ЭКСТРАКТ СЕМЯНОК SILYBUM MARIANUM (L.) GAERTN. ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА ВОЛОС Российский патент 2025 года по МПК A61K36/28 A61K31/352 A61K8/49 A61K8/9789 A61P17/14 A61Q7/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к экстракту семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. (расторопши пятнистой), а также к композициям, содержащим этот экстракт, для применения в области косметики и дерматологии для стимуляции роста волос.

Предшествующий уровень техники

Уход за волосами, не только в косметических целях, но и для предотвращения их выпадения и для восстановления, всегда вдохновлял дух исследований. Многие теории пытались прояснить этиологию выпадения волос в случаях облысения, алопеции, залысин и т.д., объясняя это повышенным напряжением тканей в черепной сфере, снижением кровоснабжения или некоторыми эндокринными или нервными расстройствами.

Волосяной фолликул представляет собой мини-орган, закрепленный в коже вплоть до гиподермы, основная роль которого заключается в образовании стержня волоса. Распределение волосяных фолликулов формируется в процессе внутриутробного развития, а их количество определяется генетически. Волосяной фолликул представляет собой динамическую структуру, которая продуцирует волосы в ходе цикла роста и ремоделирования ткани. Этот цикл можно разбить на три фазы:

- Фаза роста (анаген), клетки дермального сосочка (фибробласты) посылают сигнал стволовым клеткам луковицы, что обеспечивает их пролиферацию. Клетки трансформируются и покрывают дермальный сосочек, образуя серную матрицу волос. Они делятся и дифференцируются в фолликулярные кератиноциты, клетки, отвечающие за структуру волос. Чтобы волосы были хорошо структурированы, этим кератиноцитам необходимы серосодержащие белки, витамин В6 и различные минералы, такие как цинк и магний. Продолжительность этой фазы определяет длину волоса и зависит от пролиферации и дифференцировки матричных клеток в основании фолликула.

- Фаза регресса (катаген): матрица умирает и, в результате, дермальный сосочек больше не контактирует с этой матрицей. Между клетками больше нет обмена. Фолликул и дермальный сосочек перемещаются вверх к эпидермису.

- Фаза покоя (телоген): клетки дермального сосочка и луковицы целы и неактивны. Волосы выпадают. Чтобы новые волосы выросли, цикл должен быть запущен заново.

Таким образом, волосы постоянно обновляются и из 100000-150000 волосков, составляющих волосы, большинство находятся в фазе роста. Нормальное физиологическое выпадение волос составляет от 60 до 100 волосков в день для здоровых волос. Сверх этого потеря считается патологической, либо случайной, либо постоянной.

Термин алопеция означает частичное или общее выпадение волос на голове. Эффлувиум - это чрезмерное выпадение волос.

В алопецию могут быть вовлечены многие факторы, такие как, например, генетические факторы, возраст, пол, болезнь, стресс, гормональные проблемы, побочные эффекты лекарств и травмы. Можно выделить несколько форм алопеции:

- Наследственная андрогенетическая алопеция, она является наиболее распространенной; раннее выпадение волос происходит у людей с генетической предрасположенностью, особенно у мужчин. Она проявляется уменьшением объема волос, даже облысением, и затрагивает 50% мужчин старше 50 лет;

- Постменопаузальная алопеция является наиболее частой причиной облысения у женщин. У женщин выпадение волос является более диффузным и распространенным, чем у мужчин. Диффузная алопеция у женщин - это заболевание, которое часто начинается в период менопаузы и затрагивает примерно 40% пожилых женщин старше 70 лет. Термин диффузная показывает, что, в отличие от мужчин, облысение распространяется на все волосы на голове равномерно;

- Острая или реактивная алопеция, она может быть связана с лечением лекарствами (включая лечение рака), стрессом, родами, серьезным дефицитом питания, дефицитом железа и гормональными нарушениями, это одновременное и диффузное выпадение значительного количества волос;

- Рубцовая алопеция, она может быть вызвана кожными проблемами (опухоль, ожог, очаговая алопеция), острым облучением, красной волчанкой или паразитами (дерматофития, лишай);

- Очаговая алопеция, по видимому, имеет аутоиммунное происхождение и характеризуется повреждениями в виде пятен разного размера в одном или нескольких местах;

- Врожденная алопеция встречается редко и представляет собой отсутствие корней волос или аномалии (мутации) волос.

Термин алопеция также охватывает целое семейство повреждений волосяных фолликулов, конечными последствиями которых являются необратимая, частичная или общая потеря волос.

Мы можем различать диффузное выпадение волос и локальное выпадение волос.

Диффузное выпадение волос: обычная алопеция, телогеновая алопеция, анагеновая алопеция, залысины. Среди диффузного выпадения волос наиболее распространены обычная алопеция (мужская и женская андрогенетическая алопеция) и телогеновая алопеция (после высокой температуры, беременности, приема лекарств или строгой диеты).

Локальное выпадение волос: андрогенетическая алопеция, залысины, рубцовая алопеция, опухоли. Локализованное выпадение волос наблюдается в связи с мужской андрогенетической алопецией (виски, макушка), залысинами, алопецией, индуцированной тракцией (трихотилломания, стягивание и выпрямление) или рубцовой алопецией (центральной центробежной рубцовой алопецией, постменопаузальной лобной фиброзирующей алопецией). Можно также привести воспалительную рубцовую алопецию, в частности фолликулит, который включает расслаивающий фолликулит и декальвирующий фолликулит.Опухоли и новообразования кожи также сопровождаются локальным выпадением волос (гамартома сальных желез, базально-клеточная карцинома, плоскоклеточная карцинома).

Алопеция, в основном, связана с нарушением обновления волос, что сначала приводит к ускорению частоты циклов за счет качества волос, а затем их количества. Наиболее частым явлением является сокращение продолжительности фазы роста (фазы анагена), связанное с остановкой пролиферации клеток. Результатом является преждевременная индукция фазы катагена и большее количество волосяных фолликулов в фазе телогена и, следовательно, большая потеря волос. Поэтому для борьбы с алопецией необходимо перезапустить цикл роста волос, например, активировав фазу анагена.

