ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США с серийным номером 62/309 426, поданной 16 марта 2016 г., которая полностью включена в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Предложены способы стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения с применением свободных ферментов или рекомбинантных микроорганизмов, экспрессирующих указанные ферменты на повышенном уровне. Также предложены семена растений, обработанные свободными ферментами или рекомбинантными микроорганизмами, экспрессирующими ферменты на повышенном уровне. Предложены композиции, содержащие удобрение и фермент или рекомбинантный микроорганизм, экспрессирующий указанный фермент на повышенном уровне. Также предложены модифицированные ферменты, обладающие АЦК-дезаминазной активностью, рекомбинантные микроорганизмы, экспрессирующие указанные модифицированные ферменты, семена растений, обработанные указанными модифицированными ферментами или рекомбинантными микроорганизмами, и способы стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения с использованием указанных модифицированных ферментов или рекомбинантных микроорганизмов.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Область вокруг корней растений включает зону, называемую ризосферой. В ризосфере бактерии, грибы и другие организмы конкурируют за питательные вещества и за связывание с корневыми структурами растения. Ризосферу могут населять как вредные, так и полезные бактерии и грибы. Действие ферментов в ризосфере может оказывать влияние на бактерии, грибы и корневую систему растения. Снабжение почвы или обработка растений конкретными из указанных ферментов могли бы обеспечить благоприятные эффекты на целые популяции полезных почвенных бактерий и грибов, привести к созданию более здорового для роста растений почвенного окружения в целом, улучшить рост растений и обеспечить защиту растений от конкретных бактериальных и грибковых патогенов. Окружение корней растения (ризосфера) представляет собой уникальную смесь бактерий, грибов, питательных веществ и корней, свойства которой отличаются от свойств естественной почвы. Симбиотические отношения между указанными организмами уникальны, их можно изменять в лучшую сторону путем включении экзогенных белков.
[0004] Таким образом, в данной области техники существует потребность в способе эффективной доставки ферментов и других белков к растениям. Более того, в данной области техники существует необходимость в усилении ответа растений на ферменты и обеспечении выгоды для растениевода.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0005] Предложен фермент. Указанный фермент содержит аминокислотную последовательность, кодирующую фермент, обладающий 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминазной (АЦК-дезаминазной) активностью, и сигнальный пептид. Указанный сигнальный пептид приводит к секреции фермента при его экспрессии в микроорганизме. Также предложены рекомбинантные микроорганизмы, экспрессирующие указанный фермент. Также предложены составы, содержащие указанный фермент или рекомбинантный микроорганизм и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель. Также предложены семена растений, обработанные указанным ферментом, рекомбинантным микроорганизмом или составом.
[0006] Предложен фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью. Аминокислотная последовательность указанного фермента содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа из бактерии рода Bacillus. Аминокислотная замена приводит к повышению АЦК-дезаминазной активности по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента D-цистеиндесульфгидразы или фермента АЦК-дезаминазы дикого типа при одинаковых условиях. Также переложены рекомбинантные микроорганизмы, экспрессирующие указанный фермент. Также предложены составы, содержащие указанный фермент или рекомбинантный микроорганизм и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель. Также предложены семена растений, обработанные указанным ферментом, рекомбинантным микроорганизмом или составом.
[0007] Предложен способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение (или внесение к или в) любого из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, или состава, содержащего указанный фермент и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую растение или семя растения.
[0008] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение любого из рекомбинантных микроорганизмов, экспрессирующих фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, или состава, содержащего такой рекомбинантный микроорганизм и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[0009] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[0010] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение двух или более свободных ферментов на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, маннаназы, пектиназы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[0011] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента к растению или семени растения. Указанный фермент содержит глюканазу. Нанесение фермента на семя растения включает: (а) нанесение указанного фермента на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения указанным ферментом.
[0012] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Указанный фермент содержит глюканазу. Способ также включает нанесение белка экспансина на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[0013] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на растение или семя растения. Указанный фермент содержит фитазу.
[0014] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение удобрения и свободного фермента на среду для роста растения, область, окружающую указанное растение или семя растения, или на растение или семя растения. Свободный фермент содержит фитазу.
[0015] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[0016] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента или белка экспансина.
[0017] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[0018] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[0019] Предложено обработанное семя растения. Указанное семя растения обработано свободным ферментом. Указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[0020] Предложен другой вариант обработанного семени растения. Указанное семя растения обработано двумя или более свободными ферментами, где указанные ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[0021] Предложено семя растения с покрытием. Указанное семя растения покрыто свободным ферментом. Указанный фермент содержит глюканазу.
[0022] Предложено обработанное семя растения. Указанное семя растения обработано свободным ферментом и белком экспансином. Указанный фермент содержит глюканазу.
[0023] Предложено семя растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[0024] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента или белка экспансина.
[0025] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[0026] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[0027] Предложена композиция. Указанная композиция содержит удобрение и фермент или белок экспансин. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[0028] Предложен другой вариант композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[0029] Предложен другой вариант композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[0030] Предложен другой вариант композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[0031] Предложен другой вариант композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[0032] Признаки изобретения дополнительно определены в прилагаемой формуле изобретения и перечне вариантов реализации изобретения, представленном ниже в разделе под названием «ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ». Другие цели и признаки изобретения отчасти очевидны и отчасти изложены далее в настоящей заявке.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0033] Употребление в настоящей заявке предметов в единственном числе или использование слов «один» и «указанный» означает «по меньшей мере один» или «один или более», если иное не указано.
[0034] Термин «представитель вида Bacillus cereus» в настоящей заявке относится к любому виду бактерий рода Bacillus, который способен синтезировать экзоспорий. Таким образом, род бактерий Bacillus включает виды Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus samanii, Bacillus gaemokensis, Bacillus weihenstephensis и Bacillus toyoiensis. Представитель вида Bacillus cereus также называется в данной области техники «Bacillus cereus senso lato».
[0035] Термины «композиция» и «состав» используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к смеси двух или более химических или биологических веществ (например, смеси фермента и приемлемого с точки зрения сельского хозяйства носителя или смеси рекомбинантного микроорганизма и приемлемого с точки зрения сельского хозяйства носителя).
[0036] Термины «включающий», «включая» и «содержащий» являются открытыми терминами и означают допустимость дополнительных элементов, отличных от перечисленных.
[0037] Употребление в настоящей заявке термина «некорневой» применительно к нанесению ферментов или рекомбинантных микроорганизмов на растениям означает, что указанный фермент или рекомбинантный микроорганизм наносят на одну или более надземных частей растения, включая стебли, листья, плоды, цветки или другие наружные надземные части растения.
[0038] Термин «свободный фермент» в настоящей заявке относится к препарату фермента, который по существу не содержит интактные клетки. Термин «свободный фермент» включает содержащие фермент неочищенные клеточные экстракты, частично очищенный фермент, по существу очищенный или очищенный фермент, но не ограничивается перечисленными. Свободные ферменты могут необязательно быть иммобилизированы на химической матрице или подложке для возможности контролируемого высвобождения фермента. Препараты свободных ферментов предпочтительно не содержат ферменты, связанные с экзоспорием представителя вида бактерий Bacillus cereus. Свободные ферменты также предпочтительно не содержат ферменты, связанные с экзоспорием интактной споры представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[0039] Термин «гибридный белок» в настоящей заявке относится к белку, полипептидная последовательность которого содержит последовательности, происходящие из двух или более отдельных белков. Гибридный белок может быть создан путем соединения молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей весь или часть первого полипептида, с молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей весь или часть второго полипептида, с получением последовательности нуклеиновой кислоты, экспрессия которой приводит к получению одного полипептида, обладающего функциональными свойствами, происходящими от каждого из исходных белков.
[0040] Термин «скорость прорастания» в настоящей заявке относится к количеству семян, которые прорастают в течение конкретного периода времени. Например, скорость прорастания, составляющая 85%, указывает на то, что 85 из 100 семян прорастают в течение данного периода времени.
[0041] Термин «глюканаза» в настоящей заявке относится к любому ферменту, способному гидролизовать гликозидную связь. Термин «нецеллюлолитическая глюканаза» в настоящей заявке относится к любой глюканазе, первичная ферментативная активность которой не направлена на целлюлозу или субъединицы целлюлозы как на субстрат. Нецеллюлолитическая глюканаза предпочтительно неспособна использовать целлюлозу в качестве субстрата.
[0042] Использование в настоящей заявке термина «иммобилизация» со ссылкой на иммобилизация фермента на матрице или подложке относится к связыванию фермента с матрицей или подложкой таким образом, что указанный фермент удерживается на матрице или подложке или высвобождается из указанной подложки в течение контролируемого периода времени в отличие от рассеивания в окружающую среду неконтролируемым образом.
[0043] Термины «нативная последовательность», «нативная аминокислотная последовательность», «последовательность дикого типа» и «аминокислотная последовательность дикого типа» используются в настоящей заявке взаимозаменяемо и относятся к аминокислотной последовательности в том виде, в котором она существует в белке, встречающемся в природе.
[0044] Использование в настоящей заявке терминов «экспрессирует на повышенном уровне» и «экспрессия на повышенном уровне» со ссылкой на рекомбинантные микроорганизмы означает, что указанный рекомбинантный микроорганизм был модифицирован таким образом, что он экспрессирует белок (например, фермент) на повышенном уровне по сравнению с уровнем экспрессии того же белка микроорганизмом дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях.
[0045] Термин «среда для роста растения» включает любой материал, который способен поддерживать рост растения.
[0046] Термины «улучшение роста растения» и «стимулирование роста растения» используются взаимозаменяемо в настоящей заявке и относятся к способности усиливать или повышать по меньшей мере один из параметров, таких как высота, масса, размер листьев, размер корней, размер плода или размер стебля растения, и/или к способности повышать выход белка из растения и/или повышать урожайность растения.
[0047] Термин «улучшение здоровья растения» относится к любому благоприятному эффекту на здоровье растения, включая, но не ограничиваясь следующими: повышение скорости прорастания, повышение синхронности прорастания, снижение чувствительности к патогену, снижение чувствительности к стрессу из окружающей среды (например, засухе, затоплению, жаре, свободному цинку, соли, тяжелым металлам, низкому рН, высокому рН или любой их комбинации), повышение урожайности, повышение образования клубеньков на корнях и повышение поглощения питательных веществ и/или содержания питательных веществ (например, повышение поглощения сахара или содержания сахара или повышение поглощения белка или содержания белка).
[0048] Термин «ризосфера» используется взаимозаменяемо с термином «корневая зона» и обозначает участок почвы, который окружает корни растения и подвержен их влиянию.
[0049] Употребление в настоящей заявке термина «частично очищенный» со ссылкой на ферменты означает, что неочищенный препарат фермента (например, клеточный лизат) был подвергнут процедурам, приводящим к удалению по меньшей мере некоторых компонентов, отличных от фермента (например, остаточных белков, материала погибших клеток, избытка воды и/или нежелательных клеточных остатков). В препарате частично очищенного фермента указанный фермент предпочтительно составляет по меньшей мере 1% от общего содержания белка в препарате, более предпочтительно - по меньшей мере 3% от общего содержания белка в препарате, еще более предпочтительно - более 5% от общего содержания белка в препарате.
[0050] Употребление в настоящей заявке термина «по существу очищенный» со ссылкой на ферменты означает, что препарат фермента был подвержен процедурам, приводящим к удалению значительного количества компонентов, отличных от указанного фермента (например, остаточных белков, материала погибших клеток, избытка воды и/или нежелательных клеточных остатков). В препарате по существу очищенного фермента указанный фермент предпочтительно составляет более 30% от общего содержания белка в препарате, более предпочтительно - более примерно 40% от общего содержания белка в препарате, еще более предпочтительно - более 50% от общего содержания белка в препарате.
[0051] Термин «синергически эффективное количество» в настоящей заявке относится к количеству первого вещества (например, первого фермента), которое при использовании в комбинации со вторым веществом (например, вторым ферментом) производит биологический эффект, превышающий сумму биологических эффектов каждого из соответствующих первого и второго вещества при отдельном использовании.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ
[0052] Настоящее изобретение в целом относится к способам стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанные способы включают нанесение свободных ферментов, белков экспансинов или рекомбинантных бактерий, экспрессирующих ферменты на повышенном уровне, на среду для роста растения, растение, семеня растения или область, окружающую указанное семя растения. Настоящее изобретение также относится к семенам, обработанным или покрытым свободными ферментами или рекомбинантными бактериями, экспрессирующими указанные ферменты на повышенном уровне. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим удобрение и фермент или рекомбинантные бактерии, экспрессирующие указанный фермент на повышенном уровне. Применение свободных ферментов или рекомбинантных бактерий, экспрессирующих ферменты на повышенном уровне, для доставки ферментов к растениям обеспечивает кратковременные вспышки активности фермента, что в свою очередь обеспечивает безопасное кратковременное воздействие на растение при ограниченном количестве остаточного материала, сохраняющегося на поддающемся сбору растительном материале. В качестве альтернативы, в тех случаях, когда желательным является более продолжительное действие, свободные ферменты можно иммобилизировать на матрице или подложке с достижением контролируемого высвобождения ферментов.
I. Последовательности фермента и белка экспансина
[0053] Для упрощения поиска ниже представлены иллюстративные последовательности ферментов АЦК-дезаминаз дикого типа и модифицированных АЦК-дезаминаз, а также последовательности других ферментов и белков экспансинов, которые можно применять в связи со способами, семенами и композициями, описанными в настоящей заявке.
A. D-цистеиндесульфгидразы и АЦК-дезаминазы
[0054] Для упрощения поиска ниже представлены описания нуклеотидных последовательностей иллюстративных D-цистеиндесульфгидраз и 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминаз (АЦК-дезаминаз), а также номера указанных последовательностей SEQ ID NO (Таблица 1). В Таблице 2, ниже, представлены соответствующие аминокислотные последовательности для нуклеотидных последовательностей, перечисленных в Таблице 1. Как объясняется более подробно в настоящей заявке ниже, мутация конкретной аминокислоты в ферменте D-цистеиндесульфгидразе или АЦК-дезаминазе дикого типа может приводить к получению фермента, обладающего повышенной АЦК-дезаминазной активностью по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента дикого типа при одинаковых условиях.
[0055] В Таблице 1 последовательности SEQ ID NO: 1-3 и 111 представляют собой нуклеотидные последовательности ферментов дикого типа, обладающих как АЦК-дезаминазной, так и D-цистеиндесульфгидразной активностью, а последовательности SEQ ID NO: 4-6 и 112 представляют собой нуклеотидные последовательности, которые кодируют соответствующие варианты указанных ферментов, содержащие две аминокислотные замены по отношению к последовательности дикого типа, приводящие к повышению АЦК-дезаминазной активности. Таким образом, SEQ ID NO: 1, например, представляет собой нуклеотидную последовательность фермента дикого типа, a SEQ ID NO: 4 представляет собой нуклеотидную последовательность того же фермента, измененную таким образом, что указанная нуклеотидная последовательность кодирует фермент, содержащий две аминокислотные замены по отношению к ферменту, который кодируется последовательностью SEQ ID NO: 1. Аналогично, SEQ ID NO: 2 представляет собой нуклеотидную последовательность фермента дикого типа, a SEQ ID NO: 5 представляет собой нуклеотидную последовательность того же фермента, измененную таким образом, что указанная нуклеотидная последовательность кодирует фермент, содержащий две аминокислотные замены по отношению к ферменту, который кодируется последовательностью SEQ ID NO: 2. Аналогично, SEQ ID NO: 3 представляет собой последовательность дикого типа, a SEQ ID NO: 6 представляет собой соответствующую измененную последовательность, и SEQ ID NO: 111 представляет собой последовательность дикого типа, a SEQ ID NO: 112 представляет собой соответствующую измененную последовательность.
[0056] В Таблице 2 последовательности SEQ ID NO: 7-9 и 113 представляют собой аминокислотные последовательности ферментов дикого типа, обладающих как АЦК-дезаминазной, так и D-цистеиндесульфгидразной активностью, и последовательности SEQ ID NO: 10-12 и 114 представляют собой аминокислотные последовательности соответствующих вариантов указанных ферментов, которые содержат две аминокислотные замены по отношению к последовательности дикого типа, приводящие к повышению активности фермента. Таким образом, SEQ ID NO: 7 представляет собой последовательность дикого типа, и SEQ ID NO: 10 представляет собой аминокислотную последовательность того же фермента, содержащую две аминокислотные замены по отношению к последовательности дикого типа. Последовательности SEQ ID NO: 8 и 11, 9 и 12 и 113 и 114 относятся друг к другу таким же образом. Замещенные аминокислоты показаны в последовательностях SEQ ID NO: 10-12 и 114 в Таблице 2 жирным шрифтом с подчеркиванием.
В. Фосфолипазы
[0057] Для упрощения поиска ниже приведены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных фосфолипаз (Таблице 3), а также номера 5 указанных последовательностей (SEQ ID NO).
Таблица 3. Аминокислотные последовательности фосфолипаз
[0058] Нативные аминокислотные последовательности фосфолипаз с последовательностями SEQ ID NO: 13, 14 и 15 содержат на амино-конце указанных последовательностей последовательность сигнального пептида MKKKVLALAAAITLVAPLQSVAFA (SEQ ID NO: 49), которая непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 13, 14 и 15. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 13, 14 или 15. Тем не менее, фосфолипаза с любой из последовательностей SEQ ID NO: 13, 14 и 15 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 49 или другой сигнальный пептид.
[0059] Нативная аминокислотная последовательность фосфолипазы с последовательностью SEQ ID NO: 16 содержит сигнальный пептид MKGKLLKGVLSLGVGLGALYSGTSAQAE (SEQ ID NO: 50) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 16. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 16. Тем не менее, фосфолипаза с последовательностью SEQ ID NO: 16 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 50 или другой сигнальный пептид.
[0060] Нативная аминокислотная последовательность фосфолипазы с последовательностью SEQ ID NO: 17 содержит сигнальный пептид MKKKVLALAAAITVVAPLQSVAFA (SEQ ID NO: 51) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 17. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 17. Тем не менее, фосфолипаза с последовательностью SEQ ID NO: 17 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 51 или другой сигнальный пептид.
[0061] Нативная аминокислотная последовательность фосфолипазы с последовательностью SEQ ID NO: 18 содержит сигнальный пептид MKRKICKALICATLATSLWAGASTKVYAW (SEQ ID NO: 52) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 18. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 18. Тем не менее, фосфолипаза с последовательностью SEQ ID NO: 18 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 52 или другой сигнальный пептид.
[0062] Нативная аминокислотная последовательность фосфолипазы с последовательностью SEQ ID NO: 19 содержит сигнальный пептид MLAGPLAAALPARATTGTPAFLHGVASGD (SEQ ID NO: 53) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 19. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 19. Тем не менее, фосфолипаза с последовательностью SEQ ID NO: 19 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 53 или другой сигнальный пептид.
[0063] Нативная аминокислотная последовательность фосфолипазы с последовательностью SEQ ID NO: 115 содержит сигнальный пептид MKKKVLALAAAITLVAPLQNVAFA (SEQ ID NO: 135) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 115. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 115. Тем не менее, фосфолипаза с последовательностью SEQ ID NO: 115 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 135 или другой сигнальный пептид.
С. Липазы
[0064] Для упрощения поиска ниже предложены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных липаз (Таблица 4), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0065] Нативная аминокислотная последовательность липазы с последовательностью SEQ ID NO: 21 содержит сигнальный пептид MKFVKRRIIALVTILMLSVTSLFALQPSAKA (SEQ ID NO: 54) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 21. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 21. Тем не менее, липаза с последовательностью SEQ ID NO: 21 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 54 или другой сигнальный пептид.
[0066] Нативная аминокислотная последовательность липазы с последовательностью SEQ ID NO: 118 содержит сигнальный пептид MARTMRSRVVAGAVACAMSIAPFAGTTAVMTLATTHAAMAATAP (SEQ ID NO: 137) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 118. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 118. Тем не менее, липаза с последовательностью SEQ ID NO: 118 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 137 или другой сигнальный пептид.
[0067] Нативная аминокислотная последовательность липазы с последовательностью SEQ ID NO: 119 содержит сигнальный пептид MGIFDYKNLGTEGSKTLFADAMA (SEQ ID NO: 138) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 119. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 119. Тем не менее, липаза с последовательностью SEQ ID NO: 119 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 138 или другой сигнальный пептид.
D. Ксиланазы
[0068] Для упрощения поиска ниже предложены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных ксиланаз (Таблица 5), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0069] Нативная аминокислотная последовательность ксиланазы с последовательностью SEQ ID NO: 22 содержит сигнальный пептид MCENLEMLNLSLAKTYKDYFKIGAAVTA (SEQ ID NO: 55) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 22. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 22. Тем не менее, ксиланаза с последовательностью SEQ ID NO: 22 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 55 или другой сигнальный пептид может.
[0070] Нативная аминокислотная последовательность ксиланазы с последовательностью SEQ ID NO: 23 содержит сигнальный пептид MFKFKKNFLVGLSAALMSISLFSATASA (SEQ ID NO: 56) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 23. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 23. Тем не менее, ксиланаза с последовательностью SEQ ID NO: 23 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 56 или другой сигнальный пептид.
[0071] Нативная аминокислотная последовательность ксиланазы с последовательностью SEQ ID NO: 24 содержит сигнальный пептид MRKKCSVCLWILVLLLSCLSGKSAYA (SEQ ID NO: 57) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 24. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 24. Тем не менее, ксиланаза с последовательностью SEQ ID NO: 24 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 57 или другой сигнальный пептид.
[0072] Нативная аминокислотная последовательность ксиланазы с последовательностью SEQ ID NO: 25 содержит сигнальный пептид MKLKKKMLTLLLTASMSFGLFGATSSA (SEQ ID NO: 58) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 25. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 25. Тем не менее, ксиланаза с последовательностью SEQ ID NO: 25 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 58 или другой сигнальный пептид.
Е. Ксилозидазы
[0073] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных ксилозидаз (Таблица 6), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
F. Лактоназы
[0074] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных лактоназ (Таблица 7), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
G. Хитозаназы
[0075] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных хитозаназ (Таблица 8), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0076] Нативная аминокислотная последовательность хитозаназы с последовательностью SEQ ID NO: 29 содержит сигнальный пептид MKISMQKADFWKKAAISLLVFTMFFTLMMSETVFA (SEQ ID NO: 59) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 29. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 29. Тем не менее, хитозаназа с последовательностью SEQ ID NO: 29 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 59 или другой сигнальный пептид.
[0077] Нативная аминокислотная последовательность хитозаназы с последовательностью SEQ ID NO: 124 содержит сигнальный пептид MHSQHRTARIALAVVLTAIPASLATAGVGYASTQASTAVK (SEQ ID NO: 139) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 124. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 124. Тем не менее, хитозаназа с последовательностью SEQ ID NO: 124 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 139) или другой сигнальный пептид.
Н. Глюканазы
[0078] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных глюканаз (Таблица 9), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0079] Нативная аминокислотная последовательность глюканазы с последовательностью SEQ ID NO: 42 содержит сигнальный пептид MKRSISIFITCLLITLLTMGGMIASPASA (SEQ ID NO: 60) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 42. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 42. Тем не менее, глюканаза с последовательностью SEQ ID NO: 42 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 60 или другой сигнальный пептид.
[0080] Нативная аминокислотная последовательность глюканазы с последовательностью SEQ ID NO: 43 содержит сигнальный пептид MPYLKRVLLLLVTGLFMSLFAVTATASA (SEQ ID NO: 61) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 43. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 43. Тем не менее, глюканаза с последовательностью SEQ ID NO: 43 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 61 или другой сигнальный пептид.
[0081] Нативная аминокислотная последовательность глюканазы с последовательностью SEQ ID NO: 44 содержит сигнальный пептид MKRSQTSEKRYRQRVLSLFLAVVMLASIGLLPTSKVQA (SEQ ID NO: 62) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 44. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 44. Тем не менее, глюканаза с последовательностью SEQ ID NO: 44 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 62 или другой сигнальный пептид.
[0082] Нативная аминокислотная последовательность глюканазы с последовательностью SEQ ID NO: 45 содержит сигнальный пептид MKPSHFTEKRFMKKVLGLFLVVVMLASVGVLPTSKVQA (SEQ ID NO: 63) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 45. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 45. Тем не менее, глюканаза с последовательностью SEQ ID NO: 45 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 63 или другой сигнальный пептид.
[0083] Нативная аминокислотная последовательность глюканазы с последовательностью SEQ ID NO: 125 содержит сигнальный пептид MFKKWKKFGISSLALVLVAAVAFTGWSAKASA (SEQ ID NO: 140) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 125. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 125. Тем не менее, глюканаза с последовательностью SEQ ID NO: 125 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 140 или другой сигнальный пептид.
I. Протеазы
[0084] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных протеаз (Таблица 10), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0085] Нативная аминокислотная последовательность протеазы с последовательностью SEQ ID NO: 47 содержит сигнальный пептид MKKGIIRFLLVSFVLFFALSTGITGVQA (SEQ ID NO: 64) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 47. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 47. Тем не менее, протеаза с последовательностью SEQ ID NO: 47 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 64 или другой сигнальный пептид.
[0086] Нативная аминокислотная последовательность протеазы с последовательностью SEQ ID NO: 127 содержит сигнальный пептид MVVFSKTAALVLGLSTAVSA (SEQ ID NO: 141) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 127. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 127. Тем не менее, протеаза с последовательностью SEQ ID NO: 127 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 141 или другой сигнальный пептид.
J. Маннаназы
[0087] Для упрощения поиска ниже предложено описание аминокислотной последовательности иллюстративной маннаназы (Таблица 11), а также номер указанной последовательности (SEQ ID NO).
[0088] Нативная аминокислотная последовательность маннаназы с последовательностью SEQ ID NO: 128 содержит сигнальный пептид MAKLQKGTILTVIAALMFVILGSAAPKA (SEQ ID NO: 142) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 128. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 128. Тем не менее, маннаназа с последовательностью SEQ ID NO: 128 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 142 или другой сигнальный пептид.
K. Пектиназы
[0089] Для упрощения поиска ниже предложено описание аминокислотной последовательности иллюстративной пектиназы (Таблица 12), а также номер указанной последовательности (SEQ ID NO).
[0090] Нативная аминокислотная последовательность пектолиазы с последовательностью SEQ ID NO: 129 содержит сигнальный пептид MPSAKPLFCLATLAGAALAAP (SEQ ID NO: 143) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 129. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 129. Тем не менее, пектолиаза с последовательностью SEQ ID NO: 129 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 143 или другой сигнальный пептид.
L. Кислые фосфатазы
[0091] Для упрощения поиска ниже переложены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных кислых фосфатаз (Таблица 13), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0092] Нативная аминокислотная последовательность кислой фосфатазы с последовательностью SEQ ID NO: 130 содержит сигнальный пептид MARGSMAAVLAVLAVAALRCAPAAA (SEQ ID NO: 144) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 130. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 130. Тем не менее, кислая фосфатаза с последовательностью SEQ ID NO: 130 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 144 или другой сигнальный пептид.
[0093] Нативная аминокислотная последовательность кислой фосфатазы с последовательностью SEQ ID NO: 131 содержит сигнальный пептид MRGLGFAALSLHVLLCLANGVSSRRTSSYV (SEQ ID NO: 145) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 131. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 131. Тем не менее, кислая фосфатаза с последовательностью SEQ ID NO: 131 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 145 или другой сигнальный пептид.
М. Фитазы
[0094] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных фитаз (Таблица 14), а также номера указанных последовательностей (SEQ ID NO).
[0095] Нативная аминокислотная последовательность фитазы с последовательностью SEQ ID NO: 132 содержит сигнальный пептид MWWGSLRLLLLLAAAVAA (SEQ ID NO: 146) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 132. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 132. Тем не менее, фитаза с последовательностью SEQ ID NO: 132 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 146 или другой сигнальный пептид.
[0096] Нативная аминокислотная последовательность фитазы с последовательностью SEQ ID NO: 133 содержит сигнальный пептид MWWGSLRLLLLLAAAVAA (SEQ ID NO: 146) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 133. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 133. Тем не менее, фитаза с последовательностью SEQ ID NO: 133 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 146 или другой сигнальный пептид.
[0097] Нативная аминокислотная последовательность фитазы с последовательностью SEQ ID NO: 134 содержит сигнальный пептид MGIWRGSLPLLLLAA (SEQ ID NO: 147) на амино-конце указанной последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 134. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 134. Тем не менее, указанная фитаза с последовательностью SEQ ID NO: 134 или любой из других ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 147 или другой сигнальный пептид.
N. Белкки экспансины
[0098] Для упрощения поиска ниже представлена аминокислотная последовательность иллюстративного экспансина (Таблица 15), а также номер указанной последовательности (SEQ ID NO).
[0099] Нативная аминокислотная последовательность белка экспансина с последовательностью SEQ ID NO: 74 содержит сигнальный пептид MKKIMSAFVGMVLLTIFCFSPQASA (SEQ ID NO: 68) на амино-конце последовательности, который непосредственно предшествует первой аминокислоте последовательности SEQ ID NO: 74. Указанный сигнальный пептид не включен в SEQ ID NO: 74. Тем не менее, протеаза с последовательностью SEQ ID NO: 74, любой из ферментов, описанных в настоящей заявке, или другой белок экспансин может необязательно содержать на амино-конце сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID NO: 74 или другой сигнальный пептид.
О. Мутации, приводящие к повышению активности фермента
[00100] Для любого из ферментов, описанных в настоящей заявке, включая как свободные ферменты, так и ферменты, экспрессирующиеся рекомбинантным микроорганизмом, указанный фермент может содержать по меньшей мере одну аминокислотную замену по отношению к последовательности того же фермента дикого типа, где указанная аминокислотная замена приводит к повышенной активности фермента по сравнению с активностью указанного фермента дикого типа при одинаковых условиях.
II. Модифицированные ферменты, обладающие АЦК-дезаминазной активностью
[00101] Предложены модифицированные ферменты 1-аминоциклопропан-1-карбоксилат (АЦК)-дезаминазы. АЦК-дезаминазы и D-цистеиндесульфгидразы (DCD) часто имеют сходные аминокислотные последовательности и могут иметь перекрывающиеся ферментативные активности, обладая способностью действовать как на 1-аминоциклопропан-1-карбоксилат (АСС), так и на D-цистеин в качестве субстратов. Некоторые ферменты обладают только одной из указанных активностей, тогда как другие способны действовать как в качестве АЦК-дезаминазы, так и в качестве D-цистеиндесульфгидразы. АЦК-дезаминазы расщепляют АЦК до аммония и альфа-кетобутирата, тогда как D-цистеиндесульфгидразы превращают D-цистеин в пируват и H2S и аммоний. АЦК является непосредственным предшественником этилена, который может вызывать нежелательные эффекты у растений, если присутствует на высоком уровне.
[00102] Таким образом, фермент, обладающий повышенной АЦК-дезаминазной активностью, был бы полезен для применения в сельском хозяйстве для снижения уровня АЦК и, таким образом, снижения уровня этилена. Нанесение АЦК-дезаминазы на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения (применение к), может стимулировать рост растения, способствовать здоровью растения (например, путем повышения поглощения питательных веществ) и медленному созреванию плода. Указанные эффекты в свою очередь приводят к повышению урожайности, активности роста в начале сезона и устойчивости растения к стрессам в начале сезона. АЦК-дезаминазы также могут защищать растения от патогенов, а также стрессов, вызванных абиотическими факторами.
[00103] Как объясняется более подробно ниже, в ферменты, обладающие D-цистеиндесульфгидразной и/или АЦК-дезаминазной активностью, можно вводить мутации для повышения АЦК-дезаминазной активности указанных ферментов. Кроме того, ферменты, обладающие АЦК-дезаминазной активностью, можно модифицировать таким образом, чтобы они содержали сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента при его экспрессии в микроорганизме. Указанная модификация обеспечивает более легкое получение и очистку фермента. Такие модификации (мутации и добавление сигнального пептида) можно использовать по отдельности или в комбинации друг с другом. Все растения производят АЦК и отвечают на этилен. В связи с этим такие модифицированные ферменты АЦК-дезаминазы имеют широкое применение.
[00104] Аминокислотные последовательности для трех ферментов дикого типа представлены выше в Таблице 2 как последовательности SEQ ID NO: 7-9 и 113. Последовательности соответствующих вариантов указанных ферментов дикого типа, содержащих две аминокислотные замены, приводящие к повышенной АЦК-дезаминазной активности, представлены выше в Таблице 2 как последовательности SEQ ID NO: 10-12 и 114.
[00105] Встречающиеся в природе АЦК-дезаминазы не являются секретируемыми белками. АЦК-дезаминазы обнаружены во многих типах микроорганизмов, включая бактерии типов Bacteriodetes, Firmicutes и Actinobacteria и бактерии родов Pseudomonas, Bacillus, Rhizobium, Bradyrhizobium, а также многие другие бактерии. Однако АЦК-дезаминазы, встречающиеся в указанных бактериях, являются внутриклеточными, и их контактирование с субстратом АЦК из растения-хозяина, которое они колонизируют, органично.
[00106] В настоящей заявке предложена модифицированная АЦК-дезаминаза, которая содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции АЦК-дезаминазы из микроорганизма, в котором он экспрессируется. Указанная АЦК-дезаминаза может экспрессироваться в микроорганизме, который затем можно наносить на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. АЦК-дезаминаза секретируется микроорганизмом в области его контакта с субстратом указанной АЦК-дезаминазы. Секретируемая АЦК-дезаминаза, таким образом, способна стимулировать рост растения и/или обеспечивать здоровье растения.
[00107] Предложен фермент. Указанный фермент содержит аминокислотную последовательность, кодирующую фермент, обладающий 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминазной (АЦК-дезаминазой) активностью, и сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента при его экспрессии в микроорганизме.
[00108] Фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью может содержать фермент из бактерии рода Bacillus.
[00109] В качестве дополнения или альтернативы, в аминокислотную последовательность фермента АЦК-дезаминазы можно вводить одну или более аминокислотных замен для повышения активности фермента.
[00110] Предложен фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью. Аминокислотная последовательность указанного фермента содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа из бактерии рода Bacillus. Аминокислотная замена приводит к повышенной АЦК-дезаминазной активности по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа при одинаковых условиях.
[00111] Фермент, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную замену, может дополнительно содержать сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента при его экспрессии в микроорганизме.
[00112] Для любого фермента, обладающего АЦК-дезаминазной активностью, микроорганизм, в которой экспрессируется указанный фермент, может содержать бактерию рода Bacillus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Rhizobium, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Paracoccus, бактерию рода Mesorhizobium, бактерию рода Bradyrhizobium, бактерию рода Actinobacter, бактерию рода Arthrobacter, бактерию рода Azotobacter, бактерию рода Azosprillium, факультативную метилотрофную бактерию с розовым пигментом, микоризный гриб, гриб рода Glomus, гриб рода Trichoderma, гриб рода Kluyera, гриб рода Gliocladium или любую их комбинацию.
[00113] Например, микроорганизм может содержать бактерию рода Bacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Paenibacillus или любую их комбинацию.
[00114] Для любого фермента, обладающего АЦК-дезаминазной активностью, указанный фермент может содержать фермент бактерии Bacillus thuringiensis или фермент бактерии Bacillus pseudomycoides.
[00115] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00116] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00117] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00118] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00119] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00120] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00121] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00122] Фермент может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, где указанный фермент обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00123] Фермент может содержать две аминокислотные замены по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа, где указанные аминокислотные замены приводят к повышенной АЦК-дезаминазной активности по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента дикого типа при одинаковых условиях.
[00124] Например, аминокислотная последовательность фермента может содержать замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 7 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 7 на лейциновый остаток.
[00125] Аминокислотная последовательность фермента может содержать замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 8 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 8 на лейциновый остаток.
[00126] Аминокислотная последовательность фермента может содержать замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 9 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 9 на лейциновый остаток.
[00127] Аминокислотная последовательность фермента может содержать замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 113 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 113 на лейциновый остаток.
[00128] Фермент может содержать любую из последовательностей SEQ ID NO: 10, 11, 12 или 14.
[00129] Когда фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, содержит сигнальный пептид, но не содержит какие-либо аминокислотные замены по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа, АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113.
[00130] Сигнальные пептиды, которые можно использовать для модификации ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, дополнительно описаны в Разделе XII ниже.
III. Рекомбинантные бактерии, экспрессирующие модифицированные ферменты, обладающие АЦК-дезаминазной активностью, и составы, содержащие указанные модифицированные ферменты или рекомбинантные бактерии, экспрессирующие модифицированные ферменты
[00131] Также предложены рекомбинантные микроорганизмы, экспрессирующие любой из ферментов, описанных выше в Разделе II.
[00132] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, экспрессирующих фермент, описанных выше в Разделе II, экспрессия указанного фермента предпочтительно повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях.
[00133] Подходящие микроорганизмы, которые можно применять для экспрессии ферментов, описаны ниже в Разделе XIII.
[00134] Также предложены составы, содержащие приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель и любой из модифицированных ферментов, описанных выше в Разделе II, или рекомбинантный микроорганизм, экспрессирующий любой из модифицированных ферментов. Подходящие носители, которые можно использовать в таких составовах, и дополнительные компоненты для состава описаны ниже в Разделе XVI.
IV. Способы стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения
[00135] Предложены способы стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Как описано более подробно ниже, указанные способы включают нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма, экспрессирующего указанный фермент или белок экспансин, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00136] Нанесение ферментов или белков экспансинов или рекомбинантных бактерий предпочтительно приводит к доставке более высокого уровня указанного фермента или белка экспансина на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, по сравнению с уровнем указанного фермента или белка экспансина, который встречается в естественных условиях в среде для роста растения, на семени растения или в области, окружающей указанное растение или семя растения.
А. Модифицированные ферменты, обладающие АЦК-дезаминазной активностью
[00137] Предложен способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение любого из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, описанных выше в Разделе II, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. В качестве альтернативы, способ может включать нанесение состава, содержащего приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель и любой из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, описанных выше в Разделе II, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00138] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение любого из рекомбинантных микроорганизмов, описанных выше в Разделе III, экспрессирующих фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. В качестве альтернативы, способ может включать нанесение состава, содержащего приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель и любой из рекомбинантных микроорганизмов, описанных выше в Разделе III, экспрессирующих фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00139] Например, способ может включать нанесение любого из ферментов, описанных в Разделе II выше, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00140] Способ может включать нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00141] Способ может включать нанесение любого из рекомбинантных организмов, описанных выше в Разделе III, на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00142] Влияние на растения любого из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, описанных в данном разделе или в каком-либо другом месте в настоящей заявке, можно исследовать, например, путем измерения увеличения массы корней, увеличения высоты растений, повышения урожайности, повышения образования клубеньков, изменений в старении листьев, изменений в прорастании семян и задержки созревания плода.
В. Фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, кислые фосфатазы, фитазы, АЦК-дезаминазы и белки экспансины
1. Свободные ферменты
[00143] Как описано более подробно ниже, предложены способы стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающие применение фосфолипаз, липаз, ксилозидаз, лактоназ, хитозаназ, глюканаз, протеаз, маннаназ, пектиназ, кислых фосфатаз, фитаз, АЦК-дезаминаз и/или белков экспансинов и/или рекомбинантных бактерий, экспрессирующих указанные ферменты или белки экспансины.
[00144] Предложен способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00145] Фермент предпочтительно выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00146] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение двух или более свободных ферментов на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, маннаназы, пектиназы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[00147] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на растение или семя растения. Фермент содержит глюканазу. Нанесение фермента на семя растения включает: (а) нанесение фермента на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения ферментом.
[00148] В соответствии со способом, включающим нанесение свободного фермента на растение или семя растения, где фермент содержит глюканазу, указанный способ может включать покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим фермент и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00149] В соответствии со способом, включающим нанесение свободного фермента на растение или семя растения, где фермент содержит глюканазу, указанный способ может дополнительно включать нанесение фермента или белка экспансина на среду для роста растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Например, способ может включать нанесение фермента или белка экспансина на среду для роста растения. Способ может включать нанесение фермента и белка экспансина на среду для роста растения.
[00150] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Фермент содержит глюканазу. Способ также включает нанесение белка экспансина на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00151] В соответствии со способом, включающим нанесение свободного фермента и белка экспансина, нанесение указанного фермента или белка экспансина на семя растения включает: (а) нанесение указанного фермента или белка экспансина на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения указанным ферментом или белком экспансином. Например, способ может включать покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель и фермент, белок экспансин или фермент и белок экспансин.
[00152] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение свободного фермента на растение или семя растения. Указанный фермент содержит фитазу.
[00153] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение удобрения и свободного фермента на среду для роста растения, область, окружающую указанное растение или семя растения, или на растение или семя растения. Указанный свободный фермент содержит фитазу.
2. Рекомбинантные микроорганизмы
[00154] Предложен способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00155] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00156] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00157] Предложен другой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения. Указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения. Рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[00158] В любом из способов фермент или белок экспансин может экспрессироваться во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00159] Когда фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма, указанный рекомбинантный микроорганизм может представлять собой спорообразующий микроорганизм.
[00160] В любом из способов, отличных от способов, в которых фермент не является частью гибридного белка, фермент или белок экспансин может дополнительно содержать сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина. Подходящие сигнальные пептиды описаны в Разделе XII ниже.
[00161] Для любого из способов фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00162] Для любого из способов фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием интактной споры члена семейства бактерий Bacillus cereus.
[00163] Для любого из способов, отличных от способов, включающих применение сигнального пептида, фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не представляет собой часть гибридного белка.
С. Способы доставки ферментов, экспансинов и/или рекомбинантных микроорганизмов к растениям
[00164] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, указанный способ может включать нанесение фермента или рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения. Например, фермент или рекомбинантный микроорганизм можно наносить в бороздах или включать в почвенную добавку. В качестве альтернативы или дополнения, фермент или рекомбинантный микроорганизм можно наносить в качестве пропитки на сухую частицу, вермикулит или другой матрикс, пластмассовый полимер, торфяной мох или почвенную смесь до нанесения на среду для роста растения. Фермент или рекомбинантный микроорганизм также можно наносить на среду для роста растения с использованием источника воды, линии точечного полива, путем разбросного внесения в почву в жидком виде или путем разбросного внесения в почву в сухом виде.
[00165] Среда для роста растения может содержать или состоять по существу из удобрения. Смесь удобрения и фермента или рекомбинантного микроорганизма затем можно наносить в почву или другую среду для роста растения с применением стандартных методов внесения удобрения, включая внесение удобрения в борозды, нанесение удобрения 2×2, разбросное внесение удобрения, пропитку удобрением, внесение с помощью линии точечного полива, поверхностное внесение и т.д.
[00166] В любом из способов, описанных в настоящей заявке, способ может включать нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на растение.
[00167] В любом из способов, описанных в настоящей заявке, способ может включать нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма к корням растения.
[00168] В любом из способов, описанных в настоящей заявке, способ может включать некорневое применение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма.
[00169] В любом из способов, описанных в настоящей заявке, способ может включать применение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма к семени растения.
[00170] Когда способ включает нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на семя растения, указанное нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного организма к семени растения может включать: (а) нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного организма на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения ферментом, белком экспансином или рекомбинантным организмом.
[00171] Например, способ может включать покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель и фермент, белок экспансин, рекомбинантный микроорганизм или их комбинацию.
V. Семена растений
[00172] Также предложены семена растений, обработанные ферментом, белком экспансином или рекомбинантным микроорганизмом, который экспрессирует указанный фермент или белок экспансин.
А. Семена растений, обработанные модифицированными ферментами, обладающими АЦК-дезаминазной активностью
[00173] Предложено обработанное семя растения. Семя растения обработано любым из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, описанных выше в Разделе II. В качестве альтернативы, семя растения обработано составом, содержащим любой из ферментов, обладающих АЦК-дезаминазной активностью, описанных выше в Разделе II, и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00174] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения обработано любым из рекомбинантных микроорганизмов, экспрессирующих фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, описанных выше в Разделе III. В качестве альтернативы, семя растения обработано составом, содержащим любой из рекомбинантных микроорганизмов, экспрессирующих фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, описанный выше в Разделе III.
В. Семена растений, обработанные ферментом или рекомбинантными микроорганизмами
[00175] Предложены семена растений, обработанные ферментами, белками экспансинами или рекомбинантными бактериями.
1. Свободные ферменты
[00176] Предложено обработанное семя растения. Семя растения обработано свободным ферментом. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00177] Фермент предпочтительно выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00178] Предложен другой вариант реализации обработанного семени растения. Указанное семя растения обработано двумя или более свободными ферментами, где указанные ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[00179] Предложено обработанное семя растения. Указанное семя растения обработано свободным ферментом и белком экспансином. Фермент содержит глюканазу.
[00180] Предложено покрытое семя растения. Указанное семя растения покрыто свободным ферментом. Фермент содержит глюканазу.
2. Рекомбинантные микроорганизмы
[00181] Предложено семя растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00182] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, где экспрессия фермента повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00183] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00184] Предложен другой вариант реализации семени растения. Указанное семя растения покрыто рекомбинантным микроорганизмом. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[00185] Для любого семени фермент или белок экспансин может экспрессироваться во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00186] Когда фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма, указанный рекомбинантный микроорганизм может представлять собой спорообразующий микроорганизм.
[00187] Для любого семени, отличных от вариантов, в которых фермент не является частью гибридного белка, указанный фермент или белок экспансин может дополнительно содержать сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина. Подходящие сигнальный пептиды описаны в Разделе XII ниже.
[00188] Для любого семени фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00189] Для любого семени фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием интактной споры представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00190] Для любого семени, отличных от вариантов, включающих применение сигнального пептида, фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не представлял собой часть гибридного белка.
С. Покрытые семена растений
[00191] Для любого семени растений указанное семя растения может быть покрыто ферментом, рекомбинантным микроорганизмом, белком экспансином или любой их комбинацией.
[00192] Например, семя растения может покрыто ферментом и белком экспансином.
[00193] Любое из семян растений может быть покрыто составом для покрытия семян, содержащим фермент, рекомбинантный микроорганизм, белок экспансин или любую их комбинацию и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
VI. Композиции
[00194] Предложены композиции, содержащие удобрение и фермент или белок экспансин или рекомбинантный микроорганизм, экспрессирующий указанный фермент или белок экспансин на повышенном уровне.
А. Ферменты
[00195] Предложена композиция. Указанная композиция содержит удобрение и фермент или белок экспансин. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00196] Фермент предпочтительно содержит свободный фермент.
В. Рекомбинантные микроорганизмы
[00197] Предложена композиция. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00198] Предложен другой вариант реализации композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00199] Предложен другой вариант реализации композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00200] Предложен другой вариант реализации композиции. Указанная композиция содержит удобрение и рекомбинантный микроорганизм. Указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансин, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях. Фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных. Фермент или белок экспансин не является частью гибридного белка.
[00201] Для любой композиции фермент или белок экспансин может экспрессироваться во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00202] Когда фермент или белок экспансин экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма, указанный рекомбинантный микроорганизм может представлять собой спорообразующий микроорганизм.
[00203] Для любой композиции, отличных от вариантов, в которых фермент не является частью гибридного белка, указанный фермент или белок экспансин может дополнительно содержать сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента или белка экспансина. Подходящие сигнальный пептиды описаны в Разделе XII ниже.
[00204] Для любой композиции фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00205] Для любой композиции фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не связан с экзоспорием интактной споры члена семейства бактерий Bacillus cereus.
[00206] Для любой композиции, отличных от вариантов, которые включают применение сигнального пептида, фермент или белок экспансин в соответствующих случаях не представляет собой часть гибридного белка.
С. Носители и дополнительные агрохимикаты
[00207] Для любой композиции указанная композиция может дополнительно содержать помимо удобрения приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, дополнительный агрохимикат или их комбинацию. Подходящий носители и агрохимикаты описаны в Разделе XVI ниже.
VII. Ферменты и белки экспансины для применения со способами, семенами растений или композициями
[00208] Фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, глюканазы, белки экспансины, фитазы, кислые фосфатазы, пектиназы, маннаназы и АЦК-дезаминазы, подходящие для применения в связи со способами, семенами и композициями, описаны ниже.
А. Фосфолипазы
[00209] Фермент может содержать фосфолипазу.
[00210] Фосфолипазы можно использовать в любых целях, выбранных из стимулирования роста растения или улучшения здоровья растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особо подходящими для стимулирования роста растения, повышения поглощения питательных веществ и/или усиления развития корней и образования клубеньков. Повышение образования клубеньков на корнях приводит к повышению способности растения вступать в симбиотические отношения с азотфиксирующими микроорганизмами в почве, приводя к повышенному поглощению азота и повышенной скорости роста. Указанные эффекты также приводят к снижению чувствительности к стрессам из окружающей среды, таким как засуха.
[00211] Фосфолипазы представляют собой ферменты, которые обладают специфичной активностью в отношении фосфолипидов, высвобождая свободные жирные кислоты из сложных фосфолипидов. Фосфолипазы можно разделить на пять основных классов: фосфолипаза А, фосфолипаза В, фосфолипаза С, фосфолипаза D и фосфолипаза Е. Каждый из указанных классов действует на конкретные типы фосфолипидов.
[00212] Когда фермент содержит фосфолипазу, указанная фосфолипаза может содержать фосфолипазу А, фосфолипазу В, фосфолипазу С, фосфолипазу D, фосфолипазу Е или любую их комбинацию.
[00213] Например, фосфолипаза может содержать фосфолипазу А, фосфолипазу С, фосфолипазу D или любую их комбинацию.
[00214] Когда фосфолипаза содержит фосфолипазу А, указанная фосфолипаза А может содержать фосфолипазу А1, фосфолипазу А2 или их комбинацию.
[00215] Фосфолипаза А2 может содержать фосфолипазу А2 группы II, фосфолипазу А2 группы IIC, фосфолипазу А2 группы IID, фосфолипазу А2 группы IIE, фосфолипазу А2 группы IIF, фосфолипазу А2 группы III, фосфолипазу А2 группы IV, фосфолипазу А2 группы IVB, фосфолипазу А2 группы IVC, фосфолипазу А2 группы IVD, фосфолипазу А2 группы IVE, фосфолипазу А2 группы VIF, фосфолипазу А2 группы V, фосфолипазу А2 группы VI, фосфолипазу А2 группы VII, фосфолипазу А2 группы X, фосфолипазу А2 группы XII, фосфолипазу А2 группы XIIB, фосфолипазу А2 группы XV, фосфолипазу А2 группы XVI или любую их комбинацию.
[00216] Когда фосфолипаза содержит фосфолипазу В, указанная фосфолипаза В может содержать фосфолипазу В1.
