Косметическая композиция Российский патент 2023 года по МПК A61K8/9789 A61Q5/00 A61Q19/08 

Настоящее изобретение относится к косметическим композициям, включающим экстракт стебля пачули.

Пачули (Pogostemon cablin) представляет собой растение семейства Lamiaceae, обычно называемого семейством "мятных" или "яснотковых". Растение имеет вид кустистой травы с прямостоящими стеблями, достигающими высоты приблизительно 75 см, на которых располагаются мелкие цветки, имеющие от бледно-розовой до белой окраску. Естественным ареалом его обитания являются тропические регионы Азии.

Тяжелый и стойкий запах пачули на протяжении веков использовали для приготовления душистых веществ, а в последнее время пачули добавляют в благовония, средства для отпугивания насекомых и продукты альтернативной медицины. Наряду с другими представителями рода Pogostemon, растение Pogostemon cablin обычно культивируют для получения из него эфирного масла, известного как масло пачули. Пачули развивается в климатических условиях от теплых до тропических. Цветки, из которых получают семена, имеют сильный аромат и цветут поздней осенью. Очень мелкие семена могут быть собраны для посадки, но они очень нежные и легко сминаются. Для получения новых растений также могут быть использованы черенки от материнского растения, которые укореняют в воде.

Извлечение эфирного масла пачули обычно выполняют перегонкой с водяным паром высушенных листьев и стеблей, поскольку извлечение требует разрыва клеточных стенок растения посредством обработки материала горячим паром, световой ферментации (light fermentation) или сушки. Листья могут быть собраны несколько раз в год и после сушки могут быть направлены на перегонку.

Основным химическим компонентом масла пачули является сесквитерпеновый спирт - пачулол. Другие важные компоненты включают гермакрен-В и норпачуленол. В целом, в пачули было идентифицировано приблизительно 140 химических веществ (Swamy с соавт., Molecules 2015, 20, 8521-8547), включающих терпеноиды, фитостерины, флавоноиды, органические кислоты, лигнины, алкалоиды, гликозиды, спирты и альдегиды. Летучие вещества в основном состоят из пачулевого спирта, α-пачулена, β-пачулена, α-булнезена (α-bulnesene), сейшелена (seychellene), норпачуленола, погостона (pogostone), эвгенола и погостола (pogostol). Нелетучие вещества включают акацетин, апигенин, ликохалькон А, омбуин (ombuin), рамнетин, ретузин (retusine), актеозид, агастахозид, изокренатозид (isocrenatoside), тилианин, рубузозид, три- и сесквитерпены.

Пачули широко используется в получении душистых веществ и парфюмерии и является важным ингредиентом восточноазиатских благовоний. Листья пачули используют для изготовления травяного чая. В некоторых культурах листья пачули едят как овощи или используют в качестве приправ. Пачули также рассматривают как средство для отпугивания насекомых, применяя для отпугивания Формозских подземных термитов.

Задачей настоящего изобретения является повышение ценности стеблей пачули, которые уже были использованы для получения масла пачули.

Эта задача решена посредством создания косметических композиций и способов согласно настоящему изобретению.

Первый аспект настоящего изобретения относится к косметической композиции, включающей носитель и по меньшей мере один активный косметический ингредиент, где первый активный косметический ингредиент включает экстракт стебля пачули.

В отличие от эфирного масла, получаемого гидродистилляцией или перегонкой с водяным паром, экстракт стебля пачули получают экстракцией стеблей пачули жидким растворителем.

Экстракт стебля пачули согласно настоящему изобретению полностью натурален и не имеет запаха.

Неожиданно было обнаружено, что экстракт стебля пачули согласно настоящему изобретению обладает полезными свойствами, обеспечивающими уход за кожей и препятствующими старению.

В частности, было обнаружено, что он оказывает антиокислительное действие и препятствует воздействию эластазы, гиалуронидазы и тирозиназы.

Таким образом, в одном из конкретных воплощений косметическая композиция согласно настоящему изобретению представляет собой композицию, предназначенную для ухода за кожей, в частности, композицию препятствующую старению. Для названных целей носитель должен представлять собой дерматологически приемлемый носитель.

Особенно подходящим экстрактом является водный экстракт стеблей пачули. Таким образом, в одном из предпочтительных воплощений настоящего изобретения первый активный косметический ингредиент включает водный экстракт стеблей пачули.

Другим особенно подходящим экстрактом является спиртовой экстракт стеблей пачули. Таким образом, в одном из предпочтительных воплощений настоящего изобретения первый активный косметический ингредиент включает спиртовой экстракт стеблей пачули. Особенно предпочтительным растворителем является этанол.

В одном из особенно предпочтительных воплощений стебли пачули в частности, отработанные стебли пачули экстрагируют водно-спиртовой смесью. Особенно подходящими являются смеси этанола и воды.

Водный экстракт может быть получен экстракцией стеблей пачули чистой водой. Необязательно, вода может содержать добавки, например, для регулирования рН.

Неожиданно было обнаружено, что экстракция даже отработанных стеблей пачули позволяет получать активный косметический ингредиент, оказывающий полезное действие, рассмотренное выше. Таким образом, в одном из конкретных воплощений настоящего изобретения первый активный косметический ингредиент включает экстракт отработанных стеблей пачули.

В настоящем описании термин "отработанные стебли пачули " означает стебли пачули, которые уже были обработаны перегонкой с водяным паром. Таким образом, он относится к остаткам корней после удаления из них эфирного масла.

Одно из конкретных воплощений изобретения относится к водному и/или спиртовому экстракту отработанных стеблей пачули. Это позволяет придавать дополнительную ценность "отходам".

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения активного косметического ингредиента, где способ включает экстракцию стеблей пачули.

Под экстракцией подразумевают обработку стеблей пачули растворителем или смесью растворителей. Растворитель(ли) также может содержать добавки. Например, стебли пачули могут быть подвергнуты экстракции водой, кислотной экстракции, ферментативной экстракции, экстракции водой с применением ультразвука, экстракции водой под давлением или экстракции этанолом.

Перед экстракцией стебли пачули предпочтительно измельчают, в частности, нарезают и/или размалывают.

Перед экстракцией стебли пачули также могут быть промыты. Было обнаружено, что промывка стеблей, в частности, водой, приводит к осветлению окраски экстракта.

Стебли пачули предпочтительно экстрагируют водой, этанолом или их смесями.

Было обнаружено, что наилучшие результаты достигаются при экстракции 70% этанолом в воде, необязательно содержащей одну или более добавок.

Подходящие добавки включают, без ограничений, кислоты, основания, буферы, соли и/или сорастворители. В частности, рН растворителя экстракции может быть изменен добавлением кислоты (например, H₂SO₄ или лимонной кислоты) или основания (например, NaOH).

Экстракция может быть выполнена при комнатной температуре или при повышенной температуре, например, при температуре приблизительно 40°С, приблизительно 60°С или приблизительно 80°С.

Экстракт стебля пачули может быть очищен, например, фильтрованием (например, на фильтрах KDS15), обработкой углем и/или стерилизующим фильтрованием.

Экстракт стебля пачули также может быть сконцентрирован. Перед концентрированием для повышения растворимости экстракта во время концентрирования в экстракт может быть добавлен растворитель, например, 1,3-пропандиол.

В одном из конкретных воплощений способ согласно настоящему изобретению включает следующие этапы: (i) предоставление отработанных стеблей пачули; и (ii) экстракцию отработанных стеблей пачули.

Таким образом, в заключение следует упомянуть, что композиция согласно настоящему изобретению обеспечивает стимуляцию выработки кожного сала, стимуляцию антиокислительной способности и сильное ингибирование заживления ран посредством контроля миграции кератиноцитов.