На сегодняшний день предложены различные продукты для борьбы с алопецией и, в частности, для индукции или стимуляции роста волос. Большинство из них сочетают в себе несколько активных ингредиентов, которые могут оказывать благотворное влияние на биологические параметры, связанные с выпадением волос. Среди наиболее часто встречающихся активных ингредиентов можно привести в качестве примера: витамины, такие как витамины А, Е, В5, В6, С, Н и РР; микроэлементы, такие как цинк, медь, магний, кремний; производные белков, такие как пептиды, серосодержащие аминокислоты (метионин, цистин, цистеин или их производные); эфирные масла или экстракты растительного происхождения липофильной или гидрофильной природы, перечень которых не является исчерпывающим; противогрибковые агенты, такие как пироктоноламин, ундециленовые производные, циклоприроксоламин; синтетические химические молекулы, известные своим специфическим действием на рецепторы андрогенов или на активность 5-альфа-редуктаз. В настоящее время стандартом лечения андрогенетической алопеции является миноксидил или 2,4-диамино-6-пиперидинопиримидин-3-оксид. Несмотря на выдвижение многих теорий о механизме его действия, он не совсем ясен. Кроме того, его эффективность остается ограниченной, поскольку даже при стабилизации выпадения волос во многих клинических случаях мы наблюдаем возобновление процесса алопеции, как только прекращается лечение. Его ограниченное ежедневное использование, вероятно, является причиной нежелательных побочных эффектов, наблюдаемых у пациентов, использующих его в течение длительного времени, таких как локальные кожные реакции или системные эффекты. Кроме того, для восстановления роста волос предложены композиции, содержащие очень разнообразные активные агенты, причем эти активные агенты, возможно, являются производными 2,4-диаминопиримидин-3-оксида, такими как описанные в заявке на патент ЕР 0522964. Клинические исследования показали, что аналоги PGF2α обладают свойством индуцировать рост волос и ресниц у людей и животных (Johnstone, Am J Opht, 124 (4), 544-547, 1997). Испытания на коже головы человека показали, что аналог простагландина Е2, випростол, обладает свойством увеличивать густоту волос. В заявке WO 98/33497 описаны фармацевтические композиции, содержащие простагландины или производные простагландинов, предназначенные для стимуляции роста волос.

Таким образом, несмотря на множество доступных в настоящее время вариантов, потребители по-прежнему нуждаются в новых продуктах для стимулирования роста волос, которые являются естественными и экологически безопасными, но при этом столь же эффективными, как активные химические вещества.

Недавние достижения в понимании биологии цикла роста волос связаны со стволовыми клетками раннего и позднего типов (Mesler et al. Cell Reports 19, 809-821, 2017). Кроме того, эти ранние стволовые клетки имеют в качестве потомков клетки, которые продуцируют определенные кератины, обладающие важными функциональными свойствами для предотвращения выпадения волос. Среди этих кератинов первым вырабатывается К75, а его генетический дефицит у человека приводит к патологическому выпадению волос. Этот белок характерен для клеток, образующих сопутствующий слой внутренней оболочки корня волосяного фолликула (Gu and Coulombe J Invest Dermatol, 2007, 127 (5): 1061-73). В исследовании, описанном Sperling et al. (J Cutan Pathol 2010, 37: 243-248) показано, что экспрессия K75 сильно снижается в процессе ранней десквамации внутренней оболочки корня волосяного фолликула. Поскольку эта десквамация является гистологическим маркером алопеции, установлено, что этот белок К75, несомненно, играет ключевую роль в механизмах алопеции.

Научное название Silybum marianum (L.) Gaertn. означает растение, принадлежащее к семейству сложноцветных, однолетнее или двулетнее, с прочным стеблем, высота которого может достигать более одного метра. Его большие, блестящие, очередные листья без прилистников покрыты белыми крапинками и окаймлены твердыми заостренными шипами. Цветки собраны в верхушечные головки, часто одиночные. Они окружены крупными колючими прицветниками с очень острым концом. Цветки трубчатые, пятилопастные, пурпурно-малинового цвета. Плоды - блестящие семянки, черные или желто-крапчатые, увенчаны гребешком с зубчатыми щетинками в кольце у основания. Народное название этого растения - молочный чертополох.

Семянки (часто в литературе ошибочно именуемые семенами) Silybum marianum (L.) Gaertn. и их препараты традиционно используются перорально, при симптоматическом лечении функциональных расстройств пищеварения, связанных с печеночным происхождением.

Основной активный ингредиент семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. представляет собой силимарин, смесь нескольких флавонолигнанов (главным образом силибина, изосилибина, силихристина и силидианина). Семянки содержат до 3 мас. % силимарина. Они также состоят из масла (20-30 мас. %), слизи и белков.

Силимарин был предметом многочисленных исследований (in vitro, in vivo и клинических), продемонстрировавших его антиоксидантные, гепатопротекторные, пищеварительные и даже противовоспалительные свойства.

В настоящее время экстракты семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. с определенным содержанием силимарина присутствуют в нескольких фармацевтических препаратах, предназначенных для лечения различных заболеваний печени и желчевыводящих путей, таких как Легалон®.

Силибин (основной флавоноид силимарина) также был предметом недавнего исследования роста волос (Cheon et al., J Microbiol Biotech 29 (2), 321-329, 2019) посредством передачи сигналов AktWnt/β-катенин.

Масло Silybum marianum (L.) Gaertn., богатое омега-6 и витамином Е, в основном используется в кулинарии. Традиционно его получают из семянок методом холодного отжима. Однако исследования антиоксидантных и гепатопротекторных свойств такого масла расторопши, вводимого перорально, проводились in vivo на крысах или мышах (Zhu et al. Pharmacogn Mag, 10 (Suppl 1) S92-S99, 2014). В заявке WO 2018/002338 описан экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., бедный в отношении силимарина, который обладает интересными свойствами для лечения акне, себореи, розацеа или себорейного дерматита.

Таким образом, до настоящего времени в библиографических данных не упоминается, что экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., бедный в отношении силимарина, может стимулировать рост волос и, следовательно, быть полезным для профилактики и/или лечения алопеции.

Сущность изобретения

Неожиданным и удивительным образом заявители продемонстрировали, что экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., бедный в отношении силимарина, обладает фармакологической активностью, представляющей интерес в области лечения и/или профилактики выпадения волос, особенно путем стимуляции их роста.

Фактически авторы изобретения показали, что экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., бедный в отношении силимарина, вызывает увеличение экспрессии белка кератина 75 в фолликулах. Таким образом, экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., бедный в отношении силимарина, поможет задержать и предотвратить выпадение волос и продлить жизненный цикл волос.

Согласно первому аспекту изобретение относится к экстракту семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащему менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для его применения для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к применению, особенно в косметических или дерматологических целях, экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция, или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к применению экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для приготовления косметической или дерматологической композиции, предназначенной для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к способу, особенно косметическому или дерматологическому, стимулирования роста волос и, в частности, лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит, включающему введение нуждающемуся в этом лицу эффективного количества экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта.

Согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом для его применения для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция, или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к применению дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или предотвращения алопеции, такой как андрогенетическая алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к применению дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для стимуляции роста волос и, в частности, для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция, или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит.

Изобретение также относится к способу, особенно косметическому или дерматологическому, стимулирования роста волос и, в частности, лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция, или даже рубцовая алопеция, особенно фолликулит и предпочтительно расслаивающий фолликулит, включающему введение нуждающемуся в этом лицу эффективного количества дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом.

В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение относится к способу дерматологического лечения участка кожи головы, лишенного волос, включающему местное нанесение на участок кожи головы, лишенный волос, экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, или дерматологической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. %, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически приемлемым эксципиентом, перед или одновременно с трансплантацией волос или медицинским лечением кожи головы, таким как лечение плазмой, богатой тромбоцитами, или капиллярная мезотерапия.