[00217] Когда фосфолипаза содержит фосфолипазу С, указанная фосфолипаза С может содержать фосфолипазу С бета 1, фосфолипазу С бета 2, фосфолипазу С бета 3, фосфолипазу С бета 4, фосфолипазу С дельта 1, фосфолипазу С дельта 3, фосфолипазу С дельта 4, фосфолипазу С эпсилон 1, фосфолипазу С гамма 1, фосфолипазу С гамма 2, фосфолипазу С эта 1, фосфолипазу С эта 2, фосфолипазу С зета 1 или любую их комбинацию.
[00218] Когда фосфолипаза содержит фосфолипазу D, указанная фосфолипаза D может содержать фосфолипазу D1, фосфолипазу D2, фосфолипазу D, член 3, фосфолипазу D, член 4, фосфолипазу D, член 5, фосфолипазу D, член 6 или любую их комбинацию.
[00219] Фосфолипаза может содержать 1-алкил-2-ацетилглицерофосфохолинэстеразу, фосфатидилинозитолдеацилазу, фосфоинозитидфосфолипазу С, сфингомиелинфосфодиэстеразу, сфингомиелинфосфодиэстеразу D, алкилглицерофосфоэтаноламинфосфодиэстеразу, специфичную в отношении вариабельного поверхностного гликопротеина фосфолипазу С, гликозилфосфатидилинозитолфосфолипазу D, гидролизующую N-ацетилфосфатидилэтаноламин фосфолипазу D, фосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, гликозилфосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 2 (PNPLA2), содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 3 (PNPLA3) или любую их комбинацию.
[00220] Фосфолипаза может содержать фосфолипазу бактерий рода Streptomyces (например, фосфолипазу Streptomyces chromofuscus, такую как фосфолипаза D Streptomyces chromofuscus), фосфолипазу бактерий рода Bacillus (например, фосфолипазу Bacillus cereus, такую как специфичная в отношении фосфатидилхолина фосфолипаза С Bacillus cereus или специфичная в отношении фосфатидилинозитола фосфолипаза С Bacillus cereus или фосфолипаза Bacillus thuringiensis), фосфолипазу бактерий рода Clostridium (например, фосфолипазу Clostridium perfringens, такую как фосфолипаза С Clostridium perfringens) или любую их комбинацию.
[00221] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00222] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00223] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00224] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00225] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00226] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00227] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00228] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00229] Фосфолипаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00230] Когда фосфолипаза содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С бактерий Bacillus cereus (например, SEQ ID NO: 115), способ может дополнительно включать применение маннаназы (например, SEQ ID NO: 128) или ксилоглюканазы (например, SEQ ID NO: 125) на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00231] Когда фосфолипаза содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С бактерий Bacillus cereus (например, SEQ ID NO: 115), семя может быть дополнительно обработано маннаназой (например, SEQ ID NO: 128) или ксилоглюканазой (например, SEQ ID NO: 125).
[00232] Когда фосфолипаза содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С бактерий Bacillus cereus (например, SEQ ID NO: 115), композиция может дополнительно содержать маннаназу (например, SEQ ID NO: 128) или ксилоглюканазу (например, SEQ ID NO: 125).
[00233] Специфичная в отношении фосфатидилхолина фосфолипаза С бактерий Bacillus cereus и маннаназа могут присутствовать в способе, на семени или в композиции в синергически эффективном количестве.
[00234] Специфичная в отношении фосфатидилхолина фосфолипаза С бактерий Bacillus cereus и ксилоглюканаза могут присутствовать в способе, на семени или в композиции в синергически эффективном количестве.
В. Липазы
[00235] Фермент может содержать липазу.
[00236] Липазы представляют собой ферменты, которые обладают специфичной активностью в отношении липидов, отщепляя цепи жирных кислот от более крупных липидных молекул, таких как триглицериды. Липазы можно применять в любых целях, выбранных из стимулирования роста растения или способствования здоровью растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особо подходящими для стимулирования роста растения и усиления поглощения питательных веществ. Указанные эффекты в свою очередь приводят к повышенной урожайности, улучшенной активности роста в начале сезона и пониженной чувствительности растений к стрессам в начале сезона.
[00237] Липаза может содержать липазу сложного карбоксиэфира, диацилглицеринлипазу альфа, диацилглицеринлипазу бета, липазу А, липазу печени, чувствительную к гормонам липазу, желудочную липазу, эндотелиальную липазу, член семейства липаз Н, член семейства липаз I, член семейства липаз J, член семейства липаз K, член семейства липаз М, член семейства липаз N, липопротеиновую липазу, моноглицеридлипазу, связанный с липазой белок 2 поджелудочной железы, связанный с липазой белок 3 поджелудочной железы, ацилглицеринлипазу, галактолипазы, липопротеиновую липазу или любую их комбинацию.
[00238] Липаза может содержать липазу Bacillus subtilis, липазу Bacillus thuringiensis, липазу Bacillus cereus, липазу Bacillus clausii, липазу Burkholderia cepacia, липазу Burkholderia stearothermophilus, липазу Pseudomonas или любую их комбинацию.
[00239] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00240] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00241] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00242] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00243] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00244] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00245] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00246] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00247] Липаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
С. Ксиланазы
[00248] Фермент может содержать ксиланазу.
[00249] Ксиланазы действуют на полисахарид ксилан - общеизвестный сахар, который встречается в растениях и в почве. Ксиланазы можно использовать в качестве средства обработки семян, доставлять к среде для роста растения (например, путем внесения в борозды или в качестве почвенной добавки) или наносить в форме некорневой обработки на растения для получения более маленьких сахарных цепей, которые могут поглощаться растением или использоваться для подпитки окружающего микробиома.
[00250] Когда фермент содержит ксиланазу, указанная ксиланаза может содержать бета-ксиланазу.
[00251] Например, бета-ксиланаза может содержать глюкуроноарабиноксилан-эндо-1,4-бета-ксиланазу, экзо-1,4-бета-ксиланазу, эндо-1,4-бета-ксиланазу или любую их комбинацию.
[00252] Ксиланаза может содержать ксиланазу бактерий рода Caldicellulosiruptor (например, ксиланазу Caldicellulosiruptor saccharolyticus), ксиланазу бактерий рода Bacillus (например, ксиланазу Bacillus subtilis или ксиланазу Bacillus stearothermophilus), ксиланазу грибов рода Neocallimastix (например, ксиланазу Neocallimastix patriciarum), ксиланазу грибов рода Thermomyces (например, ксиланазу Thermomyces lanuginosus) или любую их комбинацию.
[00253] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00254] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00255] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00256] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00257] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00258] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00259] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00260] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00261] Ксиланаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
D. Ксилозидазы
[00262] Фермент может содержать ксилозидазу.
[00263] Ксилозидазы отщепляют отдельные молекулы ксилоз от более коротких фрагментов ксилана - распространенного полисахарида, который встречается в растениях и в почве. Ксилозидазы можно применять в качестве средства обработки семян, доставлять в среду для роста растения (например, путем внесения в борозды или в качестве почвенной добавки) или применять в качестве некорневой обработки на растениях для создания более малых углеводных цепей, которые могут поглощаться растением или использоваться для подпитки окружающего микробиома.
[00264] Например, ксилозидаза может содержать ксилозидазу Caldicellulosiruptor saccharolyticus, ксилозидазу Bacillus pumilus или их комбинацию.
[00265] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00266] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00267] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00268] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00269] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00270] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00271] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00272] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00273] Ксилозидаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
Е. Лактоназы
[00274] Фермент может содержать лактоназу.
[00275] Лактоназы можно использовать для любой из целей, выбранных из стимулирования роста растения или улучшения здоровья растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особо подходящими для снижения чувствительности растений к патогенам. Лактоназы также описаны как ацил-гомосериновые лактоназы и представляют собой металлоферменты, продуцируемые конкретными видами бактерий. Например, лактоназы могут быть обнаружены в бактериях типов Bacteriodetes, Firmicutes, Actinobacteria и в бактериях родов Pseudomonas и Bacillus, а также в других бактериях. Действие лактоназ направлено на ацилированные гомосериновые лактоны, которые инактивируются указанными лактоназами. Лактоназы гидролизуют сложноэфриные связи малых гормон-подобных молекул, общеизвестных как гомосеринлактоны. При гидролизе указанных лактоновых связей лактоназы действуют таким образом, чтобы предотвратить связывания указанных гомосеринлактонов с их регулируемыми на уровне транскрипции мишенями и, таким образом, препятствуют дистанционным микроб-микробным взаимодействиям. Однако секреция лактоназ встречающимися в природе бактериями, которые колонизируют почву или растения, ограничена и является индуцибельной. Таким образом, обеспечение более высокого уровня лактоназ в окружающей растение среде является желательным.
[00276] Свободные лактоназы или рекомбинантные бактерии, экспрессирующие указанные лактоназы, можно наносить на растения (например, путем некорневой обработки или в качестве средства обработки семян) или среду для роста растения для снижения уровня лактонов в окружающей среде. Без ограничения какой-либо конкретной теорией, считается, что указанное снижение уровня лактонов может в свою очередь приводить к снижению заболеваемости растений, а также вторичному повышению роста и развития растения.
[00277] При экспрессии лактоназы в рекомбинантном микроорганизме добавление к указанной лактоназе сигнала секреции позволило бы микроорганизму секретировать лактоназу в окружающую среду. Подходящие сигналы секреции описаны дополнительно ниже в Разделе XII.
[00278] Когда фермент содержит лактоназу, указанная лактоназа может содержать 1,4-лактоназу, 2-пирон-4,6-дикарбоксилатлактоназу, 3-оксоадипатеноллактоназу, актиномицинлактоназу, лактоназу, специфичную в отношении дезоксилимоноат-А-кольцевого лактона, глюконолактоназу, L-рамноно-1,4-лактоназу, лактоназу, специфичную в отношении лимоноат-D-кольцевого лактона, лактоназу, специфичную в отношении стероидов, триацетатлактоназу, ксилоно-1,4-лактоназу или любую их комбинацию.
[00279] Лактоназа может содержать лактоназу бактерий рода Bacillus (например, лактоназу Bacillus thuringiensis, лактоназу Bacillus pseudomycoides или их комбинацию), лактоназу бактерий рода Agrobacterium, лактоназу бактерий рода Rhodococcus, лактоназу бактерий рода Streptomyces, лактоназу бактерий рода Arthrobacter, лактоназу бактерий рода Sphingomonas, лактоназу бактерий рода Pseudomonas, лактоназу бактерий рода Klebsiella или любую их комбинацию.
[00280] Лактоназа может содержать AiiA.
[00281] Лактоназа предпочтительно является специфичной в отношении молекулы бактериального сигнального пути гомосеринлактона.
[00282] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00283] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00284] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00285] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00286] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00287] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00288] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00289] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
[00290] Лактоназа может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 27 или 28.
F. Хитозаназы
[00291] Фермент может содержать хитозаназу.
[00292] Хитозаназы можно использовать для любой из целей, выбранных из стимулирования роста растения или улучшения здоровья растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особо подходящими для повышения поглощения питательных веществ и повышения роста растения, приводящего в свою очередь к повышенной урожайности, улучшенной активности роста в начале сезона и пониженной чувствительности к стрессам в начале сезона. Хитозаназы также применимы для защиты растений от патогенов.
[00293] Хитозаназа может содержать экзо-1,4-бета-D-глюкозаминидазу, эндо-1,4-бета-d-глюкозаминидазу или их комбинацию.
[00294] Хитозаназа может содержать хитозаназу бактерий Bacillus subtilis, хитозаназу бактерий рода Streptomyces или любую их комбинацию.
[00295] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00296] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00297] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00298] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00299] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00300] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00301] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00302] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00303] Хитозаназа может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
G. Протеазы
[00304] Фермент может содержать протеазу.
[00305] Протеазы можно использовать в любых целях, выбранных из стимулирования роста растения или улучшения здоровья растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особенно полезными для повышения поглощения питательных веществ и стимулирования роста растения, приводящего в свою очередь к повышенной урожайности, улучшенной активности роста в начале сезона и пониженной чувствительности к стрессам в начале сезона. Протеазы также применимы для защиты растения от патогенов.
[00306] Протеаза может содержать субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, пептидазу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаматную протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу, аспарагиновую протеазу, гистидиновую протеазу, металлопротеазу или любую их комбинацию.
[00307] Например, протеаза может содержать цистеиновую протеазу, сериновую протеазу, треониновую протеазу, аспартатную протеазу, аспарагиновую протеазу, металлопротеазу, глутаматную протеазу или любую их комбинацию.
[00308] Например, протеаза может содержать металлопротеазу, сериновую протеазу, аспартатную протеазу, гистидиновую протеазу или любую их комбинацию.
[00309] Протеаза предпочтительно не состоит из метионинаминопептидазы.
[00310] Протеаза предпочтительно не содержит метионинаминопептидазу.
[00311] Протеаза может содержать протеазу бактерий рода Bacillus (например, протеазу Bacillus subtilis), протеазу грибов рода Aspergillus или их комбинацию.
[00312] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00313] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00314] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00315] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00316] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00317] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00318] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00319] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00320] Протеаза может содержать аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 100% любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
Н. Глюканазы
[00321] Фермент может содержать глюканазу.
[00322] Глюканазы можно использовать в любых целях, выбранных из стимулирования роста растения или улучшения здоровья растения, описанных в настоящей заявке, однако они являются особенно полезными для повышения поглощения питательных веществ и стимулирования роста растения, приводящего в свою очередь к повышенной урожайности, улучшенной активности роста в начале сезона и пониженной чувствительности к стрессам в начале сезона. Глюканазы также можно применять для защиты растения от патогенов и для снижения чувствительности растения к стрессу из окружающей среды.
[00323] Глюканазы используют воду для разрушения химических связей между отдельными молекулами глюкозы в глюканах, которые представляют собой длинноцепочечные полисахариды. Глюканы можно разделить на два типа - альфа-глюкан, состоящий в основном из альфа-цепей молекул глюкозы, и бета-глюканы, состоящие в основном из бета-цепей молекул глюкозы. Общеизвестные альфа-глюканы включают декстраны, гликогены, пуллаланы и крахмал. Альфа-глюканы в целом включают комбинации альфа-1,4-глюкана; альфа-1,6-глюкана и/или альфа-1,3-глюкана и разветвленные варианты. Глюканазы, которые специфично расщепляют альфа-связи, называются альфа-глюканазами. Бета-глюканазы специфичны в отношении бета-связей между глюканами. Общеизвестные бета-глюканы включают целлюлозу, ламинарии, лихенин, зимосан. В бета-глюканах обычно встречаются связи b1,3; b1,4 и/или b1,6 между молекулами глюкозы. Глюканазы могут представлять собой «экзо-» или «эндо-» глюканазы в зависимости от положения сайта расщепления полисахарида. Все из альфа-, бета-, экзо- и эндо-глюканаз эффективны для стимулирования роста растения.
[00324] Глюканаза может содержать эндоглюканазу, экзоглюканазу или их комбинацию.
[00325] Глюканаза содержит альфа-глюканазу, бета-глюканазу или их комбинацию.
[00326] Когда глюканаза содержит альфа-глюканазу, указанная альфа-глюканаза может содержать амилазу, альфа-1,4-глюканазу, альфа-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00327] Когда глюканаза содержит бета-глюканазу, указанная бета-глюканаза может содержать эндо-бета-глюканазу, экзо-бета-глюканазу или их комбинацию.
[00328] Бета-глюканаза может содержать бета-1,3-глюканазу, бета-1,3/1,4-глюканазу, бета-1,4-глюканазу, бета-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00329] Например, бета-глюканаза может содержать бета-1,3-глюканазу, бета-1,4-глюканазу или их комбинацию.
[00330] Бета-1,3-глюканаза может содержать бета-1,3-эндоглюканазу.
[00331] Бета-1,4-глюканаза может содержать бета-1,4-эндоглюканазу.
[00332] Глюканаза может содержать целлюлазу, гликозидгидролазу, ксилоглюкан:ксилоглюкозилтрансферазу, циклогептаглюканазу, олигоксилоглюкан-бета-гликозидазу, циклогексаглюканазу, ксилоглюканазу, целлюлоза-1,4-бета-целлобиозидазу, глюкан-эндо-1,3-бета-D-глюкозидазу, цикломальтодекстриназу, глюкан-1,3-бета-глюкозидазу, глюкан-эндо-1,3-альфа-глюкозидазу, эндо-1,3(4)-бета-глюканазу, экзо-бета-1,4-глюканазу, лихеназу, ламинариназу, глюкан-1,4-бета-глюкозидазу, глюкан-эндо-1,6-бета-глюкозидазу, глюкан-1,3-альфа-глюкозидазу, амилопектиназу, ламинариназу или любую их комбинацию.
[00333] Глюканаза может содержать нецеллюлолитическую глюканазу.
[00334] Для любого из способов, семян или композиций, в которых глюканаза содержит нецеллюлолитическую глюканазу, указанная нецеллюлолитическая глюканаза может содержать ксилоглюканазу, лихеназу, амилазу, амилоглюканазу, амилоглюкозидазу, ламинариназу, бета-1,3-глюканазу, бета-1,6-глюканазу, бета-1,3/1,4-глюканазу, альфа-1,4-глюканазу, альфа-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00335] Когда глюканаза содержит ксилоглюканазу, указанная ксилоглюканаза может содержать специфичную в отношении глюкана эндо-бета-1,4-глюканазу, специфичную в отношении глюкана экзо-бета-1,4-глюканазу или их комбинацию.
[00336] Ксилоглюканаза может содержать глюканазу бактерий рода Paenibacillus.
[00337] Когда глюканаза содержит ксилоглюканазу (например, SEQ ID NO: 125), способ может дополнительно включать применение маннаназы (например, SEQ ID NO: 128) на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00338] Когда глюканаза содержит ксилоглюканазу (например, SEQ ID NO: 125), семя может быть дополнительно обработано маннаназой (например, SEQ ID NO: 128).
[00339] Когда глюканаза содержит ксилоглюканазу (например, SEQ ID NO: 125), композиция может дополнительно содержать маннаназу (например, SEQ ID NO: 128).
[00340] Ксилоглюканаза и маннаназа могут присутствовать в способе, на семени или в композиции в синергически эффективном количестве.
[00341] Глюканаза может содержать целлюлазу.
[00342] Глюканаза может содержать эндоцеллюлазу, экзоцеллюлазу или их комбинацию.
[00343] Глюканаза может содержать глюканазу бактерий рода Acidothermus, глюканазу грибов рода Trichoderma, глюканазу грибов рода Aspergillus, глюканазу бактерий рода Paenibacillus, глюканазу моллюсков рода Helix, глюканазу бактерий рода Bacillus или любую их комбинацию.
[00344] Например, глюканаза может содержать глюканазу Bacillus circulans, глюканазу Bacillus subtilis (например, эндоглюканазу Bacillus subtilis или бета-глюкозидазу Bacillus subtilis), глюканазу Bacillus thuringiensis (например, эндоглюканазу Bacillus thuringiensis или бета-глюкозидазу Bacillus thuringiensis), глюканазу Bacillus cereus (например, эндоглюканазу Bacillus cereus или бета-глюкозидазу Bacillus cereus), глюканазу Trichoderma reesei (например, экзоцеллюлазу Trichoderma reesei или бета-1,4-эндоглюканазу Trichoderma reesi), глюканазу Bacillus clausii (например, эндоглюканазу Bacillus clausii или бета-глюкозидазу Bacillus clausii), глюканазу Helix pomatia (например, бета-1,3 эндоглюканазу Helix pomatia), глюканазу Acidothermus cellulolyticus (например, бета-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus) или любую их комбинацию.
[00345] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00346] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00347] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00348] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00349] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00350] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00351] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00352] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00353] Глюканаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00354] Когда глюканазу наносят (вносят) в составе или когда семя покрывают составом для покрытия семян, содержащим глюканазу, указанный состав может в соответствующих случаях содержать дополнительные агрохимикаты и/или микробный инокулянт. Например, состав может в соответствующих случаях содержать фунгицид, инсектицид, нематоцид, удобрение, растительный гормон, бактериальный инокулянт, грибковый инокулянт или любую их комбинацию. Конкретные фунгициды, инсектициды, нематоциды, удобрения, растительные гормоны, бактериальные инокулянты и грибковые инокулянты описаны в Разделе XVI ниже.
I. Фитазы
[00355] Фермент может содержать фитазу.
[00356] Фитазы действуют на фитиновые кислоты в почве - источник свободного фосфата для роста растения. Фитазы избирательно удаляют фосфаты из фитиновых кислот и высвобожденные фосфаты могут поглощаться соседними растениями.
[00357] Когда фермент содержит фитазу, указанная фитаза может содержать фитазу Triticum aestivum.
[00358] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00359] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00360] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00361] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00362] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00363] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00364] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00365] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00366] Фитаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00367] Фитаза может содержать смесь фитаз, содержащих последовательности SEQ ID NO: 132, 133 и 134.
J. Кислые фосфатазы
[00368] Фермент может содержать кислую фосфатазу.
[00369] Кислые фосфатазы действуют на нерастворимые и слабо растворимые формы фосфатов в почве и высвобождают их для поглощения растениями.
[00370] Когда фермент содержит кислую фосфатазу, указанная кислая фосфатаза может содержать кислую фосфатазу Triticum aestivum.
[00371] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00372] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00373] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00374] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00375] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00376] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00377] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00378] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00379] Кислая фосфатаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00380] Кислая фосфатаза может содержать смесь кислых фосфатаз, содержащую последовательности SEQ ID NO: 130 и 131.
[00381] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, включающих нанесение кислой фосфатазы, указанный способ может дополнительно включать нанесение второго фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00382] Для любого семени растений, описанных в настоящей заявке, обработанных или покрытых кислой фосфатазой, семя может быть дополнительно обработано или покрыто вторым ферментом.
[00383] Любая из содержащих кислую фосфатазу композиций, описанных в настоящей заявке, может дополнительно содержать второй фермент.
[00384] Второй фермент может содержать липазу, фосфолипазу, глюканазу, ксиланазу, пектиназу, маннаназу, лихеназу или любую их комбинацию. Липаза, фосфолипаза, глюканаза, ксиланаза, пектиназа, маннаназа или лихеназа может содержать любую из липаз, фосфолипаз, глюканаз, ксиланаз, пектиназ, маннаназ или лихеназ, описанных в настоящей заявке.
K. Пектиназы
[00385] Фермент может содержать пектиназу.
[00386] Пектиназы действуют на пектин и родственные полисахариды с высвобождением малых сахаров. Малые сахара в свою очередь поглощаются растением в качестве источников углерода и также могут питать микроорганизмы, которые изначально окружают указанное растение.
[00387] Когда фермент содержит пектиназу, указанная пектиназа может содержать пектолиазу.
[00388] Например, пектолиаза может содержать пектолиазу гриба Aspergillus japonicus.
[00389] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00390] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00391] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00392] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00393] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00394] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00395] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00396] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00397] Пектолиаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
L. Маннаназы
[00398] Фермент может содержать маннаназу.
[00399] Маннаназы действуют на глюкоманнаны и родственные полисахариды с высвобождением малых сахаров. Малые сахара в свою очередь поглощаются растением в качестве источников углерода и также могут питать микроорганизмы, изначально окружающие указанное растение.
[00400] Когда фермент содержит маннаназу, указанная маннаназа может содержать маннаназу бактерий рода Bacillus.
[00401] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00402] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00403] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00404] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00405] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00406] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00407] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00408] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00409] Маннаназа может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
М. АЦК-дезаминазы
[00410] Фермент может содержать АЦК-дезаминазу.
[00411] АЦК-дезаминаза может содержать любой из ферментов, описанных выше в Разделе II.
[00412] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00413] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00414] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00415] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00416] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00417] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00418] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00419] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00420] АЦК-дезаминаза может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
N. Белки экспансины
[00421] Белки экспансины способствуют увеличению растительных стенок во время роста растения. Экспансины, таким образом, являются, в частности, применимыми в любом из способов стимулирования роста растения, описанных в настоящей заявке.
[00422] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00423] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 75% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00424] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00425] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 85% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00426] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00427] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00428] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00429] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 99% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00430] Белок экспансин может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
VIII. Применение удобрений и/или биостимулирующих агентов со способами, семенами и композициями
[00431] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, указанный способ может дополнительно включать применение удобрения, биостимулирующего агента или их комбинации на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00432] Для любого семени растений, описанных в настоящей заявке, семя растения может быть дополнительно обработано или покрыто удобрением, биостимулирующего агента или их комбинацией.
[00433] Для любого из способов, семян или композиций, описанных в настоящей заявке, удобрение может содержать азот, фосфат (например, моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, ортофосфат, ортополифосфат или любую их комбинацию), калий (например, ацетат калия), цинк, железо, селен, бор, медь или любую их комбинацию.
[00434] Например, удобрение может содержать 12% аммиачного азот и 58% доступного фосфата.
[00435] Дополнительные удобрения, которое можно использовать, описаны в Разделе XVI ниже.
[00436] Биостимулирующий агент может содержать гиббереллиновую кислоту, индол-3-масляную кислоту, кинетин, ауксин, гомолог или производное ауксина или любую их комбинацию.
[00437] Для любого из способов или семян, включающих применение удобрения и/или биостимулирующего агента, фермент в соответствующих случаях содержит кислую фосфатазу, фосфолипазу, маннаназу, глюканазу или любую их комбинацию. Кислая фосфатаза, фосфолипаза, маннаназа или глюканаза может содержать любую из кислых фосфатаз, фосфолипаз, маннаназ или глюканаз, описанных в настоящей заявке.
IX. Способы получения фермента
[00438] Для любого из способов, семян или композиций, описанных в настоящей заявке, включающих применение свободного фермента и/или белка экспансина, указанный фермент или белок экспансин может содержать неочищенный клеточный экстракт, содержащий фермент или белок экспансин, частично очищенный фермент или белок экспансин или по существу очищенный фермент или белок экспансин.
[00439] Для любого из способов, семян или композиций, описанных в настоящей заявке, включающих применение свободного фермента и/или белка экспансина, указанный фермент или белок экспансин предпочтительно не содержит фермент или белок экспансин, связанный с экзоспорием представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00440] Для любого из способов, семян или композиций, описанных в настоящей заявке, включающих применение свободного фермента и/или белка экспансина, указанный фермент или белок экспансин предпочтительно не связан с экзоспорием интактной споры представителя вида бактерий Bacillus cereus.
X. Иммобилизация фермента и/или белка экспансина
[00441] Для любого из способов, семян или композиций, описанных в настоящей заявке, включающих применение свободного фермента и/или белка экспансина, указанный фермент или белок экспансин может содержать фермент или белок экспансин, иммобилизированный на матрице или подложке.
[00442] Матрица или подложка может содержать древесный уголь, биоуголь, наноуглерод, агарозу, альгинат, целлюлоза, производное целлюлозы, диоксид кремния, пластмассу, нержавеющую сталь, стекло, полистирол, керамику, доломит, глину, диатомовую землю, тальк, полимер, камедь, вододиспергируемый материал или любую их комбинацию.
[00443] Иммобилизация указанного фермента или белка экспансина на матрице или подложке предпочтительно приводит к более медленному высвобождению указанного фермента или белка экспансина в окружающую среду или на растение или семя растения по сравнению со скоростью высвобождения для того же неиммобилизированного фермента или белка экспансина при одинаковых условиях.
XI. Способы получения свободного фермента
[00444] Свободный фермент может быть получен с помощью ряда стандартных биохимических и молекулярно-биологических методов, в целом известных в данной области техники. Например, ген, кодирующий фермент, можно амплифицировать из хромосомной ДНК с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) и клонировать в подходящем векторе (например, плазмидном векторе). Вектор в соответствующих случаях содержит сайт множественного клонирования, в который может быть легко встроена молекула ДНК, кодирующая гибридный белок. Вектор в соответствующих случаях также содержит селективный маркер, такой как ген устойчивости к антибиотику, таким образом, чтобы бактерии, трансформированные, трансфицированные или соединенные с указанным вектором, можно было с легкостью идентифицировать и выделять. Когда вектор представляет собой плазмиду, указанная плазмида в соответствующих случаях также содержит ориджин репликации. В качестве альтернативы, ДНК, кодирующую белок фермента, можно встраивать в хромосомную ДНК микроорганизма-хозяина.
[00445] Организм-хозяин затем можно культивировать и фермент собирать из культуры. Можно применять неочищенный клеточный экстракт или частично очищать или по существу очищать фермент с применением стандартных биохимических методов.
[00446] Подходящие хозяева для крупномасштабного производства ферментов, включают виды рода Bacillus (например, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus coagulans, Bacillus megaterium, Bacillus thuringiensis, Bacillus fusiformis, Bacillus cereus или Bacillus mycoides), Escherichia coli, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, виды рода Streptomyces, виды рода Klebsiella, виды рода Mucor, виды рода Rhizopus, виды рода Mortierella, виды рода Kluyveromyces, виды рода Candida, Penicillium chrysogenum, виды рода Trichoderma, Sacchromyces cerevisiae, Pichia pastoris, Hansenula polymorpha, Kluyveromyces lactis, Yarrowia lipolytica, Schizosaccharomyces pombe и Candida utilitis, но не ограничиваются перечисленными.
[00447] Ферменты можно использовать в виде собранных из общего ферментационного бульона ферментов или в виде частично или по существу очищенных ферментов из ферментационной периодической культуры.
[00448] В качестве альтернативы, ферменты можно получать посредством скрининга микроорганизмов и выбора микроорганизмов, экспрессирующих указанный фермент на высоком уровне, что можно осуществлять путем изначальной селекции, обогащения и/или скрининга в питательной среде, которая содержит субстрат фермента в качестве источника питательных веществ для микроорганизмов. Часто осуществляют дополнительную селекцию с применением дифференциальных питательных сред, которые содержат индикатор, показывающий уровень и активность ферментов, продуцированных идентифицированными микроорганизмами. В указанные микроорганизмы можно вводить мутации и подвергать указанные микроорганизмы скринингу для идентификации изолятов, которые продуцируют указанные ферменты на повышенном уровне. Указанный микроорганизм можно применять в способах крупномасштабной и непрерывной ферментации для создания и секреции большого количества ферментов. Оптимизация процесса и условий ферментации может в целом приводить к повышению производительности микроорганизмов.
[00449] Ферменты также можно производить на высоком уровне с применением эукариотических клеточных линий, многие из которых можно конструировать таким образом, чтобы они секретировали ферменты на высоком уровне. Такие линии обеспечивают преимущества, связанные с различным уровнем критичных посттрансляционных модификаций и снижением ограничений, связанных с продукцией фермента в организме-хозяине. Такую продукцию ферментов также можно масштабировать до культуральных сосудов для крупномасштабного производства и проводить очистку и обработку ферментов, как описано выше. Примеры подходящих эукариотических клеточных линий для продукции ферментов включают, но не ограничиваются следующими: клетки насекомых, происходящие из таких насекомых, как Bombyx mori, Mamestra brassicae, Spodoptera frugiperda, Trichoplusiani или Drosophila melanogaster, и клеточные линии позвоночных, происходящие из таких позвоночных, как мышь, крыса, хомяк, человек или собака.
[00450] Другие потенциальные источники ферментов включают бесклеточные векторы экспрессии белка, включая векторы животного, бактериального, грибкового и растительного происхождения.
[00451] Трансгенные организмы, такие как растения, кролик, мышь, курица или лягушка, также можно использовать для продукции рекомбинантных ферментов. Например, растения можно конструировать таким образом, чтобы они экспрессировали ферменты на повышенном уровне, и указанные ферменты затем можно собирать из растения и очищать или использовать в виде неочищенного экстракта. Такие системы продукции дают возможность низкозатратной экспрессии ферментов и обеспечивают источник материала для доставки к растениям. Указанные способы обладают дополнительным преимуществом, которое заключается в том, что их можно легко масштабировать при минимальных усилиях.
[00452] В каждой из указанных систем продукции выход и качество желаемых ферментов можно улучшать с помощью методов генной инженерии и технологий изготовления. Например, генная инженерия может включать создание экспрессионных кассет и систем продукции с высоким уровнем экспрессии, удаление протеазы и деструктивных генов из микроорганизма-продуцента, оптимизацию фермента с точки зрения термостабильности и стабильности при длительном хранении и усиления способности фермента или микроорганизма-продуцента секретировать зрелый фермент в среду для легкости сбора и применения. Дополнительно экспрессионные штаммы можно использовать для создания точечных мутаций, которые могут приводить к повышенной способности продуцировать подходящие ферменты или продуцировать указанные ферменты на повышенном уровне. В некоторых случаях продуцирующий микроорганизм также можно применять и доставлять к семени растения, области, окружающей растения, к корням растения или области вблизи растения для получения желаемого эффекта in situ на растении.
[00453] Другие источники ферментов включают экстракты из животного, растения, насекомого, морской водоросли или другие биологические экстракты. Общеизвестные источники ферментов промышленного масштаба, созданных и/или очищенный таким образом, включают свиные и бычьи внутренние ткани, такие как сычуг, печень, слизистые, поджелудочная железа, а также растительные источники, такие как Carica papaya. Другим примером является очистка глюканаз из ячменя.
[00454] Многие коммерческие источники ферментов происходят из тканей, содержащий высокий уровень ферментов-мишеней, которые можно применять в исходном или в очищенном виде в сельском хозяйстве.
XII. Сигнальные пептиды
[00455] Любой сигнальный пептид можно использовать для модификации любого из ферментов, описанных в настоящей заявке, таким образом, чтобы указанный фермент секретировался из микроорганизма-хозяина, в котором он экспрессируется. Тип используемого сигнального пептида зависит в первую очередь от типа микроорганизма-хозяина, поскольку секреторный аппарат различных микроорганизмов различается по способности распознавать специфические сигнальный пептиды. Последовательности иллюстративных сигнальных пептидов представлены ниже в Таблице 16 вместе с видами бактерий, в которых указанные сигнальные пептиды встречаются в природе. Сигнальные пептиды приводят к секреции белка, к которому они присоединены, в бактериях рода, в котором они встречаются, а также в близкородственных родах бактерий. Например, сигнальная последовательность из Bacillus thuringiensis будет вызывать секрецию белка в бактериях рода Bacillus, а также бактериях рода Paenibacillus и Lysinibacillus.
[00456] Для упрощения поиска ниже представлены описания аминокислотных последовательностей иллюстративных сигнальных пептидов, которые можно добавлять к любому из ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, для индукции секреции указанных ферментов или белков экспансинов из микроорганизма, в котором он экспрессируется (Таблица 16). Любой из сигнальных пептидов, перечисленных в Таблице 16, ниже, можно добавлять на амино-конец любого из ферментов или белков экспансинов, описанных в настоящей заявке, для индуцирования секреции фермента или белка экспансина.
[00457] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00458] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00459] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00460] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00461] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00462] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00463] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00464] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00465] Например, сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73,135 и 137-147.
[00466] Сигнальные пептиды, подходящие для применения в бактериях рода Bacillus, бактериях рода Paenibacillus или бактериях рода Lysinibacillus, представлены в последовательностях SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00467] Таким образом, сигнальный пептид может, например, содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00468] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 75% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00469] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 80% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00470] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 85% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00471] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 90% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00472] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 95% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00473] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 98% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00474] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, по меньшей мере 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00475] Сигнальный пептид может содержать аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142.
[00476] Таким образом, например, когда сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную по последовательности любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139, 140 и 142, микроорганизм, в котором экспрессируется указанный фермент или белок экспансин, в соответствующих случаях содержит бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Pseudomonas или любую их комбинацию.
[00477] Например, микроорганизм может содержать бактерию Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus firmus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus aryabbattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Bacillus licheniformis, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или любую их комбинацию.
[00478] Микроорганизм предпочтительно содержит бактерию Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus, Bacillus pseudomycoides, Bacillus mycoides, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus fusiformis, Lysinibacillus sphericus или любую их комбинацию.
[00479] Сигнальный пептид предпочтительно присутствует на амино-конце указанного фермента или белка экспансина.
XIII. Рекомбинантные микроорганизмы
[00480] Рекомбинантные микроорганизмы, составы и композиции, содержащие указанные рекомбинантные микроорганизмы, способы применения указанных рекомбинантных микроорганизмов и семена, обработанные указанными рекомбинантными микроорганизмами, описаны в настоящей заявке выше.
[00481] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, композиций, способов или семян, описанных в настоящей заявке, фермент или белок экспансин может экспрессироваться под контролем конститутивного промотора.
[00482] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, композиций, способов или семян, описанных в настоящей заявке, фермент или белок экспансин может экспрессироваться под контролем индуцируемого промотора.
[00483] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, композиций, способов или семян, описанных в настоящей заявке, рекомбинантный микроорганизм может содержать бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, гриб рода Penicillium, бактерию рода Glomus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Arthrobacter, бактерию рода Paracoccus, бактерию рода Rhizobium, бактерию рода Bradyrhizobium, бактерию рода Azosprillium, бактерию рода Enterobacter, бактерию рода Escherichia или любую их комбинацию.
[00484] Когда рекомбинантный микроорганизм содержит рекомбинантный спорообразующий микроорганизм, указанный рекомбинантный спорообразующий микроорганизм может содержать бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, гриб рода Penicillium, гриб рода Glomus или любую их комбинацию.
[00485] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, композиций, способов или семян, описанных в настоящей заявке, рекомбинантный микроорганизм в соответствующих случаях содержит бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus или любую их комбинацию.
[00486] Например, рекомбинантный микроорганизм может содержать Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus aryabbattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или любую их комбинацию.
[00487] Рекомбинантный микроорганизм в соответствующих случаях содержит Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus, Bacillus pseudomycoides, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или их комбинацию.
[00488] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, способов или семян, описанных в настоящей заявке, рекомбинантный микроорганизм может содержать способствующий росту растений штамм бактерий, эндофитный штамм бактерий или штамм бактерий, который способствует росту растений и является эндофитным.
[00489] Штамм может продуцировать инсектицидный токсин (например, токсин Cry), фунгицидное соединение (например, β-1,3-глюканазу, хитозаназу, литиказу или их комбинацию), нематоцидное соединение (например, токсин Cry), бактерицидное соединение, быть устойчивым к одному или более антибиотикам, содержать одну или более свободно реплицирующихся плазмид, связываться с корнями растения, колонизировать корни растения, образовывать биопленки, солюбилизировать питательные вещества, секретировать органические кислоты или обладать комбинацией описанных свойств.
[00490] Например, указанный штамм может содержать:
(a) Bacillus aryabhattai САР53 (NRRL No. B-50819),
(b) Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL No. B-50817),
(c) Bacillus flexus BT054 (NRRL No. B-50816),
(d) Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL No. B-50820),
(e) Bacillus mycoides BT155 (NRRL No. B-50921),
(f) Enterobacter cloacae CAP12 (NRRL No. B-50822),
(g) Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL No. NRRL B-50821),
(h) Bacillus mycoides EE118 (NRRL No. B-50918),
(i) Bacillus subtilis EE148 (NRRL No. B-50927),
(j) Alcaligenes faecalis EE107 (NRRL No. B-50920),
(k) Bacillus mycoides EE141 (NRRL NO. B-50916),
(l) Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL No. B-50922),
(m) представителя вида Bacillus cereus EE128 (NRRL No. B-50917),
(n) Paenibacillus massiliensis BT23 (NRRL No. B-50923),
(о) представителя вида Bacillus cereus EE349 (NRRL No. B-50928),
(p) Bacillus subtilis EE218 (NRRL No. B-50926),
(q) Bacillus megaterium EE281 (NRRL No. B-50925),
(r) представителя вида Bacillus cereus EE-B00377 (NRRL B-67119);
(s) Bacillus pseudomycoides EE-B00366 (NRRL B-67120),
(t) Bacillus mycoides EE-B00363 (NRRL B-67121),
(u) Bacillus pumilus EE-B00143 (NRRL B-67123),
(v) Bacillus thuringiensis EE-B00184 (NRRL B-67122),
(w) Bacillus mycoides EE116 (NRRL No. B-50919),
(x) представителя вида Bacillus cereus EE417 (NRRL No. B-50974),
(y) Bacillus subtilis EE442 (NRRL No. B-50975),
(z) Bacillus subtilis EE443 (NRRL No. B-50976),
(aa) представителя вида Bacillus cereus EE444 (NRRL No. B-50977),
(bb) Bacillus subtilis EE405 (NRRL No. B-50978),
(cc) представитель вида Bacillus cereus EE439 (NRRL No. B-50979),
(dd) Bacillus megaterium EE385 (NRRL No. B-50980),
(ее) представителя вида Bacillus cereus EE387 (NRRL No. B-50981),
(ff) Bacillus circulans EE388 (NRRL No. B-50982),
(gg) Bacillus thuringiensis EE319 (NRRL No. B-50983),
(hh) представителя вида Bacillus cereus EE377 (NRRL No. B-67119),
(ii) Bacillus mycoides EE363 (NRRL No. B-67121),
(jj) Bacillus pseudomycoides EE366 (NRRL No. B-67120);
(kk) Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL No. B-50924);
или любую их комбинацию.
[00491] Каждый из указанных штаммов депонирован Службой сельскохозяйственных исследований (ARS) министерства сельского хозяйства США (USDA), расположенной по адресу 1815, North University, Пеория, Иллинойс 61604, США, и идентифицируется по номеру закладки NRRL, приведенному в круглых скобках. Штаммы (a)-(d), (f) и (g) были депонированы 11 марта 2013 г. Штаммы (е), (h)-(q), (w) и (kk) были депонированы 10 марта 2014. Штаммы (x)-(ff) были депонированы 10 сентября 2014 г., штамм (gg) был депонирован 17 сентября 2014 г. Штаммы (r)-(v), (hh), (ii) и (jj) были депонированы 19 августа 2015 г. Bacillus thuringiensis ВТ013А также известен как Bacillus thuringiensis 4Q7.
[00492] Способы выделения и характеристика указанных штаммов описаны в настоящей заявке ниже в Примерах. Частичные последовательности рибосомальной 16S РНК для каждого из указанных штаммов предложены в перечне последовательностей и суммированы ниже в Таблице 17 вместе с номерами их последовательностей (SEQ ID NO).
[00493] Эндофитный микроорганизм можно использовать для экспрессии ферментов. Тогда как многие микроорганизмы ризосферы находятся в симбиотических отношениях с растением, только небольшая субпопуляция указанных микроорганизмов может поглощаться растением и расти эндофитно. Несколько штаммов-представителей вида бактерий Bacillus cereus и несколько штаммов, не являющихся представителями вида Bacillus cereus, было выделено из кукурузных саженцев и, как было обнаружено, обладало способностью расти эндофитно в растениях. Также могут применяться другие эндофитные микроорганизмы, включая бактерии-эндофиты из следующих родов: Cellulomonas, Clavibacter, Curtobacterium, Pseudomonas, Paenibacilllus, Enterobacter, Bacillus, Klebsiella, Arthrobacter, Lysinibacillus, Pantoea, Actinomyces, Streptomyces, Alcaligenes и Microbacterium, но не ограничиваясь указанными. Также можно применять эндофитные грибы, включая грибы-эндофиты из следующих родов: Neotyphodium, Gliocadium, Acremonium lolii, Clavicipitaceae, Ascomycetes, Idriella, Xylariaceous, Ascomycotina, Deuteromycotina, Aspergillus, Phomopsis, Wardomyces, Fusarium, Dreschrella, Pestalotia, Curvularia, Humicola, Nodulisporium и Penicillium.
[00494] Многие микроорганизмы могут колонизировать растения, жить около растений, жить на растениях или становиться эндофитными по отношению к растениям. Указанные микроорганизмы могли бы обеспечить полезный механизм доставки ферментов-мишеней к растению, семени, области, окружающей растение, или среде для роста растения. Выбранные микроорганизмы, которые могут колонизировать корни растений или становиться эндофитными, можно подвергать скринингу, рекомбинантно модифицировать таким образом, чтобы они экспрессировали фермент или экспрессировали фермент на повышенном уровне, и производить в коммерческих масштабах и наносить на семя, растение или область, окружающую растение, для получения штамма, продуцирующего ферменты-мишени in situ (на растении или около растения). Указанные микроорганизмы также можно совершенствовать с помощью точечных мутаций или с помощью генной инженерии таким образом, чтобы они экспрессировали ферменты-мишени на более высоком уровне или экспрессировали новые ферменты-мишени для обеспечения пользы для растения. Скрининг точечных мутаций можно проводить путем введения мутаций в организм-хозяин и выбора мутантов с более высоким уровнем экспрессии фермента с помощью ферментативных анализов или с применением селективных сред, которые позволяют идентифицировать штаммы, экспрессирующие фермент на высоком уровне. Общеизвестные штаммы, которые являются полезными продуцентами ферментов, а также относятся к колонизирующим/эндофитным видам, включают: Bacillus argri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus firmus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus sphearicus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatu, другие виды рода Bacillus или их комбинацию, а также бактерии, которые перечислены в категории бактерий рода Bacillus в следующем источнике: Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, первое издание (1986), полностью включенном в настоящую заявку посредством ссылки. Другие потенциальные штаммы могут включать штаммы бактерий и грибов следующих родов: Cellulomonas, Clavibacter, Curtobacterium, Pseudomonas, Paenibacilllus, Enterobacter, Bacillus, Klebsiella, Arthrobacter, Lysinibacillus, Pantoea, Actinomyces, Sacchromyces, Rhizobium, Bradyrhizobium, Candida, Streptomyces, Alcaligenes, Chromatiales, Rhizobium, Bradyrhizobium, Rhodospiralles, Rhizobiales, Rhizobacteracae и Microbacterium, но не ограничиваются перечисленными.
[00495] Для любого из способов или семян, описанных в настоящей заявке, рекомбинантный микроорганизм может содержать смесь двух или более любых из рекомбинантных микроорганизмов, описанных в настоящей заявке.
[00496] Для любого из рекомбинантных микроорганизмов, составов, способов или семян, описанных в настоящей заявке, рекомбинантный микроорганизм может быть инактивированным. Инактивация приводит к получению микроорганизмов, которые неспособны воспроизводиться. Инактивация микроорганизмов может являться предпочтительной поскольку она дает возможность, например, доставки микроорганизма к растению или среде для роста растения при снижении или устранении любых неблагоприятных эффектов, которые может оказывать живой микроорганизм на растение или окружающую среду. Рекомбинантный микроорганизм можно инактивировать любыми физическими или химическими методами, например, с помощью термообработки, гамма-облучения, рентгеновского облучения, облучение ультрафиолетом А, облучение ультрафиолетом В или обработки растворителем, таким как глутаральдегид, формальдегид, перекись водорода, уксусная кислота, гипохлорит натрия, хлороформ или фенол, или с помощью комбинации любых из указанных.
XIV. Способы получения рекомбинантных микроорганизмов
[00497] Рекомбинантные микроорганизмы могут быть получены с применением стандартных методов молекулярной биологии, известных в данной области техники. Например, ген, кодирующий фермент, можно амплифицировать с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). При использовании сигнальной последовательности ген, кодирующий фермент, можно лигировать с ДНК, кодирующей указанную сигнальную последовательность. Указанный ген затем можно клонировать в любом подходящем векторе, например, плазмидном векторе. Указанный вектор в соответствующих случаях содержит сайт множественного клонирования, в который можно легко встроить молекулу ДНК, кодирующую гибридный белок. Вектор в соответствующих случаях также содержит селективный маркер, такой как ген устойчивости к антибиотику, таким образом, что бактерии, трансформированные, трансфицированные или соединенные с вектором, можно легко идентифицировать и выделять. Когда вектор представляет собой плазмиду, указанная плазмида в соответствующих случаях также содержит ориджин репликации. В качестве альтернативы, ДНК, кодирующая фермент или белок экспансин, может быть встроена в хромосомную ДНК микроорганизма-хозяина.
XV. Эффекты на растения
[00498] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, может наблюдаться повышенный рост по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00499] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, может наблюдаться повышенный рост по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00500] Для любого из способов или семян, описанных в настоящей заявке, семена, на которые был нанесен фермент или микроорганизм, могут прорастать с повышенной скоростью по сравнению с семенами, на которые не был нанесен указанный фермент или микроорганизм, при одинаковых условиях.
[00501] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, может наблюдаться повышенное поглощение питательных веществ по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00502] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, может наблюдаться повышенное поглощение питательных веществ по сравнению с растениями, выращенным из семян, не обработанных указанным свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00503] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, растения, выращенные в присутствии фермента или микроорганизма, могут обладать пониженной чувствительностью к патогену по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00504] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, растения, выращенные из семян, обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, могут обладать пониженной чувствительностью к патогену по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00505] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, растения, выращенные в присутствии фермента или микроорганизма, могут обладать пониженной чувствительностью к стрессу из окружающей среды по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00506] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, растения, выращенные из семян, обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, могут обладать пониженной чувствительностью к стрессу из окружающей среды по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных указанным свободным ферментом или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00507] Например, растения могут обладать пониженной чувствительностью к засухе, затоплению, жаре, свободному цинку, соли, тяжелым металлам, низкому рН, высокому рН или любой их комбинации.
[00508] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, может наблюдаться повышенное содержание питательных веществ по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00509] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у семян, обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, или растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, может наблюдаться повышенное содержание питательных веществ по сравнению с семенами, не обработанными указанным свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, или растениями, выращенными из семян, не обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00510] Например, питательное вещество может содержать полисахарид, белок, фитиновую кислоту, фосфат, фосфолипид или любую их комбинацию.
[00511] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, может наблюдаться повышенное образование клубеньков на корнях по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00512] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, может наблюдаться повышенное образование клубеньков на корнях по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00513] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, может наблюдаться более медленное созревание плода по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00514] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, может наблюдаться более медленное созревание плода по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00515] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, может наблюдаться более высокая урожайность по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00516] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, может наблюдаться более высокая урожайность по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных указанным свободным ферментом, белком экспансином или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00517] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, может наблюдаться измененное старение листьев по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00518] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, у растений, выращенных из семян, обработанных свободным ферментом или микроорганизмом, может наблюдаться измененное старении листьев по сравнению с растениями, выращенными из семян, не обработанных ферментом или микроорганизмом, при одинаковых условиях.
[00519] Более медленное старение листьев может приводить к более высокому уровню фотосинтеза в конце сезона, что в свою очередь приводит к большему количеству продуктов фотосинтеза, большему наполнению зерном и более крупному зерну и/или повышенной урожайности.
XVI. Составы, композиции и совместное нанесение агрохимикатов
[00520] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, указанный способ может включать нанесение фермента, белка экспансина или микроорганизма в составе, содержащем приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00521] Для любого семени, описанных в настоящей заявке, семя может быть покрыто составом, содержащим свободный фермент, белок экспансии или рекомбинантный микроорганизм и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00522] Любая из композиций, описанных в настоящей заявке, может содержать приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00523] Приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель может содержать диспергирующее вещество, поверхностно-активное вещество, добавку, воду, загуститель, антислеживающий агент, продукт распада остаточных веществ, компостирующий состав, гранулирующий состав, диатомовую землю, масло, краситель, стабилизатор, консервант, полимер, покрытие или их комбинацию.
