelii, Cochliobolus sativus, Cochliobolus setariae, Cochliobolus spicifer, Cochliobolus stenospilus, Cochliobolus tuberculatus, Cochliobolus victoriae,

Microdochium, Microdochium oryzae,

Pyricularia, Pyricularia oryzae,

Sarocladium, Sarocladium oryzae,

Ustilaginoides, Ustilaginoides virens,

Cercospora, Cercospora, Cercospora apii, Cercospora apii f. sp. clerodendri, Cercospora apiicola, Cercospora arachidicola, Cercospora asparagi, Cercospora atrofiliformis, Cercospora beticola, Cercospora brachypus, Cercospora brassicicola, Cercospora brunkii, Cercospora cannabis, Cercospora cantuariensis, Cercospora capsici, Cercospora carotae, Cercospora corylina, Cercospora fuchsiae, Cercospora fusca, Cercospora fusimaculans, Cercospora gerberae, Cercospora halstedii, Cercospora handelii, Cercospora hayi, Cercospora hydrangeae, Cercospora kikuchii, Cercospora lentis, Cercospora liquidambaris, Cercospora long ipes, Cercospora longissima, Cercospora mamaonis, Cercospora mangiferae, Cercospora medicaginis, Cercospora melongenae, Cercospora minuta, Cercospora nicotianae, Cercospora odontoglossi, Cercospora papayae, Cercospora penniseti, Cercospora pisa-sativae, Cercospora platanicola, Cercospora puderii, Cercospora pulcherrima, Cercospora rhapidicola, Cercospora rosicola, Cercospora sojina, Cercospora solani, Cercospora solani-tuberosi, Cercospora sorghi, Cercospora theae, Cercospora tuberculans, Cercospora vexans, Cercospora vicosae, Cercospora zeae-maydis, Cercospora zebrina, Cercospora zonata,

Corynespora, Corynespora cassiicola,

Phakospora, Phakospora pachyrhizi, Phakopsora gossypii, Colletotrichum, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum arachidis, Colletotrichum capsici, Colletotrichum cereale, Colletotrichum coffeanum, Colletotrichum crassipes, Colletotrichum dematium, Colletotrichum dematium f. spinaciae, Colletotrichum derridis, Colletotrichum destructivum, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum glycines, Colletotrichum gossypii, Colletotrichum graminicola, Colletotrichum higginsianum, Colletotrichum kahawae, Colletotrichum lindemuthianum, Colletotrichum lini, Colletotrichum mangenotii, Colletotrichum musae, Colletotrichum nigrum, Colletotrichum orbiculare, Colletotrichum pisi, Colletotrichum sublineolum, Colletotrichum trichellum, Colletotrichum trifolii, Colletotrichum truncatum,

Pythium spp,

Diplodia, Diplodia allocellula, Diplodia laelio-cattleyae, Diplodia manihoti, Diplodia paraphysaria, Diplodia seriata, Diplodia theae-sinensis,

Monilia, Monilinia azaleae, Monilinia fructicola, Monilinia fructigena, Monilinia laxa, Monilinia oxycocci,

Pezzicula, Pezzicula alba, Pezzicula malicorticis,

Zymoseptoria, Zymoseptoria tritici

Phytophthora, Phytophthora infestans

Guignardia, Guignardia bidwelli, Guignardia camelliae, Guignardia fulvida, Guignardia mangiferae, Guignardia musae, Guignardia philoprina,

Plasmopara, Plasmopara viticola,

Puccinia, Puccinia angustata, Puccinia arachidis, Puccinia aristidae, Puccinia asparagi, Puccinia cacabata, Puccinia campanulae, Puccinia carthami, Puccinia coronata, Puccinia dioicae, Puccinia erianthi, Puccinia extensicola, Puccinia helianthi, Puccinia hordei, Puccinia jaceae, Puccinia kuehnii, Puccinia malvacearum, Puccinia mariae-wilsoniae, Puccinia melanocephala, Puccinia menthae, Puccinia oxalidis, Puccinia pelargonii-zonalis, Puccinia pittieriana, Puccinia poarum, Puccinia purpurea, Puccinia recondita, Puccinia schedonnardii, Puccinia sessilis, Puccinia striiformis, Puccinia striiformis, Puccinia subnitens, Puccinia substriata, Puccinia verruca, Puccinia xanthii,

Rhizoctonia, Rhizoctonia solani, Rhizoctonia oryzae, Rhizoctonia cerealis, Rhizoctonia leguminicola, Rhizoctonia rubi,

Sclerotinia, Sclerotinia borealis, Sclerotinia bulborum, Sclerotinia minor, Sclerotinia ricini, Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia spermophila, Sclerotinia trifoliorum,

Septoria, Septoria ampelina, Septoria azaleae, Septoria bataticola, Septoria campanulae, Septoria cannabis, Septoria cucurbitacearum, Septoria darrowii, Septoria dianthi, Septoria eumusae, Septoria glycines, Septoria helianthi, Septoria humuli, Septoria hydrangeae, Septoria lactucae, Septoria lycopersici, Septoria lycopersici, Septoria menthae, Septoria passerinii, Septoria pisi, Septoria rhododendri, Septoria secalis, Septoria selenophomoides,

Venturia, Venturia inaequalis. Venturia carpophila,

Acrodontium, Acrodontium simplex,

Acrophialophora, Acrophialophora fusispora,

Acrosporium, Acrosporium tingitaninum,

Aecidium, Aecidium aechmantherae, Aecidium amaryllidis, Aecidium breyniae, Aecidium campanulastri, Aecidium cannabis, Aecidium cantensis, Aecidium caspicum, Aecidium foeniculi, Aecidium narcissi,

Ahmadiago,

Albonectria, Albonectria rigidiuscula,

Allodus, Allodus podophylli,

Amphobotrys, Amphobotrys ricini,

Anguillosporella, Anguillosporella vermiformis,

Anthostomella, Anthostomella pullulans,

Antrodia, Antrodia albida, Antrodia serialiformis, Antrodia serialis,

Apiospora, Apiospora montagnei,

Appendiculella,

Armillaria Armillaria heimii, Armillaria sinapina, Armillaria socialis, Armillaria tabescens,

Arthrocladiella,

Arthuriomyces, Arthuriomyces peckianus,

Ascochyta, Ascochyta asparagina, Ascochyta bohemica, Ascochyta caricae, Ascochyta doronici, Ascochyta fabae f. sp.lentis, Ascochyta graminea, Ascochyta hordei, Ascochyta humuli, Ascochyta pisi, Ascochyta prasadii, Ascochyta sorghi, Ascochyta spinaciae, Ascochyta tarda, Ascochyta tritici,

Ascospora, Ascospora ruborum,

Aspergillus, Aspergillus aculeatus, Aspergillus fischerianus, Aspergillus niger,

Asperisporium, Asperisporium caricae,

Asteridiella,

Asteroma, Asteroma caryae,

Athelia, Athelia arachnoidea, Athelia rolfsii,

Aurantiporus, Aurantiporus fissilis,

Aureobasidium, Aureobasidium pullulans,

Bambusiomyces,

Banana freckle,

Bayoud disease,

Beniowskia, Beniowskia sphaeroidea,

Bionectria, Bionectria ochroleuca,

Bipolaris, Bipolaris cactivora, Bipolaris cookei, Bipolaris incurvata, Bipolaris sacchari,

