Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к лабораторной диагностике.
Изобретение может быть использовано для количественной оценки гуморального иммунного ответа на текущую или перенесенную инфекцию, вызванную вирусом SARS-CoV-2, для определения уровня поствакцинального иммунитета, сформированного на S-белок (включая RBD) вируса SARS-CoV-2, а также для выявления вируснейтрализующей активности сывороток крови человека и животных, моноклональных антител различной видовой принадлежности.
В наборе реагентов для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к SARS-CoV-2 реализован двустадийный «конкурентный» вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Набор реагентов предназначен для количественного определения вируснейтрализующих антител к рецептор-связывающему домену - RBD поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови человека и лабораторных животных методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Результаты количественного определения антител к вирусу SARS-CoV-2 имеют коэффициент корреляции с реакцией нейтрализации 0,84, в отличие от других наборов реагентов для количественного определения иммуноглобулинов класса G к поверхностному гликопротеину S SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови человека, для которых он составляет 0,7.
Набор предназначен для профессионального применения в клинической лабораторной диагностике и научно-исследовательских организациях.
Изобретение является новым, поскольку в общедоступных источниках в Российской Федерации отсутствуют сведения о наборе реагентов, позволяющем обеспечить проведение количественного анализа вируснейтрализующих антител методом двустадийного «конкурентного» твердофазного иммуноферментного анализа, в комплектности которого представлены калибровочные образцы, аттестованные относительно стандарта WHO International Standard First WHO International Standard for anti-SARS-CoV-2 immunoglobulin (human), NIBSC code: 20/136 IU - international units»).
В качестве прототипа предлагаемого изобретения выбрали набор реагентов для иммуноферментного количественного определения иммуноглобулинов класса G к SARS-CoV-2 «SARS-CoV-2-IgG количественный-ИФА-БЕСТ», предназначенный для количественного определения иммуноглобулинов класса G к поверхностному гликопротеину S SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Выбор оговоренного выше набора обусловлен схожестью состава набора реагентов, а также предназначением обоих наборов для количественного определения антител к рецептор-связывающему домену - RBD поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови человека и лабораторных животных методом твердофазного иммуноферментного анализа
К признакам предлагаемого изобретения, отличающим ее от аналога, следует отнести:
- предлагаемый набор реагентов предназначен для количественного определения вируснейтрализующих антител, набор сравнения - для определения иммуноглобулинов класса G (IgG);
- в предлагаемом наборе метод определения основан на двустадийном «конкурентном» варианте твердофазного иммуноферментного анализа, в наборе сравнения - на двустадийном «непрямом» варианте твердофазного иммуноферментного анализа.
Предлагаемое изобретение промышленно применимо, поскольку для изготовления набора может быть использовано типовое биотехнологическое оборудование, а также широко распространенные в биотехнологической промышленности реактивы и материалы.
В комплект набора реагентов для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к SARS-CoV-2 «SARS-CoV-2-ВНА-ИФА-РХБЗ» входят:
1. Планшет разборный 96-луночный для проведения реакции с иммобилизованным рекомбинантным внеклеточным доменом человеческого ангиотензинпревращающего фермента АСЕ-2 - 1 шт;
2. Калибровочные образцы, содержащие известные количества IgG к SARS-CoV-2 - 0; 25; 100 IU/мл - 5 флаконов по 1,5 мл;
3. Контрольный образец (сыворотка крови, содержащая антитела к SARS-CoV-2 в концентрации 60-90 IU/)- 1 флакон 1,5 мл;
4. Конъюгат (конъюгат рекомбинантного S-белка виpyca SARS-CoV-2 с пероксидазой хрена) - 1 флакон 11 мл;
5. Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином - 1 флакон 28 мл;
6. Раствор тетраметилбензидина - 1 флакон 13 мл;
7. Стоп-реагент (кислота серная 4,9%) - 1 флакон 12 мл;
8. Планшет разборный 96-луночный для предварительного разведения исследуемых образцов - 1 шт.;
9. Пленки для заклеивания планшета - 2 шт.;
10. Наконечники для дозаторов на 2-200 мкл - 16 шт.;
11. Ванночка для реагентов - 1 шт.
Анализ с использованием набора реагентов для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к SARS-CoV-2 «SARS-CoV-2-ВНА-ИФА-РХБЗ» проводят по следующей схеме.
В лунки флуориметра для проведения разведения вносят 135 мкл конъюгата и 15 мкл изучаемой пробы и инкубируют.
В лунки планшета с иммобилизованным рекомбинантным рецептором АСЕ-2 вносят 100 мкл 10-кратно разведенных образцов, включая калибровочные образцы 0; 25; 100 IU/мл и контрольный образец.
Измерение результатов анализа проводят при длине волны 450 нм.
Стрипы заклеивают пленкой и инкубируют 60 мин в термостатируемом шейкере при температуре (37±1)°С с интенсивностью перемешивания 300 об/мин.
По окончании инкубации снимают липкую пленку и помещают ее в сосуд с дезинфицирующим раствором. С помощью промывочного устройства промывают лунки планшета 5 раз промывочным раствором, чередуя аспирацию и немедленное заполнение лунок каждого стрипа. В каждую лунку вносят 350 мкл жидкости в процессе каждого цикла промывки. Время между заполнением и опорожнением лунок должно доставлять не менее 30 сек. По окончании промывки остатки влаги из лунок тщательно удаляют.
Вносят во все лунки по 100 мкл раствора тетраметилбензидина и инкубируют в защищенном от прямого солнечного света месте 25 мин при температуре (18-26)°С.
Вносят во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.
Взмерение результатов анализа проводят при длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-655 нм.