[00524] Добавка может содержать масло, камедь, смолу, глину, полиоксиэтиленгликоль, терпен, вязкие органические вещества, сложный эфир жирной кислоты, сульфатированный спирт, алкилсульфонат, нефтяной сульфонат, спирт-сульфат, натрий алкилбутандиамат, сложный полиэфир тиобутандиоата натрия, производное бензолацетонитрила, белковый материал (например, молочный продукт, пшеничную муку, соевую муку, кровь, альбумин, желатин, люцерновую муку, дрожжевой экстракт или любую их комбинацию) или любую их комбинацию.
[00525] Загуститель может содержать длинноцепочечный алкилсульфонат полиэтиленгликоля, полиоксиэтиленолеат или любую их комбинацию.
[00526] Поверхностно-активное вещество может содержать тяжелое нефтяное масло, тяжелый нефтяной дистиллят, сложный эфир полиола и жирной кислоты, сложный эфир полиэтоксилированной жирной кислоты, арилалкилполиоксиэтиленгликоль, алкиламиноацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат или любую их комбинацию.
[00527] Поверхностно-активное вещество может содержать неионогенное поверхностно-активное вещество.
[00528] Антислеживающий агент может содержать натриевую соль (например, натриевую соль монометилнафталинсульфоната, натриевую соль диметилнафталинсульфоната, сульфит натрия, сульфат натрия или любую их комбинацию), карбонат кальция, диатомовую землю или любую их комбинацию.
[00529] Приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель может содержать вермикулит, древесный уголь, фильтр-прессную грязь от процесса карбонизации при сахарном производстве, рисовую шелуху, карбоксииметилцеллюлозу, торф, перлит, мелкий песок, карбонат кальция, муку, алюминиевые квасцы, крахмал, тальк, поливинилпирролидон или любую их комбинацию.
[00530] Состав или композиция может содержать состав или композицию для покрытия семени, жидкий состав или композицию для нанесения на растение или среду для роста растения или твердый состав или композицию для нанесения на растение или среду для роста растения.
[00531] Состав или композиция для покрытия семени может содержать водный или масляный раствор для нанесения на семена или порошок или гранулированный состав для нанесения на семена.
[00532] Жидкий состав или композиция для нанесения на растение или среду для роста растения может содержать концентрированный состав или композицию или готовый к применению состав или композицию.
[00533] Твердый состав или композиция для нанесения на растение или среду для роста растения может содержать гранулированный состав или композицию или порошкообразный агент.
[00534] Состав или композиция может дополнительно содержать агрохимикат.
[00535] В качестве альтернативы или дополнения, любой из способов, описанных в настоящей заявке, может дополнительно включать нанесение агрохимиката на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00536] Любое из семян растений, описанных в настоящей заявке, может быть дополнительно обработано или покрыто агрохимикатом.
[00537] Агрохимикат может содержать удобрение, содержащий микронутриенты материал для удобрения, инсектицид, нематоцид, гербицид, добавку для улучшения роста растений, фунгицид, инсектицид, моллюскоцид, альгицид, бактериальный инокулянт, грибковый инокулянт, растительный гормон или любую их комбинацию.
[00538] Бактериальный инокулянт может содержать штамм бактерий, способствующий росту растений, эндофитный штамм бактерий или штамм бактерий, который способствует росту растений и является эндофитным.
[00539] Штамм бактерий, способствующий росту растений, может продуцировать инсектицидный токсин (например, токсин Cry), фунгицидное соединение (например, β-1,3-глюканазу, хитозаназу, литиказу или их комбинацию), нематоцидное соединение (например, токсин Cry), бактерицидное соединение, быть устойчивым к одному или более антибиотикам, содержать одну или более свободно реплицирующихся плазмид, связываться с корнями растения, колонизировать корни растения, образовывать биопленки, солюбилизировать питательные вещества, секретировать органические кислоты или обладать комбинацией указанных свойств.
[00540] Штамм бактерий, способствующий росту растений, может содержать штамм Bacillus aryabhattai САР53 (NRRL No. B-50819), штамм Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL No. B-50817), штамм Bacillus flexus BT054 (NRRL No. B-50816), штамм Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL No. B-50820), штамм Bacillus mycoides BT155 (NRRL No. B-50921), штамм Enterobacter cloacae CAP12 (NRRL No. B-50822), штамм Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL No. NRRL B-50821), штамм Bacillus mycoides EE118 (NRRL No. B-50918), штамм Bacillus subtilis EE148 (NRRL No. B-50927), штамм Alcaligenes faecalis EE107 (NRRL No. B-50920), штамм Bacillus mycoides EE141 (NRRL NO. B-50916), штамм Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL No. B-50922), представителя вида Bacillus cereus EE128 (NRRL No. B-50917), штамм Paenibacillus massiliensis BT23 (NRRL No. B-50923), представителя вида Bacillus cereus EE349 (NRRL No. B-50928), штамм Bacillus subtilis EE218 (NRRL No. B-50926), штамм Bacillus megaterium EE281 (NRRL No. B-50925), представителя вида Bacillus cereus EE-B00377 (NRRL B-67119); штамм Bacillus pseudomycoides EE-B00366 (NRRL B-67120), штамм Bacillus mycoides EE-B00363 (NRRL B-67121), штамм Bacillus pumilus EE-B00143 (NRRL B-67123) или штамм Bacillus thuringiensis EE-B00184 (NRRL B-67122), штамм Bacillus mycoides EE116 (NRRL No. B-50919), представителя вида Bacillus cereus EE417 (NRRL No. B-50974), штамм Bacillus subtilis EE442 (NRRL No. B-50975), штамм Bacillus subtilis EE443 (NRRL No. B-50976), представителя вида Bacillus cereus ЕЕ444 (NRRL No. B-50977), штамм Bacillus subtilis EE405 (NRRL No. B-50978), представителя вида Bacillus cereus EE439 (NRRL No. B-50979), штамм Bacillus megaterium EE385 (NRRL No. B-50980), представителя вида Bacillus cereus EE387 (NRRL No. B-50981), штамм Bacillus circulans EE388 (NRRL No. B-50982), штамм Bacillus thuringiensis EE319 (NRRL No. B-50983), представителя вида Bacillus cereus EE377 (NRRL No. B-67119), штамм Bacillus mycoides EE363 (NRRL No. B-67121), штамм Bacillus pseudomycoides EE366 (NRRL No. B-67120), штамм Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL No. B-50924) или любую их комбинацию.
[00541] Агрохимикат может содержать удобрение.
[00542] Удобрение может содержать жидкое удобрение или сухое удобрение.
[00543] Агрохимикат может содержать содержащий микронутриенты материал для удобрения, где указанный содержащий микронутриенты материал для удобрения содержит борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или любую их комбинацию.
[00544] Агрохимикат может содержать инсектицид, где указанный инсектицид содержит органофосфат, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, ароматическую мочевину, содержащую в качестве заместителя галоген, сложный углеводородный эфир, биологический инсектицид или любую их комбинацию.
[00545] Агрохимикат может содержать гербицид, где указанный гербицид содержит хлорфенокси-соединение, нитрофенольное соединение, нитрокрезольное соединение, дипиридильное соединение, ацетамид, алифатическую кислоту, анилид, бензамид, бензойную кислоту, производное бензойной кислоты, анисовую кислоту, производное анисовой кислоты, бензонитрил, диоксид бензотиадиазинона, тиокарбамат, карбамат, карбанилат, хлорпиридинил, производное циклогексенона, производное динитроаминобензола, фтординитротолуидиновое соединение, изоксазолидинон, никотиновую кислоту, изопропиламин, производное изопропиламина, оксадиазолинон, фосфат, фталат, соединение пиколиновой кислоты, триазин, триазол, урацил, производное мочевины, эндоталь, хлорат натрия или любую их комбинацию.
[00546] Агрохимикат может содержать фунгицид, где указанный фунгицид содержит замещенный бензол, тиокарбамат, этилен-бис-дитиокарбамат, тиофталидамид, соединение меди, ртутьорганическое соединение, оловоорганическое соединение, соединение кадмия, анилазин, беномил, циклогексамид, додин, этридиазол, ипродион, метлаксил, тиамимефон, трифорин или любую их комбинацию.
[00547] Агрохимикат может содержать грибковый инокулянт, где указанный грибковый инокулянт содержит инокулянт грибов семейства Glomeraceae, инокулянт грибов семейства Claroidoglomeraceae, инокулянт грибов семейства Gigasporaceae, инокулянт грибов семейства Acaulosporaceae, инокулянт грибов семейства Sacculosporaceae, инокулянт грибов семейства Entrophosporaceae, инокулянт грибов семейства Pacidsporaceae, инокулянт грибов семейства Diversisporaceae, инокулянт грибов семейства Paraglomeraceae, инокулянт грибов семейства Archaeosporaceae, инокулянт грибов семейства Geosiphonaceae, инокулянт грибов семейства Ambisporaceae, инокулянт грибов семейства Scutellosporaceae, инокулянт грибов семейства Dentiscultataceae, инокулянт грибов семейства Racocetraceae, инокулянт грибов отдела Basidiomycota, инокулянт грибов отдела Ascomycota, инокулянт грибов отдела Zygomycota или любую их комбинацию.
[00548] Агрохимикат может содержать бактериальный инокулянт, где указанный бактериальный инокулянт содержит инокулянт бактерий рода Rhizobium, инокулянт бактерий рода Bradyrhizobium, инокулянт бактерий рода Mesorhizobium, инокулянт бактерий рода Аzorhizobium, инокулянт бактерий рода Allorhizobium, инокулянт бактерий рода Sinorhizobium, инокулянт бактерий рода Kluyvera, инокулянт бактерий рода Azotobacter, инокулянт бактерий рода Pseudomonas, инокулянт бактерий рода Azospirillium, инокулянт бактерий рода Bacillus, инокулянт бактерий рода Streptomyces, инокулянт бактерий рода Paenibacillus, инокулянт бактерий рода Paracoccus, инокулянт бактерий рода Enterobacter, инокулянт бактерий рода Alcaligenes, инокулянт бактерий рода Мусобактерия, инокулянт бактерий рода Trichoderma, инокулянт бактерий рода Gliocladium, инокулянт бактерий рода Glomus, инокулянт бактерий рода Klebsiella или любую их комбинацию.
[00549] Агрохимикат может содержать эффективное количество ризобактерий. Указанные ризобактерий могут содержать бактерии рода Bradyrhizobium (например, Bradyrhizobium japonicum), бактерии рода Rhizobium (например, Rhizobium phaseoli, Rhizobium leguminosarum или их комбинацию) или их комбинацию.
[00550] Агрохимикат может содержать фунгицид, где указанный фунгицид содержит альдиморф, ампропилфос, ампропилфос калий, андоприм, анилазин, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беноданил, беномил, бензамакрил, бензамакрилизобутил, биалафос, бинапакрил, бифенил, битертанол, бластицидин-S, боскалид, бромуконазол, бупиримат, бутиобат, полисульфид кальция, капсимицин, каптафол, каптан, карбендазим, карвон, хинометионат, хлобентиазон, хлорфеназол, хлорнеб, хлорпикрин, хлорталонил, хлозолинат, клозилакон, куфранеб, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, ципрофурам, дебакарб, дихлорофен, диклобутразол, диклофлуанид, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, диметиримол, димероморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-М, динокап, дифениламин, дипиритион, диталимфос, дитианон, додеморф, додин, дразоксолон, эдифенфос, эпоксиконазол, этаконазол, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенапанил, фенаримол, фенбуконазол, фенфурам, фенитропан, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, фентинацетат, фентингидроксид, фербам, феримзон, флуазинам, флуметовер, флуоромид, флухинконазол, флурпримодол, флусилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фосетил-алюминий, фосетил-натрий, фталид, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, фуркарбонил, фурконазол, фурконазол-цис, фурмециклокс, гуазатин, гексахлорбензол, гексаконазол, гимексазол, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иминоктадин альбесилат, иминоктадин триацетат, йодокарб, ипробенфос (ИБФ), ипродион, ирумамицин, изопротиолан, изоваледион, касугамицин, крезоксимметил, медь-содержащие продукты, такие как: гидроксид меди, нафтенат меди, оксихлорид меди, сулфьфат меди, оксид меди, комплекс оксин-медь и бордосскую смесь, манкоппер, манкозеб, манеб, меферимзон, мепанипирим, мепронил, метконазол, метасульфокарб, метфуроксам, метирам, метомеклам, метсульфовакс, мильдиомицин, миклобутанил, миклозолин, диметилдитиокарбамат никеля, нитроталь-изопропил, нуаримол, офурак, оксадиксил, оксамокарб, оксолиновую кислоту, оксикарбоксим, оксифентиин, паклобутразол, пефуразоат, пенконазол, пенцикурон, фосдифен, пимарицин, пипералин, полиоксин, полиоксорим, пробеназол, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропанозин натрия, пропиконазол, пропинеб, протиоциназол, пиразофос, пирифенокс, пириметанил, пирохилон, пироксифур, хинконазол, хинтозен (PCNB), серу и композиции серы, тебуконазол, теклофталам, текназен, тетциклазис, тетраконазол, тиабендазол, тициофен, тифлузамид, тиофанат-метил, тиоксимид, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триазбутил, триазоксид, трикламид, трициклазол, тридеморф, трифлоксистробин, трифлумизол, трифорин, униконазол, валидамицин А, винклозолин, виниконазол, зариламид, зинеб, зирам, а также Dagger G, OK-8705, OK-8801, а-(1,1-диметилэтил)-3-(2-феноксиэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(2,4-дихлорфенил)-3-фтор-3-пропил-1-Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(2,4-дихлорфенил)-3-метокси-а-метил-1-Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(5-метил-1,3-диоксан-5-ил)-[3-[[4-(трифторметил)фенил]метилен]-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол, (5RS,6RS)-6-гидрокси-2,2,7,7-тетраметил-5-(1-Н-1,2,4-триазол-1-ил)-3-октанон, (Е)-а-(метоксиимино)-N-метил-2-феноксифенилацетамид, 1-изопропил{2-метил-1-[[[1-(4-метилфенил)этил]амино]карбонил]пропил}карбамат, 1-(2,4-дихлорфенил)-2-(1-Н-1,2,4-триазол-1-ил)этанон-O-(фенилметил)оксим, 1-(2-метил-1-нафтоленил)-1-Н-пиррол-2,5-дион, 1-(3,5-дихлорфенил)-3-(2-пропенил)-2,5-пирролидиндион, 1-[(дийодометил)сульфонил]-4-метилбензол, 1-[[2-(2,4-дихлорфенил)-1, 3-диоксолан-2-ил]метил]-1-Н-имидазол, 1-[[2-(4-хлорфенил)-3-фенилоксиранил]метил]-1Н-1,2,4-триазол, 1-[1-[2-[(2,4-дихлорфенил)метокси]фенил-этенил]-1-Н-имидазол, 1-метил-5-нонил-2-(фенилметил)-3-пирролидинол, 2',6'-дибром-2-метил-4'-трифторметокси-4'-трифторметил-1,3-тиазолкарбоксанилид, 2,2-дихлор-N-[1-(4-хлорфенил)этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид, 2,6-дихлор-5-(метилтио)-4-пиримидинилтиоцианат, 2,6-дихлор-N-(4-трифторметилбензил)бензамид, 2,6-дихлор-N-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бензамид, 2-(2,3,3-трийод-2-пропенил)-2Н-тетразол, 2-[(1-метилэтил)сульфонил]-5-(трихлорметил)-1,3,4-тиадиазол, 2-[[6-дезокси-4-О-(4-0-метил-(3-D-гликопиранозил)-а-D-глюкопиранозил]амино]-4-метокси-1-Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил, 2-аминобутан, 2-бром-2-(бромметил)пентандинитрил, 2-хлор-N-(2,3-дигидро-1,1,3-триметил-1-Н-инден-4-ил)-3-пиридинкарбоксамид, 2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)-N-(изотиоцианатометил)-ацетамид, 2-фенилфенол (ОРР), 3,4-дихлор-1-[4-(дифторметокси)фенил]пиррол-2,5-дион, 3,5-дихлор-N-[циано[(1-метил-2-пропинил)окси]метил]бензамид, 3-(1,1-диметилпропил-1-оксо-1Н-инден-2-карбонитрил, 3-[2-(4-хлорфенил)-5-этокси-3-изоксазолидинил]пиридин, 4-хлор-2-циано-N,N-диметил-5-(4-метилфенил)-1-Н-имидазол-1-сульфонамид, 4-метил-тетразоло[1,5-а]хиназолин-5(4Н)-он, 8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-2-метанамин, 8-гидроксихинолинсульфат, 9Н-ксантен-2-[(фениламино)карбонил]-9-карбоксилгидразид, бис-(1-метилэтил)-3-метил-4-[(3-метилбензоил)окси]-2,5-тиофендикарбоксилат, цис-1-(4-хлорфенил)-2-(1-Н-1,2,4-триазол-1-ил)циклогептанол, цис-4-[3-[4-(1,1-диметилпропил)фенил-2-метилпропил]-2,6-диметилморфолин гидрохлорид, этил-[(4-хлорфенил)азо]цианоацетат, бикарбонат калия, натриевую соль метантетратиола, метил-1-(2,3-дигидро-2,2-диметил-инден-1-ил)-1-Н-имидазол-5-карбоксилат, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(5-изоксазолилкарбонил)-DL-аланинат, метил-N-(хлорацетил)-N-(2,6-диметилфенил)-DL-аланинат, N-(2,3-дихлор-4-гидроксифенил)-1-метил-циклогексанкарбоксамид, N-(2,6-диметил-фенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-фуранил)ацетамид, N-(2,6-диметилфенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-тиенил)ацетамид, N-(2-хлор-4-нитрофенил)-4-метил-3-нитробензолсульфонамид, N-(4-циклогексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(4-гексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(5-хлор-2-метилфенил)-2-метокси-Н-(2-оксо-3-оксазолидинил)ацетамид, N-(6-метокси)-3-пиридинил)циклопропанкарбоксамид, N-[2,2,2-трихлор-1-[(хлорацетил)амино]этил]бензамид, N-[3-хлор-4,5-бис(2-пропинилокси)фенил]-N'-метоксиметанимидамид, N-формил-N-гидрокси-DL-аланин натриевую соль, 0,0-диэтил-[2-(дипропиламино)-2-оксоэтил]этилфосфорамидотиоат, 0-метил-S-фенил-фенилпропилфосфорамидотиоат, S-метил-1,2,3-бензотиадиазол-7-карботиоат и спиро[2Н]-1-бензопиран-2,1'(3'Н)-изобензофуран]-3'-он, N-трихлорметил)тио-4-циклогексан-1,2-дикарбоксимид, тетраметилтиопероксидикарбоновый диамид, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)-DL-аланинат, 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксол-4-ил)-1-Н-пиррол-3-карбонитрил или любую их комбинацию.
[00551] Агрохимикат может содержать инокулянт бактерий рода Bacillus, инокулянт бактерий рода Bacillus, содержащий бактерии Bacillus argri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus sphearicus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatu или любую их комбинацию.
[00552] Агрохимикат может содержать гербицид, где указанный гербицид содержит 2,4-D, 2,4-DB, ацетохлор, ацифлуорфен, атахлор, аметрин, атразин, аминопиралид, бенефин, бенцепион, бенсулид, бентазон, бромацил, бромоксинил, бутилат, карфентразон, хлоримурон, хлорцепион, клетодим, кломазон, клопиралид, клорансулам, циклоат, DCPA, десмедифам, дикамба, дихлобенил, диклофоп, диклосулам, дифлуфензопир, диметенамид, дикват, диурон, DSMA, эндоталь, ЕРТС, этальфлуралин, этофумесат, феноксапроп, флуазифоп-Р, флукарбазон, флуфенацет, флуметсулам, флумиклорак, флумиоксазин, флуометурон, флуроксипир, фомесафен, форамцепион, глюфосинат, глифосат, галоцепион, гексазинон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазахин, имазетапир, изоксабен, изоксафлутол, лактофен, линурон, МСРА, МСРВ, мезотрион, метолахлор-s, метрибузин, метцепион, молинат, MSMA, напропамид, напталам, никоцепион, норфлуразол, оризалин, оксадиазон, оксифлуорофен, паракват, пеларгоновую кислоту, пендиметалин, фенмедифам, пиклорам, примицепион, продиамин, прометрин, пронамид, пропанил, процепион, пиразон, пиритиобак, хинклорак, хизалофоп, римцепион, сетоксидим, сидурон, симазин, сульфентразон, сульфометурон, сульфоцепион, тебутиурон, тербацил, тиазопир, тифенцепион, тиобенкарб, тралкоксидим, траилат, триацепион, трибенурон, триклопир, трифлуралин, трифлуцепион или любую их комбинацию.
[00553] Агрохимикат может содержать удобрение, где указанное удобрение содержит сульфат аммония, нитрат аммония, сульфат-нитрат аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, аммиачную воду, безводный аммоний, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, нитрат кальция-аммония, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцинированный известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гашеную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат калия-магния, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, оксид магния, мочевину, мочевиные формальдегиды, мочевиный нитрат аммония, покрытую серой мочевину, покрытую полимером мочевину, изобутилидендимочевину, K2SO4-2MgSO4, каинит, сильвинит, кизерит, соли Эпсома, элементарную серу, известковую глину, землю с устричными раковинами, рыбную муку, шроты, рыбный тук, кровяную муку, фосфатную руду, суперфосфаты, шлак, костную муку, древесный пепел, навоз, пещерное гуано, торфяной мох, компост, песок из карьера, муку из жмыха семян хлопчатника, перьевую муку, крабовую муку, рыбную эмульсию, гумусовую кислоту или любую их комбинацию.
[00554] Агрохимикат может содержать растительный гормон, где указанный растительный гормон содержит гибберелин, ауксин, кинетин или любую их комбинацию.
[00555] Ферменты можно обеспечивать различными способами. Общие цели получения ферментативных продуктов в виде композиций включают увеличение срока годности, защиту продукта от микроорганизмов и повышение активности фермента. Ферментативные продукты можно лиофилизировать для увеличения срока годности большинства ферментов путем замораживания-высушивания, сушки распылением или другого способа удаления жидкого компонента из ферментативного продукта. Жидкие и лиофилизированные продукты часто наполняют добавками, такими как буферы, стабилизаторы, противомикробные агенты и объемообразующие добавки. Ферменты часто могут быть инкапсулированы или гранулированы для достижения большей безопасности и легкости применения конечного продукта. Гранулированные продукты могут иметь повышенный срок годности и обладать низкой ферментативной активностью на внешней поверхности гранул. Ферменты также могут быть присоединены к органическим или неорганическим носителям, таким как пластмассовые гранулы, доломит, глина, древесный уголь, биоуголь, наночастицы, альгинаты, гранулы на основе диоксида кремния, которые способствуют их связыванию и хранению в легкой для применения форме. Часто ферменты иммобилизируют на матрицах для обеспечения более продолжительной активности и срока годности ферментных продуктов Общеизвестные матрицы включают углерод, наноуглероды, агарозу, альгинаты, целлюлозу и целлюлозный материал, диоксид кремния, пластмассу, нержавеющую сталь, стекло, полистирол и керамику.
[00556] Многие композиции ферментов можно применять для пролонгирования ферментативной активности или срока годности продуктов. Компоненты указанных композиций включают, но не ограничиваются следующими: консерванты, биоциды, стабилизаторы, усилители цвета, агенты для ослабления запаха, поверхностно-активные вещества, детергенты, буферы, кофакторы, ионы и другие варианты компонентов композиций, повышающие эффективность ферментов.
XVII. Среда для роста растения
[00557] Для любого из способов, описанных в настоящей заявке, включающих применение среды для роста растения, указанная среда для роста растения может содержать почву, воду, водный раствор, песок, гравий, полисахарид, дерновой грунт, компост, торфяной мох, солому, древесину, глину, соевую муку, дрожжевой экстракт или их комбинацию.
[00558] Среда для роста растения может содержать или состоять по существу из удобрения.
[00559] Более того, среда для роста растения может быть дополнена субстратом для фермента.
[00560] Указанный субстрат может содержать триптофан, аденозинмонофосфат, аденозиндифосфат, аденозинтрифосфат (например, аденозин-3-трифосфат), полифосфат, белковую муку, триметафосфат, целлюлозу, метилцеллюлозу, хитин, хитозан, производное целлюлозы, фосфат, жир, воск, фосфолипид, фитиновую кислоту или любую их комбинацию.
XVIII. Растения
[00561] В любом из описанных выше способов, имеющих отношение к растениям, указанное растение может представлять собой двудольное, однодольное или голосемянное растение.
[00562] Аналогично, в любом из вариантов реализации семян, описанных в настоящей заявке, указанное семя может представлять собой семя двудольного, однодольного или голосемянного растения.
[00563] Например, когда растение представляет собой двудольное растение или семя представляет собой семя двудольного растения, указанное двудольное растение может быть выбрано из группы, состоящий из фасоли, гороха, томата, перца, кабачка, люцерны, миндаля, семян аниса, яблока, абрикоса, арракачи, аритишока, авокадо, земляных бобов, свеклы, бергамота, черного перца, черной акации, ежевики, черники, горького апельсина, бок чой, бразильского ореха, хлебного дерева, брокколи, кормовых бобов, брюссельской капусты, гречихи, капусты, рыжика, пекинской капусты, какао, мускусной дыни, семян тмина, испанского артишока, рожкового дерева, моркови, ореха кешью, маниоки, клещевины обыкновенной, цветной капусты, сельдерея, салатного сельдерея, вишни, каштана, нута, цикория, чилийского перца, хризантемы, корицы, кормового арбуза, клементины, гвоздики, клевера, кофе, ореха колы, кользы, кукурузы, хлопчатника, семян хлопчатника, вигны китайской, катрана, клюквы, кресс-салата, огурца, смородины, анноны сетчатой, кассии пучковатой, земляного гороха, баклажана, эндивия, фенхеля, пажитника, инжира, орешника, льна, герани, крыжовника, горлянки, винограда, грейпфрута, гуавы, конопли, конопляного семени, хны, хмеля, конских бобов, хрена, индиго, жасмина, артишока иерусалимского, джута, капусты кормовой, капока, гибискуса коноплевого, кольраби, кумквата, лаванды, лимона, чечевицы, леспедецы, салата, лайма, лакрицы, нефелиума, мушмулы японской, люпина, ореха макадамии, мускатного ореха, мандарина, кормовой свеклы, манго, мушмулы германской, дыни, мяты, шелковицы, горчицы, нектарина, масличного нуга, мускатника, окры, оливы, белого мака, апельсина, папаци, пастернака, гороха, персика, арахиса, груши, ореха пикана, хурмы, голубиного гороха, фисташек, банана кухонного, сливы, граната, помело, маковых семян, картофеля, сладкого картофеля, сливы домашней, тыквы, квебрахового дерева, айвы, деревьев рода Cinchona, квиноа, редиски, рами, рапса, малины, китайской крапивы, ревеня, розы, фикуса, брюквы, сафлора, люцерны посевной, козлобородника, саподиллы, мандарина уншиу, козельца, кунжута, масляного дерева, сои, шпината, тыквы, земляники, сахарной свеклы, сахарного тростника, подсолнечника, брюквы, сладкого перца, мандарина, чая, метлички абиссинской, табака, томата, трилистника, тунгового дерева, репы, урены, вики, грецкого ореха, арбуза, падуба парагвайского, сурепки обыкновенной, пастушьей сумки, кресс-салата посевного, перечного кресса, водяного кресса, ярутки полевой, аниса звездчатого, лавра, лавра благородного, кассии, джамболана, укропа, тамаринда, перечной мяты, орегано, розмарина, шалфея, аноны игольчатой, щитолистника, калофилла, момордики харантской, лакового дерева, тайского каштана, базилика, черники облиственной, гибискуса, маракуйи, златолиста, сассафраса, кактуса, зверобоя продырявленного, вербейника, боярышника, кориандра, бессмертника песчаного, киви, тимьяна, цуккини, уллюко, хикамы, гидрофиллума, стрихноса колючего, спондиаса желтого, карамболы, амаранта, васаби, японского перца, желтой сливы, настурции клебненосной, цедрелы китайской, новозеландского шпината, тетрагонии (Tetragonia implexicoma), угу, пижмы, мокричника, момбина пурпурного, малайского яблока, спилантеса, осота, китайского картофеля, смирнии европейской, гулявника аптечного, смолевки, агавы, сенны сиамской, чертополоха, кровохлебки, антильского крыжовника, солянки, солероса, щавеля, птериса мечевидного, капусты листовой, примулы, первоцвета аптечного, портулака, спорыша, терпентинного дерева, шпинатного дерева, дикого бетеля, африканского перца, эриодиктиона клейкого, эстрагона, петрушки, кервеля, сурепки весенней, бедренца камнеломкового, медовой травы, белокопытника, периллы, водного перца, периллы многолетней, горькой фасоли, кислицы обыкновенной, кампонга, китайского сельдерея, лимонного базилика, тайского базилика, водной мимозы, кокорыша, капустного дерева, моринги, мирабилиса широкого, страусника обыкновенного, лимнофилы ароматной, лимнохариса желтого, любистока лекарственного, перечной травы, маки, горлянки обыкновенной, долихоса обыкновенного, ипомеи водяной, кошачьего уха, хауттюйнии сердцевидной, гинуры (Gynura crepioides), глинуса лядвенцевидного, галинсоги мелкоцветковой, синеголовника пахучего, рукколы, артишока испанского, циклантеры съедобной, скрытницы японской, кроталярии длинноклювой (Crotalatia longirostrata), серпника, кратоксилума красивого, Crassocephalum crepidioides, кокцинии индийской, бодяка огородного, красной водоросли, чая, марь Натталя, абиссинской горчицы, мари гигантской, мари цельнолистной, еразола, мари белой, целозии серебристой, каперса, брокколи рапини, пекинской капусты, курчаволистной горчицы, китайской савойской капусты, кай-лан, листовой горчицы, базелла-шпината, мангольда, алтея аптечного, ползучей акации, китайского джута, паприки, семян бикса, мяты курчавой, чабера, душицы, тмина, ромашки, мелиссы лимонной, гвоздики, черники, аноны черимойя, морошки, тернослива, питайи, дуриана, бузины, фейхоа, хлебного дерева, эвгении, ююбы, физалисм, пурпурного мангустана, нефелиума, красной смородины, черной смородины, гаультерии шаллон, мандарина уншиу, плода агли, фасоли адзуки, черной фасоли, коровьего гороха, фасоли борлотти, обыкновенной фасоли, зеленой фасоли, многоцветковой фасоли, лимской фасоли, золотистой фасоли, турецких бобов, фасоли пинто, огненно-красной фасоли, стручкового гороха, гороха мангетот, цветков брокколи, спаржевой капусты, крапивы, болгарского перца, красного салатного цикория, японской редьки, белой редьки, поручейника сахарного, китайской капусты Татсой, брокколини, черной редьки, корня лопуха, стручковой фасоли, итальянской брокколи, долихоса обыкновенного, люпина, сиеркулии, бархатных бобов, квадратного гороха, хикамы, акации плосколистной, веронии, лабазника, акации Муррея, акация колючей, акации Кемпе, акации кожистой, чиа, букового ореха, тунга молуккского, колоквинта, меликокки, бросимума, монгонго, ирвингии, лецитиса и чемпедака.
[00564] Когда растение представляет собой однодольное растение или семя представляет собой семя однодольного растения, указанное однодольное растение может быть выбрано из группы, состоящей из кукурузы, пшеницы, овса, риса, ячменя, проса культурного, банана, лука, чеснока, спаржи, плевела, проса культурного, фонио, базилика душистого, дистихлиса Палмери (Distichlis palmeri), куркумы длинной, шафрана, калгана, лука скорода, кардамона, финиковой пальмы, ананаса, лука-шаллота, лука-порея, зеленого лука, водяного каштана, Ramp, слез Иова, бамбука, дагуссы, вольфии бескорневой, колокасии пузырчатой, тайского шпината, маниллы, ареки, посевного проса, бетельной пальмы, сорго технического, сорго метельчатого, цитронеллы, кокоса, колоказии съедобной, маиса, таро, дурры, твердой пшеницы, леспедицы, фуркреи андинской, новозеланского льна, имбиря, ежи сборной, эспарто, суданской травы, сорго гвинейского, манильской пеньки, мексиканской пеньки, гибридного маиса, хлебного злака, лемонграсса, агавы мексиканской, проса тростникового, элевзине, проса итальянского, ежовника хлебного, проса обыкновенного, новозеландского льна, овса, масличной пальмы, пальмировой пальмы, саговой пальмы, полевицы белой, агавы сизалевой, сорго, пшеницы спельта, сладкой кукурузы, сладкого сорго, колоказии, метлички абиссинской, тимофеевки луговой, тритикале, ванили, пшеницы и ямса.
[00565] Когда растение представляет собой голосемянное растение или семя представляет собой семя голосемянного растения, указанное голосемянное растение может представлять собой растение семейства, выбранного из группы, состоящей из Araucariaceae, Boweniaceae, Cephalotaxaceae, Cupressaceae, Cycadaceae, Ephedraceae, Ginkgoaceae, Gnetaceae, Pinaceae, Podocarpaceae, Taxaceae, Taxodiaceae, Welwitschiaceae и Zamiaceae.
[00566] Растения и семена растений, описанные в настоящей заявке, могут включать трансгенные растения или семена растений, такие как трансгенные зерновые кульутры (пшеницу, рис), маис, сою, картофель, хлопчатник, табак, масличный рапс и фруктовые растения (фрукты яблони, груши, плоды цитрусовых и виноград). Предпочтительные трансгенные растения включают кукурузу, сою, картофель, хлопчатник, табак и масличный рапс.
[00567] Подходящие трансгенные растения и семена можно характризовать на основе образования указанными растением токсинов, в особенности токсинов, кодируемых генами Bacillus thuringiensis (например, генами CryIA (a), CryIA (b), CryIA (с), CryIIA, CryIIIA, CryIIIB2, Cry9c, Cry2Ab, Cry3Bb, CryIF или их комбинацией). Образование токсинов в растениях повышает их устойчивость к насекомым, паукообразным, нематодам, а также слизням и улиткам (здесь и далее растения, обладающие указанными признаками, называются «Bt-растениями»). Bt-растения, такие как разновидности маиса, разновидности хлопчатника, разновидности сои и разновидности картофеля, например, коммерчески доступны под торговым названием YEILD GARD ® (например, маис, хлопчатник, соя), KnockOut ® (например, маис), StarLink ® (например, маис), Bollgard ® (хлопчатник), Nucotn ® (хлопчатник) и NewLeaf ® (картофель). Растения с устойчивостью к гербицидам включают растения под торговыми названиями Roundup Ready ® (растения с устойчивостью к глифосату, такие как кукуруза, хлопчатник, соя), Clearfield ® (например, маис), Liberty Link ® (растения с устойчивостью к глюфосинату, например, масличный рапс), IMI ® (растения с устойчивостью к имидазолинону) и STS ® (растения с устойчивостью к сульфонилмочевине, такие как маис).
[00568] Семена растений, описанные в настоящей заявке, могут быть генетически модифицированными (например, любое семя, которое приводит к получению генетически модифицированного растения или части растения, обладающей устойчивостью к гербициду, устойчивостью к факторам окружающей среды, таким как водный стресс, засуха, вирусы и продукция азота, или устойчивостью к бактериальным, грибковым токсинам или токсинам насекомых). Подходящие генетически модифицированные семена включают генетически модифицированные семена капустных культур, овощей, плодовых деревьев, лубяных культур, масличных культур, клубнеплодов, кофе, цветов, бобовых, зерновых, а также других видов однодольных и двудольных растений. Предпочтительно, генетически модифицированные семена включают арахис, табак, злаки, пшеницу, ячмень, рожь, сорго, рис, рапс, сахарную свеклу, подсолнечник, томат, перец, фасоль, салат, картофель и морковь. Наиболее предпочтительно, генетически модифицированные семена включают хлопчатник, сою и кукурузу (сладкую, полевую, кукурузное семя или воздушную кукурузу).
[00569] В частности, применимые трансгенные растения, которые можно обрабатывать согласно изобретению, представляют собой растения с эпизодом трансформации или комбинацией эпизодов трансформации, перечисленных, например, в базах данных различных национальных или региональных регулирующих органов (см., например, http://gmoinfo.jrc.it/gmp_browse.aspx и http://www.agbios.com/dbase.php). Тогда как настоящее изобретение было подробно описано, очевидно, что возможны модификации и варианты в пределах объема настоящего изобретения, определяемого прилагаемой формулой изобретения.
ПРИМЕРЫ
[00570] Следующие далее неограничивающие примеры предложены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения.
Пример 1: Свободная эндоглюканаза на кукурузе в условиях теплицы
[00571] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до концентрации, соответствующей активности 12,5 - 1600 мЕд/мл. Ед (единицы или международные единицы) активности эндоглюканазы определяли по количеству фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл при идеальной температуре и условиях. Семена коммерчески доступной гибридной кукурузы 6626RR (BECK), которая обладает признаком устойчивости к глифосату и не включает обработку семян, помещали в конические пробирки на 50 мл, по 18 семян на каждую группу обработки. Каждую коническую пробирку обрабатывали на вортексе и в каждую пробирку добавляли по 18 мкл раствора фермента с достижением конечной концентрации фермента эндоглюканазы, соответствующей активности 0, 12,5 мкЕд, 25 мкЕд, 50 мкЕд, 100 мкЕд, 200 мкЕд, 400 мкЕд, 800 мкЕд или 1600 мкЕд на семя. Конические пробирки снова обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семенам позволяли сохнуть в течение 5 минут, затем семена сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержащие коммерчески доступный верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки в каждый горшок добавляли по 50 мл воды комнатной температуры для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с поддержанием цикла ночь/день 13/11 часов и температурного диапазона 21°C днем/15°C ночью. Растения поливали по мере необходимости и перемещали случайным образом каждые 3 дня во избежание влияния каких-либо холодных зон в пределах комнаты. В конце 14-го дня измеряли высоту кукурузного растения для каждого варианта обработки и нормировали к высоте контрольного растения, семя которого было покрыто только водой.
[00572] Данный эксперимент повторяли три раза и значения усредняли для всех экспериментов. Как можно видеть из Таблицы 18, применение эндоглюканазы в качестве средства обработки семян на кукурузе 6626RR от компании BECK (гибридная кукуруза с устойчивостью к глифосату) оказывало сильный эффект при активности фермента, составляющей в диапазоне от 100 до 1600 мкЕд/семя. При указанных значениях наблюдался заметный и воспроизводимый эффект на рост кукурузы. Значения ниже 50 мкЕд на семя оказывали намного менее выраженный эффект на скорость роста кукурузы для указанного гибрида. Указанные варианты ферментативной обработки хорошо подходят для применения в качестве независимого средства обработки для зерновых культур.
Пример 2: Влияние свободной эндоглюканазы на кукурузу в условиях теплицы
[00573] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до концентрации, соответствующей активности 50-1200 мЕд/мл. Ед активности эндоглюканазы определяли как количество фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл при идеальной температуре и условиях. Восемнадцать семян коммерчески доступной гибридной кукурузы 5140HR от компании BECK, обладающей признаком защиты от зернового точильщика HERCULEX (признак защиты от насекомых) и признаком устойчивости к глифосату и не включающей обработку семян, помещали в конические пробирки на 50 мл. Каждую коническую пробирку обрабатывали на вортексе и в каждую пробирку добавляли по 18 мкл раствора фермента с достижением конечной концентрации фермента эндоглюканазы, соответствующей активности 0,50 мкЕд, 100 мкЕд, 200 мкЕд, 400 мкЕд, 600 мкЕд, 800 мкЕд или 1200 мкЕд на семя. Конические пробирки снова обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семенам позволяли высыхать в течение 5 минут, затем семена сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержащие коммерчески доступный верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки в каждый горшок добавляли по 50 мл воды комнатной температуры для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с поддержанием цикла ночь/день 13/11 часов и температурного диапазона 21°C днем/15°C ночью. Растения поливали по мере необходимости и перемещали случайным образом каждые 3 дня во избежание влияния каких-либо холодных зон в пределах комнаты. В конце 14-го дня измеряли высоту кукурузного растения для каждого варианта обработки и нормировали к высоте контрольного растения, семя которого покрывали только водой. Каждое испытание повторяли 3 раза.
[00574] Как можно видеть из Таблицы 19, сильный эффект применения эндоглюканазы в качестве средства обработки семян на кукурузе 5140HR от компании BECK наблюдался в диапазоне концентраций, соответствующих активности фермента 600-1200 мкЕд/семя. При указанных значениях наблюдался заметный и воспроизводимый эффект на рост кукурузы. Значения активности ниже 400 мкЕд на семя приводили к более низкому эффекту на скорость роста кукурузы на указанном гибриде. Указанные варианты ферментативной обработки хорошо подходят для применения в качестве независимого средства обработки для зерновых культур.
Пример 3: Глюканазы и фосфолипазы на кукурузе в поле
[00575] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164), β-1,3-D-глюканазу Helix pomatia (SEQ ID NO: 126; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта 67138), β-1,4-эндоглюканазу «целлюлазу» Trichoderma reesi (SEQ ID NO: 36; коммерчески доступную от компании Worthington Biochemical Corp., Лейквуд, Нью-Джерси, в виде продукта АТСС26921) и экзо-β-1,3-глюканазу Aspergillus oryzae (SEQ ID NO: 41; коммерчески доступную от компании Megazyme, Чикаго, Иллинойс, в виде продукта Е-EXG5AO) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до концентрации, обеспечивающей активность 600 мЕд/мл (для β-1,4-эндоглюканазы Acidothermus и β-1,4-эндоглюканазы Trichoderma) или 252 мЕд/мл (для β-1,3-D-глюканазы Helix). Указанная группа включала несколько ферментов с целлюлазной акитвностью (целлюлолитическая глюканаза) и нецеллюлолитической глюканазной активностью, включая β-1,4-эндоглюканазную и β-1,3-D-глюканазную активность соответственно. Ед активности фермента определяли как количество фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл при идеальной температуре и условиях. Специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу С Bacillus cereus (SEQ ID NO: 116; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р5524), специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С Bacillus cereus (SEQ ID NO: 115; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури в виде продукта Р6621), фосфолипазу С Clostridium perfringens (SEQ ID NO: 18; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р7633) и фосфолипазу D Streptomyces chromofuscus (SEQ ID NO: 19; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р0065) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до конечной концентрации, соответствующей активности 2,5 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С Bacillus, фосфолипазы С Clostridium и фосфолипазы D Streptomyces) или 100 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазы С Bacillus). Каждая из указанных фосфолипаз обладала различными специфическими активностями в отношении фосфолипидов и в отношении различных сайтов расщепления фосфолипидов. Использовали семена коммерческого гибрида кукурузы 6175YE от компании BECK, обладающего признаком HERCULEX (признаком защиты от кукурузного жука и кукурузного мотылька), MON810 (включающим признак устойчивости к кукурузному мотыльку), признаком устойчивости к глюфосинату и признаком устойчивости к глифосату и не включающего обработку семян. Семена помещали в порционный протравливатель, по 400 семян на каждый вариант обработки. В каждую партию добавляли по 400 мкл раствора с достижением конечной концентрации фермента, соответствующей активности 600 мкЕд/семя для β-1,4-эндоглюканазы Acidothermus и β-1,4-эндоглюканазы Trichoderma, 252 мкЕд/семя для β-1,3-D-глюканазы Helix, 100 мЕд/семя для специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазы С или 2,5 мЕд/семя для специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С Bacillus и семена покрывали фосфолипазами С и D. Каждой партии позволяли перемешиваться в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Дополнительно указанные семена покрывали коммерческими наборами, включавшими протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин (обработка для семян EVERGOL Energy/PONCHO, коммерчески доступная от компании Bayer CropScience) - «базовая обработка». Каждое испытание повторяли по 3 раза. Семенам позволяли высыхать в течение 3 недель и затем сажали в естественную почву в рядах длиной 9,14 м с интервалом 10,16 см на глубину 3,81 см. Высоту растений измеряли через 2 недели после посадки и нормировали к высоте контрольного растения, семя которого покрывали только водой с базовой обработкой. Результаты показаны в Таблице 16, ниже.
[00576] β-1,3-экзоглюканазу (Aspergillus oryzae; SEQ ID NO: 41; коммерчески доступную от компании Megazyme, Чикаго, Иллинойс, в виде продукта E-EXG5AO), специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу С (Bacillus cereus; SEQ ID NO: 116; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р6621), специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (Bacillus cereus; SED ID NO: 115; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р5542) и фосфолипазу D (Streptomyces chromofuscus; SEQ ID NO: 19; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich в виде продукта Р8023) разводили в воде до концентрации 182 мЕд/мл (для β-1,3-экзоглюканазы), 100 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазы С) или 2,5 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С и фосфолипазы D). Ферменты применяли в качестве средства обработки семян на кукурузе (BECK 5828 YH), обладающей признаком HERCULEX (признаком защиты от кукурузного жука и устойчивости к кукурузному мотыльку), признаком устойчивости к глюфосинату и признаком устойчивости к глифосату, с использованием таких же способов, как описано выше, сажали и позволяли расти до сбора. Обработку семян проводили поверх базовой обработки семян, включающей протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин («базовая обработка») и обрабатывали, как описано в разделе указанного Примера, выше. Урожайность обработанных зерновых культур (рассчитанная как бушели на акр (бушели/акр) или метрическая тонна на гектар (т/га)) сравнивали и нормировали к культурам, выращенным из семян, обработанных водой. Каждую обработку независимо осуществляли по меньшей мере 4 раза. Обработка кукурузного семени с использованием свободных ферментов приводила к повышению урожайности кукурузы по сравнению с контрольным кукурузным растением, семя которого не обрабатывали. Обработка β-1,3-экзоглюканазой приводила к повышению урожайности примерно на 4%, обработка специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазой С приводила к повышению урожайности примерно на 3%, и обработка фосфолипазой D приводила к повышению урожайности примерно на 2%. У кукурузных растений, выращенных из семян, обработанных тремя указанными свободными ферментами, также увеличивалась средняя масса на початок. Результаты показаны в Таблице 21, ниже.
[00577] Из фосфолипаз и глюканаз, которые исследовали в данном испытании, β-1,3-экзоглюканаза и специфичная в отношении фосфатидилинозитола фосфолипаза С Bacillus cereus и фосфолипаза D Streptomyces вызывали наилучшие ответы со стороны растений. Указанные ферментативные обработки были эффективны для множества гибридов и наборов признаков.
Пример 4: Применение глюканаз на кукурузе в поле
[00578] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до концентрации, соответствующей активности 200 мЕд/мл и 450 мЕд/мл. Ед активности эндоглюканазы определяли как количество ферментов, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл при идеальной температуре и условиях. 150 семян коммерчески доступного гибридного растения 6175YE от компании BECK, обладающего признаком HERCULEX (признаком защиты от кукурузного жука и кукурузного мотылька), MON810 (признаком устойчивости к кукурузному мотыльку), признаком устойчивости к глюфосинату и признаком устойчивости к глифосату и не включающего обработку семян, помещали в конические пробирки на 50 мл по 50 семян в каждую. 50 мкл фермента добавляли в каждую из пробирок с 250 мкл суспензии, содержавшей протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин (обработка семени EVERGOL Energy/PONCHO - «базовая обработка»), что приводило к получению конечной концентрации фермента, соответствующей активности 200 мкЕд/семя и 450 мкЕд/семя. Пробирки обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семенам позволяли высыхать в течение 3 недель, затем семена сажали в естественную почву в рядах длиной 9,14 м с интервалами 10,16 см на глубину 3,81 см. Через 2 недели после посадки измеряли высоту растений и результаты нормировали к высоте контрольных растений, семена которого покрывали только водой с базовой обработкой (протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин).
[00579] Испытания повторяли три раза и значения усредняли для всех экспериментов. Данные в Таблице 22, ниже, показывают, что скорость роста кукурузы при применении обеих концентраций β-1,4-эндоглюканазы была повышена через 2 недели после посадки. При указанных концентрациях наблюдался заметный и воспроизводимый эффект на рост кукурузы. Указанные варианты ферментативной обработки хорошо применимы в качестве комплексной обработки поверх базовой обработки на зерновых культурах и на множестве гибридов и наборов признаков.
Пример 5: Применение фосфолипаз на кукурузе в широком диапазоне концентраций в условиях теплицы
[00580] Специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С Bacillus cereus (SEQ ID NO: 115; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р6621), фосфолипазу С Clostridium perfringens (SEQ ID NO: 18; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р7633) и фосфолипазу D Streptomyces chromofuscus (SEQ ID NO: 19; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р0065) разводили в 100 мМ трис-буфере, рН 7,0, до концентрации, соответствующей активности от 100 Ед/мл до 450 Ед/мл. Семена коммерчески доступной гибридной кукурузы 6626RR (BECK), обладающей признаком устойчивости к глифосату и не включающей обработку семян, помещали в конические пробирки на 50 мл, по 18 семян на каждую группу обработки. Каждую коническую пробирку обрабатывали на вортексе и добавляли 18 мкл раствора фермента в каждую пробирку с достижением конечной концентрации фермента, соответствующей активности фосфолипазы 100 мЕд/мл, 200 мЕд/мл или 450 мЕд/мл на семя и снова обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семенам позволяли высыхать в течение 5 минут и затем указанные семена сажали в горшки объемом 42,24 дюйм3 (692,19 см3) с коммерчески доступным верхним слоем почвы на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки в каждый горшок добавляли по 50 мл воды комнатной температуры для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением при поддержании цикла ночь/день 13/11 часов и температурного диапазона 21°C днем/15°C ночью. Растения поливали по мере необходимости и перемещали по кругу каждые 3 дня во избежание влияния каких-либо холодных зон в пределах комнаты. В конце 14-го дня измеряли высоту кукурузного растения для каждого варианта обработки и нормировали к высоте контрольного растения, семя которого покрывали только водой. Эксперименты повторяли три раза.
[00581] Из Таблицы 23 можно видеть, что эффект ферментов фосфолипаз С и D, главным образом, был наилучшим при значениях, равных или меньших 100 мЕд/семя. При указанных значениях наблюдался заметный и воспроизводимый эффект на рост кукурузы. При значениях, равных или превышающих активность 200 мЕд/семя, наблюдался неблагоприятный эффект на рост кукурузы, что было справедливо для обоих ферментов - фосфолипазы С и фосфолипазы D.
