ЭКСТРАКТ ЛЕСПЕДЕЦЫ ГОЛОВЧАТОЙ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ОБЛАСТИ УХОДА ЗА ВОЛОСАМИ Российский патент 2023 года по МПК A61K38/48 A61P17/14 

Область техники

Настоящее изобретение относится к экстракту леспедецы головчатой (Lespedeza capitata Michx.) для применения в косметике и/или дерматологии в области ухода за волосами; более конкретно, в лечении и/или профилактике алопеции и/или себореи волосистой кожи головы.

Предшествующий уровень техники

Lespedeza capitata Michx. - это травянистое многолетнее растение семейства бобовых, происходящее из Северной Америки. Lespedeza capitata Michx. культивируется в Европе и особенно во Франции.

Lespedeza capitata Michx. - это войлочное растение, прямостоячие стебли которого могут достигать высоты 1,5 метра. Его листья являются очередными, сложными и обычно тройчатыми; размеры листовых пластинок составляют примерно 4,5×1,8 см; черешок является коротким (2-5 мм). Листья и стебли покрыты прижатыми волосками, которые придают растению серебряный блеск. Цветки мочковидные, густо сгруппированные в пазушные соцветия. Лепестки белые, за исключением паруса, имеющего оттенок от розового до пурпурного. Чашечка является устойчивой и со временем приобретает коричневый оттенок. Плоды нерастянутые и несут единственное семя. Lespedeza capitata Michx. имеет глубокую корневую систему с главным корнем, который может входить в почву на глубину до 2,5 метров.

Lespedeza capitata Michx. является частью традиционной медицины многих коренных американцев. Омаха и Понка использовали стебли в качестве моксы для лечения ревматизма или невралгии. Команчи использовали листья в виде настоя. Мескваки использовали корень как противоядие от отравления (USDA-NRCS. Plant Guide 05 декабря 2000). В настоящее время Lespedeza capitata Michx. выращивается, в основном, для использования в пищевых добавках, фармацевтических, гомеопатических и ветеринарных препаратах.

Надземные части Lespedeza capitata Michx. были изучены, главным образом, в отношении их свойств в мочевыводящей сфере (в частности, в отношении их мочегонного и антиазотемического действия). Было задокументировано несколько клинических исследований. Большинство из них проводилось в 60-80-е годы, в основном, во Франции. Клинические исследования особенно касаются внутривенного введения экстрактов Lespedeza capitata Michx. пациентам с заболеваниями почек. Снижающее холестерин действие настойки Lespedeza capitata Michx. при пероральном введении было зарегистрировано в клиническом исследовании, проведенном с участием 39 субъектов со стабильной гиперхолестеринемией (Yarnell and Abascal, Alternative and Complementary Therapies. 13(1): 18-23, 2007).

Надземные части Lespedeza capitata Michx. до сих пор используются благодаря их терапевтическим свойствам. Они продаются в форме порошков или экстрактов для приготовления настоек, в качестве диетических добавок, гомеопатических или фармацевтических препаратов (азотемия; мочевая сфера) или ветеринарных препаратов (мочевыделительная сфера).

Одна недавняя публикация показывает, что этанольный экстракт Lespedeza capitata Michx. индуцирует in vitro пролиферацию фибробластов и кератиноцитов, ингибирование коллагеназы и стимуляцию синтеза коллагена фибробластами и обладает липолитическим действием (Pastorino et al. 2017. Industrial Crops and Products. 96: 158-164). В заявке на патент CN 104606122 также утверждается, что Lespedeza capitata в смеси с другими растениями способна сжигать абдоминальный жир, связанный с беременностью.

Сущность изобретения

Неожиданно и с удивлением заявители показали, что экстракт Lespedeza capitata Michx. обладает фармакологической активностью, представляющей интерес в области лечения и/или профилактики заболеваний кожи и волос, особенно для борьбы с выпадением волос и для лечения себореи кожи головы и связанных с ней заболеваний.

Действительно, авторы изобретения показали, что экстракт Lespedeza capitata Michx. подавляет синтез и высвобождение белка Dickkopf-1 (DKK1), клетками дермальных сосочков. Таким образом, Lespedeza capitata Michx. поможет отсрочить и предотвратить выпадение волос, а также продлить жизненный цикл волос.

Кроме того, авторы изобретения показали, что экстракт Lespedeza capitata Michx. подавляет активность 5α-редуктазы в клетках дермальных сосочков. Следовательно, экстракт Lespedeza capitata Michx. будет полезен в области предотвращения выпадения волос, а также при себорее кожи головы и связанных с ней заболеваниях кожи и волос.

Это новое применение Lespedeza capitata Michx. в области ухода за волосами является предметом настоящего изобретения и позволяет предусмотреть применение различных продуктов на основе Lespedeza capitata Michx. для улучшения эстетического внешнего вида волос путем ухода за ними, а также для предотвращения и/или лечения выпадения волос и/или себореи кожи головы и всех сопутствующих заболеваний кожи и волос.

Следовательно, изобретение также относится к экстракту Lespedeza capitata для его применения для лечения и/или профилактики по меньшей мере одного заболевания кожи и волос.

Преимущественно указанное заболевание кожи и волос выбирают из алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинаций.

Заболеванием кожи и волос также могут быть жирные волосы. Подробное описание изобретения

Уход за волосами не только в косметических целях, но и для предотвращения выпадения и восстановления волос всегда интересен исследователям.

Волосяной фолликул - это мини-орган, находящийся в коже до подкожной клетчатки, основная функция которого - производить стержень волоса. Волосяной фолликул - это динамическая структура, производящая волосы. Волосы растут не непрерывно, а в соответствии с циклом роста волос, включающим три фазы:

- Фазу роста (анаген): клетки дермального сосочка (фибробласты) посылают сигнал стволовым клеткам луковицы, который позволяет им размножаться. Эти клетки трансформируются и охватывают дермальный сосочек, образуя серную матрицу волос. Они делятся и дифференцируются в кератиноциты, клетки, отвечающие за структуру волос. Чтобы волосы были правильно структурированы, кератиноцитам необходимы серосодержащие белки, витамин В6 и различные минералы, такие как цинк и магний. Продолжительность этой фазы определяет длину волос и зависит от пролиферации и дифференцировки матричных клеток в основании фолликула.

- Фазу регресса (катаген): матрица умирает и, в результате, дермальный сосочек больше не контактирует с этой матрицей. Между клетками больше нет обмена. Фолликул и дермальный сосочек перемещаются вверх к эпидермису.

- Фазу покоя (телоген): дермальные сосочки и клетки луковицы целы и неактивны. Выпадают волосы. Чтобы новые волосы выросли, цикл должен быть запущен заново.