Подробное описание изобретения

Определения

В настоящем описании растение Silybum marianum (L.) Gaertn. может быть сокращенно обозначено термином Silybum marianum.

Под «силимарином» в рамках настоящего изобретения подразумевается очищенный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий в основном (по меньшей мере 95 мас. %) смесь следующих четырех флавонолигнанов: силибина, изосилибина, силикристина и силидианина (Kuki et al., Chromatographia 75: 175-180, 2012). Таким образом, содержание силимарина менее 0,2 мас. % означает, что общее количество компонентов силимарина составляет менее 0,2 мас. %. Такое содержание может быть определено, в частности, с помощью ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии) или УЭЖХ (ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии) путем расчета общей площади пиков, соответствующих всем компонентам силимарина, в частности, с использованием эталонного образца силимарина, который можно получить, например, от Sigma Aldrich, для определения положения этих пиков.

Под «силибином», также называемым в данной области техники силибинином, в рамках настоящего изобретения подразумеваются четыре диастереомера: силибин А, силибин В, 2,3-цис-силибин А и 2,3-цис-силибин В.

Под «изосилибином» в контексте настоящего изобретения подразумеваются два диастереоизомера изосилибин А и изосилибин В.

Под «силикристином» в контексте настоящего изобретения подразумеваются два диастереоизомера силикристин А и силикристин В.

Под «приблизительно» в настоящем описании подразумевается, что рассматриваемое значение может быть меньше или больше на 10%, в частности на 5%, в частности на 2%, более конкретно на 1%, чем указанное значение.

Для целей настоящего изобретения под термином «сухой экстракт» понимают экстракт, не содержащий экстракционного растворителя или носителя или содержащий его только в виде незначительных следов. Таким образом, такой сухой экстракт содержит только материал, полученный из Silybum marianum (L.) Gaertn. Он также может содержать незначительные следы экстракционного растворителя.

Под «органическим растворителем, не смешивающимся с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn.» в рамках настоящего изобретения понимают органический растворитель, который не способен смешиваться или только частично смешивается с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., так что смесь органического растворителя и масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., дает гетерогенную смесь, в которой можно наблюдать по меньшей мере две отдельные фазы.

Под «жирной кислотой» в контексте настоящего изобретения понимают карбоновую кислоту R1-CO₂H, цепь R1 которой представляет собой линейную или разветвленную углеводородную цепь, насыщенную или содержащую двойные связи С=С, при этом карбоновая кислота содержит от 16 до 22 атомов углерода (включая атом углерода функциональной группы карбоновой кислоты).

Под «свободной» жирной кислотой (включая линолевую кислоту) в контексте настоящего изобретения понимают жирную кислоту, не связанную с другими молекулами (например, с глицерином или его производными с образованием глицеридов или со спиртом с образованием жирного эфира).

Под «токоферолом» в контексте настоящего изобретения понимают α-токоферол, β-токоферол, γ-токоферол и δ-токоферол.

Под «спиртом С₁-С₃» в контексте настоящего изобретения понимают спирт R2-OH, в котором цепь R2 представляет собой насыщенную, линейную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 3 атомов углерода. Это может быть метанол, этанол, н-пропанол или изопропанол, в частности, метанол, этанол или изопропанол. Предпочтительно это будет этанол или изопропанол, в частности этанол.

Под «комнатной температурой» в контексте настоящего изобретения понимается температура от 15 до 40°С, предпочтительно от 20 до 30°С, в частности около 25°С.

Под «волосами и волосами на теле» подразумеваются волосы, волосы на теле, брови, ресницы и/или волосяной покров, предпочтительно волосы.

Под «ростом волос» подразумевается рост волос и/или волос на теле, как определено выше, предпочтительно волос.

Под «алопецией» понимают полную или частичную потерю волос и/или волос на теле, например, связанную с уменьшением роста волос и/или ускорением выпадения волос и/или волос на теле. Этот термин включает, но не ограничивается этим, андрогенетическую алопецию, постменопаузальную алопецию, реактивную алопецию, рубцовую алопецию, гнездную алопецию и врожденную алопецию. Предпочтительно это будет андрогенетическая алопеция, постменопаузальная алопеция, реактивная алопеция или очаговая алопеция. Последствиями алопеции являются временное или постоянное и частичное или полное отсутствие волос и/или волос на теле.

Под «лысиной» подразумевается массивное выпадение волос участками, чаще всего на волосистой части головы. У пораженных людей есть пятна без волос, чаще круглой или овальной формы. С другой стороны, кожа головы не поражена и не имеет шрамов.

Под «участком кожи головы, лишенным волос» подразумевается участок кожи головы, независимо от его размера, который не содержит волос или на котором растет недостаточно волос, чтобы покрыть рассматриваемый участок. Это может быть лысина, частичная или полная алопеция.

Под «фолликулитом» понимают воспаление одного или более волосяных фолликулов с образованием па пул о пустулы. Поэтому это может произойти в любом месте, где есть волосы. Он может быть бактериального, грибкового, вирусного или неинфекционного происхождения. Фолликулит может быть поверхностным, остиофолликулитным или глубоким. Существуют различные формы фолликулита, такие как расслаивающий фолликулит или декальвирующий фолликулит. Расслаивающий фолликулит волосистой части головы - хронический и редко встречающийся гнойный дерматоз волосистой части головы. Он проявляется в виде множества болезненных фолликулярных и перифолликулярных воспалительных узелков, пустул и абсцессов, которые соединяются между собой через свищевые ходы, что в конечном итоге приводит к рубцовой алопеции. Декальвирующий фолликулит Кенко также представляет собой воспалительную рубцовую алопецию волосистой части головы, хроническую и редкую, встречающуюся у взрослых людей среднего возраста и характеризующуюся развитием очагов алопеции, которые распространяются медленно и центробежно, в основном, на макушке и в затылочной зоне волосистой части головы с перифолликулярной эритемой, пустулами и геморрагическими струпьями.

Под термином «лечение» алопеции понимают остановку алопеции, уменьшение алопеции и/или облегчение алопеции. Таким образом, «лечение» алопеции включает ограничение выпадения волос и/или волос на теле и/или стимулирование роста волос и/или волос на теле, увеличение плотности волосяных фолликулов и/или регулирование фаз цикла волосяных фолликулов.

Под термином «предотвращение» алопеции понимают снижение риска развития алопеции или замедление прогрессирования алопеции у млекопитающего, предпочтительно у человека, который предрасположен к развитию алопеции.

Под термином «ограничение» понимают замедление, снижение, уменьшение и/или остановку.

Под термином «стимулировать» понимают повышать, активировать, усиливать и/или ускорять.

В настоящем изобретении термин «косметически или дерматологически приемлемый» предназначен для обозначения того, что полезно при приготовлении косметической или дерматологической композиции, которая в целом безопасна, нетоксична и ни биологически, ни иным образом нежелательна, и которая приемлема для косметического или дерматологического применения, в частности, путем местного нанесения на волосы и/или кожу головы.

