Способ определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах (варианты) Российский патент 2023 года по МПК A61K31/395 A61K36/88 G01N30/00 G01N30/90 G01N33/15 

Изобретение относится к способам качественного определения стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии. Изобретение может быть использовано для контроля качества лекарственного растительного сырья «Чемерицы Лобеля корневища с корнями», субстанции «Настойка чемерицы» и лекарственного препарата «Вода чемеричная» по показателю «Подлинность».

Лекарственные препараты на основе чемерицы Лобеля (Veratrum officinalis L., сем. лилейных - Liliaceae) корневищ с корнями относятся к противопаразитарным (противопедикулезным) растительным средствам. Фармацевтическая субстанция «Чемерицы настойка», а также лекарственный препарат на ее основе, известный под торговым названием «Чемеричная вода», разрешен к медицинскому применению и используется наружно для уничтожения эктопаразитов. Данный лекарственный препарат отечественных производителей включен в Государственный реестр лекарственных средств (Государственный реестр лекарственных средств, на 01.09.2021 г. доступен по адресу: https://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx]).

Все части лекарственного растения содержат алкалоиды, преимущественно стероидной структуры: корни до 2,4 %, корневища - до 1,3 %. Из корневищ с корнями чемерицы Лобеля выделены иервератровые алкалоиды, большинство из которых ядовито, - иеврин, рубииерин, изорубиерин, термин, гермидин, герменин, вератрамин; цевератровые алкалоиды - протоверин, протовератрины А и В (Коломиец Н.Э., Полуэктова Т.В., Малышев АЮ. Совершенствование характеристики подлинности корневищ с корнями чемерицы. Фармация. 2016;63(3):6-8. Орлова Т.Н., Григорьев А.М., Крупина Н.А.. Случай из практики. Отравление алкалоидами чемерицы (постер). Судебная медицина. 2016;2(2):119-20. Shakirov R. New C-NOR, D-homosteroid alkaloid germinine from Veratrum Lobelianum. Chemistry of natural compounds. 1997;33(4):479-80.).

Алкалоиды чемерицы Лобеля обладают антипролиферативным и противовоспалительным действием, влияют на сердечно-сосудистую, нервную и желудочно-кишечную системы. Механизм токсического действия алкалоидов чемерицы связан с увеличением проницаемости натриевых каналов клеток, что оказывает возбуждающее действие, которое быстро сменяется функциональным истощением, брадикардией, гипотензией и апноэ. Механизм противопаразитарного действия обусловлен нейротоксическим действием алкалоидов чемерицы на половозрелые особи насекомых (Мишина ТП, Лукьянова ИЮ, Бидерман ФМ, Афанасьева ИВ. Отравление чемерицей. Скорая медицинская помощь. 2013;14(3):48-51. Christov V, Mikhova B, Ivanova A, Serly J., Molnar J., Selenge D. et al. Steroidal alka-loids of Veratrum lobelianum Bernh. and Veratrum nigrum L./ Z. Naturforsch. 2010;65(3-4):195-200.).

В соответствии с принципом сквозной стандартизации установление подлинности лекарственного растительного сырья, фармацевтической субстанции и лекарственного препарата следует проводить по одной и той же группе или группам биологически активных веществ, предпочтительно с использованием одного и того же метода (Самылина ИА. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных средств. В кн.: Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты. Материалы I Международного научного конгресса. М.: Институт традиционных методов лечения МЗ РФ; 1994. С. 254).

В качестве прототипа авторами выбран способ, описанный в фармакопейной статье ФС.2.5.0104.18 «Чемерицы Лобеля корневища с корнями» в разделе «Подлинность» (URL: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php 4 том, Лекарственное растительное сырье), который включает взятие навески измельченного сырья, проходящего сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, около 1,0 г, экстракцию 70 % спиртом, использование пластинки для ТСХ, использование в качестве подвижной фазы смесь растворителей бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:1) и детектирование в УФ-свете при длине волны 254 нм без обработки какими-либо реактивами.

