СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ У КРОЛИКОВ Российский патент 2023 года по МПК A61B10/00 A61D3/00 G01N33/487 

Изобретение относится к ветеринарии и медицине и может быть использовано для получения ротовой жидкости у кроликов для лабораторной диагностики заболеваний, а также для доклинических исследований в медицине.

В настоящее время исследование ротовой жидкости (саливодиагностика) является перспективным научно-исследовательским направлением для верификации многих (эндокринных, онкологических, сердечно-сосудистых) заболеваний у человека и животных [1-3]. Однако, существующие способы получения ротовой жидкости у животных имеют ряд недостатков, лимитирующих их широкое применение.

Известны следующие способы получения ротовой жидкости [4-6]. Способ, предложенный P. Gjörstrup для оценки активности слюнной амилазы, заключается во введении полиэтиленовой трубки в выводной проток околоушной слюнной железы кролика [4]. Недостатком данного способа является необходимость введения животного в наркоз и привлечение анестезиолога.

Разработанная отечественными учеными И.П. Павловым и Д.Л. Глинским в 1894 году оперативная методика наложения постоянной фистулы выводного протока околоушной слюнной железы [5]. Аналогичными способами получения ротовой жидкости является введение в выводные протоки слюнных желез специальных стеклянных трубок или зондов, по которым секрет слюнной железы будет стекать в пробирку. Данный способ наиболее близок по совокупности признаков к заявленному изобретению и принят в качестве прототипа. Сущность способа, выбранного в качестве прототипа, заключается в том, что дополнительно при этом используется стимуляция секреции слюнных желез при помощи средств, усиливающих активность парасимпатического звена вегетативной нервной системы (антихолинэстеразные средства, холиномиметики и другие). Недостатками вышеуказанных способов является трудность выполнения и необходимость введения лабораторного кролика в состояние наркоза. Кроме того, при использовании средств, усиливающих активность парасимпатической системы, неизбежно возникает ряд побочных (неблагоприятных) эффектов: брадикардия, гипотония, миоз, усиление перистальтики, расслабление гладкомышечных сфинктеров, гипотермия, и др. В последующем данный способ был несколько модифицирован отечественными учеными (А.С. Козлов и др. (1985)). Для этого исследователи разработали специальной устройство, которое состоит из эластической трубки, через отверстие которой ротовая жидкость будет аспирироваться в специальную пробирку для сбора слюны, и резинового баллона, который будет перекрывать вход в пищевод и предотвращать последующую потерю ротовой жидкости в желудочно-кишечном тракте [6]. Недостатком данного способа является необходимость погружения обследуемого животного в состоянии наркоза, а также необходимость участия как минимум двух специалистов при получении пробы.

Цель изобретения - предложить новой способ получения ротовой жидкости у кроликов. Технический результат - расширение ассортимента способов отбора проб ротовой жидкости у кроликов, сочетание простоты выполнения (участие одного специалиста, отсутствие необходимости выполнения манипуляций, связанных с наркотизированием животного и введение в проток желез специальных зондов, отсутствие прямой необходимости проведения стимуляции секреции слюнных желез) и эффективности (получение достаточного для лабораторного исследования объема пробы биожидкости). Эта цель достигается тем, что помещенным в сумку для фиксации лабораторным кроликам, предварительно отлученным от кормушки и поилки на 3 часа, при помощи пинцента или специального таблеткодавателя в преддверие полости рта кролика вводят стерильный хлопковый тампон на срок 7-10 мин, в течение которого рот кролика фиксируют намордником для предотвращения выпадения тампона после чего данный тампон извлекают и погружают в коническую пробирку с зауженным дном (размер тампона подбирается таким образом, чтобы он при центрифугировании застревал в нижней зауженной части пробирки), которую затем центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин, в результате чего на дно пробирки с тампона под действием центробежной силы стекает ротовая жидкость в объеме около 150-200 мкл (0,15-0,2 мл).

В ходе наших экспериментов нами были получены образцы ротовой жидкости у 15 лабораторных кроликов породы Советская шиншилла. Нами были применены коммерческие пробирки со стерильными ватными тампонами без реагента. Экспериментальным путем мы пришли к необходимости нахождения тампона в преддверии полости рта кролика, оптимальнее всего в щечной области на срок от 7 до 10 мин, что позволяет получать в среднем 150-200 мкл ротовой жидкости. Меньшее время нахождения тампона в полости рта кролика приводило к уменьшению получаемого количества ротовой жидкости (менее 100 мкл при нахождении 4-6 минут и менее 50 мкл при нахождении в течение 3 минут), что может оказаться недостаточным для проведения лабораторно-диагностических исследований. В рамках нашего эксперимента были использованы коммерческие пробирки фирмы Sarstedt (Германия) с зауженным (V-образным) дном, однако для реализации данного способа можно использовать и другие пробирки с зауженным дном. В нашем способе мы не использовали стимуляторы слюноотделения, которые дополнительно могли бы повлиять на скорость слюноотделения и получения большего объема стимулированной слюны.

Предлагаемый нами способ иллюстрируется следующими фигурами:

Фиг. 1. - Техника введения тампона в преддверие полости рта кролика.

Фиг. 2. - Фиксация рта кролика путем надевания намордника после введения тампона в полость рта.

Фиг. 3. - Извлечение тампона и его погружение в пробирку конической формы перед центрифугированием.