Пример 6: Урожайность сои, 2015 г., применение эндоглюканаз и фосфолипаз
[00582] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164), β-1,3-D-глюканазу Helix pomatia (SEQ ID NO: 126; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта 67138) и β-1,4-эндоглюканазу «целлюлазу» Trichoderma reesi (SEQ ID NO: 36; коммерчески доступную из Worthington Biochemical Corp., Лейквуд, Нью-Джерси) разводили в воде до концентрации, соответствующей активности 600 мЕд/мл для двух β-1,4-эндоглюканаз и 252 мЕд/мл для β-1,3-D-глюканазы. Указанные группы включали несколько ферментов с целлюлолитической и нецеллюлолитической глюканазной активностью, включая β-1,4-эндоглюканазную и β-1,3-D-глюканазную активность. Специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С Bacillus cereus (SEQ ID NO: 115; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р6621), фосфолипазу С Clostridium perfringens (SEQ ID NO: 18; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р7633) и специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу С Bacillus cereus (SEQ ID NO: 116; коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Р5524) разводили в воде до конечной концентрации, соответствующей активности 2,5 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С Bacillus и фосфолипазы С Clostridium) или 100 Ед/мл (для специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазы С Bacillus). Каждая из указанных фосфолипаз обладала различными специфическими активностями в отношении фосфолипидов и в отношении различных сайтов расщепления указанных фосфолипидов. 720 семян коммерчески доступного гибрида сои 294NR от компании BECK, обладающего признаком устойчивости к нематодам (SCN-SB) и признаком устойчивости к глифосату (ROUNDUP READY 1) и включающего комплект базовой обработки семян металаксилом и клотианидином («базовая обработка»), помещали в банки от краски и покрывали коммерчески доступной обработкой для семян (базовой обработкой). Каждую партию перемешивали и к каждой указанной партии добавляли 720 мкл раствора с достижением конечной концентрации фермента, указанной в Таблице 24 ниже. Семенам позволяли высыхать в течение 3 недель, затем указанные семена сажали в естественную почву в рядах длиной 9,14 м с интервалами 6,35 см на глубину 3,81 см. Растения собирали и измеряли урожайность при сборе урожая. Каждую обработку повторяли 4 раза и семена сажали 4 раза в поле. Результаты показаны ниже в Таблице 24 в виде процентной массы по сравнению с контрольной обработкой (базовой обработкой).
[00583] Как можно видеть из Таблицы 24, применение всех из трех глюканаз приводило к заметному повышению урожайности соевого растения, также как и применение фосфатидилхолин-ФЛ-С и фосфатидилинозитол-ФЛС из Bacillus cereus.
Пример 7: Урожайность кукурузы, 2015 г., применение эндоглюканазы
[00584] β-1,4-эндоглюканазу Acidothermus cellulolyticus (SEQ ID NO: 30 коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, в виде продукта Е2164) разводили в цитратном буфере для разведения фермента до концентрации, соответствующей активности 250 и 600 мЕд/мл. Семена коммерчески доступного гибрида кукурузы BECK'S 5828YH с набором базовой обработки для семян, содержащим протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин (EVERGOL Energy/PONCHO, «базовая обработка») помещали в протравливатели для семян по 250 семян в каждый. Каждую партию перемешивали и в каждую пробирку добавляли по 250 мкл раствора с достижением конечной концентрации фермента, соответствующей 200 или 600 мкЕд/семя для покрытия семян эндоглюканазами. Каждую партию снова перемешивали в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семенам позволяли высыхать в течение 3 недель и затем сажали в естественную почву в рядах длиной 9,14 м с интервалом 6,35 см на глубину 3,81 см. Растения собирали и измеряли урожайность при сборе. Каждую обработку повторяли по 4 раза. Результаты представлены ниже в Таблице 25 как процентная масса урожая по сравнению с массой урожая для контрольной обработки (нормированная к контролю).
Как можно видеть из Таблицы 25, применение β-1,4-эндоглюканазы Acidothermus в обоих количествах приводило к повышению урожайности кукурузы.
Пример 8: Выделение и идентификация способствующих росту растений бактериальных штаммов.
[00585] Образцы почвы из ризосфер наиболее здоровых и максимально устойчивых растений картофеля (Solarium tuberosum), патиссона (Cucurbita реро), томата (Solarium lycopersicum) и вьющейся фасоли (Phaseolus coccineus) собирали, разводили в стерильной воде и распределяли на планшетах с питательным веществом агаром. Бактериальные изоляты, которые росли с большой скоростью и которые можно было пересевать и размножать, выбирали для дополнительного исследования. Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, 0,15 г MgSO4 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на 1 л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по десять семян салата-латука на каждый вариант обработки на глубину 1 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), просеянный для удаления крупных твердых частиц. При посадке в горшки диаметром 4 см семена инокулировали с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерий в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения выращивали при температуре между 65 и 75°F (18-24°C) при поддержании светового режима 11 часов/день и добавлении 5 мл воды каждые 3 дня. Через одну неделю оценивали высоту растений и диаметр листьев, а также общее здоровье растений. В результате первичного скрининга изолятов ризосферы было получено более 200 различных видов бактерий и грибов из ризосферы четырех растений. Некоторые из видов бактерий описаны в Таблице 26. Идентифицированные штаммы обозначены с помощью соответствующих идентификационных номеров для штаммов известных бактерий. Другие штаммы обозначены с помощью идентификационных номеров для штаммов неизвестных бактерий. Инокулянты, приводящие к результатам, близким к контролю (+/- 2%), не были включены в таблицу.
[00586] Бактериальные штаммы, которые оказывали максимальный эффект на общее здоровье растений и высоту растений в первоначальном испытании на салате, подвергали дополнительной идентификации. Бактериальные штаммы растили в течение ночи в бульоне Луриа-Бертани при температуре 37°C и культуры, растущие в течение ночи, откручивали на центрифуге. Среды декантировали и из оставшегося бактериального осадка выделяли хромосомную ДНК с использованием набора для выделения бактериальный хромосомной ДНК Qiagen. Проводили амплификацию кодирующих 16S рРНК участков хромосомной ДНК с помощью ПЦР с использованием праймеров E338F 5'-АСТ ССТ ACG GGA GGC AGC AGT-3' (SEQ ID NO: 108), E1099R A 5'-GGG TTG CGC TCG TTG C-3' (SEQ ID NO: 109) и E1099R В 5'-GGG TTG CGC TCG TTA C-3' (SEQ ID NO: 110). ПЦР-ампликоны очищали с применением набора для очистки продуктов ПЦР Promega и полученные ампликоны разводили и отправляли в Главный центр ДНК Университета Миссури (University of Missouri DNA Core) для секвенирования ДНК. Последовательности ДНК сравнивали с базой данных бактериальных изолятов NCBI BLAST и принадлежность к родам и видам идентифицировали путем непосредственного сравнения с известными штаммами. Главные идентифицированные виды показаны в Таблице 26. Во многих случаях ДНК-последовательности 16S рРНК указывали только на родовую принадлежность выбранного бактериального штамма. В случаях, когда не удавалась непосредственная идентификация, проводили дополнительные биохимические анализы с применением стандартных методов, известных в данной области техники, чтобы дифференцировать штаммы бактерий на уровне вида и штамма. Указанные дифференцированные штаммы перечислены в Таблице 27.
Пример 9: Выделение и идентификация дополнительных способствующих росту растений бактериальных штаммов.
[00587] Образцы почвы с сельскохозяйственных полей около Гаса (Канзас) собирали, разводили в стерильной воде и распределяли на планшетах с питательным веществом агаром. Бактериальные изоляты, которые росли с большой скоростью и которые можно было пересевать и размножать, выбирали для дополнительного исследования. Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, 0,15 г MgSO4 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на 1 л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Кукурузные семена покрывали коммерческим полимером для семян, смешанным только с водой (в общем объеме 1,6 мкл на семя), или коммерческим полимером для семян, содержащим выбранные бактериальные штаммы (в общем объеме 1,6 мкл на семя). Покрытые семена сажали в горшки диаметром 3 дюйма (7,62 см) на глубину 1 дюйм (2,54 см) в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), который просеивали для удаления крупных твердых частиц. Растения растили при температурах между 18 и 24°C (65-75°F) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 50 мл воды при посадке и каждые 3 дня. Через две недели определяли высоту растений и диаметр листьев, а также общее здоровье растений. Для анализов прорастания и определения длины 3-дневных корней семена покрывали, как указано выше, и равномерно распределяли на бумажном полотенце по 10 семян. Бумажные полотенца смачивали с помощью 10 мл воды, скручивали, помещали в небольшой пластиковый мешок и инкубировали при температуре 30°C или помещали на подогревающий мат для прорастания при 27-30°C (80-85°F). Результаты измерения корней записывали через 3 дня. В результате первичного скрининга изолятов ризосферы было получено более 100 различных видов бактерий и грибов из ризосферы. Некоторые из видов бактерий описаны в Таблице 28. Идентифицированные штаммы обозначены с помощью их соответствующих идентификационных номеров для бактериальных штаммов.
[00588] Бактериальные штаммы, которые оказывали максимальный эффект на здоровье растений, описаны в Таблице 28. Бактериальные штаммы растили в течение ночи в бульоне Луриа-Бертани при температуре 37°C и культуры, растущие в течение ночи, центрифугировали. Среды декантировали и из оставшегося бактериального осадка выделяли хромосомную ДНК с использованием набора для выделения бактериальной хромосомной ДНК Qiagen. Проводили амплификацию кодирующих 16S рРНК участков полученной хромосомной ДНК с помощью ПЦР с использованием праймеров E338F 5'-АСТ ССТ ACG GGA GGC AGC AGT-3' (SEQ ID NO: 108), E1099R A 5'-GGG TTG CGC TCG TTG C-3' (SEQ ID NO: 109) и E1099R В 5'-GGG TTG CGC TCG TTA C-3' (SEQ ID NO: 110). ПЦР-ампликоны очищали с применением набора для очистки продуктов ПЦР Promega и полученные ампликоны разводили и посылали в Главный центр ДНК Университета Миссури (University of Missouri DNA Core) для секвенирвоания ДНК. Последовательности ДНК сравнивали с базой данных бактериальных изолятов NCBI BLAST и принадлежность к роду и виду идентифицировали путем непосредственного сравнения с известными штаммами. Главные идентифицированные виды указаны в Таблице 28. Во многих случаях последовательности ДНК для 16S рРНК могли указать только род выбранного бактериального штамма. В случаях, когда не удавалась непосредственная идентификация, проводили дополнительные биохимические анализы с применением стандартных методов, известных в данной области техники, чтобы дифференцировать штаммы бактерий на уровне вида и штамма, и дифференцированные штаммы перечислены в Таблице 29.
wk = слабый рост или низкий рост
Пример 10: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на люцерне.
[00589] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и бактерии ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Для каждого варианта обработки сажали по десять покрытых ZEBA семян люцерны на глубину 0,6 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), просеянный для удаления крупных твердых частиц. ZEBA представляет собой сверхвпитывающий полимер на основе кукурузного крахмала использовали в качестве влагоудерживающего покрытия семени. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерии в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Люцерне позволяли расти в течение 1 недели для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, и конечные данные по высоте представлены в Таблице 30.
Пример 11: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на огурцах.
[00590] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по десять семян огурцов на каждую обработку на глубину 1 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), который просеивали для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерии в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Огурцам позволяли расти в течение 2 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, и конечные данные по высоте представлены в Таблице 31.
Пример 12: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на желтом кабачке.
[00591] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по десять семян желтого кабачка на каждый вариант обработки на глубину 1 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), просеянный для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерии в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Желтому кабачку позволяли расти в течение 2 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, конечные данные по высоте и конечные данные по диаметру листьев (на основе размера двух листьев) перечислены в Таблице 32.
Пример 13: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на плевеле.
[00592] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по тридцать семян плевела на каждый вариант обработки на глубину 0,3 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), который провеивали для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерий в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового дня 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Плевелу позволяли расти в течение 1,5 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, и данные по высоте представлены в Таблице 33.
Пример 14: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на кукурузе.
[00593] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л). Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по десять кукурузных семян на каждый вариант обработки на глубину 2,5 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), просеянный для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерии в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Кукурузе позволяли расти в течение 2 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, и конечные данные по высоте представлены в Таблице 34.
Пример 15: Исследование бактериальных штаммов, способствующих росту растений, на сое.
[00594] Выбранные штаммы растили в минимальной среде (3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 1 г NH4Cl, 0,50 г NaCl, MgSO4 0,15 г 7H2O, 0,013 г CaCl2 2H2O и 1 г глюкозы (сухая масса) на л) или в маннитно-дрожжевой среде для бактерий рода Bradyrhizobium или Rhizobium. Культуры выбранных штаммов, растущие в течение ночи (30°C), центрифугировали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по десять соевых семян на каждый вариант обработки на глубину 2,5 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), который просеивали для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 10 мл H2O. При исследовании двух бактериальных штаммов 0,5 мкл ресуспендированных бактерий каждого из указанных штаммов замешивали в 10 мл H2O. Десяти мл H2O было достаточно для доставки бактерий в объем почвы 3 дюйма3 (49,16 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 75°F (18-24°C) с поддержанием светового режима 11 часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Сои позволяли расти в течение 2 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих идентификационных номеров бактериальных штаммов, и конечные данные по высоте представлены в Таблице 35. Ко-инокуляция бактериальными штаммами с использованием представителей бактерий Bradyrhizobium sp. или Rhizobium sp., описанная в настоящем изобретении, приводила к повышению роста растения по сравнению с отдельным применением любого из инокулянтов.
Пример 16: Члены семейства Bacillus cereus, обладающие способностью стимулировать рост растений.
[00595] Штамм Bacillus mycoides ВТ155, штамм Bacillus mycoides ЕЕ118, штамм Bacillus mycoides EE141, штамм Bacillus mycoides BT46-3, штамм-представитель вида Bacillus cereus EE349, штамм Bacillus thuringiensis BT013A и штамм Bacillus megaterium EE281 растили в бульоне Луриа-Бертани при 37°C и кульутры, культивировали в течение ночи, откручивали, среду декантировали и ресуспендировали в равном количестве дистиллированной воды. Сажали по двадцать кукурузных семян на каждый вариант обработки на глубину 2,5 см в глинистый верхний слой почвы (Колумбия, Миссури), просеянный для удаления крупных твердых частиц. Семена инокулировали при посадке с помощью 0,5 мкл ресуспендированных в воде бактерий, которые замешивали в 50 мл H2O. Пятидесяти мл H2O было достаточно для доставки бактерий в объем почвы 29 дюймов3 (475,22 см3), а также для насыщения почвы для надлежащего прорастания семян. Растения растили при температурах между 65 и 72°F с поддержанием светового режима 13 световых часов/день и добавлением 5 мл воды каждые 3 дня. Проросткам позволяли расти в течение 2 недель для анализа появления всходов и начального прорастания растений при описанных условиях. Идентифицированные штаммы, обозначенные с помощью их соответствующих бактериальных идентификаторов, и данные по конечной высоте представлены в Таблице 36.
[00596] Все исследуемые бактерии, способствующие росту растений, оказывали благоприятный эффект на высоту кукурузы через две недели при описанных условиях. Штамм ЕЕ128, являющийся членом семейства Bacillus cereus, оказывал максимальный эффект в данном испытании, приводя к увеличению высоты кукурузы более чем на 14%.
Пример 17: Выделение, идентификация и характеристика эндофитных штаммов бактерий семейства Bacillus cereus.
[00597] Было обнаружено, что представитель вида Bacillus cereus 349, описанный выше в непосредственно предшествующем примере, способен расти эндофитно. Также было идентифицировано несколько других представителей вида Bacillus cereus, способных расти эндофитно: представитель вида Bacillus cereus ЕЕ439, Bacillus thuringiensis EE417, Bacillus cereus EE444, Bacillus thuringiensis EE319, Bacillus thuringiensis EE-B00184, Bacillus mycoides EE-B00363, Bacillus pseudomycoides EE-B00366 и представитель вида Bacillus cereus EE-B00377.
[00598] Для получения указанных дополнительных представителей вида бактерий Bacillus cereus коммерчески доступное гибридное кукурузное семя сажали в почву для горшечных культур и позволяли ему расти. Кукурузные семена покрывали фунгицидом и биологическим инокулянтом. Растения выращивали при поддержании искусственного освещения в течении 14 часов в день и измеряли рост растений в течение периода, составляющего 14 дней. Растения поливали каждые три дня на протяжении всего эксперимента. Через 14 дней растения извлекали из почвы и промывали для удаления избытка остаточных веществ. Затем растения переворачивали, подвергали воздействию 5% гипохлорита натрия в течение десяти минут, промывали в воде, подвергали воздействию перекиси водорода (10%) в течение десяти минут, снова промывали в воде и разрезали стебли с помощью стерильного бритвенного лезвия. Половинки разрезанных стеблей помещали срезом вниз на планшеты с питательным веществом агаром на два часа. Через два часа стебли удаляли и планшеты с агаром инкубировали при температуре 30°C в течение 48 часов. Через 48 часов оценивали морфологию колоний на планшетах и колонии представителя вида Bacillus cereus, обнаруженного внутри растения, переносили с помощью зубочистки на питательное вещество агар. Затем полученные колонии растили в течение ночи при 30°C в бульоне с сердечно-мозговым экстрактом и откручивали при 10,000 X g в течение 5 минут. Супернатант удаляли и осадок замораживали в течение ночи при -20°C. Затем из каждого клона экстрагировали хромосомную ДНК и проверяли видовую принадлежность каждой колонии с помощью ПЦР с применением праймеров к 16S рРНК и ампликоны отправляли для секвенирования ДНК и идентификации. Последовательности 16S рРНК для указанных штаммов представлены выше в Таблице 17.
Пример 18: Выделение, идентификация и характеристика дополнительных эндофитных штаммов бактерий (не являющихся членами семейства Bacillus cereus).
[00599] Эндофитные штаммы бактерий Bacillus megaterium ЕЕ385, Bacillus sp. EE387, Bacillus circulans EE388, Bacillus subtilis EE405, Lysinibacillus fusiformis EE442, Lysinibacillus spp. EE443 и Bacillus pumilus EE-B00143 выделяли из проростков кукурузы. Двухнедельные проростки кукурузы сначала стерилизовали. Растения извлекали из почвы и промывали для удаления избытка остаточных веществ. Растения затем переворачивали, подвергали воздействию 5% гипохлорита натрия в течение десяти минут, промывали в воде, подвергали воздействию перекиси водорода (10%) в течение десяти минут и снова промывали в воде. Стебли затем разрезали с помощью стерильного бритвенного лезвия. Половинки разрезанных стеблей помещали срезом вниз на планшеты с питательным веществом агаром на два часа. Через два часа стебли растений удаляли из планшетов и планшеты затем инкубировали при температуре 30°C в течение 48 часов. Колонии бактерий Bacilli, которые являлись эндофитными, выбирали для дополнительного анализа. Указанные штаммы растили в бульоне с сердечно-мозговым экстрактом в течение ночи при температуре 30°C и из культур экстрагировали ДНК с применением набора для выделения хромосомной ДНК Qiagen. ДНК амплифицировали с помощью ПЦР для получения гена 16S рРНК, который отправляли для секвенирования ДНК. Полученные в результате последовательности искали с помощью программы BLAST с использованием баз данных NCBI для установления видовой принадлежности бактерий класса Bacilli. Последовательности 16S рРНК представлены выше в Таблице 17.
Пример 19: Обработка кукурузы свободной АЦК-дезаминазой в условиях теплицы.
[00600] 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминазу (АЦК-дезаминазу) применяли путем некорневого нанесения в виде спрея на кукурузное растение. В последовательность D-цистеиндесульфгидразы Bacillus thuringiensis, штамма IS5056 (SEQ ID NO: 113), вводили две аминокислотные мутации, приводящие к небольшому повышению АЦК-дезаминазной активности (в отношении 1-аминоциклопропан-1-карбоксилата). Помимо D-цистеиндесульфгидразной активности нативная D-цистеиндесульфгидраза из штамма Bacillus thuringiensis IS5056 обладает значительной собственной АЦК-дезаминазной активностью. Однако в целях настоящего Примера и Примера 20 ниже нативная D-цистеиндесульфгидраза из штамма Bacillus thuringiensis IS5056 (SEQ ID NO: 113) называется «D-цистеиндесульфгидразой». Поскольку мутантный вариант фермента (SEQ ID NO: 114) обладает повышенной АЦК-дезаминазной активностью, в целях данных примеров мутантный фермент называется «АЦК-дезаминазой». Последовательности с мутациями представлены как SEQ ID NO: 112 (нуклеиновая кислота) и SEQ ID NO: 114 (белок). В Таблице 2 две аминокислотные замены выделены жирным шрифтом с подчеркиванием. Треонин в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 113 замещали на остаток глутаминовой кислоты и сериновый остаток в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 113 замещали на лейциновый остаток с использованием стандартных методов мутагенеза с помощью ПЦР, известных в данной области техники. Гены, кодирующие D-цистеиндезаминазу (SEQ ID NO: 111) и АЦК-дезаминазу (SEQ ID NO: 112), затем клонировали в векторе для грамположительных бактерий рВС (уменьшенной версии природной плазмиды рВС16) под контролем промотора спорообразования BclA. Затем указанными векторами трансформировали Bacillus thuringiensis. После спорообразования в минимальной среде, приводящего к высвобождению клеточного содержимого, включая ферменты, все клетки удаляли посредством фильтрования и оставшиеся фракции активного фермента наносили на растения. АЦК-дезаминазную активность рассчитывали с применением стандартного анализа на основе динитрофенилгидразина (Li et al., A colorimetric assay of 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) based on ninhydrin reaction for rapid screening of bacteria containing ACC deaminase, LETT APPL. MICROBIOL. 53(2): 178-85 (2011)).
[00601] Фермент дикого типа (SEQ ID NO: 113) и фермент с двумя точечными мутациями (SEQ ID NO: 114) применяли в качестве свободных ферментов путем некорневой доставки на 2-недельных кукурузных растениях (5828 YH от компании BECK, стадия развития V2-V3) и 4-недельных соевых растениях (297NR от компании BECK, стадия развития V2-V3). Кукуруза 5828 YH от компании BECK обладает признаком HERCULEX (признаком устойчивости к кукурузному жуку и кукурузному мотыльку), признаком устойчивости к глюфосинату и признаком устойчивости к глифосату. Соя 297NR BECK обладает признаком устойчивости к нематодам (SCN-SB) и признаком устойчивости к глифосату.
[00602] По шестнадцать растений на каждое испытание обрабатывали по отдельности путем некорневого внесения (нанесения) D-цистеиндесульфгидразы и ферментов АЦК-дезаминаз и сравнивали результаты с контролем, включавшим обработку только поверхностно-активным веществом (контроль). Значение активности ферментов D-цистеиндесульфгидразы (SEQ ID NO: 113) и АЦК-дезаминазы (SEQ ID NO: 114) для некорневого нанесения приводили в соответствие с содержанием указанных белков и указанные ферменты наносили в соответствующих рабочих концентрациях в виде спрея для некорневой обработки, содержащего 0,1% неионогенного поверхностно-активного вещества (НПАВ, ALLIGARE SURFACE, Alligare LLC), используемого для доставки ферментов к кукурузному и соевому растению в объеме 10 мл/растение. Активность АЦК-дезаминазны описывается в настоящей заявке в милиединицах (мЕд), где 1 мЕд соответствует 1 нмоль продукта/мг белка/час при 30°С. Исходная активность D-цистеиндесульфгидразы в данном анализе составляла 500 мЕд/мл, а активность АЦК-дезаминазы составляла 2,124 мЕд/мл. После разведения в объеме 10 мл/растение доставку фермента осуществляли в объеме 2,5% с конечной концентрацией, соответствующей конечной активности 12,5 мЕд/мл на растение для D-цистеиндесульфгидразы и 53,1 мЕд/мл для АЦК-дезаминазы. Поверхностно-активное вещество ALLIGARE SURFACE содержит смесь алкилполиоксэтилена, производных гликоля, увлажнитель и вспомогательные вещества для состава.
[00603] Через две недели после некорневого нанесения корни кукурузных или соевых растений собирали, промывали водой, осторожно промакивали насухо для удаления любой избыточный воды и определяли влажную массу корней (граммы). Влажную массу корней для каждого варианта обработки нормировали к контрольным растениям, обработанным только наполнителем, содержащим только минимальную среду и 0,1% неионогенного поверхностно-активного вещества. Результаты показаны в Таблицах 37 и 38, ниже.
[00604] Как показано в Таблице 37, некорневое нанесение АЦК-дезаминазы на кукурузе приводило к значительному увеличению влажной массы корня (приблизительно на 12%) по сравнению с растениями, обработанными только неионогенным поверхностно-активным веществом (*р-значение = 0,015). Средняя влажная масса корней кукурузных растений, получавших D-цистеиндесульфгидразу, напротив, была сравнима с массой контрольных растений, обработанных только поверхностно-активным веществом.
[00605] У соевых растений (Таблица 38), обработанных D-цистеиндесульфгидразой, наблюдалась слабая тенденция к увеличению массы корней через 2 недели после некорневого применения указанного фермента. У соевых растений, обработанных АЦК-дезаминазой, напротив, наблюдалось увеличение массы корней в среднем на 12% по сравнению с контролем.
[00606] Данное исследование демонстрирует, что некорневое нанесение АЦК-дезаминазы (и в меньшей степени D-цистеиндесульфгидразы) как в случае однодольного растения кукурузы, так и в случае двудольного растения сои, может непосредственно приводить к увеличению массы корней растений, получающих некорневую обработку, по сравнению с контрольными обработками.
[00607] АЦК-дезаминазу (SEQ ID NO: 114) также наносили в качестве обработки в бороздах (внесения в почву) на рисе в области, окружающей семя гибридного риса. Указанное применение также приводило к повышенному росту растений. АЦК-дезаминазу (SEQ ID NO: 114) получали и очищали, как описано выше, в указанной выше исходной концентрации и доставляли в концентрации 8 жидких унций фермента/акр (584,2 мл/гектар) на каждые 2,5 галлона воды/акр (23,4 литров/гектар). Конечной активности ферментов, составляющей 6,25 мЕд/мл для D-цистеиндесульфгидразы и 52,1 мЕд/мл для АЦК-дезаминазы, достигали путем их разбавления в воде. Продукт наносили непосредственно на семена в объеме 1 мл на семя и семенам позволяли сохнуть в почве до их покрытия рыхлым грунтом. Результаты показаны в Таблице 39, ниже. При обработке в бороздах с использованием гибридного риса наблюдалось среднее увеличение высоты, нормированное к контролю (для 2 испытаний, включавших по 36 растений), составляющее примерно 131%. Указанное исследование демонстрирует, что экзогенное внесение свободного фермента АЦК-дезаминазы в борозды непосредственно влияет на рост и мощность растений путем повышения высоты растений.
Пример 20: Свободный фермент АЦК-дезаминаза задерживает созревание плода.
[00608] 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминаза (АЦК-дезаминаза) разрушает 1-аминоциклопропан-1-карбоксилат (АСС) - природный предшественник этилена (C2H4), который стимулирует и регулирует созревание плода. Этилен действует в следовых количествах на протяжении всей жизни растения, стимулируя или регулируя созревания плода, раскрытие цветков и опадание или распад плодов и листьев. Этилен представляет собой важный природный гормон растений, который используется в сельском хозяйстве для ускорения созревания плодов (Lin et al., Recent advances in ethylene research, JOURNAL OF EXPERIMENTAL BOTANY 60: 3311-3336 (2009)). Вызванное этиленом созревание характеризуется ускоренным изменением цвета (накоплением пигмента) и сопровождается размягчением как наружного слоя или кожуры, так и области мякоти, находящейся со внутренней стороны по отношению к наружному слою плода. Для того, чтобы определить, может ли нанесение свободной АЦК-дезаминазы или D-цистеинсульфгидразы на плоды замедлить их созревание, оба фермента наносили на неспелые плоды манго.
[00609] АЦК-дезаминаза и D-цистеинсульфгидраза были охарактеризованы и имели значения активности, описанные в Примере 19 выше. АЦК-дезаминазу, последовательность который содержала две аминокислотные мутации, описанные выше в Примере 19 (SEQ ID NO: 114), и нативный фермент D-цистеиндесульфгидразу (SEQ ID NO: 113) экспрессировали и использовали в качестве свободных ферментов в способах, описанных выше в Примере 19. Как отмечено выше в Примере 19, нативный фермент D-цистеиндесульфгидраза (SEQ ID NO: 113) обладает как D-цистеиндесульфгидразной, так и АЦК-дезаминазной активностью.
[00610] Незрелые плоды манго (коммерчески доступное разнообразие плодов манго сорта «Кейт») обрабатывали ферментами АЦК-дезаминазой или D-цистеиндесульфгидразой и сравнивали с плодами манго, которые обрабатывали водой (контроль) или подвергали контрольной обработке, содержащей только фильтрат без ферментов (экспрессионный штамм без какого-либо экспрессированного фермента). Использовали по четыре плода на группу обработки. Наружный слой (слои) плода манго полностью смачивали свободными ферментами в объеме 1 мл (равным конечной концентрации белка в фильтрате 10 мкг/мл). Оцененная ферментативная АЦК-дезаминазная активность при нанесении применения на плоды манго в указанном анализе составляла 500 мЕд/мл для D-цистеиндесульфгидразы и 2,124 мЕд/мл для АЦК-дезаминазы. На плоды манго также наносили два варианта контрольной обработки (только фильтрат или воду) в объеме 1 мл. Плоды манго помещали в запечатанные пластиковые пакеты на ночь. На следующий день удаляли избыток жидкости с помощью бумажного полотенца и плод вытирали насухо. Сухие плоды манго затем помещали в запечатанный пакет из плотной бумаги (для разных вариантов обработки использовали раздельные пакеты) на 4 дня для ускорения созревания. Ответному созреванию присваивали баллы по размягчению и изменению цвета по шкале от 1 до 5, где 1 соответствовал наименьшей степени созревания (жесткий, зеленый или с отсутствием изменения цвета/цветового перехода), и 5 соответствовал наибольшей степени созревания (мягкий, переход цвета от зеленого к желтому/розовый цвет в окраске), где различным степеням созревания соответствовали баллы между указанным низким и высоким баллом (2-4). Баллы созревания на основе размягчения и изменения цвета затем объединяли с получением баллов «общего ответного созревания» по шкале 1-10, которую использовали для оценки эффективности обработки.
[00611] Данные представлены в Таблице 40, ниже, в виде средних баллов для плодов в каждой группе обработки. Нанесение как АЦК-дезаминазы, так и D-цистеиндесульфгидразы в форме обработки свободными ферментами на плод манго приводило к задержке созревания по сравнению с контрольными обработками, включающими воду или только фильтрат, через 4 дня. Обработка АЦК-дезаминазой или D-цистеиндесульфгидразой в качестве свободных ферментов оказывала сходный эффект на общее созревание на основе размягчения и изменения цвета при нанесении на манго. Указанные результаты демонстрируют, что оба типа ферментов могут применяться в качестве средства обработки путем промывки/смачивания плодов для задержки созревания плода и могут быть полезны для применения на других экономически значимых плодах для предотвращения ускоренного созревания или потери плодов вследствие других стрессов.
Пример 21: Глюканазы и фосфолипазы на соевых семенах в поле.
[00612] β-1,4-эндоглюканазу (Acidothermus; SEQ ID NO: 30), β-1,3-D-глюканазу (Helix pomatia; SEQ ID NO: 126), специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу С (Bacillus cereus; SEQ ID NO: 116) и специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (Bacillus cereus; SEQ ID NO: 115) наносили в виде свободных ферментов на соевое семя (294 NR от компании BECK). Свободные ферменты разводили в воде до концентрации (мкЕд/семя или мЕд/семя), перечисленных в Таблице 41 ниже. Единицу (Ед) ферментативной активности эндоглюканазы или фосфолипазы определяли по количеству фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл (1 Ед = 1 мкмоль субстрата/мин) при идеальной температуре и условиях. К каждому семени добавляли раствор фермента в количестве, необходимом для достижения конечной активности для вариантов обработки, в объеме 1 мкл/семя и перемешивали с растворами для обработки семян металаксилом и клотианидином. Семена полностью высушивали и затем сажали в поле, соблюдая требования глубины посадки и ширины междурядий, приближенные к стандартной методике, на глубину от 1,5 до 2 дюймов (от 3,8 см до 5 см) для обеспечения нормального развития корней в количестве, составляющем в среднем 150,000 растений на акр (370,658 растений на гектар), при ширине междурядий 30 дюймов (76,2 см) и густоте посева, составляющей примерно от 7 до 8 семян на фут (26 семян на метр). Удобрение наносили с учетом результатов почвенных анализов. Гербициды наносили для контроля сорняков и дополнительно проводили культивацию при необходимости.
[00613] Испытание повторяли три раза, каждое из указанных испытаний включало 600 растений. Урожайность сои измеряли примерно через шесть месяцев после посева, данные представлены в Таблице 41 ниже как абсолютное изменение в бушелях на акр (бушели/акр) или метрических тоннах на гектар (т/га) по сравнению с контролем (обработка только водой) и как процентная урожайность, нормированная к контролю. Применение всех из эндоглюканаз или фосфолипаз (β-1,4-эндоглюканазы (Acidothermus), β-1,3-D-глюканазы (Helix pomatia), специфичной в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазы С (Bacillus cereus) и специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С (Bacillus cereus)) в качестве средств обработки семян приводило к повышенной урожайности по сравнению с контрольным семенем (обработанным водой). Из исследованных ферментов специфичная в отношении фосфатидилхолина фосфолипаза С (Bacillus cereus) обеспечивала максимальное повышение урожайности по сравнению с контролем, приводя к повышению более чем на 8 бушелей/акр (более 0,5 т/га) или повышению урожайности на 145% по сравнению с необработанным контрольным семенем (см. Таблицу 41).
Пример 22: Применение свободных фосфолипаз на кукурузном семени в условиях теплицы.
[00614] Специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (ФЛ-С) из Bacillus cereus (SEQ ID NO: 115) разводили в воде до концентрации, соответствующей активности от 20 мЕд/семя до 800 мЕд/семя (как представлено в Таблице 42 ниже). Единицу активности фермента ФЛ-С определяли по количеству фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл (1 Ед = 1 мкмоль субстрата/мин) при идеальной температуре и условиях.
[00615] Испытание повторяли два раза, каждое из указанных испытаний включало восемнадцать семян коммерчески доступной гибридной кукурузы (5828 YH от компании BECK), которые помещали в конические пробирки на 50 мл. Каждую коническую пробирку обрабатывали на вортексе и 18 мкл раствора фермента добавляли в каждую пробирку для достижения конечной концентрации фермента, соответствующей еверактивности наносимой ФЛ-С 20, 50, 100, 200, 400, 600 или 800 мЕд на семя. Конические пробирки снова обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия на каждого семени. Семена сушили в течение 5 минут и затем сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержавшие верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки в каждый горшок добавляли по 50 мл воды комнатной температуры для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с обеспечением уровня освещенности, составляющего примерно 300 мкмоль м-2 с-1 при поддержании цикла ночь/день 13/11 часов и температурного диапазона 21°С днем/15°С ночью.
[00616] Значения высоты растений усредняли для 2 повторов испытания с использованием в каждом испытании по 18 растений на группу обработки. Изменение высоты растений после обработки семян с использованием фермента ФЛ-С нормировали к контрольным растениям, которые обрабатывали только водой. Изменение высоты растений представлено в Таблице 42 как процент от средней высоты растения, нормированной к контролю, вместе со среднеквадратичными отклонениями (STDEV) для 2 испытаний. Как можно видеть из Таблицы 42, активность фермента ФЛ-С, составляющая от 50 мЕд/семя до 600 мЕд/семя, приводила к значительному повышению высоты (см) кукурузного растения при сравнении и нормировании к контрольным растениям, обработанным водой (без фермента).
[00617] Во втором эксперименте определяли титры фосфолипазы D, требуемые для достижения оптимального роста. Фосфолипазу D (ФЛ-D) из бактерий Acidovorax avenae (SEQ ID NO: 117) разводили в воде до концентрации, соответствующей активности от 20 мЕд/семя до 800 мЕд/семя. Единицу активности фермента для ФЛ-D определяли по количеству фермента, которое требовалось для разрушения 1 мкмоль субстрата/мин/мл (1 Ед = 1 мкмоль субстрат/мин) при идеальной температуре и условиях. Испытание повторяли два раза с использованием в каждом испытании по 18 растений на каждый уровень активности фермента. В обоих испытаниях для каждой группы обработки по 18 семян коммерческого гибрида кукурузы (5828 YH от компании BECK) помещали в конические пробирки на 50 мл. Каждую коническую пробирку обрабатывали на вортексе и в каждую пробирку добавляли по 18 мкл раствора фермента для достижения конечной концентрации фермента, соответствующей активности ФЛ-D 20, 50, 100, 200, 400, 600 или 800 мЕд на семя. Титры ФЛ-D, варьирующие от 20 мЕд/семя до 800 мЕд/семя, наносили на кукурузное семя с использованием объема 1 мкл для определения оптимальной обработки семян ФЛ-D для улучшения роста. Конические пробирки снова обрабатывали на вортексе в течение 20 секунд для достижения равномерного покрытия каждого семени. Семена сушили в течение 5 минут и затем сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержащие верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки в каждый горшок добавляли по 50 мл воды комнатной температуры для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с обеспечением уровня освещенности примерно 300 мкмоль м-2 с-1 при поддержании цикла ночь/день 13/11 часов и температурного диапазона 21°С днем/15°С ночью.
[00618] Высоту растений (см) усредняли для 2 повторов испытания с применением в каждом испытании по 18 растений на группу обработки. Высоту растений, полученных из обработанных ФЛ-D семян, нормировали к контролю и выражали как процент средней высоты растения, нормированной к не обработанным ферментом контрольным растения (обработанным водой), данные представлены в Таблице 43 ниже со значениями среднеквадратичного отклонения (STDEV) для 2 испытаний.
[00619] Как можно видеть из Таблицы 43, нанесение фосфолипазы D на кукурузное семя оказывало положительный эффект на рост растений при каждом из исследованных уровней активности фермента. В каждом примере растения, получавшие обработку семян ФЛ-D, имели повышенную высоту по сравнению с контрольными растениями.
Пример 23: Некорневая обработка свободными фосфолипазами и ксилоглюканазами на кукурузе и сое, тепличные условия.
[00620] Свободную ксилоглюканазу (SEQ ID NO: 125; Paenibacillus sp.) и фосфолипазу D (SEQ ID NO: 117; Acidovorax avenae) наносили на 2-хнедельную гибридную кукурузу (5828 YH от компании BECK) в качестве некорневой обработки с использованием концентраций фермента, описанных в Таблице 44 (ниже), вместе с 0,1% неионогенным поверхностно-активным веществом (ALLIGARE SURFACE) с помощью пульверизатора, доставляя 10 мл/растение. Среднюю высоту растений нормировали к контрольным растениям, которые получали некорневую обработку только водой вместе с поверхностно-активным веществом. Некорневое нанесение ксилоглюканазы и фосфолипазой D путем обработки распылением кукурузного растения приводило к повышению высоты растения по сравнению с контрольными растениями (Таблица 44). Нанесение ксилоглюканазы путем некорневой обработки в концентрации, обеспечивающей активность 600 мкЕд/мл, и фосфолипазы D в концентрации, обеспечивающей активность 200 мкЕд/мл, на кукурузном растении обеспечивали максимальное повышение роста растений, приводя к повышению, составляющему 106,5% и 111,1%, соответственно, по сравнению с контрольным растения.
[00621] В другом эксперименте фосфолипазу D (ФЛ-D) из бактерий рода Acidovorax наносили в качестве средства обработки семян на соевое семя (297NR от компании BECK) в объеме 1 мкл в концентрациях на каждое семя, эквивалентных конечным уровням активности 600 мЕд/семя и 800 мЕд/семя (указанные значения активности были выбраны для исследования на сои на основе титров, описанных выше в Примере 22 для кукурузы). Нанесение ФЛ-D в концентрациях, соответствующих активности 600 мЕд/семя и 800 мЕд/семя в качестве средства обработки семян на соевом семени приводило к положительному эффекту на скорость роста растений.
[00622] Обработанные семена высаживали и позволяли им расти в тепличных условиях. Когда растения достигали стадии развития V2-V3, измеряли значения их общей биомассы, биомассы корней и уровня образования клубеньков. Стадия V2-V3 представляет собой самую раннюю стадию развития для образования клубеньков. Инициация образования клубеньков начинается на соевых проростках, как только корневые волоски появляются на первичных или боковых корнях. Азот-фиксация начинается примерно через 2-3 недели после первоначальной ризобиальной инфекции. Первые трехлисточковые листья, которые полностью формировались у соевых растений на стадии V1-V2, измеряли на стадии, соответствующей показанной максимальной активности азот-фиксации. Эффективное образование клубеньков на корнях сои приводит к более высокой урожайности и более высокому качеству продукции семени, белка и масла на акр.
[00623] Проводили два независимых эксперимента (в каждом испытании по 18 растений на группу обработки). Данные для обработанных ФЛ-D растений нормировали к контрольным растениям, выращенным из контрольных семян, обработанных водой.
[00624] Нанесение ФЛ-D в качестве средства обработки семян с применением 800 мЕд на соевое семя приводило к значительному повышению как общей биомассы, так и биомассы корней по сравнению с растениями, выращенными из контрольных семян, обработанных водой, которые не получали свободный фермент ФЛ-D (Таблица 45).
[00625] Обработка ФЛ-D также приводила к количественному повышению образования клубеньков на корнях растений. Обработка семян ФЛ-D в концентрации, соответствующей активности 600 мЕд или 800 мЕд, приводила к повышенному образованию клубеньков по сравнению с необработанными контрольными растениями, при этом обработка в концентрации, соответствующей 800 мЕд, приводила почти к удвоению количества клубеньков на корнях соевых растений.
Пример 24: Свободные ферменты на кукурузе, полевые условия.
[00626] Свободные ферменты ксилоглюканазу, ксиланазу, хитозаназу, лихеназу, ксилозидазу, протеазу и липазу разводили в воде до концентраций, соответствующих уровням активности, перечисленным в Таблице 46 ниже. Семена гибридной кукурузы (5828 YH от компании BECK) обрабатывали 1 мкл раствора свободного фермента на семя для достижения уровня активности на семя (1 Ед = 1 мкмоль субстрата/мин), как показано в Таблице 46 ниже. Семена полностью высушивали и сажали (по 4 повтора на обработку) в ряды длиной 24 дюйма (7,3 м) с густотой посева семян 1,72 семян/фут/ряд (5,64 семян/метр/ряд). Рассадники в каждом положении готовили с применением стандартных методов или методов противоэрозионной обработки почвы для посадки кукурузы. Для контроля сорняков наносили гербициды и осуществляли дополнительную культивацию при необходимости. Каждое испытание повторяли 4 раза. Для всех вариантов обработки осуществляли обработку семени, включавшую протиоконазол, пенфлуфен, металаксил и клотианидин.
[00627] После сбора урожая измеряли абсолютное изменение в бушелях на акр (бушели/акр) или метрических тоннах на гектар для каждой группы обработки свободным ферментом и нормировали к урожайности не обработанного контрольного растения (обработанного водой) (Таблица 46, ниже). Среднее значение для контрольного кукурузного семени составляло 162 бушеля/акр (10,17 т/га). Обработка семян лихеназой, протеазой или липазой приводила к максимальному повышению урожайности кукурузы по сравнению с контрольными растениями. Обработка лихеназой показала максимальное повышение урожайности по сравнению с контрольными растениями со среднем повышением, составляющим 22 бушели/акр (1,39 т/га), что равно повышению на 114% при нормировании к контрольным кукурузным растениям.
[00628] Во втором эксперименте свободные ферменты (эндоглюканазу, экзоглюканазу, хитозаназу, протеазу и фитазу) наносили путем некорневого нанесения на кукурузу (гибрид 5140 HR от компании BECK), обладающую признаком защиты от кукурузного жука HERCULEX и признаком устойчивости к глифосату, в 4 участках Среднего Запада на стадии развития V5-V8. Для обеспечения равномерного покрытия листьев все растения с ферментативными обработками и контрольной обработкой дополнительно обрабатывали неионогенным поверхностно-активным веществом (ALLIGARE SURFACE) в конечной концентраций 0,1%. Абсолютное изменение в бушелях на акр (бушели/акр) и эквивалентные значения в т/га представлены по сравнению с контрольными растениями и также выражены как урожайность, нормированная к контрольным растениям («контроль, включающий обработку водой/поверхностно-активным веществом») (Таблица 47). Результаты некорневой обработки с применением свободных ферментов представлены как абсолютная урожайность в бушелях на акр (или т/га). Абсолютное изменение урожайности для приведенных значений урожайности (бушели/акр или т/га), нормированное к контрольным растениям, сравнивали между 4 повторами испытаний (Таблица 47). Наблюдалось положительное изменение урожайности у обработанных ферментом растений по сравнению с контрольными растениями (растениями, обработанными только водой и поверхностно-активным веществом). Нанесение фитазы в качестве некорневой обработки приводило к максимальному общему повышению урожайности (абсолютное изменение урожайности ~ 24 бушеля/акр (~ 1,51 т/га) по сравнению с контролем).
Пример 25: Обработка липазами кукурузного семени, тепличные условия.
[00629] Проводили эксперимент на кукурузе для определения способности липаз обеспечивать рост растений при их нанесении в качестве средства обработки семян. Липазу (Pseudomonas fluoresceins; SEQ ID NO: 119) разводили в воде до концентраций, которые обеспечивали активность липазы 3000 мкЕд и 6000 мкЕд на семя. Липазу наносили на кукурузное сеся (сорт кукуруза 5828 YH от компании BECK) с использованием активности 3000 мкЕд/семя и 6000 мкЕд/семя в объеме 1 мкл фермента на семя для достижения перечисленных значений активности на семя. Семена сушили в течение 5 минут и затем сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержащие верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки добавляли 50 мл воды комнатной температуры в каждый горшок для возможности прорастания. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с обеспечением уровня освещенности, составляющего примерно 300 мкмоль м-2 с-1 с циклом световых суток 13/11 и температурным диапазоном 21°С днем/15°С ночью. В конце 2 недели, когда все растения достигли стадии развития V2-V3, измеряли высоту кукурузных растений, обработанных липазой, и нормировали к высоте контрольных растений, семена которых были обработаны только водой.
[00630] Эксперимент повторяли два раза, при этом использовали по 18 растений на группу обработки (и 3 повторности на группу обработки) и значения усредняли между экспериментами, данные представлены в Таблице 48 вместе со значениями среднеквадратичного отклонения (STDEV). Нанесение липазы в качестве свободного фермента в концентрации, соответствующей активности 3000 мкЕд и 6000 мкЕд на семя, приводило к среднему увеличению высоты растения, составляющему приблизительно 106% и 103% соответственно.
Пример 26: Липаза или фосфолипаза на кукурузе, тепличные условия, обработка в бороздах.
[00631] Нанесение липазы (Burkholderia cepacia) в качестве обработки в бороздах использовали, чтобы определить, может ли нанесение липазы в качестве свободного фермента на область, окружающую кукурузное семя, приводить к положительным благоприятным эффектам на рост растений на ранней фазе для кукурузного растения. Фермент липазу (Burkholderia cepacia, SEQ ID NO: 118) разводили в воде до концентрации, соответствующей значениям уровня активности, перечисленным в Таблице 49 ниже. Кукурузные семена (6626 RR компании BECK) сажали в горшки объемом 39,7 см3, содержащий верхний слой почвы, на глубину 2,54 см по 2 семени на горшок. После посадки, но до укрытия семени грунтом, фермент липазу наносили в бороздах на область, окружающую семя, в объеме 1 мкл при уровне активности, варьирующим от 2 мкЕд до 200 мкЕд. Группу семян вместо липазы обрабатывали β-1,4-эндоглюканазой (Acidothermus cellulolyticus; SEQ ID NO: 30) путем внесения в борозды на область, окружающую семя, при уровне активности 1000 мкЕд. Горшки хранили в теплице с искусственным освещением с обеспечением уровня освещенности, составляющего примерно 300 мкмоль м-2 с-1 с циклом световых суток 13/11 и температурным диапазоном 21°С днем/15°С ночью. Примерно через две недели, когда растения достигли стадии развития V2-V3, их высоту измеряли и нормировали к контрольным растениям, которые обрабатывали только водой. Растения, обработанные липазой, дополнительно сравнивали с растениями, получавшими β-1,4-эндоглюканазу (Acidothermus).
[00632] Эксперимент повторяли в целом два раза (по 18 растений в каждом испытании на группу обработки). Средние значения высоты растений на группы обработки для обоих испытаний, нормированные к контролю, представлены вместе со значениями среднеквадратичного отклонения (STDEV, Таблица 49). Нанесение липаз при уровне активности 20 мкЕд на семя в качестве обработки в бороздах на кукурузе приводило к максимальному увеличению высоты растений по сравнению с нанесением в качестве обработки в бороздах других значений активности липазы. Нанесение β-1,4-эндоглюканазы в качестве обработки свободным ферментом в бороздах также приводило к положительным изменениям высоты растений и эффектам, способствующим росту растений, описанным для кукурузных растений. Эффект нанесения липазы в концентрации, обеспечивающей активность 20 мкЕд, на область, окружающую семя (на мл объема в воде), был сравним с обработкой в бороздах семян, получавших β-1,4-эндоглюканазу.
[00633] Во втором эксперименте специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С из Bacillus cereus (SEQ ID NO: 115) наносили с удобрением (SF), содержащим 12% аммиачного азота и 58% доступного фосфата (происходящего из моноаммонийфосфата) с помощью методов непосредственного внесения в борозды, как описано выше для кукурузного семени (5828 YH от компании BECK). Фермент наносили в концентрации 8 жидких унций/акр (584,2 мл/гектар) или приблизительно 1200 мЕд на область, окружающую семя. Указанная обработка приводила к среднему увеличению высоты растения для 3 повторов испытаний на 105% при нормировании к контролю, который включал использование воды и обработку только удобрением. Результаты показаны в Таблице 50 ниже.
Пример 27: Применение кислой фосфатазы на кабачке и кукурузе, в бороздах.