Недостатками известного способа (прототипа) является то, что визуализация зон адсорбции на хроматограмме проводят только с помощью просматривания в УФ-свете, что не является специфичным для данного класса биологически активных веществ и в связи с этим может привести к недостоверным результатам качественного определения; отсутствует стадия очистки получаемого спиртового извлечения, что сильно снижает качество визуализации результатов и затрудняет определение алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах; использование хроматографических пластинок для тонкослойной хроматографии (ТСХ), что также сказывается на снижении качества визуализации; невозможно определить в ряду от лекарственного растительного сырья до лекарственных средств на его основе по одной и той же группе биологически активных веществ, так как отсутствует подходящий этап пробоподготовки.

Задачей изобретения является разработка специфичного способа определения содержания стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном растительном сырье «Чемерицы Лобеля корневища с корнями», а также в субстанции «Настойка чемерицы» и лекарственного препарата «Вода чемеричная» методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии.

Техническим результатом является расширение арсенала средств определения содержания стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах.

Технический результат достигается вариантами способа определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах, включающими этап подготовки проб, в частности приготовление испытуемых растворов для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями, для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями, для фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка», эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят испытуемый раствор на линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол: уксусная кислота: вода (4:1:1), когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета.

Для приготовления испытуемого раствора лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями около 1,0 г чемерицы Лобеля корневища с корнями измельчают, помещают в колбу 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 96% и нагревают на водяной бане в течение 15 мин, охлаждают и фильтруют, прибавляют 10 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл.

Для приготовления испытуемого раствора для фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка» 25 мл «Чемерицы настойки» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл.

Для приготовления испытуемого раствора для лекарственного препарата «Чемеричная вода» 25 мл «Чемеричной воды» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл.

Объем нанесения испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ-пластинки: 10 мкл для испытуемого раствора для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями; 5 мкл для испытуемого раствора для фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка»; 10 мкл для испытуемого раствора для лекарственного препарата «Чемеричная вода».

Применение заявляемого способа определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах в отличие от прототипа позволяет повысить качество визуализации результатов определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля благодаря очистке спиртового извлечения с помощью переэкстракции эфиром и использованию хроматографических пластинок для ВЭТСХ. Предлагаемый способ обладает высокой специфичностью благодаря обработке хроматографической пластинки ВЭТСХ реактивом Драгендорфа модифицированного после проведения хроматографии с последующим просмотром при дневном свете. Благодаря разработанному авторами этапу пробоподготовки проб испытуемых растворов лекарственных средств предлагаемое техническое решение возможно применять не только для качественного определения алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном растительном сырье, но и для определения алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах на его основе.

Краткое описание чертежей и иных материалов.

Фиг. 1. Фотография (a) и схема (b) хроматограммы в УФ-свете.

Фиг. 2. Фотография (a) и схема (b) хроматограммы после обработки реактивом Драгендорфа модифицированным.

Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается следующими примерами:

Пример 1. Определение содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах в образцах лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневища с корнями, фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка» и лекарственного препарата «Чемеричная вода».

Приготовление испытуемого раствора для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями.

В примере использовались образцы лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями двух производителей: ООО «Хорст» и «Данила Травник».

1,00102 г чемерицы Лобеля корневища с корнями (ООО «Хорст») и 1,00081 г чемерицы Лобеля корневища с корнями («Данила Травник») измельчили до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, поместили в конические колбы вместимостью 100 мл, прибавили по 10 мл спирта 96% и нагревали на водяной бане в течение 15 мин. Растворы охладили и профильтровали через бумажный фильтр «черная лента». Фильтраты поместили в делительные воронки вместимостью 100 мл, прибавили по 10 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагировали эфиром два раза по 15 мл. Эфирные извлечения каждого лекарственного растительного сырья объединили и профильтровали в круглодонные колбы вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного. Фильтры промыли 10 мл эфира каждый. Эфир отогнали на роторном испарителе при температуре 40 °С досуха. Сухие остатки растворили в 2,0 мл спирта 96% каждый.

Приготовление испытуемого раствора для фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка».