Таким образом, композиция согласно настоящему изобретению может быть включена в композиции для ухода за кожей, для ухода за кожей волосяного покрова головы и/или для ухода за телом, в частности, в сыворотки для ухода за сухой кожей, сыворотки, препятствующие старению, препятствующие старению ночные и дневные кремы, продукты, препятствующие сухости кожи и образованию перхоти, лосьоны, препятствующие сухости кожи волосяного покрова головы, или лосьоны для ухода за телом.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению экстракта из стеблей пачули для ухода за кожей. Это позволяет использовать полезный эффект экстракта стебля пачули, рассмотренный выше.

В одном из конкретных воплощений применяют водный экстракт и/или экстракт из отработанных стеблей пачули.

В особенно предпочтительном варианте экстракт стебля пачули используют в препятствующем старению продукте, в продукте, препятствующем образованию перхоти, или в продукте для ухода за сухой кожей и/или за сухой кожей волосяного покрова головы.

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу стимуляции

выработки кожного сала, стимуляции антиокислительной способности и/или ингибирования заживления ран посредством нанесения косметической композиции согласно настоящему изобретению на кожу человека.

Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется приведенными ниже неограничивающими примерами.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Получение экстракта стебля пачули

Подвергнутые гидродистилляции и затем высушенные стебли пачули размалывали, получая порошок. 25 г порошка экстрагировали при комнатной температуре в 500 г этанола (70% в воде) в течение 30 минут при перемешивании. Экстракт (приблизительно 420 г) фильтровали через фильтр Eaton KDS15 (123 см²). Фильтрат концентрировали в 5,2 раза испарением в вакууме, получая приблизительно 80 г концентрированного продукта.

Одну партию концентрированного продукта (Партию А) применяли как таковую. Этот необеспеченный продукт имел черный цвет.

Вторую партию концентрированного продукта (Партию В) обесцвечивали на угольных фильтрах (24 см²). Такое обесцвечивание эффективно снижает окрашивание. Количество сухого материала уменьшалось приблизительно в 2 раза.

Наконец, две партии фильтровали через фильтр S60 (24 см²) и установку для стерильного фильтрования из PES (polyethersulfone, что означает "полиэфирсульфон") (VWR), что обеспечивало хранение готовых продуктов без консервантов.

Характеристики двух партий представлены в нижеследующей таблице:

Для сравнения различных растворителей экстракцию также проводили водой, 100% этанолом, 70% этанолом и 50% этанолом. Цвет по шкале Гарднера (Gardner) и содержание сухого вещества определяли в необработанных экстрактах. Результаты представлены ниже:

По существу не наблюдали различий в цвете или даже в содержании сухого вещества (за исключением 100% этанола), но обычно выход сухого вещества был очень низким.

Пример 2

Анализ экстракта стебля пачули

Подвергнутые гидродистилляции и затем высушенные стебли пачули размалывали, получая порошок. 75 г порошка экстрагировали при 20°С в 550 г этанола (70% в воде) в течение 60 минут при перемешивании. Экстракт фильтровали через целлюлозный фильтр с размером отверстий 0,7 мкм, пять раз концентрировали для удаления этанола и, наконец, фильтровали через целлюлозный фильтр с размером отверстий 0,35 мкм. Затем экстракт подвергали лиофилизации.

Фракционирование сырого экстракта способом центробежной распределительной хроматографии (ЦРХ)

Сырой (неочищенный) экстракт (1,078 г) растворяли в 30 мл двухфазной системы растворителей, состоящей из простого метил-трет-бутилового эфира (МТБЭ), ацетонитрила и воды в соотношении 3:3:4 (об./об.). Центробежную распределительную хроматографию (ЦРХ) проводили на устройстве FCPE300® (Rousselet Robatel Kromaton) с колонкой объемом 303 мл, при скорости вращения колонки 1200 об./мин. и скорости течения 20 мл/мин.