Biscogniauxia, Biscogniauxia capnodes, Biscogniauxia marginata,

Bjerkandera, Bjerkandera adusta,

Black sigatoka,

Blakeslea, Blakeslea trispora,

Botryodiplodia, Botryodiplodia oncidii, Botryodiplodia ulmicola,

Botryosphaeria, Botryosphaeria cocogena, Botryosphaeria dothidea, Botryosphaeria marconii, Botryosphaeria obtusa, Botryosphaeria rhodina, Botryosphaeria ribis, Botryosphaeria stevensii,

Botryosporium, Botryosporium pulchrum,

Botryotinia, Botryotinia fuckeliana, Botryotinia polyblastis,

Boxwood blight,

Brachybasidiaceae,

Brasiliomyces, Brasiliomyces malachrae,

Briosia, Briosia ampelophaga,

Brown ring patch,

Buckeye rot of tomato,

Bulbomicrosphaera,

Cadophora, Cadophora malorum,

Caespitotheca,

Calonectria, Calonectria ilicicola, Calonectria indusiata, Calonectria kyotensis, Calonectria pyrochroa, Calonectria quinqueseptata,

Camarotella, Camarotella acrocomiae, Camarotella costaricensis,

Canna rust,

Capitorostrum, Capitorostrum cocoes,

Capnodium, Capnodium footii, Capnodium mangiferum, Capnodium ramosum, Capnodium theae,

Cephalosporium, Cephalosporium gramineum,

Ceratobasidium, Ceratobasidium cereale, Ceratobasidium cornigerum, Ceratobasidium noxium, Ceratobasidium ramicola, Ceratobasidium setariae, Ceratobasidium stevensii,

Ceratocystis, Ceratocystis adiposa, Ceratocystis coerulescens, Ceratocystis fimbriata, Ceratocystis moniliformis, Ceratocystis oblonga, Ceratocystis obpyriformis, Ceratocystis paradoxa, Ceratocystis pilifera, Ceratocystis pluriannulata, Ceratocystis polyconidia, Ceratocystis tanganyicensis, Ceratocystis zombamontana,

Ceratorhiza, Ceratorhiza hydrophila,

Ceratospermopsis,

Cercoseptoria, Cercoseptoria ocellata,

Cercosporella, Cercosporella rubi,

Ceriporia, Ceriporia spissa, Ceriporia xylostromatoides,

Cerrena, Cerrena unicolor,

Ceuthospora, Ceuthospora lauri,

Choanephora, Choanephora cucurbitarum, Choanephora infundibulifera,

Chrysanthemum, Chrysanthemum white rust,

Chrysomyxa, Chrysomyxa cassandrae,

Chrysomyxa, Chrysomyxa himalensis, Chrysomyxa ledi, Chrysomyxa ledi var. rhododendri, Chrysomyxa ledicola, Chrysomyxa nagodhii, Chrysomyxa neoglandulosi, Chrysomyxa piperiana, Chrysomyxa pirolata, Chrysomyxa pyrolae, Chrysomyxa reticulata, Chrysomyxa roanensis, Chrysomyxa succinea,

Cladosporium, Cladosporium arthropodii, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium cladosporioides f. sp. pisicola, Cladosporium cucumerinum, Cladosporium herbarum, Cladosporium musae, Cladosporium oncobae,

Climacodon, Climacodon pulcherrimus, Climacodon septentrionalis,

Clitocybe, Clitocybe parasitica,

Clonostachys rosea f. rosea,

Clypeoporthe, Clypeoporthe iliau,

Coleosporium, Coleosporium helianthi, Coleosporium ipomoeae, Coleosporium madiae, Coleosporium pacificum, Coleosporium tussilaginis,

Conidiosporomyces,

Coniella, Coniella castaneicola, Coniella diplodiella, Coniella fragariae,

Coniothecium, Coniothecium chomatosporum,

Coniothyrium, Coniothyrium celtidis-australis, Coniothyrium henriquesii, Coniothyrium rosarum, Coniothyrium wernsdorffiae,

Coprinopsis, Coprinopsis psychromorbida,

Cordana, Cordana johnstonii, Cordana musae, Coriolopsis floccosa,

Corn grey leaf spot,

Corticium, Corticium invisum, Corticium penicillatum, Corticium theae,

Coryneopsis, Coryneopsis rubi,

Coryneum, Coryneum rhododendri,

Covered smut,

Crinipellis, Crinipellis sarmentosa,

Cronartium, Cronartium ribicola,

Cryphonectriaceae,

Cryptobasidiaceae,

Cryptocline, Cryptocline cyclaminis,

Cryptomeliola,

Cryptosporella, Cryptosporella umbrina,

Cryptosporiopsis, Cryptosporiopsis tarraconensis,

Cryptosporium, Cryptosporium minimum,

Curvularia, Curvularia lunata, Curvularia caricae-papayae, Curvularia penniseti, Curvularia senegalensis, Curvularia trifolii,

Cyclaneusma needle cast,

Cylindrocarpon, Cylindrocarpon ianthothele var. ianthothele, Cylindrocarpon magnusianum, Cylindrocarpon musae,

Cylindrocladiella, Cylindrocladiella camelliae, Cylindrocladiella parva,

Cylindrocladium, Cylindrocladium clavatum, Cylindrocladium lanceolatum, Cylindrocladium peruvianum, Cylindrocladium pteridis,

Cylindrosporium, Cylindrosporium cannabinum, Cylindrosporium juglandis, Cylindrosporium rubi,

Cymadothea, Cymadothea trifolii,

Cytospora, Cytospora palmarum, Cytospora personata, Cytospora sacchari, Cytospora sacculus, Cytospora terebinthi,

Cytosporina, Cytosporina ludibunda,

Dactuliophora, Dactuliophora elongata,

Davidiella, Davidiella dianthi, Davidiella tassiana,

Deightoniella, Deightoniella papuana, Deightoniella torulosa,

Dendrophora, Dendrophora marconii, Dendrophora erumpens,

Denticularia, Denticularia mangiferae,

Dermea pseudotsugae,

Diaporthaceae,

Diaporthe, Diaporthe arctii, Diaporthe dulcamarae, Diaporthe eres, Diaporthe helianthi, Diaporthe lagunensis, Diaporthe lokoyae, Diaporthe melonis, Diaporthe orthoceras, Diaporthe perniciosa, Diaporthe phaseolorum, Diaporthe phaseolorum var. caulivora, Diaporthe phaseolorum var. phaseolorum, Diaporthe phaseolorum var. soja, Diaporthe rudis, Diaporthe tanakae, Diaporthe toxica,

Dicarpella, Dicarpella dryina,

Didymella, Didymella applanata, Didymella bryoniae, Didymella fabae, Didymella lycopersici

Didymosphaeria, Didymosphaeria arachidicola, Didymosphaeria taiwanensis,

Dilophospora, Dilophospora alopecuri,

Dimeriella, Dime hell a sacchari,

Diplocarpon, Diplocarpon mespili, Diplocarpon rosae,

Discosia, Discosia artocreas,

Discostroma, Discostroma corticola,

Distocercospora, Distocercospora livistonae,

Dothiorella, Dothiorella brevicollis, Dothiorella dominicana, Dothiorella dulcispinae, Dothiorella gregaria,

Drechslera, Drechslera avenacea, Drechslera campanulata, Drechslera dematioidea, Drechslera gigantea, Drechslera glycines, Drechslera musae-sapientium, Drechslera teres f. maculata, Drechslera wirreganensis,