25,0 мл «Чемерицы настойки» поместили в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавили 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагировали эфиром два раза по 15 мл. Эфирные извлечения объединили и профильтровали в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного. Фильтр промыли 10 мл эфира. Эфир отогнали на роторном испарителе при температуре 40 °С досуха. Сухой остаток растворили в 2,0 мл спирта 96%.

Приготовление испытуемого раствора для лекарственного препарата «Чемеричная вода».

25,0 мл «Чемеричной воды» поместили в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавили 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагировали эфиром два раза по 15 мл. Эфирные извлечения объединили и профильтровали в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного. Фильтр промыли 10 мл эфира. Эфир отогнали на роторном испарителе при температуре 40 °С досуха. Сухой остаток растворили в 2,0 мл спирта 96%.

На линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля нанесли в виде полос длиной 10 мм и шириной 2 мм:

- 5 мкл испытуемого раствор для фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка»;

- 10 мкл испытуемого раствора для лекарственного препарата «Чемеричная вода»;

- 10 мкл испытуемого раствора для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями (производитель ООО «Хорст»);

- 10 мкл испытуемого раствора для лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями (производитель «Данила Травник»).

Пластинку с нанесенными пробами поместили в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол: уксусная кислота : вода (4:1:1), и хроматографировали восходящим способом.

Когда фронт растворителей прошел 90% длины пластинки от линии старта, ее вынули и высушили до удаления следов растворителей. Пластинку просматривали при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем обработали реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривали при дневном свете в УФ-кабинете.

На фиг. 1. представлены фотография (a) и схема (b) хроматограммы в УФ-свете, на которой видно присутствие большого количества дополнительных зон, не относящихся к определяемым БАВ

На фиг. 2. представлены фотография (a) и схема (b) хроматограммы после обработки реактивом Драгендорфа модифицированным, на которой заметна высокая степень качества визуализации, что обеспечивается наличием стадии экстракции эфиром, использованием пластинок для ВЭТСХ и обработкой пластинки ВЭТСХ реактивом Драгендорфа модифицированным.

Пример 2. Влияние количества эфира на полноту экстракции на примере лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневища с корнями.

В примере использовались образцы лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями производства ООО «Хорст».

Пять навесок лекарственного растительного сырья чемерицы Лобеля корневищ с корнями - 1,00141 г, 1,04641 г, 1,03326 г, 1,03290 г, 1,03374 г - измельченных до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, поместили в конические колбы вместимостью 100 мл, прибавили по 10 мл спирта 96% и нагревали на водяной бане в течение 15 мин. Растворы охладили и профильтровали через бумажные фильтры «черная лента». Фильтраты поместили в делительные воронки вместимостью 100 мл, прибавили по 10 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагировали эфиром следующим образом: 1 раз 30 мл; 2 раза по 10 мл; 2 раза по 15 мл; 2 раза по 20 мл; три раза по 10 мл соответственно. Эфирные извлечения отдельно для каждой навески объединили и профильтровали в круглодонные колбы вместимостью 100 мл через предварительно смоченные эфиром бумажные фильтры, содержащие по 2 г натрия сульфата безводного. Фильтры промыли 10 мл эфира.

Далее провели количественное определение суммы алкалоидов в пересчете на протовератрин в соответствии с ФС.2.5.0104.18 «Чемерицы Лобеля корневища с корнями»:

Эфирные извлечения поместили в делительные воронки и извлекали последовательно 15 мл хлористоводородной кислоты 1 % и 3 раза по 10 мл хлористоводородной кислоты 1 %. Извлечения отдельно для каждой навески объединили, профильтровали в другие делительные воронки, подщелачили аммиака раствором и извлекали по 20 мл хлороформа. Эту операцию повторили по два раза, используя по 15 мл хлороформа. Хлороформные извлечения отдельно для каждой навески профильтровали через бумажные фильтры, содержащие по 3-4 г натрия сульфата безводного, смоченного хлороформом, в круглодонные колбы. Хлороформ отогнали с помощью роторного испарителя при пониженном давлении досуха. Сухие остатки высушили при температуре 103 °С в течение 30 мин. После охлаждения сухие остатки растворили каждый в 1,0 мл 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты, избыток которой титровали 0,01 М раствором натрия гидроксида (индикатор - метиловый оранжевый).

