НЕЖИЗНЕСПОСОБНЫЕ БАКТЕРИИ BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 A61K35/745 A61P1/00 C12R1/00 

Настоящее изобретение относится к нежизнеспособным бактериям Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированным под номером депозита № DSM 24514, или одному или нескольким их фрагментам для применения в терапии, в частности, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения, такого как синдром раздраженного кишечника. Более того, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей в качестве активного ингредиента указанные нежизнеспособные бактерии для применения в терапии, в частности, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения. Также, настоящее изобретение относится к способу получения нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов, и к бактериям, получаемым способом по изобретению, для применения в терапии, в частности, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения.

В настоящем описании цитирован ряд документов, включая патентные заявки и руководства изготовителей. Содержание этих документов, хотя и не считается значимым для патентоспособности настоящего изобретения, включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Более конкретно, все упоминаемые документы включены в качестве ссылок в той же степени, как если бы было конкретно и индивидуально указано, что каждый индивидуальный документ включен в качестве ссылки.

Желудочно-кишечные нарушения, как правило, коррелируют с функциональным нарушением желудочно-кишечного тракта и/или коррелируют с нежелательной воспалительной активностью и широко распространены. Синдром раздраженного кишечника (IBS) (EMA/CHMP/60337/ 2013), например, является одним из наиболее распространенных из этих нарушений с оцененной встречаемостью вплоть до 20% в европейской популяции. IBS характеризуется рецидивирующими эпизодами функциональных желудочно-кишечных симптомов, для которых не подтверждается органическое заболевание. Распространенные симптомы IBS включают боль в животе, метеоризм, вздутие, диарею и/или запор. Пациенты с IBS страдают от заметного ухудшения их качества жизни, которое, как было определено, является еще более худшим, чем у пациентов с другими хроническими заболеваниями (Chang et al., 2004).

В соответствии с рекомендациями European Medicines Agency (EMA), IBS может быть диагностирована посредством критериев Rome III, которые в настоящее время широко признаны в качестве научного стандарта для определения IBS. Современные критерии Rome III определяют людей с IBS по: боли в животе или дискомфорту в течение по меньшей мере 3 суток в месяц на протяжении последних 3 месяцев с появлением симптома по меньшей мере 6 месяцев до этого совместно по меньшей мере с 2 критериями (1) улучшение после дефекации, (2) ассоциация начала с изменением частоты стула или (3) формы стула (EMA/CHMP/60337/2013; Rome, 2006).

Этиология, ведущая к разнообразному профилю симптомов у пациентов с IBS, все еще неполностью понятна и вследствие гетерогенной патологии в популяции с IBS эффективная стандартная терапия все еще отсутствует. В настоящее время лечение IBS в основном сфокусировано на преобладающих симптомах у пациента. Однако эффективность большинства лекарственных средств является умеренной и часто отсутствует доказательство высокого качества (Camilleri and Ford, 2017).

Исследования биоптатов толстой кишки неизменно демонстрируют, что у пациентов с IBS барьерная функция кишечника изменена со значительно более высокой проницаемостью по сравнению со здоровыми индивидуумами (Piche et al., 2009; Vivinus-Nébot et al., 2012). Таким образом, одна гипотеза состоит в том, что вследствие повышения проницаемости кишечного барьера происходит перенос факультативно-патогенных бактерий, что в свою очередь приводит к симптомам IBS, таким как боль в животе, неотложный позыв, запор и диарея. Для повышения активности слизистого барьера и для восстановления кишечного барьера было предложено использовать протекторы слизистого барьера, такие как таннат желатина, в качестве потенциального подхода для повторного установления физиологического гомеостаза кишечника (Lopetuso et al., 2015).

Исследования in vitro показали, что конкретные пробиотические штаммы способны усиливать барьерную функцию кишечника, обеспечивая объяснение, почему определенные бактерии полезны для лечения IBS (Resta-Lenert et al., 2006; Eun et al., 2011). Исходя из этих данных, пробиотики становятся все более важными для лечения IBS. В EP-B1-2481299 описан конкретный штамм Bifidobacterium bifidum, для которого обнаружено, что, когда он составлен в виде состава пробиотика, он значительно улучшает симптомы IBS: боль/дискомфорт в животе, растяжение/вздутие, неотложный позыв и нарушение пищеварения.

Однако способ действия и эффективность различных штаммов являются в высокой степени специфическими для штаммов и даже близкородственные штаммы могут значительно отличаться по их эффективности (Brenner and Chey, 2009; Layer et al., 2011). Эта специфичность штаммов была продемонстрирована в исследованиях эффективности Lactobacillus plantarum MF 1928 и Lactobacillus plantarum LP299V в отношении симптомов IBS. В то время как штамм L. plantarum LP299V обеспечивали значительное улучшение симптомов IBS (Ducrotté et al., 2012), близкородственный штамм L. plantarum MF 1298 приводил к значительному ухудшению симптомов у пациентов с IBS (Farup et al., 2012). Таким образом, несмотря на их близкое родство, эти два штамма значительно различаются по их эффективности. Более того, было обнаружено, что многочисленные другие штаммы вовсе не являются эффективными при лечении синдрома раздраженного кишечника (Bausserman and Michail, 2005; Niv et al., 2005; Kim et al., 2005; Sen et al., 2002). Более того, хотя использование бактерий-пробиотиков для улучшения желудочно-кишечного здоровья предлагалось в течение многих лет и общепризнанно в качестве безопасного, было показано, что пациенты с серьезными заболеваниями могут иметь более высокий риск серьезных осложнений при пероральном введении бактерий-пробиотиков. Besselink et al., 2008 описали клиническое испытание для пациентов со спрогнозированным тяжелым острым панкреатитом, которое показало, что многовидовой препарат жизнеспособных пробиотиков, используемый в качестве профилактики, был ассоциирован с увеличенным риском смертности по сравнению с плацебо.

Таким образом, несмотря на тот факт, что в настоящее время прилагаются большие усилия для более тщательного понимания желудочно-кишечных нарушений и для разработки соответствующих терапевтических подходов, все еще остается необходимость в предоставлении эффективных и безопасных альтернатив доступным в настоящее время подходам.

Эта потребность удовлетворяется предоставлением вариантов осуществления, охарактеризованных в формуле изобретения.

Таким образом, настоящее изобретение относится к нежизнеспособным бактериям Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одному или нескольким их фрагментам для применения в терапии (т.е. для применения в качестве лекарственного средства/для применения для лечения нарушения). В частности, изобретение также относится к этим нежизнеспособным бактериям или одному или нескольким их фрагментам для применения для лечения желудочно-кишечных нарушений, таких как IBS.

Кроме того, изобретение относится к композиции, содержащей указанные нежизнеспособные бактерии или один или несколько их фрагментов для применения в терапии, в частности, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения, такого как IBS. В частности, изобретение относится к композиции, содержащей в качестве активного ингредиента указанные нежизнеспособные бактерии, или один или несколько их фрагментов, для применения в терапии, предпочтительно для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения (такого как IBS). Более того, настоящее изобретение относится к способу получения нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов, и к бактериям, или одному или нескольким их фрагментам, получаемыми способом по изобретению, для применения в терапии, в частности, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения, такого как IBS. Изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного нарушения, такого как IBS, где способ включает введение нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов, индивидууму, нуждающемуся в этом. Более того, настоящее изобретение также относится к применению нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов, для производства лекарственного средства для лечения желудочно-кишечного нарушения, такого как IBS.

В соответствии с настоящим изобретением, нежизнеспособные бактерии представляют собой бактерии Bifidobacterium bifidum. Бифидобактерии принадлежат семейству Bifidobacteriaceae актинобактерий и представляют собой род грамположительных неподвижных часто ветвящихся анаэробных бактерий. Они являются широко распространенными обитателями желудочно-кишечного тракта, влагалища и рта млекопитающих, в том числе людей. Более того, они являются одним из основных родов бактерий, которые составляют флору толстого кишечника млекопитающих. Конкретный штамм Bifidobacterium bifidum SYN-HI-001 был депонирован в Leibniz-Institute DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Inhoffenstr. 7B, 38124 Braunschweig, Germany) 26 января 2011 под номером депозита № DSM 24514.

В соответствии с настоящим изобретением, бактерии могут быть в любой из их форм жизненного цикла, например, вегетативной или стационарной, при условии, что они являются нежизнеспособными.

Термин "нежизнеспособные бактерии", как используют в рамках изобретения, относится к бактериям, которые инактивированы, т.е. которые являются погибшими. Нежизнеспособные бактерии не имеют метаболизма и более неспособны к репликации. Определение того, способны ли бактерии к репликации, может без труда проводить специалист в данной области, например, путем посева бактерий на чашки с агаром и анализа того, способны ли они расти и формировать колонии на указанных чашках в условиях, подходящих для роста и формирования колоний жизнеспособными бактериями указанного штамма. Отсутствие формирования колоний в этих условиях указывает на то, что бактерии являются нежизнеспособными.

В соответствии с настоящим изобретением, термин "нежизнеспособные бактерии" включает как интактные нежизнеспособные бактерии, так и бактерии, которые более не являются интактными. Неограничивающие примеры нежизнеспособных бактерий, которые более не являются интактными, включают, но не ограничиваются ими, бактерии с нарушением клеточной стенки бактерий.

Кроме того, настоящее изобретение относится к "одному или нескольким фрагментам" этих нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001. Такой (a) фрагмент(ы) может, например, включать большинство молекул, которые составляют бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, но также могут ограничиваться конкретными компонентами указанных бактерий, например, такими как клеточная стенка и/или клеточная мембрана бактерий. Предпочтительно, фрагмент(ы) содержит(ат) по меньшей мере одну или несколько из молекул клеточной стенки бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001. Более предпочтительно, фрагмент(ы) содержит(ат) по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, как например, по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95%, как, например, по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% молекул клеточной стенки, присутствующих в бактериях Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001.

В соответствии с настоящим изобретением, нежизнеспособные бактерии или один или несколько их фрагментов предоставляют для применения в терапии (т.е. для применения в качестве лекарственного средства). В связи с этим, они могут быть предоставлены в любой подходящей форме, которая позволяет их введение пациенту и раскрытие их терапевтического потенциала. Например, нежизнеспособные бактерии или один или несколько их фрагментов могут быть составлены в виде композиции, как подробно описано в настоящем описании ниже, включая фармацевтическую, косметическую, пребиотическую или пищевую композицию.

В контексте настоящего изобретения, неожиданно было обнаружено, что инактивируемые нагреванием бактерии B. bifidum SYN-HI-001 эффективно улучшали симптомы IBS. Как показано в прилагаемых примерах, проводили рандомизированное, двойное слепое, многоцентровое и плацебо-контролируемое испытание и получили убедительные доказательства выраженного полезного эффекта инактивированных нагреванием бактерий B. bifidum SYN-HI-001 у пациентов с IBS. С использованием инактивированных нагреванием бактерий B. bifidum SYN-HI-001 была достигнута значительно более высокая частота ответа 33,5% по первичному конечному результату по сравнению с 19,4% для плацебо. Первичным конечным результатом исследования был составной показатель ответа в соответствии с текущими рекомендациями EMA, определяемый как улучшение на 30% показателя боли в животе и по меньшей мере одна из трех наилучших категорий параметра облегчения симптомов (боль в животе/дискомфортный ритм кишечника и другие симптомы IBS) по меньшей мере в течение 50% периода лечения. Кроме того, инактивированные нагреванием бактерии B. bifidum SYN-HI-001 значительно улучшали индивидуальные симптомы IBS в конце лечения ("Общая оценка симптомов индивидуумом" (SGA), боль в животе, растяжение/вздутие, составной показатель от 1 до 4, дискомфорт и боль, ассоциированные с актом дефекации), а также связанное со здоровьем качество жизни. В частности, показатель ответа в виде облегчения симптомов (достаточное облегчение 3) был чрезвычайно высоким 60,18% и с высокой значимостью в группе Bifidobacteria (P=0,0009).