Волосы постоянно обновляются и из 100000-150000 волосков, составляющих волосы, большинство находятся в фазе роста. Нормальное физиологическое выпадение волос составляет от 60 до 100 волосков в день для здоровых волос. Сверх этого, потеря считается патологической, либо случайной, либо постоянной.

Термин алопеция означает частичное или общее выпадение волос.В алопецию могут быть вовлечены многие факторы, такие как, например, генетические факторы, возраст, пол, болезнь, стресс, гормональные проблемы, побочные эффекты лекарств и травмы. Можно выделить несколько форм алопеции:

- Наследственная андрогенетическая алопеция является наиболее распространенной. Раннее выпадение волос происходит у людей с генетической предрасположенностью, особенно у мужчин. Проявляется уменьшением объема волос или даже облысением и затрагивает 50% мужчин старше 50 лет;

- Постменопаузальная алопеция - самая частая причина облысения у женщин. У женщин выпадение волос более диффузное и распространенное, чем у мужчин. Диффузная алопеция у женщин - это заболевание, которое часто начинается в период менопаузы и затрагивает примерно 40% пожилых женщин старше 70 лет. Термин диффузная показывает, что, в отличие от мужчин, облысение распространяется на все волосы на голове равномерно;

- Острая или реактивная алопеция может быть связана с химиотерапией, стрессом, родами, серьезным дефицитом питания, дефицитом железа и гормональными нарушениями. Это одновременное и диффузное выпадение значительного количества волос;

- Рубцовая алопеция может быть вызвана кожными проблемами (опухоль, ожог, очаговая алопеция), острым облучением, красной волчанкой или паразитами (дерматофития, лишай);

- Очаговая алопеция имеет аутоиммунное происхождение и характеризуется повреждениями в виде пятен разного размера в одном или нескольких местах;

- Врожденная алопеция встречается редко и представляет собой отсутствие корней волос или аномалии (мутаций) волос.

Алопеция, в основном, связана с нарушением обновления волос, что приводит сначала к увеличению частоты цикла ценой качества волос, а затем их количества. Наиболее частым явлением является сокращение цикла роста (фаза анагена) из-за остановки клеточной пролиферации. Следствием этого является преждевременная индукция фазы катагена и большее количество волосяных фолликулов в фазе телогена и, следовательно, большая потеря волос.Поэтому для борьбы с алопецией необходимо перезапустить цикл волос, например, активировав фазу анагена.

В настоящее время известно, что механизмы, ответственные за наследственную андрогенетическую алопецию (также называемую себорейной алопецией), включают, среди прочего, гормональные компоненты со сверхэкспрессией андрогеновых рецепторов (рецепторов тестостерона и ДГТ) и с более интенсивной активностью фермента 5-альфа-редуктазы. Эта гормональная дисрегуляция приводит к чрезмерной выработке дигидротестостерона (ДГТ), активного метаболита тестостерона. В дермальном сосочке этот метаболит будет стимулировать выработку ингибиторов цикла волос, что приводит к сокращению фазы анагена, заставляя волосы слишком быстро переходить в фазу телогена и не давая волосяному фолликулу достаточно времени для выработки качественного кератина и, обязательно после нескольких циклов, к истощению способности волосяного фолликула производить стержень волоса.

Эта алопеция, вызванная избытком андрогенов, также поражает женщин во время менопаузы (постменопаузальная алопеция) или после лечения андрогенами. Он начинается у висков и короны. Это выпадение волос более диффузное и распространенное, чем у мужчин. Выпадение волос равномерно распространяется на всю кожу головы.

Следовательно, ингибитор 5-альфа-редуктазы позволяет лечить и/или предотвращать выпадение волос у мужчин и/или женщин.

Себорея - это чрезмерная выработка кожного сала сальными железами. В целом у людей 2000000 сальных желез, соединенных с 6000000 волосками. Распределение сальных желез является неравномерным. Плотность сальных желез достигает от 300 до 900 сальных желез/см² на лице и волосистой части головы, и эта плотность составляет около 100 сальных желез/см² в верхней части груди и спины. На деятельность сальных желез влияют андрогены. Андрогены активны только под влиянием фермента 5-альфа-редуктазы, который обеспечивает метаболизм андрогенов в сальных железах, что вызывает выработку кожного сала. Гиперактивация фермента 5-альфа-редуктазы вызывает себорею.

Местом проявления себореи является медиальная область лица (лоб, нос, подбородок), где сальные железы являются самыми многочисленными и крупными. Себорея также проявляется на коже черепа, где она преобладает во фронтальной и лобно-височной областях, а также в верхней части черепа.

Себорея кожи головы вызывает эстетические и дерматологические состояния, такие как себорейный дерматит и эритема кожи головы.

Себорейный дерматит кожи головы (СД) характеризуется диффузными розовыми воспалительными пятнами, покрытыми маслянистыми, белыми, твердыми чешуйками, прилипающими к эпидермису, иногда гнойными и иногда вызывающими сильный зуд.

Себорея часто связана с андрогенетической алопецией.

Таким образом, активный ингибитор фермента 5-альфа-редуктазы позволит снизить секрецию кожного сала, лечить себорею и решить дерматологические и/или эстетические проблемы, связанные с себореей.

Цикл роста волос - это строго регулируемый процесс, во время которого различные части волосяного фолликула (кожный сосочек, стволовые клетки, находящиеся в луковице, кератиноциты матрикса волосяного фолликула) вступают в тесные взаимодействия посредством различных молекулярных обменов. Известно, что среди задействованных сигналов сигнал Wnt/β-катенин способствует росту волос (Leiros et al., Br. J. Dermatol. 166 (5) -1035-1042, 2012).

Андрогенная алопеция, которая является наиболее распространенной формой выпадения волос, явно является андрогенным заболеванием. Андрогены нарушают регуляцию факторов, секретируемых дермальным сосочком, что приводит к неспособности дифференцировки стволовых клеток за счет ингибирования канонического сигнального пути Wnt.

Ингибитор цикла роста волос «белок Dickkopf 1 (DKK1)», как известно, блокирует каноническую активацию пути Wnt, опосредованного β-катенином, и способствует прогрессированию фазы катагена (Kwack et al., J. Invest. Dermatol 132 (6): 1554-60, 2012). DKK1 также описан как являющийся регулируемым андрогенами (Kwack et al., J. Invest. Dermatol. 128 (2): 262-9, 2008).

Взятые вместе, эти результаты показывают, что DKK1 играет важную роль в подавлении роста волос, индуцированном андрогенами, и ранней индукции фазы катагена при андрогенетической алопеции (Inui and Itami, J. Dermatol. Sci. 61 (1): 1-6, 2011).