Под «местным применением» подразумевается нанесение на кожу, в частности, на кожу головы, слизистые оболочки, волосы и/или волосы на теле, в частности, на волосы и/или кожу головы.

Экстракт по изобретению

Экстракт по изобретению представляет собой экстракт семянок Silybum marianum, содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта.

Согласно конкретному варианту осуществления экстракт согласно изобретению содержит по меньшей мере 3 мас. %, предпочтительно по меньшей мере 4 мас. % свободной линолевой кислоты по отношению к массе сухого экстракта. В частности, экстракт согласно изобретению содержит от 3% до 25%, например от 3 до 15 мас. %, особенно от 4% до 10 мас. %, в частности от 4% до 6 мас. %, например около 5 мас. % свободной линолевой кислоты по отношению к массе сухого экстракта. Массовое отношение силимарин/свободная линолевая кислота в экстракте согласно изобретению может, в частности, составлять менее 0,07, например менее 0,05 и особенно менее 0,01.

Экстракт по изобретению может также содержать от 10% до 70%, в частности от 10% до 50%, более конкретно от 10% до 30 мас. %, в частности от 15% до 25 мас. % свободных жирных кислот по отношению к массе сухого экстракта.

Согласно конкретному варианту осуществления экстракт согласно изобретению содержит по меньшей мере 0,01 мас. %, особенно 0,05 мас. % токоферолов по отношению к массе сухого экстракта. В частности, экстракт согласно изобретению содержит от 0,01% до 2 мас. %, более конкретно от 0,01% до 1 мас. %, еще более конкретно от 0,01% до 0,5 мас. %, в частности от 0,05% до 0,2 мас. %, например примерно 0,1 мас. % токоферолов по отношению к массе сухого экстракта. Массовое отношение силимарин/токоферолы в экстракте согласно изобретению может, в частности, быть меньше 1, например меньше 0,1.

Согласно другому конкретному варианту экстракт согласно изобретению содержит от 3% до 25 мас. %, например от 3 до 20 мас. %, в частности от 3% до 15 мас. %, в частности от 4% до 10 мас. %, в частности от 4% до 6 мас. %, например приблизительно 5 мас. % свободной линолевой кислоты по отношению к массе сухого экстракта; и от 0,01% до 2 мас. %, в частности от 0,01% до 1 мас. %, еще более конкретно от 0,01% до 0,5 мас. %, в частности от 0,05% до 0,2 мас. %, например около 0,1 мас. % токоферолов по отношению к массе сухого экстракта. В частности, массовое отношение силимарин/свободная линолевая кислота в экстракте по изобретению может, в частности, составлять менее 0,07, в частности менее 0,01, и массовое отношение силимарин/токоферолы в экстракте по изобретению может, в частности, быть менее 1, в частности менее 0,1.

Предпочтительно экстракт по настоящему изобретению будет сухим экстрактом.

В соответствии с предпочтительным вариантом экстракт согласно изобретению может быть получен способом согласно изобретению, описанным ниже.

Способ получения экстракта по изобретению

Способ получения экстракта по изобретению включает, в частности, стадию экстракции масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., экстракционным растворителем, содержащим, в частности, состоящим из водного гидротропного раствора, субкритической воды или органического растворителя, не смешивающегося с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., необязательно в смеси с водой.

Согласно конкретному варианту экстракционный растворитель содержит, в частности, состоит из органического растворителя, не смешивающегося с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., необязательно в смеси с водой.

Органический растворитель, не смешивающийся с маслом, полученный из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. может, в частности, представлять собой спирт С₁-С₃.

Экстракционный растворитель может, в частности, представлять собой спирт С₁-C₃ необязательно в смеси с водой.

Органический растворитель, не смешивающийся с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., в частности спирт С₁-С₃, такой как метанол, этанол или изопропанол, в частности этанол или изопропанол, предпочтительно этанол, может быть использован в виде смеси с водой, в частности, при объемном соотношении органический растворитель/вода от 70/30 до 100/0, в частности от 80/20 до 100/0, например, примерно 80/20 или 90/10.

Экстракционный растворитель, в частности, может быть выбран из метанола, смеси метанол/вода, этанола, смеси этанол/вода, изопропанола и смеси изопропанол/вода, в частности, из смеси этанол/вода или смеси изопропанол/вода, предпочтительно из смеси этанол/вода.

Согласно конкретному варианту экстракционным растворителем будет метанол, смесь этанол/вода в объемном соотношении приблизительно 80/20 или 90/10 или смесь изопропанол/вода в объемном соотношении приблизительно 90/10.

Стадию экстракции масла из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. будут осуществлять, в частности, путем перемешивания масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., с экстракционным растворителем в течение от 1 до 12 часов и, в частности, при температуре от 15 до 25°С, особенно около 20°С. Количество экстракционного растворителя, используемого для проведения этой экстракции, предпочтительно будет составлять от 0,5 до 3 г, в частности от 1 до 3 г на 1 г масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn.

Затем в конце этой экстракции получают экстракционную фазу и липидную фазу. Экстракционную фазу целесообразно отделять от липидной фазы и извлекать перед сушкой (в частности, путем выпаривания экстракционного растворителя), частично или полностью, в частности, под вакуумом, чтобы более или менее удалить экстракционный растворитель и получить сухой экстракт, если растворитель полностью удален, или концентрированный экстракт, разбавленный остаточным растворителем.

Масло, полученное из семянок Silybum marianum, предпочтительно может быть получено путем экстракции из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. (семянки могут быть целыми или кусочками), в частности, путем прессования, предпочтительно холодного прессования (то есть без нагревания), при комнатной температуре.

Согласно одному варианту осуществления способ согласно изобретению будет включать следующие две последовательные стадии:

(i) экстрагирование масла из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. и

(ii) экстрагирование масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., экстракционным растворителем, содержащим, в частности, состоящим из гидротропного водного раствора, субкритической воды или органического растворителя, не смешивающегося с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., необязательно в смеси с водой.

Согласно предпочтительному варианту осуществления способ согласно изобретению будет включать следующие последовательные стадии:

(i) необязательно экстрагирование масла из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. и

(ii) экстрагирование масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., экстракционным растворителем, содержащим, в частности, состоящим из гидротропного водного раствора, субкритической воды или органического растворителя, не смешивающегося с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., необязательно в смеси с водой.

(iii) отделение экстракционной фазы, полученной на стадии (ii), и

(iv) частичная или полная сушка экстракционной фазы с получением концентрированного или сухого экстракта согласно изобретению.

Стадию (Г) целесообразно осуществлять путем холодного прессования семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., целых или кусочков.

Стадию (ii) предпочтительно осуществлять с использованием экстракционного растворителя, как определено выше, и в частности, выбранного из метанола, смеси метанол/вода, этанола, смеси этанол/вода, изопропанола и смеси изопропанол/вода.