Как известно авторам изобретения, на сегодняшний день, было показано, что ни один инактивированный нагреванием бактериальный штамм не улучшает значительно симптомы IBS или других желудочно-кишечных заболеваний по сравнению с плацебо. Tsuchiya et al. (2004), например, обнаружили, что не происходит улучшения симптомов IBS: боли, ритма дефекации и вздутия, после приема нежизнеспособных бактериальных клеток по сравнению с исходным уровнем, в то время как происходило значительное улучшение этих симптомов в случае жизнеспособных пробиотиков по сравнению с исходным уровнем и нежизнеспособными клетками. Другие группы исследовали эффективность жизнеспособность клеток по сравнению с нежизнеспособными клетками при острой диарее и обнаружили, что жизнеспособные бактерии являются важными для терапевтической эффективности (Isolauri et al., 1991; Mitra et al., 1990). Таким образом, было неоднократно обнаружено, что инактивация влияет на эффективность бактерий, что является эффектом, которым может быть объяснен штамм-специфической чувствительностью к процессу инактивации. Исследование, представленное в настоящем описании, обеспечивает первое доказательство, что инактивированные нагреванием бактерии штамма B. bifidum SYN-HI-001 обеспечивают значительные результаты по сравнению с плацебо у пациентов с IBS. Таким образом, настоящее изобретение относится к первому штамму нежизнеспособных бактерий с доказанной эффективностью in vivo при лечении IBS. В отличие от существующих композиций пробиотиков для лечения желудочно-кишечных нарушений, которые основаны на жизнеспособных бактериях, эти нежизнеспособные бактерии по настоящему изобретению, кроме того, обеспечивают сниженный риск ассоциации с неблагоприятными побочными эффектами, которые ранее описаны, например, в Besselink et al., 2008, для серьезно больных индивидуумов. Таким образом, нежизнеспособные бактерии по настоящему изобретению, а также их фрагменты, обеспечивают перспективный и безопасный новый инструмент для лечения желудочно-кишечных нарушений.

Как объяснено выше, настоящее изобретение, в частности, относится к нежизнеспособным бактериям штамма Bifidobacterium bifidum SYN-HI-001, депонированным под номером депозита № DSM 24514, или одному или нескольким их фрагментам, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения. Поскольку наличие желудочно-кишечного нарушения у индивидуума часто ассоциировано с ухудшением качества жизни указанного индивидуума, настоящее изобретение также относится к применению указанных нежизнеспособных бактерий или их фрагмента(ов), для улучшения ухудшенного качества жизни, вызванного или ассоциированного с желудочно-кишечным нарушением.

"Желудочно-кишечное нарушение", подлежащее лечению в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно выбрано из синдрома раздраженного кишечника (IBS), воспалительного заболевания кишечника (IBD), болезни Крона, язвенного колита, паучита, постинфекционного колита, диареи (включая ассоциированную с Chlostridium difficile диарею), запора, диспепсии и/или ассоциированных диспепсических синдромов, гастропареза, кишечной псевдообструкции, затрудненной дефекации, вздутия живота, увеличения размера живота, копростаза, боли в животе, дискомфорта в животе, боли, ассоциированной с кишечной перистальтикой, уменьшенного/увеличенного количества актов дефекации и жидкой формы стула. Более предпочтительно, нарушение выбрано из IBS, IBD, болезни Крона, язвенного колита, паучита, постинфекционного колита, диареи (включая ассоциированную с Chlostridium difficile диарею), запора, диспепсии и/или ассоциированных диспепсических синдромов, гастропареза и псевдообструкции кишечника. Еще более предпочтительно, желудочно-кишечное нарушение выбрано из IBS, IBD, болезни Крона, язвенного колита, паучита, постинфекционного колита и диареи. Наиболее предпочтительно, нарушение представляет собой IBS.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к композиции, содержащей нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или один или несколько их фрагментов. Термин "композиция", как используют в соответствии с настоящим изобретением, относится к композиции, которая содержит в качестве активного ингредиента по меньшей мере нежизнеспособные бактерии по изобретению или один или несколько их фрагментов. Особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95%, еще более предпочтительно по меньшей мере 98% и еще более предпочтительно по меньшей мере 99% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, находящихся в композиции, были нежизнеспособными бактериями Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514. Особенно предпочтительно, чтобы по меньшей мере 99,5%, более предпочтительно по меньшей мере 99,9% и наиболее предпочтительно, 100% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, находящихся в композиции, представляли собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

Композиция необязательно может содержать другие молекулы. Такие дополнительные молекулы могут представлять собой сами по себе активные ингредиенты, или могут быть инертными и могут быть включены для выполнения различных функций, например, таких как стабилизация нежизнеспособных бактерий по изобретению или одного или нескольких их фрагментов, или замедление, модулирование и/или активация их функций, или в качестве соединения, которое обеспечивает дополнительную пользу (для здоровья) пациенту, предусматриваемую указанной композицией. Неограничивающие примеры таких дополнительных молекул включают фармацевтически приемлемые и/или пригодные для проглатывания носители, адъюванты, другие нежизнеспособные бактериальные компоненты, дополнительные фармакологически активные вещества, белки и/или пептиды, в частности, белки и/или пептиды, которые богаты глутамином/глутаматом, липидами, углеводами, витаминами, минералами и/или микроэлементами.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель" относится к нетоксичному твердому веществу, полутвердому веществу или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующими материалу или вспомогательному веществу для состава любого типа. Примеры таких носителей включают воду, солевой раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Также являются пригодными неводные носители, такие как жирные масла и этилолеат, а также липосомы. Носитель в подходящем случае содержит незначительные количества добавок, таких как вещества, которые повышают изотоничность и химическую стабильность. Такие материалы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях, и включают буферы, такие как фосфат, цитрат, сукцинат, уксусная кислота и другие органические кислоты или их соли; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота; низкомолекулярные (менее чем приблизительно десять остатков) (поли)пептиды, например, полиаргинин или трипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота или аргинин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы включая целлюлозу или ее производные, глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; спирты сахаров, такие как маннит или сорбит; противоионы, такие как натрий; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты, полоксамеры или ПЭГ. Особенно предпочтительные носители в соответствии с настоящим изобретением включают фосфатно-солевой буфер, воду, эмульсии, такие как эмульсии масло/вода, различные типы смачивающих веществ, стерильные растворы и органические растворители, включая DMSO.

Термин "пригодный для проглатывания носитель", как используют в рамках изобретения, относится к носителю, который является пригодным для перорального введения композиции и который помогает проглатывать ингредиенты композиции. Подходящие носители могут быть без труда выбраны специалистом в данной области, в зависимости от формы, в которой вводят композицию. Для предоставления некоторых неограничивающих примеров: в качестве материала носителя для форм таблеток или капсул можно использовать целлюлозу; для порошковых форм или молочных продуктов можно использовать мальтодекстрин для введения в форме продукта питания, как подробно описано в настоящем описании ниже.

Термин "адъювант", как используют в рамках изобретения, относится к соединению, которое модулирует эффект других соединений, например, таких как нежизнеспособные бактерии по изобретению, или один или несколько его фрагментов, при наличии небольшого количества, или даже отсутствии, прямых эффектов при введении отдельно. Адъюванты часто добавляют для способствования более раннему, более мощному ответу и/или более длительному ответу на активный ингредиент, тем самым позволяя использовать более низкую дозировку. Неограничивающий примеры адъювантов включают, например, гидроксид алюминия и фосфат алюминия, органическое соединение Сквален, а также соединения, которые тестируют в настоящее время или уже квалифицированы в качестве адъювантов, например, такие как QS21, гидроксид алюминия и его производные, масляные иммерсии, липид A и его производные (например, монофосфориллипид A (MPL), CpG-мотивы, мурамилдипептид (MDP), полный адъювант Фрейнда (FCA), неполный адъювант Фрейнда (FIA) или MF59C (см., например, and Van Mechelen. Recent clinical experience with vaccines using MPL- and QS-21-containing adjuvant systems. Expert Rev Vaccines. 2011 Apr;10(4):471-86; Alving CR. Lipopolysaccharide, lipid A, and liposomes containing lipid A as immunologic adjuvants. Immunobiology. 1993 Apr;187(3-5):430-46; Petrovsky and Aguilar. (2004). "Vaccine adjuvants: current state and future trends". Immunol Cell Biol. 82 (5): 488-96; Weiner et al. (1997). Immunostimulatory oligodeoxynucleotides containing the CpG motif are effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization. PNAS 94 (20): 10833-7; Yoo et al. Adjuvant activity of muramyl dipeptide derivatives to enhance immunogenicity of a hantavirus-inactivated vaccine. Vaccine. 1998 Jan-Feb;16(2-3):216-24; Steiner et al. (1960) The local and systemic effects of Freund's adjuvant and its fractions. Archives of Pathology 70:424-434; US 6299884 B, US 6451325).

Термин "другие нежизнеспособные бактериальные компоненты", как используют в рамках изобретения, относится к нежизнеспособным бактериям или их фрагментам, где указанные бактерии не являются нежизнеспособными бактериями Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514. Неограничивающие примеры таких нежизнеспособных бактерий включают бактериальные штаммы вида Lactobacillus, Bifidobacterium, Saccharomyces, Streptococcus, Enterococcus и/или Bacillus.

Термин "фармакологически активные средства", как используют в рамках изобретения, относится к химическим или биологическим соединениям, которые являются фармацевтически активными, являясь фармацевтически переносимыми для пациента. Неограничивающие примеры включают бисакодил, лоперамид, аминосалицилат, сульфасалазин, 5-аминосалициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, бензалазина дигидрохлорид, олсалазин, балсалазид и субсалицилат висмута. В частности, фармакологически активные вещества могут быть выбраны из лекарственных средств, о которых известно, что они являются пригодными для лечения желудочно-кишечных заболеваний. Примеры таких фармакологически активных веществ известны в данной области, и они регистрируются и постоянно обновляются в фармацевтических реестрах, например, таких как "Rote Liste" в Германии.

Термин "пептид", как используют в рамках изобретения, относится к группе молекул, состоящей из вплоть до 30 аминокислот, в то время как "белки" состоят из более чем 30 аминокислот. Пептиды и белки могут дополнительно образовывать димеры, тримеры и олигомеры более высокого порядка, т.е. состоящие из более чем одной молекулы, которые могут быть идентичными или неидентичными. Следовательно, соответствующие структуры более высокого порядка, называют гомо- или гетеродимерами, гомо- или гетеротримерами и т.д. Термины "пептид" и "белок" (где "белок" используется взаимозаменяемо с "полипептидом") также относятся к модифицированными естественным образом пептидам/белкам, где модификация осуществляется, например, посредством гликозилирования, ацетилирования, фосфорилирования и т.п. Такие модификации хорошо известны в данной области. Предпочтительно используют белки и/или пептиды, богатые глутамином/глутаматом, поскольку глутамин/глутамат являются полезными для формирования клеток кишечника и восстановления поврежденной слизистой оболочки кишечника. Белки и/или пептиды, богатые глутамином/глутаматом, включают, но не ограничиваются ими, молочный белок, соевый белок и пшеничный белок.

Термин "липиды", как используют в рамках изобретения, определяют в соответствии с областью техники. Неограничивающие примеры липидов, пригодных в качестве дополнительных соединений, включают, но не ограничиваются ими, оливковое масло, соевое масло, рапсовое масло и рыбий жир.

"Углеводы" представляют собой органические соединения, состоящие только из углерода, водорода и кислорода. Неограничивающие примеры углеводов, пригодных в качестве дополнительных соединений, включают целлюлозу, лактозу, мальтодекстрин, инулин, декстрозу, маннит, фруктоолигосахарид, маннит, мальтозу, декстрин, сорбит и фруктозу.