Экстракт согласно изобретению

В настоящем описании растение Lespedeza capitata Michx. можно для краткости обозначить Lespedeza capitata.

В контексте настоящего изобретения экстракт Lespedeza capitata получают из одной или более частей растения Lespedeza capitata, выбранных из корней и надземных частей, таких как стебли, ветви, листья, плоды, семена и/или цветы. Преимущественно это надземные части, выбранные из листьев, стеблей или цветов по отдельности или в смеси.

В конкретном варианте осуществления изобретения экстракт получают из листьев, и/или стеблей, и/или цветов Lespedeza capitata, особенно высушенных.

В конкретном варианте осуществления изобретения экстракт получают из культуры клеток Lespedeza capitata.

Согласно конкретному варианту осуществления экстракт представляет собой водно-спиртовой экстракт, в частности водно-этанольный экстракт. Преимущественно это будет экстракт, полученный в результате водно-спиртовой экстракции, в частности, водно-этанольной.

Согласно предпочтительному варианту осуществления экстракт согласно изобретению может быть получен способом согласно изобретению, описанным ниже.

Растение Lespedeza capitata или его часть могут быть свежими или сушеными, целыми, разрезанными или измельченными, а затем могут подвергаться стадии экстракции.

Способ получения экстракта согласно изобретению будет включать стадию экстракции всего растения Lespedeza capitata или его части гидрофильным или неполярным растворителем, предпочтительно гидрофильным или умеренно полярным водным растворителем.

«Умеренно полярный растворитель» означает в контексте настоящего изобретения растворитель, выбранный из группы, состоящей из С1-С5 спиртов, гликолей (пропиленгликоля, бутиленгликоля, пентиленгликоля), глицерина, ацетона, сложных алкиловых эфиров (таких как, в частности, этилацетат и изопропилацетат), смесей смешивающихся с водой растворителей, таких как водно-спиртовая смесь или смесь ацетон/вода, например, или даже гидротропных растворителей. Группа альтернативных гидротропных растворителей представляет собой амфифильные молекулы, растворимые в воде, которые при достаточной концентрации могут экстрагировать умеренно полярные соединения, такие как описанные при характеристике экстракта.

В контексте настоящего изобретения «сложные алкиловые эфиры» обозначают соединение R₁-COO-R₂, где R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными (С1-С6)алкильными группами. Сложным эфиром может быть, в частности, ацетат, т.е. соединение CH₃COO-R₂.

В контексте настоящего изобретения группа «(С1-С6)алкил» означает линейную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода. Примеры включают метильную, этильную, пропильную, изопропиловую, бутильную, изобутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, пентильную или гексильную группы.

В контексте настоящего изобретения «неполярный растворитель» обозначает растворитель, выбранный из гептана, гексана, лимонена, галогенированных углеводородов (хлороформа, дихлорметана), сверхкритического СО₂ и смеси сверхкритический СО₂+этанол.

Понятно, что выбор неполярного растворителя для экстракции, такого как определено выше, не является предпочтительным.

«Гидрофильный растворитель» означает растворитель, выбранный из группы, состоящей из воды, воды в докритическом состоянии, спиртов, смешиваемых с водой (например этанола), С3-С5 гликолей, глицерина, ацетона и их смесей.

«Водный растворитель» означает растворитель, выбранный из группы, состоящей из одной воды и воды в сочетании с водой в докритическом состоянии, смешиваемых с водой спиртов (например этанола), С3-С5 гликолей, глицерина, ацетона и их смесей.

В контексте настоящего изобретения «сухой экстракт» означает экстракт без экстракционного растворителя или растворителя-носителя, или содержащий только растворитель в виде незначительных следов. Таким образом, такой сухой экстракт содержит только материал, полученный из Lespedeza capitata. Он также может содержать незначительные следы экстракционного растворителя.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения экстракционный растворитель может быть выбран из этилацетата, изопропилацетата, С1-С5 спирта, С3-С5 гликоля, глицерина или воды, или их смеси. Предпочтительно это будет вода или смесь вода/спирт.Преимущественно это будет смесь этанол/вода.

Еще более предпочтительно эта смесь этанол/вода будет характеризоваться соотношением этанол/вода от 9:1 до 7:3 (об./об.).

Еще более предпочтительно умеренно полярный растворитель представляет собой смесь этанол/вода в соотношении 9:1 (об./об.).

Согласно другому конкретному варианту осуществления изобретения экстракцию проводят при перемешивании или статически, при кипячении с обратным холодильником, при температуре окружающей среды или при температуре между температурой окружающей среды и температурой кипения с обратным холодильником. Этому может способствовать ультразвук, микроволны или экструзия при соотношении масса растения/объем растворителя от 1/3 до 1/30 в течение от 1 минуты до 48 часов. Экстракцию можно повторять 2-3 раза.

Согласно другому конкретному варианту осуществления изобретения твердую фазу затем отделяют центрифугированием или фильтрацией, чтобы выделить прозрачную жидкую фазу, свободную от частиц. Фильтрацию можно проводить через бумажный фильтр или фильтрующую пластину с порогом отсечения от 5 до 20 мкм, в частности от 10 до 20 мкм. Подходящие фильтры или фильтрующие пластины можно выбрать из линейки продуктов для глубинной фильтрации Pall® серии K. Такие пластины состоят из сбалансированной смеси целлюлозных волокон, диатомовой земли и перлита, что позволяет создать четко определенную матрицу. Поэтому, например, можно выбрать К пластины серии Pall® от K300 до K900. Жидкая фаза, представляющая экстракт, может быть сконцентрирована в большей или меньшей степени, вплоть до получения сухого экстракта.

В другом варианте осуществления изобретения носитель может быть добавлен на стадии концентрирования для получения экстракта, содержащего от 1 до 75% сухого экстракта. Носителем может быть мальтодекстрин, лактоза, диоксид кремния, глицерин, гликоль или любой другой косметологически приемлемый носитель, который солюбилизирует экстракт, предпочтительно биологического происхождения, такой как, например, гликоли на биологической основе (1,2-пентандиол; 1,3-бутандиол; 1,3-пропандиол и др.), а также гидротропы, такие как, например, алкилгликозиды (Sepiclear, Apyclean, АРХС4 и др.).

Согласно конкретному варианту осуществления изобретения экстракт можно обесцветить, например, активированным углем, чтобы удалить весь хлорофилл или его часть.

Согласно конкретному варианту осуществления изобретения экстракт Lespedeza capitata согласно изобретению характеризуется содержанием всех полифенолов от 2 до 40%, в частности от 5 до 35%, более конкретно - от 10 до 30%, еще более конкретно -приблизительно 25% (% по массе по отношению к массе сухого экстракта), выраженном в граммах эпикатехина на 100 граммов сухого экстракта.

В настоящем изобретении «приблизительно» означает, что рассматриваемое значение может быть на 10% ниже или выше, особенно на 5%, в частности на 1%, чем указанное значение.

Композиция согласно изобретению

Другой аспект изобретения относится к косметической, дерматологической композиции или композиции для кожи и волос, содержащей по меньшей мере один экстракт Lespedeza capitata согласно изобретению с по меньшей мере одним косметически или дерматологически приемлемым эксципиентом, предназначенной для ухода за волосами и/или кожей головы.

В настоящем изобретении «косметически или дерматологически приемлемый» означает нечто полезное при приготовлении косметического, дерматологического состава или состава для кожи и волос, которое, как правило, безопасно, нетоксично и не является нежелательным с биологической или иной точки зрения и которое приемлемо для косметических, дерматологических целей, или для использования для кожи и волос, в частности, путем местного применения для волос и/или кожи головы.

«Местное применение» означает нанесение на кожу, особенно на кожу головы, слизистую оболочку и/или наружные покровы, особенно на волосы и кожу головы.

«Наружный покров» означает волосы на голове и теле, брови, ресницы и/или ногти, предпочтительно волосы на голове.

В конкретном варианте осуществления изобретения композиция по настоящему изобретению отличается тем, что она находится в форме, подходящей для местного применения на коже головы и/или волосах.

В конкретном варианте осуществления изобретения композиции согласно изобретению предназначены для местного применения, особенно путем нанесения композиции на кожу головы и/или волосы и наружные покровы.

Таким образом, композиция согласно изобретению может быть представлена в общеизвестных формах для местного применения, то есть в виде лосьонов, бальзамов, шампуней, муссов, гелей, дисперсий, эмульсий, спреев, сывороток, масок или кремов, с эксципиентами, которые обеспечивают проникновение с целью улучшения свойств и доступности активных ингредиентов.

Преимущественно композиции согласно изобретению могут быть представлены в общеизвестных формах для местного применения на волосах и коже головы, например, в виде шампуня, кондиционера, крема для волос, лосьона для волос, маски или спрея, не требующих смывания. Следовательно, они представляют собой косметические, дерматологические композиции или композиции для кожи и волос.

Таким образом, различают продукты, требующие смывания, и продукты, не требующие смывания.

В конкретном варианте осуществления изобретения композиция согласно изобретению отличается тем, что она присутствует в форме, подходящей для перорального введения. Фактически было показано, что Lespedeza capitata может ингибировать превращающий фермент ренин-ангиотензиновой системы, даже когда он вводится перорально (Yarnell, 2012, IJKD, vol 6, 407-418). Следовательно, этот экстракт не полностью метаболизируется в желудочно-кишечном тракте.

Согласно другому варианту осуществления изобретения композиции согласно изобретению также могут присутствовать в общеизвестных формах для перорального введения, то есть, в частности, в таблетках, капсулах, порошках, гранулах и пероральных растворах или суспензиях. Когда твердая композиция приготовлена в форме таблеток, основной активный ингредиент смешивают с фармацевтическим носителем, таким как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, гуммиарабик или тому подобное. Таблетки можно покрыть сахарозой или другими подходящими материалами или даже обработать так, чтобы они обладали пролонгированной или отсроченной активностью и чтобы они непрерывно высвобождали заданное количество активного ингредиента.

Капсульный препарат получают путем смешивания активного ингредиента с разбавителем и внесения полученной смеси в твердые или мягкие капсулы.

В дополнение к экстракту согласно изобретению эти составы содержат физиологически приемлемую среду, как правило, воду или растворитель на основе, например, спиртов, простых эфиров или гликолей. Они также могут содержать поверхностно-активные вещества, комплексообразователи, консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, загустители, гелеобразователи, увлажнители, смягчающие вещества, микроэлементы, эфирные масла, ароматизаторы, красители, увлажнители или термальные воды и т.д.

В одном варианте осуществления косметические или дерматологические композиции, в частности композиции для кожи и волос, согласно настоящему изобретению будут содержать от 0,0001% до 2 мас %, предпочтительно от 0,001 до 1 мас %, предпочтительно от 0,005% до 0,8 мас %, более предпочтительно от 0,01% до 0,5 мас % экстракта Lespedeza capitata по массе сухого экстракта по отношению к общей массе композиции.

Экстракты Lespedeza capitata, используемые в композициях согласно изобретению, преимущественно имеют содержание сухого экстракта от 1% до 10%, предпочтительно от 1% до 5% по массе по отношению к общей массе экстракта.

В конкретном варианте осуществления экстракт Lespedeza capitata является единственным активным агентом, используемым в композиции, предназначенной для ухода за волосами и/или кожей головы. Активный агент означает лечебное или профилактическое средство для заболеваний кожи и волос, на которые распространяется изобретение.

Экстракт согласно изобретению или косметическая или дерматологическая композиция согласно изобретению также может использоваться в сочетании с лечением алопеции, таким как финастерид или миноксидил, и/или в сочетании с веществами, полезными для хорошей структуры волос, такими как, например, серосодержащие белки, витамин В6 и различные минералы, такие как цинк и/или магний.

Экстракт или композиция согласно изобретению также могут быть объединены по меньшей мере с одним антибактериальным агентом, противогрибковым агентом, противовоспалительным средством и их смесями.

Экстракт согласно изобретению или косметическая или дерматологическая композиция согласно изобретению могут быть использованы индивидуумом, у которого был микротрансплантат.

Предпочтительно композиция согласно изобретению имеет легкую текстуру, также обеспечивающую оптимальное проникновение, не делая волосы или кожу головы жирными. С первых же нанесений волосы вернут силу и жизненный тонус.

Следовательно, изобретение также относится к дерматологической композиции согласно изобретению для ее применения для лечения и/или профилактики по меньшей мере одного заболевания кожи и волос.

Композиция в соответствии с изобретением для ее применения для лечения и/или профилактики по меньшей мере одного заболевания кожи и волос отличается тем, что по меньшей мере одно заболевание кожи и волос выбрано из алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинации.

Композиция согласно изобретению для лечения и/или профилактики по меньшей мере одного заболевания кожи и волос отличается тем, что алопецию выбирают из группы, состоящей из андрогенетической алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции и аэратной алопеции.

Другой аспект настоящего изобретения касается дерматологической композиции, содержащей экстракт Lespedeza capitata согласно изобретению, для ее применения для профилактики и/или лечения алопеции.

В конкретном варианте осуществления изобретения алопеция выбрана из группы, состоящей из андрогенной алопеции, постменопаузальной алопеции, реактивной алопеции и аэратной алопеции.