Eballistra, Eballistra lineata, Eballistra oryzae,

Eballistraceae,

Echinodontium, Echinodontium ryvardenii, Echinodontium tinctorium,

Ectendomeliola,

, ampelina, batatas, brasiliensis, leucospila, randii, rosarum, sacchari, theae, veneta,

Endomeliola,

Endothia, Endothia radicalis,

Endothiella, Endothiella gyrosa,

Entorrhizomycetes,

Entyloma, Entyloma ageratinae, Entyloma dahliae, Entyloma ellisii,

Epicoccum, Epicoccum nigrum,

Eremothecium, Eremothecium coryli, Eremothecium gossypii,

Erysiphales,

Exobasidiaceae, Exobasidium burtii, Exobasidium reticulatum, Exobasidium vaccinii var. japonicum, Exobasidium vaccinii-uliginosi, Exobasidium vexans,xxophiala alcalophila,

Exophiala, Exophiala angulospora, Exophiala attenuata, Exophiala calicioides, Exophiala castellanii, Exophiala dermatitidis, Exophiala dopicola, Exophiala exophialae, Exophiala heteromorpha, Exophiala hongkongensis, Exophiala jeanselmei, Exophiala lecanii-corni, Exophiala mansonii, Exophiala mesophila, Exophiala moniliae, Exophiala negronii, Exophiala phaeomuriformis, Exophiala pisciphila, Exophiala psychrophila, Exophiala salmonis, Exophiala spinifera,

Fomes, Fomes lamaensis,

Fomitopsis, Fomitopsis rosea,

Fusicladium Fusicladium pisicola,

Fusicoccum, Fusicoccum aesculi, Fusicoccum amygdali, Fusicoccum quercus,

Galactomyces, Galactomyces candidum,

Ganoderma, Ganoderma brownii, Ganoderma lobatum, Ganoderma megaloma, Ganoderma meredithiae, Ganoderma orbiforme, Ganoderma philippii, Ganoderma sessile, Ganoderma tornatum, Ganoderma zonatum,

Geastrumia, Geastrumia polystigmatis,

Georgefischeriaceae,

Georgefischeriales,

Geosmithia, Geosmithia pallida,

Geotrichum, Geotrichum candidum, Geotrichum klebahnii,

Gibberella, Gibberella acuminata, Gibberella avenacea, Gibberella baccata, Gibberella cyanogena, Gibberella fujikuroi, Gibberella intricans, Gibberella pulicaris, Gibberella stilboides, Gibberella tricincta, Gibberella xylarioides, Gibberella zeae,

Gibellina, Gibellina cerealis,

Gilbertella, Gilbertella persicaria,

Gjaerumiaceae,

Gliocladiopsis, Gliocladiopsis tenuis,

Gliocladium, Gliocladium vermoeseni,

Gloeocercospora, Gloeocercospora sorghi,

Gloeocystidiellum, Gloeocystidiellum porosum,

Gloeophyllum, Gloeophyllum mexicanum, Gloeophyllum trabeum,

Gloeoporus, Gloeoporus dichrous,

Gloeosporium, Gloeosporium cattleyae, Gloeosporium theae-sinensis,

Glomerella, Glomerella cingulata, Glomerella graminicola, Glomerella tucumanensis,

Gnomonia, Gnomonia caryae, Gnomonia comari, Gnomonia dispora, Gnomonia iliau, Gnomonia rubi,

Golovinomyces, Golovinomyces cichoracearum,

Graphiola phoenicis,

Graphiolaceae,

Graphium, Graphium rigidum, Graphium rubrum,

Graphyllium, Graphyllium pentamerum,

Grovesinia, Grovesinia pyramidalis,

Gymnoconia, Gymnoconia nitens,

Gymnopus, Gymnopus dryophilus,

Gymnosporangium, Gymnosporangium kernianum, Gymnosporangium libocedri, Gymnosporangium nelsonii, Gymnosporangium yamadae,

Haematonectria, Haematonectria haematococca,

Hansenula, Hansenula subpelliculosa,

Hapalosphaeria, Hapalosphaeria deformans,

Haplobasidion, Haplobasidion musae,

Helicobasidium, Helicobasidium compactum, Helicobasidium longisporum, Helicobasidium purpureum,

Helicoma, Helicoma muelleri,

Helminthosporium, Helminthosporium cookei, Helminthosporium solani,

Hendersonia, Hendersonia creberrima, Hendersonia theicola,

Hericium, Hericium coralloides,

Heterobasidion, Heterobasidion irregulare, Heterobasidion occidentale,

Hexagonia, Hexagonia hydnoides,

Hymenula, Hymenula affinis,

Hyphodermella, Hyphodermella corrugata,

Hyphodontia, Hyphodontia aspera, Hyphodontia sambuci,

Hypoxylon, Hypoxylon tinctor,

Inonotus, Inonotus arizonicus, Inonotus cuticularis, Inonotus dryophilus, Inonotus hispidus, Inonotus ludovicianus,

Irpex, Irpex destruens, Irpex lacteus,

Kabatiella, Kabatiella caulivora,

Karnal bunt,

Koa wilt,

Kretzschmaria, Kretzschmaria zonata,

Kuehneola, Kuehneola uredinis,

Kutilakesa, Kutilakesa pironii,

Laetiporus, Laetiporus ailaoshanensis, Laetiporus baudonii, Laetiporus caribensis, Laetiporus conifericola, Laetiporus cremeiporus, Laetiporus gilbertsonii, Laetiporus huroniensis, Laetiporus montanus, Laetiporus portentosus, Laetiporus zonatus,

Laxitextum, Laxitextum bicolor,

Leandria, Leandria momordicae,

Lentinus, Lentinus tigrinus,

Lenzites, Lenzites betulina, Lenzites elegans,

Leohumicola, Leohumicola atra, Leohumicola incrustata, Leohumicola levissima,

Leptodontidium, Leptodontidium elatius,

Leptographium, Leptographium microsporum,

Leptosphaerulina, Leptosphaerulina crassiasca, Leptosphaerulina trifolii,

Leptothyrium, Leptothyrium nervisedum,

Leptotrochila, Leptotrochila medicaginis,

Leucocytospora, Leucocytospora leucostoma,

Leucostoma, Leucostoma auerswaldii, Leucostoma canker, Leucostoma kunzei, Leucostoma persoonii,

Leveillula, Leveillula compositarum, Leveillula leguminosarum, Leveillula taurica,

Limacinula, Limacinula tenuis,

Linochora, Linochora graminis,

Loose smut,

Lopharia, Lopharia crassa,

Lophodermium, Lophodermium aucupariae, Lophodermium schweinitzii,

Macrophoma, Macrophoma mangiferae, Macrophoma theicola,

Macrosporium, Macrosporium cocos,

Magnaporthe, Magnaporthe grisea, Magnaporthe salvinii,

Magnaporthiopsis,

Mamianiella, Mamianiella coryli,

Marasmiellus, Marasmiellus cocophilus, Marasmiellus stenophyllus,

Marasmius, Marasmius crinis-equi, Marasmius sacchari, Marasmius semiustus, Marasmius stenophyllus, Marasmius tenuissimus,