Экстракционный растворитель может, в частности, представлять собой органический растворитель, не смешивающийся с маслом, полученным из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn, в частности спирт C₁-C₃, такой как метанол, этанол или изопропанол, необязательно в виде смеси с водой, в частности, при объемном соотношении органический растворитель/вода от 80/20 до 100/0, в частности от 85/15 до 95/5, в частности примерно 90/10. Предпочтительным экстракционным растворителем является смесь изопропанол/вода в объемном соотношении примерно 90/10.

Стадию экстракции (ii) можно осуществлять путем перемешивания масла, полученного из семянок Silybum marianum, с экстракционным растворителем в течение от 1 до 12 часов и, в частности, при температуре от 15 до 25°С, в частности около 20°С.Количество экстракционного растворителя, используемого для проведения этой экстракции, предпочтительно составляет от 0,5 до 3 г, в частности от 1 до 3 г на 1 г масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn.

Эта стадия экстракции (ii) позволяет получить в конце интересующую экстракционную фазу и липидную фазу.

Стадию (iii) целесообразно проводить путем отделения экстракционной фазы от липидной фазы.

Стадию (iv) целесообразно проводить в вакууме.

Косметические и дерматологические применения

Согласно первому аспекту изобретение относится к экстракту семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащему менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для его применения для стимуляции роста волос.

Изобретение также относится к экстракту семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащему менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, для его применения для лечения или профилактики алопеции, такой как андрогенная алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или аэрированная алопеция, или даже для лечения расслаивающего фолликулита.

Экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, можно использовать в сочетании с трансплантацией волос, в частности, при микротрансплантации фолликулярных единиц. Фолликулярная единица представляет собой группу волос, естественно собранных вместе в коже головы в небольшие пучки, которые могут содержать от одного до четырех волос.Применение экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, идеально уместно, в частности, в сочетании с лазерной трансплантацией волос.

Экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, также можно использовать в сочетании с лечением на основе богатой тромбоцитами плазмы (PRP). Именно этот концентрат тромбоцитов и, следовательно, богатый факторами роста, вводят в кожу головы.

Экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, также можно использовать в сочетании с капиллярной мезотерапией. Это широко используемый метод в медицинской и эстетической областях, который заключается во введении различных поливитаминов в дерму кожи головы для глубокого питания волосяного фолликула, что позволяет лечить волосы одновременно с улучшением кровообращения в коже головы. Как правило, двух месяцев лечения достаточно, чтобы нормализовать выпадение, а иногда и увеличить густоту волос.

Экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, можно использовать перед или одновременно с трансплантацией волос или медицинским лечением кожи головы, таким как лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярная мезотерапия.

Согласно второму аспекту настоящее изобретение относится к дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом для ее применения для стимуляции роста волос.

Изобретение также относится к дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом для ее применения при лечении или профилактике алопеции, такой как андрогенетическая алопеция, реактивная алопеция, постменопаузальная алопеция или очаговая алопеция или даже для лечения расслаивающего фолликулита.

Дерматологическая или косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, может быть использована в сочетании с трансплантацией волос, особенно лазерной трансплантацией волос.

Дерматологическая или косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, также может быть использована в сочетании с лечением на основе богатой тромбоцитами плазмы (PRP).

Дерматологическая или косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, также может быть использована в сочетании с капиллярной мезотерапией.

Таким образом, дерматологическая или косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, может использоваться перед или одновременно с трансплантацией волос или лечением кожи головы, таким как лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярная мезотерапия.

Предпочтительно экстракт, включенный в дерматологическую или косметическую композицию, является таким, как описано выше.

В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение относится к способу дерматологического лечения участка кожи головы, лишенного волос, включающему местное нанесение на участок кожи головы, лишенный волос, экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1% по массе силимарина по отношению к массе сухого экстракта по изобретению, или дерматологической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2%, предпочтительно менее 0,1 мас. % силимарина по отношению в массе сухого экстракта по изобретению, с по меньшей мере одним дерматологически приемлемым эксципиентом перед или одновременно с трансплантацией волос или медицинским лечением кожи головы, таким как лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярная мезотерапия.

Предпочтительно, чтобы это дерматологическое лечение согласно изобретению предшествовало трансплантации волос, особенно лазерной трансплантации.

Согласно конкретному варианту осуществления изобретения способ дерматологического лечения согласно изобретению осуществляют в течение от 1 до 6 недель, предпочтительно от 1 до 4 недель и еще более предпочтительно от 2 до 4 недель до трансплантации волос или медицинского лечения кожи головы, такого как лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярная мезотерапия.

Изобретение предпочтительно направлено на экстракт и косметическую или дерматологическую композицию согласно изобретению, которые представлены в своей собственной форме и подходят для местного нанесения, в частности, на кожу головы и/или волосы.

Таким образом, косметическая или дерматологическая композиция согласно изобретению может быть представлена в формах, обычно известных для местного применения, то есть, в частности, в виде лосьонов, шампуней, бальзамов, пен, гелей, дисперсий, эмульсий, спреев, сывороток, масок или кремов с наполнителями, обеспечивающими, в частности, проникновение, чтобы улучшить свойства и доступность активного начала.

Преимущественно композиция согласно изобретению может быть в формах, обычно известных для местного нанесения на волосы и кожу головы, то есть, в частности, в виде шампуня, кондиционера, крема для волос, лосьона для волос, маски или спрея, в частности, не требующего смывания.

Таким образом, существует различие между составленными продуктами, которые можно смывать, и продуктами, которые не требуют смывания.

Предпочтительно композиция по изобретению имеет легкую текстуру, что дополнительно обеспечивает оптимальное проникновение без засаливания волос и/или волос на теле или кожи головы.

Эти композиции обычно содержат помимо экстракта по настоящему изобретению физиологически приемлемую среду, как правило, на основе воды или растворителя, например спиртов, простых эфиров или гликолей. Они также могут содержать поверхностно-активные вещества, комплексообразователи, консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, загустители, желирующие вещества, влагоудерживающие вещества, смягчающие вещества, микроэлементы, эфирные масла, отдушки, красители, увлажнители и т.д.

Согласно конкретному варианту осуществления композиция по изобретению содержит в качестве косметически или дерматологически приемлемого эксципиента изопропанол, полиэтилен гликоль (ПЭГ) или их смесь. Таким образом, предпочтительно, чтобы композиция по настоящему изобретению содержала, в частности, экстракт по изобретению, изопропанол и ПЭГ. Массовое соотношение изопропанол/ПЭГ предпочтительно будет составлять от 1/2 до 2/1, в частности от 1/1,5 до 1,5/1, в частности, будет составлять около 1/1.

В частности, ПЭГ может иметь среднечисловую молекулярную массу от 200 до 600 г/моль, в частности от 200 до 500 г/моль, в частности от 200 до 400 г/моль, например от 250 до 350 г/моль, в частности около 300 г/моль. В частности, это может быть ПЭГ 300.

В другом конкретном варианте осуществления композиция по изобретению характеризуется тем, что она находится в форме, подходящей для перорального введения.