Согласно другому аспекту изобретение относится к косметическому применению экстракта согласно изобретению в соответствии со способом, описанным выше, или косметической или дерматологической композиции согласно изобретению в соответствии со способом, описанным выше, для ухода за волосами и/или кожей головы для ограничения выпадения волос, и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, и/или для снижения жирности волос.

В другом аспекте изобретение относится к способу косметической обработки волос и/или кожи головы для ограничения выпадения волос, и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, и/или для снижения жирности волос, включающему введение экстракта согласно изобретению человеку, нуждающемуся в этом. Это введение может быть пероральным или ввиде местного применения.

Таким образом, изобретение относится к косметическому применению экстракта Lespedeza capitata согласно изобретению для ограничения выпадения волос, и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, и/или для снижения жирности волос.

Альтернативно, изобретение относится к косметическому применению косметической композиции согласно изобретению для ухода за волосами и/или кожей головы для ограничения выпадения волос и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, и/или для снижения жирности волос.

Изобретение также относится к косметическому способу ухода за волосами и/или кожей головы для ограничения выпадения волос и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, включающему введение индивиду, нуждающемуся в этом, эффективного количества экстракта согласно изобретению в соответствии со способом, описанным выше, или косметической или дерматологической композиции согласно изобретению в соответствии со способом, описанным выше.

В другом аспекте изобретение относится к косметическому лечению волос и/или кожи головы для ограничения выпадения волос и/или для усиления роста волос, и/или для увеличения плотности волосяных фолликулов, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или для усиления регенерации фолликулов, и/или для уменьшения себореи кожи головы, и/или для снижения жирности волос, включающему введение косметической композиции согласно изобретению человеку, нуждающемуся в этом. Это введение предпочтительно осуществляют в виде местного применения на волосы и/или кожу головы.

Экстракт или косметическую или дерматологическую композицию согласно изобретению предпочтительно будут применять местно и/или вводить перорально.

Композиция согласно изобретению, такая как описано здесь, отличается тем, что она присутствует в форме, подходящей для местного применения на кожу головы и/или волосы.

Композиция согласно изобретению, такая как описано здесь, отличается тем, что она присутствует в форме, подходящей для перорального введения.

Экстракт согласно изобретению или косметическая или дерматологическая композиция согласно изобретению также помогает остановить выпадение волос, путем удлинения их цикла, так что волосяной покров сохраняется количественно и качественно.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение также относится к способу косметического ухода за волосами, предназначенному для улучшения эстетики волос путем усиления роста волос, и/или для получения большего покрытия волосами, и/или ограничения выпадения волос, отличающемуся тем, что он включает нанесение на волосы и/или кожу головы эффективного количества экстракта Lespedeza согласно изобретению или композиции согласно изобретению, оставляя композицию в контакте с волосами и/или кожей головы, и, необязательно, ополаскивание волос и кожи головы.

В соответствии с другим аспектом настоящее изобретение также относится к способу косметического ухода за волосами, предназначенному для улучшения эстетики волос путем борьбы с жирностью волос и/или восстановления блеска тусклым волосам, отличающемуся тем, что он включает нанесение на волосы и/или кожу головы эффективного количества экстракта Lespedeza согласно изобретению или композиции согласно изобретению, оставляя композицию в контакте с волосами и/или кожей головы, и, необязательно, ополаскивание волос и кожи головы.

Следующие ниже примеры предназначены для иллюстрации изобретения без ограничения его объема. Они приведены в качестве неограничивающего примера.

Примеры

Приготовление экстракта, используемого в изобретении.

Пример 1: Экстракция этанолом 90 путем кипячения с обратным холодильником

2,5 кг высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata экстрагируют при кипячении с обратным холодильником при перемешивании 25 литрами смеси этанол/вода 90:10 (об./об.) в течение 1 часа в реакторе. Затем экстракт фильтруют через K900 и растворитель выпаривают с получением 250 грамм зеленого порошка с массовым выходом 10%. Полученный сухой экстракт содержит 26% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 2: Экстракция этилацетатом путем кипячения с обратным холодильником

100 граммов высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata экстрагируют при кипячении с обратным холодильником при перемешивании 1 литром этилацетата в течение 1 часа в реакторе. Затем экстракт фильтруют через K900 и растворитель выпаривают с получением 2 грамм зеленой пасты с массовым выходом 2%. Полученный сухой экстракт содержит 3% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 3: Экстракция этанолом 30 при температуре окружающей среды

20 кг высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata экстрагируют при температуре окружающей среды при перемешивании 350 литрами смеси этанол/вода 30:70 (об./об.) в течение 12 часов в реакторе. Затем экстракт фильтруют через K900 и растворитель выпаривают с получением 3,4 грамм коричневого порошка с массовым выходом 17%. Полученный сухой экстракт содержит 36% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 4: Экстракция этанолом 90 с использованием ультразвука с последующим обесцвечиванием активированным углем.

26 грамм высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata приводят в контакт с 260 миллилитрами смеси этанол/вода 90:10 (об./об.), затем экстрагируют под действием ультразвука (20 кГц) 3 раза по 1 мин с амплитудой 100%. После фильтрации через К900 экстракт концентрируют и обесцвечивают активированным углем (0,2% мас./об.). После фильтрации растворитель выпаривают с получением 1,5 грамм коричневого порошка с массовым выходом 6%. Полученный сухой экстракт содержит 25% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 5: Экстракция этанолом 90 путем кипячения с обратным холодильником и обесцвечивание активированным углем

280 г высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata экстрагируют путем кипячения с обратным холодильником при перемешивании 2800 миллилитрами смеси этанол/вода 90:10 (об./об.) в течение 1 часа в реакторе. После фильтрации через К900 экстракт концентрируют и обесцвечивают активированным углем (0,2% мас./об.). После фильтрации растворитель выпаривают с получением 25 грамм экстракта в виде коричневого порошка с массовым выходом 9%. Полученный экстракт содержит 25% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 6: Экстракция этанолом 90 путем кипячения с обратным холодильником с последующим обесцвечиванием активированным углем и помещением в носитель

2,5 кг высушенных и измельченных надземных частей Lespedeza capitata экстрагируют путем кипячения с обратным холодильником при перемешивании 25 литрами смеси этанол/вода 90:10 (об./об.) в течение 1 часа в реакторе. После фильтрации через K900 экстракт концентрируют и обесцвечивают активированным углем (0,2% мас./об.). После фильтрации экстракт сушат в 1,2-пентандиоле с получением 46 грамм экстракта в виде темной вязкой жидкости. Полученный экстракт содержит 50% 1,2-пентандиола и 12% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Пример 7: Экстракция этанолом 90 путем кипячения с обратным холодильником

100 г высушенных и измельченных листьев Lespedeza capitata экстрагируют путем кипячения с обратным холодильником при перемешивании 1 литром смеси этанол/вода 90:10 (об./об.) в течение 1 часа в реакторе. Экстракт затем фильтруют через K900, растворитель выпаривают с получением 17 грамм зеленого порошка с массовым выходом 17%. Полученный сухой экстракт содержит 28% полифенолов, выраженных в виде эпикатехина.