Massarina, Massarina walkeri,

Mauginiella, Mauginiella scaettae,

Melampsora, Melampsora lini, Melampsora occidentalis,

Melanconis, Melanconis carthusiana,

Melanconium, Melanconium juglandinum,

Meliola, Meliola mangiferae, Meliola zangii,

Meruliopsis, Meruliopsis ambigua,

Microascus, Microascus brevicaulis,

Microbotryum, Microbotryum silenes-dioicae, Microbotryum violaceum,

Microsphaera, Microsphaera coryli, Microsphaera diffusa, Microsphaera ellisii, Microsphaera euphorbiae, Microsphaera hommae, Microsphaera penicillata, Microsphaera vaccinii, Microsphaera verruculosa,

Microstroma, Microstoma juglandis,

Moesziomyces, Moesziomyces bullatus,

Moniliophthora, Moniliophthora roreri,

Monilochaetes, Monilochaetes infuscans,

Monochaetia, Monochaetia coryli, Monochaetia mali,

Monographella, Monographella albescens, Monographella cucumehna, Monographella nivalis,

Monosporascus, Monosporascus cannonballus, Monosporascus eutypoides,

Monostichella, Monostichella coryli,

Mucor, Mucor circinelloides, Mucor hiemalis, Mucor mucedo, Mucor paronychius, Mucor piriformis, Mucor racemosus,

Mycena, Mycena citricolor,

Mycocentrospora, Mycocentrospora acerina,

Mycoleptodiscus, Mycoleptodiscus terrestris,

Didymella, Didymella rabiei,

Mycosphaerella, Mycosphaerella recutita, Mycosphaerella rosicola, Mycosphaerella rubi, Mycosphaerella stigmina-platani, Mycosphaerella striatiformans,

Mycovellosiella, Mycovellosiella concors,

Passalora, Passalora fulva,

Mycovellosiella, Mycovellosiella koepkei, Mycovellosiella vaginae,

Myriogenospora, Myriogenospora aciculispora,

Myrothecium, Myrothecium roridum, Myrothecium verrucaria,

Naevala, Naevala perexigua,

Naohidemyces, Naohidemyces vaccinii,

Nectria, Nectria cinnabarina, Nectria ditissima, Nectria foliicola, Nectria mammoidea, Nectria mauritiicola, Nectria peziza, Nectria pseudotrichia, Nectria radicicola, Nectria ramulariae,

Nectriella, Nectriella pironii,

Nemania, Nemania diffusa, Nemania serpens,

Neocosmospora, Neocosmospora vasinfecta,

Neodeightonia, Neodeightonia phoenicum,

Neoerysiphe, Neoerysiphe galeopsidis,

Neofabraea, Neofabraea perennans,

Neofusicoccum, Neofusicoccum mangiferae,

Oidiopsis, Oidiopsis gossypii,

Oidium, Oidium arachidis, Oidium caricae-papayae, Oidium indicum, Oidium mangiferae, Oidium manihotis,

Olpidium, Olpidium brassicae,

Omphalia, Omphalia tralucida,

Ophiobolus, Ophiobolus anguillides, Ophiobolus cannabinus,

Ophioirenina,

Ovulinia, Ovulinia azaleae,

Oxyporus, Oxyporus corticola,

Ozonium, Ozonium texanum,

Peltaster, Peltaster fructicola,

Penicillium, Penicillium expansum, Penicillium funiculosum,

Peniophora,

Periconia, Periconia circinata,

Periconiella, Periconiella cocoes,

Peridermium, Peridermium californicum,

Pestalosphaeria, Pestalosphaeria concentrica,

Pestalotia, Pestalotia longiseta, Pestalotia rhododendri,

Pestalotiopsis, Pestalotiopsis adusta, Pestalotiopsis arachidis, Pestalotiopsis disseminata, Pestalotiopsis guepini, Pestalotiopsis leprogena, Pestalotiopsis longiseta, Pestalotiopsis mangiferae, Pestalotiopsis palmarum, Pestalotiopsis sydowiana, Pestalotiopsis theae,

Peyronellaea, Peyronellaea curtisii,

Phacidiopycnis, Phacidiopycnis padwickii,

Phaeochoropsis, Phaeochoropsis mucosa,

Phaeocytostroma, Phaeocytostroma iliau, Phaeocytostroma sacchari,

Phaeoisariopsis, Phaeoisariopsis bataticola,

Phaeoramularia, Phaeoramularia heterospora, Phaeoramularia indica, Phaeoramularia manihotis,

Phaeoseptoria, Phaeoseptoria musae,

Phaeosphaerella, Phaeosphaerella mangiferae, Phaeosphaerella theae,

Phaeosphaeria, Phaeosphaeria avenaria, Phaeosphaeria herpotrichoides, Phaeosphaeria microscopica, Phaeosphaeria nodorum,

Phaeosphaeriopsis, Phaeosphaeriopsis obtusispora,

Phaeotrichoconis, Phaeotrichoconis crotalariae,

Phialophora, Phialophora asteris, Phialophora cinerescens, Phialophora gregata, Phialophora tracheiphila,

Phoma, Phoma clematidina, Phoma costaricensis, Phoma cucurbitacearum, Phoma destructive, Phoma draconis, Phoma exigua, Phoma exigua, Phoma exigua var. foveata, Phoma exigua, Phoma glomerata, Phoma glycinicola, Phoma herbarum, Phoma insidiosa, Phoma medicaginis, Phoma microspora, Phoma narcissi, Phoma nebulosa, Phoma oncidii-sphacelati, Phoma pinodella, Phoma sclerotioides, Phoma strasseri,

Phomopsis, Phomopsis asparagi, Phomopsis asparagicola, Phomopsis cannabina, Phomopsis coffeae, Phomopsis ganjae, Phomopsis javanica, Phomopsis longicolla, Phomopsis mangiferae, Phomopsis prunorum, Phomopsis sclerotioides, Phomopsis theae,

Phragmidium, Phragmidium mucronatum, Phragmidium rosae-pimpinellifoliae, Phragmidium rubi-idaei, Phragmidium violaceum,

Phyllachora, Phyllachora banksiae, Phyllachora cannabis, Phyllachora graminis, Phyllachora gratissima, Phyllachora musicola, Phyllachora pomigena, Phyllachora sacchari,

Phyllactinia,

Phyllosticta, Phyllosticta alliariaefoliae Phyllosticta arachidis-hypogaeae, Phyllosticta batatas, Phyllosticta capitalensis, Phyllosticta carpogena, Phyllosticta coffeicola, Phyllosticta concentrica, Phyllosticta coryli, Phyllosticta cucurbitacearum, Phyllosticta cyclaminella, Phyllosticta erratica, Phyllosticta hawaiiensis, Phyllosticta lentisci, Phyllosticta manihotis, Phyllosticta micropuncta, Phyllosticta mortonii, Phyllosticta nicotianae, Phyllosticta palmetto, Phyllosticta penicillariae, Phyllosticta perseae, Phyllosticta pseudocapsici, Phyllosticta sojaecola, Phyllosticta theae, Phyllosticta theicola,

Phymatotrichopsis, Phymatotrichopsis omnivora,

Physalospora, Physalospora disrupta, Physalospora perseae,

Physoderma, Physoderma alfalfae, Physoderma leproides, Physoderma trifolii,

Physopella, Physopella ampelopsidis,

Pileolaria, Pileolaria terebinthi,

Piricaudiopsis, Piricaudiopsis punicae, Piricaudiopsis rhaphidophorae, Piricaudiopsis rosae,

Plenodomus, Plenodomus destruens, Plenodomus meliloti,

Pleosphaerulina, Pleosphaerulina sojicola,

Pleospora, Pleospora alfalfae, Pleospora betae, Pleospora herbarum, Pleospora lycopersici, Pleospora tarda, Pleospora theae,