Изократическое элюирование подвижной фазы (нижней фазы двухфазной системы растворителей) выполняли в восходящем режиме в течение 75 минут (с повышением начальной скорости течения от 0 до 20 мл/мин в течение 5 минут). Наконец, колонку разгружали, переключая клапан выбора режима в течение 20 минут. Хроматограмму ЦРХ отслеживали при 220 нм. В течение всего эксперимента собирали фракции объемом 20 мл, которые объединяли на основании профилей тонкослойной хроматографии (ТСХ). ТСХ выполняли на планшетах из силикагеля 60 F254 Merck с заранее нанесенным покрытием с помощью системы растворителей для отслеживания миграции, EtOAc/толуол/муравьиная кислота/уксусная кислота (70/30/11/11; об./об.), с визуализацией в УФ свете при 254 нм и 360 нм и обнаружением посредством распыления на высушенные планшеты 50% H₂SO₄ и ванилина с последующим нагреванием. В результате собирали 16 субфракций.

Анализы ЯМР и идентификация основных метаболитов

Аликвоту каждой фракции от F1 до F16 (до ≈ 20 мг) растворяли в 700 мкл ДМСО-d6 (ДМСО - сокр. от "диметилсульфоксид") и исследовали способом ЯМР ¹³С при 298 K на спектрометре Bruker Avance AVIII-600 (Karlsruhe, Germany), снабженном криозондом TXI. Спектры синхронизировали вручную, базовую линию корректировали с помощью программного обеспечения TOPSPIN 3.2 (Bruker) и калибровали на центральном резонансе ДМСО-d6 (δ 39,80 миллионных долей (м.д.)). Абсолютные интенсивности всех сигналов ЯМР ¹³С автоматически регистрировали и группировали по спектрам серии фракций с использованием компьютерного алгоритма местной разработки. Полученную таблицу импортировали в программное обеспечение PermutMatrix, версия 1.9.3 (LIRMM, Montpellier, France) для проведения аналитической иерархической группировки (англ. Hierarchical Clustering Analysis, сокращенно НСА, рус. сокр. АИГ). Полученные кластеры химических сдвигов ¹³С визуализировали в виде древовидных диаграмм на двухмерной карте. Для идентификации метаболита каждый кластер химических сдвигов ¹³С, получаемый способом АИГ, вручную вводили в систему поиска структуры программного обеспечения для обработки базы данных ACD/NMR (программное обеспечение Workbook Suite 2012, ACD/Labs, Ontario, Canada), включающей структуры и предсказанные химические сдвиги низкомолекулярных природных продуктов (n ≈ 2950 в марте 2018 г.). Параллельно выполняли литературный поиск для нахождения наименований и химических структур максимального количества метаболитов, уже обнаруженных для вида Pogostemon cablin (n ≈ 70). Для фракций, содержащих предположительно идентифицированные соединения, выполняли дополнительные эксперименты ЯМР 2D (HSQC (от англ. "Heteronuclear Single Quantum Coherence", рус."гетероядерная спектроскопия с одноквантовым переносом когеренции"), НМВС (от англ. "Heteronuclear Multiband Correlation", рус."гетероядерная многополосная корреляция") и COSY (от англ. "Correlation Spectroscopy", рус."корреляционная спектроскопия")) для подтверждения молекулярных структур, предложенных базой данных по окончании процесса дерепликации.

Были идентифицированы следующие основные метаболиты:

Вербаскозид

Апигенин-7-О-глюкуронид

- Янтарная кислота

- Глюкозил-цитоспорон V (2 изомера)

- Молочная кислота

- Холин

- α-D-фруктоза

- β-D-фруктоза

- α -D-глюкоза

- β -D-глюкоза

- β -D-фруктопираноза

- 7,3'-диметилэридиктиол

- Пахиподол

- Цитоспорон V

- пара-гидроксибензойная кислота

- Протокатеховая кислота

- Сирингарезинол

- Ванилин

- Рамноцитрин

- Лютеолин-7-О-глюкуронид

- Гидроксиметилглутаровая кислота

- 12-гидроксижасмоновая кислота

- производное кофеоила

- апигенин-7-сахара

Состав фракций ЦРХ обозначали следующим образом: Осн. = основная; Сред. = средняя; Незн. = незначительная:

Пример 3

Тестирование биологической активности

Антиокислительное действие (DPPH, англ. diphenyl picryl hydrazyl, рус.2,2-дифенил-1-пикрилгидразил), противодействие воздействию эластазы, гиалуронидазы и тирозиназы анализировали в двух партиях А и В, полученных в Примере 1. Результаты приведены в нижеследующей таблице:

Необесцвеченная Партия А явно проявляла высокую биологическую активность.