"Витамины" в соответствии с настоящим изобретением включают растворимые в воде, а также не растворимые в воде витамины. Неограничивающие примеры витаминов, пригодных в качестве дополнительных соединений, включают витамин A (например, ретинол, ретиналь и каротиноиды, в том числе бета-каротин), витамин B1 (тиамин), витамин B2 (рибофлавин), витамин B3 (например, ниацин, ниацинамид, никотинамид), витамин B5 (пантотеновая кислота), витамин B6 (например, пиридоксин, пиридоксамин, пиридоксаль), витамин B7 (биотин), витамин B9 (например, фолиевая кислота, фолиновая кислота), витамин B12 (например, цианкобаламин, гидроксикобаламин, метилкобаламин), витамин C (аскорбиновая кислота), витамин D (например, эргокальциферол, хлоркальциферол), витамин E (например, токоферолы, токотриенолы) и витамин K (например, филлохинон, менахиноны).

Особенно предпочтительными витаминами являются витамины группы B, такие как витамин B1 (тиамин), витамин B2 (рибофлавин), витамин B3 (например, ниацин, ниацинамид, никотинамид), витамин B5 (пантотеновая кислота), витамин B6 (например, пиридоксин, пиридоксамин, пиридоксаль), витамин B7 (биотин), витамин B9 (например, фолиевая кислота, фолиновая кислота) и витамин B12 (например, цианкобаламин, гидроксикобаламин, метилкобаламин).

Неограничивающие примеры минералов, пригодных в качестве дополнительных соединений, включают магний, кальций, цинк, селен, железо, медь, марганец, хром, молибден, калий, ванадий, бор и титан. Особенно предпочтительными минералами являются магний и кальций.

Термин "микроэлемент", как используют в рамках изобретения, относится к химическому элементу, который требуется только в очень низких количествах для роста, развития и/или физиологии организма, предпочтительно организма человека. Неограничивающие примеры микроэлементов, пригодных в качестве дополнительных соединений, включают йод, медь или железо.

Подходящие соотношения между нежизнеспособными бактериями или их фрагментом(ами) и такими дополнительными молекулами могут быть без труда определены специалистом в данной области.

Например, 15-40 г, предпочтительно 18-35 г, более предпочтительно 20-30 г, еще более предпочтительно 22-28 г, и наиболее предпочтительно 25 г нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) можно смешивать с 50-100 г, предпочтительно с 60-90 г, более предпочтительно с 65-85 г, еще более предпочтительно с 70-80 г, и наиболее предпочтительно с 75 г одного или нескольких углеводов (предпочтительно, один или несколько пребиотиков или мальтодекстрин), одного или нескольких фармацевтически приемлемых соединений, или их смесей. Указанную смесь можно необязательно дополнительно смешивать с 30-70 г, предпочтительно с 35-65 г, более предпочтительно с 40-60 г, еще более предпочтительно с 45-55 г, и наиболее предпочтительно с 50 г одного или нескольких фармацевтически приемлемых и/или пригодных для проглатывания носителей, одного или нескольких адъювантов, одного или нескольких других нежизнеспособных бактериальных компонентов, одного или нескольких дополнительных фармакологически активных веществ, одного или нескольких белков и/или пептидов, одного или нескольких липидов, одного или нескольких дополнительных углеводов, одного или нескольких витаминов, одного или нескольких минералов, одного или нескольких микроэлементов или смеси любой их этих молекул.

В более предпочтительном примере нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) смешивают с одним или несколькими углеводами, предпочтительно одним или несколькими пребиотиками, в указанных выше предпочтительных количествах. Указанную смесь можно необязательно дополнительно смешивать с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, одним или несколькими дополнительными углеводами, одним или несколькими витаминами, одним или несколькими минералами, одним или несколькими микроэлементами или смесью любых из этих молекул в указанных выше предпочтительных количествах.

В еще более предпочтительном варианте осуществления нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) смешивают с одним или несколькими углеводами, предпочтительно одним или несколькими пребиотиками или мальтодекстрином, в указанных выше предпочтительных количествах, и дополнительно смешивают с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, одним или несколькими дополнительными углеводами, одним или несколькими витаминами, одним или несколькими минералами, одним или несколькими микроэлементами или смесью любых из этих молекул в указанных выше предпочтительных количествах.

В еще более предпочтительном варианте осуществления нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) смешивают с мальтодекстрином и фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно целлюлозой, в описанных выше предпочтительных количествах. Наиболее предпочтительно, нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) смешивают с мальтодекстрином и целлюлозой в соотношении приблизительно 1:3:2 (в расчете на массу), как например, 25 г нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) смешивают с 75 г мальтодекстрина и 50 г целлюлозы.

В соответствии с настоящим изобретением особенно предпочтительно, чтобы композиция по изобретению содержала нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или один или несколько их фрагментов в качестве единственного активного вещества. Кроме того, особенно предпочтительно, чтобы композиция по настоящему изобретению не содержала дополнительных бактериальных компонентов, отличных от нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов.

Композиция по изобретению может представлять собой композицию любого типа, например, такую как фармацевтическая композиция, композиция пребиотика или пищевая композиция. Особенно предпочтительно, чтобы композиция представляла собой фармацевтическую композицию или пищевую композицию.

Для композиции пребиотика, композиция, кроме того, содержит "соединение-пребиотик". Термин "соединение-пребиотик", как используют в рамках изобретения, относится к не перевариваемое соединение, которое при проглатывании индивидуумом обеспечивает пользу для указанного индивидуума, вследствие селективной стимуляции роста и/или активации одной или нескольких полезных бактерий, которые присутствуют в кишечнике указанного индивидуума. Таким образом, соединение-пребиотик позволяет изменение баланса бактериальной флоры. Предпочтительно, композиция пребиотика по настоящему изобретению содержит, в дополнение к нежизнеспособным бактериям по изобретению, или одному или нескольким их фрагментам, инулин и/или фруктоолигосахарид в качестве соединения-пребиотика.

Инулин представляет собой растворимое соединение, которое принадлежит химически семейству фруктанов, т.е. полисахаридам, которые образованы из линейных цепей фруктозы (вплоть до 100 молекул фруктозы) с концевым остатком глюкозы. В данной области известно, что употребление инулина приводит к увеличенному присутствию бифидобактерий и лактобацилл в кишечнике. Лактобациллы продуцируют молочные ферменты, которые важны для правильного пищеварения и для здоровья толстого кишечника. В то же время, наблюдают массивное снижение количества вредоносных бактерий в кишечнике.

Фруктоолигосахариды представляют собой более короткие олигосахариды фруктаны (вплоть до 10 молекул фруктозы), которые являются резистентными к гидролизу слюной и пищеварительными ферментами кишечника. В толстом кишечнике они ферментируются анаэробными бактериями, тем самым улучшая общее состояние здоровья желудочно-кишечного тракта.

Композиция по настоящему изобретению также может иметь форму пищевой композиции. Термин "пищевая композиция", как используют в рамках изобретения, относится к любой пище, пригодной для употребления человеком или животными. Неограничивающие примеры таких "пищевых композиций", таким образом, включают, например, корма для животных, например, прессованный и гранулированный корм для животных, или грубо перемешенный корм, а также пищу для употребления человеком, как в виде твердых, так и в виде жидких продуктов питания, таких как напитки, включая питьевую воду и молочные продукты, как более подробно описано ниже. Таким образом, термин включает, но не ограничивается ими, продукт питания, пищевую добавку или биологически активную добавку.

Термин "пищевая добавка", как используют в рамках изобретения, относится к произведенному продукту, предназначенному для дополнения рациона человека или животного при пероральном приеме и, как правило, предоставляемому в форме пилюли, капсулы, таблетки или жидкости, упакованной в единичную или многократную дозированную форму. Пищевые добавки, как правило, не обеспечивают значительных количеств калорий, но могут содержать другие микронутриенты, например, такие как витамины или минералы. Термин "питательная добавка" в соответствии с настоящим изобретением относится к композиции, содержащей пищевую добавку в комбинации с источником калорий. Например, питательные добавки могут представлять собой заменители пищи или добавки, например такие как питательные или энергетические батончики, питательные напитки и концентраты.

Предпочтительно, пищевая композиция представляет собой молочный продукт. Неограничивающие примеры молочных продуктов включают скисшее молоко, десерты на основе молока, гуманизированное молоко, молочный порошок, молочный концентрат, соусы на молочной основе, молочные напитки, а также ферментированные молочные продукты, например, такие как йогурт, включая замороженный йогурт, йогуртовые препараты, такие как йогуртовые напитки, сброженные сливки, кефир, сметану, крем-фреш, сыр и плавленый сыр. Термин "молочный продукт", как используют в рамках изобретения, включает продукты либо животного (т.е. молочные продукты), либо растительного (т.е. немолочные продукты) происхождения. Молочные продукты животного происхождения включают продукты, полученные из молока, полученного, например, от коровы, овцы, козы или буйвола. Молочные продукты растительного происхождения включают ферментированные продукты растительного происхождения, такие как продукты, полученные из соевого молока, рисового молока, миндального молока, кокосового молока или злакового молока (например, молоко из овса).

В соответствии с настоящим изобретением, композиция может быть в твердой или жидкой форме и может быть составлена общепринятыми способами. Например, способы составления фармацевтических композиций описаны в данной области, например, в "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Pharmaceutical Press, 22^nd edition. Как правило, композиции получают путем приведения в контакт компонентов композиции до однородного состояния и равномерно с желаемыми дополнительными соединениями. Затем при необходимости продукту придают форму желаемого состава.

В зависимости от типа композиции, композиции могут быть составлены в различных формах. Например, фармацевтические, а также пребиотические композиции можно составлять в виде дозированных форм для перорального, парентерального, такого как внутримышечное, внутривенное, подкожное, внутрикожное, внутриартериальное, внутрисердечное, ректального, назального, местного, аэрозольного или вагинального введения. Особенно предпочтительными являются дозированные формы для перорального введения. Для перорального введения композицию составляют для введения посредством перорального приема, в частности, путем проглатывания. Таким образом, композицию можно вводить, чтобы она прошла через рот в желудочно-кишечный тракт. Неограничивающие примеры предпочтительных форм для перорального введения включают покрытые и непокрытые таблетки, мягкие желатиновые капсулы, твердые желатиновые капсулы, пастилки, лепешки, крахмальные капсулы, лепешки, капсулы, растворы, эмульсии, суспензии, сиропы, эликсиры, порошки и гранулы для разбавления, диспергируемые порошки и гранулы (например, асептически упакованные порошки или гранулы), медицинские жевательные резинки, жевательные таблетки и шипучие таблетки, которые могут содержать вкусовые добавки или красители, для применений для немедленного, отсроченного, модифицированного, замедленного, импульсного или контролируемого высвобождения. Композиция также может быть включена в пищевые продукты для получения пищевой композиции.

Таблетки могут содержать эксципиенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, цитрат натрия, карбонат кальция, двухосновный фосфат кальция и глицин, разрыхлители, такие как крахмал (предпочтительно кукурузный, картофельный или маниоковый крахмал), натрия крахмала гликолят, кроскармеллоза натрий и определенные комплексные силиката, и связующие вещества для гранулирования, такие как поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза (HPMC), гидроксипропилцеллюлоза (HPC), сахароза, желатин и гуммиарабик. Кроме того, могут быть включены смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, глицерилбегенат и тальк. Также в качестве наполнителей желатиновых капсул можно использовать твердые композиции сходного типа. Предпочтительные эксципиенты в этом отношении включают лактозу, крахмал, целлюлозу или высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Для водных суспензий и/или эликсиров нежизнеспособные бактерии по изобретению, или один или несколько их фрагментов, можно комбинировать с различными подсластителями или вкусовыми добавками, красителями или пигментами, с эмульгирующими и/или суспендирующими веществами и с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль и глицерин, и их комбинации.

Как упоминалось, нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) или композиция по изобретению предназначены для применения в терапии, более конкретно, для применения для лечения желудочно-кишечного нарушения. Таким образом, терапевтически эффективное количество нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов предназначено для применения в соответствии с настоящим изобретением. Будет понятно, что длительность лечения, необходимая для наблюдения изменений и интервал после лечения для возникновения ответов, варьируются в зависимости от конкретного медицинского применения. Конкретные количества и время могут быть определены посредством общепринятых тестов, которые хорошо известны специалисту в данной области.