Pleuroceras,

Podosphaera, Podosphaera fuliginea, Podosphaera fusca, Podosphaera leucotricha, Podosphaera macularis, Podosphaera pannosa,

Polyscytalum, Polyscytalum pustulans,

Poria, Poria hypobrunnea,

Postia, Postia tephroleuca,

Powdery mildew,

Pseudocercospora, Pseudocercospora arecacearum, Pseudocercospora cannabina, Pseudocercospora fuligena, Pseudocercosporella herpotrichoides, Pseudocercospora gunnerae, Pseudocercospora pandoreae, Pseudocercospora puderi, Pseudocercospora rhapisicola, Pseudocercospora theae, Pseudocercospora vitis, Pseudocercosporella capsellae,

Pseudocochliobolus, Pseudocochliobolus eragrostidis,

Pseudoepicoccum, Pseudoepicoccum cocos,

Pseudopeziza, Pseudopeziza jonesii, Pseudopeziza medicaginis, Pseudopeziza trifolii,

Pseudoseptoria, Pseudoseptoria donacis,

Pucciniaceae,

Pucciniastrum, Pucciniastrum americanum, Pucciniastrum arcticum, Pucciniastrum epilobii, Pucciniastrum hydrangeae,

Pycnostysanus, Pycnostysanus azaleae,

Pyrenochaeta, Pyrenochaeta lycopersici, Pyrenochaeta terrestris,

Pyrenopeziza, Pyrenopeziza brassicae,

Ramichloridium, Ramichloridium musae,

Ramulispora, Ramulispora sorghi, Ramulispora sorghicola,

Rhinocladium, Rhinocladium corticola,

Rhizophydium, Rhizophydium graminis,

Rhizopus, Rhizopus arrhizus, Rhizopus circinans, Rhizopus microsporus, Rhizopus oryzae,

Rhytisma, Rhytisma punctatum, Rhytisma vitis,

Rigidoporus, Rigidoporus vinctus,

Rosellinia, Rosellinia arcuata, Rosellinia bunodes, Rosellinia necatrix, Rosellinia pepo,

Saccharicola, Saccharicola taiwanensis,

Schiffnerula, Schiffnerula cannabis,

Schizophyllum, Schizophyllum commune,

Schizopora, Schizopora flavipora,

Schizothyrium, Schizothyrium pomi,

Sclerophthora, Sclerophthora macrospora,

Sclerotium, Sclerotium cinnamomi, Sclerotium delphinii,

Scytinostroma, Scytinostroma galactinum,

Seimatosporium, Seimatosporium mariae, Seimatosporium rhododendri,

Selenophoma, Selenophoma linicola,

Septobasidium, Septobasidium bogoriense, Septobasidium euryae-groffii, Septobasidium gaoligongense, Septobasidium pilosum, Septobasidium polygoni, Septobasidium pseudopedicellatum, Septobasidium theae,

Septocyta, Septocyta ruborum,

Serpula, Serpula lacrymans,

Setosphaeria, Setosphaeria rostrata, Setosphaeria turcica,

Spencermartinsia, Spencermartinsia pretoriensis,

Sphaceloma, Sphaceloma arachidis, Sphaceloma menthae, Sphaceloma perseae, Sphaceloma poinsettiae, Sphaceloma sacchari, Sphaceloma theae,

Sphacelotheca, Sphacelotheca reiliana, Sphaerotheca castagnei,

Sphaerulina, Sphaerulina oryzina, Sphaerulina rehmiana, Sphaerulina rubi,

Sphenospora, Sphenospora kevorkianii,

Spilocaea, Spilocaea oleaginea,

Sporisorium, Sporisorium omentum, Sporisorium ehrenbergii, Sporisorium scitamineum, Sporisorium sorghi,

Sporonema, Sporonema phacidioides,

Stagonospora, Stagonospora avenae, Stagonospora meliloti, Stagonospora recedens, Stagonospora sacchari, Stagonospora tainanensis,

Stagonosporopsis,

Stegocintractia, Stegocintractia junci,

Stemphylium, Stemphylium alfalfae, Stemphylium bolickii, Stemphylium cannabinum, Stemphylium globuliferum, Stemphylium lycopersici, Stemphylium sarciniforme, Stemphylium solani, Stemphylium vesicarium,

Stenella, Stenella anthuriicola,

Stigmatomycosis,

Stigmina, Stigmina carpophila, Stigmina palmivora, Stigmina platani-racemosae,

Stromatinia, Stromatinia cepivora,

Sydowiella, Sydowiella depressula,

Sydowiellaceae,

Synchytrium, Synchytrium endobioticum,

Tapesia, Tapesia acuformis, Tapesia yallundae,

Taphrina, Taphrina coryli, Taphrina potentillae,

Thanatephorus, Thanatephorus cucumeris,

Thecaphora, Thecaphora solani,

Thielaviopsis, Thielaviopsis basicola, Thielaviopsis ceramica,

Thyrostroma, Thyrostroma compactum,

Tiarosporella, Tiarosporella urbis-rosarum,

Tilletia, Tilletia barclayana, Tilletia caries, Tilletia controversa, Tilletia laevis, Tilletia tritici, Tilletia walkeri,

Tilletiariaceae,

Togniniaceae,

Tranzschelia, Tranzschelia pruni-spinosae,

Trichoderma, Trichoderma koningii, Trichoderma paucisporum, Trichoderma songyi, Trichoderma theobromicola, Trichoderma viride,

Tubercularia, Tubercularia lateritia,

Tunstallia, Tunstallia aculeata,

Typhula, Typhula blight, Typhula idahoensis, Typhula incarnata, Typhula ishikariensis, Typhula variabilis,

Ulocladium, Ulocladium consortiale,

Uncinula,

Uredo, Uredo behnickiana, Uredo kriegeriana, Uredo musae, Uredo nigropuncta, Uredo rangelii,

Urocystis, Urocystis agropyri, Urocystis brassicae, Urocystis occulta,

Uromyces, Uromyces apiosporus, Uromyces appendiculatus, Uromyces beticola, Uromyces ciceris-arietini, Uromyces dianthi, Uromyces euphorbiae, Uromyces graminis, Uromyces inconspicuus, Uromyces lineolatus, Uromyces musae, Uromyces oblongus, Uromyces pisi-sativi, Uromyces proeminens, Uromyces medicaginis, Uromyces trifolii-repentis, Uromyces viciae-fabae,

Urophlyctis, Urophlyctis leproides, Urophlyctis trifolii,

Ustilaginales,

Ustilago, Ustilago avenae, Ustilago esculenta, Ustilago hordei, Ustilago maydis, Ustilago nigra, Ustilago nuda, Ustilago scitaminea, Ustilago tritici,

Vankya, Vankya ornithogali,

Velvet blight,

Veronaea, Veronaea musae,

Verticillium, Verticillium albo-atrum, Verticillium alfalfae, Verticillium dahliae, Verticillium isaacii, Verticillium klebahnii, Verticillium longisporum, Verticillium nonalfalfae, Verticillium theobromae, Verticillium wilt, Verticillium zaregamsianum,

Waitea, Waitea circinata,

Westea,

Wheat leaf rust,

Wheat mildew,

Wuestneiopsis, Wuestneiopsis georgiana,

Xeromphalina, Xeromphalina fraxinophila,

Zopfia, Zopfia rhizophila,

Zygosaccharomyces, Zygosaccharomyces bailii, Zygosaccharomyces florentinus,

Zythiostroma.