В этом случае композиция согласно изобретению может быть в формах, которые обычно известны для перорального введения, то есть, в частности, в виде таблеток, капсул, порошков, гранул и пероральных растворов или суспензий. При приготовлении твердой композиции в форме таблеток основной активный ингредиент можно смешивать с косметическим или дерматологическим носителем, таким как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, гуммиарабик, диоксид кремния и т.п. Таблетки могут быть покрыты сахарозой или другими подходящими материалами, или они могут быть обработаны таким образом, чтобы они обладали пролонгированной или замедленной активностью и непрерывно высвобождали заданное количество активного вещества. Капсульную форму можно получить, смешивая активный ингредиент с разбавителем и помещая полученную смесь в мягкие или твердые капсулы.

Преимущественно композиция по настоящему изобретению содержит от 0,01 до 15 мас. %, предпочтительно от 0,1 до 10 мас. % экстракта по изобретению относительно общего объема композиции.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: приготовление экстрактов

Способ согласно изобретению, обеспечивающий получение изопропанольного экстракта 90 (экстракта I), содержащего низкое содержание силимарина.

- Холодное прессование семянок Silybum marianum для получения масла, полученного из семянок Silybum marianum,

- Экстракция масла, полученного из семянок Silybum marianum, смесью изопропанол/вода (90/10 по объему) с 1 граммом смеси изопропанол/вода на грамм масла в течение 2 часов при 20°С,

- Отделение изопропанольной фазы, и

- Испарение растворителя.

Метанольный (экстракт М) и этанольный (экстракт Е) экстракты получали аналогичным образом, заменяя смесь изопропанол/вода (90/10 по объему) соответственно метанолом и смесью этанол/вода (90/10 по объему). Масло, полученное из семянок Silybum marianum, экстрагируют соответственно 3 объемами метанола и 3 объемами смеси этанол/вода (90/10 по объему) на 1 объем масла в течение 2 часов при 20°С.

Эти различные экстракты охарактеризовывали с помощью УЭЖХ (ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии) или ГХ-МС (газовой хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией) в соответствии с протоколами, подробно описанными ниже.

Протокол оценки полученных экстрактов

Протокол 1: оценка содержания силимарина методом УЭЖХ

Подготовка образца и контроля:

- Контроль силимарина: приготовить раствор 5 мг силимарина в 10 мл смеси метанол/вода (60:40) (об./об.).

- Образец: нагреть анализируемый сухой экстракт (экстракт М, Е или I) при 35°С при перемешивании до получения гомогенного и прозрачного раствора. Взвесить ровно 200 мг экстракта, растворить его в 10 мл смеси метанол/дихлорметан, обеспечивая полное растворение экстракта, и гомогенизировать раствор. Эта смесь имеет диапазон от соотношения метанол/дихлорметан (1:1) (об./об.) до чистого метанола.

Аналитические условия:

Колонка: Acquity ВЕН Shield С18 150 мм × 2,1 мм - 1,7 мкм (Waters) Мобильная фаза:

- А: вода + 0,1% муравьиная кислота

- В: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота Градиент согласно Таблице 1 ниже:

Температура колонки: 40°С Скорость потока: 0,4 мл/мин Детектирование: 287 нм Объем введения: 1 мкл.

Протокол 2: оценка содержания линолевой кислоты с помощью УЭЖХ Подготовка образца и контроля:

- Контроль линолевой кислоты: приготовить раствор 10 мг линолевой кислоты в 10 мл смеси метанол/дихлорметан (1:1) (об./об.).

- Образец: нагреть анализируемый сухой экстракт (экстракт М, Е или I) при 35°С при перемешивании до получения гомогенного и прозрачного раствора. Взвесить ровно 50 мг экстракта, растворить его в 1 мл смеси метанол/дихлорметан, обеспечивая полное растворение экстракта, и гомогенизировать раствор. Эта смесь имеет диапазон от соотношения метанол/дихлорметан (1:1) (об./об.) до чистого метанола.

Аналитические условия:

Колонка: Acquity ВЕН Shield С18 150 мм × 2,1 мм - 1,7 мкм (Waters) Мобильная фаза:

- А: вода + 0,1% муравьиная кислота

- В: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота Градиент согласно Таблице 2 ниже:

Температура колонки: 40°С Скорость потока: 0,4 мл/мин Детектирование: 215 нм Объем введения: 1 мкл.

Протокол 3: оценка содержания жирных кислот с помощью ГХ-МС Подготовка образца:

Нагреть сухой экстракт для анализа до 35°С при перемешивании до получения прозрачной однородной жидкости.

Растворить 20 мг экстракта в 800 мкл смеси метанол/дихлорметан (1:1) (об./об.).

Добавить 200 мкл дериватизатора N,O-бис(трисметилсилил)трифторацетамид (БСТФА)+триметилхлорсилан (ТМХС) (99:1) (Supelco-Sigma Alrich).

Перемешивать в течение 1 минуты.

Условия газовой хроматографии (ГПХ):

Колонка: DB-5 мс (Agilent Technologies); 30 м × 0,25 мм; 0,25 мкм

Инжекция: Т =3 00°С; Режим = Разделение; Коэффициент разделения = 100:1

Термостат: температурный градиент (°С)

- Начальная температура = 150°С

- Градиент = 7°С/мин до конечной температуры = 340°С

- Выдержать при 340°С в течение 10 минут

Скорость потока газа-носителя: 1 мл/мин

Детектирование: МС-ЭИ, Т=300°С, время сканирования = 0,2 с; Стартовая масса полного сканирования = 40; Конечная масса полного сканирования =6 00. Объем введения: 1 мкл

Результаты

Экстракт I семянок Silybum marianum согласно изобретению с низким содержанием силимарина содержит, главным образом, вещества со временем удерживания от 13 до 30 минут по данным УЭЖХ.

Содержание силимарина в экстрактах I определяли методом УЭЖХ после калибровки контрольными растворами коммерческого силимарина (Sigma Aldrich).

Экстракт I содержит 0,06 мас. % силимарина.

Содержание свободных жирных кислот и, в частности, линолевой кислоты в экстракте I определяли методами УЭЖХ и ГПХ и представляли в таблице 3 ниже.

Авторы изобретения смогли продемонстрировать, что профили УЭЖХ и ГПХ трех экстрактов семянок согласно изобретению, полученных экстракцией метанолом (экстракт М), этанолом 90 (экстракт Е) и изопропанолом 90 (экстракт I), являются аналогичными.

Различные анализы, проведенные с помощью УЭЖХ и ГХ-МС, позволили продемонстрировать следующие характеристики:

- Изопропанольный экстракт 90 семянок согласно изобретению (экстракт I) почти не содержит силимарина, особенно полярных флавонолигнанов.

- Профили УЭЖХ и ГХ-МС 3 экстрактов семянок по изобретению, полученных экстракцией метанолом, этанолом 90 и изопропанолом 90, очень похожи.

Пример 2: количественное определение белка Кератина 75 в лобных фолликулах человека.