[00634] Исследовали эффекты кислой фосфатазы (отдельно или в комбинации с липазой, β-ксиланазой, пектолазой, маннаназой, лихеназой или ксиланазой) на рост растения. Свободные ферменты, содержащие кислую фосфатазу (Triticum aestivum, смесь двух различных изоформ, имеющих последовательности, представленные в настоящей заявке последовательностями SEQ ID NO: 130 и 131, коммерчески доступную от компании Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, как продукт номер Р3627) отдельно или в комбинации с липазой (Pseudomonas fluorescens, SEQ ID NO: 119), β-ксиланазой (Neocallimastix patriciarum, SEQ ID NO: 122), пектолиазой (Aspergillus, SEQ ID NO: 129), маннаназой (Bacillus sp., SEQ ID NO: 128), лихеназой (Bacillus subtilis, SEQ ID NO: 43) или ксиланазой (Thermomyces lanuginosus, SEQ ID NO: 121) наносили при уровнях активности, перечисленных в Таблице 51, путем непосредственного внесения в борозды на площадь, окружающую семена кабачка, с использованием таких же способов, как описано выше в Примере 26 (для гибридного кабачка «Амбассадор», коммерчески доступного от компании Park seed в виде продукта 05298). Варианты проводимой ферментативной обработки семян кабачка включали обработку для семян «Thiram» и проводились вместе с обработкой удобрением (SF), содержавшим 12% аммиачного азота и 58% доступного фосфата. Обработку в бороздах ферментом и только удобрением осуществляли с применением рабочих концентраций, представленных как единицы активности на мл объема в Таблице 51 ниже, и ферменты доставляли в объеме 1 мл на семя в почву вокруг семени. Высоту растений определяли для 2 испытаний, при этом в каждом испытании измеряли по 18 растений на вариант обработки. Данные приведены в Таблице 51 ниже и представляют собой процентное изменение высоты растения для семян кабачка, обработанных свободным ферментом в бороздах по сравнению с контрольными семенами (контроль, обработанный только удобрением). Отдельная обработка свободным ферментом кислой фосфатазой приводила к увеличению высоты растений в среднем на 49,6% по сравнению с контрольными растениями. Растения, выросшие из семян кабачка, обработанных в бороздах свободным ферментом, включая кислую фосфатазу, объединенную с ферментами липазой, β-ксиланазой, пектолиазой, маннаназой, лихеназой или ксиланазой, имели повышенную высоту по сравнению с обработанными водой и удобрением кабачками. Обработка в бороздах с применением фермента кислой фосфатазы отдельно приводила к максимальному среднему процентному повышению общего роста, как показано по увеличению высоты растения по сравнению с применением комбинации кислой фосфатазы с другими ферментами (липазой, β-ксиланазой, пектолиазой, маннаназой, лихеназой или ксиланазой).
[00635] В другом эксперименте свободные ферменты, содержащие кислую фосфатазу (Triticum aestivum, смесь двух изоформ с последовательностями, представленными в настоящей заявке последовательностями SEQ ID NO: 130 и 131), специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (Bacillus cereus; SEQ ID NO: 115) или β-1,4-эндоглюканазу (Acidothermus cellulolyticus; SEQ ID NO: 30) наносили путем непосредственной обработки в бороздах на площадь, окружающую гибридное кукурузное семя (5828 YH от компании BECK) в концентрациях, перечисленных в Таблице 52 ниже. Обработку в бороздах осуществляли совместно с обработкой гормон-биостимулирующим агентом (CYTOPLEX, коммерчески доступным от компании Miller Chemical & Fertilizer, LLC), который содержит экстракт морских растений, кинетин, гиббереллиновую кислоту и индол-3-масляную кислоту в концентрации 2 жидких унции/акр (146,2 мл/гектар). Высоту растений определяли для 2 испытаний, при этом для каждого испытания измеряли по 18 растений на группу обработки. Данные в Таблице 52 ниже приведены как процентное изменение высоты растения для кукурузных семян, получавших обработку в бороздах с использованием свободных ферментов, по сравнению с контрольными семенами (обработка только гормон-биостимулирующим агентом). Обработка кислой фосфатазой в качестве свободного фермента приводила увеличению высоты растения в среднем на 16% и 8% по сравнению с контрольными растениями для рабочих концентраций 300 мЕд/мл и 600 мЕд/мл соответственно, нанесенных в бороздах на площадь семени. Высота растения для кукурузы, выращенной из семени, обработанного в бороздах фосфолипазой С и β-1,4-эндоглюканазой, также была увеличена по сравнению с семенем, обработанным только гормон-биостимулирующим агентом. Нанесение каждого из свободных ферментов: кислой фосфатазы, фосфолипазы С и β-1,4-эндоглюканазы в рабочей концентрации 300 мЕд/мл приводило к увеличению высоты растения приблизительно в 2 раза по сравнению с применением рабочей концентрации 600 мЕд/мл в бороздах на площадь семени. Обработка каждым из трех ферментов в комбинации с гормон-биостимулирующим агентом приводила к увеличению высоты растения по сравнению с контролями, включавшими обработку только гормон-биостимулирующим агентом.
[00636] Свободные ферменты, содержащие кислую фосфатазу (Triticum aestivum, смесь двух различны изоформ с последовательностями, представленными в настоящей заявке последовательностями SEQ ID NO: 130 и 131) или специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (Bacillus cereus; SEQ ID NO: 115) наносили путем непосредственного внесения в борозды на площадь, окружающую гибридное кукурузное семя (5828 YH от компании BECK). Обработку ферментом в бороздах проводили в комбинации с обработкой гормон-биостимулирующим агентом (CYTOPLEX, коммерчески доступным от компании Miller Chemical & Fertilizer, LLC), содержащим экстракт морских растений, кинетин, гиббереллиновую кислоту и индол-3-масляную кислоту. Обработку ферментом в бороздах осуществляли с применением рабочих концентраций, составляющих 2, 4 и 8 жидких унций на площадь семени (59,14, 118,29 и 236,59 мл на площадь семени). Высоту растения определяли для 2 испытаний, при этом проводили измерение 18 растений на каждое испытание. Данные приведены в Таблице 53 ниже как процентное изменение высоты растения для кукурузных семян, получавших обработку в бороздах с использованием ферментов кислой фосфатазы или фосфолипазы С по сравнению с контрольными семенами (только биостимулирующий агент). Обработка кислой фосфатазой в виде свободного фермента в рабочих концентрациях, составляющих 2, 4 и 8 жидких унций (59,14, 118,29 и 236,59 мл) при нанесении на площадь семени (приблизительно 150 мЕд/мл, 300 мЕд/мл и 600 мЕд/мл на площадь семени) приводила к увеличению высоты растения по сравнению с контрольными растениями, где концентрация, составляющая 4 жидких унции (118,29 мл) приводила к увеличению высоты растений на 8,3% по сравнению с контрольным растениям при рабочей концентрации 300 мЕд/мл. Обработка кукурузы в бороздах приводила к увеличению высоты растения, выращенного при обработке фосфолипазой С, по сравнению с кукурузой, выращенной при контрольной обработке, включающей только биостимулирующий агент, при использовании рабочих концентраций 2 и 4 жидкие унции (59,14 и 118,29 мл) на площадь семени (приблизительно равных 150 и 300 мЕд на площадь семени соответственно). Рабочая концентрация, составляющая 4 жидкие унции (118,29 мл), была предпочтительной для роста растения и приводила к увеличению высоты растений на 11,4% по сравнению с контролем, включавшим только биостимулирующий агент. Обработка контролем, включавшим только биостимулирующий агент, приводила к более низкой скорости роста кукурузного растения по сравнению с обработкой только водой.
Пример 28: Протеаза или ксилозидаза в бороздах на кукурузе.
[00637] Протеазу A (Aspergillus saitoi; SEQ ID NO: 127) и ксилозидазу (Bacillus pumilus; SEQ ID NO: 123) наносили на кукурузу форме обработки свободным ферментом в бороздах и оценивали эффекты на высоту и рост растений. В случае обоих ферментов - протеазы А и ксилозидазы - использовали способы, сходные со способами, описанными выше в Примере 26 для обработки липазой в бороздах с кукурузой. Обработку в бороздах (1 мл на семя) осуществляли на области, окружающей кукурузное семя (5828 YH от компании BECK) после посадки кукурузы, но до покрытия семени рыхлым грунтом. Протеазу А и ксилозидазу в качестве обработки в бороздах доставляли в объеме 1 мкл в концентрации, эквивалентной активности 428 мкЕд/площадь семени для протеазы и 714 мкЕд/площадь семени (на мл) для ксилозидазы. Обработка как протеазой А, так и ксилозидазой приводила к увеличению высоты растения при нормировании к контрольным растениям (обработка только водой). Результаты показаны в Таблице 54 ниже.
Пример 29: Ксиланаза или ксилозидаза на кукурузном и соевом семени, тепличные условия.
[00638] Свободные ферменты наносили в качестве средства обработки семян на кукурузу и сою. Ксиланазы, происходящие из грибов Thermomyces lanuginosus (SEQ ID NO: 121) или Neocallimastix patriciarum (SEQ ID NO: 122), и ксилозидазу, происходящую из бактерий Bacillus pumilus (SEQ ID NO: 123), наносили на семена кукурузы (5828 NR от компании BECK) и сои (297 NR от компании BECK) в конических пробирках с применением объемов по 2 мкл, эквивалентных активности 600 мкЕд на семя для ксиланаз (Thermomyces lanuginosus; Neocallimastix patriciarum) и 714 мкЕд на семя для ксилозидазы (Bacillus pumilus). Два отдельных набора кукурузных и соевых семян обрабатывали β-1,4-эндоглюканазой (Acidothermus cellulolyticus; SEQ ID NO: 30) при активности 1000 мкЕд/семя. Семенам позволяли сохнуть после их покрытия и сажали в коммерчески доступный верхний слой почвы, как описано выше в Примере 1. В конце 14-го дня определяли среднее процентное изменение высоты растений по сравнению с контрольными растениями, обработанными водой, для двух повторов испытания для кукурузы и одного испытания для сои с использованием 12 растений на испытание. Изменение средней высоты растения (см) сравнивали с контрольными растениями, а также кукурузными и соевыми растениями, выращенными из семян, обработанных β-1,4-эндоглюканазой (Acidothermus), что приводило к увеличению роста растения при нанесении в качестве средства обработки семян на кукурузе и сои. Среднее процентное изменение высоты растения, нормированной к контрольным растениям, обработанным водой, представлено в Таблице 55 ниже со значениями среднеквадратичного отклонения от среднего (STDEV) для 2 испытаний, проведенных на кукурузе и сое.
[00639] Нанесение ксиланаз (Thermomyces lanuginosus; Neocallimastix patriciarum) в качестве средства обработки семян как на кукурузном, так и на соевом семени при активности, составляющей 600 мкЕд/семя, приводило к увеличению высоты растений по сравнению с контрольными растениями. Нанесение ксиланазы (Thermomyces lanuginosus) на кукурузное семя приводило к повышению высоты растений в среднем на 9% для кукурузы и в среднем на 12% для сои. Нанесение β-ксиланазы (Neocallimastix patriciarum) на кукурузное семя приводило к увеличению высоты растений в среднем на 4% для кукурузы. Применение ксилозидазы (Bacillus pumilus) в качестве средства обработки семян на кукурузном и соевом семени в концентрации 714 мкЕд/семя, приводило к увеличению высоты приблизительно на 9-11% как для кукурузного, так и для соевого растения по сравнению с контрольными растениями. Положительное влияние на высоту растений нанесения ксиланазы и ксилозидазы в форме обработки свободным ферментом на кукурузном и соевом семени было сравнимо или превышало влияние β-1,4-эндоглюканазы (Acidothermus) как для кукурузного, так и для соевого растения. Через две недели высоту растений измеряли и нормировали к растениям, получавшим обработку только удобрением.
Пример 30: Свободные ферменты и титры активности для осуществления обработки семян и обработки в бороздах на кукурузе и сое.
[00640] Каждый из ферментов лихеназы (Bacillus subtilis, коммерчески доступной от компании Megazyme в виде продукта E-LICHN; SEQ ID NO: 43), ксилоглюканазы (из видов Paenibacillus, коммерчески доступной от компании Megazyme, в виде продукта E-XEGP; SEQ ID NO: 125), β-ксиланазы (Bacillus stearothermophilus, коммерчески доступной от компании Megazyme в виде продукта E-XYNBS; SEQ ID NO: 25), маннаназы (из видов Bacillus, коммерчески доступной от компании Megazyme в виде продукта E-BMABS; SEQ ID NO: 128), липазы (Burkholderia stearothermophilus, коммерчески доступной от компании Sigma-Aldrich, в виде продукта 534641; SEQ ID NO: 120), пектолиазы (Aspergillus japonicus, коммерчески доступной от компании Sigma-Aldrich, в виде продукта Р3026; SEQ ID NO: 129) и β-1,4-эндоглюканазы (Acidothermus cellulolyticus, коммерчески доступной от компании Sigma-Aldrich, в виде продукта Е2164; SEQ ID NO: 30) разводили в воде для достижения уровней активности, перечисленных ниже в Таблице 56. Аликвоты (1 мкл) указанных препаратов применяли для обработки семян в экспериментах, описанных ниже в данном примере и в Примере 31.
[00641] Проводили исследование титров шести свободных ферментов (лихеназы, ксилоглюканазы, ксиланазы, маннаназы, липазы и пектолиазы) на кукурузе (5828 YH от компании BECK) и сое (BECK'S 297 NR) для определения оптимальных значений активности, способствующих росту растений, при применении в качестве средства обработки семян. Титры шести ферментов, обеспечивающие значения активности, которые определяли как оптимальные для применения указанных ферментов в качестве средства обработки семян, перечислены в Таблице 57 ниже (представлены как активность свободного фермента на семя). Эксперименты проводили при одинаковых условиях окружающей среды в условиях контролируемого роста, как описано в Примере 29. Процентные изменения средней высоты растения определяли для шести ферментов, используемых в качестве средства обработки семян, наносимого на семена кукурузы или сои (Таблица 57, ниже). Среднюю высоту растений для каждого из шести ферментов нормировали к значению для растений, выращенных из семян, получавших контрольную обработку, представляющую собой воду, и записывали как процентное изменение (Таблица 57). Включали применение дополнительных обработок свободными ферментами на кукурузном семени и сравнивали с обработкой свободным ферментом β-1,4-эндоглюканазой, поскольку ранее было показано, что указанный фермент способствует росту растений при нанесении в качестве средства обработки семян на кукурузном растении (см. Примеры 1-4, 7, 26 и 29, выше).
[00642] Применение всех из шести свободных ферментов (лихеназы, ксилоглюканазы, β-ксиланазы, и маннаназы, липазы и пектолиазы) на кукурузе и сое в качестве средства обработки семян при оптимальном уровне их активности приводили к повышению высоты растений по сравнению с контрольными растениями, выращенными из семян, не обработанных ферментом. Результаты показаны в Таблице 57 ниже. Нанесение свободного фермента β-1,4-эндоглюканазы на кукурузное семя приводило к увеличению высоты кукурузного растения, нормированной к контрольному растению. На основании данных для обоих сортов растений - кукурузы и сои - маннаназа приводила к максимальному увеличению высоты растений, нормированной к контрольным растениям (повышение на 107% у кукурузы и повышение на 110% у сои).
[00643] Четыре одинаковых фермента (лихеназу, ксилоглюканазу, маннаназу и пектолиазу, перечисленные в Таблице 56 выше) титровали для определения оптимальных значений активности для применения в качестве обработки в бороздах на кукурузе (5828 YH от компании BECK) для улучшения роста растений. Титры каждого фермента оптимизировали с точки зрения влияния на рост растений (Таблица 58) и непосредственно наносили в объеме 1 мл воды на семя на область, окружающую семя, непосредственно перед окончанием посадки и покрытием семени грунтом. Через две недели после посадки измеряли высоту растений и нормировали к высоте растений, не обработанных ферментом, а получавших вместо этого только контрольную обработку воду. Данный эксперимент повторяли в трех испытаниях с использованием по 18 растений на каждое испытание. Результаты измерений усредняли для всех испытаний с получением процентного изменения средней высоты кукурузного растения (по сравнению с контролем). Данные приведены в Таблице 58 для четырех свободных ферментов: лихеназы, ксилоглюканазы, маннаназы и пектолиазы. Применение всех из свободных ферментов лихеназы, ксилоглюканазы и пектолазы в качестве обработки в бороздах на области, окружающей кукурузные семена, приводило к повышению высоты кукурузы по сравнению с контролем, содержавшем только воду.
[00644] Шесть одинаковых свободных ферментов (лихеназу, ксилоглюканазу, ксиланазу, маннаназу, липазу и пектолиазу, перечисленных выше в Таблице 56) титровали для определения оптимальных значений активности для применения в качестве средства обработки семян на сое (297 NR от компании BECK). Значения активности (мкЕд/семя) приведены для каждого фермента в Таблице 59 ниже. Проводили три испытания, каждое из которых включало 18 растений, и измеряли изменения общей биомассы, биомассы побегов, биомассы корней и образования клубеньков. Эксперименты проводили при одинаковых условиях окружающей среды в условиях контролируемого роста, как описано в Примере 6 выше. В некоторых экспериментах дополнительную группу семян обрабатывали β-1,4-эндоглюканазой (1000 мкЕд/семя). Изменения общей биомассы, биомассы побегов, биомассы корней и образования клубеньков представлены в Таблице 59 ниже как процентное (%) изменение, нормированное к семенам сои, не обработанным свободным ферментом (контроль, обработанный водой).
Пример 31: Свободные ферменты в качестве средства обработки семян для повышения урожайности на кабачке цукини.
[00645] Свободные ферменты лихеназу, ксилоглюканазу, ксиланазу, липазу, описанные выше в Примере 30, и β-1,4-эндоглюканазу (Acidothermus cellulolyticus, SEQ ID NO: 30) наносили в форме средства обработки семян при оптимальной концентрации, определенной на основе серии титров, и наносили на семена кабачка цукини (Spineless Beauty, коммерчески доступного от компании Park Seed) в объеме 1 мкл при концентрации ферментов, соответствующей активности, приведенной в мкЕд/семя (Таблица 60). Общая урожайность для семян, обработанных свободным ферментом лихеназой, ксилоглюканазой, ксиланазой, липазой и β-1,4-эндоглюканазой, приведена в Таблице 60 как общая масса собранных плодов кабачка цукини, нормированная к контролю. Данные усредняли для двух сборов урожая, завершенных в августе (Колумбия, Миссури). Все из наносимых на семена цукини вариантов обработки свободными ферментами с применением лихеназы (700 мкЕд/семя), ксиланазы (3000 мкЕд/семя) и липазы (50 мкЕд/семя) привели к положительным изменениям урожайности, которая была повышена по сравнению с контрольной обработкой. Благоприятный эффект на общую урожайность от повышения общего количества поддающего сбору урожая для растений цукини при применение обработок семени свободным ферментом для лихеназы, ксиланазы и липазы был сходным с эффектом β-1,4-эндоглюканазы (1000 мкЕд/семя).
Пример 32: Синергическое действие нескольких ферментов на кукурузу, в бороздах.
[00646] Маннаназу (Bacillus sp.; SEQ ID NO: 128), ксилоглюканазу (Paenibacillus sp., SEQ ID NO: 125), специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С (Bacillus cereus, SEQ ID NO: 115) и ксилозидазу (Bacillus pumilus; SEQ ID NO: 123) наносили на кукурузу (5828 YH от компании BECK) в качестве обработки в бороздах свободным ферментом и проверяли эффекты на высоту растений. Варианты обработки ферментами, включая комбинации ферментов, описаны в Таблице 61. Для всех свободных ферментов использовали способы, подобные описанным выше способам в Примере 26 для обработки кукурузы липазой в бороздах. Вкратце, обработку в бороздах наносили на области, окружающей кукурузное семя, после посадки кукурузы, но до покрытия семян рыхлым грунтом. Каждую обработка, которая включала как фермент (ферменты), так и удобрение, содержащее ортополифосфат и ацетат калия, наносили в объеме 1 мл на семя. Обработку в бороздах с применением каждого фермента осуществляли при значениях активности 300 мЕд/площадь семени для маннаназы и специфичной в отношении фосфатидилхолина фосфолипазы С, 500 мЕд/площадь семени для ксилоглюканазы и 714 мЕд/площадь семени (на мл) для ксилозидазы. Ферменты доставляли к семенам в объеме 1 мл на площадь семени, содержащем как фермент (ферменты), так и удобрение. Для каждого варианта обработки использовали по 54 семени, которые разделяли между 3 повторяющимися экспериментами, каждый из которых включал 18 растений. Примерно через две недели измеряли высоту растений и нормировали к контрольным растениям, обработанным только удобрением.
[00647] Результаты показаны в Таблице 61 ниже. Маннаназа или ксилоглюканаза отдельно не приводили к значительному увеличению высоты. Отдельное нанесение фосфолипазы С и ксилозидазы приводило к повышению высоты растения. Комбинации фосфолипазы С и маннаназы или ксилоглюканазы неожиданным образом приводили к синергическому повышению высоты растения по сравнению с любой отдельной обработкой. Комбинация маннаназы и ксилоглюканазы также была более эффективной по сравнению с любым из указанных ферментов по отдельности.
Пример 33: Суммарные эффекты нескольких ферментов на кабачке, в бороздах.
[00648] Маннаназу (Bacillus sp.; SEQ ID NO: 128), лихеназу (Bacillus subtilis, SEQ ID NO: 43), кислую фосфатазу (Triticum aestivum, смесь двух различных изоформ с последовательностями, представленными в настоящей заявке как последовательности SEQ ID NO: 130 и 131), пектолиазу (Aspergillus japonicus, SEQ ID NO: 129), β-ксиланазу (Neocallismastix patriciarum, SEQ ID NO: 122) и β-ксиланазу (Bacillus stearothermophilius, SEQ ID NO: 25) наносили на гибридный кабачок сорта «Амбассодор» (коммерчески доступный от компании Park seed как продукт 05298) в качестве обработки свободным ферментом в бороздах и оценивали их эффекты на высоту и рост растений. Для нанесения всех свободных ферментов использовали способы, подобные способам, описанным выше в Примере 26 для обработки кукурузы липазой в бороздах. Вкратце, обработку в бороздах наносили на область, окружающую семя кабачка, после посадки указанного кабачка, но до покрытия семени рыхлым грунтом. Каждый вариант обработки наносили в объеме 1 мл на семя, содержавшем как фермент (ферменты), так и удобрение, содержащее моноаммонийфосфат. Обработку в бороздах с применением каждого фермента осуществляли при значениях активности 300 мЕд/площадь семени для маннаназы, 600 мЕд/площадь семени для лихеназы, 30 мЕд/площадь семени для пектолиазы, 35 мкЕд/площадь семени для кислой фосфатазы и 1500 мЕд/площадь семени для обеих β-ксиланаз. Ферменты доставляли к семенам в объеме 1 мл на площадь семени, содержавшем как фермент (ферменты), так и удобрение. Через две недели измеряли высоту растений и значение нормировали к растениям, которые обрабатывали только удобрением.
[00649] Результаты показаны в Таблице 62 ниже. Отдельное применение кислой фосфатазы приводило к увеличению высоте растений по сравнению с контрольными растениями, обработанными только удобрением. Указанный эффект был немного лучше при применении лихеназы, наносимой вместе с кислой фосфатазой. Значительное увеличение наблюдалось при дополнительном добавлении к комбинации удобрение/кислая фосфатаза пектолиазы, маннаназы или любой из ксиланаз. Применение указанных не целлюлолитических углеводных гидролаз в комбинации с кислой фосфатазой приводило к значительному приросту высоты растений, опосредованному механизмом доставки через почву.
ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00650] Для дополнительной иллюстрации изобретения ниже изложены дополнительные неограничивающие варианты реализации настоящего изобретения.
[00651] Вариант реализации 1 представляет собой фермент, который содержит аминокислотную последовательность, кодирующую фермент, обладающий 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминазной (АЦК-дезаминазной) активностью, и сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента при его экспрессии в микроорганизме.
[00652] Вариант реализации 2 представляет собой фермент согласно варианту реализации 1, характеризующийся тем, что указанный фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, содержит фермент из бактерии рода Bacillus.
[00653] Вариант реализации 3 представляет собой фермент, обладающий АЦК-дезаминазной активностью, характеризующийся тем, что аминокислотная последовательность указанного фермента содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа из бактерии рода Bacillus и тем, что указанная аминокислотная замена приводит к повышенной АЦК-дезаминазной активности по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа при одинаковых условиях.
[00654] Вариант реализации 4 представляет собой фермент согласно варианту реализации 3, характеризующийся тем, что указанный фермент также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента при его экспрессии в микроорганизме.
[00655] Вариант реализации 5 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 1, 2 и 4, характеризующийся тем, что микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Rhizobium, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Paracoccus, бактерию рода Mesorhizobium, бактерию рода Bradyrhizobium, бактерию рода Actinobacter, бактерию рода Arthrobacter, бактерию рода Azotobacter, бактерию рода Azosprillium, факультативную метилотрофную бактерию с розовым пигментом, микоризный гриб, гриб рода Glomus, гриб рода Trichoderma, гриб рода Kluyera, гриб рода Gliocladium или любую их комбинацию.
[00656] Вариант реализации 6 представляет собой фермент согласно варианту реализации 5, характеризующийся тем, что микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Paenibacillus или любую их комбинацию.
[00657] Вариант реализации 7 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 1-6, характеризующийся тем, что фермент содержит фермент бактерии Bacillus thuringiensis или фермент бактерии Bacillus pseudomycoides.
[00658] Вариант реализации 8 представляет собой фермент согласно варианту реализации 7, характеризующийся тем, что фермент содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113, и обладает АЦК-дезаминазной активностью.
[00659] Вариант реализации 9 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 3-8, характеризующийся тем, что аминокислотная последовательность указанного фермента содержит две аминокислотные замены по отношению к последовательности фермента D-цистеиндесульфгидразы или АЦК-дезаминазы дикого типа, где указанные аминокислотные замены приводят к повышению АЦК-дезаминазной активности по сравнению с АЦК-дезаминазной активностью фермента дикого типа при одинаковых условиях.
[00660] Вариант реализации 10 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 3-9, характеризующийся тем, что аминокислотная последовательность указанного фермента содержит:
замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 7 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 7 на лейциновый остаток;
замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 8 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 8 на лейциновый остаток;
замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 9 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 9 на лейциновый остаток; или
замену треонинового остатка в положении 290 последовательности SEQ ID NO: 113 на остаток глутаминовой кислоты и замену серинового остатка в положении 317 последовательности SEQ ID NO: 113 на лейциновый остаток.
[00661] Вариант реализации 11 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 3-10, характеризующийся тем, что указанный фермент содержит или состоит из последовательности SEQ ID NO: 10, 11, 12 или 114.
[00662] Вариант реализации 12 представляет собой фермент согласно варианту реализации 1 или 2, характеризующийся тем, что указанный фермент содержит аминокислотную последовательность, на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-9 и 113.
[00663] Вариант реализации 13 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, экспрессирующий фермент согласно любому из вариантов реализации 1-12.
[00664] Вариант реализации 14 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 13, характеризующийся тем, что экспрессия фермента повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях.
[00665] Вариант реализации 15 представляет собой состав, содержащий фермент согласно любому из вариантов реализации 1-12 или рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 13 или 14 и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00666] Вариант реализации 16 представляет собой семя растения, обработанное ферментом согласно любому из вариантов реализации 1-12, рекомбинантным микроорганизмом согласно варианту реализации 13 или 14 или состав согласно варианту реализации 15.
[00667] Вариант реализации 17 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение фермента согласно любому из вариантов реализации 1-12, рекомбинантного микроорганизма согласно варианту реализации 13 или 14 или состава согласно варианту реализации 15 на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00668] Вариант реализации 18 представляет собой способ согласно варианту реализации 17, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента согласно любому из вариантов реализации 1-12 на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00669] Вариант реализации 19 представляет собой способ согласно варианту реализации 17 или 18, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00670] Вариант реализации 20 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-19, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение рекомбинантного микроорганизма согласно варианту реализации 13 или 14 на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00671] Вариант реализации 21 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00672] Вариант реализации 22 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение двух или более свободных ферментов на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, маннаназы, пектиназы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[00673] Вариант реализации 23 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение свободного фермента на растение или семя растения, где указанный фермент содержит глюканазу и где указанное нанесение фермента к семени растения включает: (а) нанесение указанного фермента на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения указанным ферментом.
[00674] Вариант реализации 24 представляет собой способ согласно варианту реализации 23, характеризующийся тем, что указанный способ включает покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим фермент и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00675] Вариант реализации 25 представляет собой способ согласно варианту реализации 23 или 24, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесение фермента или белка экспансина на среду для роста растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00676] Вариант реализации 26 представляет собой способ согласно варианту реализации 25, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесение фермента или белка экспансина к среде для роста растения.
[00677] Вариант реализации 27 представляет собой способ согласно варианту реализации 26, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесение фермента и белка экспансина к среде для роста растения.
[00678] Вариант реализации 28 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение свободного фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где указанный фермент содержит глюканазу и способ также включает нанесение белка экспансина на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00679] Вариант реализации 29 представляет собой способ согласно варианту реализации 28, характеризующийся тем, что нанесение фермента или белка экспансина к семени растения включает: (а) нанесение фермента или белка экспансина на семя растения во время посадки или (b) покрытие семени растения ферментом или белком экспансином.
[00680] Вариант реализации 30 представляет собой способ согласно варианту реализации 29, характеризующийся тем, что указанный способ включает покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим:
фермент, белок экспансии или фермент и белок экспансии и
приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00681] Вариант реализации 31 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение свободного фермента на растение или семя растения, где указанный фермент содержит фитазу.
[00682] Вариант реализации 32 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение удобрения и свободного фермента на среду для роста растения, область, окружающую указанное растение или семя растения, или на растение или семя растения, где указанный свободный фермент содержит фитазу.
[00683] Вариант реализации 33 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00684] Вариант реализации 34 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции фермента или белка экспансина.
[00685] Вариант реализации 35 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий
нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00686] Вариант реализации 36 представляет собой способ стимулирования роста растения и/или улучшения здоровья растения, включающий:
нанесение рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения, где:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не является частью гибридного белка.
[00687] Вариант реализации 37 представляет собой семя растения, покрытое рекомбинантным микроорганизмом, характеризующееся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, фитазы, маннаназы, пектиназы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00688] Вариант реализации 38 представляет собой семя растения, покрытое рекомбинантным микроорганизмом, характеризующееся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00689] Вариант реализации 39 представляет собой семя растения, покрытое рекомбинантным микроорганизмом, характеризующееся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00690] Вариант реализации 40 представляет собой семя растения, покрытое рекомбинантным микроорганизмом, характеризующееся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, глюканазы, протеазы, маннаназы, пектиназы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не является частью гибридного белка.
[00691] Вариант реализации 41 представляет собой композицию, содержащую удобрение и фермент или белок экспансии, характеризующуюся тем, что указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00692] Вариант реализации 42 представляет собой композицию согласно варианту реализации 41, характеризующуюся тем, что фермент содержит свободный фермент.
[00693] Вариант реализации 43 представляет собой композицию, содержащую удобрение и рекомбинантный микроорганизм, характеризующуюся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00694] Вариант реализации 44 представляет собой композицию, содержащую удобрение и рекомбинантный микроорганизм, характеризующуюся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00695] Вариант реализации 45 представляет собой композицию, содержащую удобрение и рекомбинантный микроорганизм, характеризующуюся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00696] Вариант реализации 46 представляет собой композицию, содержащую удобрение и рекомбинантный микроорганизм, характеризующуюся тем, что:
указанный рекомбинантный микроорганизм экспрессирует фермент или белок экспансии, при этом экспрессия указанного фермента или белка экспансина повышена по сравнению с уровнем экспрессии указанного фермента или белка экспансина в микроорганизме дикого типа той же разновидности при одинаковых условиях;
фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, маннаназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных; и
фермент или белок экспансии не является частью гибридного белка.
[00697] Вариант реализации 47 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 41-46, характеризующуюся тем, что указанная композиция также содержит приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, дополнительный агрохимикат или их комбинацию.
[00698] Вариант реализации 48 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 34-36, семя согласно любому из вариантов реализации 38-40 или композиции, согласно любому из вариантов реализации 44-47, характеризующиеся тем, что указанный фермент или белок экспансии экспрессируется во время вегетативного роста рекомбинантного микроорганизма.
[00699] Вариант реализации 49 представляет собой способ согласно варианту реализации 33 или 48, семя согласно варианту реализации 37 или 48 или композиции. согласно любому из вариантов реализации 43, 47 и 48, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает рекомбинантный спорообразующий микроорганизм.
[00700] Вариант реализации 50 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 33, 35, 48 и 49, семя согласно любому из вариантов реализации 37, 39, 48 и 49 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43 и 45-49, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии также содержит сигнальный пептид, приводящий к секреции указанного фермента или белка экспансина.
[00701] Вариант реализации 51 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 1, 2 и 4-12, рекомбинантный микроорганизм согласно варианту реализации 13 или 14, состав согласно варианту реализации 15, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 34 и 50, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 38 и 50 или композицию согласно любому из вариантов реализации 44, 47 и 50, характеризующиеся тем, что сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную по последовательности любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-73, 135 и 137-147.
[00702] Вариант реализации 52 представляет собой фермент, рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 51, характеризующиеся тем, что сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную по последовательности любой из последовательностей SEQ ID NO: 49-51, 54, 56-73, 135, 139,140 и 142.
[00703] Вариант реализации 53 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 1, 2, 4-12, 51 и 52, рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51 и 52, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 34 и 50-52, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 38 и 50-52 или композицию согласно любому из вариантов реализации 44, 47 и 50-52, характеризующиеся тем, что сигнальный пептид присутствует на амино-конце указанного фермента или белка экспансина.
[00704] Вариант реализации 54 представляет собой фермент, рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 52 или 53, характеризующиеся тем, что указанный микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, бактерию рода Pseudomonas или любую их комбинацию.
[00705] Вариант реализации 55 представляет собой фермент, рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 54, характеризующиеся тем, что указанный микроорганизм включает Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus firmus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus aryabbattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Bacillus licheniformis, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или любую их комбинацию.
[00706] Вариант реализации 56 представляет собой фермент, рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 55, характеризующиеся тем, что указанный микроорганизм включает Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus, Bacillus pseudomycoides, Bacillus mycoides, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus fusiformis, Lysinibacillus sphericus или любую их комбинацию.
[00707] Вариант реализации 57 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 33, 34, 36 и 48-56 или семя согласно любому из вариантов реализации 37, 38, 40 и 48-56 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43, 44 и 46-56, характеризующиеся тем, что указанный фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием рекомбинантного представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00708] Вариант реализации 58 представляет собой способ согласно варианту реализации 35 или 57, семя согласно варианту реализации 39 или 57 или композицию согласно варианту реализации 45 или 57, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием интактной споры представителя вида бактерий Bacillus cereus.
[00709] Вариант реализации 59 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 33, 35, 48, 49, 57 и 58, семя согласно любому из вариантов реализации 37, 39, 48, 49, 57 и 58 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43, 45, 47-49, 57 и 58, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии не является частью гибридного белка.
[00710] Вариант реализации 60 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-22, 25-30, 32-36 и 48-59, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на среду для роста растения.
[00711] Вариант реализации 61 представляет собой способ согласно варианту реализации 60, характеризующийся тем, что среда для роста растения содержит удобрение.
[00712] Вариант реализации 62 представляет собой способ согласно варианту реализации 60, характеризующийся тем, что среда для роста растения по существу состоит из удобрения.
[00713] Вариант реализации 63 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36 и 48-62, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на растение.
[00714] Вариант реализации 64 представляет собой способ согласно варианту реализации 63, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на корни растения.
[00715] Вариант реализации 65 представляет собой способ согласно варианту реализации 63 или 64, характеризующийся тем, что указанный способ включает некорневое нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на.
[00716] Вариант реализации 66 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36 и 48-65, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного микроорганизма на семя растения.
[00717] Вариант реализации 67 представляет собой способ согласно варианту реализации 66, характеризующийся тем, что нанесение фермента, белка экспансина или рекомбинантного организма к семени растения включает: (а) нанесение указанного фермента, белка экспансина или рекомбинантного организма на семф растения во время посадки или (b) покрытие семени растения ферментом, белком экспансином или рекомбинантным организмом.
[00718] Вариант реализации 68 представляет собой способ согласно варианту реализации 67, характеризующийся тем, что указанный способ включает покрытие семени растения составом для покрытия семян, содержащим:
фермент, белок экспансии, рекомбинантный микроорганизм или их комбинацию; и
приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00719] Вариант реализации 69 представляет собой семя растения, обработанное свободным ферментом, где указанный фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, нецеллюлолитической глюканазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00720] Вариант реализации 70 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21 и 60-68 или семя растения согласно варианту реализации 69, характеризующиеся тем, что фермент выбран из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, маннаназы, пектиназы, лактоназы, хитозаназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, АЦК-дезаминазы и комбинации любых из перечисленных.
[00721] Вариант реализации 71 представляет собой семя растения, обработанное двумя или более свободными ферментами, где указанные ферменты независимо выбраны из фосфолипазы, липазы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, хитозаназы, маннаназы, пектиназы, протеазы, фитазы, кислой фосфатазы, глюканазы и АЦК-дезаминазы.
[00722] Вариант реализации 72 представляет собой семя растения, покрытое свободным ферментом, где указанный фермент содержит глюканазу.
[00723] Вариант реализации 73 представляет собой семя растения, обработанное свободным ферментом и белком экспансином, где указанный фермент содержит глюканазу.
[00724] Вариант реализации 74 представляет собой семя растения согласно любому из вариантов реализации 16, 69-71 и 73, характеризующееся тем, что указанное семя растения покрыто ферментом, рекомбинантным микроорганизмом, белком экспансином или любой их комбинацией.
[00725] Вариант реализации 75 представляет собой семя растения согласно варианту реализации 74, характеризующееся тем, что указанное семя растения покрыто ферментом и белком экспансином.
[00726] Вариант реализации 76 представляет собой семя растения согласно любому из вариантов реализации 72, 74 и 75, характеризующееся тем, что указанное семя растения покрыто составом для покрытия семян, содержащим фермент, рекомбинантный микроорганизм, белок экспансии или любую их комбинацию и приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00727] Вариант реализации 77 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36 и 48-68 и 70, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-76 или композицию согласно любому из вариантов реализации 51-59, характеризующиеся тем, что фермент содержит фосфолипазу.
[00728] Вариант реализации 78 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 77, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит фосфолипазу А, фосфолипазу В, фосфолипазу С, фосфолипазу D, фосфолипазу Е или любую их комбинацию.
[00729] Вариант реализации 79 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 78, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит фосфолипазу А, фосфолипазу С, фосфолипазу D или любую их комбинацию.
[00730] Вариант реализации 80 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 78, характеризующиеся тем, что:
фосфолипаза содержит фосфолипазу А, где указанная фосфолипаза А содержит фосфолипазу А1, фосфолипазу А2 или их комбинацию;
фосфолипаза содержит фосфолипазу В, где указанная фосфолипаза В содержит фосфолипазу В1;
фосфолипаза содержит фосфолипазу С, где указанная фосфолипаза С содержит фосфолипазу С бета 1, фосфолипазу С бета 2, фосфолипазу С бета 3, фосфолипазу С бета 4, фосфолипазу С дельта 1, фосфолипазу С дельта 3, фосфолипазу С дельта 4, фосфолипазу С эпсилон 1, фосфолипазу С гамма 1, фосфолипазу С гамма 2, фосфолипазу С эта 1, фосфолипазу С эта 2, фосфолипазу С зета 1 или любую их комбинацию; или
фосфолипаза содержит фосфолипазу D, где указанная фосфолипаза D содержит фосфолипазу D1, фосфолипазу D2, фосфолипазу D, член 3, фосфолипазу D, член 4, фосфолипазу D, член 5, фосфолипазу D, член 6, или любую их комбинацию,
[00731] Вариант реализации 81 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 80, характеризующиеся тем, что фосфолипаза А содержит фосфолипазу А2, фосфолипазу А2, содержащую фосфолипазу А2 группы II, фосфолипазу А2 группы IIC, фосфолипазу А2 группы IID, фосфолипазу А2 группы IIE, фосфолипазу А2 группы IIF, фосфолипазу А2 группы III, фосфолипазу А2 группы IV, фосфолипазу А2 группы IVB, фосфолипазу А2 группы IVC, фосфолипазу А2 группы IVD, фосфолипазу А2 группы IVE, фосфолипазу А2 группы VIF, фосфолипазу А2 группы V, фосфолипазу А2 группы VI, фосфолипазу А2 группы VII, фосфолипазу А2 группы X, фосфолипазу А2 группы XII, фосфолипазу А2 группы XIIB, фосфолипазу А2 группы XV, фосфолипазу А2 группы XVI или любую их комбинацию.
[00732] Вариант реализации 82 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 77, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит 1-алкил-2-ацетилглицерофосфохолинэстеразу, фосфатидилинозитолдеацилазу, фосфоинозитидфосфолипазу С, сфингомиелинфосфодиэстеразу, сфингомиелинфосфодиэстеразу D, алкилглицерофосфоэтаноламинфосфодиэстеразу, специфичную в отношении вариабельного поверхностного глико протеина фосфолипазу С, гликозилфосфатидилинозитолфосфолипазу D, N-ацетилфосфатидилэтаноламин-гидролизующую фосфолипазу D, фосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, гликозилфосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 2 (PNPLA2), содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 3 (PNPLA3) или любую их комбинацию.
[00733] Вариант реализации 83 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 77-82, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит фосфолипазу бактерий рода Streptomyces, фосфолипазу бактерий рода Bacillus, фосфолипазу бактерий рода Clostridium, фосфолипазу бактерий рода Acidovorax или любую их комбинацию.
[00734] Вариант реализации 84 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 83, характеризующиеся тем, что фосфолипаза бактерий рода Streptomyces содержит фосфолипазу Streptomyces chromofuscus, фосфолипаза бактерий рода Bacillus содержит фосфолипазу Bacillus cereus или фосфолипазу Bacillus thuringiensis или фосфолипаза бактерий рода Clostridium содержит фосфолипазу Clostridium perfringens.
[00735] Вариант реализации 85 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 83, характеризующиеся тем, что фосфолипаза Streptomyces chromofuscus содержит фосфолипазу D Streptomyces chromofuscus, фосфолипаза Bacillus cereus содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С Bacillus cereus, специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу С Bacillus cereus или фосфолипаза Clostridium perfringens содержит фосфолипазу С Clostridium perfringens.
[00736] Вариант реализации 86 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 77-85, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 13-19 и 115-117.
[00737] Вариант реализации 87 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 77, характеризующиеся тем, что фосфолипаза содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу С Bacillus cereus, где:
указанный способ также включает нанесение маннаназы или ксилоглюканазы на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения;
указанное семя дополнительно обработано маннаназой или ксилоглюканазой; или
указанная композиция также содержит маннаназу или ксилоглюканазу.
[00738] Вариант реализации 88 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 87, характеризующиеся тем, что фосфолипаза С и маннаназа присутствуют в синергически эффективном количестве.
[00739] Вариант реализации 89 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 87, характеризующиеся тем, что фосфолипаза С и ксилоглюканаза присутствуют в синергически эффективном количестве.
[00740] Вариант реализации 90 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-89, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-89 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-89, характеризующиеся тем, что фермент содержит липазу.
[00741] Вариант реализации 91 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 90, характеризующиеся тем, что липаза содержит липазу, специфичную в отношении сложных эфиров карбоновых кислот, диацилглицеринлипазу альфа, диацилглицеринлипазу бета, липазу А, липазу печени, чувствительную к гормонам липазу, желудочную липазу, эндотелиальную липазу, представителя вида липаз H, член семейства липаз I, член семейства липаз J, член семейства липаз K, член семейства липаз М, член семейства липаз N, липопротеиновую липазу, моноглицеридлипазу, связанный с липазой белок 2 поджелудочной железы, связанный с липазой белок 3 поджелудочной железы, ацилглицеринлипазу, галактолипазы, липопротеиновую липазу или любую их комбинацию.
[00742] Вариант реализации 92 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 90 или 91, характеризующиеся тем, что липаза содержит липазу Bacillus subtilis, липазу Bacillus thuringiensis, липазу Bacillus cereus, липазу Bacillus clausii, липазу Burkholderia cepacia, липазу Burkholderia. stearothermophilus, липазу Pseudomonas или любую их комбинацию.
[00743] Вариант реализации 93 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 90-92, характеризующиеся тем, что липаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 20, 21 и 118-120.
[00744] Вариант реализации 94 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-93, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-93 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-93, характеризующиеся тем, что фермент содержит ксиланазу.
[00745] Вариант реализации 95 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 94, характеризующиеся тем, что ксиланаза содержит бета-ксиланазу.
[00746] Вариант реализации 96 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 95, характеризующиеся тем, что бета-ксиланаза содержит глюкуроноарабиноксилан-эндо-1,4-бета-ксиланазу, экзо-1,4-бета-ксиланазу, эндо-1,4-бета-ксиланазу или любую их комбинацию.
[00747] Вариант реализации 97 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 94-96, характеризующиеся тем, что ксиланаза содержит ксиланазу бактерий рода Caldicellulosiruptor, ксиланазу бактерий рода Bacillus, ксиланазу грибов рода Neocallimastix, ксиланазу грибов рода Thermomyces или любую их комбинацию.
[00748] Вариант реализации 98 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 97, характеризующийся тем, что ксиланаза бактерий рода Caldicellulosiruptor содержит ксиланазу Caldicellulosiruptor saccharolyticus, ксиланаза бактерий рода Bacillus содержит ксиланазу Bacillus subtilis или Bacillus stearothermophilus, ксиланаза грибов рода Neocallimastix содержит ксиланазу Neocallimastix patriciarum или ксиланаза грибов рода Thermomyces содержит ксиланазу Thermomyces lanuginosus.
[00749] Вариант реализации 99 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 94-98, характеризующиеся тем, что ксиланаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 22-25, 121 и 122.
[00750] Вариант реализации 100 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 46-68, 70 и 77-93, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-93 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-93, характеризующиеся тем, что фермент содержит ксилозидазу.
[00751] Вариант реализации 101 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 100, характеризующиеся тем, что ксилозидаза содержит ксилозидазу Caldicellulosiruptor saccharolyticus, ксилозидазу Bacillus pumilus или их комбинацию.
[00752] Вариант реализации 102 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 100 или 101, характеризующиеся тем, что ксилозидаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 26 или 123.
[00753] Вариант реализации 103 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-102, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-49, 69-71 и 74-102 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-102, характеризующиеся тем, что фермент содержит лактоназу.
[00754] Вариант реализации 104 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 103, характеризующиеся тем, что лактоназа содержит 1,4-лактоназу, 2-пирон-4,6-дикарбоксилатлактоназу, 3-оксоадипатеноллактоназу, актиномицинлактоназу, лактоназу, специфичную в отношении дезоксилимоноат-А-кольцевого лактона, глюконолактоназы, L-рамноно-1,4-лактоназу, лактоназу, специфичную в отношении лимоноат-D-кольцевого лактона, специфичную в отношении стероида лактоназу, триацетатлактоназу, ксилоно-1,4-лактоназу или любую их комбинацию.
[00755] Вариант реализации 105 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 103 или 104, характеризующиеся тем, что лактоназа содержит лактоназу бактерий рода Bacillus, лактоназу бактерий рода Agrobacterium, лактоназу бактерий род Rhodococcus, лактоназу бактерий рода Streptomyces, лактоназу бактерий рода Arthrobacter, лактоназу бактерий рода Sphingomonas, лактоназу бактерий рода Pseudomonas, лактоназу бактерий рода Klebsiella или любую их комбинацию.
[00756] Вариант реализации 106 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 105, характеризующиеся тем, что лактоназа содержит лактоназу Bacillus thuringiensis, лактоназу Bacillus pseudomycoides или их комбинацию.
[00757] Вариант реализации 107 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 106, характеризующиеся тем, что лактоназа содержит AiiA.
[00758] Вариант реализации 108 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 103-107, характеризующиеся тем, что лактоназа специфична в отношении бактериальной сигнальной молекулы гомосеринлактона.
[00759] Вариант реализации 109 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 103-108, характеризующиеся тем, что лактоназа содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO; 27 или 28.
[00760] Вариант реализации 110 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-109, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-109 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-109, характеризующиеся тем, что фермент содержит хитозаназу.
[00761] Вариант реализации 111 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 110, характеризующиеся тем, что хитозаназа содержит экзо-1,4-бета-D-глюкозаминидазу, эндо-1,4-бета-d-глюкозаминидазу или их комбинацию.
[00762] Вариант реализации 112 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 110 или 111, характеризующиеся тем, что хитозаназа содержит хитозаназу бактерий Bacillus subtilis, хитозаназу бактерий рода Streptomyces или любую их комбинацию.
[00763] Вариант реализации 113 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 112, характеризующиеся тем, что хитозаназа содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 29 или 124.
[00764] Вариант реализации 114 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-113, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-113 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-113, характеризующиеся тем, что фермент содержит протеазу.
[00765] Вариант реализации 115 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 114, характеризующиеся тем, что протеаза содержит субтилизин, кислую протеазу, щелочную протеазу, протеиназу, пептидазу, эндопептидазу, экзопептидазу, термолизин, папаин, пепсин, трипсин, проназу, карбоксилазу, сериновую протеазу, глутаматную протеазу, аспартатную протеазу, цистеиновую протеазу, треониновую протеазу, аспарагиновую протеазу, гистидиновую протеазу, металлопротеазу или любую их комбинацию.
[00766] Вариант реализации 116 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 114 или 115, характеризующиеся тем, что протеаза содержит цистеиновую протеазу, сериновую протеазу, треониновую протеазу, аспартатную протеазу, аспарагиновую протеазу, металлопротеазу, глутаматную протеазу или любую их комбинацию.
[00767] Вариант реализации 117 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 114 или 115, характеризующиеся тем, что протеаза содержит металлопротеазу, сериновую протеазу, аспартатную протеазу, гистидиновую протеазу или любую их комбинацию.
[00768] Вариант реализации 118 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 114-117, характеризующиеся тем, что протеаза не состоит из метионинаминопептидазы.
[00769] Вариант реализации 119 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 114-118, характеризующиеся тем, что протеаза не содержит метионинаминопептидазу.
[00770] Вариант реализации 120 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 114-119, характеризующиеся тем, что протеаза содержит протеазу Bacillus, протеазу Aspergillus или их комбинацию.
[00771] Вариант реализации 121 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 120, характеризующиеся тем, что протеаза бактерий рода Bacillus содержит протеазу Bacillus subtilis.
[00772] Вариант реализации 122 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 114-121, характеризующиеся тем, что протеаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 46-48 и 127.
[00773] Вариант реализации 123 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21-30, 33-36, 48-68 и 77-122, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69 и 71-122 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-122, характеризующиеся тем, что фермент содержит глюканазу.
[00774] Вариант реализации 124 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 123, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит эндоглюканазу, экзоглюканазу или их комбинацию.
[00775] Вариант реализации 125 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 123 или 124, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит альфа-глюканазу, бета-глюканазу или их комбинацию.
[00776] Вариант реализации 126 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 125, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит альфа-глюканазу, где указанная альфа-глюканаза содержит амилазу, альфа-1,4-глюканазу, альфа-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00777] Вариант реализации 127 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 125, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит бета-глюканазу, где указанная бета-глюканаза содержит эндо-бета-глюканазу, экзо-бета-глюканазу или их комбинацию.
[00778] Вариант реализации 128 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 125, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит бета-глюканазу, где указанная бета-глюканаза содержит бета-1,3-глюканазу, бета 1,3/1,4 глюканазу, бета-1,4-глюканазу, бета-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00779] Вариант реализации 129 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 128, характеризующиеся тем, что бета-глюканаза содержит бета-1,3-глюканазу, бета-1,4-глюканазу или их комбинацию.
[00780] Вариант реализации 130 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 128 или 129, характеризующиеся тем, что бета-1,3-глюканаза содержит бета-1,3-эндоглюканазу или бета-1,4-глюканаза содержит бета-1,4-эндоглюканазу.