Например, для фармацевтической композиции режим дозирования обычно определяется лечащим врачом, и он зависит от клинических факторов. Как хорошо известно в области медицины, дозировки для любого пациента зависят от многих факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное вводимое соединение, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные средства, которые вводят совместно. Терапевтически эффективное количество для данной ситуации может быть без труда определено путем стандартного экспериментирования, и его определение зависит от способностей и мнения клинициста или врача. Предполагаемая, но не ограничивающая доза для перорального введения человеку (с массой тела приблизительно 70 кг) может составлять от 0,05 до 2000 мг, предпочтительно от 0,1 мг до 1000 мг активных ингредиентов на единичную дозу. Единичную дозу можно вводить, например, от 1 до 3 раз в сутки. Единичную дозу также можно вводить от 1 до 14 раз в неделю, например, посредством от одного до двух введений в сутки. Сходные количества и интервалы между введениями также пригодны для других типов композиций, таких как пребиотические или пищевые композиции.

Будет понятно, что может быть необходимым внесение стандартных изменений в дозировку в зависимости от возраста и массы тела пациента/индивидуума, а также тяжести состояния, подвергаемого лечению. Точная доза, а также путь введения, в конечном итоге будут зависеть от мнения лечащего врача или ветеринара. Как правило, компоненты фармацевтической композиции для применения для терапевтического введения должны быть стерильными.

В соответствии с настоящим изобретением особенно предпочтительно, чтобы нежизнеспособные бактерии вводились перорально в суточном количестве по меньшей мере приблизительно 10² нежизнеспособных клеток. Более предпочтительно, нежизнеспособные бактерии вводят перорально в суточном количестве по меньшей мере приблизительно 10³, таком как по меньшей мере приблизительно 10⁴, таком как по меньшей мере приблизительно 10⁵, таком как по меньшей мере приблизительно 10⁶, таком как по меньшей мере приблизительно 10⁷, или таком как по меньшей мере приблизительно 10⁸ нежизнеспособных клеток и, наиболее предпочтительно, в суточном количестве по меньшей мере приблизительно 10⁹ нежизнеспособных клеток. Особенно предпочтительно, чтобы интервал между введениями составлял приблизительно 24 часа, более предпочтительно ровно 24 часа, в течение всего периода лечения.

Кроме того, предпочтительно, чтобы введение нежизнеспособных бактерий осуществлялось перорально в качестве двух единиц дозированной формы в сутки, например, таких как две таблетки или две капсулы в сутки. Предпочтительно, каждая единица дозированной формы содержит по меньшей мере приблизительно 5×10¹ нежизнеспособных клеток, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 5×10², как например, по меньшей мере приблизительно 5×10³, как например, по меньшей мере приблизительно 5×10⁴, как например, по меньшей мере приблизительно 5×10⁵, как например, по меньшей мере приблизительно 5×10⁶, как например, по меньшей мере приблизительно 5×10⁷ нежизнеспособных клеток и наиболее предпочтительно каждая единица дозированной формы содержит по меньшей мере приблизительно 5×10⁸ нежизнеспособных клеток. Таким образом, посредством введения двух единиц дозированной формы в сутки будут вводиться описанные выше предпочтительные общие количества по меньшей мере приблизительно от 10² до 10⁹ нежизнеспособных клеток в сутки. Кроме того, особенно предпочтительно, чтобы вводилось суточное количество нежизнеспособных бактерий, например, такое как две таблетки или две капсулы в сутки, за один раз, и предпочтительно всегда приблизительно в одно и то же время дня, наиболее предпочтительно с приемом пищи. Иными словами, когда общее суточное количество вводят форме двух таблеток или двух капсул, предпочтительно, чтобы обе таблетки/капсулы принимались одновременно.

Наиболее предпочтительно, желудочно-кишечное нарушение, подвергаемое лечению посредством указанных выше предпочтительных количеств, представляет собой IBS.

Предпочтительные количества пребиотического соединения в соответствии с настоящим изобретением включают по меньшей мере 1 г, предпочтительно по меньшей мере 2 г, более предпочтительно по меньшей мере 3 г, еще более предпочтительно по меньшей мере 4 г, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 5 г соединения-пребиотика на 1 г нежизнеспособных клеток и/или фрагмента(ов), более предпочтительно на 10⁸ нежизнеспособных клеток (или фрагмента(ов)).

Нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) или композицию по изобретению можно вводить в виде монотерапии (например, без сопутствующего введения каких-либо дополнительных терапевтических средств, или без сопутствующего введения каких-либо дополнительных терапевтических средств против того же заболевания, которое намереваются лечить или предупреждать посредством нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) или композиции по изобретению). Однако нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) или композицию по изобретению также можно вводить в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Если нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)) или композицию по изобретению используют в комбинации со вторым активным веществом терапевтического средства против того же заболевания или состояния, доза каждого вещества может отличаться от дозы, когда соответствующее вещество используют отдельно, в частности, можно использовать более низкую дозу каждого вещества. Комбинация нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) или композиции по изобретению с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами может включать одновременное/сопутствующее введение нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) или композиции по изобретению и дополнительного терапевтического средства(средств) (либо в одном фармацевтическом составе, либо в различных фармацевтических составах), или последовательное/отдельное введение нежизнеспособных бактерий (или их фрагмента(ов)) или композиции по изобретению и дополнительного терапевтического средства(средств)). Если введение является последовательным, сначала можно вводить либо нежизнеспособные бактерии (или их фрагмент(ы)), либо композицию по изобретению или одно или несколько дополнительных терапевтических средств. Если введение является одновременным, одно или несколько дополнительных терапевтических средств могут быть включены в тот же фармацевтический состав, что и нежизнеспособные бактерии (или фрагмент(ы)) или композиция по изобретению, или их можно вводить в двух или более различных (отдельных) фармацевтических составах.

Индивидуумом или пациентом, подвергаемым лечению в соответствии с настоящим изобретением, может быть животное (например, не являющееся человеком животное). Предпочтительно, индивидуумом/пациентом является млекопитающее. Более предпочтительно, индивидуумом/пациентом является человек (например, мужчина или женщина) или не являющееся человеком млекопитающее (например, такое как морская свинка, хомячок, крыса, мышь, кролик, собака, кошка, лошадь, обезьяна макака, человекообразная обезьяна, мартышка, павиан, горилла, шимпанзе, орангутан, гиббон, овца, крупный рогатый скот или свинья). Наиболее предпочтительно, индивидуумом/пациентом, подвергаемым лечению в соответствии с изобретением, является человек.

Кроме того, предпочтительно, чтобы нежизнеспособные бактерии, или один или несколько их фрагментов, или композиция, вводились или подлежали введению индивидууму с ослабленным иммунитетом. Индивидуумом с "ослабленным иммунитетом" является любой индивидуум, чья иммунная система является неполностью функциональной. Например, иммунная система указанного индивидуума может быть неспособна бороться с инфекционными заболеваниями и/или злокачественной опухолью. Таких индивидуумов также называют индивидуумами, имеющими "иммунодефицит". Индивидуум может быть рожден с иммунодефицитом (первичный иммунодефицит), или он может приобретать иммунодефицит (вторичный иммунодефицит), например, вследствие ВИЧ-инфекции, пожилого возраста или факторов внешней среды, таких как нарушение питания. Кроме того, определенные лекарственные средства, такие как стероиды, которые часто назначают в контексте хирургической операции по трансплантации органов в качестве меры против отторжения и у пациентов, страдающих от гиперактивной иммунной системы, как при аутоиммунных заболеваний, могут приводить к иммуносупрессии. Предпочтительно, индивидуумом с иммунодефицитом является человек. Более предпочтительно, индивидуумом с иммунодефицитом является человек, имеющий первичный иммунодефицит, человек, имеющий вторичный иммунодефицит, предпочтительно вследствие ВИЧ-инфекции, или человек, чья иммунная система подвергнута медицинской супрессии.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, или одного или нескольких их фрагментов, причем способ включает: (a) предоставление бактерий Bifidobacterium bifidum штамма, депонированного под номером депозита № DSM 24514; и (b) инактивацию бактерий, предоставленных на стадии (a), с получением нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, или одного или нескольких их фрагментов.

В соответствии с этим способом по изобретению, бактерии штамма Bifidobacterium bifidum, депонированного под номером депозита № DSM 24514, предоставляют на первой стадии. Для предоставления достаточных количеств этих бактерий, их можно культивировать и амплифицировать перед стадией (a) способами, известными в данной области; например, как описано в "Probiotics and Health Claims", Wolfgang Kneifel, Seppo Salminen, John Wiley & Sons; 1. Edition (7 January 2011). Например, жизнеспособные клетки B. bifidum SYN-HI-001 могут быть выращены в богатой белком жидкой среде для роста. Как правило, подходящая среда для выращивания и/или ферментации штамма Bifidobacterium bifidum в соответствии со стадией (a) включает по меньшей мере воду, декстрозу, дрожжевой экстракт и минералы. Обычно используемой стандартной средой является бульон MRS (Difco, Detroit, MI, США), дополненный 0,05% гидрохлоридом L-цистеина (cMRS). Специалисту в данной области хорошо известно, что также другие среды можно использовать для выращивания, ферментация и предварительного культивирования бактериальных организмов. Как правило, инокулируют объем стандартной среды, составляющий по меньшей мере 200 мл, предпочтительно по меньшей мере 300 мл, более предпочтительно по меньшей мере 400 мл, еще более предпочтительно по меньшей мере 500 мл и наиболее предпочтительно по меньшей мере 600 мл с по меньшей мере одной клеткой бактериального штамма и культуру выращивают в течение ночи в анаэробных условиях, например, при 37°C при 220 об/мин. Кроме того, можно проводить дополнительные стадии ферментации, например, в более высоких объемах.

На второй стадии (стадия (b)), бактерии инактивируют с получением нежизнеспособных бактерий. Средства и способы инактивации бактерий хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются ими, инактивацию под действием нагревания, давления, ультразвука, облучения, например, такого как облучение ультрафиолетовыми лучами, сушки, импульсного электрического поля (PEF), надкритического уровня CO₂ и/или изменения pH. Предпочтительно, инактивация представляет собой инактивацию нагреванием. Инактивацию можно проводить непосредственно в емкости для ферментации или в отдельной емкости. Стадию (b) можно проводить один раз или можно повторять настолько часто, насколько считается необходимым. Успешную инактивацию можно тестировать перед дальнейшим применением препарата путем посева аликвоты инактивированного бактериального препарата на культуральную среду и культивирования в стандартных условиях.

После инактивации на стадии (b) полученную композицию можно использовать как есть или можно далее перерабатывать. Дальнейшая переработка включает одну или несколько дополнительных стадий способа, например, для сбора и/или очистки нежизнеспособных бактерий или их конкретных фрагментов. Средства и способы для таких стадий сбора и/или очистки хорошо известны в данной области и включают, например центрифугирование, например, такое как центрифугирование с использованием дисковой центрифуги или сепаратора (например, предоставляемого GEA Westfalia Separator Group GmbH (Oelde, Германия)). Затем клетки можно стабилизировать, лиофилизировать, перемалывать и просеивать с использованием стандартных средств и способов. Все из описанных выше способов известны в данной области и описаны, например в "Probiotics and Health Claims", Wolfgang Kneifel, Seppo Salminen, John Wiley & Sons; 1. Edition (7 January 2011), "Modelling microorganisms in food", Stanley Brul, Suzanne Van Gerwen, Marcel Zwietering; 1. Edition (2007) и "Probiotic bacteria: fundamentals, therapy, and technological aspects", J. Paulo Sousa e Silva and Ana C. Freitas; 1. Edition (2014).