Обесцвеченная Партия В проявляла лишь невысокую антиокислительную активность, однако, ее противодействие тирозиназе было близко к значению, полученному для Партии А.

Пример 4

Заживление ран

Кератиноциты здорового человека (КЗЧ) высевали с плотностью 200000 клеток на лунку в 12-луночные культуральные планшеты, имеющие в лунках покрытие из коллагена I типа, в присутствии среды, подходящей для роста кератиноцитов (KGM, Lonza), дополненной факторами роста, такими как гидрокортизон, трансферрин, эпинефрин, экстракт гипофиза быка (ЭГБ), рекомбинантный человеческий эпидермальный фактор роста (rhEGF) и инсулин. После слияния клетки предварительно инкубировали с экстрактом стебля пачули Примера 1 в концентрации 0,5% (об./об.) или с гепарин-связывающим эпидермальным фактором роста (англ. heparin-binding epidermal growth factor, сокр. HB-EGF) в концентрации 1 нг/мл (положительный контроль) в течение ночи в основной питательной среде для кератиноцитов без дополнения. После проведения этой фазы предварительного кондиционирования клеточный монослой, закрепленный на дне лунки, соскребали стерильным конусом Р200 и затем два раза промывали фосфатно-солевым буферным раствором (ФСБР). Затем кератиноциты здорового человека (КЗЧ) вновь стимулировали экстрактом пачули в концентрации 0,5% или HB-EGF в концентрации 1 нг/мл в течение 8 часов в основной питательной среде.

Процесс заживления ран анализировали, записывая изображения, получаемые с помощью оптического микроскопа с обратным изображением (Zeiss), в моменты времени Т₀ и T_8h. После анализа изображений определяли процент заращивания царапин по сравнению с состоянием без обработки.

Было обнаружено, что экстракт стебля пачули значительно ингибирует заживление ран, приблизительно на -50% в анализе КЗЧ с царапанием, в то время как обработка HB-EGF приводит к ускорению приблизительно на +60%. Замедление заживления ран особенно важно для состояний, характеризующихся гиперпролиферацией кератиноцитов, например, чрезмерного ороговения или сухой перхоти.

Пример 5

Антиокислительное действие

КЗЧ высевали на черный планшет со стеклянным дном, имеющий в лунках покрытие из коллагена I типа, с плотностью 20000 клеток на лунку. Клетки инкубировали при 37°С с 5% CO₂ в течение 24 часов. На следующие сутки клетки инкубировали в течение 24 часов с экстрактом стебля пачули Примера 1 в концентрации 0,5% (об./об.) или с резвератролом (положительный контроль) в концентрации 200 мкм. После предварительной инкубации клетки инкубировали с дихлор-дигидро-флуоресцеиновым ("DCFH", от англ. dichloro-dihydro-fluorescein) зондом в концентрации 50 мкМ в течение 30-45 минут. Затем клетки дважды промывали ФСБР и инкубировали только с ФСБР или с ФСБР, содержащим 5 мМ трет-бутилпероксида (ТБП), для создания окислительного стресса. Флуоресцентное считывание выполняли каждые 10 минут в течение 1 часа при возбуждении при 488 нм и испускании при 525 нм.

Было обнаружено, что экстракт стебля пачули приводит к уменьшению выработки реакционноспособных кислородсодержащих частиц (РКЧ) на -28%, то есть оказывает антиокислительное действие.