Предпочтительно, парами грибов, оомицетов или бактерий и культурных растений, на которые направлено изобретение, являются следующие:

Пшеница (Triticum sativum)

Claviceps purpurea, Erysiphe graminis, Fusarium avenaceum, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium langsethiae, Fusarium poae, Fusarium pseudograminearum, Gaeumannomyces graminis, Leptosphaeria nodorum, Microdochium spp., Mycosphaerella graminicola, Oculimacula acuformis, Oculimacula yallundae, Puccinia recondita, Puccinia striiformis, Pyrenophora tritici-repentis, Rhizoctonia cerealis, Microdochium и Zymoseptoria tritici.

Кукуруза (Zea mays)

Fusarium graminearum, Fusarium proliferatum, Fusarium subglutinans, Fusarium verticillioides

Ячмень (Hordeum vulgare)

Blumeria graminis, Fusarium spp., Pyrenophora teres, Ramularia collo-cygni, Rhynchosporium secalis

Рис (Oryza sativa)

Cochliobolus miyabeanus, Fusarium fijikuroi, Magnaporthe oryzae, Microdochium oryzae, Pyricularia oryzae, Rhizoctonia oryzae, Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae, Ustilaginoides virens

Картофель (Solanum tuberosum)

Alternia alternata, Alternaria solani, Phytophtora infestans, Rhizoctonia solani

Виноград (Vinis vitifera)

Botrytis cinerea, Erysiphe necator, Plasmopara viticola, Guignardia bidwelli, Erisyphe necator, Diplodia seriata

Соя (Glycine max)

Cercopora kikuchii, Colletotrichum dematium, Corynespora cassiicola, Fusarium graminearum, Pythium spp., Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum, Septoria glycines

Яблоня (Malus domestica)

Monilia fructigena, Monilia laxa, Pezzicula alba, Pezzicula malicorticis, Venturia inaequalis

Томат (Lycopersicon esculentum)

Phytophtora infestans

Фасоль (Phaseolus vulgaris)

Uromyces appendiculatus

Редька (Raphanus sativus)

Alternaria brassicae

Все фрукты и овощи

Botrytis cinerea

Земляника (Fragaria sp.)

Colletotrichum acutatum

Морковь (Daucus carota)

Aternaria alternata, Alternaria dauci, Alternaria radicina

Персик (Prunus persica) и абрикос (Prunus armeniaca)

Monilia fructicola, Monilia fructigena, Monilia laxa

Наиболее предпочтительными парами грибов или бактерий и культурных растений, на которые направлено изобретение, являются следующие:

Пшеница: Fusarium graminearum, Microdochium и Zymoseptoria tritici

Виноград: Botrytis cinerea, Erysiphe necator, Plasmopara viticola, Guignardia bidwelli, Erisyphe necator, Diplodia seriata

Картофель: Alternia alternata, Alternaria solani, Phytophtora infestans, Rhizoctonia solani

Томат: Phytophtora infestans

Способ борьбы

Изобретение также относится к способу борьбы с патогенными грибами, оомицетами и(или) бактериями культурных растений и семян, включающему применение молекулы формулы (I):

где:

R₁ выбран из группы, состоящей из:

где:

- R₃ представляет собой Н или SO₃Na,

- R₄ представляет собой Н или ОН,

- представляет собой одинарную или двойную связь,

- n принимает значения 0 или 1 и

- m принимает значения 0 или 1; и

R₂ выбран из группы, состоящей из:

и

Предпочтительно, представляет собой:

где R₃ представляет собой Н или SO₃Na.

Предпочтительно, R₂ представляет собой:

Такая борьба может быть направлена на лечение или на профилактику, предпочтительно, на лечение.

Применение у культурных растений можно осуществлять любыми способами, известными специалисту в области техники, позволяющими достичь части растений, пораженные грибами и/или бактериями.

Молекулу формулы (I) применяют в дозе от 0,1 до 5 мг/мл, предпочтительно от 0,5 до 3 мг/мл, наиболее предпочтительно от 0,75 до 1 мг/мл.

Покрытие семян можно осуществлять любым способом, известным специалисту в области техники, позволяющим активному агенту оставаться в контакте с семенами.

Например, покрытие можно наносить путем опудривания или опрыскивания.

Например, покрытие может содержать вспомогательные вещества и адъюванты.

Вспомогательные вещества позволяют нанести и удержать активное вещество на зерне в одинаковой и постоянной пропорции на протяжение всего процесса нанесения продукта, причем в очень низких дозах.

Вспомогательные вещества включают: органические растворители или воду, диспергирующие вещества, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты, красители и т.д.

Поверхностно-активные вещества и эмульгаторы обладают свойством объединять и поддерживать вместе в стабильном виде две несовместимые жидкости.

На семена можно наносить различные адъюванты. Пленкообразователи соответствуют нанесению микропористой пленки на поверхность семян. Они не изменяют ни форму, ни размер семени. Они улучшают покрытие и гомогенность обработки. Фермерам удобнее обращаться с семенами при посеве за счет уменьшения запыленности и улучшения подачи семян в сеялку. Они улучшают действие активных веществ в условиях культивации. Нанесение оболочки изменяет форму, размер и вес семени. Оно улучшает точность высева.

Способы борьбы с патогенными грибами и/или бактериями культурных растений и семян по изобретению особенно подходят для борьбы с фузариозом, предпочтительно, с фузариозом, указанным в Таблице 1.

Способы борьбы с патогенными грибами, оомицетами и/или бактериями культурных растений и семян по изобретению особенно подходят для следующих пар грибов или бактерий и культурных растений:

Пшеница: Fusarium graminearum, Microdochium nivale и Zymoseptoria tritici

Виноград: Botrytis cinerea, Plasmopara viticola, Guignardia bidwelli, Erisyphe necator, Diplodia seriata

Яблоня: Venturia inaequalis

Банановое дерево: Fusarium oxysporum и Mycosphaerella fijiensis

ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Пример 1. Культура микроводорослей

Микроводоросли Amphidinium carterae, штамм АС208, полученный из банка водорослей Algobank (Кан) и микроводоросли Prymnesium parvum, штамм RCC 1436, и Phaeodactylum tricornutum, штамм ССМР 632, полученные из банка морских микроорганизмов Роскоф (RCC: Коллекция культур Роскоф). Указанные микроводоросли культивировали в искусственной морской воде L1 (https://ncma.bigelow.org/algal-recipes) при 19°С с циклами день/ночь 12 ч/12 ч. Использовали интенсивность света 100 мкЭ. Биомассу выделяли в конце фазы экспоненциального роста путем центрифугирования (15 мин при 3000 об/мин). Полученный осадок замораживали и затем лиофилизировали в лабораторном лиофилизаторе (Alpha 1-2 LDplus, Labconco) для сохранения активного вещества в стабильном состоянии в течение длительного времени. После лиофилизации сухое вещество взвешивали.

Пример 2. Получение экстракта

Для экстрагирования активного вещества из сухого вещества, полученного в Примере 1, 20 мг сухого вещества ресуспендировали в 1 мл дистиллированной воды при 100°С. После инкубации в течение 2 мин при комнатной температуре (20-25°С) экстракт хранили на льду и затем центрифугировали в течение 5 мин при 10000 об/мин при комнатной температуре. Надосадочную жидкость, содержащую активное вещество, замораживали в жидком азоте для сохранения его противогрибковых свойств в течение длительного времени.