Способ может включать дополнительную стадию фрагментации нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, с получением одного или нескольких фрагментов бактерий. Эту стадию также можно комбинировать со стадией (b), т.е. стадией инактивации бактерий. Например, инактивацию на стадии (b) можно проводить в условиях, которые являются достаточно жесткими, и применять в течение достаточно длительного периода времени, чтобы происходило разрушение бактерий. Такие способы включают, например, любой из кипячения бактерий, например, в смеси этанол/вода или смеси пропанол/вода (или любой из экстракции раствором или смесью растворителей, которые пригодны для экстракции полярных и неполярных веществ), проведение размораживания-оттаивания бактерий (например, множества циклов замораживания-оттаивания), воздействие на бактерии ультразвука, обработку бактерий детергентом, таким как додецилсульфат натрия (SDS), октилфеноксиполиэтоксиэтанол (например, Nonidet P-40 или IGEPAL CA-630), Triton X-100, н-додецил-β-D-мальтопиранозид (DDM), дигитонин, полисорбат 20 (например, Tween 20), полисорбат 80 (например, Tween 80), 3-[(3-хлорамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат (CHAPS), мочевина, холат, лауроилсаркозинат натрия (саркозил) или любая их комбинация. После разрушения бактерий представляющие интерес фрагменты можно выделять на дополнительной стадии (c), если желательно. Например, клеточную стенку (фракции) и/или клеточную мембрану (фракции), можно отделять от остальной части бактериальных клеток, например, цитоплазмы и компонентов цитоплазмы, различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, фильтрацию, с использованием фильтра с размером пор от приблизительно 0,5 мкм до приблизительно 2 мкм, более предпочтительно приблизительно 1 мкм, и центрифугирование.

В иллюстративном варианте осуществления можно использовать следующий подход: жизнеспособные бактерии штамма Bifidobacterium bifidum, депонированные под номером депозита № DSM 24514, выращивают в богатой белком жидкой среде для роста, инактивированной нагреванием в емкости для ферментации, центрифугируют, а затем лиофилизируют, перемалывают и просеивают. Более того, затем инактивированные бактерии в форме сухого порошка можно смешивать с эксципиентом и заполнять им капсулы, такие как непокрытые целлюлозные капсулы, в количестве приблизительно 0,5×10⁹ нежизнеспособных бактерий.

Затем нежизнеспособные бактерии, полученные или получаемые способом по настоящему изобретению, можно использовать в терапии, в частности, для лечения желудочно-кишечного нарушения, как описано в настоящем описании выше.

Как используют в рамках изобретения, термины "необязательный", "необязательно" и "может" означают, что указанный признак может присутствовать, но также может отсутствовать. Когда используют термин "необязательный", "необязательно" или "может", настоящее изобретение, в частности, относится к обеим возможностям, т.е. что соответствующий признак присутствует или альтернативно что соответствующий признак отсутствует. Например, если указано, что компонент композиции "может" присутствовать, изобретение, в частности, относится к обеим возможностям, т.е. что соответствующий компонент присутствует (содержится в композиции) или что соответствующий компонент отсутствует в композиции.

Как используют в рамках изобретения, если явно не указано иное или если контекст этому явно не противоречит, форму единственного числа используют взаимозаменяемо с термином "один или несколько" и "по меньшей мере один". Таким образом, например, композиция, содержащая "некоторое" конкретное соединение, например, носитель, может быть интерпретирована как композиция, содержащая "один или несколько" из указанных конкретных соединений, например, один или несколько носителей.

Как используют в рамках изобретения, термин "приблизительно" предпочтительно относится к ±10% от указанной числовой величины, более предпочтительно к ±5% от указанной числовой величины, и, в частности, к точной указанной числовой величине. Если термин "приблизительно" используют применительно к конечным результатам диапазона, он предпочтительно относится к диапазону от нижней границы -10% от указанной числовой величины до верхней границы +10% от этой указанной числовой величины, более предпочтительно, к диапазону от нижней границы -5% до верхней границы +5%, и еще более предпочтительно к диапазону, определяемому конкретными числовыми величинами нижней границы и верхней границы. Если термин "приблизительно" используют применительно к конкретной границе открытого диапазона, он предпочтительно относится к соответствующему диапазону, начиная с нижней границы -10% или от верхней границы +10%, более предпочтительно к диапазону, начиная с нижней границы -5% или с верхней границы +5%, и еще более предпочтительно к открытому диапазону определяемому точной числовой величиной соответствующей границы. Если термин "приблизительно" используют применительно к параметру, который количественно определяется целыми числами, количества, соответствующие ±10% или ±5% от указанной числовой величины, округляют до ближайшего целого числа (с использованием правила равноудаленности "округление выше половины вверх").

Как используют в рамках изобретения, термин "содержащий" (или "содержать", "содержит", "включать", "включает" или "включающий"), если нет иных явных указаний или если контекст этому не противоречит, имеет значение "включающий, среди прочего", т.е. "включающий, среди других необязательных элементов…". В дополнение к этому, этот термин также включает более узкие значения "по существу состоящий из" и "состоящий из". Например, термин "A, содержащий B и C," имеет значение "A, содержащий, среди прочих, B и C", где A может содержать дополнительные необязательные элементы (например, также охватываются "A, содержащий B, C и D"), однако этот термин также включает значение "A, по существу состоящий из B и C" и значение "A, состоящий из B и C" (т.е. никакие другие компоненты, отличные от B и C, не содержатся в A).

Если нет иных конкретных указаний, все свойства и параметры, упоминаемые в настоящем описании (включая, например, любые количества/концентрации, указанные в "мг/мл", в "% (масс./об.)" (т.е. мг/100 мкл) или в "% (об./об.)", а также любые значения pH), предпочтительно определяют в условиях стандартной температуры окружающей среды и давления, в частности при температуре 25°C (298,15 K) и при абсолютном давлении 101,325 кПа (1 атм).

Как используют в рамках изобретения и если контекст не указывает на иное, термин "лечение" или "лечащий" (заболевание или нарушение) относится к излечению, смягчению, снижению или предупреждению одного или нескольких симптомов или клинически значимых проявлений заболевания или нарушения, или к смягчению, обращению вспять или устранению заболевания или нарушения, или к предупреждению возникновения заболевания или нарушения, или к предупреждению, снижению или замедлению прогрессирования заболевания или нарушения. Например, "лечение" индивидуума или пациента, у которого не идентифицировано симптомов или клинически значимых проявлений соответствующего заболевания или нарушения, представляет собой превентивное или профилактическое лечение, в то время как "лечение" индивидуума или пациента, у которого идентифицированы симптомы или клинически значимые проявления соответствующего заболевания или нарушения, может представлять собой, например, излечивающее или паллиативное лечение. Каждая из этих форм лечения может считаться отдельным аспектом настоящего изобретения.

"Лечение" нарушения или заболевания может приводить, например, к остановке прогрессирования нарушения или заболевания (например, без ухудшения симптомов) или замедлению прогрессирования нарушения или заболевания (в случае, если остановка прогрессирования имеет только временный характер). "Лечение" нарушения или заболевания также может приводить к частичному ответу (например, облегчению симптомов) или полному ответу (например, исчезновению симптомов) индивидуума/пациента, страдающего от нарушения или заболевания. Таким образом, "лечение" нарушения или заболевания также может относиться к смягчению нарушения или заболевания, которое может приводить, например, к остановке прогрессирования нарушения или заболевания или замедлению прогрессирования нарушения или заболевания. После такого частичного или полного ответа может следовать рецидив. Следует понимать, что индивидуум/пациент может испытывать широкий диапазон ответов на лечение (таких как иллюстративные ответы, как описано в настоящем описании выше). Лечение нарушения или заболевания может включать, среди прочего, излечивающее лечение (предпочтительно ведущее к полному ответу и в конечном итоге к излечению от нарушения или заболевания), паллиативное лечение (включающее облегчение симптомов) или профилактическое лечение (включая предупреждение) нарушения или заболевания.

Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают тем же значением, которое обычно подразумевает специалист в области, к которой относится настоящее изобретение. В случае противоречия, описание патента, включая определения, имеет приоритет.

Следует понимать, что настоящее изобретение, в частности, относится к каждой комбинации признаков и вариантов осуществления, описанных в настоящем описании, включая любую комбинацию основных и/или предпочтительных признаков/вариантов осуществления.

Аналогично и также в случаях, когда в независимых и/или зависимых пунктах формулы изобретения не указаны альтернативы, понятно, что, если в зависимых пунктах формулы изобретения приводится отсылка к нескольким предшествующим пунктам формулы изобретения, любая комбинация объектов, охватываемых ими, считается в явной форме раскрытой. Например, в случае независимого пункта 1 формулы изобретения, зависимого пункта 2 формулы изобретения с отсылкой к п.1 формулы изобретения и зависимого пункта 3 формулы изобретения с отсылкой как к п.2, так и к п.1, комбинация объектов пп.3 и 1 является явно и недвусмысленно раскрытой, также как и комбинация объектов пп.3, 2 и 1. В случае, если присутствует следующий зависимый п.4 формулы изобретения, который относится к любому из пп.1-3, следует, что комбинация объекта по пп.4 и 1, пп.4, 2 и 1, пп.4, 3 и 1, а также пп.4, 3, 2 и 1 явно и недвусмысленно раскрыта.

Описанные выше аспекты применимы с соответствующими поправками ко всем прилагаемым пунктам формулы изобретения. Чтобы привести неограничивающий пример комбинация пп.18, 16 и 2 формулы изобретения явно и недвусмысленно предусматривается ввиду структуры формулы изобретения. То же самое применимо к комбинации пп.18, 16 и 12 формулы изобретения, или к комбинации пп.18, 16 и 5 и т.д.

На фиг. показано:

Фиг.1: Схема исследования. Исследование в течение 12 недель, включающее подготовку, лечение и период вымывания с пятью посещениями врача.

Фиг.2: Принципиальная схема исследования пациентов. Реальный препарат=инактивированные нагреванием B. bifidum SYN-HI-001.

Фиг.3: Составные показатели ответа (показатель ответа в виде адекватного облегчения в комбинации с показателем ответа на боль) в ходе лечения в популяции "с намерением лечения" (ITT) и "без отклонений от протокола" (PP).

Фиг.4: Динамика составного показателя ответа (показатель ответа в виде адекватного облегчения в комбинации с показателем ответа на боль) в ходе обоих интервалов лечения. Значимо больше отвечающих пациентов в группе B. bifidum SYN-HI-001 в ходе обоих интервалов лечения.

Фиг.5: Показатель ответа в виде адекватного облегчения в ходе лечения.

Фиг.6: Сравнение эффектов B. bifidum SYN-HI-001 и плацебо в отношении облегчения симптомов (сообщенного по шкале 1-7) на еженедельной основе. Значимое улучшение в группе Bifidobacteria против группы плацебо со второй недели лечения до конца лечения.

Фиг.7: Пациенты с улучшением IBS-SSS ≥50% в конце лечения в популяции "с намерением лечиться" (ITT) и "без отклонений от протокола" (PP).

Фиг.8: Значимое снижение суммарного показателя IB-SSS (0-500) посредством B. bifidum SYN-HI-001 по сравнению с плацебо в отношении изменений средних показателей от исходного уровня до конца лечения в популяции с "намерением лечиться" (ITT) и "без отклонений от протокола" (PP).

Фиг.9: Значимое снижение симптомов IBS при оценке на суточной основе посредством B. bifidum SYN-HI-001 по сравнению с плацебо, на основе изменений средних показателей от исходного уровня до конца лечения (популяция "с намерением лечиться", ITT). Составной показатель 1-4=арифметическое среднее значение четырех индивидуальных оценок симптомов (SGA, боль, растяжение/вздутие, неотложный позыв).

Фиг.10: Значимое снижение симптомов IBS, оцененных на еженедельной основе, посредством B. bifidum SYN-HI-001 по сравнению с плацебо на основе изменений средних показателей от исходного уровня до конца лечения (популяция "с намерением лечиться", ITT).

Фиг.11: Значимое снижение суммарной оценки SF-12 и суммарной оценки психического здоровья посредством B. bifidum SYN-HI-001 по сравнению с плацебо на основе изменений средних показателей от исходного уровня до конца лечения (популяция "с намерением лечиться", ITT).