Пример 6

Регулирование выработки кожного сала

Человеческие себоциты высевали на 96-луночные планшеты (50000 клеток/лунка) и культивировали в течение 24 часов в бессывороточной питательной среде для кератиноцитов (БПС) с дополнением из гентамицина в концентрации 25 мкг/мл. Культуральную среду затем удаляли и заменяли экстрактом стебля пачули Примера 1 в концентрации 1% (об./об.) или веществом сравнения, olumacostat glasaretil, в концентрации 1 мкМ. Клетки предварительно инкубировали в течение 4 часов. Затем добавляли липогенную смесь, содержащую витамин С, витамин D3, инсулин и кальций (без андрогенов), и клетки инкубировали в течение 7 суток. Спустя 3 суток инкубации половину культуральной среды удаляли, и обработку возобновляли (включая стимуляцию липогенной смесью). Параллельно проводили контроль без стимуляции. По окончании инкубации клетки промывали, фиксировали и пермеабилизировали. Затем липидные капли, содержащиеся в клетках, метили с помощью флуоресцентного зонда Bodipy® для липидов, в основном предназначенного для мечения нейтральных липидов. Параллельно окрашивали ядра клеток раствором Hoechst 33258. Изображения получали с помощью анализатора INCell analyzer™ 2200. Регистрировали пять фотографий на лунку (линзы объектива х20). Мечение количественно регистрировали по измеренной интенсивности флуоресценции, нормализованной к общему количеству клеток.

Было обнаружено, что при липогенной стимуляции экстракт стебля пачули стимулирует выработку кожного сала себоцитами на +39%. Стимуляция выработки кожного сала особенно полезна для обработки сухой кожи и для восстановления кожного барьера и проницаемости кожи.

Группа изобретений относится к косметическому применению экстракта стебля пачули. Косметическая композиция включает носитель и по меньшей мере один активный косметический ингредиент, где активный косметический ингредиент включает экстракт из отработанных стеблей пачули, где отработанные стебли пачули были предварительно обработаны перегонкой с водяным паром. Также раскрыты способ получения активного косметического ингредиента, применение экстракта из отработанных стеблей пачули для ухода за кожей, для ухода за кожей волосяного покрова головы или для ухода за телом, способ стимуляции выработки кожного сала, способ стимуляции антиокислительной способности, способ ингибирования заживления ран. Группа изобретений обеспечивает антиокислительное действие и препятствует воздействию эластазы, гиалуронидазы и тирозиназы. 6 н. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл., 6 пр.

1. Косметическая композиция, включающая носитель и по меньшей мере один активный косметический ингредиент, где активный косметический ингредиент включает экстракт из отработанных стеблей пачули, где отработанные стебли пачули были предварительно обработаны перегонкой с водяным паром.

2. Косметическая композиция по п. 1, которая представляет собой композицию для ухода за кожей, композицию для ухода за кожей волосяного покрова головы или композицию для ухода за телом.

3. Косметическая композиция по п. 2, которая представляет собой сыворотку для ухода за сухой кожей, препятствующую старению сыворотку и препятствующий старению ночной или дневной крем, продукт, препятствующий сухости кожи и образованию перхоти, лосьон, препятствующий сухости кожи волосяного покрова головы, или лосьон для ухода за телом.

4. Косметическая композиция по любому из пп. 1-3, в которой активный косметический ингредиент включает водный и/или спиртовой экстракт из отработанных стеблей пачули.

5. Способ получения активного косметического ингредиента, включающий следующие этапы:

(i) предоставление отработанных стеблей пачули и

(ii) экстракцию отработанных стеблей пачули,

где отработанные стебли пачули были предварительно обработаны перегонкой с водяным паром.

6. Способ по п. 5, в котором выполняют экстракцию водой и/или этанолом.

7. Применение экстракта из отработанных стеблей пачули для ухода за кожей, для ухода за кожей волосяного покрова головы или для ухода за телом, где отработанные стебли пачули были предварительно обработаны перегонкой с водяным паром.

8. Применение по п. 7, в котором экстракт из отработанных стеблей пачули представляет собой водный экстракт.

9. Способ стимуляции выработки кожного сала посредством нанесения косметической композиции по любому из пп. 1-4 на кожу человека.

10. Способ стимуляции антиокислительной способности посредством нанесения косметической композиции по любому из пп. 1-4 на кожу человека.

11. Способ ингибирования заживления ран посредством нанесения косметической композиции по любому из пп. 1-4 на кожу человека.