[00781] Вариант реализации 131 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 123-125, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит целлюлазу, гликозидгидролазу, ксилоглюкан:ксилоглюкозилтрансферазу, циклогептаглюканазу, олигоксилоглюкан-бета-гликозидазу, циклогексаглюканазу, ксило глюканазу, целлюлоза-1,4-бета-целлобиозидазу, глюкан-эндо-1,3-бета-D-глюкозидаза, цикломальтодекстриназу, глюкан-1,3-бета-глюкозидазу, глюкан-эндо-1,3-альфа-глюкозидазу, эндо-1,3(4)-бета-глюканазу, экзо-бета-1,4-глюканазу, лихеназу, ламинариназу, глюкан-1,4-бета-глюкозидазу, глюкан-эндо-1,6-бета-глюкозидазу, глюкан-1,3-альфа-глюкозидазу, амилопектиназу, ламинариназу или любую их комбинацию.
[00782] Вариант реализации 132 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 123, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит нецеллюлолитическую глюканазу.
[00783] Вариант реализации 133 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21 и 60-68, семя согласно любому из вариантов реализации 69 и 74-76 или способ, семя или композицию согласно варианту реализации 132, характеризующиеся тем, что нецеллюлолитическая глюканаза содержит ксило глюканазу, лихеназу, амилазу, амилоглюканазу, амилоглюкозидаза, ламинариназу, бета-1,3-глюканазу, бета-1,6-глюканазу, бета-1,3/1,4-глюканазу, альфа-1,4-глюканазу, альфа-1,6-глюканазу или любую их комбинацию.
[00784] Вариант реализации 134 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 131 или 133, характеризующиеся тем, что ксилоглюканаза содержит специфичную в отношении глюкана эндо-бета-1,4-глюканазу, специфичную в отношении ксилоглюкана экзо-бета-1,4-глюканазу или их комбинацию.
[00785] Вариант реализации 135 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 133 или 134, характеризующиеся тем, что ксилоглюканаза содержит глюканазу бактерий рода Paenibacillus.
[00786] Вариант реализации 136 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 133-135, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит ксилоглюканазу, где:
указанный способ также включает нанесение маннаназы на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения;
семя дополнительно обработано маннаназой; или
композиция также содержит маннаназу.
[00787] Вариант реализации 137 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 136, характеризующиеся тем, что ксилоглюканаза и маннаназа присутствуют в синергически эффективном количестве.
[00788] Вариант реализации 138 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 131, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит целлюлазу.
[00789] Вариант реализации 139 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 138, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит эндоцеллюлазу, экзоцеллюлазу или их комбинацию.
[00790] Вариант реализации 140 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 123-139, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит глюканазу бактерий рода Acidothermus, глюканазу грибов рода Trichoderma, глюканазу грибов рода Aspergillus, глюканазу бактерий рода Paenibacillus, глюканазу моллюсков рода Helix, глюканазу бактерий рода Bacillus или любую их комбинацию.
[00791] Вариант реализации 141 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 140, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит глюканазу Bacillus circulans, глюканазу Bacillus subtilis, глюканазу Bacillus thuringiensis, глюканазу Bacillus cereus, глюканазу Trichoderma reesei, глюканазу Bacillus clausii, глюканазу Helix pomatia, глюканазу Acidothermus cellulolyticus или любую их комбинацию.
[00792] Вариант реализации 142 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 141, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит эндоглюканазу Bacillus subtilis, эндоглюканазу Bacillus thuringiensis, эндоглюканазу Bacillus cereus, эндоглюканазу Bacillus clausii, экзоцеллюлазу Trichoderma reesei, бета-1,4-эндоглюканазу Trichoderma reesi, бета-глюкозидазу Bacillus subtilis, бета-глюкозидазу Bacillus thuringiensis, бета-глюкозидазу Bacillus cereus, бета-глюкозидазу Bacillus clausii, бета-1,4-энд,огпюканазу Acidothermus cellulolyticus, бета-1,3-эндоглюканазу Helix pomatia или любую их комбинацию.
[00793] Вариант реализации 143 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 123-142, характеризующиеся тем, что глюканаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 30-45, 125 и 126.
[00794] Вариант реализации 144 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 25-30, 33-36, 48-68 и 77-143, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59 и 73-143 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-143, характеризующиеся тем, что белок экспансии содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 74.
[00795] Вариант реализации 145 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 22, 31-36, 48-68, 70 и 77-144, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71 и 74-144 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-144, характеризующиеся тем, что фермент содержит фитазу.
[00796] Вариант реализации 146 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 145, характеризующиеся тем, что фитаза содержит фитазу Triticum aestivum.
[00797] Вариант реализации 147 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 145 или 146, характеризующиеся тем, что фитаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 132-134.
[00798] Вариант реализации 148 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70 и 77-147, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69, 71 и 74-147 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59 и 77-147, характеризующиеся тем, что фермент содержит кислую фосфатазу.
[00799] Вариант реализации 149 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 148, характеризующиеся тем, что кислая фосфатаза содержит кислую фосфатазу Triticum aestivum.
[00800] Вариант реализации 150 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 148 или 149, характеризующиеся тем, что кислая фосфатаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 130 или 131.
[00801] Вариант реализации 151 представляет собой способ или семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 148-150, характеризующиеся тем, что кислая фосфатаза содержит смесь кислых фосфатаз, содержащих последовательности SEQ ID NO: 130 и 131.
[00802] Вариант реализации 152 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 148-151, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесение второго фермента на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00803] Вариант реализации 153 представляет собой семя согласно любому из вариантов реализации 148-151, характеризующееся тем, что указанное семя дополнительно обработано или покрыто вторым ферментом.
[00804] Вариант реализации 154 представляет собой композицию согласно любому из вариантов реализации 148-151, характеризующуюся тем, что указанная композиция также содержит второй фермент.
[00805] Вариант реализации 155 представляет собой способ согласно варианту реализации 152, семя согласно варианту реализации 153 или композицию согласно варианту реализации 154, характеризующиеся тем, что второй фермент содержит липазу, фосфолипазу, глюканазу, ксиланазу, пектиназу, маннаназу, лихеназу или любую их комбинацию.
[00806] Вариант реализации 156 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70, 77-152 и 155, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71, 74-151, 153 и 155 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151, 154 и 155, характеризующиеся тем, что фермент содержит пектиназу.
[00807] Вариант реализации 157 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 155 или 156, характеризующиеся тем, что пектиназа содержит пектолиазу.
[00808] Вариант реализации 158 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 157, характеризующиеся тем, что пектолиаза содержит пектолиазу Aspergillusjaponicus.
[00809] Вариант реализации 159 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 155-158, характеризующиеся тем, что пектолиаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 129.
[00810] Вариант реализации 160 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 33-36, 48-68, 70, 77-152 и 155-159, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71, 74-151, 153 и 155-159 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151 и 154-159, характеризующиеся тем, что фермент содержит маннаназу.
[00811] Вариант реализации 161 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 155 или 160, характеризующиеся тем, что маннаназа содержит маннаназу бактерий рода Bacillus.
[00812] Вариант реализации 162 представляет собой способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 155, 160 и 161, характеризующиеся тем, что маннаназа содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную последовательности SEQ ID NO: 128.
[00813] Вариант реализации 163 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 21, 22, 34, 48-68, 70, 77-152 и 155-162, семя согласно любому из вариантов реализации 37-40, 48-59, 69-71, 74-151, 153 и 155-162 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151 и 154-162, характеризующиеся тем, что фермент содержит АЦК-дезаминазу.
[00814] Вариант реализации 164 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 163, характеризующиеся тем, что АЦК-дезаминаза содержит фермент согласно любому из вариантов реализации 1-12.
[00815] Вариант реализации 165 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 163, характеризующиеся тем, что АЦК-дезаминаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичную любой из последовательностей SEQ ID NO: 7-12, 113 и 114.
[00816] Вариант реализации 166 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152 и 155-165, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесения удобрения, биостимулирующего агента или их комбинации на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
[00817] Вариант реализации 167 представляет собой семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 69-151, 153 и 155-165, характеризующееся тем, что указанное семя дополнительно обработано или покрыто удобрением, биостимулирующим агентом или их комбинацией.
[00818] Вариант реализации 168 представляет собой способ согласно варианту реализации 32 или 166, семя согласно варианту реализации 167 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151 и 154-165, характеризующиеся тем, что удобрение содержит азот, фосфат, калий, цинк, железо, селен, бор, медь или любую их комбинацию.
[00819] Вариант реализации 169 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 168, характеризующиеся тем, что фосфат содержит моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, ортофосфат, ортополифосфат или любую их комбинацию или характеризующиеся тем, что калий содержит ацетат калия.
[00820] Вариант реализации 170 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 168, характеризующиеся тем, что удобрение содержит 12% аммиачного азота и 58% доступного фосфата.
[00821] Вариант реализации 171 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 166 и 168-170 или семя согласно любому из вариантов реализации 167-170, характеризующиеся тем, что биостимулирующий агент содержит гиббереллиновую кислоту, индол-3-масляную кислоту, кинетин, ауксин, гомолог или производное ауксина или любую их комбинацию.
[00822] Вариант реализации 172 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 166 и 168-171 или семя согласно любому из вариантов реализации 167-171, характеризующиеся тем, что фермент содержит кислую фосфатазу, фосфолипазу, маннаназу, глюканазу или любую их комбинацию.
[00823] Вариант реализации 173 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-32, 60-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-172, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 69-151, 153, 155-165 и 167-172 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41, 42, 47, 77-151, 154-165 и 168-170, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии содержит неочищенный клеточный экстракт, содержащий указанный фермент или белок экспансии.
[00824] Вариант реализации 174 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-32, 60-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-172, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 69-151, 153, 155-165 и 167-172 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41, 42, 47, 77-151, 154-165 и 168-170, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии содержит частично очищенный фермент или белок экспансии.
[00825] Вариант реализации 175 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-32, 60-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-172, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 69-151, 153, 155-165 и 167-172 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41, 42, 47, 77-151, 154-165 и 168-170, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии содержит по существу очищенный фермент или белок экспансии.
[00826] Вариант реализации 176 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-32, 60-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-175, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 69-151, 153, 155-165 и 167-175 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41, 42, 47, 77-151, 154-165, 168-170 и 173-175, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии не содержит фермент или белок экспансии, связанный с экзоспорием члена семейства бактерий Bacillus cereus.
[00827] Вариант реализации 177 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 176, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии не связан с экзоспорием интактной споры члена семейства бактерий Bacillus cereus.
[00828] Вариант реализации 178 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-32, 60-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-177, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 69-151, 153, 155-165 и 167-177 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41, 42, 47, 77-151, 154-165, 168-170 и 173-177, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии содержит фермент или белок экспансии, иммобилизированный на матрице или подложке.
[00829] Вариант реализации 179 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 178, характеризующиеся тем, что матрица или подложка содержит древесный уголь, биоуголь, наноуглерод, агарозу, альгинат, целлюлозу, производное целлюлозы, диоксид кремния, пластмассу, нержавеющую сталь, стекло, полистирол, керамику, доломит, глину, диатомовую землю, тальк, полимер, камедь, вододиспергируемый материал или любую их комбинацию.
[00830] Вариант реализации 180 представляет собой способ, семя или композицию согласно варианту реализации 178 или 179, характеризующиеся тем, что иммобилизация фермента или белка экспансина на матрице или подложке приводит к более медленному высвобождению указанного фермента или белка экспансина в окружающую среду или на растение или семя растения по сравнению со скоростью высвобождения того же не иммобилизированного фермента или белка экспансина при одинаковых условиях.
[00831] Вариант реализации 181 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14 и 51-56, состав согласно любому из вариантов реализации 15 и 51-56, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-172, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165 и 167-172 или композицию согласно любому из вариантов реализации 34-59, 77-151, 154-165 и 168-172, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии экспрессируется в рекомбинантном микроорганизме под контролем конститутивного промотора.
[00832] Вариант реализации 182 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14 и 51-56, состав любому из вариантов реализации 15 и 51-56, способ согласно любому из вариантов реализации 7-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-172, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165 и 167-172 или композицию согласно любому из вариантов реализации 34-59, 77-151, 154-165 и 168-172, характеризующиеся тем, что фермент или белок экспансии экспрессируется в рекомбинантном микроорганизме под контролем индуцируемого промотора.
[00833] Вариант реализации 183 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51-56, 181 и 182, состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56, 181 и 182, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166, 168-172, 181 и 182, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165, 167-172, 181 и 182 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43-59, 77-151, 154-165, 168-172, 181 и 182, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, гриб рода Penicillium, бактерию рода Glomus, бактерию рода Pseudomonas, бактерию рода Arthrobacter, бактерию рода Paracoccus, бактерию рода Rhizobium, бактерию рода Bradyrhizobium, бактерию рода Azosprillium, бактерию рода Enterobacter, бактерию рода Escherichia или любую их комбинацию.
[00834] Вариант реализации 184 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 49-51, 53, 57-68, 70 и 77-152, 155-166, 168-172 и 181-183 или семя согласно любому из вариантов реализации 49-51, 53, 57-59 и 77-151, 153, 155-165, 167-172 и 181-183 или композицию согласно любому из вариантов реализации 49-51, 53, 57-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-183, характеризующиеся тем, что рекомбинантный спорообразующий микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus, гриб рода Penicillium, гриб рода Glomus или любую их комбинацию.
[00835] Вариант реализации 185 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51-56 и 181-183, состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56 и 181-183, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166, 168-172 и 181-183, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165, 167-172 и 181-183 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-183, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает бактерию рода Bacillus, бактерию рода Paenibacillus, бактерию рода Lysinibacillus или любую их комбинацию.
[00836] Вариант реализации 186 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 185, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Bacillus aryabbattai, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus circulans, Bacillus flexus, Bacillus nealsonii, Bacillus pumulis, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или любую их комбинацию.
[00837] Вариант реализации 187 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 186, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus, Bacillus pseudomycoides, Lysinibacillus macroides, Lysinibacillus sphericus, Lysinibacillus fusiformis или любую их комбинацию.
[00838] Вариант реализации 188 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51-56 и 181-187, состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56 и 181-187, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166, 168-172 и 181-187, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165, 167-172 и 181-187 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-187, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм включает способствующий росту растений штамм бактерий, эндофитный штамм бактерий или штамм бактерий, который способствует росту растений и является эндофитным.
[00839] Вариант реализации 189 представляет собой рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51-56 и 181-188, состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56 и 181-188, способ согласно любому из вариантов реализации 17-20, 33-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166, 168-172 и 181-188, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 77-151, 153, 155-165, 167-172 и 181-188 или композицию согласно любому из вариантов реализации 43-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-188, характеризующиеся тем, что рекомбинантный микроорганизм является инактивированным.
[00840] Вариант реализации 190 представляет собой фермент согласно любому из вариантов реализации 1, 2, 5-8, 51-56, рекомбинантный микроорганизм согласно любому из вариантов реализации 13, 14, 51-56, 181-183 и 185-189, состав согласно любому из вариант реализации 15, 51-56, 181-183 и 185-189, способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-189, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 37-40, 48-59, 69-151, 153, 155-165 и 167-189 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-189, характеризующиеся тем, что фермент содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену по отношению к последовательности того же фермента дикого типа, где указанная аминокислотная замена приводит к повышенной активности фермента по сравнению с активностью фермента дикого типа при одинаковых условиях.
[00841] Вариант реализации 191 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-190, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, наблюдается усиленный рост по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00842] Вариант реализации 192 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-191, характеризующийся тем, что для семян, на которые был нанесен фермент или микроорганизм, наблюдается повышенная скорость прорастания по сравнению с семенами, на которые не был нанесен указанный фермент или микроорганизм, при одинаковых условиях.
[00843] Вариант реализации 193 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-192, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, наблюдается повышенное поглощение питательных веществ по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00844] Вариант реализации 194 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-193, характеризующийся тем, что растения, выращенные в присутствии фермента или микроорганизма, обладают пониженной чувствительностью к патогену по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00845] Вариант реализации 195 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-194, характеризующийся тем, что растения, выращенные в присутствии фермента или микроорганизма обладают пониженной чувствительностью к стрессу из окружающей среды по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00846] Вариант реализации 196 представляет собой способ согласно варианту реализации 195, характеризующийся тем, что стресс из окружающей среды включает засуху, затопление, жару, свободный цинк, соли, тяжелые металлы, низкий рН, высокий рН или любую их комбинацию.
[00847] Вариант реализации 197 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-196, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, наблюдается повышенное содержание питательных веществ по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00848] Вариант реализации 198 представляет собой способ согласно варианту реализации 197, характеризующийся тем, что питательное вещество содержит полисахарид, белок, фитиновую кислоту, фосфат, фосфолипид или любую их комбинацию.
[00849] Вариант реализации 199 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-198, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, наблюдается повышенное образование клубеньков на корнях по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00850] Вариант реализации 200 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-199, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, наблюдается более медленное созревания плода по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00851] Вариант реализации 201 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-200, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента, белка экспансина или микроорганизма, наблюдается более высокую урожайность по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента, белка экспансина или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00852] Вариант реализации 202 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-201, характеризующийся тем, что у растений, выращенных в присутствии фермента или микроорганизма, наблюдаются изменение в старении листьев по сравнению с растениями, выращенными в отсутствие указанного фермента или микроорганизма, при одинаковых условиях.
[00853] Вариант реализации 203 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-36, 48-68, 70, 77-152, 155-166 и 168-202, характеризующийся тем, что указанный способ включает нанесение фермента, белка экспансина или микроорганизма в составе, содержащем приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель.
[00854] Вариант реализации 204 представляет собой состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56, 181-183 и 185-190, способ согласно любому из вариантов реализации 24-27, 30, 60-68, 77-152, 155-166 и 168-203 или семя согласно любому из вариантов реализации 16, 76-151, 153, 155-165 и 167-190 или композицию согласно любому из вариантов реализации 47-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-190, характеризующиеся тем, что приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит диспергирующее вещество, поверхностно-активное вещество, добавку, воду, загуститель, антислеживающий агент, продукт распада остаточных веществ, компостирующий состав, гранулирующий состав, диатомовую землю, масло, краситель, стабилизатор, консервант, полимер, покрытие или любую их комбинацию.
[00855] Вариант реализации 205 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 204, характеризующиеся тем, что приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит добавку и указанная добавка содержит масло, камедь, смолу, глину, полиоксиэтиленгликоль, терпен, вязкие органические вещества, сложный эфир жирной кислоты, сульфатированный спирт, алкилсульфонат, нефтяной сульфонат, спирт-сульфат, натрий алкилбутандиамат, сложный полиэфир тиобутандиоата натрия, производное бензолацетонитрила, белковый материал или любую их комбинацию; приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит загуститель и указанный загуститель содержит длинноцепочечный алкилсульфонат полиэтиленгликоля, полиоксиэтиленолеат или любую их комбинацию; приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит поверхностно-активное вещество и указанное поверхностно-активное вещество содержит тяжелое нефтяное масло, тяжелый нефтяной дистиллят, сложный эфир полиола и жирной кислоты, сложный эфир полиэтоксилированной жирной кислоты, арилалкилполиоксиэтиленгликоль, алкиламиноацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат или любую их комбинацию; или приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит антислеживающий агент и указанный антислеживающий агент содержит натриевую соль, карбонат кальция, диатомовую землю или любую их комбинацию.
[00856] Вариант реализации 206 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 204, характеризующиеся тем, что поверхностно-активное вещество содержит неионогенное поверхностно-активное вещество.
[00857] Вариант реализации 207 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 205, характеризующиеся тем, что добавка содержит белковый материал и указанный белковый материал содержит молочный продукт, пшеничную муку, соевую муку, кровь, альбумин, желатин, люцерновую муку, дрожжевой экстракт или любую их комбинацию; или антислеживающий агент содержит натриевую соль и указанная натриевая соль содержит натриевую соль монометилнафталинсульфоната, натриевую соль диметилнафталинсульфоната, сульфит натрия, сульфат натрия или любую их комбинацию.
[00858] Вариант реализации 208 представляет собой состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56, 181-183, 185-190 и 204-207, способ согласно любому из вариантов реализации 24-27, 30, 60-68, 77-152, 155-166 и 168-207, семя согласно любому из вариантов реализации 16, 76-151, 153, 155-165 и 167-190 и 204-207 или композицию согласно любому из вариантов реализации 47-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-190 и 204-207, характеризующиеся тем, что приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит вермикулит, древесный уголь, фильтр-прессную грязь от процесса карбонизации при сахарном производстве, рисовую шелуху, карбоксииметилцеллюлозу, торф, перлит, мелкий песок, карбонат кальция, муку, алюминиевые квасцы, крахмал, тальк, поливинилпирролидон или любую их комбинацию.
[00859] Вариант реализации 209 представляет собой состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56, 181-183, 185-190 и 204-208, способ согласно любому из вариантов реализации 24-27, 30, 60-68, 77-152, 155-166 и 168-208 или семя согласно любому из вариантов реализации 16, 76-151, 153, 155-165 и 167-190 и 204-208 или композицию согласно любому из вариантов реализации 47-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-190 и 204-208, характеризующиеся тем, что состав или композиция содержит состав или композицию для покрытия семени, жидкий состав или композицию для нанесения на растение или среду для роста растения или твердый состав или композицию для нанесения на растение или среду для роста растения.
[00860] Вариант реализации 210 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 209, характеризующиеся тем, что состав или композиция для покрытия семени содержит водный или масляный раствор для нанесения на семена или порошок гранулированный состав для нанесения на семена.
[00861] Вариант реализации 211 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 209, характеризующиеся тем, что жидкий состав или композиция для нанесения на растение или среду для роста растения содержит концентрированный состав или композицию или готовый к применению состав или композицию.
[00862] Вариант реализации 212 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 209, характеризующиеся тем, что твердый состав или композиция для нанесения на растение или среду для роста растения содержит гранулированный состав или композицию или порошкообразный агент.
[00863] Вариант реализации 213 представляет собой состав согласно любому из вариантов реализации 15, 51-56, 181-183, 185-190 и 204-212, способ согласно любому из вариантов реализации 203-212 или семя согласно любому из вариантов реализации 16, 76-151, 153, 155-165 и 167-190 и 204-212, характеризующиеся тем, что состав также содержит агрохимикат; способ согласно любому из вариантов реализации 324-27, 30, 60-68, 77-152, 155-166 и 168-212, характеризующийся тем, что указанный способ также включает нанесение агрохимиката на среду для роста растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения; или композицию согласно любому из вариантов реализации 47-59, 77-151, 154-165, 168-172 и 181-190 и 204-212, характеризующуюся тем, что агрохимикат содержит удобрение, содержащий микронутриенты материал для удобрения, инсектицид, нематоцид, гербицид, добавку для улучшения роста растения, фунгицид, инсектицид, моллюскоцид, альгицид, бактериальный инокулянт, инокулянт грибов, растительный гормон или любую их комбинацию.
[00864] Вариант реализации 214 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 213, характеризующиеся тем, что бактериальный инокулянт содержит способствующий росту растений штамм бактерий, эндофитный штамм бактерий или штамм бактерий, который способствует росту растений и является эндофитным.
[00865] Вариант реализации 215 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 188 или состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 214, характеризующиеся тем, что штамм бактерий продуцирует инсектицидный токсин, фунгицидное соединение, нематоцидное соединение, бактерицидное соединение, является устойчивым к одному или более антибиотикам, содержит одну или более свободно реплицирующихся плазмид, связывается с корнями растения, колонизирует корни растения, образует биопленки, солюбилизирует питательные вещества, секретирует органические кислоты или любую их комбинацию.
[00866] Вариант реализации 216 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно варианту реализации 215, характеризующиеся тем, что инсектицидный токсин содержит токсин Cry и фунгицидное соединение содержит β-1,3-глюканазу, хитозаназу, литиказу или их комбинацию или нематоцидное соединение содержит токсин Cry.
[00867] Вариант реализации 217 представляет собой рекомбинантный микроорганизм, состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 214-216, характеризующиеся тем, что штамм содержит Bacillus aryabhattai САР53 (NRRL No. B-50819), Bacillus aryabhattai CAP56 (NRRL No. B-50817), Bacillus flexus BT054 (NRRL No. B-50816), Paracoccus kondratievae NC35 (NRRL No. B-50820), Bacillus mycoides BT155 (NRRL No. B-50921), Enterobacter cloacae CAP12 (NRRL No. B-50822), Bacillus nealsonii BOBA57 (NRRL No. NRRL B-50821), Bacillus mycoides ЕЕ 118 (NRRL No. B-50918), Bacillus subtilis EE148 (NRRL No. B-50927), Alcaligenes faecalis EE107 (NRRL No. B-50920), Bacillus mycoides EE141 (NRRL NO. B-50916), Bacillus mycoides BT46-3 (NRRL No. B-50922), представителя вида Bacillus cereus EE128 (NRRL No. B-50917), Paenibacillus massiliensis BT23 (NRRL No. B-50923), представителя вида Bacillus cereus EE349 (NRRL No. B-50928), Bacillus subtilis EE218 (NRRL No. B-50926), Bacillus megaterium EE281 (NRRL No. B-50925), представителя вида Bacillus cereus EE-B00377 (NRRL B-67119); Bacillus pseudomycoides EE-B00366 (NRRL B-67120), Bacillus mycoides EE-B00363 (NRRL B-67121), Bacillus pumilus EE-B00143 (NRRL B-67123) или Bacillus thuringiensis EE-B00184 (NRRL B-67122), Bacillus mycoides EE116 (NRRL No. B-50919), представителя вида Bacillus cereus EE417 (NRRL No. B-50974), Bacillus subtilis EE442 (NRRL No. B-50975), Bacillus subtilis EE443 (NRRL No. B-50976), представителя вида Bacillus cereus EE444 (NRRL No. B-50977), Bacillus subtilis EE405 (NRRL No. B-50978), представителя вида Bacillus cereus EE439 (NRRL No. B-50979), Bacillus megaterium EE385 (NRRL No. B-50980), представителя вида Bacillus cereus EE387 (NRRL No. B-50981), Bacillus circulans EE388 (NRRL No. B-50982), Bacillus thuringiensis EE319 (NRRL No. B-50983), представителя вида Bacillus cereus EE377 (NRRL No. B-67119), Bacillus mycoides EE363 (NRRL No. B-67121), Bacillus pseudomycoides EE366 (NRRL No. B-67120), Bacillus thuringiensis BT013A (NRRL No. B-50924) или любую их комбинацию.
[00868] Вариант реализации 218 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 213-217, характеризующиеся тем, что агрохимикат содержит удобрение и указанное удобрение содержит жидкое или сухое удобрение; указанный агрохимикат содержит содержащий микронутриенты материал для удобрения и указанный содержащий микронутриенты материал для удобрения содержит борную кислоту, борат, борную фритту, сулфьфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или любую их комбинацию; агрохимикат содержит инсектицид и указанный инсектицид содержит органофосфат, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, ароматическую замещенную галогеном мочевину, сложный углеводородный эфир, биологический инсектицид или любую их комбинацию; агрохимикат содержит гербицид и указанный гербицид содержит хлорфенокси соединение, нитрофенольное соединение, нитрокрезольное соединение, дипиридильное соединение, ацетамид, алифатическую кислоту, анилид, бензамид, бензойную кислоту, производное бензойной кислоты, анисовую кислоту, производное анисовой кислоты, бензонитрил, диоксид бензотиадиазинона, тиокарбамат, карбамат, карбанилат, хлорпиридинил, производное циклогексенона, производное динитроаминобензола, фтординитротолуидиновое соединение, изоксазолидинон, никотиновую кислоту, изопропиламин, производное изопропиламина, оксадиазолинон, фосфат, фталат, соединение пиколиновой кислоты, триазин, триазол, урацил, производное мочевины, эндоталь, хлорат натрия или любую их комбинацию; агрохимикат содержит фунгицид и указанный фунгицид содержит замещенный бензол, тиокарбамат, этилен-бис-дитиокарбамат, тиофталидамид, соединение меди, ртутьорганическое соединение, оловоорганическое соединение, соединение кадмия, анилазин, беномил, циклогексамид, додин, этридиазол, ипродион, метлаксил, тиамимефон, трифорин или любую их комбинацию; агрохимикат содержит грибковый инокулянт и указанный грибковый инокулянт содержит инокулянт грибов семейства Glomeraceae, инокулянт грибов семейства Claroidoglomeraceae, инокулянт грибов семейства Gigasporaceae, инокулянт грибов семейства Acaulosporaceae, инокулянт грибов семейства Sacculosporaceae, инокулянт грибов семейства Entrophosporaceae, инокулянт грибов семейства Pacidsporaceae, инокулянт грибов семейства Diversisporaceae, инокулянт грибов семейства Paraglomeraceae, инокулянт грибов семейства Archaeosporaceae, инокулянт грибов семейства Geosiphonaceae, инокулянт грибов семейства Ambisporaceae, инокулянт грибов семейства Scutellosporaceae, инокулянт грибов семейства Dentiscultataceae, инокулянт грибов семейства Racocetraceae, инокулянт грибов отдела Basidiomycota, инокулянт грибов отдела Ascomycota, инокулянт грибов отдела Zygomycota или любую их комбинацию; или характеризующиеся тем, что агрохимикат содержит бактериальный инокулянт и указанный бактериальный инокулянт содержит инокулянт бактерий рода Rhizobium, инокулянт бактерий рода Bradyrhizobium, инокулянт бактерий рода Mesorhizobium, инокулянт бактерий рода Aзоrhizobium, инокулянт бактерий рода Allorhizobium, инокулянт бактерий рода Sinorhizobium, инокулянт бактерий рода Kluyvera, инокулянт бактерий рода Azotobacter, инокулянт бактерий рода Pseudomonas, инокулянт бактерий рода Azospirillium, инокулянт бактерий рода Bacillus, инокулянт бактерий рода Streptomyces, инокулянт бактерий рода Paenibacillus, инокулянт бактерий рода Paracoccus, инокулянт бактерий рода Enterobacter, инокулянт бактерий рода Alcaligenes, инокулянт бактерий рода Мусобактерия, инокулянт бактерий рода Trichoderma, инокулянт бактерий рода Gliocladium, инокулянт бактерий рода Glomus, инокулянт бактерий рода Klebsiella или любую их комбинацию.
[00869] Вариант реализации 219 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 32, 61, 62, 166 и 168-170, семя согласно любому из вариантов реализации 167-170 или композиция согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151, 154-165, 168-172, 181-190 и 204-218, характеризующиеся тем, что удобрение содержит жидкое или сухое удобрение.
[00870] Вариант реализации 220 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 32, 61, 62, 166 и 168-170 и 219, семя согласно любому из вариантов реализации 167-170 и 219 или композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151, 154-165, 168-172, 181-190 и 204-219, характеризующиеся тем, что удобрение содержит содержащий микронутриенты материал для удобрения и указанный содержащий микронутриенты материал для удобрения содержит борную кислоту, борат, борную фритту, сулфьфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или любую их комбинацию.
[00871] Вариант реализации 221 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 213-218, характеризующиеся тем, что агрохимикат содержит фунгицид и указанный фунгицид содержит альдиморф, ампропилфос, ампропилфос калий, андоприм, анилазин, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беноданил, беномил, бензамакрил, бензамакрилизобутил, биалафос, бинапакрил, бифенил, битертанол, бластицидин-S, боскалид, бромуконазол, бупиримат, бутиобат, полисульфид кальция, капсимицин, каптафол, каптан, карбендазим, карвон, хинометионат, хлобентиазон, хлорфеназол, хлорнеб, хлорпикрин, хлорталонил, хлозолинат, клозилакон, куфранеб, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, ципрофурам, дебакарб, дихлорофен, диклобутразол, диклофлуанид, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, диметиримол, димероморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-М, динокап, дифениламин, дипиритион, диталимфос, дитианон, додеморф, додин, дразоксолон, эдифенфос, эпоксиконазол, этаконазол, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенапанил, фенаримол, фенбуконазол, фенфурам, фенитропан, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, фентинацетат, фентингидроксид, фербам, феримзон, флуазинам, флуметовер, флуоромид, флухинконазол, флурпримодол, флусилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фосетил-алюминий, фосетил-натрий, фталид, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, фуркарбонил, фурконазол, фурконазол-цис, фурмециклокс, гуазатин, гексахлорбензол, гексаконазол, гимексазол, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иминоктадин альбесилат, иминоктадин триацетат, йодокарб, ипробенфос (ИБФ), ипродион, ирумамицин, изопротиолан, изоваледион, касугамицин, крезоксимметил, медь-содержащие продукты, такие как: гидроксид меди, нафтенат меди, оксихлорид меди, сулфьфат меди, оксид меди, комплекс оксин-медь и Бордосскую смесь, манкоппер, манкозеб, манеб, меферимзон, мепанипирим, мепронил, метконазол, метасульфокарб, метфуроксам, метирам, метомеклам, метсульфовакс, мильдиомицин, миклобутанил, миклозолин, диметилдитиокарбамат никеля, нитроталь-изопропил, нуаримол, офурак, оксадиксил, оксамокарб, оксолиновую кислоту, оксикарбоксим, оксифентиин, паклобутразол, пефуразоат, пенконазол, пенцикурон, фосдифен, пимарицин, пипералин, полиоксин, полиоксорим, пробеназол, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропанозин натрия, пропиконазол, пропинеб, протиоциназол, пиразофос, пирифенокс, пириметанил, пирохилон, пироксифур, хинконазол, хинтозен (PCNB), серу и композиции серы, тебуконазол, теклофталам, текназен, тетциклазис, тетраконазол, тиабендазол, тициофен, тифлузамид, тиофанат-метил, тиоксимид, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триазбутил, триазоксид, трикламид, трициклазол, тридеморф, трифлоксистробин, трифлумизол, трифорин, униконазол, валидамицин А, винклозолин, виниконазол, зариламид, зинеб, зирам и также Dagger G, OK-8705, OK-8801, а-(1,1-диметилэтил)-(3-(2-феноксиэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(2,4-дихлорфенил)-3-фтор-3-пропил-1-Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(2,4-дихлорфенил)-3-метокси-а-метил-1-Н-1,2,4-триазол-1-этанол, а-(5-метил-1,3-диоксан-5-ил)-[3-[[4-(трифторметил)фенил]метилен]-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол, (5RS,6RS)-6-гидрокси-2,2,7,7-тетраметил-5-(1-Н-1,2,4-триазол-1-ил)-3-октанон, (Е)-а-(метоксиимино)-N-метил-2-фенокси-фенилацетамид, 1-изопропил{2-метил-1-[[[1-(4-метилфенил)этил]амино]карбонил]пропил}карбамат, 1-(2,4-дихлорфенил)-2-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)этанон-O-(фенилметил)оксим, 1-(2-метил-1-нафтоленил)-1Н-пиррол-2,5-дион, 1-(3,5-дихлорфенил)-3-(2-пропенил)-2,5-пирролидиндион, 1-[(дийодометил)-сульфонил]-4-метилбензол, 1-[[2-(2,4-дихлорфенил)-1, 3-диоксолан-2-ил]метил]-1-Н-имидазол, 1-[[2-(4-хлорфенил)-3-фенилоксиранил]метил]-1Н-1,2,4-триазол, 1-[1-[2-[(2,4-дихлорфенил)метокси]фенил]-этенил]-1-Н-имидазол, 1-метил-5-нонил-2-(фенилметил)-3-пирролидинол, 2',6'-дибром-2-метил-4'-трифторметокси-4'-трифторметил-1, 3-тиазолкарбоксанилид, 2,2-дихлор-N-[1-(4-хлорфенил)этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид, 2,6-дихлор-5-(метилтио)-4-пиримидинилтиоцианат, 2,6-дихлор-N-(4-трифторметилбензил)бензамид, 2,6-дихлор-N-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бензамид, 2-(2,3,3-трийод-2-пропенил)-2Н-тетразол, 2-[(1-метилэтил)-сульфонил]-5-(трихлорметил)-1,3,4-тиадиазол, 2-[[6-дезокси-4-O-(4-0-метил-(3-D-гликопиранозил)-а-D-глюкопиранозил]-амино]-4-метокси-1-Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил, 2-аминобутан, 2-бром-2-(бромметил)пентандинитрил, 2-хлор-N-(2,3-дигидро-1,1,3-триметил-1-Н-инден-4-ил)-3-пиридинкарбоксамид, 2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)-N-(изотиоцианатометил)ацетамид, 2-фенилфенол (ОРР), 3,4-дихлор-1-[4-(дифторметокси)фенил]пиррол-2,5-дион, 3,5-дихлор-N-[циано[(1-метил-2-пропинил)окси]метил]бензамид, 3-(1,1-диметилпропил-1-оксо-1Н-инден-2-карбонитрил, 3-[2-(4-хлорфенил)-5-этокси-3-изоксазолидинил]пиридин, 4-хлор-2-циано-N,N-диметил-5-(4-метилфенил)-1-Н-имидазол-1-сульфонамид, 4-метилтетразоло[1,5-а]хиназолин-5(4Н)-он, 8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-2-метанамин, 8-гидроксихинолинсульфат, 9Н-ксантен-2-[(фениламино)карбонил]-9-карбоксилгидразид, бис-(1-метилэтил)-3-метил-4-[(3-метилбензоил)окси]-2,5-тиофендикарбоксилат, цис-1-(4-хлорфенил)-2-(1-Н-1,2,4-триазол-1-ил)-циклогептанол, цис-4-[3-[4-(1,1-диметилпропил)фенил-2-метилпропил]-2,6-диметилморфолин гидрохлорид, этил-[(4-хлорфенил)азо]цианоацетат, бикарбонат калия, натриевую соль метантетратиола, метил-1-(2,3-дигидро-2,2-диметил-инден-1-ил)-1-Н-имидазол-5-карбоксилат, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(5-изоксазолилкарбонил)-DL-аланинат, метил-N-(хлорацетил)-N-(2,6-диметилфенил)-DL-аланинат, N-(2,3-дихлор-4-гидроксифенил)-1-метилциклогексанкарбоксамид, N-(2,6-диметил-фенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-фуранил)ацетамид, N-(2,6-диметилфенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-тиенил)ацетамид, N-(2-хлор-4-нитрофенил)-4-метил-3-нитробензолсульфонамид, N-(4-циклогексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(4-гексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(5-хлор-2-метилфенил)-2-метокси-N-(2-оксо-3-оксазолидинил)ацетамид, N-(6-метокси)-3-пиридинил)-циклопропанкарбоксамид, N-[2,2,2-трихлор-1-[(хлорацетил)амино]этил]бензамид, N-[3-хлор-4,5-бис(2-пропинилокси)фенил]-N'-метоксиметанимидамид, N-формил-N-гидрокси-DL-аланин-натриевую соль, 0.0-диэтил-[2-(дипропиламино)-2-оксоэтил]этилфосфорамидотиоат, 0-метил-S-фенил-фенилпропилфосфорамидотиоат, S-метил-1,2,3-бензотиадиазол-7-карботиоат и спиро[2Н]-1-бензопиран-2,1'(3'Н)-изобензофуран]-3'-он, N-трихлорметил)тио-4-циклогексан-1,2-дикарбоксимид, тетраметилтиопероксидикарбоновый диамид, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)-DL-аланинат, 4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксол-4-ил)-1-Н-пиррол-3-карбонитрил или любую их комбинацию.
[00872] Вариант реализации 222 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 213-218 и 221, характеризующиеся тем, что агрохимикат содержит инокулянт бактерий рода Bacillus и указанный инокулянт бактерий рода Bacillus содержит бактерии Bacillus argri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos. Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus sphearicus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatu или любую их комбинацию.
[00873] Вариант реализации 223 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 213-218, 221 и 222, характеризующиеся тем, что агрохимикат содержит гербицид и указанный гербицид содержит 2,4-D, 2,4-DB, ацетохлор, ацифлуорфен, атахлор, аметрин, атразин, аминопиралид, бенефин, бенцепион, бенсулид, бентазон, бромацил, бромоксинил, бутилат, карфентразон, хлоримурон, хлорцепион, клетодим, кломазон, клопиралид, клорансулам, циклоат, DCPA, десмедифам, дикамбу, дихлобенил, диклофоп, диклосулам, дифлуфензопир, диметенамид, дикват, диурон, DSMA, эндоталь, ЕРТС, этальфлуралин, этофумесат, феноксапроп, флуазифоп-Р, флукарбазон, флуфенацет, флуметсулам, флумиклорак, флумиоксазин, флуометурон, флуроксипир, фомесафен, форамцепион, глюфосинат, глифосат, галоцепион, гексазинон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазахин, имазетапир, изоксабен, изоксафлутол, лактофен, линурон, МСРА, МСРВ, мезотрион, метолахлор-s, метрибузин, метцепион, молинат, MSMA, напропамид, напталам, никоцепион, норфлуразол, оризалин, оксадиазон, оксифлуорофен, паракват, пеларгоновую кислоту, пендиметалин, фенмедифам, пиклорам, примицепион, продиамин, прометрин, пронамид, пропанил, процепион, пиразон, пиритиобак, хинклорак, хизалофоп, римцепион, сетоксидим, сидурон, симазин, сульфентразон, сульфометурон, сульфоцепион, тебутиурон, тербацил, тиазопир, тифенцепион, тиобенкарб, тралкоксидим, траилат, триацепион, трибенурон, триклопир, трифлуралин, трифлуцепион или любую их комбинацию.
[00874] Вариант реализации 224 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 32, 61, 62, 166 и 168-170, 219 и 220, семя согласно любому из вариантов реализации 167-170, 219 и 220, композицию согласно любому из вариантов реализации 41-59, 77-151, 154-165, 168-172, 181-190 и 204-220 или состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации и 213-223, характеризующиеся тем, что удобрение содержит сульфат аммония, нитрат аммония, сульфат-нитрат аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, аммиачную воду, безводный аммоний, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, нитрат кальция-аммония, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцинированный известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гашеную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат калия-магния, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, оксид магния, мочевину, мочевиные формальдегиды, мочевиный нитрат аммония, покрытую серой мочевину, покрытую полимером мочевину, изобутилидендимочевину, K2SO4-2MgSO4, каинит, сильвинит, кизерит, соли Эпсома, элементарную серу, известковую глину, земню с устричными раковинами, рыбную муку, шроты, рыбный тук, кровяную муку, фосфатную руду, суперфосфаты, шлак, костную муку, древесный пепел, навоз, пещерное гуано, торфяной мох, компост, песок из карьера, муку из жмыха семян хлопчатника, перьевую муку, крабовую муку, рыбную эмульсию, гумусовую кислоту или любую их комбинацию.
[00875] Вариант реализации 225 представляет собой состав, способ, семя или композицию согласно любому из вариантов реализации 213-224, характеризующиеся тем, что гормон растения содержит гибберелин, ауксин, кинетин или любую их комбинацию.
[00876] Вариант реализации 226 представляет собой способ согласно любому из вариантов реализации 17-22, 25-46, 48-68, 70 и 77-152, 155-166 и 167-225, дополнительно включающий добавление в среду для роста растения субстрат для фермента.
[00877] Вариант реализации 227 представляет собой способ согласно варианту реализации 226, характеризующийся тем, что субстрат содержит триптофан, аденозинмонофосфат, аденозиндифосфат, аденозинтрифосфат (например, аденозин-3-трифосфат), полифосфат, белковую муку, триметафосфат, целлюлозу, метилцеллюлозу, хитин, хитозан, производное целлюлозы, фосфат, жир, воск, фосфолипид, фитиновую кислоту или любую их комбинацию.
[00878] В свете приведенного выше описания можно видеть, что были достигнуты некоторые цели изобретения и получены другие предпочтительные результаты.
[00879] Поскольку в пределах объема настоящего изобретения возможны различные изменения описанных выше ферментов, рекомбинантных организмов, способов и семян, следует понимать, что весь материал, содержащийся в приведенном выше описании, является иллюстративным и не ограничивает настоящее изобретение.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Spogen Biotech Inc.