Фармакологическое исследование

Пример 8: Ингибирование синтеза и высвобождения DKK1 клетками дермальных сосочков экстрактом надземных частей Lespedeza capitata.

Это исследование направлено на оценку влияния экстракта согласно настоящему изобретению на продукцию и секрецию DKK1 клетками дермальных сосочков волосяного фолликула человека и на оценку дерматологической и косметической ценности этого экстракта как средства предотвращения выпадения волос.Было показано, что DKK1 является ключевым фактором андрогенной алопеции (см. Kwack et al, ВМВ Reports, Volume 43, Issue 10, 2010, p. 688-692).

Эксперименты проводили на клетках дермальных сосочков волосяных фолликулов человека, полученных от трех разных доноров.

Клетки высевают на 96-луночные планшеты и культивируют в течение 24 часов в стандартной культуральной среде. Затем среду заменяют тестовой средой, содержащей тестируемое соединение или без него (контроль). Lespedeza capitata представляет собой экстракт, полученный в соответствии с примером 5 настоящего изобретения, и этот экстракт испытывают при двух концентрациях, 3 мкг/мл и 10 мкг/мл; это сухой экстракт, разбавленный ДМСО. Через двадцать четыре часа супернатанты культур собирают и хранят при -80°С.

Белок DKK1 определяли количественно с помощью Luminex (ссылка на набор: HBNMAG-51K, Millipore) в соответствии с инструкциями производителя.

Необработанные данные анализируют с помощью программного обеспечения Microsoft Excel и Prism. Статистический анализ выполняют путем сравнения между группами с помощью ANOVA с последующим тестом Даннета.

Результаты

В Таблице 1 ниже показана экспрессия DKK1 в присутствии или в отсутствие Lespedeza capitata и ее процент ингибирования.

Клетки дермальных сосочков волосяного фолликула человека естественным образом секретируют DKK1 на уровне приблизительно 150 пг/мл. Когда эти клетки обрабатывают экстрактом Lespedeza capitata, экспрессия этого белка снижается в зависимости от концентрации и значительно при концентрации от 3 мкг/мл. В присутствии экстракта Lespedeza capitata с концентрацией 10 мкг/мл снижение DKK1 достигает 72%.

Таким образом, авторы изобретения продемонстрировали, что экстракт Lespedeza обладает ингибирующей активностью в отношении мишени DKK1.

Следовательно, этот экстракт обладает интересной активностью для использования в качестве средства для профилактики и/или лечения выпадения волос.

Пример 9: Ингибирование синтеза 5α-редуктазы клетками дермальных сосочков экстрактом надземных частей Lespedeza capitata.

Это исследование направлено на оценку влияния экстракта согласно настоящему изобретению на активность 5α-редуктазы в клетках дермальных сосочков для оценки ценности этого экстракта в области предотвращения выпадения волос и/или себореи кожи головы.

Эксперименты проводили на клетках дермальных сосочков волосяных фолликулов человека от двух разных доноров. Клетки высевают (150 ООО клеток на лунку) на 24-луночные планшеты и культивируют в течение 24 часов в стандартной культуральной среде. Затем среду заменяют тестовой средой, содержащей тестируемое соединение или без него (контроль), или продукт сравнения (финастерид в концентрации 10 мкМ), на 24 часа. Экстракт Lespedeza capitata представляет собой экстракт, приготовленный в соответствии с примером 5 настоящего изобретения, и этот экстракт испытывают при двух концентрациях: 30 мкг/мл и 100 мкг/мл; это сухой экстракт, разбавленный ДМСО. Затем клетки обрабатывают в течение 24 часов средой, содержащей тестостерон С¹⁴ и тестируемое соединение или не содержащей его. Затем культуральные супернатанты собирают для анализа метаболизма тестостерона.

Стероидные молекулы супернатанта экстрагируют смесью хлороформ/метанол. Органическую фазу собирают и ДГТ отделяют с помощью тонкослойной хроматографии с использованием системы растворителей, содержащей дихлорметан, этилацетат и метанол. Затем на хроматограмме проводят авторадиографию и оценивают трансформированный тестостерон с помощью денситометрического анализа. Необработанные данные анализируют с помощью программного обеспечения Microsoft Excel. Статистический анализ выполняют путем межгруппового сравнения с повторными измерениями ANOVA с последующим тестом Даннета.

В этом исследовании для представления активности фермента 5α-редуктазы выбирают соотношение ДГТ/тестостерон. Если это соотношение уменьшается при добавлении соединения, это соединение считается ингибитором 5α-редуктазы. Чтобы быть уверенным, что это соединение действительно специфично для этого фермента, важно проверить уменьшение соотношения 5α-андростан-3α,17β-диол/тестостерон и соотношения андростендион/тестостерон, а также увеличение соотношения 4-андростен-3,17-дион/тестостерон.

Результаты

В Таблице 2 ниже показана активность 5α-редуктазы (соотношение ДГТ/тестостерон) после инкубации в течение 24 плюс 24 часов с веществом сравнения (финастеридом) и экстрактом Lespedeza capitata.

Обработка финастеридом клеток дермальных сосочков волосяных фолликулов человека показывает очень сильное снижение превращения тестостерона в ДГТ (уменьшение соотношения ДГТ/тестостерон). Эти результаты были ожидаемыми и позволяют проверить тест.

В присутствии экстракта Lespedeza capitata соотношение ДГТ/тестостерон снижается в зависимости от концентрации; это снижение (которое достигает 60%) является статистически значимым при концентрации Lespedeza capitata 100 мкг/мл. Хотя активность при 30 мкг/мл не была квалифицирована как статистически значимая, она все же является показательной.

Таким образом, авторы изобретения ясно продемонстрировали, что экстракт Lespedeza обладает ингибиторной активностью в отношении 5α-редуктазы.

Таким образом, этот экстракт Lespedeza capitata проявляет интересную активность для его использования в качестве агента для профилактики и/или лечения заболеваний кожи и волос, в частности, выпадения волос и/или себореи кожи головы и связанных с ними заболеваний.

Пример 10: Ингибирование метаболической активности и/или пролиферации клеток дермальных сосочков экстрактом надземных частей Lespedeza capitata.