Пример 3. Тест на прорастание Fusarium graminearum

Споры Fusarium graminearum выращивали в обедненной среде, приготовленной из отвара золотистой фасоли. Споры отделяли от мицелия путем фильтрования через Miracloth (Calbiochem), центрифугировали и затем ресуспендировали в концентрации 1,6×10⁶ спор/мл. Приблизительно 16000 спор инкубировали в присутствии контрольного раствора или экстракта A. carterae в различных концентрациях. После инкубации при комнатной температуре в течение 10 мин споры помещали на стекло для подсчета проросших спор через 6 часов или на чашку Петри для наблюдения за ростом мицелия через 72 часа.

Исследования

Пример 4. Фракционирование экстракта D при помощи ВЭЖХ и анализ противогрибковой активности различных полученных фракций

Чтобы охарактеризовать, какие молекулы, присутствующие в экстракте A. carterae, отвечают за противогрибковую активность, выбрали стратегию бионаправленного фракционирования: экстракт A. carterae фракционировали на колонке ВЭЖХ и проводили анализ биоцидной активности против спор F. graminearum для каждой фракции, чтобы установить, какая из фракций содержит молекулу(ы), ответственную(ые) за противогрибковую активность.

200 мг лиофильно высушенных клеток солюбилизировали в 1 мл метанола. После центрифугирования в течение 10 мин при 4400 об/мин надосадочную жидкость отбирали и затем всю собранную жидкую спиртовую фазу фильтровали через бумагу, затем раствор выпаривали на ротационном испарителе на холоде и получали 48,5 мг экстрагированного продукта. Анализ активности проводили на спорах F. graminearum для подтверждения активности экстракта A. carterae (Фиг. 1А).

Если экстракт проявлял активность, проводили эксперименты с полупрепаративным фракционированием на колонке С18 для обращенно-фазовой хроматографии с применением высокопроизводительного жидкостного хроматографа Thermo Scientific Ultimate 3000 согласно следующему протоколу:

Экстракт A. carterae растворяли в метаноле до концентрации 5 г/л. Для экстракта использовали следующие условия:

Скорость тока: 2,5 мл/мин

Колонка: С18 для обращенно-фазовой хроматографии Длина = 250 мм; внутренний диаметр = 10 мм; диаметр частиц = 5 мкм.

Инжектируемый объем: 150 мкл

Температура при инжекции: 24°С

Детекция при длине волны: 280 нм

Программа для градиента описана в Таблице 2 ниже.

Полученная в указанных условиях хроматограмма представлена на Фиг. 1Б. Получили пять фракций F1-F5, как показано на Фиг. 1Б, таким образом каждый основной пик соответствует отдельной фракции. Рост F. graminearum использовали для анализа активности каждой фракции в концентрации 5 мг/мл. Результаты свидетельствуют, что только фракция F1 по-прежнему обладала биоцид ной активностью (Фиг. 1В), минимальная ингибирующая концентрация (MIC) для данной фракции составляла 0,75 мг/мл (Фиг. 1Г).

Фракцию F1 вновь подвергали фракционированию согласно следующему протоколу:

Экстракт F1 растворяли в метаноле до концентрации 5 г/л. Для экстракта F1 использовали следующие условия:

- Скорость тока: 2,5 мл/мин

- Колонка: С18 для обращенно-фазовой хроматографии Длина = 250 мм; внутренний диаметр = 10 мм; диаметр частиц = 5 мкм

- Инжектируемый объем: 150 мкл

- Температура при инжекции: 24°С

- Детекция при длине волны: 280 нм

- Программа для градиента описана в Таблице 3 ниже.

Полученная в указанных условиях хроматограмма представлена на Фиг. 2А. Получили пять фракций F1-1 - F1-5, как показано на Фиг. 2А, основной пик соответствовал фракции F1-2. Рост F. graminearum использовали для анализа активности каждой фракции в концентрации 5 мг/мл. Результаты свидетельствуют, что только фракции F1-2 и F1-3 обладали биоцидной активностью (Фиг. 2Б), MIC для фракции F1-2 составляла 0,75 мг/мл (Фиг. 2В).

Пример 5. Масс-спектрометрический анализ фракции F1-2.

Чтобы лучше охарактеризовать молекулу, присутствующую во фракции F1-2, проводили масс-спектрометрический анализ в следующих условиях:

Эксперименты проводили на спектрометре QStar Elite (Applied Biosystems) с подачей образца при помощи шприца.

Режим ионизации: Ионизация электрораспылением (ESI) с регистрацией положительно заряженных ионов

Напряжение на распыляющем капилляре 4500 В при комнатной температуре

Условия инжектирования: 20 мкл образца, растворенного в метаноле, при скорости тока метанола 400 мкл/мин.

Сканирование в диапазоне: 100-2000 Дальтон

На Фиг. 3А показан масс-спектр, полученный при ионизации электрораспылением с регистрацией положительно заряженных ионов представляющей интерес молекулы из фракции F1-2.

Установили точную массу 1381,8276 Дальтон. Она соответствует натриевому аддукту, образованному в ходе ионизации ([M+Na]⁺). После вычитания массы натрия 23 Дальтон масса молекулярного пика соединения составила 1358,8 Да.

Тщательный анализ точной массы позволяет получить одну или более чем одну эмпирическую формулу, соответствующую данной массе, с ошибкой 5 ррт.Отбросив предположения, которые были нереалистичными, выбрали эмпирическую формулу C₇₁H₁₂₂O₂₄.

Провели углубленный анализ данного пика 1381,8276 Да при помощи тандемной масс-спектрометрии. Масс-спектр представлен на Фиг. ЗБ. Несколько пиков (обведенные пики на Фиг. 3Б) аналогичны пикам, наблюдаемым при фрагментации амфидинола 18 (7).

Пример 6. Анализ фракции F1-2 методом ядерно-магнитного резонанса (ЯМР)

Для определения структуры молекулы, имеющей молекулярную массу 1358,8 Да, проводили ЯМР анализ согласно следующей схеме:

Собирали образцы, соответствующие пику F1-2, и затем полностью растворяли приблизительно в 350 мкл дейтерированного метанола (MeOD₄).

Эксперименты проводили на спектрометре Bruker Avance 14.1Т, снабженном мультиядерным датчиком. Для записи одно- и двумерных протонных и углеродных спектров использовали импульсные последовательности из библиотеки последовательностей Bruker.

Параметры эксперимента были следующими:

- ¹Н: Количество сканов: 512; Импульс: 8 мкс; Запись: 5,0 с; Релаксация: 1,0 с

- ¹³С DEPT135: Количество сканов: 44666; Импульс: 12 мкс; Запись: 1,0 с; Релаксация: 3,0 с

- HSQC: Количество сканов: 64; 512 инкрементов

- НМВС: Количество сканов: 48; 512 инкрементов

- COSY: Количество сканов: 56; 256 инкрементов

- TOCSY: Количество сканов: 48; 256 инкрементов Последовательность ¹³С DEPT135 представляет собой эксперимент, позволяющий рассортировать углероды в зависимости от количества непосредственно связанных с ними протонов: СН₃ и СН>0 и СН₂<0.

Корреляционная спектроскопия (COSY) относится к двумерной гомоядерной спектроскопии и используется для идентификации протонов, находящихся в скалярном взаимодействии, на расстоянии 2 или 3 связей друг от друга.