Целью этого примера является оценка эффектов экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. % силимарина, на экспрессию белка Кератина 75 у человека. Действительно, такая фармакологическая активность представляет интерес в области лечения и/или предотвращения выпадения волос, особенно путем стимуляции их роста.

Методы

Препарат экстракта I для местного применения, полученный в примере 1, был приготовлен в виде 1,75% или 7,0% (масса/объем) сухого экстракта в смеси изопропанол/ПЭГ 300 (1:1) (мае./мае), затем был помещен в распылитель для применения два раза в день на время лечения.

Тринадцать здоровых добровольцев наблюдали в течение от 4 до 12 недель в зависимости от их доступности. Это исследование проводили в соответствии с Хельсинкской декларацией с письменного согласия каждого субъекта. Это продолжительное обсервационное одноцентровое исследование. Субъектов наблюдали в частной практике под пристальным наблюдением одного и того же персонала на протяжении всего исследования, что дополнялось постоянными цифровыми контактами и обменами с субъектами. Установлен еженедельный мониторинг на базе цифровых установок. Образец фолликула брали при каждом посещении.

Отбирали у субъектов со лба образцы фолликулов с цианоакрилатом в соответствии с Pierard et al. (Scientific World Journal, 2014 ID 463634, 2014) с использованием капли 2-этилцианоакрилата, прилипшей к предметному стеклу микроскопа.

Экстракция белка:

Биоптаты отделяют от предметного стекла в дистиллированной воде в течение 30 минут при комнатной температуре, разрезают на мелкие части и затем гомогенизируют в буфере для экстракции 2 мМ Трис-HCl, рН 6,8, 3% ДСН, 10 мМ пирофосфата натрия, 5 мМ ЭДТА и 2 мМ ванадата натрия. Образцы нагревают при 50°С в течение 3 часов. Экстракты центрифугируют при 10000 об/мин в течение 10 минут. Определение белков в супернатантах проводят по методу Бредфорда (Anal Biochem 72: 248-254, 1976) с использованием реактива Bio-Rad (Cressier, Швейцария). Культуры себоцитов промывают буфером PBS, затем клетки лизируют в специальном буфере (50 мМ Трис-HCl, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1% TritonTM Х-100). Суспензии пропускают через ультразвуковой аппарат, а затем анализируют по методу Бредфорда.

Образцы белка анализируют с помощью вестерн-блоттинга с использованием стандартной процедуры и следующего антитела: поликлональное кроличье античеловеческое IgG К75, разведение 1:5000 (Fisher Scientific, Reinach, Швейцария).

Протеомный анализ проводили с помощью электрофореза (SDS-PAGE) с последующим окрашиванием Кумасси. Цветные белковые полосы собирают и анализируют на платформе протеомики Женевского университета.

Результаты

Уровень экспрессии белка К75 (денситометрическая единица вестерн-блоттинга) в волосяных фолликулах лба людей показан в Таблице 4 ниже до и после лечения экстрактом по изобретению.

Авторы изобретения ясно продемонстрировали, что лечение экстрактом по изобретению вызывает статистически значимое увеличение (р<0,001) экспрессии белка К75. Интересно отметить, что это увеличение наблюдается у всех пациентов, независимо от тестируемой концентрации или продолжительности лечения. Действительно, после 4 недель лечения увеличение экспрессии белка К75 уже кажется очень заметным.

Пример 3: количественное определение белка Кератина 75 на уровне волосистой части головы пациента с залысинами

При этом тяжелом заболевании волос наблюдается крайне низкая экспрессия К75. Больного лечат тем же экстрактом в концентрации 7% и так же, как в примере 2. Полученные результаты, а именно уровень экспрессии белка К75 (денситометрическая единица полос вестерн-блотов) в волосяных фолликулах пациента, страдающего облысением, до и после лечения экстрактом по изобретению представлены в Таблице 5 ниже.

Таким образом, авторы изобретения продемонстрировали, что лечение, включающее экстракт согласно изобретению, позволяет значительно увеличить уровень экспрессии К75 у пациента, страдающего облысением. Интересно отметить, что в конце лечения можно было наблюдать отрастание волос.

Все эти результаты позволяют изобретателям подчеркнуть преимущества экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. % силимарина, для стимулирования роста волос.

Пример 4: количественное определение Кератина 75 на уровне кожи головы на залысинах и отросших волосах

Обнаружено, что при этом тяжелом заболевании волос экспрессия К75 чрезвычайно низка. Двух пациентов, страдающих залысинами, лечили одним и тем же экстрактом в концентрации 7% в течение 4 недель и так же, как в примере 2, над двумя или тремя залысинами. Результаты (всего 5 залысин) плотности белка К75 и густоты волос приведены в Таблице 6 ниже.

Таким образом, авторы изобретения ясно продемонстрировали, что лечение, включающее экстракт согласно изобретению, позволяет значительно повысить уровень экспрессии К75 у двух пациентов, страдающих от залысин. Это повышение связано с отрастанием волос. Действительно, после применения экстракта по изобретению плотность волос увеличилась более чем в два раза.

Таким образом, местное нанесение экстракта по изобретению на кожу головы позволяет создать условия, благоприятные для роста волос. Таким образом, изобретатели ясно продемонстрировали, что такой экстракт можно применять для предотвращения трансплантации волос или медицинского лечения, такого как PRP или мезотерапия.

Пример 5: Специфическое действие экстракта семянок Silybum marianum на фосфорилирование рецепторов EGFR и PDGFRB в клетках дермального сосочка

Целью данного исследования является показать, что экстракт семянок Silybum marianum, протестированный в концентрации 30 мкг/мл, специфически индуцирует фосфорилирование тирозиновых рецепторов с тирозинкиназной активностью (фосфо-РТК) и киназ различных сигнальных путей (фосфокиназы), в отличие от Силимарина (Sigma), испытанного при концентрации 0,06 мкг/мл. Контроль обрабатывали диметилсульфоксидом (ДМСО), используемым в качестве растворителя для экстракта семянок Silybum marianum и силимарина.

Исследование проводили на клетках дермального сосочка, выделенных из волосяных фолликулов человека и культивируемых в чашке Петри в течение 48 часов. Затем клетки дермального сосочка стимулировали в течение 1 часа в присутствии экстракта семянок Silybum marianum или силимарина. Затем готовили полные клеточные лизаты и тестировали на фосфорилирование различных биологических мишеней. Картирование этих мишеней было получено с помощью двух наборов матриц антител, в которых используется целлюлозная мембрана, на которую нанесены антитела для обнаружения присутствия представляющих интерес белков (набор для скрининга протеома Proteome Profiler Human, R&D Systems). Список фармакологических мишеней, проверяемых в этих тестах, является следующим и доступен в Интернете:

• 49 фосфо-рецепторов с тирозинкиназной активностью (https://www.rndsystems.com/products/proteome-profiler-human-phosph kit_ary001b)

• 43 сигнальных фосфокиназ (https://www.rndsystems.com/products/proteome-profiler-human phospho-kinase-array-kit_aryOO3b# product-datasheets).