Дермальный сосочек расположен у основания волосяного фолликула и глубоко закреплен в кожной ткани. Давно известно, что клетки дермального сосочка играют ключевую роль в росте волосяного фолликула. Сильно васкуляризованный дермальный сосочек доставляет питательные вещества к волосам и предоставляет молекулярную информацию, необходимую для пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток, чтобы производить новые волосы в каждом цикле. Исследования показали, что в здоровых волосяных фолликулах человека и в экспериментах на крысах на модели регенерации усов, вызванной повреждением, существует корреляция между размером дермального сосочка (а также с количеством клеток дермального сосочка и размером стержня волоса). Эта корреляция сохраняется в контексте прогрессирующего выпадения волос, при котором размер волосяных фолликулов и стержней волос последовательно уменьшается с циклами роста волос. Более того, увеличение количества клеток дермального сосочка в фолликуле может происходить частично за счет рекрутирования новых клеток в дермальный сосочек, но пролиферация клеток дермального сосочка также может способствовать этому увеличению.

Это исследование направлено на оценку влияния экстракта согласно настоящему изобретению на метаболическую активность и/или пролиферацию клеток дермальных сосочков для определения ценности этого экстракта в области предотвращения выпадения волос.

Эксперименты проводили на клетках дермальных сосочков волосяных фолликулов человека, полученных от трех разных доноров.

Клетки высевают на 96-луночные планшеты и культивируют в течение 24 часов в стандартной культуральной среде. Затем среду заменяют тестовой средой (Follicle Dermal Papilla Cell Basal (HFDPC) Medium, Ref C-26500 от Promocell), содержащей тестируемое соединение или без него (контроль). Группа с такой же средой с добавлением 5% дополненной среды (Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium SupplementPack, Ref C-39620, Promocell) действует как положительный контроль. Экстракт Lespedeza capitata представляет собой экстракт, приготовленный в соответствии с примером 2 настоящего изобретения, и этот экстракт испытывают при двух концентрациях: 3 мкг/мл и 10 мкг/мл; это сухой экстракт, разбавленный ДМСО. Спустя семьдесят два часа супернатанты культур собирают и хранят при -80°С.

Результаты

В Таблице 3 показаны результаты влияния экстракта Lespedeza на метаболическую активность и клеточную пролиферацию.

Обработка клеток дермальных сосочков дополненной средой вызывает значительную активацию пролиферации клеток и/или метаболической активности. Этот результат подтверждает эту модель. 3 мкг/мл экстракта Lespedeza capitata вызывает статистически значимое увеличение пролиферации клеток и/или метаболической активности. Эта активация не достигает значимости при концентрации Lespedeza capitata, составляющей 10 мкг/мл, несомненно, из-за большой вариабельности результатов, но, тем не менее, это, по крайней мере, указывает на эффект экстракта.

Таким образом, изобретатели ясно продемонстрировали, что экстракт Lespedeza обладает стимулирующей активностью в отношении пролиферации клеток и/или метаболической активности. Таким образом, этот экстракт Lespedeza capitata обладает интересным действием, поскольку способствует росту волос, укрепляя и стимулируя жизненный цикл волос, а также способствуя регенерации волос.

Пример 11: Исследование влияния надземных частей Lespedeza capitata на ингибирование JAK1, JAK2 и JAK3 человека.

JAK-STAT - это сигнальный путь трансдукции, регулирующий рост, выживание, дифференциацию и устойчивость к патогенам. Этот путь опосредует действие цитокинов, интерферонов и факторов роста. У млекопитающих семейство JAK состоит из четырех членов: JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. В исследовании, проведенном на волосяных фолликулах мышей, было показано, что путь JAK-STAT динамически регулируется в цикле волос; путь JAK-STAT активируется во время фаз катагена и телогена и подавляется в начале фазы анагена. Более того, на мышах было продемонстрировано, что местная обработка в фазе телогена ингибиторами пути JAK-STAT, включая тофацитиниб (JAK1/3>JAK2>TYK2) и руксолитиниб (JAK1/2>TYK2>JAK3), приводило к быстрому возвращению в начало фазы анагена (Harel et al., 2015 Sci. Adv.1, e1500973). В этом же исследовании также показано, что ингибирование JAK-STAT в волосяных фолликулах человека увеличивает рост волос ex vivo. Эти данные предполагают, что сигнальный путь JAK-STAT может быть новой мишенью для стимуляции роста волос.

Цель этого примера - оценить, может ли экстракт согласно настоящему изобретению ингибировать сигнальный путь JAK-STAT. Это ингибирование оценивают на человеческих рекомбинантных белках JAK1, JAK2 или JAK3.

Методы

Экстракт Lespedeza capitata представляет собой экстракт, полученный в соответствии с примером 5 настоящего изобретения. Этот экстракт разводят ДМСО и испытывают при различных концентрациях (0,1-1000 мкг/мл). В этом тесте также оценивают положительные контроли (тофацитиниб и руксолитиниб).

Тестируемые продукты инкубируют с человеческим рекомбинантным белком JAK1, JAK2 или JAK 3 с реакционным буфером (Tris/HCl для JAK1, MOPS (3-морфолино-1-пропансульфоновая кислота) для JAK2 и JAK3), ЭДТА и определенными пептидными субстратами. Затем инициируют реакцию фосфорилирования добавлением смеси ацетата магния и радиоактивно меченного АТФ (45 мкМ для JAK1 и JAK2 и 10 мкМ для JAK3). После инкубации в течение 40 минут при температуре окружающей среды реакцию останавливают добавлением фосфорной кислоты. Выполняют четыре промывки фосфорной кислотой и одну промывку метанолом для элюирования небольших молекул, включая меченый АТФ. Наконец, измеряют радиоактивность определенного фосфорилированного субстрата. Соединения тестируют в трех отдельных экспериментах, и для каждого эксперимента проводят дублирование.

Значения IC₅₀ в мкг/мл для каждого рекомбинантного белка JAK1, JAK2 и JAK3 в отношении тестируемых продуктов представлены ниже в Таблице 4:

Результаты, полученные с соединениями сравнения (руксолитинибом и тофацитинибом), соответствуют ожидаемым. Действительно, эти два соединения сильно ингибируют активность JAK-STAT (максимальное ингибирование от 97% до 100% при очень низких значениях IC₅₀, около нанограмма на миллилитр). Руксолитиниб проявляет большее сродство к JAK1 или JAK2, чем к JAK3. Тофацитиниб проявляет большее сродство к JAK1 или JAK3, чем к JAK2. Эти ожидаемые результаты подтверждают этот тест.

Экстракт надземной части Lespedeza capitata демонстрирует сильное ингибирование JAK1 (100% максимальное ингибирование) со значением IC₅₀ 24,8 мкг/мл, сильное ингибирование JAK2 (100% максимальное ингибирование) с несколько более высоким значением IC₅₀ 146,5 мкг/мл, а также сильное ингибирование JAK3 (100% максимальное ингибирование) со значением IC₅₀ 3,9 мкг/мл.