Следующие примеры иллюстрируют изобретение.

Пример 1: Двойное слепое, многоцентровое, рандомизированное и плацебо-контролируемое исследование по оценке эффективности инактивируемых нагреванием B. bifidum SYN-HI-001 у пациентов с синдромом раздраженного кишечника

1.1 Исследуемая выборка

Пациентов привлекали из исполнителей исследования и посредством рекламы. Протокол испытания был представлен Ethics Committee в Physicians Chamber of Hamburg для получения консультативного заключения. Были включены индивидуумы в возрасте от 18 до 65 лет с IBS в соответствии с критериями Rome III. Были исключены индивидуумы с воспалительными органическими желудочно-кишечными заболеваниями, системными заболеваниями, злокачественной опухолью, аутоиммунными заболеваниями, диабетом, известной лактозной непереносимостью или иммунодефицитом, абдоминальной хирургической операцией (за исключением аппендэктомии, хирургической операции по поводу грыжи, холецистэктомии или кесарева сечения), отсутствием диагностического результата сигмоидоскопии или колоноскопии в пределах последних пяти лет для пациентов старше 55 лет, диагностированного гипертиреоидизма, применения антипсихотических средств в течение по меньшей мере 3 месяцев или системных кортикостероидов в течение по меньшей мере одного месяца перед началом испытания, значительным психиатрическим нарушением, глютеновой болезнью или беременностью.

1.2 Схема испытания

Испытание проводили в качестве проспективного, многоцентрового, рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого интервенционного испытания из двух звеньев. На протяжении испытания пациенты регистрировали их общие симптомы IBS, а также индивидуальные симптомы IBS, с использованием дневника пациента. Кроме того, пациентов опрашивали в медицинском центре в отношении общих и индивидуальных симптомов (посещения 2-5) и качества жизни (посещения 2-4). Посещения врача проводились при скрининге, после подготовительной фазы в течение двух недель (рандомизация), после лечения в течение 4 недель (контрольное посещение), после 8 недель (конец лечения) и после дополнительной фазы вымывания в течение двух недель (конец испытания) (фиг.1).

После того, как пациенты давали письменное информированное согласие, их направляли на скрининговое обследование при 1 посещении (0 сутки), которое включало полный медицинский анамнез и физикальное обследование. Проводили взятие образца крови для анализа в центральной лаборатории, включая тест на беременность для женщин. Пациентов инструктировали не менять их пищевые привычки и образ жизни на протяжении испытания. Им выдавали дневник пациента.

При втором посещении (14 сутки), дневники изучались врачом. Пациентов, которые зарегистрировали показатель боли по меньшей мере ≥4 по 11-бальной числовой оценочной шкале (NRS) в течение двух суток в ходе подготовительной фазы и которые удовлетворили всем другим критериям включения и которые не удовлетворяли никаким критериям исключения, распределяли случайным образом в соотношении 1:1 для введения либо инактивированных нагреванием B. bifidum SYN-HI-001, либо плацебо. Пациентов распределяли в группы лечения в соответствии со сгенерированным компьютером перечнем блочной рандомизации с размером блока 4. Размер блока не сообщался исследователям и распределение было слепым как для пациентов, так и для персонала центра. В ходе периода вмешательства в течение 8 недель пациенты принимали либо две капсулы, содержавшие инактивированные нагреванием бактерии, каждые сутки, либо плацебо идентичного внешнего вида.

В середине фазы лечения (посещение 3, сутки 42), исследователи обсуждали течение заболевания с пациентом с первую часть дневника лечения забирали и изучали. В конце фазы лечения (посещение 4, сутки 70), исследователи изучали и забирали оставшуюся часть дневника лечения.

После фазы вмывания без лечения (посещение 5, сутки 84), исследователи забирали дневники фазы вымывания, а также неиспользованный исследуемый продукт и пустые емкости для подтверждения соблюдения пациентами назначенного лечения. Более того, проводили полное физикальное обследование и взятие образцов крови. Бисакодил и лоперамид допускались в качестве препаратов неотложной терапии. Пробиотики или другие лекарственные средства, которые могли повлиять на эффективность исследуемого продукта, не допускались.

1.3 Получение исследуемого продукта

Жизнеспособные клетки штамма Bifidobacterium bifidum, депонированного под номером депозита № DSM 24514, выращивали в богатой белком жидкой среде для роста, инактивировали нагреванием в емкости для ферментации, центрифугировали, а затем лиофилизировали, перемалывали и просеивали. Более того, инактивированные бактерии в виде сухого порошка смешивали с эксципиентом, и ими заполняли непокрытые целлюлозные капсулы в количестве приблизительно 0,5×10⁹ клеток (нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001). Капсулы плацебо выглядели идентичными и содержали мальтодекстрин.

1.4 Определение конечных результатов

Проспективно определенная первичная переменная эффективности представляла собой комбинацию улучшения боли на ≥30% по 11-бальной NRS и достижение результата в одной из 3 наилучших категорий облегчения по 7-бальной шкале Лайкерта, причем оба из этих критериев должны были удовлетворяться в течение по меньшей мере 4 из 8 недель лечения, чтобы квалифицировать пациента как отвечающего на лечение. Пациентов ежедневно просили ответить на вопрос "если Вы испытывали боль в животе в течение последних 24 часов, как бы Вы оценили эту боль?". Возможные ответы находились в диапазоне от 0 (нет боли) до 10 (сильнейшая мыслимая боль).

Облегчение симптомов определяли еженедельно по 7-бальной шкале Лайкерта (Совокупная оценка по шкале улучшения). Оценка по этой шкале проводилась каждую неделю в ходе периода лечения в течение 8 недель в дневнике пациента. Пациентов еженедельно просили отвечать на вопрос "По сравнению с тем, как Вы обычно чувствовали себя до приема исследуемого лекарственного средства, как бы Вы могли оценить Ваше облегчение симптомов (боль/дискомфорт в животе, ритм дефекации и другие симптомы IBS) за последние 7 дней?". Возможные ответы находились в диапазоне от 1 (очень большое облегчение), 2 (значительное облегчение), 3 (некоторое облегчение), 4 (отсутствие изменений), 5 (некоторое ухудшение), 6 (значительное ухудшение) до 7 (очень большое ухудшение).

Вторичные переменные эффективности включали "Суммарную оценку индивидуумом симптомов (SGA)" и индивидуальные симптомы IBS отдельно, такие как "боль в животе", "растяжение/вздутие" и "неотложный позыв", регистрируемые по той же 7-бальной шкале Лайкерта (боль в животе оценивали по 11-бальной NRS, как описано выше). Индивидуальные показатели симптомов, кроме того, комбинировали в составной показатель симптомов в качестве арифметического среднего значения SGA и трех индивидуальных показателей симптомов. Более того, оценивали уменьшение и/или увеличение частоты актов дефекации, форму стула (оцениваемую по Бристольской шкале формы стула), ощущения неполного опорожнения кишечника и прием других лекарственных средств отмечали каждые сутки в дневнике и оценивали.

В начале, середине и конце лечения, а также в конце испытания (посещения 2-5) врачи опрашивали пациентов в отношении тяжести их симптомов IBS посредством системы оценки тяжести IBS (IBS-SSS). Эта оценка основана на 5 визуальных аналоговых шкалах (VAS) в диапазоне от 0 до 100 и содержит тяжесть за последние 10 суток симптомов "тяжесть боли в животе", "частота боли в животе" (количество суток с болью за последние 10 суток), "тяжесть вздутия в животе", "удовлетворенность актами дефекации" и "препятствование повседневной активности вследствие IBS". Связанное со здоровьем качество жизни оценивали с использованием опросника SF-12 перед лечением, в середине лечения и в конце лечения (посещение 2, 3 и 4).

Неблагоприятные явления регистрировали на протяжении испытания и врачом проводился опрос для определения суммарной оценки переносимости исследуемого лечения при 3, 4 и 5 посещении врача. Переносимость оценивали по 5-бальной шкале с вопросом "Если учитывать побочные эффекты исследуемого лечения, как бы Вы оценили общую переносимость?". Возможные ответы находились в диапазоне от 1 (очень хорошо), 2 (хорошо), 3 (приемлемо), 4 (неудовлетворительно) до 5 (плохо). Проверку основных показателей жизнедеятельности проводили при каждом посещении врача и лабораторные величины исследовали при скрининговом посещении и в конце испытания.

1.5 Статистические методы

1.5.1 Вычисление размера выборки

Вычисление размера выборки было основано как на оцененных ответах группы плацебо и группы лечения в отношении первичного конечного результата, так и на оцененных различиях между подгруппами IBS в отношении основных показателей оценки симптомов. Для мощности 80% был вычислен размер выборки 350 оцениваемых пациентов. При оцененном уровне исключения из исследования 15-20% после рандомизации, было запланировано 412 рандомизированных пациентов и 507 было привлечено для учета возможных отказов перед началом исследования.

1.5.2 Статистический анализ

Основной задачей этого исследования было подтверждение гипотезы, что комбинированный показатель ответа в виде адекватного облегчения 3 и болевого ответа был значимо более высоким в группе Bifidobacterium по сравнению с группой плацебо. Первичный конечный результат был определен как комбинация улучшения боли на ≥30% по 11-бальной NRS (отвечающий на боль пациент) и достижение одной из наилучших 3 категорий облегчения по 7-бальной шкале Лайкерта (ответ в виде адекватного облегчения 3) и где эти два критерия должны были удовлетворяться в течение по меньшей мере 4 из 8 недель лечения для квалификации в качестве отвечающего на лечение пациента. Критерий Кохрана-Мантеля-Гензеля, стратифицированный по центру исследования, использовали для сравнения звеньев лечения, и статистически значимым считалось значение P<0,05.

Первичный анализ был основан на выборке с намерением лечиться, в которую были включены все пациенты, успешно прошедшие рандомизацию. Недели с отсутствующими данными автоматически определялись как отсутствие ответа. Пациенты, которые предоставляли только исходные данные для первичной оценки переменной эффективности, считались "не отвечающими" при оценке первичного критерия эффективности. Проводили дополнительный анализ в соответствии с протоколом для целей подтверждения.

На основе доступных данных проводили описательный анализ вторичных результатов. Для выявления отличий в лечении использовали критерий суммы рангов Уилкоксона для непрерывных переменных и точный критерий Фишера для бинарных переменных. Все значения p были двухсторонними. Вторичные переменные эффективности включали ответ на основе правила 50% облегчения симптомов в ходе лечения (улучшение в течение по меньшей мере 4 из 8 недель в ходе периода лечение и улучшение, улучшаемое как снижение от исходного уровня по меньшей мере на один балл).

Неблагоприятные явления (AE) кодировались посредством MedDRA с использованием текущей версии на момент начала испытания, которую использовали на протяжении испытания. Кодирование было основано на германской версии, и для конечного анализа использовали соответствующую английскую версию. AE вносили в таблицу на основе Предпочтительных терминов (PT) словаря MedDRA. Таблицы включают страдающих пациентов и абсолютную и относительную частоту явлений.

Весь статистический анализ проводили с использованием версии SAS 9.5 для windows, SAS Institute Inc., Cary, NC, США.

1.6 Результаты

1.6.1 Индивидуумы

Из 507 пациентов, которым проводили скрининг, 443 пациенты были успешно случайным образом распределены для получения либо плацебо (n=222), либо инактивированных нагреванием B. bifidum SYN-HI-001 (n=221). Всех рандомизированных пациентов анализировали в отношении намерения лечиться (ITT) и неблагоприятных явлений (n=443). Анализировали всего 377 пациентов (187 плацебо и 190 B. bifidum SYN-HI-001) в соответствии с протоколом (фиг.2).

1.6.2 Исходные характеристики

Исходные характеристики и демографические данные были хорошо сбалансированы между двумя группами введения. 24,2% были классифицированы как имеющие IBS с преобладанием запора (IBS-C), 40,0% как имеющие IBS с преобладанием диареи (IBS-D), 7,7% как имеющие смешанную IBS (IBS-M) и 28,2% как имеющие IBS без определенного подтипа (IBS-U) без значимых различий между группами Bifidobacteria и плацебо.

В среднем, возраст пациентов составлял 41,3 года, с 69,3% женщин, средним ростом 171,9 см, средним весом 73,0 кг и средним BMI 24,6, без значимых различий между двумя группами лечения (таблица 1).

Таблица 1: Демографические характеристики популяции с "намерением лечиться" (ITT)

B. bifidum SYN-HI-001 (N=221) Плацебо (N=222) N (%) или среднее значение ± s.d. N (%) или среднее значение ± s.d. Возраст 40,1 ± 12,8 42,7 ± 13,8 Женщины 155 (70,1) 152 (68,5) Рост (см) 172,4 ± 8,9 171,3 ± 9,1 Вес (кг) 73,2 ± 7,7 72,8 ± 16,6 BMI 24,5 ± 5,3 24,7 ± 5,0 Тип IBS IBS-C 54 (24,4) 53 (23,9) IBS-D 95 (43,0) 82 (36,9) IBS-M 14 (6,3) 20 (9,0) IBS-U 58 (26,2) 67 (30,2)

1.6.3 Первичный конечный результат: составной показатель ответа (ответ в виде адекватного облегчения 3 в комбинации с ответом облегчения боли)

Первичным результатом был составной показатель ответа, определяемый как улучшение на 30% боли в животе и достижение по меньшей мере одной из 3 наилучших категорий облегчения в течение меньшей мере 4 из 8 недель лечения (правил 50%). Исходя из этого определения, составной показатель ответа был достигнут у 33,5% пациентов в группе Bifidobacterium (74/221) по сравнению с 19,4% пациентами в группе плацебо (43/222). Это эквивалентно в 1,7 раза более высокому показателю успеха (95%CI: 1,3-2,4) для исследуемого продукта. Критерий Кохрана-Мантеля-Гензеля, стратифицированный по центру исследования обеспечивал статистически значимое отличие (P=0,00071). Положительный результат был подтвержден посредством анализа в соответствии с протоколом. Пациенты, которых лечили инактивированными нагреванием B. bifidum SYN-HI-001, достигли составного показателя ответа 36,8% по сравнению с 19,8% при введении плацебо (P=0,0004 с критерием Мантеля-Гензеля). Эти результаты являются в высокой степени значимыми и указывают на явное превосходство инактивированных нагреванием B. bifidum SYN-HI-001 над плацебо (фиг.3).

Динамика составного показателя ответа в ходе двухнедельных интервалов лечения (неделя 1-4 и неделя 5-8) продемонстрировала, что лечение B. bifidum SYN-HI-001 было значимо лучшим относительно плацебо в ходе как первого, так и второго интервала лечения. В течение недель 1-4 31,7% Bifidobacteria против 19,8% в группе плацебо (P=0,0047) и в течение недель 5-8 39,4% Bifidobacteria против 29,7% (P=0,0361) удовлетворяли критериям ответа в течение 50% времени (фиг.4).

1.6.4 Вторичные результаты

1.6.4.1 Другие комбинированные показатели ответа и адекватное облегчение/смягчение симптомов

Вторичные конечные результаты включали "более строгое" определение составного показателя ответа: комбинация 30% улучшения боли и достижения одной из наилучших 2 категорий облегчения в течение по меньшей мере 4 из 8 недель лечения. Даже в случае этого "более строгого определения" ответа в виде адекватного облегчения, этот составной ответ был значимо более высоким в группе Bifidobacteria (15,8%) по сравнению с плацебо (7,7%) (P=0,0079), причем результат был подтвержден посредством анализа в соответствии с протоколом (B. bifidum SYN-HI-001: 17,9% против плацебо: 7,5%; P=0,0031).

Анализ только ответа в виде адекватного облегчения (и не в комбинации с другим показателем ответа) показывает значительную пользу лечения B. bifidum SYN-HI-001. Показатель ответа в виде адекватного облегчения 3 (наилучшие три категории 3 облегчения в течение по меньшей мере 4 из 8 недель ответа) составил 60,18% в группе Bifidobacteria (т.е. группе введения реального препарата) и только 44,14% в группе плацебо (P=0,0009). Также показатель ответа в виде адекватного облегчения 2 (наилучшие 2 категории облегчения по меньшей мере в течение 4 из 8 недель лечения) был значительно более высоким в группе реального препарата (20,36%) по сравнению с плацебо (11,26%) (P=0,0093) (фиг.5).

Другим вторичным конечным результатом было улучшение в виде облегчения симптомов (снижение среднего показателя), которое оценивалось каждую неделю в ходе лечения в течение 8 недель в дневнике пациента. Еженедельная оценка облегчения симптомов продемонстрировала значительную пользу для пациентов в группе Bifidobacteria каждую неделю, начиная со второй недели (неделя 2) до конца лечения (неделя 8). В конце лечения средний показатель облегчения симптомов составлял 3,08 в группе реального препарата против 3,44 в группе плацебо (P=0,006) (фиг.6).

1.6.4.2 Система оценки синдрома раздраженного кишечника (IBS-SSS)

IBS-SSS оценивали на исходном уровне (посещение 2), при контрольном посещении после лечения в течение 4 недель (посещение 3), в конце лечения на 8 неделе (посещение 4) и в конце испытания на 10 неделе (посещение 5) с суммарным показателем оценки в диапазоне 0-500. В конце лечения (неделя 8), IBS-SSS улучшался на ≥50% у значительно большего количества пациентов группы реального препарата (41,2%) по сравнению с пациентами в группе плацебо (28,8%) (P=0,0072). Результат был подтвержден в анализе в соответствии с протоколом (B. bifidum SYN-HI-001: 37,4% против плацебо: 25,1%; P=0,0109) (фиг.7).

Что касается снижения суммарного показателя IBS-SSS от исходного уровня до конца лечения исследование продемонстрировало статистически значимое превосходство B. bifidum SYN-HI-001 над плацебо с улучшением суммарного показателя -101,07 в группе реального препарата по сравнению с -71,24 в группе плацебо (P=0,0013). Вновь, результат был подтвержден анализом в соответствии с протоколом (B. bifidum SYN-HI-001: -102,11 против плацебо: -73,51; P=0,0048) (фиг.8). Три из подшкал, где каждый показатель находится в диапазоне 0-100 (удовлетворенность актами дефекации, количество дней с болью и влияние на качество жизни) продемонстрировал значимые отличия в пользу B. bifidum SYN-HI-001, таким образом, усиливая доказательство положительного эффекта лечения на показатель на основе симптомов. Удовлетворенность актами дефекации улучшалась на -23,72 в группе реального препарата по сравнению с -16,62 в группе плацебо (P=0,0208). Показатель количества дней с болью улучшался на -22,71 в группе реального препарата по сравнению с -14,35 в группе плацебо (P=0,0080). Показатель влияния на повседневную жизнь улучшался на -20,05 в группе реального препарата по сравнению с -14,15 в группе плацебо (P=0,0122). Остальные два параметра боли в животе IBS - тяжесть и тяжесть вздутия - продемонстрировали численно большее снижение в группе B. bifidum SYN-HI-001.

1.6.4.3 Общая оценка индивидуумом (SGA) симптомов IBS, индивидуальные симптомы и составной показатель 1-4

Вторичные конечные результаты "SGA", "боль в животе", "растяжение/вздутие" и "неотложный позыв" оценивались ежедневно в дневнике пациента по 7-бальной шкале Лайкерта (только боль в животе регистрировали по 11-бальной NRS). B. bifidum SYN-HI-001 продемонстрировали значимое снижение от исходного уровня до конца лечения SGA на -0,76 балла против -0,54 балла в группе плацебо (P=0,0192), боли в животе на -1,29 балла против -0,93 балла в группе плацебо (P=0,0112) и растяжения/вздутия на -0,69 балла против -0,50 балла в группе плацебо (P=0,0456). Составной показатель 1-4 вычисляли для симптомов IBS (SGA, боль в животе, растяжение/вздутие и неотложный позыв). Для пациентов в группе B. bifidum SYN-HI-001 польза была значимой для лечения против плацебо (изменение от исходного уровня до конца лечения в группе лечения реальным препаратом: -1,21 балла; плацебо: -0,89 балла; P=0,0256) (фиг.9).

Более того, симптомы "дискомфорт" и "боль, ассоциированная с перистальтикой кишечника" оценивались еженедельно в дневнике пациента по 7-бальной шкале Лайкерта. Вновь, B. bifidum SYN-HI-001 продемонстрировали значимое снижение от исходного уровня до конца лечения. Дискомфорт снижался на -1,35 балла против -0,92 балла в группе плацебо (P=0,0015) и боль, ассоциированная с актами дефекации, снижалась на -0,88 балла против -0,46 балла в группе плацебо (P=0,0231) (фиг.10).

1.6.4.4 Связанное со здоровьем качество жизни (SF-12)

Оценка суммарных показателей SF-12 продемонстрировала значительное повышение качества жизни в группе B. bifidum SYN-HI-001. Сумма SF-12 улучшалась от исходного уровня до конца лечения на 5,82 в группе Bifidobacteria и на 4,06 в группе плацебо (P=0,0382). Суммарный показатель психического здоровья улучшался от исходного уровня до конца лечения на 3,31 в группе Bifidobacteria и на 1,66 в группе плацебо (P=0,0309). Суммарный показатель физического здоровья численно больше улучшался в группе реального препарата (2,51) по сравнению с плацебо (0,8965), но отличия не достигали значимости. Поскольку пациенты IBS в большей степени страдали психически, чем физически, этот результат не является неожиданным (фиг.11).

1.6.4.5 Анализ подгрупп

Анализ подгрупп продемонстрировал улучшение следующих симптомов, которые являются специфическими для соответствующих типов IBS:

1. Частота стула (IBS-C):

У пациентов с IBS-C среднее изменение от исходного уровня до конца лечения частоты актов дефекации продемонстрировало значимые отличия в пользу B. bifidum SYN-HI-001. В случае B. bifidum SYN-HI-001 наблюдали среднее увеличение актов дефекации/неделя, составляющее 1,66, в противоположность снижению актов дефекации/неделя, составляющему -1,01, в группе плацебо (P=0,0220).

2. Форма жидкого стула (IBS-D):

В подгруппе пациентов с IBS-D, консистенция стула, которая оценивалась в дневнике пациента посредством BSFS (от 1=запор до 7=диарея), улучшалась от исходного уровня до конца лечения значимо в большей степени в группе реального препарата (-0,68 балла) по сравнению с группой плацебо (-0,48 балла) в сторону более твердой консистенции стула (P=0,0939).

3. Удовлетворенность актами дефекации (IBS-M и IBS-U):

Как в подгруппе IBS-M, так и в подгруппе IBS-U, были выявлены значимые отличия в удовлетворенности актами дефекации в пользу группы B. bifidum SYN-HI-001. В конце лечения отличия (реальный препарат-плацебо) в среднем изменении от исходного уровня составили -27,41 [95% CI: -49,26; -5,55] в подгруппе IBS-M и -13,71 [95% CI: -24,66; -2,76] в подгруппе IBS-U.

1.6.4.6 Неблагоприятные явления

Было описано только 15 неблагоприятных явлений, предположительно связанных с исследуемым продуктом, 7 в группе B. bifidum SYN-HI-001 и 8 в группе плацебо. Не было выявлено значимых отличий в профиле побочных эффектов для B. bifidum SYN-HI-001 против плацебо (таблица 2).

Таблица 2: Встречаемость неблагоприятных явлений, которые предположительно являются связанными, в соответствии с предпочтительным термином (согласно MedDRA):

B. bifidum SYN-HI-001 Плацебо Итого N (%) N (%) N (%) P Вздутие живота 1 0,45 1 0,45 2 0,45 10,000 Боль и животе 2 0,90 1 0,45 3 0,68 0,6233 Боль в верхней части живота 0 0,00 1 0,45 1 0,23 10,000 Запор 0 0,00 1 0,45 1 0,23 10,000 Диарея 0 0,00 2 0,90 2 0,45 0,4989 Гастроэнтерит 1 0,45 0 0,00 1 0,23 0,4989 Ухудшение синдрома раздраженной кишки 1 0,45 0 0,00 1 0,23 0,4989 Тест функции печени 0 0,00 2 0,90 2 0,45 0,4989 Тошнота 1 0,45 0 0,00 1 0,23 0,4989 Недержание мочи 1 0,45 0 0,00 1 0,23 0,4989

Большинство неблагоприятных явлений имели тяжесть от мягкой до умеренной и проходили после симптоматического лечения. Большинство явлений были связаны с желудочно-кишечными симптомами, и могут рассматриваться как симптомы, сопутствующие основному заболеванию.

Только два пациента сообщили о серьезных неблагоприятных явлениях: острый коронарный синдром и перелом шейки бедра, оба из которых не были оценены как связанные с лечением и которые произошли в группе плацебо. В этом исследовании не было описано смертей.

Лечение, проведенное против симптомов IBS, не отличалось на значимом уровне между двумя группами лечения, также как и прекращения исследуемого лечения. Также лабораторные величины не указывали на какой-либо риск безопасности B. bifidum SYN-HI-001. Оценка основных показателей жизнедеятельности и физикальная оценка не выявила ничего необычного. Общая оценка переносимости в конце лечения была оценена как очень хорошая или хорошая у 90,5% пациентов в группе B. bifidum SYN-HI-001 и 86,0% в группе плацебо (88,3% от общей исследуемой популяции; отличия не значимы).

В целом, исследование продемонстрировало хорошую переносимость и не продемонстрировало никакого риска безопасности для применения инактивированных нагреванием B. bifidum SYN-HI-001 у пациентов с IBS.

Исследование, описанное в настоящем описании, впервые показало, что нежизнеспособные бактерии штамма B. bifidum SYN-HI-001 обладают эффективностью in vivo, приемлемой для лечения IBS. В отличие от композиций пробиотиков, т.е. композиций на основе жизнеспособных бактерий, эти нежизнеспособные бактерии по настоящему изобретению, кроме того, обеспечивают снижение риска неблагоприятных явлений, которые ранее были описаны, например, Besselink et al., 2008, для серьезно больных индивидуумов. Таким образом, нежизнеспособные бактерии по настоящему изобретению, а также их фрагменты, оказались перспективным и безопасным новым инструментом для лечения желудочно-кишечных нарушений.

Дополнительные ссылки

Alving CR. (1993). Lipopolysaccharide, lipid A, and liposomes containing lipid A as immunologic adjuvants. Immunobiology, 187(3-5), 430-446.

Bausserman, M., & Michail, S. (2005). The use of Lactobacillus GG in irritable bowel syndrome in children: a double-blind randomized control trial. The Journal of pediatrics, 147(2), 197-201.

Besselink, M.G., et al., Probiotic prophylaxis in predicted severe acute pancreatitis: a randomised, double-blind, placebo-controlled trial. Lancet, 2008. 371(9613): p. 651-9.

Brenner, D. M., & Chey, W. D. (2009). Bifidobacterium infantis 35624: A novel probiotic for the treatment of irritable bowel syndrome. Reviews in gastroenterological disorders, 9(1), 7-15.

Brul, Stanley, Suzanne Van Gerwen, and Marcel Zwietering, eds. Modelling microorganisms in food. Elsevier, 2007.

Camilleri, M., & Ford, A. C. (2017). Pharmacotherapy for Irritable Bowel Syndrome. Journal of Clinical Medicine, 6(11), 101.

Chang, L. "Epidemiology and quality of life in functional gastrointestinal disorders." Alimentary pharmacology & therapeutics 20.s7 (2004): 31-39.

Ducrotté, P., Sawant, P., & Jayanthi, V. (2012). Clinical trial: Lactobacillus plantarum 299v (DSM 9843) improves symptoms of irritable bowel syndrome. World journal of gastroenterology: WJG, 18(30), 4012.

e Silva, J. Paulo Sousa, and Ana Cristina Freitas, eds. Probiotic bacteria: fundamentals, therapy, and technological aspects. Crc Press, 2014.

Eun CS, Kim YS, Han DS, Choi, JH, Lee AR, Park YK. Lactobacillus casei prevents impaired barrier function in intestinal epithelial cells. APMIS 2011; 119: 49-56.

Farup, P. G., Jacobsen, M., Ligaarden, S. C., & Rudi, K. (2012). Probiotics, symptoms, and gut microbiota: what are the relations? A randomized controlled trial in subjects with irritable bowel syndrome. Gastroenterology research and practice, 2012.

& Van Mechelen. (2011). Recent clinical experience with vaccines using MPL- and QS-21-containing adjuvant systems. Expert Rev Vaccines, 10(4), 471-486.

Guideline on the evaluation of medicinal products for the treatment of irritable bowel syndrome. EMA/CHMP/60337/2013.

Isolauri, E., Rautanen, T., Juntunen, M., Sillanaukee, P., & Koivula, T. (1991). A human Lactobacillus strain (Lactobacillus casei sp strain GG) promotes recovery from acute diarrhea in children. Pediatrics, 88(1), 90-97.

Kim, H. J., Vazquez Roque, M. I., Camilleri, M., Stephens, D., Burton, D. D., Baxter, K., & Zinsmeister, A. R. (2005). A randomized controlled trial of a probiotic combination VSL# 3 and placebo in irritable bowel syndrome with bloating. Neurogastroenterology & Motility, 17(5), 687-696.

Kneifel, Wolfgang, and Seppo Salminen, eds. Probiotics and health claims. John Wiley & Sons, 2010.

Layer, P., et al. "S3-Leitlinie Reizdarmsyndrom: Definition, Pathophysiologie, Diagnostik und Therapie. Gemeinsame Leitlinie der Deutschen Gesellschaft für Verdauungs-und Stoffwechselkrankheiten (DGVS) und der Deutschen Gesellschaft für Neurogastroenterologie und Motilität (DGNM)." Zeitschrift für Gastroenterologie 49.02 (2011): 237-293.

Lopetuso, L. R., Scaldaferri, F. R. A. N. C. O., Bruno, G., Petito, V., Franceschi, F., & Gasbarrini, A. (2015). The therapeutic management of gut barrier leaking: the emerging role for mucosal barrier protectors. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 19(6), 1068-1076.

Mitra, A. K., & Rabbani, G. H. (1990). A double-blind, controlled trial of bioflorin (Streptococcus faecium SF68) in adults with acute diarrhea due to Vibrio cholerae and enterotoxigenic Escherichia coli. Gastroenterology, 99(4), 1149-1152.

Niv, E., Naftali, T., Hallak, R., & Vaisman, N. (2005). The efficacy of Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the treatment of patients with irritable bowel syndrome-a double blind, placebo-controlled, randomized study. Clinical Nutrition, 24(6), 925-931.

Petrovsky & Aguilar. (2004). Vaccine adjuvants: current state and future trends. Immunol Cell Biol, 82(5), 488-496.

Piche, T., et al., Impaired intestinal barrier integrity in the colon of patients with irritable bowel syndrome: involvement of soluble mediators. Gut, 2009. 58(2): p. 196-201.

Resta-Lenert, S., & Barrett, K. E. (2006). Probiotics and commensals reverse TNF-α-and IFN-γ-induced dysfunction in human intestinal epithelial cells. Gastroenterology, 130(3), 731-746.

Rome, F., Guidelines--Rome III Diagnostic Criteria for Functional Gastrointestinal Disorders. J Gastrointestin Liver Dis, 2006. 15(3): p. 307-12.

Sen, S., Mullan, M. M., Parker, T. J., Woolner, J. T., Tarry, S. A., & Hunter, J. O. (2002). Effect of Lactobacillus plantarum 299v on colonic fermentation and symptoms of irritable bowel syndrome. Digestive diseases and sciences, 47(11), 2615-2620.

Steiner et al. (1960). The local and systemic effects of Freund's adjuvant and its fractions. Archives of Pathology, 70, 424-434.

Tsuchiya, J., Barreto, R., Okura, R., Kawakita, S., Fesce, E., & Marotta, F. (2004). Single‐blind follow‐up study on the effectiveness of a symbiotic preparation in irritable bowel syndrome. Journal of Digestive Diseases, 5(4), 169-174.

Vivinus-Nébot, M., et al. "Combination of allergic factors can worsen diarrheic irritable bowel syndrome: role of barrier defects and mast cells." The American journal of gastroenterology 107.1 (2012): 75.

Weiner et al. (1997). Immunostimulatory oligodeoxynucleotides containing the CpG motif are effective as immune adjuvants in tumor antigen immunization. PNAS, 94(20), 10833-10837.

Yoo et al. (1998). Adjuvant activity of muramyl dipeptide derivatives to enhance immunogenicity of a hantavirus-inactivated vaccine. Vaccine, 16(2-3), 216-224.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены композиция для лечения желудочно-кишечного нарушения, содержащая в качестве активного ингредиента по меньшей мере 98% нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum DSM 24514, способ лечения желудочно-кишечного нарушения, включающий введение заявленной композиции, и применение по меньшей мере 98% нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum DSM 24514 для производства фармацевтической композиции. Изобретения обеспечивают расширение арсенала средств для лечения желудочно-кишечных нарушений - синдрома раздраженного кишечника, воспалительного заболевания кишечника и болезни Крона. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 табл., 1 пр.

1. Композиция, содержащая в качестве активного ингредиента нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, для применения в лечении желудочно-кишечного нарушения, выбранного из синдрома раздраженного кишечника (IBS), воспалительного заболевания кишечника (IBD) и болезни Крона, где по меньшей мере 98% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

2. Композиция для применения по п.1, в которой по меньшей мере 99% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

3. Композиция для применения по п.1, в которой по меньшей мере 99,9% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

4. Композиция для применения по любому из пп.1-3, где композиция представляет собой фармацевтическую композицию или пищевую композицию.

5. Способ лечения желудочно-кишечного нарушения, выбранного из синдрома раздраженного кишечника (IBS), воспалительного заболевания кишечника (IBD) и болезни Крона, причем способ включает введение композиции, содержащей нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514 индивидууму, нуждающемуся в этом, где по меньшей мере 98% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

6. Способ по п.5, в котором по меньшей мере 99% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

7. Способ по п.5, в котором по меньшей мере 99,9% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

8. Применение нежизнеспособных бактерий Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514, для производства фармацевтической композиции для лечения желудочно-кишечного нарушения, выбранного из синдрома раздраженного кишечника (IBS), воспалительного заболевания кишечника (IBD) и болезни Крона, где по меньшей мере 98% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

9. Применение по п.8, в котором по меньшей мере 99% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

10. Применение по п.8, в котором по меньшей мере 99,9% всех бактерий Bifidobacterium bifidum, содержащихся в композиции, представляют собой нежизнеспособные бактерии Bifidobacterium bifidum штамма SYN-HI-001, депонированного под номером депозита № DSM 24514.

11. Композиция для применения по любому из пп.1-4, или способ по любому из пп.5-7, или применение по любому из пп.8-10, где желудочно-кишечное нарушение представляет собой синдром раздраженного кишечника (IBS).

12. Композиция для применения по любому из пп.1-4, или 11 или способ по любому из пп.5-7 или 11, или применение по любому из пп.8-11, где нежизнеспособные бактерии или композицию вводят перорально в суточном количестве по меньшей мере приблизительно 10² нежизнеспособных клеток, предпочтительно в качестве двух дозированных единиц.

13. Способ по любому из пп.5-7, 11 или 12, где индивидуумом является человек.

14. Способ по любому из пп.5-7 или 11-13, где индивидуумом является индивидуум с ослабленным иммунитетом.

15. Применение по любому из пп.8-12, где фармацевтическую композицию вводят индивидууму, являющемуся человеком.

16. Применение по любому из пп.8-12 или 15, где фармацевтическую композицию вводят субъекту с ослабленным иммунитетом.