<120> Способы улучшения здоровья растения с применением свободных
ферментов и микроорганизмов, экспрессирующих ферменты на повышенном уровне
<130> PCTBF/P67366EP
<140> EP17767505.5
<141> 2017-03-16
<150> PCT/US2017/022662
<151> 2017-03-16
<150> US62/309426
<151> 2016-03-16
<160> 147
<170> PatentIn, версия 3.5
<210> 1
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 1
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagaat catatacacc aattgaaaag 60
ttaaacaact tttctgaagc acttggtggg ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggtgg taataagacg agaaagttag agtttctagt tgcggatgca 180
gaggcaaaag gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa ccattgccgt 240
ctaacactgg cagctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta tccttgtatt agaagaaggg 300
cttgaaccag aagagaagcc agactttaac ggaaactatt tcttatatca tttactaggt 360
gctgaaaatg taattgttgt accaaacggg gcagatctta tggaagagat gcataaagta 420
gcgaaagaag ttagtgaaaa aggtaataca ccatatgtca taccagttgg tggatcaaat 480
cctactggtg caatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcaca atcatttgac 540
caaggaattg atttcagtac agtcgtttgc gtaagcggta gcgctggtat gcacgctggt 600
ttaattactg gttttgctgg aacacaaagc cacattcctg taattggaat caacgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat cccgcgtgac gctgttacgt gctttgatga atatgtaggg 780
ccaggatatg cgttaccaac gccggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtataca ggtaaagcgg tagcgggatt aatcgactta 900
attaaaaaag gtacatttaa taaagaagac aacattttat tcgtacattc aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 2
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 2
atgaatttag cgaagtttcc tagaaagaaa tacacagaat catatacgcc aatcgaaaaa 60
ttaaatcact tttctgaagt cctaggagga ccttctattt actttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggcgg aaataaaaca agaaaattag aattccttgt ggcggatgca 180
caggcgaaag gtgtagatac gttaattact gctggtggta ttcagtcaaa tcattgccga 240
ttaacattag cggctgcggt aaaagagaaa atgaaatgca ttcttgtatt agaagaagga 300
cttgaaccag aagaaaaacc agactttaat gggaattact tcttatatca tttattaggt 360
gctgaaaatg taatcgttgt gccaaacgga actgacctta tggatgagat gcaaaaagtg 420
gccaaagaag taactgaaaa agggcataca ccatacgtca ttccagttgg aggatccaat 480
cctaccggtg caatgggata tattgcatgt gcagaggaaa ttatggctca atcgtttgag 540
caagggatag atttcaatgc ggttgtttgt gtaagtggta gcggtggcat gcatgctggt 600
ttgattactg gattttatgg aagacaaaca gggatcccga taatcggaat gaatgtgagc 660
cgcggaaaag ctgaacaaga agaaaaagta tgtaagcttg tgcaagaaac ttcagcgcat 720
gttggtattc caaacagtat tccgcgtgag gctgtgacat gttttgatga atacgttggg 780
ccaggatacg ctttaccaac acctgaaatg gtagaagctg ttcaactttt agcaaaaaca 840
gaaggaattt tactggatcc agtatataca gggaaagcag tagctggact gatcgacata 900
attcgaaaag gtacatttaa gaaagaagat aacatcctat ttgtacattc aggtggttct 960
ccggcgttat atgcgaatac atcactattt tcctaa 996
<210> 3
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 3
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagagt catatacacc aattgaaaaa 60
ttaaacaatt tttctgaagt acttggtggg ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggtgg taataagacg agaaagttag agtttctagt tgcggatgca 180
caggcaaaag gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa ccattgccgt 240
ctaacactgg cagctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta tccttgtatt agaagaaggg 300
cttgaaccag aagagaagcc agactttaac ggaaactatt tcttatatca cttattaggt 360
gctgaaaatg tcattgttgt accaaacgga gcagacctga tggaagaaat gcataaagta 420
gcaaaagaag taagtgaaaa agggaataca ccatatgtaa ttccagttgg tggatcaaac 480
cctacgggcg ctatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcgca atcatttgag 540
caaggaattg atttcagttc agttgtttgt gtaagtggta gcggcggtat gcatgctggt 600
ttaattactg gttttgctgg aacacaaagc cacattcctg taattggaat caacgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat ctcgcgcgac gctgttacgt gctttgatca atatgtagga 780
ccaggctatg cgttaccaac gcaggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtataca ggtaaagcgg tagcgggatt aatcgactta 900
attaaaaaag ggacatttaa taaagaagac aacattttat tcgtacattc aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 4
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 4
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagaat catatacacc aattgaaaag 60
ttaaacaact tttctgaagc acttggtggg ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggtgg taataagacg agaaagttag agtttctagt tgcggatgca 180
gaggcaaaag gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa ccattgccgt 240
ctaacactgg cagctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta tccttgtatt agaagaaggg 300
cttgaaccag aagagaagcc agactttaac ggaaactatt tcttatatca tttactaggt 360
gctgaaaatg taattgttgt accaaacggg gcagatctta tggaagagat gcataaagta 420
gcgaaagaag ttagtgaaaa aggtaataca ccatatgtca taccagttgg tggatcaaat 480
cctactggtg caatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcaca atcatttgac 540
caaggaattg atttcagtac agtcgtttgc gtaagcggta gcgctggtat gcacgctggt 600
ttaattactg gttttgctgg aacacaaagc cacattcctg taattggaat caacgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat cccgcgtgac gctgttacgt gctttgatga atatgtaggg 780
ccaggatatg cgttaccaac gccggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtatgaa ggtaaagcgg tagcgggatt aatcgactta 900
attaaaaaag gtacatttaa taaagaagac aacattttat tcgtacattt aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 5
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 5
atgaatttag cgaagtttcc tagaaagaaa tacacagaat catatacgcc aatcgaaaaa 60
ttaaatcact tttctgaagt cctaggagga ccttctattt actttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggcgg aaataaaaca agaaaattag aattccttgt ggcggatgca 180
caggcgaaag gtgtagatac gttaattact gctggtggta ttcagtcaaa tcattgccga 240
ttaacattag cggctgcggt aaaagagaaa atgaaatgca ttcttgtatt agaagaagga 300
cttgaaccag aagaaaaacc agactttaat gggaattact tcttatatca tttattaggt 360
gctgaaaatg taatcgttgt gccaaacgga actgacctta tggatgagat gcaaaaagtg 420
gccaaagaag taactgaaaa agggcataca ccatacgtca ttccagttgg aggatccaat 480
cctaccggtg caatgggata tattgcatgt gcagaggaaa ttatggctca atcgtttgag 540
caagggatag atttcaatgc ggttgtttgt gtaagtggta gcggtggcat gcatgctggt 600
ttgattactg gattttatgg aagacaaaca gggatcccga taatcggaat gaatgtgagc 660
cgcggaaaag ctgaacaaga agaaaaagta tgtaagcttg tgcaagaaac ttcagcgcat 720
gttggtattc caaacagtat tccgcgtgag gctgtgacat gttttgatga atacgttggg 780
ccaggatacg ctttaccaac acctgaaatg gtagaagctg ttcaactttt agcaaaaaca 840
gaaggaattt tactggatcc agtatatgaa gggaaagcag tagctggact gatcgacata 900
attcgaaaag gtacatttaa gaaagaagat aacatcctat ttgtacattt aggtggttct 960
ccggcgttat atgcgaatac atcactattt tcctaa 996
<210> 6
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 6
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagagt catatacacc aattgaaaaa 60
ttaaacaatt tttctgaagt acttggtggg ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagctggtgg taataagacg agaaagttag agtttctagt tgcggatgca 180
caggcaaaag gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa ccattgccgt 240
ctaacactgg cagctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta tccttgtatt agaagaaggg 300
cttgaaccag aagagaagcc agactttaac ggaaactatt tcttatatca cttattaggt 360
gctgaaaatg tcattgttgt accaaacgga gcagacctga tggaagaaat gcataaagta 420
gcaaaagaag taagtgaaaa agggaataca ccatatgtaa ttccagttgg tggatcaaac 480
cctacgggcg ctatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcgca atcatttgag 540
caaggaattg atttcagttc agttgtttgt gtaagtggta gcggcggtat gcatgctggt 600
ttaattactg gttttgctgg aacacaaagc cacattcctg taattggaat caacgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat ctcgcgcgac gctgttacgt gctttgatca atatgtagga 780
ccaggctatg cgttaccaac gcaggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtatgaa ggtaaagcgg tagcgggatt aatcgactta 900
attaaaaaag ggacatttaa taaagaagac aacattttat tcgtacattt aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 7
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 7
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Ala Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Glu Ala Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met His Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Asn Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Asp Gln Gly Ile Asp Phe Ser Thr Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Ala Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ala Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Pro Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Thr Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Lys Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Ser Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 8
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 8
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn His Phe Ser Glu Val Leu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Ala Lys Gly
50 55 60
Val Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Thr Asp Leu Met Asp Glu Met Gln Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Thr Glu Lys Gly His Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Ile Ala Cys Ala Glu Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Asn Ala Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Tyr Gly Arg
195 200 205
Gln Thr Gly Ile Pro Ile Ile Gly Met Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Cys Lys Leu Val Gln Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Ser Ile Pro Arg Glu Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Thr Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Ile Ile Arg Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Lys Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Ser Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ser
325 330
<210> 9
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 9
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Val Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Ala Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met His Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Asn Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Ser Ser Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ala Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Ser Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Gln Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Gln Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Thr Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Lys Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Ser Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 10
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 10
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Ala Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Glu Ala Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met His Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Asn Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Asp Gln Gly Ile Asp Phe Ser Thr Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Ala Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ala Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Pro Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Glu Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Lys Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Leu Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 11
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 11
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn His Phe Ser Glu Val Leu Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Ala Lys Gly
50 55 60
Val Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Thr Asp Leu Met Asp Glu Met Gln Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Thr Glu Lys Gly His Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Ile Ala Cys Ala Glu Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Asn Ala Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Tyr Gly Arg
195 200 205
Gln Thr Gly Ile Pro Ile Ile Gly Met Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Cys Lys Leu Val Gln Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Ser Ile Pro Arg Glu Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Glu Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Ile Ile Arg Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Lys Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Leu Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ser
325 330
<210> 12
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 12
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Val Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Ala Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Pro Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met His Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Asn Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Ser Ser Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ala Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Ser Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Gln Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Gln Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Glu Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Lys Lys Gly
290 295 300
Thr Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Leu Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 13
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 13
His Glu Asn Asp Gly Gly Gln Arg Phe Gly Val Ile Pro Arg Trp Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val
20 25 30
Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln
35 40 45
Asp Arg Val Ala Leu Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly
50 55 60
Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Tyr
85 90 95
Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly
100 105 110
Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met Gln Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly
115 120 125
Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala
130 135 140
Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu
145 150 155 160
Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn
165 170 175
Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly
180 185 190
Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp Tyr Ala Gly Ile Val Asn Asp Asn
195 200 205
Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp
210 215 220
Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp
225 230 235 240
Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr
245 250 255
Gly Asp Arg
<210> 14
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 14
His Glu Asn Asp Gly Gly Gln Arg Phe Gly Val Ile Pro Arg Trp Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val
20 25 30
Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln
35 40 45
Asp Arg Val Ala Leu Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly
50 55 60
Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Tyr
85 90 95
Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly
100 105 110
Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met Gln Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly
115 120 125
Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala
130 135 140
Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu
145 150 155 160
Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn
165 170 175
Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly
180 185 190
Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp Tyr Ala Gly Ile Val Asn Asp Asn
195 200 205
Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp
210 215 220
Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp
225 230 235 240
Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr
245 250 255
Gly Asp Arg
<210> 15
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 15
His Glu Asn Asp Gly Gly Gln Arg Phe Gly Val Ile Pro Arg Trp Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val
20 25 30
Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln
35 40 45
Asp Arg Val Ala Leu Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly
50 55 60
Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Tyr
85 90 95
Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly
100 105 110
Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly
115 120 125
Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala
130 135 140
Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu
145 150 155 160
Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn
165 170 175
Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly
180 185 190
Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp Tyr Ala Gly Ile Val Asn Asp Asn
195 200 205
Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp
210 215 220
Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp
225 230 235 240
Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr
245 250 255
Gly Asn Arg
<210> 16
<211> 305
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 16
Ala Ser Thr Asn Gln Asn Asp Thr Leu Lys Val Met Thr His Asn Val
1 5 10 15
Tyr Met Leu Ser Thr Asn Leu Tyr Pro Asn Trp Gly Gln Thr Glu Arg
20 25 30
Ala Asp Leu Ile Gly Ala Ala Asp Tyr Ile Lys Asn Gln Asp Val Val
35 40 45
Ile Leu Asn Glu Val Phe Asp Asn Ser Ala Ser Asp Arg Leu Leu Gly
50 55 60
Asn Leu Lys Lys Glu Tyr Pro Asn Gln Thr Ala Val Leu Gly Arg Ser
65 70 75 80
Ser Gly Ser Glu Trp Asp Lys Lys Leu Gly Asn Tyr Ser Ser Ser Thr
85 90 95
Pro Glu Asp Gly Gly Val Ala Ile Val Ser Lys Trp Pro Ile Ala Glu
100 105 110
Lys Ile Gln Tyr Val Phe Ala Lys Gly Cys Gly Pro Asp Asn Leu Ser
115 120 125
Asn Lys Gly Phe Val Tyr Thr Lys Ile Lys Lys Asn Asp Arg Phe Ile
130 135 140
His Val Ile Gly Thr His Leu Gln Ala Glu Asp Ser Met Cys Gly Lys
145 150 155 160
Thr Ser Pro Ala Ser Val Arg Thr Asn Gln Leu Lys Glu Ile Gln Asp
165 170 175
Phe Ile Lys Asn Lys Asn Ile Pro Asn Asn Glu Tyr Val Leu Ile Gly
180 185 190
Gly Asp Met Asn Val Asn Lys Ile Asn Ala Glu Asn Lys Asn Asp Ser
195 200 205
Glu Tyr Thr Ser Met Phe Lys Thr Leu Asn Ala Ser Val Pro Ser Tyr
210 215 220
Thr Gly His Thr Ala Thr Trp Asp Ala Thr Thr Asn Ser Ile Ala Lys
225 230 235 240
Tyr Asn Phe Pro Asp Ser Pro Ala Glu Tyr Leu Asp Tyr Ile Ile Ala
245 250 255
Ser Lys Asp His Ala Asn Pro Ser Tyr Ile Glu Asn Lys Val Leu Gln
260 265 270
Pro Lys Ser Pro Gln Trp Thr Val Thr Ser Trp Phe Gln Lys Tyr Thr
275 280 285
Tyr Asn Asp Tyr Ser Asp His Tyr Pro Val Glu Ala Thr Ile Ser Met
290 295 300
Lys
305
<210> 17
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus cereus
<400> 17
His Glu Asn Asp Gly Gly Ser Lys Ile Lys Ile Val His Arg Trp Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val
20 25 30
Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln
35 40 45
Asp Arg Val Ala Gln Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly
50 55 60
Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Phe
85 90 95
Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly
100 105 110
Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly
115 120 125
Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala
130 135 140
Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu
145 150 155 160
Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn
165 170 175
Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu Glu Trp Ile His Gly
180 185 190
Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp Tyr Ser Gly Ile Val Asn Asp Asn
195 200 205
Thr Lys Asp Trp Phe Val Lys Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp
210 215 220
Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp
225 230 235 240
Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr
245 250 255
Gly Asp Arg
<210> 18
<211> 369
<212> БЕЛОК
<213> Clostridium perfringens
<400> 18
Asp Gly Lys Ile Asp Gly Thr Gly Thr His Ala Met Ile Val Thr Gln
1 5 10 15
Gly Val Ser Ile Leu Glu Asn Asp Leu Ser Lys Asn Glu Pro Glu Ser
20 25 30
Val Arg Lys Asn Leu Glu Ile Leu Lys Glu Asn Met His Glu Leu Gln
35 40 45
Leu Gly Ser Thr Tyr Pro Asp Tyr Asp Lys Asn Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Gln Asp His Phe Trp Asp Pro Asp Thr Asp Asn Asn Phe Ser Lys Asp
65 70 75 80
Asn Ser Trp Tyr Leu Ala Tyr Ser Ile Pro Asp Thr Gly Glu Ser Gln
85 90 95
Ile Arg Lys Phe Ser Ala Leu Ala Arg Tyr Glu Trp Gln Arg Gly Asn
100 105 110
Tyr Lys Gln Ala Thr Phe Tyr Leu Gly Glu Ala Met His Tyr Phe Gly
115 120 125
Asp Ile Asp Thr Pro Tyr His Pro Ala Asn Val Thr Ala Val Asp Ser
130 135 140
Ala Gly His Val Lys Phe Glu Thr Phe Ala Glu Glu Arg Lys Glu Gln
145 150 155 160
Tyr Lys Ile Asn Thr Ala Gly Cys Lys Thr Asn Glu Asp Phe Tyr Ala
165 170 175
Asp Ile Leu Lys Asn Lys Asp Phe Asn Ala Trp Ser Lys Glu Tyr Ala
180 185 190
Arg Gly Phe Ala Lys Thr Gly Lys Ser Ile Tyr Tyr Ser His Ala Ser
195 200 205
Met Ser His Ser Trp Asp Asp Trp Asp Tyr Ala Ala Lys Val Thr Leu
210 215 220
Ala Asn Ser Gln Lys Gly Thr Ala Gly Tyr Ile Tyr Arg Phe Leu His
225 230 235 240
Asp Val Ser Glu Gly Asn Asp Pro Ser Val Gly Lys Asn Val Lys Glu
245 250 255
Leu Val Ala Tyr Ile Ser Thr Ser Gly Glu Lys Asp Ala Gly Thr Asp
260 265 270
Asp Tyr Met Tyr Phe Gly Ile Lys Thr Lys Asp Gly Lys Thr Gln Glu
275 280 285
Trp Glu Met Asp Asn Pro Gly Asn Asp Phe Met Thr Gly Ser Lys Asp
290 295 300
Thr Tyr Thr Phe Lys Leu Lys Asp Glu Asn Leu Lys Ile Asp Asp Ile
305 310 315 320
Gln Asn Met Trp Ile Arg Lys Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Pro Asp Ala
325 330 335
Tyr Lys Pro Glu Asn Ile Lys Ile Ile Ala Asn Gly Lys Val Val Val
340 345 350
Asp Lys Asp Ile Asn Glu Trp Ile Ser Gly Asn Ser Thr Tyr Asn Ile
355 360 365
Lys
<210> 19
<211> 495
<212> БЕЛОК
<213> Streptomyces chromofuscus
<400> 19
Pro Leu Pro Asp Gly Val Leu Leu Trp Thr Arg Val Thr Pro Thr Ala
1 5 10 15
Asp Ala Thr Pro Gly Ser Gly Leu Gly Pro Asp Thr Glu Val Gly Trp
20 25 30
Thr Val Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Asn Val Val Ala Lys Gly Ser
35 40 45
Thr Thr Ala Thr Ala Ala Ser Asp His Thr Val Lys Ala Asp Ile Arg
50 55 60
Gly Leu Ala Pro Ala Thr Asp His Trp Phe Arg Phe Ser Ala Gly Gly
65 70 75 80
Thr Asp Ser Pro Ala Gly Arg Ala Arg Thr Ala Pro Ala Ala Asp Ala
85 90 95
Ala Val Ala Gly Leu Arg Phe Gly Val Val Ser Cys Ala Asn Trp Glu
100 105 110
Ala Gly Tyr Phe Ala Ala Tyr Arg His Leu Ala Ala Arg Gly Asp Leu
115 120 125
Asp Ala Trp Leu His Leu Gly Asp Tyr Ile Tyr Glu Tyr Gly Ala Gly
130 135 140
Glu Tyr Gly Thr Arg Gly Thr Ser Val Arg Ser His Ala Pro Ala His
145 150 155 160
Glu Ile Leu Thr Leu Ala Asp Tyr Arg Val Arg His Gly Arg Tyr Lys
165 170 175
Thr Asp Pro Asp Leu Gln Ala Leu His Ala Ala Ala Pro Val Val Ala
180 185 190
Ile Trp Asp Asp His Glu Ile Ala Asn Asp Thr Trp Ser Gly Gly Ala
195 200 205
Glu Asn His Thr Glu Gly Val Glu Gly Ala Trp Ala Ala Arg Gln Ala
210 215 220
Ala Ala Lys Gln Ala Tyr Phe Glu Trp Met Pro Val Arg Pro Ala Ile
225 230 235 240
Ala Gly Thr Thr Tyr Arg Arg Leu Arg Phe Gly Lys Leu Ala Asp Leu
245 250 255
Ser Leu Leu Asp Leu Arg Ser Phe Arg Ala Gln Gln Val Ser Leu Gly
260 265 270
Asp Gly Asp Val Asp Asp Pro Asp Arg Thr Leu Thr Gly Arg Ala Gln
275 280 285
Leu Asp Trp Leu Lys Ala Gly Leu Lys Ser Ser Asp Thr Thr Trp Arg
290 295 300
Leu Val Gly Asn Ser Val Met Ile Ala Pro Phe Ala Ile Gly Ser Leu
305 310 315 320
Ser Ala Glu Leu Leu Lys Pro Leu Ala Lys Leu Leu Gly Leu Pro Gln
325 330 335
Glu Gly Leu Ala Val Asn Thr Asp Gln Trp Asp Gly Tyr Thr Asp Asp
340 345 350
Arg Arg Glu Leu Leu Ala His Leu Arg Ser Asn Ala Ile Arg Asn Thr
355 360 365
Val Phe Leu Thr Gly Asp Ile His Met Ala Trp Ala Asn Asp Val Pro
370 375 380
Val Asn Ala Gly Thr Tyr Pro Leu Ser Ala Ser Ala Ala Thr Glu Phe
385 390 395 400
Val Val Thr Ser Val Thr Ser Asp Asn Leu Asp Asp Leu Val Lys Val
405 410 415
Pro Glu Gly Thr Val Ser Ala Leu Ala Ser Pro Val Ile Arg Ala Ala
420 425 430
Asn Arg His Val His Trp Val Asp Thr Asp Arg His Gly Tyr Gly Val
435 440 445
Leu Asp Ile Thr Ala Glu Arg Ala Gln Met Asp Tyr Tyr Val Leu Ser
450 455 460
Asp Arg Thr Gln Ala Gly Ala Thr Ala Ser Trp Ser Arg Ser Tyr Arg
465 470 475 480
Thr Arg Ser Gly Thr Gln Arg Val Glu Arg Thr Tyr Asp Pro Glu
485 490 495
<210> 20
<211> 240
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 20
Met Arg Thr Pro Leu Ser Phe Asp Lys Asp Thr Ala Ile Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ser Cys Cys Glu Leu Thr Tyr Glu Gln Tyr Lys Gln Asn Gly Ile Phe
20 25 30
Glu Ile Pro Asp Gly Phe Gln Tyr Val Gln Gly Phe Gln Gly Lys Ala
35 40 45
Ile Gln Thr Thr Glu Trp Phe Gly Phe Ile Leu Glu Ser Glu Asp Thr
50 55 60
Ile Ile Val Ala Phe Arg Gly Thr Gln Thr Asp Pro Asp Trp Ile Ile
65 70 75 80
Asp Ser Leu Val Asn Gln Lys Pro Tyr Pro Tyr Ala Leu Asn Gly Gly
85 90 95
Asn Val His Asn Gly Phe Leu Ser Ile Tyr Glu Ser Cys Arg Asp Ser
100 105 110
Ile Met Asp Met Leu Val Ser Leu Pro Ala His Lys Lys Leu Leu Ala
115 120 125
Thr Gly His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Leu His Ile Leu Asp
130 135 140
Ala Arg Ile Asn Thr Ala Phe Ala Gln Tyr Gly Leu Tyr Ser Phe Ala
145 150 155 160
Ser Pro Lys Val Gly Asp Ile Ala Phe Arg Asn Tyr Tyr Lys Leu Gln
165 170 175
Val Ala Ser Ser Phe Arg Phe Val Asn Leu Phe Asp Val Val Pro Leu
180 185 190
Leu Pro Pro Arg Asn Ile Asn Phe Asn Asp His Asp Trp Glu Tyr Ala
195 200 205
His Val His His Asn Met Thr Phe Thr Lys Asn Thr Lys Ser Ile Thr
210 215 220
Asn Asn His Ser Ile Thr Thr Tyr Lys Thr Cys Leu Thr Ser His Phe
225 230 235 240
<210> 21
<211> 181
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 21
Ala Glu His Asn Pro Val Val Met Val His Gly Ile Gly Gly Ala Ser
1 5 10 15
Phe Asn Phe Ala Gly Ile Lys Ser Tyr Leu Val Ser Gln Gly Trp Ser
20 25 30
Arg Asp Lys Leu Tyr Ala Val Asp Phe Trp Asp Lys Thr Gly Thr Asn
35 40 45
Tyr Asn Asn Gly Pro Val Leu Ser Arg Phe Val Gln Lys Val Leu Asp
50 55 60
Glu Thr Gly Ala Lys Lys Val Asp Ile Val Ala His Ser Met Gly Gly
65 70 75 80
Ala Asn Thr Leu Tyr Tyr Ile Lys Asn Leu Asp Gly Gly Asn Lys Val
85 90 95
Ala Asn Val Val Thr Leu Gly Gly Ala Asn Arg Leu Thr Thr Gly Lys
100 105 110
Ala Leu Pro Gly Thr Asp Pro Asn Gln Lys Ile Leu Tyr Thr Ser Ile
115 120 125
Tyr Ser Ser Ala Asp Met Ile Val Met Asn Tyr Leu Ser Arg Leu Asp
130 135 140
Gly Ala Arg Asn Val Gln Ile His Gly Val Gly His Ile Gly Leu Leu
145 150 155 160
Tyr Ser Ser Gln Val Asn Ser Leu Ile Lys Glu Gly Leu Asn Gly Gly
165 170 175
Gly Gln Asn Thr Asn
180
<210> 22
<211> 309
<212> БЕЛОК
<213> Caldicellulosiruptor saccharolyticus
<400> 22
Lys Asp Leu Glu Gly Val His Arg Asp Ile Leu Leu Lys His Phe Asn
1 5 10 15
Ser Leu Thr Pro Glu Asn Ala Met Lys Phe Glu Asn Ile His Pro Glu
20 25 30
Glu Gln Arg Tyr Asn Phe Glu Glu Val Ala Arg Ile Lys Glu Phe Ala
35 40 45
Ile Lys Asn Asp Met Lys Leu Arg Gly His Thr Phe Val Trp His Asn
50 55 60
Gln Thr Pro Gly Trp Val Phe Leu Asp Lys Asn Gly Glu Glu Ala Ser
65 70 75 80
Lys Glu Leu Val Ile Glu Arg Leu Arg Glu His Ile Lys Thr Leu Cys
85 90 95
Glu Arg Tyr Lys Asp Val Val Tyr Ala Trp Asp Val Val Asn Glu Ala
100 105 110
Val Glu Asp Lys Thr Glu Lys Leu Leu Arg Glu Ser Asn Trp Arg Lys
115 120 125
Ile Ile Gly Asp Asp Tyr Ile Lys Ile Ala Phe Glu Ile Ala Arg Glu
130 135 140
Tyr Ala Gly Asp Ala Lys Leu Phe Tyr Asn Asp Tyr Asn Asn Glu Met
145 150 155 160
Pro Tyr Lys Leu Glu Lys Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Leu Leu Glu
165 170 175
Arg Gly Thr Pro Ile Asp Gly Ile Gly Ile Gln Ala His Trp Asn Ile
180 185 190
Trp Asp Lys Asn Leu Val Ser Asn Leu Lys Lys Ala Ile Glu Val Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Gly Leu Glu Ile His Ile Thr Glu Leu Asp Ile Ser Val
210 215 220
Phe Glu Phe Glu Asp Lys Arg Thr Asp Leu Phe Glu Pro Thr Pro Glu
225 230 235 240
Met Leu Glu Leu Gln Ala Lys Val Tyr Glu Asp Val Phe Ala Val Phe
245 250 255
Arg Glu Tyr Lys Asp Val Ile Thr Ser Val Thr Leu Trp Gly Ile Ser
260 265 270
Asp Arg His Thr Trp Lys Asp Asn Phe Pro Val Lys Gly Arg Lys Asp
275 280 285
Trp Pro Leu Leu Phe Asp Val Asn Gly Lys Pro Lys Glu Ala Leu Tyr
290 295 300
Arg Ile Leu Arg Phe
305
<210> 23
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 23
Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gln Asn Trp Thr Asp Gly Gly Gly Ile Val
1 5 10 15
Asn Ala Val Asn Gly Ser Gly Gly Asn Tyr Ser Val Asn Trp Ser Asn
20 25 30
Thr Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Thr Gly Ser Pro Phe
35 40 45
Arg Thr Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Val Trp Ala Pro Asn Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Ser Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Thr Tyr Lys Gly
85 90 95
Thr Val Lys Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Thr Arg
100 105 110
Tyr Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Asp Arg Thr Thr Phe Thr Gln Tyr
115 120 125
Trp Ser Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Ala Thr Ile
130 135 140
Thr Phe Ser Asn His Val Asn Ala Trp Lys Ser His Gly Met Asn Leu
145 150 155 160
Gly Ser Asn Trp Ala Tyr Gln Val Met Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ser Asn Val Thr Val Trp
180 185
<210> 24
<211> 487
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 24
Ala Thr Ser Thr Thr Ile Ala Lys His Ile Gly Asn Ser Asn Pro Leu
1 5 10 15
Ile Asp His His Leu Gly Ala Asp Pro Val Ala Leu Thr Tyr Asn Gly
20 25 30
Arg Val Tyr Ile Tyr Met Ser Ser Asp Asp Tyr Glu Tyr Asn Ser Asn
35 40 45
Gly Thr Ile Lys Asp Asn Ser Phe Ala Asn Leu Asn Arg Val Phe Val
50 55 60
Ile Ser Ser Ala Asp Met Val Asn Trp Thr Asp His Gly Ala Ile Pro
65 70 75 80
Val Ala Gly Ala Asn Gly Ala Asn Gly Gly Arg Gly Ile Ala Lys Trp
85 90 95
Ala Gly Ala Ser Trp Ala Pro Ser Ile Ala Val Lys Lys Ile Asn Gly
100 105 110
Lys Asp Lys Phe Phe Leu Tyr Phe Ala Asn Ser Gly Gly Gly Ile Gly
115 120 125
Val Leu Thr Ala Asp Ser Pro Ile Gly Pro Trp Thr Asp Pro Ile Gly
130 135 140
Lys Pro Leu Val Thr Pro Ser Thr Pro Gly Met Ser Gly Val Val Trp
145 150 155 160
Leu Phe Asp Pro Ala Val Phe Val Asp Asp Asp Gly Thr Gly Tyr Leu
165 170 175
Tyr Ala Gly Gly Gly Val Pro Gly Val Ser Asn Pro Thr Gln Gly Gln
180 185 190
Trp Ala Asn Pro Lys Thr Ala Arg Val Ile Lys Leu Gly Pro Asp Met
195 200 205
Thr Ser Val Val Gly Ser Ala Ser Thr Ile Asp Ala Pro Phe Met Phe
210 215 220
Glu Asp Ser Gly Leu His Lys Tyr Asn Gly Thr Tyr Tyr Tyr Ser Tyr
225 230 235 240
Cys Ile Asn Phe Gly Gly Thr His Pro Ala Asp Lys Pro Pro Gly Glu
245 250 255
Ile Gly Tyr Met Thr Ser Ser Ser Pro Met Gly Pro Phe Thr Tyr Arg
260 265 270
Gly His Phe Leu Lys Asn Pro Gly Ala Phe Phe Gly Gly Gly Gly Asn
275 280 285
Asn His His Ala Val Phe Asn Phe Lys Asn Glu Trp Tyr Val Val Tyr
290 295 300
His Ala Gln Thr Val Ser Ser Ala Leu Phe Gly Ala Gly Lys Gly Tyr
305 310 315 320
Arg Ser Pro His Ile Asn Lys Leu Val His Asn Ala Asp Gly Ser Ile
325 330 335
Gln Glu Val Ala Ala Asn Tyr Ala Gly Val Thr Gln Ile Ser Asn Leu
340 345 350
Asn Pro Tyr Asn Arg Val Glu Ala Glu Thr Phe Ala Trp Asn Gly Arg
355 360 365
Ile Leu Thr Glu Lys Ser Thr Ala Pro Gly Gly Pro Val Asn Asn Gln
370 375 380
His Val Thr Ser Ile Gln Asn Gly Asp Trp Ile Ala Val Gly Asn Ala
385 390 395 400
Asp Phe Gly Ala Gly Gly Ala Arg Ser Phe Lys Ala Asn Val Ala Ser
405 410 415
Thr Leu Gly Gly Lys Ile Glu Val Arg Leu Asp Ser Ala Asp Gly Lys
420 425 430
Leu Val Gly Thr Leu Asn Val Pro Ser Thr Gly Gly Ala Gln Thr Trp
435 440 445
Arg Glu Ile Glu Thr Ala Val Ser Gly Ala Thr Gly Val His Lys Val
450 455 460
Phe Phe Val Phe Thr Gly Thr Gly Thr Gly Asn Leu Phe Asn Phe Asp
465 470 475 480
Tyr Trp Gln Phe Thr Gln Arg
485
<210> 25
<211> 183
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus stearothermophilus
<400> 25
Ala Thr Asp Tyr Trp Gln Tyr Trp Thr Asp Gly Gly Gly Met Val Asn
1 5 10 15
Ala Val Asn Gly Pro Gly Gly Asn Tyr Ser Val Thr Trp Gln Asn Thr
20 25 30
Gly Asn Phe Val Val Gly Lys Gly Trp Thr Val Gly Ser Pro Asn Arg
35 40 45
Val Ile Asn Tyr Asn Ala Gly Ile Trp Glu Pro Ser Gly Asn Gly Tyr
50 55 60
Leu Thr Leu Tyr Gly Trp Thr Arg Asn Ala Leu Ile Glu Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Val Asp Ser Trp Gly Thr Tyr Arg Pro Thr Gly Asn Tyr Lys Gly Thr
85 90 95
Val Asn Ser Asp Gly Gly Thr Tyr Asp Ile Tyr Thr Thr Met Arg Tyr
100 105 110
Asn Ala Pro Ser Ile Asp Gly Thr Gln Thr Phe Gln Gln Phe Trp Ser
115 120 125
Val Arg Gln Ser Lys Arg Pro Thr Gly Ser Asn Val Ser Ile Thr Phe
130 135 140
Ser Asn His Val Asn Ala Trp Arg Ser Lys Gly Met Asn Leu Gly Ser
145 150 155 160
Ser Trp Ala Tyr Gln Val Leu Ala Thr Glu Gly Tyr Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Arg Ser Asn Val Thr Val Trp
180
<210> 26
<211> 488
<212> БЕЛОК
<213> Caldicellulosiruptor saccharolyticus
<400> 26
Met Glu Arg Arg Lys Ile Met Lys Ile Thr Ile Asn Tyr Gly Lys Arg
1 5 10 15
Leu Gly Lys Ile Asn Lys Phe Trp Ala Lys Cys Val Gly Ser Cys His
20 25 30
Ala Thr Thr Ala Leu Arg Glu Asp Trp Arg Lys Gln Leu Lys Lys Cys
35 40 45
Arg Asp Glu Leu Gly Phe Glu Tyr Ile Arg Phe His Gly Trp Leu Asn
50 55 60
Asp Asp Met Ser Val Cys Phe Arg Asn Asp Asp Gly Leu Leu Ser Phe
65 70 75 80
Ser Phe Phe Asn Ile Asp Ser Ile Ile Asp Phe Leu Leu Glu Ile Gly
85 90 95
Met Lys Pro Phe Ile Glu Leu Ser Phe Met Pro Glu Ala Leu Ala Ser
100 105 110
Gly Thr Lys Thr Val Phe His Tyr Lys Gly Asn Ile Thr Pro Pro Lys
115 120 125
Ser Tyr Glu Glu Trp Gly Gln Leu Ile Glu Glu Leu Ala Arg His Leu
130 135 140
Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Asn Glu Val Arg Glu Trp Phe Phe Glu Val
145 150 155 160
Trp Asn Glu Pro Asn Leu Lys Asp Phe Phe Trp Ala Gly Thr Met Glu
165 170 175
Glu Tyr Phe Lys Leu Tyr Lys Tyr Ala Ala Phe Ala Ile Lys Lys Val
180 185 190
Asp Ser Glu Leu Arg Val Gly Gly Pro Ala Thr Ala Ile Asp Ala Trp
195 200 205
Ile Pro Glu Leu Lys Asp Phe Cys Thr Lys Asn Gly Val Pro Ile Asp
210 215 220
Phe Ile Ser Thr His Gln Tyr Pro Thr Asp Leu Ala Phe Ser Thr Ser
225 230 235 240
Ser Asn Met Glu Glu Ala Met Ala Lys Ala Lys Arg Gly Glu Leu Ala
245 250 255
Glu Arg Val Lys Lys Ala Leu Glu Glu Ala Tyr Pro Leu Pro Val Tyr
260 265 270
Tyr Thr Glu Trp Asn Asn Ser Pro Ser Pro Arg Asp Pro Tyr His Asp
275 280 285
Ile Pro Tyr Asp Ala Ala Phe Ile Val Lys Thr Ile Ile Asp Ile Ile
290 295 300
Asp Leu Pro Leu Gly Cys Tyr Ser Tyr Trp Thr Phe Thr Asp Ile Phe
305 310 315 320
Glu Glu Cys Gly Gln Ser Ser Leu Pro Phe His Gly Gly Phe Gly Leu
325 330 335
Leu Asn Ile His Gly Ile Pro Lys Pro Ser Tyr Arg Ala Phe Gln Ile
340 345 350
Leu Asp Lys Leu Asn Gly Glu Arg Ile Glu Ile Glu Phe Glu Asp Lys
355 360 365
Ser Pro Thr Ile Asp Cys Ile Ala Val Gln Asn Glu Arg Glu Ile Ile
370 375 380
Leu Val Ile Ser Asn His Asn Val Pro Leu Ser Pro Ile Asp Thr Glu
385 390 395 400
Asn Ile Lys Val Val Leu Lys Gly Ile Glu Asn Cys Arg Glu Val Phe
405 410 415
Val Glu Arg Ile Asp Glu Tyr Asn Ala Asn Pro Lys Arg Val Trp Leu
420 425 430
Glu Met Gly Ser Pro Ala Tyr Leu Asn Arg Glu Gln Ile Glu Glu Leu
435 440 445
Ile Lys Ala Ser Glu Leu Lys Lys Glu Lys Val Ser Trp Gly Ile Val
450 455 460
Asn Asn Asn Glu Ile Thr Phe Asp Leu Ser Val Leu Pro His Ser Val
465 470 475 480
Val Ala Val Thr Ile Lys Asn Gly
485
<210> 27
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 27
Met Thr Val Lys Lys Leu Tyr Phe Ile Pro Ala Gly Arg Cys Met Leu
1 5 10 15
Asp His Ser Ser Val Asn Ser Thr Leu Thr Pro Gly Asn Leu Leu Asn
20 25 30
Leu Pro Val Trp Cys Tyr Leu Leu Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ile Leu
35 40 45
Val Asp Thr Gly Met Pro Glu Ile Ala Val Asn Asn Glu Gly Leu Phe
50 55 60
Asn Gly Thr Phe Val Glu Gly Gln Ile Leu Pro Lys Met Thr Glu Glu
65 70 75 80
Asp Arg Ile Ile Thr Ile Leu Lys Arg Ala Gly Tyr Glu Pro Asp Asp
85 90 95
Leu Leu Tyr Ile Ile Ser Ser His Leu His Phe Asp His Ala Gly Gly
100 105 110
Asn Gly Ala Phe Ser Asn Thr Pro Ile Ile Ile Gln Arg Ala Glu Tyr
115 120 125
Glu Ala Ala Gln Tyr Arg Glu Glu Tyr Leu Lys Glu Cys Ile Leu Pro
130 135 140
His Leu Asn Tyr Lys Ile Ile Glu Gly Asp Tyr Glu Val Val Pro Gly
145 150 155 160
Val Arg Leu Leu Tyr Thr Pro Gly His Ser Pro Gly His Gln Ser Leu
165 170 175
Leu Ile Glu Thr Glu Lys Ser Gly Pro Ile Leu Leu Thr Ile Asp Ala
180 185 190
Ser Tyr Thr Lys Glu Asn Phe Glu Asp Glu Val Pro Phe Ala Gly Phe
195 200 205
Asp Ser Glu Leu Ala Leu Ser Ser Ile Lys Arg Leu Lys Glu Val Val
210 215 220
Ala Lys Glu Lys Pro Ile Ile Phe Phe Gly His Asp Ile Glu Gln Glu
225 230 235 240
Lys Gly Cys Lys Val Phe Pro Glu Tyr Ile
245 250
<210> 28
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 28
Met Thr Val Lys Lys Leu Tyr Phe Leu Pro Ala Gly Arg Cys Met Leu
1 5 10 15
Asp His Ser Ser Ile Asn Ser Thr Leu Thr Pro Gly Lys Leu Leu Asp
20 25 30
Leu Pro Val Trp Cys Tyr Leu Leu Glu Thr Thr Glu Gly Pro Ile Leu
35 40 45
Ile Asp Thr Gly Met Pro Glu Ser Ala Val Asp Asn Glu Asn Leu Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Phe Val Glu Gly Gln Ile Phe Pro Lys Met Lys Pro Asp
65 70 75 80
Asp Ser Ile Val Asn Ile Leu Lys Arg Val Gly Tyr Ala Pro Glu Asp
85 90 95
Leu Leu Cys Val Ile Ser Ser His Phe His Phe Asp His Ala Gly Gly
100 105 110
Asn Gly Ser Phe Ser His Thr Pro Ile Ile Val Gln Arg Thr Glu Tyr
115 120 125
Asp Ala Ala Leu His Arg Glu Glu Tyr Leu Lys Glu Cys Ile Leu Pro
130 135 140
Asp Leu Asn Tyr Gln Ile Ile Glu Gly Asp Tyr Glu Val Met Pro Gly
145 150 155 160
Val Gln Leu Leu Tyr Thr Pro Gly His Ser Pro Gly His Gln Ser Ile
165 170 175
Phe Val Glu Thr Glu Lys Ser Gly Pro Val Leu Leu Thr Ile Asp Ala
180 185 190
Ala Tyr Thr Gln Glu Asn Phe Glu Gln Gly Val Pro Phe Ala Gly Phe
195 200 205
Asn Ser Glu Met Ala Ser Gln Ser Ile Asn Arg Leu Lys Glu Ile Val
210 215 220
Leu Asp Glu Lys Pro Ile Ile Phe Phe Gly His Asp Met Glu Gln Glu
225 230 235 240
Lys Arg Cys Lys Thr Phe Pro Glu Phe Leu
245 250
<210> 29
<211> 242
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 29
Ala Gly Leu Asn Lys Asp Gln Lys Arg Arg Ala Glu Gln Leu Thr Ser
1 5 10 15
Ile Phe Glu Asn Gly Thr Thr Glu Ile Gln Tyr Gly Tyr Val Glu Arg
20 25 30
Leu Asp Asp Gly Arg Gly Tyr Thr Cys Gly Arg Ala Gly Phe Thr Thr
35 40 45
Ala Thr Gly Asp Ala Leu Glu Val Val Glu Val Tyr Thr Lys Ala Val
50 55 60
Pro Asn Asn Lys Leu Lys Lys Tyr Leu Pro Glu Leu Arg Arg Leu Ala
65 70 75 80
Lys Glu Glu Ser Asp Asp Thr Ser Asn Leu Lys Gly Phe Ala Ser Ala
85 90 95
Trp Lys Ser Leu Ala Asn Asp Lys Glu Phe Arg Ala Ala Gln Asp Lys
100 105 110
Val Asn Asp His Leu Tyr Tyr Gln Pro Ala Met Lys Arg Ser Asp Asn
115 120 125
Ala Gly Leu Lys Thr Ala Leu Ala Arg Ala Val Met Tyr Asp Thr Val
130 135 140
Ile Gln His Gly Asp Gly Asp Asp Pro Asp Ser Phe Tyr Ala Leu Ile
145 150 155 160
Lys Arg Thr Asn Lys Lys Ala Gly Gly Ser Pro Lys Asp Gly Ile Asp
165 170 175
Glu Lys Lys Trp Leu Asn Lys Phe Leu Asp Val Arg Tyr Asp Asp Leu
180 185 190
Met Asn Pro Ala Asn His Asp Thr Arg Asp Glu Trp Arg Glu Ser Val
195 200 205
Ala Arg Val Asp Val Leu Arg Ser Ile Ala Lys Glu Asn Asn Tyr Asn
210 215 220
Leu Asn Gly Pro Ile His Val Arg Ser Asn Glu Tyr Gly Asn Phe Val
225 230 235 240
Ile Lys
<210> 30
<211> 469
<212> БЕЛОК
<213> Acidothermus cellulolyticus
<400> 30
Met Gly Thr Tyr Pro Ile Arg Ser Val Ser Gly Gly Val Ala Leu Ala
1 5 10 15
Ala Cys Ala Val Leu Thr Met Thr Thr Ala Ala Ala Ala Thr Pro Ile
20 25 30
His Asp Ala Ser Ser Pro His Thr Ile Pro Pro His Ala Arg Leu Tyr
35 40 45
Thr Pro Pro Pro Asp Lys Gly Ala Ile Lys Gln Ile Thr Asp Leu Leu
50 55 60
Lys Ala Arg Asp Val Arg Asp Ala Arg Leu Ile Ala Glu Met Ile Ser