Полная корреляционная спектроскопия (TOCSY) относится к двумерной гомоядерной спектроскопии и используется для идентификации протонов, находящихся в скалярном взаимодействии, на расстоянии 3 или более связей друг от друга.

Гетероядерная одноквантовая корреляционная спектроскопия (HSQC) относится к двумерной гетероядерной спектроскопии и демонстрирует непосредственное взаимодействие между углеродом и непосредственно связанным(и) протоном(ами).

Гетероядерная многосвязная корреляционная спектроскопия (НМВС) относится к двумерной гетероядерной спектроскопии, демонстрирующей корреляции между протонами и углеродами, находящимися на расстоянии 2 или 3 связи друг от друга.

Одномерные спектры подвергали Фурье-преобразованию. Спектры подвергали Фурье-преобразованию в двух измерениях.

Как показывают полученные результаты, в записанном спектре ¹Н, представленном на Фиг. 4А, выявляется ряд пиков в широком спектральном окне между 1 и 6 ррт.Это подтверждает, что исследуемые соединения содержат алифатические и олефиновые протоны. Такие сдвиги также позволяют предположить наличие гетероатомов, таких как кислород.

В спектре ¹³С DEPT135 (Фиг. 4Б) выявляется ряд пиков в спектральном окне между 13 и 211 ppm. Последовательности 2D НМВС и HSQC показывают, каким образом углероды связаны между собой в цепь. Последовательности 2D COSY и TOCSY позволяют подтвердить структуру цепи на основании протонных сдвигов и их корреляций.

Количество ненасыщенных связей и колец согласуется с рассчитанным для молекулы на основании ее эмпирической формулы (=11):

Где: n_C: число атомов углерода, n_Н: число атомов водорода, n_N: число атомов азота, n_X: число атомов галогена.

11 ненасыщенных связей распределены следующим образом:

- 1 кетогруппа

- 8 двойных связей, включая 2 на концах цепи

- 2 кольца

Последовательности COSY и TOCSY позволили реконструировать весь углеродный скелет структуры. Эти корреляции показаны жирными связями на Фиг. 5. Приведенные результаты свидетельствуют, что вторичная структура молекулы соответствует таковой амфидинола 18. Сравнение результатов, полученных в данном исследовании и найденных в литературе (7), послужило подтверждением общей интерпретации данных.

В заключение, все результаты, полученные методом ядерного магнитного резонанса и масс-спектрометрии, подтверждают, что молекула, присутствующая во фракции F1-2, полученной путем фракционирования экстракта D и проявляющая противогрибковую активность против F. graminearum, представляет собой молекулу амфидинола 18, имеющую следующие химические характеристики:

- Эмпирическая формула: C₇₁H₁₂₂O₂₄

- Молярная масса: 1358,83 г/моль

Список литературы

(1) Arseniuk, Е., Foremska, Е., Goral, Т., Chelkowski, J. 1999. Fusarium head blight reactions and accumulation ofdeoxynivalenol (DON) and some of its derivatives in kernels of wheat, triticale and rye. Journal of Phytopathology 147, 577-590

(2) Devi P, Wahidulla S, Kamat T and D'Souza L (2011). Screening marine organisms for antimicrobial activity against clinical pathogens. Indian J. Geomar. Sci. (40) 338-346.

(3) Mayer AM, Rodriguez AD, Taglialatela-Scafati O, Fusetani N (2013). Marine pharmacology in 2009-2011: marine compounds with antibacterial, antidiabetic, antifungal, anti-inflammatory, antiprotozoal, antituberculosis, and antiviral activities; affecting the immune and nervous systems, and other miscellaneous mechanisms of action. Mar Drugs. 11(7):2510-73

(4) Bowler, C, Vardi, A., & Allen, A. E. (2010). Oceanographic and biogeochemical insights from diatom genomes. Annual Review of Marine Science, 2, 333-65. doi: 10.1146/annurev-marine-120308-081051

(5) Murray S, Garby T, Hoppenrath M, Neilan BA (2012). Genetic diversity, morphological uniformity and polyketide production in dinoflagellates (Amphidinium, Dinoflagellata). PLoS One. 7(6)

(6) Morsy N, Houdai T, Matsuoka S, Matsumori N, Adachi S, et al. (2006). Structures of new amphidinols with truncated polyhydroxyl chain and their membrane-permeabilizing activities. Bioorganic and Medicinal Chemistry 14: 6548-6554.

(7) Nuzzo G, Cutignano A, Sardo A, Fontana A, 2014 Jun 27, J Nat Prod, Antifungal Amphidinol 18 and its 7-sulfate derivative from marine dinoflagellate Amphidinium carterae.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и направлено на создание противогрибковых агентов для культурных растений и семян. Раскрывается способ борьбы с патогенными грибами культурных растений и семян, при котором на культурные растения наносят и/или указанные семена покрывают молекулой формулы (I), при этом молекулу формулы (I) используют в дозе от 0,1 до 5 мг/мл. Изобретение обеспечивает эффективную борьбу с патогенными грибами культурных растений и семян. 10 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 табл., 4 пр.

1. Способ борьбы с патогенными грибами культурных растений и семян, при котором на культурные растения наносят и/или указанные семена покрывают молекулой следующей формулы (I):

где R₁ выбран из группы, состоящей из:

где R₃ представляет собой Н или SO₃Na,

R₄ представляет собой Н или ОН,

представляет собой одинарную или двойную связь,

n принимает значения 0 или 1 и

m принимает значения 0 или 1; и

R₂ выбран из группы, состоящей из:

и

при этом молекулу формулы (I) используют в дозе от 0,1 до 5 мг/мл.

2. Способ по п. 1, где молекулу формулы (I) используют в дозе от 0,5 до 3 мг/мл.

3. Способ по п. 2, где молекулу формулы (I) используют в дозе от 0,75 до 1 мг/мл.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где R₁ представляет собой:

где R₃ представляет собой Н или SO₃Na.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где R₂ представляет собой:

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где молекула формулы (I) представляет собой амфидинол 18:

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где молекула формулы (I) выделена из клеток одной или более чем одной микроводоросли рода Amphidinium.

8. Способ по п. 7, где молекула формулы (I) выделена из клеток Amphidinium carterae.

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, где указанные патогенные грибы культурных растений и семян представляют собой патогенные грибы культурных растений и семян родов Fusarium, Colletotrichum, Mycosphaerella, Phytophthora и Alternaria, предпочтительно, пары грибы/культурные растения Triticum sativum/Mycosphaerella graminicola - Triticum sativum/Fusarium graminearum - Solanum tuberosum/Phytophtora infestans - Vinis vitifera/Plasmospora viticola - Vinis vitifera/Erysiphe necator - Lycopersicon esculentum/Phytophtora infestans.

10. Способ по п. 9, где указанные патогенные грибы культурных растений и семян родов Fusarium, Colletotrichum, Mycosphaerella, Phytophthora и Alternaria выбраны из группы, состоящей из Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium avenaceum, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium moniliforme, Fusarium poae, Fusarium proliferatum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium subglutinans, Fusarium tricinctum, Colletotrichum acutatum, Colletotrichum graminicola, Colletotrichum coffeanum, Colletotrichum gloeosporioides, Mycosphaerella graminicola, Phytophthora infestans, Alternaria solani и Alternaria brassisicola.

11. Способ по любому из предшествующих пунктов, являющийся лечебным или профилактическим.