Этот тест демонстрирует, что экстракт Lespedeza capitata индуцирует ингибирование активности тирозинкиназы (с большим сродством к JAK3), проявляя интересующую фармакологическую активность по стимулированию роста волос.

Пример 12: Подтверждение ингибиторной активности экстракта надземной части Lespedeza capitata в отношении пути JAK-STAT на клеточном уровне

Цель этого примера - подтвердить ингибиторную активность экстракта Lespedeza capitata в отношении сигнального пути JAK-STAT на клеточной модели, фолликулярных кератиноцитах внешней эпителиальной оболочки волосяного фолликула (модель внешней корневой оболочки (ORS)). В этой модели для активации пути JAK1/2-STAT3 используется интерлейкин IL-6 путем активации рецепторов IL-6 и GP130, которые оба экспрессируются в эпителиальной оболочке волосяного фолликула. IL-6 - это цитокин, который действует как ингибитор цикла роста волос. Его сверхэкспрессия на модели трансгенных мышей приводит к задержке роста волос. Более того, при андрогенетической алопеции IL-6 будет сверхэкспрессироваться в клетках дермальных сосочков под влиянием андрогенов (Kwack et al., 2012, J Invest Dermatology 132 (1): 43-9). Также сообщалось, что IL-6 задерживает рост волосяных фолликулов у людей.

Метод

Это исследование проводят на кератиноцитах фолликулов внешней эпителиальной оболочки волосяного фолликула (модель внешней корневой оболочки (ORS)). Кератиноциты культивируют в 96-луночных планшетах в соответствующей среде (CnT-PR от CellNTech). Через двадцать четыре часа клетки промывают щелочным фосфатным буфером (PBS) и среду заменяют на CnT-PR-Η (стандартная поддерживающая среда для первичных кератиноцитов человека). Через 48 часов клетки обрабатывают в течение 1 часа исследуемым веществом (экстракт Lespedeza capitata в концентрации 30 и 100 мкг/мл, разбавленный в ДМСО) и соединениями сравнения (руксолитинибом и тофацитинибом в концентрации 5 мкМ, оба разбавленные в ДМСО). Тестируемый экстракт Lespedeza capitata представляет собой экстракт, приготовленный в соответствии с примером 5 настоящего изобретения. Затем проводят стимуляцию IL-6 в концентрации 100 нг/мл в течение 15 минут.

Все условия проверены на клетках от η равному 3 разных доноров. Экстракты Lespedeza capitata испытывают в n равному 3 различных экспериментах, контрольные условия, стимуляцию и с соединениями сравнения проводят в n равному 6 экспериментах. Для каждого эксперимента данные получают в трех экземплярах.

Активность JAK определяют путем оценки степени фосфорилирования белка STAT3. Статистический анализ выполняют путем параметрического теста после проверки нормальности и эквивалентности дисперсии, в противном случае выбирают непараметрический тест. Результаты

Результаты приведены ниже в Таблице 5.

Обработка кератиноцитов с помощью IL-6 вызывает значительное увеличение степени фосфорилирования STAT3. Это увеличение достигает 16% и является статистически значимым (р менее 0,05). Соединения сравнения (руксолитиниб и тофацитиниб, испытанные в дозе 5 мкМ) значительно снижают степень фосфорилирования STAT3, соответственно, на 85% и 104%, p менее 0,05 для руксолитиниба и p менее 0,01 для тофацитиниба. Эти ожидаемые результаты подтверждают этот тест.

Экстракт Lespedeza capitata в обеих протестированных концентрациях достоверно (р менее 0,01 для обеих концентраций) и очень заметно ингибировал степень фосфорилирования STAT3, индуцированного стимуляцией IL-6.

Таким образом, авторы изобретения демонстрируют ценность экстракта надземных частей Lespedeza capitata для стимуляции возобновления роста волос.

Группа изобретений относится к уходу за волосами. Раскрыто применение экстракта Lespedeza capitata, полученного после экстракции водно-спиртовой смесью или сложными алкиловыми эфирами, для лечения или профилактики алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинаций. Также раскрыты применение экстракта Lespedeza capitata и дерматологической композиции для лечения или профилактики андрогенной алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции и аэратной алопеции, применение косметической композиции для ухода за волосами и/или кожей головы, применение дерматологической композиции для лечения или профилактики алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинаций. Группа изобретений обеспечивает лечение и профилактику алопеции и/или себореи волосистой кожи головы. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 табл., 12 пр.

1. Применение экстракта Lespedeza capitata, полученного после экстракции водно-спиртовой смесью или сложными алкиловыми эфирами, для лечения или профилактики алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинаций.

2. Применение по п. 1, где экстракт Lespedeza capitata получают из одной или более частей растения Lespedeza capitata, выбранных из корней и надземных частей, таких как стебли, ветви, листья, плоды, семена и/или цветы.

3. Применение по п. 1, где экстракт Lespedeza capitata получают после экстракции смесью этанол/вода.

4. Применение по любому из пп. 1-3, где экстракт Lespedeza capitata содержит от 2 до 40 мас.% от общего количества полифенолов по отношению к массе сухого экстракта.

5. Применение экстракта Lespedeza capitata, полученного после экстракции водно-спиртовой смесью или сложными алкиловыми эфирами, для лечения или профилактики андрогенной алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции и аэратной алопеции.

6. Применение косметической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента эффективное количество экстракта Lespedeza capitata, как определено в любом из пп. 1-4, с по меньшей мере одним косметически приемлемым эксципиентом, для ухода за волосами и/или кожей головы.

7. Применение по п. 6, где указанная композиция содержит от 0,0001 до 2 мас.%, предпочтительно от 0,001 до 1 мас.% экстракта Lespedeza capitata, по массе сухого экстракта по отношению к общей массе композиции.

8. Применение по п. 6 или 7, где указанная композиция находится в форме, подходящей для местного применения на кожу головы и/или волосы.

9. Применение по любому из пп. 6-8, где указанная композиция находится в форме, подходящей для перорального введения.

10. Применение дерматологической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента эффективное количество экстракта Lespedeza capitata, как определено в любом из пп. 1-4, с по меньшей мере одним дерматологически приемлемым эксципиентом, для лечения или профилактики алопеции, себорейного дерматита кожи головы, эритемы кожи головы, себореи кожи головы и их комбинаций.

11. Применение дерматологической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента эффективное количество экстракта Lespedeza capitata, как определено в любом из пп. 1-4, с по меньшей мере одним дерматологически приемлемым эксципиентом, для лечения или профилактики андрогенной алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции и аэратной алопеции.