Содержание суммы алкалоидов в пересчете на протовератрин в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле:

где:

0,0625 - количество суммы алкалоидов в пересчете на протовератрин, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты;

1,0 - аликвота 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты, добавленная к сухому остатку мл;

V - объем 0,01 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование избытка 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты, мл;

100 - коэффициент, переводящий результат в проценты;

а - навеска лекарственного растительного сырья, г;

W - влажность сырья, % (8,48 %);

- коэффициент пересчета на абсолютно сухое сырье.

Полученные результаты приведены в табл. 1 и фиг. 3:

Табл. 1. Влияние количества эфира на полноту экстракции. Величина Извлечение 1 х 30 мл 2 х 10 мл 2 х 15 мл 2 х 20 мл 3 х 10 мл a, г 1,00141 1,04641 1,03290 1,03326 1,03374 V, мл 0,84 0,82 0,82 0,82 0,82 Х, % 1,09112 1,17472 1,19009 1,18967 1,18912

Как видно из представленного графика (фиг. 3) предложенное соотношение лекарственного растительного сырья и экстрагента, а также кратность экстракции, позволяют проводить наиболее полную экстракцию без избыточных затрат экстрагента.

Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой специфичностью и позволяет определить содержание алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах, может быть применен для качественного определения алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном растительном сырье и для определения алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах на его основе, а также повысить качество визуализации результатов определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля.

Группа изобретений относится к способам качественного определения стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - чемерицы Лобеля корневищ с корнями, для этого 1,0 г чемерицы Лобеля корневища с корнями измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 96% и нагревают на водяной бане в течение 15 мин, охлаждают и фильтруют, прибавляют 10 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 10 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота: вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном растительном сырье чемерицы Лобеля корневищ с корнями определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка», для этого 25 мл «Чемерицы настойки» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 5 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - лекарственного препарата «Чемеричная вода», для этого 25 мл «Чемеричной воды» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 10 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ - пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета. Вышеописанные способы расширяют арсенал определения содержания стероидных алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственных средствах, способы являются высокоспецифичными. 3 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 2 пр.

1. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - чемерицы Лобеля корневищ с корнями, для этого 1,0 г чемерицы Лобеля корневища с корнями измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 96% и нагревают на водяной бане в течение 15 мин, охлаждают и фильтруют, прибавляют 10 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 10 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном растительном сырье чемерицы Лобеля корневищ с корнями определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета.

2. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - фармацевтической субстанции «Чемерицы настойка», для этого 25 мл «Чемерицы настойки» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 5 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ-пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета.

3. Способ качественного определения содержания алкалоидов чемерицы Лобеля в лекарственном средстве, включающий этап подготовки пробы, а именно приготовление испытуемого раствора лекарственного средства - лекарственного препарата «Чемеричная вода», для этого 25 мл «Чемеричной воды» помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляют 25 мл воды, 1 мл аммиака раствора концентрированного 25% и экстрагируют эфиром два раза по 15 мл, эфирные извлечения объединяют и фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 мл через предварительно смоченный эфиром бумажный фильтр, содержащий 2 г натрия сульфата безводного, фильтр промывают 10 мл эфира, эфир отгоняют на роторном испарителе при температуре не выше 40°С досуха, сухой остаток растворяют в 2,0 мл спирта 96%, далее испытуемый раствор хроматографируют восходящим способом высокоэффективной тонкослойной хроматографии, для этого наносят 10 мкл испытуемого раствора на линию старта ВЭТСХ - пластинки со слоем силикагеля в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм, затем пластинку помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:1, когда фронт растворителей пройдет 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают и сушат до удаления следов растворителей, просматривают при УФ-свете при длине волны 365 нм, затем хроматографическую пластинку обрабатывают реактивом Драгендорфа модифицированным и просматривают при дневном свете в УФ-кабинете, содержание алкалоидов чемерицы Лобеля определяют путем обнаружения на хроматограмме испытуемого раствора в средней трети пластинки не менее трех зон адсорбции от оранжевого до красно-оранжевого цвета.