Время между остановкой реакции и измерением оптической плотности не должно превышать 5 мин.
Концентрацию вируснейтрализующих антител к SARS-CoV-2 IU/мл) в анализируемых образцах определяют по калибровочному графику (зависимость значения оптической плотности от концентрации), построенному в линейных координатах на основе показаний калибровочных образцов (IU/мл).
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ К SARS-CoV-2 В СЫВОРОТКЕ ИЛИ ПЛАЗМЕ КРОВИ ЛЮДЕЙ, ПЕРЕНЕСШИХ COVID-19 ИЛИ ПРИВИТЫХ ВАКЦИНАМИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ НОВОЙ КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ COVID-19, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА, СОДЕРЖАЩЕГО РЕКОМБИНАНТНЫЙ РЕЦЕПТОР-СВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН (RBD) ПОВЕРХНОСТНОГО ГЛИКОПРОТЕИНА S КОРОНАВИРУСА SARS-COV-2 И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ РЕЦЕПТОР АСЕ2 | 2021 |
|
RU2784655C1 |
Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами | 2021 |
|
RU2760438C1 |
Способ получения штамма клеток яичника китайского хомячка, продуцента рекомбинантного белка RBD вируса SARS-CoV-2, штамм клеток яичника китайского хомячка, продуцент рекомбинантного белка RBD вируса SARS-CoV-2, способ получения рекомбинантного белка RBD вируса SARS-CoV-2, тест-система для иммуноферментного анализа сыворотки или плазмы крови человека и ее применение | 2020 |
|
RU2723008C1 |
Штамм гибридных культивируемых клеток Homo sapiens/Mus musculus Hu-C6D7-RBD - продуцент человеческих моноклональных антител, специфичных к RBD домену S белка вируса SARS-CoV-2 | 2022 |
|
RU2788359C1 |
Штамм hCoV-19/Russia/Omsk-202118-1707/2020 коронавируса SARS-CoV-2, иммуносорбент, содержащий цельновирионный очищенный антиген, полученный на основе указанного штамма и тест-система ИФА для выявления антител классов M, G и A к коронавирусу SARS-CoV-2 с использованием указанного иммуносорбента | 2021 |
|
RU2752862C1 |
Моноклональное антитело к RBD фрагменту в составе S белка вируса SARS-CoV-2 | 2020 |
|
RU2744274C1 |
СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ SARS-COV-2 В СОСТАВЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА С ОПРЕДЕЛЕНИЕМ УРОВНЕЙ АНТИТЕЛ КЛАССОВ IgM, IgG, IgA В СЫВОРОТКЕ/ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ COVID-19 | 2020 |
|
RU2730897C1 |
Искусственный ген, кодирующий бицистронную структуру, образованную последовательностями рецептор-связующего домена гликопротеина S коронавируса SARS-CoV-2, P2A-пептида и гликопротеина G VSV, рекомбинантная плазмида pStem-rVSV-Stbl_RBD_SC2, обеспечивающая экспрессию искусственного гена и рекомбинантный штамм вируса везикулярного стоматита rVSV-Stbl_RBD_SC2, используемого для создания вакцины против коронавируса SARS-CoV-2 | 2020 |
|
RU2733831C1 |
Тест-система и способ дифференцированного выявления антител к SARS-CoV-2 | 2021 |
|
RU2754340C1 |
Способ проведения иммуноферментного анализа для выявления антител в биологическом образце человека, специфичных к коронавирусу человека SARS-COV2, тест-система | 2021 |
|
RU2759149C1 |
Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к рецептор-связывающему домену - RBD поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 в сыворотке или плазме крови человека и лабораторных животных. Изобретение представляет собой набор реагентов для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к SARS-CoV-2, в котором реализован двустадийный «конкурентный» вариант твердофазного иммуноферментного анализа.
Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения вируснейтрализующих антител к рецептор-связывающему домену - RBD поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 в сыворотке или плазме крови человека и лабораторных животных, включающий в себя калибровочные образцы, содержащие известные количества IgG к SARS-CoV-2 - 0; 25; 100 IU/мл, контрольный отрицательный образец, конъюгат, концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор тетраметилбензидина, стоп-реагент, планшет разборный на 96 лунок для проведения реакции и планшет для предварительного разведения исследуемых образцов, пленки для заклеивания планшетов, наконечники для дозаторов, ванночку для реагентов, отличающийся тем, что в лунках планшета для проведения реакции иммобилизирован рекомбинантный внеклеточный домен человеческого ангиотензинпревращающего фермента АСЕ-2, конъюгатом выступает рекомбинантный S-белок вируса SARS-CoV-2 с пероксидазой хрена, в качестве контрольного образца выступает разведение сыворотки крови, содержащей антитела к SARS-CoV-2 в концентрации 60-90 IU/мл.
Устройство для перевозки грузов, например, рельсов | 1939 |
|
SU57469A1 |
Автоматический терморегулирующий вентиль | 1940 |
|
SU62709A1 |
СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ G К КОНЪЮГАТУ ФОРМАЛЬДЕГИД - СЫВОРОТОЧНЫЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ АЛЬБУМИН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ | 2010 |
|
RU2473908C2 |
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОПОЛИСАХАРИДОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ В ПЫЛИ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ | 2013 |
|
RU2543323C2 |
WO 2022090573 A1, 02.11.2020 | |||
JU B | |||
et al., Human neutralizing antibodies elicited by SARS-CoV-2 infection, Nature, 2020, Vol.584, N7819, pp.115-119. |
Авторы
Даты
2023-06-09—Публикация
2021-09-20—Подача