Затем регистрировали хемолюминесцентные сигналы с помощью денситометра (ChemiDoc, Biorad) и количественно оценивали с помощью программного обеспечения Image J 1,52 с использованием подключаемого модуля профиля Microarray. Анализ данных позволил определить среднюю интенсивность пикселей для каждого экспериментального условия и измерить соотношение относительно контроля ДМСО. Наконец, были проведены испытания на двух независимых донорах клеток дермального сосочка и в двух параллельных опытах.

Результаты с фосфо-рецепторами представлены в Таблице 7 ниже.

Эти результаты показывают, что экстракт Silybum marianum заметно увеличивает фосфорилирование тирозина этих двух рецепторов при отношении 1,91 и 2,77, соответственно, в ответ на один час обработки. С другой стороны, отношение остается близким к 1, 1,02 и 0,76 для EGFR и PDGFR0, соответственно, после инкубации с силимарином. Эти данные показывают, что экстракт семянок Silybum marianum в концентрации 30 мкг/мл имеет в качестве специфических мишеней EGFR и PDGFRp и что фосфорилирование этих двух рецепторов не модулируется силимарином в концентрации 0,06 мкг/мл.

Кроме того, результаты скрининга сигнальных фосфокиназ приведены ниже в таблице 8, в которой представлена индукция фосфорилирования тирозина сигнальных киназ экстрактом семянок Silybum marianum, при этом значения представляют собой отношение экстракта семянок Silybum marianum к контролю.

Эти экспериментальные результаты позволяют подтвердить, что PDGFRβ действительно тирозинируется по остатку Y751 в ответ на экстракт Silybum marianum (отношение 1,94). Более того, этот экстракт активирует известные сигнальные пути для EGFR и PDGFRβ, а именно: ERK 1/2 (T202/Y204, T185/Y187); GSK3 а/b (S21/S9); Akt 1/2/3 (S473); STAT 5а (Y694); STAT 5a/b (Y694/Y699) и общий b-катенин.

В заключение, набор результатов для этого примера демонстрирует, что экстракт семянок Silybum marianum специфически активирует фосфорилирование EGFR и PDGFRβ тирозина, независимо от присутствия силимарина, а также их сигнальные пути в клетках дермального сосочка.

Группа изобретений относится к области косметики и дерматологии для стимуляции роста волос. Применение экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для стимуляции роста волос, где указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. получают способом, включающим следующие последовательные стадии: (i) прессование семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. с получением масла; (ii) экстракция масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. на стадии (i), экстракционным растворителем, выбранным из субкритической воды и С₁-С₃ спирта необязательно в смеси с водой, с получением экстракционной фазы и липидной фазы; (iii) отделение экстракционной фазы, полученной на стадии (ii); и (iv) частичное или полное высушивание экстракционной фазы с получением концентрированного или сухого экстракта. Применение дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, для стимуляции роста волос, где указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. получают способом, включающим следующие последовательные стадии: (i) прессование семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. с получением масла; (ii) экстракция масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. на стадии (i), экстракционным растворителем, выбранным из субкритической воды и С₁-С₃ спирта необязательно в смеси с водой, с получением экстракционной фазы и липидной фазы; (iii) отделение экстракционной фазы, полученной на стадии (ii); и (iv) частичное или полное высушивание экстракционной фазы с получением концентрированного или сухого экстракта. Вышеописанные применяемые экстракт и композиция эффективны для стимуляции роста волос. 2 н. и 17 з.п. ф-лы, 8 табл., 5 пр.

1. Применение экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащего менее 0,2 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, для стимуляции роста волос,

где указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. получают способом, включающим следующие последовательные стадии:

(i) прессование семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. с получением масла;

(ii) экстракция масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. на стадии (i), экстракционным растворителем, выбранным из субкритической воды и С₁-С₃ спирта необязательно в смеси с водой, с получением экстракционной фазы и липидной фазы;

(iii) отделение экстракционной фазы, полученной на стадии (ii); и

(iv) частичное или полное высушивание экстракционной фазы с получением концентрированного или сухого экстракта.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. содержит менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта.

3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. находится в форме, адаптированной для местного применения.

4. Применение по любому из пп. 1-3 для предотвращения или лечения алопеции.

5. Применение по п. 4, отличающееся тем, что алопеция выбрана из группы, состоящей из андрогенетической алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции, очаговой алопеции и рубцовой алопеции.

6. Применение по п. 4, отличающееся тем, что алопеция представляет собой фолликулит.

7. Применение по. 6, отличающееся тем, что фолликулит представляет собой расслаивающий фолликулит.

8. Применение по любому из пп. 1-7, отличающееся тем, что указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. используют перед или одновременно с трансплантацией волос или медицинским лечением кожи головы.

9. Применение по п. 8, отличающееся тем, что медицинское лечение кожи головы представляет собой лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярную мезотерапию.

10. Применение дерматологической или косметической композиции, содержащей по меньшей мере один экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn., содержащий менее 0,2 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта, с по меньшей мере одним дерматологически или косметически приемлемым эксципиентом, для стимуляции роста волос,

где указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. получают способом, включающим следующие последовательные стадии:

(i) прессование семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. с получением масла;

(ii) экстракция масла, полученного из семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. на стадии (i), экстракционным растворителем, выбранным из субкритической воды и С₁-С₃ спирта необязательно в смеси с водой, с получением экстракционной фазы и липидной фазы;

(iii) отделение экстракционной фазы, полученной на стадии (ii); и

(iv) частичное или полное высушивание экстракционной фазы с получением концентрированного или сухого экстракта.

11. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 10, отличающееся тем, что указанный экстракт семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. содержит менее 0,1 мас. % силимарина по отношению к массе сухого экстракта.

12. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 10 или 11, отличающееся тем, что она находится в форме, адаптированной для местного применения.

13. Применение дерматологической или косметической композиции по любому из пп. 10 или 12, отличающееся тем, что композиция содержит от 0,01 до 15 мас. % экстракта семянок Silybum marianum (L.) Gaertn. на основе массы сухого экстракта относительно общей массы композиции.

14. Применение дерматологической или косметической композиции по любому из пп. 10-13 для предотвращения или лечения алопеции.

15. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 14, отличающееся тем, что алопеция выбрана из группы, состоящей из андрогенетической алопеции, реактивной алопеции, постменопаузальной алопеции, очаговой алопеции и рубцовой алопеции.

16. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 14, отличающееся тем, что алопеция представляет собой фолликулит.

17. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 16, отличающееся тем, что фолликулит представляет собой расслаивающий фолликулит.

18. Применение дерматологической или косметической композиции по любому из пп. 10-17, отличающееся тем, что указанную композицию используют перед или одновременно с трансплантацией волос или медицинским лечением кожи головы.

19. Применение дерматологической или косметической композиции по п. 18, отличающееся тем, что медицинское лечение кожи головы представляет собой лечение богатой тромбоцитами плазмой или капиллярную мезотерапию.