Предлагаемый нами способ реализуется следующим образом: помещенным в сумку для фиксации лабораторным кроликам, предварительно отлученным от кормушки и поилки на 3 часа, при помощи пинцента или специального таблеткодавателя через беззубую часть в полость рта вводят стерильный хлопковый тампон (фиг. 1) на срок 7-10 мин, в течение которого рот кролика фиксируют намордником для предотвращения выпадения тампона (фиг. 2), после чего данный тампон извлекают и погружают в коническую пробирку с зауженным дном (фиг. 3) (размер тампона подбирается таким образом, чтобы он при центрифугировании застревал в нижней зауженной части пробирки), которую затем центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин, в результате чего, на дно пробирки с тампона под действием центробежной силы стекает ротовая жидкость в объеме около 150-200 мкл.

Способ иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Лабораторный кролик породы шиншилла отлучается от кормушки и поилки на 3 часа. После чего кролику при помощи пинцета в полость рта в район щечной области вводится стерильный хлопковый тампон на срок 10 мин; по прошествии данного времени тампон аккуратно извлекается при помощи пинцета и погружается в пластиковую пробирку фирмы Sarstedt. После чего осуществляется центрифугирование данной пробирки в течение 5 мин при 3000 об/мин и жидкость с тампона стекает на дно пробирки в объеме 200 мкл (0,2 мл).

Пример 2. Лабораторный кролик породы шиншилла отлучается от кормушки и поилки на 3 часа. После чего кролику при помощи пинцета в полость под язык в район нижних резцов вводится стерильный хлопковый тампон на срок 7 мин; по прошествии данного времени тампон аккуратно извлекается при помощи пинцета и погружается в пластиковую пробирку фирмы Sarstedt. После чего осуществляется центрифугирование данной пробирки в течение 5 мин при 3000 об/мин и жидкость с тампона стекает на дно пробирки в объеме 150 мкл (0,15 мл).

Таким образом, предложенный нами способ получения ротовой жидкости показал свою эффективность и может применяться как в ветеринарии, так и экспериментальной медицине для получения ротовой жидкости у кроликов и последующей возможности использования в качестве диагностического биоматериала.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

Гильмутдинов Р.Я., Иванов А.В., Махамат М.К., Покровская Е.С. Слюна - новый объект диагностических исследований у животных. Достижение науки и техники АПК. 2012. № 12. С. 52-55.

Чаулин, А.М. Концентрация высокочувствительного тропонина I в ротовой жидкости у пациентов с острым инфарктом миокарда: пилотное исследование [Текст] / А.М. Чаулин, П.Д. Дуплякова, Г.Р. Бикбаева, А.А. Тухбатова, Е.В. Григорьева, Д.В. Дупляков // Российский кардиологический журнал. - 2020. - Т. 25, № 12. 3814. https://doi.org/10.15829/1560-4071-2020-3814

Чаулин, А.М. Клинико-диагностическая ценность кардиомаркеров в биологических жидкостях человека [Текст] / А.М. Чаулин, Л.С. Карслян, Е.В. Григорьева, Д.А. Нурбалтаева, Д.В. Дупляков // Кардиология. - 2019. - Т. 59, № 11. - C. 66-75. DOI:10.18087/cardio.2019.11.n414.

Gjörstrup P. Parotid secretion of fluid and amylase in rabbits during feeding. J Physiol. 1980 Dec; 309:101-16. doi: 10.1113/jphysiol.1980.sp013497. PMID: 6166744; PMCID: PMC1274573.

Дегтярев В.П., А.Ю. Шишелова. Краткий курс нормальной физиологии. Учебное пособие. Москва, издательство «ИКАР», 2008, - 344 с.

Козлов А.С., Дегтярев В.П., Чистякова А.В., Чистяков А.Н. Устройство для получения секрета слюнных желез животных (патент). 1985. № 865289.

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарной диагностике. Лабораторным кроликам, предварительно отлученным от кормушки и поилки на 3 часа, через беззубую часть в полость рта вводят стерильный хлопковый тампон на срок 7-10 мин. В течение данного периода рот кролика фиксируют намордником для предотвращения выпадения тампона. Размер тампона подбирают так, чтобы при центрифугировании он застревал в нижней части центрифужной конической пробирки с зауженным дном. Тампон извлекают, погружают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. Способ обеспечивает расширение ассортимента способов отбора проб ротовой жидкости у кроликов, прост в выполнении за счет участия одного специалиста, отсутствия необходимости выполнения манипуляций, связанных с наркотизированием животного и введением в проток желез специальных зондов, отсутствия прямой необходимости проведения стимуляции секреции слюнных желез, эффективен за счет получения достаточного для лабораторного исследования объема пробы ротовой жидкости. 3 ил., 3 пр.

Способ получения ротовой жидкости у кроликов, заключающийся в том, что помещенным в сумку для фиксации лабораторным кроликам, предварительно отлученным от кормушки и поилки на 3 часа, через беззубую часть в полость рта вводят стерильный хлопковый тампон на срок 7-10 мин, в течение которого рот кролика фиксируют намордником для предотвращения выпадения тампона, при этом размер тампона подбирают так, чтобы при центрифугировании он застревал в нижней части центрифужной конической пробирки с зауженным дном, после чего данный тампон извлекают, погружают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин.