Средство дезинвазии против паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота Российский патент 2023 года по МПК A01N33/04 A01N35/02 A01N25/02 A61L2/18 A61L101/32 A61L101/34 

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и может быть использовано в скотоводческих хозяйствах и в личном подворье граждан против экзогенных стадий развития паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота.

Скотоводство является одной из основных отраслей животноводства России и играет большую роль в обеспечении населения такими важными продуктами питания как мясо и молоко. А получаемый побочный продукт - навоз, является ценнейшим сырьем для приготовления органических удобрений, которые способствуют улучшению плодородия почвы и повышения урожайности зерновых и кормовых культур.

Из опыта развития скотоводства в условиях плановой экономики известно, что увеличению поголовья и повышению продуктивности животных часто препятствуют различные паразитарные болезни, среди них у крупного рогатого скота особое место занимают паразитические простейшие, гельминты и эктопаразиты, которые имеют достаточно широкое распространение [1, 5].

Из паразитических простейших наиболее часто встречаются эймерии, криптоспоридии и букстонеллы, которые поражают животных разного возраста, но наибольшее отрицательное действие на организм они оказывают у молодняка. Заражаются в первые дни жизни после рождения и тяжело переболевают криптоспоридиозом телята молочного периода, эймериозом наиболее часто болеют телята 2-6-месячного возраста и старше, буксстонеллезом - телята с 6-месячного возраста и старше.

У крупного рогатого скота к настоящему времени описано 15 видов эймерий, вызывающих эймериоз, которые относятся к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, отряду Coccidia, семейству Eimeriidae, подсемейству Eimeriinae, роду Eimeria. Наибольшее значение для молодняка крупного рогатого скота имеют виды Eimeria bovis, E.zuernii, E.ellipsoidalis, E.bukidnonensis. Проведенными исследованиями установлено, что у телят наиболее часто паразитируют криптоспоридии видов Criptosporidium parvum и C.muris. У крупного рогатого скота паразитирует один вид букстонелл Bwctonella sulcata [2-4].

Патогенное действие криптоспоридий и эймерий обусловлено массовой гибелью инвазированных эпителиальных клеток и ворсинок, воспалением стенки кишечника, нарушением всасывания питательных веществ из кишечника. Животные более старших возрастных групп болеют эймериозом в легкой форме и остаются носителями возбудителей болезни. Патогенное действие букстонелл обусловлено нарушением целостности слизистой оболочки слепой кишки, всасывательной способности кишечника в местах их нахождения. В процессе своей жизнедеятельности эти паразиты выделяют токсины, которые приводят к нарушению функции пораженных участков кишечника.

Исследованиями установлено, что зараженные паразитическими простейшими животные ежедневно выделяют с фекалиями большое количество ооцист и цист, которые загрязняют объекты внешней среды инвазионными элементами, которые весьма устойчивы во внешней среде и сохраняют свою жизнеспособность в течение длительного времени.

Наши исследования показали, что наиболее загрязненными инвазионными элементами паразитических простейших и гельминтов объектами внешней среды в помещениях для содержания животных являются пол станков и проходов. Стены станков и кормушки для животных меньше контаминированы инвазионными элементами.

Широкому распространению паразитических простейших способствуют различные нарушения технологии выращивания молодняка крупного рогатого скота: повышенная влажность воздуха, скученность в помещениях, неполноценное кормление и нарушения ветеринарно-санитарных правил.

Для достижения устойчивых результатов в борьбе с паразитическими простейшими молодняка крупного рогатого скота усилиями ученых и практиков предложено ряд средств и препаратов как против эндогенных стадий, так и против экзогенных. Проблема паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота продолжает ставить задачи перед исследователями по совершенствованию мер борьбы с экзогенной стадией развития паразитов.

Из современных средств, используемых против экзогенных стадий развития паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота, следует отметить препараты, созданные на основе хлора, фенола, йода, едких щелочей и другие, которые в своем большинстве являются моновалентными и по эффективности не устраивают запросы ветеринарной практики.

Исходя из отмеченного, для дезинвазии объектов внешней среды против ооцист паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота предложено комплексное средство «Цистодез-2», имеющий следующий состав: действующие вещества (ДВ) - глутаровый альдегид 6,0%, алкилдиметилбензиламмония хлорид 7,0% и вспомогательные компоненты - полиэтиленгликоль 400-27,0%, поверхностно-активные вещества - 25,0% и вода до 100% при их совместном применении в оптимальных концентрациях в соотношении массы, % - 6,0; 7,0; 27,0; 25,0.

При рассмотрении действующих веществ следует отметить, что глутаровый альдегид, является известным дезинфицирующим средством для наружного применения и активен против ооцист и цист паразитических простейших. Второе действующее вещество - алкилдиметилбензиламмония хлорид является надежным антисептиком, антипротозойным и противогрибковым средством и известен как эффективное дезинфицирующее средство. Исходя из отмеченных достоинств действующих веществ при их совместном применении против ооцист и цист паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота могут оказать синергетическое действие на паразитарный объект, а используемые вспомогательные вещества способствуют обеспечению лучшей очистки пола, стен и технологического оборудования от биозагрязнений и более равномерно распределяют ДВ по поверхности объекта.

Использованное в качестве вспомогательного средства полиэтиленгликоль-400 (ПЭГ-400), обладает высокими эмульгирующими свойствами, что в конечном счете оказывает эффективное смягчающее действие на ооцист и цист паразитических простейших. В дальнейшем, под действием полиэтиленгликоля клеточная мембрана оболочки ооцист и цист паразитических простейших частично растворяется, открывая доступ для проникновения внутрь ооцист и цист средства дезинвазии. Кроме того, в числе используемых вспомогательных компонентов следует отметить поверхностно-активные вещества, которые обеспечивают лучшую очистку пола, стен и технологического оборудования от биологических загрязнений и равномерно распределяют ДВ по поверхности, способствуя повышению эффективности.

В задачу наших исследований входило разработать средство дезинвазии против ооцист и цист паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота доступными средствами, пригодными для применения как ручным, так и механизированным способом, не оказывая коррозионное воздействие на технологическое оборудование в животноводческих помещениях.

Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве средства дезинвазии против ооцист и цист паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота был использован составленный нами комплексное средство «Цистодез-2», в состав которого входят: действующие вещества - глутаровый альдегид 6%, алкилдиметилбензиламмония хлорид 7,0% и вспомогательные компоненты - полиэтиленгликоль-400 - 27,0%, поверхностно-активные вещества - 25,0% и вода до 100% соответственно в соотношении массы, %: 6,0; 7,0; 27,0; 25,.

Из доступных заявителю источников информации не известны указанная совокупность существующих признаков, позволяющих получать указанный технический результат, поэтому заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности «новизна».

Заявителю также не известны средства аналогичного назначения, в которых были раскрыты отличительные признаки заявляемого изобретения с получением от использования его в какой-либо совокупности признаков указанного технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности изобретательский уровень.

Доказательства промышленной применимости заявляемого приводятся в следующих примерах.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1. Приготовление рабочих растворов, культуры ооцист эймерий и криптоспоридий крупного рогатого скота и проведение лизис-теста с разными концентрациями средства дезинвазии.

Исследования по данной теме проводили в условиях лаборатории Всероссийского научно-исследовательского института фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений - филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (г. Москва).

Изначально было приготовлено комплексное средство дезинвазии против паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота согласно выше приведенной прописи.

Рабочие растворы с разными концентрациями комплексного средства дезинвазии «Цистодез-2» готовили следующим образом. В приготовленные четыре стеклянные колбы на 1 л наливали по 750 мл дистиллированной воды и в первые три из них добавляли по 30; 40 и 50 мл средства «Цистодез-2», тщательно размешивали в течение семи минут, затем объем доводили до литра, снова размешивали в течение семи минут и раствор был готов к использованию. В четвертую колбу к 750 мл воды добавляли 40 г кристаллического фенола, размешивали, объем доводили до 1 литра, снова размешивали, дали отстояться и раствор был готов к использованию.

Приготовление культур ооцист Eimeria spp. и Criptosporidium spp.молодняка крупного скота. Для сбора ооцист эймерий и криптоспоридий использовали фекалии спонтанно зараженных эймериями и криптоспоридиями молодняка крупного рогатого скота, в условиях скотоводческого хозяйства Московской области. Поступивший из хозяйства материал от зараженных телят исследовали флотационным методом Фюллеборна с использованием насыщенного раствора хлорида натрия. Поверхностную пленку из стаканов снимали с помощью паразитологической петли и собирали в чашку Петри с дихлорированной водой, трижды отмывали ооцист от соли, подсчитывали их количество в 1 мкл и в 1 мл, перемешивали со слоем консерванта - 2,0%-й раствор бихромата калия и использовали в дальнейшей работе, при культивировании их в термостате при температуре +26°С в условиях лаборатории. При культивировании в течение семи дней, ежедневно проводили аэрацию культуры (40 минут), а с четвертого дня проводили осмотр и оценку культуры ооцист под микроскопом. Через семь дней культивирования проводили заключительную оценку культуры, определяли процент споруляции, который составил 97,5% у культуры Eimeria spp.и 98,0% у культуры Criptosporidium spp. Для разведения готовой культуры использовали буфер SWH. При приготовлении буфера к 3300 мл дистиллированной воды добавили 17,5 мл 10,0% раствора хлорида кальция и 5 мл 10,0% раствора сульфата магния, автоклавировали в течение 20 минут при 120°С. Концентрацию водородных ионов раствора определяли с помощью прибора «Аквилон-410».

Лизис-тест культур ооцист Eimeria spp.и Criptosporidium spp. с приготовленными концентрациями комплексного средства (3; 4 и 5,0%-е растворы средства и 4,0%-й фенол) проводили в условиях лаборатории. Для этого в 250 мл колбы Эрленмейера поместили по 50 мл приготовленного средства, фенола и буфера SWH по отдельности и добавили по 50 мл раствора с ооцистами эймерий и криптоспоридий в концентрации 2000 и 3000 ооцист/мл соответственно. Затем колбы с содержимым ставили на вибростолик со скоростью 100 об/минуту на 2 часа.

После чего содержимое из колбы выливали в пластиковую бутылку с завинчивающийся крышкой объемом 1500 мл, колбу с остатком раствора ополаскивали несколько раз и сливали в пластиковую бутылку и объем доводили до 1500 мл. Содержимое бутылки перемешивали путем переворачивания (три раза) и оставили при комнатной температуре (22°С) на 24 часа. По окончании времени раствор сливали до отметки 30 мл, а осадок переливали в новую емкость объемом 100 мл, пластиковую бутылку ополаскивали несколько раз с использованием буфера, доводя объем до 50 мл и использовали в дальнейшей работе.

Пример 2. Биопроба по экспериментальному заражению телят для определения эффективности комплексного средства для дезинвазии станков.

Для определения эффективности разных концентраций комплексного средства для дезинвазии в условиях скотоводческого хозяйства Московской области проводили биопробу по экспериментальному заражению 36 телят 10-14-суточного возраста заранее подготовленной культурой криптоспоридий и 36 телят 3-месячного возраста культурой эймерий, которые были свободны от криптоспоридий и эймерий и их корма не содержали антикокцидийные препараты. Опытных телят разного возраста подвергали клиническому обследованию, пронумеровали и по принципу аналогов разделили на 6 групп по 6 голов в каждой.

Телят 10-14-суточного возраста содержали в клетках, а телят 3-месячного возраста в станках по 6 голов. Для контроля концентрации ооцист эймерий (2000 экз./мл) и криптоспоридий (3000 экз./мл) использовали камеру Мак Мастера и микроскоп МБС. Для разведения культуры применяли буфер SWH с таким расчетом, чтобы было возможно задавать 5 мл суспензии каждому теленку с общим количеством ооцист эйммерий 10000 экз./гол и ооцист криптоспоридий 15000 экз./гол.

Телятам 1, 2 и 3 групп каждой возрастной группы задавали постепенно внутрь при помощи шприца с резиновой трубочкой в конце по 5 мл суспензии ооцист эймерий и криптоспоридий, обработанной 3; 4 и 5,0%-ными растворами комплексного средства. Телятам 4 группы - по 5 мл суспензии ооцист эймерий и криптоспоридий, обработанной 4,0%-ном раствором фенола. Телятам 5 группы давали внутрь по 5 мл суспензии ооцист эймерий и криптоспоридий в разведении с буфером, которые служили зараженным контролем. Телята 6 группы получали по 5 мл буферного раствора, которые служили незараженным контролем. В ходе испытания телята всех шести групп каждой возрастной группы находились в аналогичных условиях содержания и имели одинаковый рацион. За опытными животными проводили ежедневные клинические наблюдения, обращая внимание на общее состояние, их поведение, прием корма и воды и видимые физиологические изменения.

Для установления выделения ооцист эймерий и криптоспоридий в фекалиях телят разной возрастной группы отдельно с 15 по 21 сутки после дачи инвазионного материала ежедневно собирали свежие фекалии, взвешивали, добавляли воду до массы 3000 г, смешивали смесителем в течение пяти минут. Пробы для дальнейших исследований отбирали из каждой группы в количестве 30 г, консервировали 4,0%-м раствором бихромата калия, доводили до однородной массы и хранили в холодильнике при +4°С.

Наличие ооцист в фекалиях телят устанавливали флотационным методом Фюллеборна с использованием насыщенного раствора хлористого натрия, плотностью 1,18 г/см³, а количество ооцист/г фекалий подсчитывали с использованием камеры Мак Мастера.

Эффективность разных концентраций комплексного средства и 4,0%-й концентрации фенола устанавливали, исходя из процента снижения ооцист эймерий и криптоспоридий после воздействия на них отмеченными концентрациями комплексного средства дезинвазии, по сравнению с телятами зараженного контроля.

Проведенные исследования опытных телят первой группы 3-месячного возраста, которым задавали суспензию ооцист эймерий, обработанную 3,0%-й концентрацией комплексного средства, ооцист эймерий в фекалиях находили через три, четыре и семь суток, средний показатель в одной камере за период исследований 4,71. В г/фекалий телят первой группы находили 942 экз. ооцист, что в проценте от контроля 15,6 (табл. 1). Интенсэффективность комплексного средства в 3,0%-й концентрации или процент снижения выделения ооцист после воздействия на них средством составила:

У телят второй и третьей групп, которым назначали суспензию ооцист, обработанную 4 и 5,0%-й концентрациями комплексного средства, при исследовании проб фекалий ооцист эймерий ни в одном случае не находили, что свидетельствует о 100%-й эффективности комплексного средства в испытанных концентрациях против ооцист эймерий телят.

Телята четвертой группы, которым назначали суспензию ооцист эймерий, обработанной 4,0%-й концентрацией фенола (базовый препарат) ооцист эймерий в фекалиях находили во все сроки исследований в количестве от 8,3 до 12,3 в камере, средний показатель в камере за период исследований 6,14. Количество эймерий в г/фекалий составило 1228 или 20,3% от контроля. Интенсэффективность фенола 4,0%-го против ооцист эймерий телят составила 79,7%.

Телята пятой контрольной группы, получавшие 2000 ооцист/мл во все сроки исследований с фекалиями, выделяли ооцист эймерий в количестве от 10,2 до 45,4 в камере, средний показатель за период исследований 30,2. У телят контрольной группы в г/фекалий при исследовании обнаружено 6040 экз. ооцист эймерий и данный показатель был использован нами как исходный при расчете интенсэффективности испытанного комплексного средства и базового препарата.

У телят шестой контрольной группы во все сроки исследований ооцисты эймерий не обнаружены.

Проведенные нами исследования показали, что интенсэффективность комплексного средства в 3,0%-й концентрации против ооцист эймерий телят составила 84,4%, в концентрациях 4 и 5,0% испытанное средство показало 100%-ную эффективность, а базовый препарат фенол 4,0%-й обеспечил 79,7%-ю интенсэффективность.

При исследовании опытных телят 10-14-суточного возраста у животных первой группы, которые получали суспензию ооцист криптоспоридий, обработанную 3,0%-й концентрацией комплексного средств, ооцист криптоспоридий в фекалиях находили через двое, трое, пять и шесть суток, средний показатель в одной камере за период исследований 6,83. В г/фекалий телят первой группы находили 1366 экз. ооцист, что в проценте от контроля 12,84 (табл. 2). Интенсэффективность комплексного средства в 3,0%-й концентрации, после воздействия на ооцисты криптоспоридий, составила:

Телята второй и третьей групп, которым давали суспензию ооцист, обработанную 4 и 5,0%-й концентрацией комплексного средства при исследовании в отмеченные сроки были свободны от ооцист, что говорит о 100%-й эффективности комплексного средства против ооцист криптоспоридий.

У телят четвертой группы, которые получали суспензию ооцист криптоспоридий, обработанной 4,0%-й концентрацией фенола ооцист в фекалиях находили во все сроки исследований в количестве от 1,3 до 23,1 в камере, средний показатель в камере за период исследований 11,35. Количество ооцист в г/фекалий составило 2270 или 21,3% от контроля. Интенсэффективность фенола 4,0%-го против ооцист криптоспоридий телят составила 78,7%.

Телята пятой контрольной группы, получавшие 3000 ооцист/мл во все сроки исследований с фекалиями, выделяли ооцист криптоспоридий в количестве от 18,4 до 76,5 в камере, средний показатель за период исследований 53,2. Количество ооцист в 1 г фекалий составило 10640 экз.

Телята шестой контрольной группы во все сроки исследований были свободны от ооцист криптоспоридий.

Результаты проведенных исследований дают нам основание рекомендовать для борьбы с экзогенной стадией развития эймерий и криптоспоридий испытанное комплексное средство в 4,0%-й концентрации в скотоводческих хозяйствах для дезинвазии помещений для содержания молодняка крупного рогатого скота и технологического оборудования при их подготовке к заселению молодняком.

Источники информации:

1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев P.M. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных -М., 2008.-776 с.

2. Вершинин, И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика / И.И. Вершинин. - Екатеринбург, 1996. - 264 с.

3. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. - С-Петер., 1996.-602 с.

4. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора. №13-5-02/0522 от 15.07.2002.-76 с.

5. Сафиуллин Р.Т., Шибитов С.К. Паразитозы молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах Центрального и Уральского регионов России // Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М., 2019. Вып. 20. С. 264-269.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, а именно к средству дезинвазии против паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота. Средство дезинвазии против паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота, включающее компоненты, мас.%: глутаровый альдегид – 6,0, алкилдиметилбензиламмония хлорид – 7,0, полиэтиленгликоль-400 – 27,0, поверхностно-активные вещества – 25,0, вода – до 100. Вышеуказанное изобретение представляет собой доступное средство, пригодное для дезинвазии помещений для содержания молодняка крупного рогатого скота и технологического оборудования при их подготовке к заселению молодняком. 2 табл., 2 пр.

Средство дезинвазии против паразитических простейших молодняка крупного рогатого скота, включающее компоненты, мас.%:

глутаровый альдегид 6,0 алкилдиметилбензиламмония хлорид 7,0 полиэтиленгликоль-400 27,0 поверхностно-активные вещества 25,0 вода до 100