65 70 75 80
Thr Pro Gln Ala Val Trp Phe Thr Gly Gly Thr Pro Asp Gln Val Arg
85 90 95
Arg Asp Val His Arg Val Val Thr Lys Ala Ala Ala His His Ala Ile
100 105 110
Pro Val Leu Val Ala Tyr Asn Ile Pro Phe Arg Asp Cys Ser Gln Tyr
115 120 125
Ser Ala Gly Gly Ala Val Asp Thr Ala Ala Tyr Glu Ala Trp Ile Asp
130 135 140
Gly Phe Ala Ala Gly Ile Gly Asp Lys Arg Ala Ile Val Leu Leu Glu
145 150 155 160
Pro Asp Ser Leu Gly Ile Ile Pro Tyr Asn Thr Asp Ile Asn Gly Asn
165 170 175
Ala Glu Trp Cys Lys Pro Asp Leu Ser Gly Thr Gly Leu Thr Pro Asp
180 185 190
Glu Ala Asn Gln Ala Arg Tyr Asp Gln Leu Asn Tyr Ala Val Asp Ala
195 200 205
Leu Glu Ala His Arg Asn Val Ser Val Tyr Leu Asp Gly Thr His Ser
210 215 220
Gly Trp Leu Gly Val Gly Asp Ile Ala Gln Arg Leu Val Arg Ala Gly
225 230 235 240
Val Gln Arg Ala Gln Gly Phe Phe Val Asn Val Ser Asn Tyr Gln Thr
245 250 255
Thr Glu Arg Gln Ile Lys Tyr Gly Thr Trp Ile Ser Glu Cys Ile Ala
260 265 270
Phe Ala Asn Asp Pro Glu Glu Gly Gly Trp Arg Leu Gly His Tyr Ser
275 280 285
Trp Cys Ala Ser Gln Tyr Tyr Pro Ala Asn Pro Asn Asp Phe Ser Thr
290 295 300
Trp Val Gln Thr Asp Gln Trp Tyr Ala Ser Asn Leu Gly Thr Ala Val
305 310 315 320
Pro Thr Thr His Phe Val Ile Asp Thr Ser Arg Asn Gly Arg Gly Pro
325 330 335
Asn Asp Met Thr Ala Tyr Ala Ala Ala Pro Tyr Asn Gln Pro Ala Ser
340 345 350
Val Ile Ser Ala Leu Gln Gly Gly Ser Trp Cys Asn Pro Pro Gly Arg
355 360 365
Gly Leu Gly Leu Arg Pro Thr Val Asn Thr Gly Val Pro Leu Leu Asp
370 375 380
Ala Tyr Leu Trp Val Lys Ile Pro Gly Glu Ser Asp Gly Gln Cys Asp
385 390 395 400
Ala Ala Gly Gly Ala Arg Ala Trp Asp Tyr Ser Ala Tyr Thr Glu Pro
405 410 415
Gly Trp Pro Thr Asp Pro Ser Gln Gln Ala Leu Phe Asp Pro Leu Trp
420 425 430
Gly Leu Tyr Asp Pro Pro Ala Gly Gln Trp Phe Pro Gln Gln Ala Leu
435 440 445
Gln Leu Ala Gln Leu Ala Val Pro Pro Leu Gln Pro Gln Trp Pro Val
450 455 460
Pro Pro Val His His
465
<210> 31
<211> 459
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 31
Met Ala Pro Ser Val Thr Leu Pro Leu Thr Thr Ala Ile Leu Ala Ile
1 5 10 15
Ala Arg Leu Val Ala Ala Gln Gln Pro Gly Thr Ser Thr Pro Glu Val
20 25 30
His Pro Lys Leu Thr Thr Tyr Lys Cys Thr Lys Ser Gly Gly Cys Val
35 40 45
Ala Gln Asp Thr Ser Val Val Leu Asp Trp Asn Tyr Arg Trp Met His
50 55 60
Asp Ala Asn Tyr Asn Ser Cys Thr Val Asn Gly Gly Val Asn Thr Thr
65 70 75 80
Leu Cys Pro Asp Glu Ala Thr Cys Gly Lys Asn Cys Phe Ile Glu Gly
85 90 95
Val Asp Tyr Ala Ala Ser Gly Val Thr Thr Ser Gly Ser Ser Leu Thr
100 105 110
Met Asn Gln Tyr Met Pro Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Ser Ser Val Ser
115 120 125
Pro Arg Leu Tyr Leu Leu Asp Ser Asp Gly Glu Tyr Val Met Leu Lys
130 135 140
Leu Asn Gly Gln Glu Leu Ser Phe Asp Val Asp Leu Ser Ala Leu Pro
145 150 155 160
Cys Gly Glu Asn Gly Ser Leu Tyr Leu Ser Gln Met Asp Glu Asn Gly
165 170 175
Gly Ala Asn Gln Tyr Asn Thr Ala Gly Ala Asn Tyr Gly Ser Gly Tyr
180 185 190
Cys Asp Ala Gln Cys Pro Val Gln Thr Trp Arg Asn Gly Thr Leu Asn
195 200 205
Thr Ser His Gln Gly Phe Cys Cys Asn Glu Met Asp Ile Leu Glu Gly
210 215 220
Asn Ser Arg Ala Asn Ala Leu Thr Pro His Ser Cys Thr Ala Thr Ala
225 230 235 240
Cys Asp Ser Ala Gly Cys Gly Phe Asn Pro Tyr Gly Ser Gly Tyr Lys
245 250 255
Ser Tyr Tyr Gly Pro Gly Asp Thr Val Asp Thr Ser Lys Thr Phe Thr
260 265 270
Ile Ile Thr Gln Phe Asn Thr Asp Asn Gly Ser Pro Ser Gly Asn Leu
275 280 285
Val Ser Ile Thr Arg Lys Tyr Gln Gln Asn Gly Val Asp Ile Pro Ser
290 295 300
Ala Gln Pro Gly Gly Asp Thr Ile Ser Ser Cys Pro Ser Ala Ser Ala
305 310 315 320
Tyr Gly Gly Leu Ala Thr Met Gly Lys Ala Leu Ser Ser Gly Met Val
325 330 335
Leu Val Phe Ser Ile Trp Asn Asp Asn Ser Gln Tyr Met Asn Trp Leu
340 345 350
Asp Ser Gly Asn Ala Gly Pro Cys Ser Ser Thr Glu Gly Asn Pro Ser
355 360 365
Asn Ile Leu Ala Asn Asn Pro Asn Thr His Val Val Phe Ser Asn Ile
370 375 380
Arg Trp Gly Asp Ile Gly Ser Thr Thr Asn Ser Thr Ala Pro Pro Pro
385 390 395 400
Pro Pro Ala Ser Ser Thr Thr Phe Ser Thr Thr Arg Arg Ser Ser Thr
405 410 415
Thr Ser Ser Ser Pro Ser Cys Thr Gln Thr His Trp Gly Gln Cys Gly
420 425 430
Gly Ile Gly Tyr Ser Gly Cys Lys Thr Cys Thr Ser Gly Thr Thr Cys
435 440 445
Gln Tyr Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu
450 455
<210> 32
<211> 418
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 32
Met Asn Lys Ser Val Ala Pro Leu Leu Leu Ala Ala Ser Ile Leu Tyr
1 5 10 15
Gly Gly Ala Val Ala Gln Gln Thr Val Trp Gly Gln Cys Gly Gly Ile
20 25 30
Gly Trp Ser Gly Pro Thr Asn Cys Ala Pro Gly Ser Ala Cys Ser Thr
35 40 45
Leu Asn Pro Tyr Tyr Ala Gln Cys Ile Pro Gly Ala Thr Thr Ile Thr
50 55 60
Thr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Gly Pro Thr Thr Thr Thr Arg Ala Thr
65 70 75 80
Ser Thr Ser Ser Ser Thr Pro Pro Thr Ser Ser Gly Val Arg Phe Ala
85 90 95
Gly Val Asn Ile Ala Gly Phe Asp Phe Gly Cys Thr Thr Asp Gly Thr
100 105 110
Cys Val Thr Ser Lys Val Tyr Pro Pro Leu Lys Asn Phe Thr Gly Ser
115 120 125
Asn Asn Tyr Pro Asp Gly Ile Gly Gln Met Gln His Phe Val Asn Glu
130 135 140
Asp Gly Met Thr Ile Phe Arg Leu Pro Val Gly Trp Gln Tyr Leu Val
145 150 155 160
Asn Asn Asn Leu Gly Gly Asn Leu Asp Ser Thr Ser Ile Ser Lys Tyr
165 170 175
Asp Gln Leu Val Gln Gly Cys Leu Ser Leu Gly Ala Tyr Cys Ile Val
180 185 190
Asp Ile His Asn Tyr Ala Arg Trp Asn Gly Gly Ile Ile Gly Gln Gly
195 200 205
Gly Pro Thr Asn Ala Gln Phe Thr Ser Leu Trp Ser Gln Leu Ala Ser
210 215 220
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Arg Val Trp Phe Gly Ile Met Asn Glu Pro
225 230 235 240
His Asp Val Asn Ile Asn Thr Trp Ala Ala Thr Val Gln Glu Val Val
245 250 255
Thr Ala Ile Arg Asn Ala Gly Ala Thr Ser Gln Phe Ile Ser Leu Pro
260 265 270
Gly Asn Asp Trp Gln Ser Ala Gly Ala Phe Ile Ser Asp Gly Ser Ala
275 280 285
Ala Ala Leu Ser Gln Val Thr Asn Pro Asp Gly Ser Thr Thr Asn Leu
290 295 300
Ile Phe Asp Val His Lys Tyr Leu Asp Ser Asp Asn Ser Gly Thr His
305 310 315 320
Ala Glu Cys Thr Thr Asn Asn Ile Asp Gly Ala Phe Ser Pro Leu Ala
325 330 335
Thr Trp Leu Arg Gln Asn Asn Arg Gln Ala Ile Leu Thr Glu Thr Gly
340 345 350
Gly Gly Asn Val Gln Ser Cys Ile Gln Asp Met Cys Gln Gln Ile Gln
355 360 365
Tyr Leu Asn Gln Asn Ser Asp Val Tyr Leu Gly Tyr Val Gly Trp Gly
370 375 380
Ala Gly Ser Phe Asp Ser Thr Tyr Val Leu Thr Glu Thr Pro Thr Ser
385 390 395 400
Ser Gly Asn Ser Trp Thr Asp Thr Ser Leu Val Ser Ser Cys Leu Ala
405 410 415
Arg Lys
<210> 33
<211> 344
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 33
Met Ile Gln Lys Leu Ser Asn Leu Leu Val Thr Ala Leu Ala Val Ala
1 5 10 15
Thr Gly Val Val Gly His Gly His Ile Asn Asp Ile Val Ile Asn Gly
20 25 30
Val Trp Tyr Gln Ala Tyr Asp Pro Thr Thr Phe Pro Tyr Glu Ser Asn
35 40 45
Pro Pro Ile Val Val Gly Trp Thr Ala Ala Asp Leu Asp Asn Gly Phe
50 55 60
Val Ser Pro Asp Ala Tyr Gln Asn Pro Asp Ile Ile Cys His Lys Asn
65 70 75 80
Ala Thr Asn Ala Lys Gly His Ala Ser Val Lys Ala Gly Asp Thr Ile
85 90 95
Leu Phe Gln Trp Val Pro Val Pro Trp Pro His Pro Gly Pro Ile Val
100 105 110
Asp Tyr Leu Ala Asn Cys Asn Gly Asp Cys Glu Thr Val Asp Lys Thr
115 120 125
Thr Leu Glu Phe Phe Lys Ile Asp Gly Val Gly Leu Leu Ser Gly Gly
130 135 140
Asp Pro Gly Thr Trp Ala Ser Asp Val Leu Ile Ser Asn Asn Asn Thr
145 150 155 160
Trp Val Val Lys Ile Pro Asp Asn Leu Ala Pro Gly Asn Tyr Val Leu
165 170 175
Arg His Glu Ile Ile Ala Leu His Ser Ala Gly Gln Ala Asn Gly Ala
180 185 190
Gln Asn Tyr Pro Gln Cys Phe Asn Ile Ala Val Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Leu Gln Pro Ser Gly Val Leu Gly Thr Asp Leu Tyr His Ala Thr Asp
210 215 220
Pro Gly Val Leu Ile Asn Ile Tyr Thr Ser Pro Leu Asn Tyr Ile Ile
225 230 235 240
Pro Gly Pro Thr Val Val Ser Gly Leu Pro Thr Ser Val Ala Gln Gly
245 250 255
Ser Ser Ala Ala Thr Ala Thr Ala Ser Ala Thr Val Pro Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Gly Pro Thr Ser Arg Thr Thr Thr Thr Ala Arg Thr Thr Gln Ala
275 280 285
Ser Ser Arg Pro Ser Ser Thr Pro Pro Ala Thr Thr Ser Ala Pro Ala
290 295 300
Gly Gly Pro Thr Gln Thr Leu Tyr Gly Gln Cys Gly Gly Ser Gly Tyr
305 310 315 320
Ser Gly Pro Thr Arg Cys Ala Pro Pro Ala Thr Cys Ser Thr Leu Asn
325 330 335
Pro Tyr Tyr Ala Gln Cys Leu Asn
340
<210> 34
<211> 242
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 34
Met Lys Ala Thr Leu Val Leu Gly Ser Leu Ile Val Gly Ala Val Ser
1 5 10 15
Ala Tyr Lys Ala Thr Thr Thr Arg Tyr Tyr Asp Gly Gln Glu Gly Ala
20 25 30
Cys Gly Cys Gly Ser Ser Ser Gly Ala Phe Pro Trp Gln Leu Gly Ile
35 40 45
Gly Asn Gly Val Tyr Thr Ala Ala Gly Ser Gln Ala Leu Phe Asp Thr
50 55 60
Ala Gly Ala Ser Trp Cys Gly Ala Gly Cys Gly Lys Cys Tyr Gln Leu
65 70 75 80
Thr Ser Thr Gly Gln Ala Pro Cys Ser Ser Cys Gly Thr Gly Gly Ala
85 90 95
Ala Gly Gln Ser Ile Ile Val Met Val Thr Asn Leu Cys Pro Asn Asn
100 105 110
Gly Asn Ala Gln Trp Cys Pro Val Val Gly Gly Thr Asn Gln Tyr Gly
115 120 125
Tyr Ser Tyr His Phe Asp Ile Met Ala Gln Asn Glu Ile Phe Gly Asp
130 135 140
Asn Val Val Val Asp Phe Glu Pro Ile Ala Cys Pro Gly Gln Ala Ala
145 150 155 160
Ser Asp Trp Gly Thr Cys Leu Cys Val Gly Gln Gln Glu Thr Asp Pro
165 170 175
Thr Pro Val Leu Gly Asn Asp Thr Gly Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser
180 185 190
Pro Pro Ala Thr Ser Ser Ser Pro Pro Ser Gly Gly Gly Gln Gln Thr
195 200 205
Leu Tyr Gly Gln Cys Gly Gly Ala Gly Trp Thr Gly Pro Thr Thr Cys
210 215 220
Gln Ala Pro Gly Thr Cys Lys Val Gln Asn Gln Trp Tyr Ser Gln Cys
225 230 235 240
Leu Pro
<210> 35
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 35
Met Lys Ser Cys Ala Ile Leu Ala Ala Leu Gly Cys Leu Ala Gly Ser
1 5 10 15
Val Leu Gly His Gly Gln Val Gln Asn Phe Thr Ile Asn Gly Gln Tyr
20 25 30
Asn Gln Gly Phe Ile Leu Asp Tyr Tyr Tyr Gln Lys Gln Asn Thr Gly
35 40 45
His Phe Pro Asn Val Ala Gly Trp Tyr Ala Glu Asp Leu Asp Leu Gly
50 55 60
Phe Ile Ser Pro Asp Gln Tyr Thr Thr Pro Asp Ile Val Cys His Lys
65 70 75 80
Asn Ala Ala Pro Gly Ala Ile Ser Ala Thr Ala Ala Ala Gly Ser Asn
85 90 95
Ile Val Phe Gln Trp Gly Pro Gly Val Trp Pro His Pro Tyr Gly Pro
100 105 110
Ile Val Thr Tyr Val Val Glu Cys Ser Gly Ser Cys Thr Thr Val Asn
115 120 125
Lys Asn Asn Leu Arg Trp Val Lys Ile Gln Glu Ala Gly Ile Asn Tyr
130 135 140
Asn Thr Gln Val Trp Ala Gln Gln Asp Leu Ile Asn Gln Gly Asn Lys
145 150 155 160
Trp Thr Val Lys Ile Pro Ser Ser Leu Arg Pro Gly Asn Tyr Val Phe
165 170 175
Arg His Glu Leu Leu Ala Ala His Gly Ala Ser Ser Ala Asn Gly Met
180 185 190
Gln Asn Tyr Pro Gln Cys Val Asn Ile Ala Val Thr Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Gly Thr Pro Ala Thr Gln Leu Tyr Lys Pro Thr
210 215 220
Asp Pro Gly Ile Leu Phe Asn Pro Tyr Thr Thr Ile Thr Ser Tyr Thr
225 230 235 240
Ile Pro Gly Pro Ala Leu Trp Gln Gly
245
<210> 36
<211> 234
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 36
Met Lys Phe Leu Gln Val Leu Pro Ala Leu Ile Pro Ala Ala Leu Ala
1 5 10 15
Gln Thr Ser Cys Asp Gln Trp Ala Thr Phe Thr Gly Asn Gly Tyr Thr
20 25 30
Val Ser Asn Asn Leu Trp Gly Ala Ser Ala Gly Ser Gly Phe Gly Cys
35 40 45
Val Thr Ala Val Ser Leu Ser Gly Gly Ala Ser Trp His Ala Asp Trp
50 55 60
Gln Trp Ser Gly Gly Gln Asn Asn Val Lys Ser Tyr Gln Asn Ser Gln
65 70 75 80
Ile Ala Ile Pro Gln Lys Arg Thr Val Asn Ser Ile Ser Ser Met Pro
85 90 95
Thr Thr Ala Ser Trp Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Ile Arg Ala Asn Val
100 105 110
Ala Tyr Asp Leu Phe Thr Ala Ala Asn Pro Asn His Val Thr Tyr Ser
115 120 125
Gly Asp Tyr Glu Leu Met Ile Trp Leu Gly Lys Tyr Gly Asp Ile Gly
130 135 140
Pro Ile Gly Ser Ser Gln Gly Thr Val Asn Val Gly Gly Gln Ser Trp
145 150 155 160
Thr Leu Tyr Tyr Gly Tyr Asn Gly Ala Met Gln Val Tyr Ser Phe Val
165 170 175
Ala Gln Thr Asn Thr Thr Asn Tyr Ser Gly Asp Val Lys Asn Phe Phe
180 185 190
Asn Tyr Leu Arg Asp Asn Lys Gly Tyr Asn Ala Ala Gly Gln Tyr Val
195 200 205
Leu Ser Tyr Gln Phe Gly Thr Glu Pro Phe Thr Gly Ser Gly Thr Leu
210 215 220
Asn Val Ala Ser Trp Thr Ala Ser Ile Asn
225 230
<210> 37
<211> 513
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 37
Met Tyr Arg Lys Leu Ala Val Ile Ser Ala Phe Leu Ala Thr Ala Arg
1 5 10 15
Ala Gln Ser Ala Cys Thr Leu Gln Ser Glu Thr His Pro Pro Leu Thr
20 25 30
Trp Gln Lys Cys Ser Ser Gly Gly Thr Cys Thr Gln Gln Thr Gly Ser
35 40 45
Val Val Ile Asp Ala Asn Trp Arg Trp Thr His Ala Thr Asn Ser Ser
50 55 60
Thr Asn Cys Tyr Asp Gly Asn Thr Trp Ser Ser Thr Leu Cys Pro Asp
65 70 75 80
Asn Glu Thr Cys Ala Lys Asn Cys Cys Leu Asp Gly Ala Ala Tyr Ala
85 90 95
Ser Thr Tyr Gly Val Thr Thr Ser Gly Asn Ser Leu Ser Ile Gly Phe
100 105 110
Val Thr Gln Ser Ala Gln Lys Asn Val Gly Ala Arg Leu Tyr Leu Met
115 120 125
Ala Ser Asp Thr Thr Tyr Gln Glu Phe Thr Leu Leu Gly Asn Glu Phe
130 135 140
Ser Phe Asp Val Asp Val Ser Gln Leu Pro Cys Gly Leu Asn Gly Ala
145 150 155 160
Leu Tyr Phe Val Ser Met Asp Ala Asp Gly Gly Val Ser Lys Tyr Pro
165 170 175
Thr Asn Thr Ala Gly Ala Lys Tyr Gly Thr Gly Tyr Cys Asp Ser Gln
180 185 190
Cys Pro Arg Asp Leu Lys Phe Ile Asn Gly Gln Ala Asn Val Glu Gly
195 200 205
Trp Glu Pro Ser Ser Asn Asn Ala Asn Thr Gly Ile Gly Gly His Gly
210 215 220
Ser Cys Cys Ser Glu Met Asp Ile Trp Glu Ala Asn Ser Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ala Leu Thr Pro His Pro Cys Thr Thr Val Gly Gln Glu Ile Cys Glu
245 250 255
Gly Asp Gly Cys Gly Gly Thr Tyr Ser Asp Asn Arg Tyr Gly Gly Thr
260 265 270
Cys Asp Pro Asp Gly Cys Asp Trp Asn Pro Tyr Arg Leu Gly Asn Thr
275 280 285
Ser Phe Tyr Gly Pro Gly Ser Ser Phe Thr Leu Asp Thr Thr Lys Lys
290 295 300
Leu Thr Val Val Thr Gln Phe Glu Thr Ser Gly Ala Ile Asn Arg Tyr
305 310 315 320
Tyr Val Gln Asn Gly Val Thr Phe Gln Gln Pro Asn Ala Glu Leu Gly
325 330 335
Ser Tyr Ser Gly Asn Glu Leu Asn Asp Asp Tyr Cys Thr Ala Glu Glu
340 345 350
Ala Glu Phe Gly Gly Ser Ser Phe Ser Asp Lys Gly Gly Leu Thr Gln
355 360 365
Phe Lys Lys Ala Thr Ser Gly Gly Met Val Leu Val Met Ser Leu Trp
370 375 380
Asp Asp Tyr Tyr Ala Asn Met Leu Trp Leu Asp Ser Thr Tyr Pro Thr
385 390 395 400
Asn Glu Thr Ser Ser Thr Pro Gly Ala Val Arg Gly Ser Cys Ser Thr
405 410 415
Ser Ser Gly Val Pro Ala Gln Val Glu Ser Gln Ser Pro Asn Ala Lys
420 425 430
Val Thr Phe Ser Asn Ile Lys Phe Gly Pro Ile Gly Ser Thr Gly Asn
435 440 445
Pro Ser Gly Gly Asn Pro Pro Gly Gly Asn Arg Gly Thr Thr Thr Thr
450 455 460
Arg Arg Pro Ala Thr Thr Thr Gly Ser Ser Pro Gly Pro Thr Gln Ser
465 470 475 480
His Tyr Gly Gln Cys Gly Gly Ile Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Val Cys
485 490 495
Ala Ser Gly Thr Thr Cys Gln Val Leu Asn Pro Tyr Tyr Ser Gln Cys
500 505 510
Leu
<210> 38
<211> 471
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 38
Met Ile Val Gly Ile Leu Thr Thr Leu Ala Thr Leu Ala Thr Leu Ala
1 5 10 15
Ala Ser Val Pro Leu Glu Glu Arg Gln Ala Cys Ser Ser Val Trp Gly
20 25 30
Gln Cys Gly Gly Gln Asn Trp Ser Gly Pro Thr Cys Cys Ala Ser Gly
35 40 45
Ser Thr Cys Val Tyr Ser Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu Pro Gly
50 55 60
Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Thr Arg Ala Ala Ser Thr Thr Ser Arg
65 70 75 80
Val Ser Pro Thr Thr Ser Arg Ser Ser Ser Ala Thr Pro Pro Pro Gly
85 90 95
Ser Thr Thr Thr Arg Val Pro Pro Val Gly Ser Gly Thr Ala Thr Tyr
100 105 110
Ser Gly Asn Pro Phe Val Gly Val Thr Pro Trp Ala Asn Ala Tyr Tyr
115 120 125
Ala Ser Glu Val Ser Ser Leu Ala Ile Pro Ser Leu Thr Gly Ala Met
130 135 140
Ala Thr Ala Ala Ala Ala Val Ala Lys Val Pro Ser Phe Met Trp Leu
145 150 155 160
Asp Thr Leu Asp Lys Thr Pro Leu Met Glu Gln Thr Leu Ala Asp Ile
165 170 175
Arg Thr Ala Asn Lys Asn Gly Gly Asn Tyr Ala Gly Gln Phe Val Val
180 185 190
Tyr Asp Leu Pro Asp Arg Asp Cys Ala Ala Leu Ala Ser Asn Gly Glu
195 200 205
Tyr Ser Ile Ala Asp Gly Gly Val Ala Lys Tyr Lys Asn Tyr Ile Asp
210 215 220
Thr Ile Arg Gln Ile Val Val Glu Tyr Ser Asp Ile Arg Thr Leu Leu
225 230 235 240
Val Ile Glu Pro Asp Ser Leu Ala Asn Leu Val Thr Asn Leu Gly Thr
245 250 255
Pro Lys Cys Ala Asn Ala Gln Ser Ala Tyr Leu Glu Cys Ile Asn Tyr
260 265 270
Ala Val Thr Gln Leu Asn Leu Pro Asn Val Ala Met Tyr Leu Asp Ala
275 280 285
Gly His Ala Gly Trp Leu Gly Trp Pro Ala Asn Gln Asp Pro Ala Ala
290 295 300
Gln Leu Phe Ala Asn Val Tyr Lys Asn Ala Ser Ser Pro Arg Ala Leu
305 310 315 320
Arg Gly Leu Ala Thr Asn Val Ala Asn Tyr Asn Gly Trp Asn Ile Thr
325 330 335
Ser Pro Pro Ser Tyr Thr Gln Gly Asn Ala Val Tyr Asn Glu Lys Leu
340 345 350
Tyr Ile His Ala Ile Gly Pro Leu Leu Ala Asn His Gly Trp Ser Asn
355 360 365
Ala Phe Phe Ile Thr Asp Gln Gly Arg Ser Gly Lys Gln Pro Thr Gly
370 375 380
Gln Gln Gln Trp Gly Asp Trp Cys Asn Val Ile Gly Thr Gly Phe Gly
385 390 395 400
Ile Arg Pro Ser Ala Asn Thr Gly Asp Ser Leu Leu Asp Ser Phe Val
405 410 415
Trp Val Lys Pro Gly Gly Glu Cys Asp Gly Thr Ser Asp Ser Ser Ala
420 425 430
Pro Arg Phe Asp Ser His Cys Ala Leu Pro Asp Ala Leu Gln Pro Ala
435 440 445
Pro Gln Ala Gly Ala Trp Phe Gln Ala Tyr Phe Val Gln Leu Leu Thr
450 455 460
Asn Ala Asn Pro Ser Phe Leu
465 470
<210> 39
<211> 744
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 39
Met Arg Tyr Arg Thr Ala Ala Ala Leu Ala Leu Ala Thr Gly Pro Phe
1 5 10 15
Ala Arg Ala Asp Ser His Ser Thr Ser Gly Ala Ser Ala Glu Ala Val
20 25 30
Val Pro Pro Ala Gly Thr Pro Trp Gly Thr Ala Tyr Asp Lys Ala Lys
35 40 45
Ala Ala Leu Ala Lys Leu Asn Leu Gln Asp Lys Val Gly Ile Val Ser
50 55 60
Gly Val Gly Trp Asn Gly Gly Pro Cys Val Gly Asn Thr Ser Pro Ala
65 70 75 80
Ser Lys Ile Ser Tyr Pro Ser Leu Cys Leu Gln Asp Gly Pro Leu Gly
85 90 95
Val Arg Tyr Ser Thr Gly Ser Thr Ala Phe Thr Pro Gly Val Gln Ala
100 105 110
Ala Ser Thr Trp Asp Val Asn Leu Ile Arg Glu Arg Gly Gln Phe Ile
115 120 125
Gly Glu Glu Val Lys Ala Ser Gly Ile His Val Ile Leu Gly Pro Val
130 135 140
Ala Gly Pro Leu Gly Lys Thr Pro Gln Gly Gly Arg Asn Trp Glu Gly
145 150 155 160
Phe Gly Val Asp Pro Tyr Leu Thr Gly Ile Ala Met Gly Gln Thr Ile
165 170 175
Asn Gly Ile Gln Ser Val Gly Val Gln Ala Thr Ala Lys His Tyr Ile
180 185 190
Leu Asn Glu Gln Glu Leu Asn Arg Glu Thr Ile Ser Ser Asn Pro Asp
195 200 205
Asp Arg Thr Leu His Glu Leu Tyr Thr Trp Pro Phe Ala Asp Ala Val
210 215 220
Gln Ala Asn Val Ala Ser Val Met Cys Ser Tyr Asn Lys Val Asn Thr
225 230 235 240
Thr Trp Ala Cys Glu Asp Gln Tyr Thr Leu Gln Thr Val Leu Lys Asp
245 250 255
Gln Leu Gly Phe Pro Gly Tyr Val Met Thr Asp Trp Asn Ala Gln His
260 265 270
Thr Thr Val Gln Ser Ala Asn Ser Gly Leu Asp Met Ser Met Pro Gly
275 280 285
Thr Asp Phe Asn Gly Asn Asn Arg Leu Trp Gly Pro Ala Leu Thr Asn
290 295 300
Ala Val Asn Ser Asn Gln Val Pro Thr Ser Arg Val Asp Asp Met Val
305 310 315 320
Thr Arg Ile Leu Ala Ala Trp Tyr Leu Thr Gly Gln Asp Gln Ala Gly
325 330 335
Tyr Pro Ser Phe Asn Ile Ser Arg Asn Val Gln Gly Asn His Lys Thr
340 345 350
Asn Val Arg Ala Ile Ala Arg Asp Gly Ile Val Leu Leu Lys Asn Asp
355 360 365
Ala Asn Ile Leu Pro Leu Lys Lys Pro Ala Ser Ile Ala Val Val Gly
370 375 380
Ser Ala Ala Ile Ile Gly Asn His Ala Arg Asn Ser Pro Ser Cys Asn
385 390 395 400
Asp Lys Gly Cys Asp Asp Gly Ala Leu Gly Met Gly Trp Gly Ser Gly
405 410 415
Ala Val Asn Tyr Pro Tyr Phe Val Ala Pro Tyr Asp Ala Ile Asn Thr
420 425 430
Arg Ala Ser Ser Gln Gly Thr Gln Val Thr Leu Ser Asn Thr Asp Asn
435 440 445
Thr Ser Ser Gly Ala Ser Ala Ala Arg Gly Lys Asp Val Ala Ile Val
450 455 460
Phe Ile Thr Ala Asp Ser Gly Glu Gly Tyr Ile Thr Val Glu Gly Asn
465 470 475 480
Ala Gly Asp Arg Asn Asn Leu Asp Pro Trp His Asn Gly Asn Ala Leu
485 490 495
Val Gln Ala Val Ala Gly Ala Asn Ser Asn Val Ile Val Val Val His
500 505 510
Ser Val Gly Ala Ile Ile Leu Glu Gln Ile Leu Ala Leu Pro Gln Val
515 520 525
Lys Ala Val Val Trp Ala Gly Leu Pro Ser Gln Glu Ser Gly Asn Ala
530 535 540
Leu Val Asp Val Leu Trp Gly Asp Val Ser Pro Ser Gly Lys Leu Val
545 550 555 560
Tyr Thr Ile Ala Lys Ser Pro Asn Asp Tyr Asn Thr Arg Ile Val Ser
565 570 575
Gly Gly Ser Asp Ser Phe Ser Glu Gly Leu Phe Ile Asp Tyr Lys His
580 585 590
Phe Asp Asp Ala Asn Ile Thr Pro Arg Tyr Glu Phe Gly Tyr Gly Leu
595 600 605
Ser Tyr Thr Lys Phe Asn Tyr Ser Arg Leu Ser Val Leu Ser Thr Ala
610 615 620
Lys Ser Gly Pro Ala Thr Gly Ala Val Val Pro Gly Gly Pro Ser Asp
625 630 635 640
Leu Phe Gln Asn Val Ala Thr Val Thr Val Asp Ile Ala Asn Ser Gly
645 650 655
Gln Val Thr Gly Ala Glu Val Ala Gln Leu Tyr Ile Thr Tyr Pro Ser
660 665 670
Ser Ala Pro Arg Thr Pro Pro Lys Gln Leu Arg Gly Phe Ala Lys Leu
675 680 685
Asn Leu Thr Pro Gly Gln Ser Gly Thr Ala Thr Phe Asn Ile Arg Arg
690 695 700
Arg Asp Leu Ser Tyr Trp Asp Thr Ala Ser Gln Lys Trp Val Val Pro
705 710 715 720
Ser Gly Ser Phe Gly Ile Ser Val Gly Ala Ser Ser Arg Asp Ile Arg
725 730 735
Leu Thr Ser Thr Leu Ser Val Ala
740
<210> 40
<211> 466
<212> БЕЛОК
<213> Trichoderma reesei
<400> 40
Met Leu Pro Lys Asp Phe Gln Trp Gly Phe Ala Thr Ala Ala Tyr Gln
1 5 10 15
Ile Glu Gly Ala Val Asp Gln Asp Gly Arg Gly Pro Ser Ile Trp Asp
20 25 30
Thr Phe Cys Ala Gln Pro Gly Lys Ile Ala Asp Gly Ser Ser Gly Val
35 40 45
Thr Ala Cys Asp Ser Tyr Asn Arg Thr Ala Glu Asp Ile Ala Leu Leu
50 55 60
Lys Ser Leu Gly Ala Lys Ser Tyr Arg Phe Ser Ile Ser Trp Ser Arg
65 70 75 80
Ile Ile Pro Glu Gly Gly Arg Gly Asp Ala Val Asn Gln Ala Gly Ile
85 90 95
Asp His Tyr Val Lys Phe Val Asp Asp Leu Leu Asp Ala Gly Ile Thr
100 105 110
Pro Phe Ile Thr Leu Phe His Trp Asp Leu Pro Glu Gly Leu His Gln
115 120 125
Arg Tyr Gly Gly Leu Leu Asn Arg Thr Glu Phe Pro Leu Asp Phe Glu
130 135 140
Asn Tyr Ala Arg Val Met Phe Arg Ala Leu Pro Lys Val Arg Asn Trp
145 150 155 160
Ile Thr Phe Asn Glu Pro Leu Cys Ser Ala Ile Pro Gly Tyr Gly Ser
165 170 175
Gly Thr Phe Ala Pro Gly Arg Gln Ser Thr Ser Glu Pro Trp Thr Val
180 185 190
Gly His Asn Ile Leu Val Ala His Gly Arg Ala Val Lys Ala Tyr Arg
195 200 205
Asp Asp Phe Lys Pro Ala Ser Gly Asp Gly Gln Ile Gly Ile Val Leu
210 215 220
Asn Gly Asp Phe Thr Tyr Pro Trp Asp Ala Ala Asp Pro Ala Asp Lys
225 230 235 240
Glu Ala Ala Glu Arg Arg Leu Glu Phe Phe Thr Ala Trp Phe Ala Asp
245 250 255
Pro Ile Tyr Leu Gly Asp Tyr Pro Ala Ser Met Arg Lys Gln Leu Gly
260 265 270
Asp Arg Leu Pro Thr Phe Thr Pro Glu Glu Arg Ala Leu Val His Gly
275 280 285
Ser Asn Asp Phe Tyr Gly Met Asn His Tyr Thr Ser Asn Tyr Ile Arg
290 295 300
His Arg Ser Ser Pro Ala Ser Ala Asp Asp Thr Val Gly Asn Val Asp
305 310 315 320
Val Leu Phe Thr Asn Lys Gln Gly Asn Cys Ile Gly Pro Glu Thr Gln
325 330 335
Ser Pro Trp Leu Arg Pro Cys Ala Ala Gly Phe Arg Asp Phe Leu Val
340 345 350
Trp Ile Ser Lys Arg Tyr Gly Tyr Pro Pro Ile Tyr Val Thr Glu Asn
355 360 365
Gly Thr Ser Ile Lys Gly Glu Ser Asp Leu Pro Lys Glu Lys Ile Leu
370 375 380
Glu Asp Asp Phe Arg Val Lys Tyr Tyr Asn Glu Tyr Ile Arg Ala Met
385 390 395 400
Val Thr Ala Val Glu Leu Asp Gly Val Asn Val Lys Gly Tyr Phe Ala
405 410 415
Trp Ser Leu Met Asp Asn Phe Glu Trp Ala Asp Gly Tyr Val Thr Arg
420 425 430
Phe Gly Val Thr Tyr Val Asp Tyr Glu Asn Gly Gln Lys Arg Phe Pro
435 440 445
Lys Lys Ser Ala Lys Ser Leu Lys Pro Leu Phe Asp Glu Leu Ile Ala
450 455 460
Ala Ala
465
<210> 41
<211> 405
<212> БЕЛОК
<213> Aspergillus oryzae
<400> 41
Met Leu Pro Leu Leu Leu Cys Ile Val Pro Tyr Cys Trp Ser Ser Arg
1 5 10 15
Leu Asp Pro Arg Ala Ser Ser Phe Asp Tyr Asn Gly Glu Lys Val Arg
20 25 30
Gly Val Asn Leu Gly Gly Trp Leu Val Leu Glu Pro Trp Ile Thr Pro
35 40 45
Ser Ile Phe Asp Ala Ala Gly Ala Glu Ala Val Asp Glu Trp Ser Leu
50 55 60
Thr Lys Ile Leu Gly Lys Glu Glu Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala His
65 70 75 80
Trp Lys Ser Phe Val Ser Ala Gly Asp Phe Gln Arg Met Ala Asp Ala
85 90 95
Gly Leu Asn His Val Arg Ile Pro Ile Gly Tyr Trp Ala Leu Gly Pro
100 105 110
Leu Glu Gly Asp Pro Tyr Val Asp Gly Gln Leu Glu Tyr Leu Asp Lys
115 120 125
Ala Val Glu Trp Ala Gly Ala Ala Gly Leu Lys Val Leu Ile Asp Leu
130 135 140
His Gly Ala Pro Gly Ser Gln Asn Gly Phe Asp Asn Ser Gly Arg Arg
145 150 155 160
Gly Ala Ile Gln Trp Gln Gln Gly Asp Thr Val Glu Gln Thr Leu Asp
165 170 175
Ala Phe Asp Leu Leu Ala Glu Arg Tyr Leu Gly Ser Asp Thr Val Ala
180 185 190
Ala Ile Glu Ala Ile Asn Glu Pro Asn Ile Pro Gly Gly Val Asp Gln
195 200 205
Gly Lys Leu Gln Glu Tyr Tyr Gly Ser Val Tyr Gly Ile Val Asn Lys
210 215 220
Tyr Asn Ala Gly Thr Ser Val Val Tyr Gly Asp Gly Phe Leu Pro Val
225 230 235 240
Glu Ser Trp Asn Gly Phe Lys Thr Glu Gly Ser Lys Val Val Met Asp
245 250 255
Thr His His Tyr His Met Phe Asp Asn Gly Leu Ile Ala Met Asp Ile
260 265 270
Asp Ser His Ile Asp Ala Val Cys Gln Phe Ala His Gln His Leu Glu
275 280 285
Ala Ser Asp Lys Pro Val Ile Val Gly Glu Trp Thr Gly Ala Val Thr
290 295 300
Asp Cys Ala Lys Tyr Leu Asn Gly Lys Gly Asn Gly Ala Arg Tyr Asp
305 310 315 320
Gly Ser Tyr Ala Ala Asp Lys Ala Ile Gly Asp Cys Ser Ser Leu Ala
325 330 335
Thr Gly Phe Val Ser Lys Leu Ser Asp Glu Glu Arg Ser Asp Met Arg
340 345 350
Arg Phe Ile Glu Ala Gln Leu Asp Ala Phe Glu Leu Lys Ser Gly Trp
355 360 365
Val Phe Trp Thr Trp Lys Thr Glu Gly Ala Pro Gly Trp Asp Met Ser
370 375 380
Asp Leu Leu Glu Ala Gly Val Phe Pro Thr Ser Pro Asp Asp Arg Glu
385 390 395 400
Phe Pro Lys Gln Cys
405
<210> 42
<211> 470
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 42
Ala Gly Thr Lys Thr Pro Val Ala Lys Asn Gly Gln Leu Ser Ile Lys
1 5 10 15
Gly Thr Gln Leu Val Asn Arg Asp Gly Lys Ala Val Gln Leu Lys Gly
20 25 30
Ile Ser Ser His Gly Leu Gln Trp Tyr Gly Glu Tyr Val Asn Lys Asp
35 40 45
Ser Leu Lys Trp Leu Arg Asp Asp Trp Gly Ile Thr Val Phe Arg Ala
50 55 60
Ala Met Tyr Thr Ala Asp Gly Gly Tyr Ile Asp Asn Pro Ser Val Lys
65 70 75 80
Asn Lys Val Lys Glu Ala Val Glu Ala Ala Lys Glu Leu Gly Ile Tyr
85 90 95
Val Ile Ile Asp Trp His Ile Leu Asn Asp Gly Asn Pro Asn Gln Asn
100 105 110
Lys Glu Lys Ala Lys Glu Phe Phe Lys Glu Met Ser Ser Leu Tyr Gly
115 120 125
Asn Thr Pro Asn Val Ile Tyr Glu Ile Ala Asn Glu Pro Asn Gly Asp
130 135 140
Val Asn Trp Lys Arg Asp Ile Lys Pro Tyr Ala Glu Glu Val Ile Ser
145 150 155 160
Val Ile Arg Lys Asn Asp Pro Asp Asn Ile Ile Ile Val Gly Thr Gly
165 170 175
Thr Trp Ser Gln Asp Val Asn Asp Ala Ala Asp Asp Gln Leu Lys Asp
180 185 190
Ala Asn Val Met Tyr Ala Leu His Phe Tyr Ala Gly Thr His Gly Gln
195 200 205
Phe Leu Arg Asp Lys Ala Asn Tyr Ala Leu Ser Lys Gly Ala Pro Ile
210 215 220
Phe Val Thr Glu Trp Gly Thr Ser Asp Ala Ser Gly Asn Gly Gly Val
225 230 235 240
Phe Leu Asp Gln Ser Arg Glu Trp Leu Lys Tyr Leu Asp Ser Lys Thr
245 250 255
Ile Ser Trp Val Asn Trp Asn Leu Ser Asp Lys Gln Glu Ser Ser Ser
260 265 270
Ala Leu Lys Pro Gly Ala Ser Lys Thr Gly Gly Trp Arg Leu Ser Asp
275 280 285
Leu Ser Ala Ser Gly Thr Phe Val Arg Glu Asn Ile Leu Gly Thr Lys
290 295 300
Asp Ser Thr Lys Asp Ile Pro Glu Thr Pro Ser Lys Asp Lys Pro Thr
305 310 315 320
Gln Glu Asn Gly Ile Ser Val Gln Tyr Arg Ala Gly Asp Gly Ser Met
325 330 335
Asn Ser Asn Gln Ile Arg Pro Gln Leu Gln Ile Lys Asn Asn Gly Asn
340 345 350
Thr Thr Val Asp Leu Lys Asp Val Thr Ala Arg Tyr Trp Tyr Lys Ala
355 360 365
Lys Asn Lys Gly Gln Asn Phe Asp Cys Asp Tyr Ala Gln Ile Gly Cys
370 375 380
Gly Asn Val Thr His Lys Phe Val Thr Leu His Lys Pro Lys Gln Gly
385 390 395 400
Ala Asp Thr Tyr Leu Glu Leu Gly Phe Lys Asn Gly Thr Leu Ala Pro
405 410 415
Gly Ala Ser Thr Gly Asn Ile Gln Leu Arg Leu His Asn Asp Asp Trp
420 425 430
Ser Asn Tyr Ala Gln Ser Gly Asp Tyr Ser Phe Phe Lys Ser Asn Thr
435 440 445
Phe Lys Thr Thr Lys Lys Ile Thr Leu Tyr Asp Gln Gly Lys Leu Ile
450 455 460
Trp Gly Thr Glu Pro Asn
465 470
<210> 43
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 43
Gln Thr Gly Gly Ser Phe Phe Asp Pro Phe Asn Gly Tyr Asn Ser Gly
1 5 10 15
Phe Trp Gln Lys Ala Asp Gly Tyr Ser Asn Gly Asn Met Phe Asn Cys
20 25 30
Thr Trp Arg Ala Asn Asn Val Ser Met Thr Ser Leu Gly Glu Met Arg
35 40 45
Leu Ala Leu Thr Ser Pro Ala Tyr Asn Lys Phe Asp Cys Gly Glu Asn
50 55 60
Arg Ser Val Gln Thr Tyr Gly Tyr Gly Leu Tyr Glu Val Arg Met Lys
65 70 75 80
Pro Ala Lys Asn Thr Gly Ile Val Ser Ser Phe Phe Thr Tyr Thr Gly
85 90 95
Pro Thr Asp Gly Thr Pro Trp Asp Glu Ile Asp Ile Glu Phe Leu Gly
100 105 110
Lys Asp Thr Thr Lys Val Gln Phe Asn Tyr Tyr Thr Asn Gly Ala Gly
115 120 125
Asn His Glu Lys Ile Val Asp Leu Gly Phe Asp Ala Ala Asn Ala Tyr
130 135 140
His Thr Tyr Ala Phe Asp Trp Gln Pro Asn Ser Ile Lys Trp Tyr Val
145 150 155 160
Asp Gly Gln Leu Lys His Thr Ala Thr Asn Gln Ile Pro Thr Thr Pro
165 170 175
Gly Lys Ile Met Met Asn Leu Trp Asn Gly Thr Gly Val Asp Glu Trp
180 185 190
Leu Gly Ser Tyr Asn Gly Val Asn Pro Leu Tyr Ala His Tyr Asp Trp
195 200 205
Val Arg Tyr Thr Lys Lys
210
<210> 44
<211> 839
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus circulans
<400> 44
Ala Glu Thr Ala Gly Thr Thr Ile Thr Ser Met Ser Tyr Phe Ser Thr
1 5 10 15
Ala Asp Gly Pro Ile Ile Thr Lys Ser Gly Val Gly Gln Ala Ser Tyr
20 25 30
Gly Phe Val Met Pro Ile Phe Asn Gly Gly Ser Ala Thr Trp Asn Asp
35 40 45
Val Ala Gln Asp Leu Gly Val Lys Val Lys Val Asn Gly Ser Trp Val
50 55 60
Asp Ile Asp Ser Val Ser Ser Phe Val Tyr Asn Gln Asn Trp Gly His
65 70 75 80
Trp Asn Asp Gly Gly Phe Thr Gly Tyr Trp Phe Thr Leu Ser Ala Thr
85 90 95
Thr Glu Ile Gln Leu Tyr Ser Lys Ala Asn Glu Val Thr Leu Glu Tyr
100 105 110
Ser Leu Val Phe Gln Asn Ile Asn Lys Thr Thr Ile Thr Ala Met Thr
115 120 125
Pro Thr Gln Gly Pro Gln Ile Thr Ala Gly Phe Thr Gly Gly Ala Gly
130 135 140
Phe Thr Tyr Pro Ile Phe Asn His Asp Pro Ala Ile Thr Tyr Ala Ala
145 150 155 160
Val Ala Asp Asp Leu Lys Val Tyr Val Lys Pro Val Asn Ser Ser Gln
165 170 175
Trp Ile Asp Ile Asp Asn Asn Ala Ala Ser Gly Trp Ile Tyr Asp Gln
180 185 190
Asn Phe Gly Gln Phe Thr Asp Gly Gly Gly Gly Tyr Trp Phe Asn Val
195 200 205
Thr Glu Ser Ile Asn Val Lys Leu Glu Ser Lys Thr Ser Ser Thr Asn
210 215 220
Ile Val Tyr Thr Ile Ser Phe Asn Glu Pro Val Arg Asn Ser Tyr Val
225 230 235 240
Leu Thr Pro Tyr Glu Gly Thr Thr Phe Thr Ala Asp Ala Ser Gly Ala
245 250 255
Ile Gly Ile Pro Leu Pro Lys Ile Asp Gly Gly Ala Pro Ile Gly Thr
260 265 270
Glu Leu Gly Asn Phe Val Tyr Gln Ile Asn Ile Asn Gly Gln Trp Val
275 280 285
Asp Leu Asp Asn Ser Ser Gln Ser Gly Phe Val Tyr Ser Ala Asn Gly
290 295 300
Tyr Asn Asn Met Ser Ala Ala Asn Gln Trp Gly Tyr Trp Ala Asp His
305 310 315 320
Ile Tyr Gly Leu Trp Phe Gln Pro Ile Gln Val Asp Met Gln Ile Arg
325 330 335
Ile Gly Tyr Pro Leu Asn Gly Gln Ala Gly Gly Ser Val Gly Ser Asn
340 345 350
Phe Val Asn Tyr Thr Leu Ile Gly Asn Pro Asp Ala Pro Arg Pro Asp
355 360 365
Val Asn Asp Gln Glu Asp Ile Pro Ile Gly Thr Pro Asn Asp Ser Ala
370 375 380
Ile Glu Gly Met Asn Leu Ile Trp Gln Asp Glu Phe Asn Gly Thr Ala
385 390 395 400
Leu Asp Gln Ser Lys Trp Asn Tyr Glu Thr Gly Tyr Tyr Leu Asn Asp
405 410 415
Asp Pro Asn Thr Trp Gly Trp Gly Asn Ser Glu Leu Gln His Tyr Thr
420 425 430
Asp Arg Ala Gln Asn Val Phe Val Gln Asp Gly Lys Leu Asn Ile Lys
435 440 445
Ala Leu Asn Glu Pro Lys Ser Phe Pro Gln Asp Pro Ser Arg Tyr Ala
450 455 460
Gln Tyr Ser Ser Gly Lys Ile Asn Thr Lys Asp His Phe Ser Leu Lys
465 470 475 480
Tyr Gly Arg Val Asp Phe Arg Ala Lys Leu Pro Thr Gly Asn Gly Ile
485 490 495
Trp Pro Ala Leu Trp Met Leu Pro Gln Asp Asn Val Tyr Gly Thr Trp
500 505 510
Ala Ser Ser Gly Glu Ile Asp Val Met Glu Ala Lys Gly Arg Leu Pro
515 520 525
Gly Ser Thr Ser Gly Ala Val His Phe Gly Gly Gln Trp Pro Thr Asn
530 535 540
Arg Tyr Leu Ser Gly Glu Tyr His Phe Pro Glu Gly Gln Thr Phe Ala
545 550 555 560
Asn Asp Tyr His Val Tyr Ser Val Val Trp Glu Glu Asp Asn Ile Lys
565 570 575
Trp Tyr Val Asp Gly Lys Phe Phe Phe Lys Val Thr Arg Asp Gln Trp
580 585 590
Tyr Ser Ala Ala Ala Pro Asn Asn Pro Asn Ala Pro Phe Asp Gln Pro
595 600 605
Phe Tyr Leu Ile Met Asn Leu Ala Ile Gly Gly Thr Phe Asp Gly Gly
610 615 620
Arg Thr Pro Asp Pro Ser Asp Ile Pro Ala Thr Met Gln Val Asp Tyr
625 630 635 640
Val Arg Val Tyr Lys Glu Gly Glu Gly Gly Gly Gln Asn Pro Gly Asn
645 650 655
Val Pro Val Thr Gly Val Thr Val Asn Pro Thr Thr Ala Gln Val Glu
660 665 670
Val Gly Gln Ser Val Gln Leu Asn Ala Ser Val Ala Pro Ser Asn Ala
675 680 685
Thr Asn Lys Gln Val Thr Trp Ser Val Ser Gly Ser Ser Ile Ala Ser
690 695 700
Val Ser Pro Asn Gly Leu Val Thr Gly Leu Ala Gln Gly Thr Thr Thr
705 710 715 720
Val Thr Ala Thr Thr Ala Asp Gly Asn Lys Ala Ala Ser Ala Thr Ile
725 730 735
Thr Val Ala Pro Ala Pro Ser Thr Val Ile Val Ile Gly Asp Glu Val
740 745 750
Lys Gly Leu Lys Lys Ile Gly Asp Asp Leu Leu Phe Tyr Val Asn Gly
755 760 765
Ala Thr Phe Ala Asp Leu His Tyr Lys Val Asn Asn Gly Gly Gln Leu
770 775 780
Asn Val Ala Met Ala Pro Thr Gly Asn Gly Asn Tyr Thr Tyr Pro Val
785 790 795 800
His Asn Leu Lys His Gly Asp Thr Val Glu Tyr Phe Phe Thr Tyr Asn
805 810 815
Pro Gly Gln Gly Ala Leu Asp Thr Pro Trp Gln Thr Tyr Val His Gly
820 825 830
Val Thr Gln Gly Thr Pro Glu
835
<210> 45
<211> 644
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus circulans
<400> 45
Ala Gly Thr Thr Val Thr Ser Met Glu Tyr Phe Ser Pro Ala Asp Gly
1 5 10 15
Pro Val Ile Ser Lys Ser Gly Val Gly Lys Ala Ser Tyr Gly Phe Val
20 25 30
Met Pro Lys Phe Asn Gly Gly Ser Ala Thr Trp Asn Asp Val Tyr Ser
35 40 45
Asp Val Gly Val Asn Val Lys Val Gly Asn Asn Trp Val Asp Ile Asp
50 55 60
Gln Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Asn Gln Asn Trp Gly His Trp Ser Asp
65 70 75 80
Gly Gly Phe Asn Gly Tyr Trp Phe Thr Leu Ser Ala Thr Thr Glu Ile
85 90 95
Gln Leu Tyr Ser Lys Ala Asn Gly Val Lys Leu Glu Tyr Gln Leu Val
100 105 110
Phe Gln Asn Ile Asn Lys Thr Thr Ile Thr Ala Met Asn Pro Thr Gln
115 120 125
Gly Pro Gln Ile Thr Ala Ser Phe Thr Gly Gly Ala Gly Phe Thr Tyr
130 135 140
Pro Thr Phe Asn Asn Asp Ser Ala Val Thr Tyr Glu Ala Val Ala Asp
145 150 155 160
Asp Leu Lys Val Tyr Val Lys Pro Val Asn Ser Ser Ser Trp Ile Asp
165 170 175
Ile Asp Asn Asn Ala Ala Ser Gly Trp Ile Tyr Asp His Asn Phe Gly
180 185 190
Gln Phe Thr Asp Gly Gly Gly Gly Tyr Trp Phe Asn Val Thr Glu Ser
195 200 205
Ile Asn Val Lys Leu Glu Ser Lys Thr Ser Ser Ala Asn Leu Val Tyr
210 215 220
Thr Ile Thr Phe Asn Glu Pro Thr Arg Asn Ser Tyr Val Ile Thr Pro
225 230 235 240
Tyr Glu Gly Thr Thr Phe Thr Ala Asp Ala Asn Gly Ser Ile Gly Ile
245 250 255
Pro Leu Pro Lys Ile Asp Gly Gly Ala Pro Ile Ala Lys Glu Leu Gly
260 265 270
Asn Phe Val Tyr Gln Ile Asn Ile Asn Gly Gln Trp Val Asp Leu Ser
275 280 285
Asn Ser Ser Gln Ser Lys Phe Ala Tyr Ser Ala Asn Gly Tyr Asn Asn
290 295 300
Met Ser Asp Ala Asn Gln Trp Gly Tyr Trp Ala Asp Tyr Ile Tyr Gly
305 310 315 320
Leu Trp Phe Gln Pro Ile Gln Glu Asn Met Gln Ile Arg Ile Gly Tyr
325 330 335
Pro Leu Asn Gly Gln Ala Gly Gly Asn Ile Gly Asn Asn Phe Val Asn
340 345 350
Tyr Thr Phe Ile Gly Asn Pro Asn Ala Pro Arg Pro Asp Val Ser Asp
355 360 365
Gln Glu Asp Ile Ser Ile Gly Thr Pro Thr Asp Pro Ala Ile Ala Gly
370 375 380
Met Asn Leu Ile Trp Gln Asp Glu Phe Asn Gly Thr Thr Leu Asp Thr
385 390 395 400
Ser Lys Trp Asn Tyr Glu Thr Gly Tyr Tyr Leu Asn Asn Asp Pro Ala
405 410 415
Thr Trp Gly Trp Gly Asn Ala Glu Leu Gln His Tyr Thr Asn Ser Thr
420 425 430
Gln Asn Val Tyr Val Gln Asp Gly Lys Leu Asn Ile Lys Ala Met Asn
435 440 445
Asp Ser Lys Ser Phe Pro Gln Asp Pro Asn Arg Tyr Ala Gln Tyr Ser
450 455 460
Ser Gly Lys Ile Asn Thr Lys Asp Lys Leu Ser Leu Lys Tyr Gly Arg
465 470 475 480
Val Asp Phe Arg Ala Lys Leu Pro Thr Gly Asp Gly Val Trp Pro Ala
485 490 495
Leu Trp Met Leu Pro Lys Asp Ser Val Tyr Gly Thr Trp Ala Ala Ser
500 505 510
Gly Glu Ile Asp Val Met Glu Ala Arg Gly Arg Leu Pro Gly Ser Val
515 520 525
Ser Gly Thr Ile His Phe Gly Gly Gln Trp Pro Val Asn Gln Ser Ser
530 535 540
Gly Gly Asp Tyr His Phe Pro Glu Gly Gln Thr Phe Ala Asn Asp Tyr
545 550 555 560
His Val Tyr Ser Val Val Trp Glu Glu Asp Asn Ile Lys Trp Tyr Val
565 570 575
Asp Gly Lys Phe Phe Tyr Lys Val Thr Asn Gln Gln Trp Tyr Ser Thr
580 585 590
Ala Ala Pro Asn Asn Pro Asn Ala Pro Phe Asp Glu Pro Phe Tyr Leu
595 600 605
Ile Met Asn Leu Ala Val Gly Gly Asn Phe Asp Gly Gly Arg Thr Pro
610 615 620
Asn Ala Ser Asp Ile Pro Ala Thr Met Gln Val Asp Tyr Val Arg Val
625 630 635 640
Tyr Lys Glu Gln
<210> 46
<211> 442
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 46
Met Phe Gly Tyr Ser Met Val Gln Met Val Arg Ala Asn Ala His Lys
1 5 10 15
Leu Asp Trp Pro Leu Arg Glu Thr Val Leu Gln Leu Tyr Lys Pro Phe
20 25 30
Lys Trp Thr Pro Cys Phe Leu His Lys Phe Phe Glu Thr Lys Leu Gln
35 40 45
Asn Arg Lys Lys Met Ser Val Ile Ile Glu Phe Glu Glu Gly Cys His
50 55 60
Glu Thr Gly Phe Gln Met Ala Gly Glu Val Leu Gln Lys Glu Lys Arg
65 70 75 80
Ser Lys Leu Lys Ser Arg Phe Asn Lys Ile Asn Cys Cys Ser Ala Glu
85 90 95
Val Thr Pro Ser Ala Leu His Ser Leu Leu Ser Glu Cys Ser Asn Ile
100 105 110
Arg Lys Val Tyr Leu Asn Arg Glu Val Lys Ala Leu Leu Asp Thr Ala
115 120 125
Thr Glu Ala Ser His Ala Lys Glu Val Val Arg Asn Gly Gln Thr Leu
130 135 140
Thr Gly Lys Gly Val Thr Val Ala Val Val Asp Thr Gly Ile Tyr Pro
145 150 155 160
His Pro Asp Leu Glu Gly Arg Ile Ile Gly Phe Ala Asp Met Val Asn
165 170 175
Gln Lys Thr Glu Pro Tyr Asp Asp Asn Gly His Gly Thr His Cys Ala
180 185 190
Gly Asp Val Ala Ser Ser Gly Ala Ser Ser Ser Gly Gln Tyr Arg Gly
195 200 205
Pro Ala Pro Glu Ala Asn Leu Ile Gly Val Lys Val Leu Asn Lys Gln
210 215 220
Gly Ser Gly Thr Leu Ala Asp Ile Ile Glu Gly Val Glu Trp Cys Ile
225 230 235 240
Gln Tyr Asn Glu Asp Asn Pro Asp Glu Pro Ile Asp Ile Met Ser Met
245 250 255
Ser Leu Gly Gly Asp Ala Leu Arg Tyr Asp His Glu Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Leu Val Arg Ala Val Glu Glu Ala Trp Ser Ala Gly Ile Val Val Cys
275 280 285
Val Ala Ala Gly Asn Ser Gly Pro Asp Ser Gln Thr Ile Ala Ser Pro
290 295 300
Gly Val Ser Glu Lys Val Ile Thr Val Gly Ala Leu Asp Asp Asn Asn
305 310 315 320
Thr Ala Ser Ser Asp Asp Asp Thr Val Ala Ser Phe Ser Ser Arg Gly
325 330 335
Pro Thr Val Tyr Gly Lys Glu Lys Pro Asp Ile Leu Ala Pro Gly Val
340 345 350
Asn Ile Ile Ser Leu Arg Ser Pro Asn Ser Tyr Ile Asp Lys Leu Gln
355 360 365
Lys Ser Ser Arg Val Gly Ser Gln Tyr Phe Thr Met Ser Gly Thr Ser
370 375 380
Met Ala Thr Pro Ile Cys Ala Gly Ile Ala Ala Leu Ile Leu Gln Gln
385 390 395 400
Asn Pro Asp Leu Thr Pro Asp Glu Val Lys Glu Leu Leu Lys Asn Gly
405 410 415
Thr Asp Lys Trp Lys Asp Glu Asp Pro Asn Ile Tyr Gly Ala Gly Ala
420 425 430
Val Asn Ala Glu Asn Ser Val Pro Gly Gln
435 440
<210> 47
<211> 778
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 47
Ala Pro Ala Ser Ser Lys Thr Ser Ala Asp Leu Glu Lys Ala Glu Val
1 5 10 15
Phe Gly Asp Ile Asp Met Thr Thr Ser Lys Lys Thr Thr Val Ile Val
20 25 30
Glu Leu Lys Glu Lys Ser Leu Ala Glu Ala Lys Glu Ala Gly Glu Ser
35 40 45
Gln Ser Lys Ser Lys Leu Lys Thr Ala Arg Thr Lys Ala Lys Asn Lys
50 55 60
Ala Ile Lys Ala Val Lys Asn Gly Lys Val Asn Arg Glu Tyr Glu Gln
65 70 75 80
Val Phe Ser Gly Phe Ser Met Lys Leu Pro Ala Asn Glu Ile Pro Lys
85 90 95
Leu Leu Ala Val Lys Asp Val Lys Ala Val Tyr Pro Asn Val Thr Tyr
100 105 110
Lys Thr Asp Asn Met Lys Asp Lys Asp Val Thr Ile Ser Glu Asp Ala
115 120 125
Val Ser Pro Gln Met Asp Asp Ser Ala Pro Tyr Ile Gly Ala Asn Asp
130 135 140
Ala Trp Asp Leu Gly Tyr Thr Gly Lys Gly Ile Lys Val Ala Ile Ile
145 150 155 160
Asp Thr Gly Val Glu Tyr Asn His Pro Asp Leu Lys Lys Asn Phe Gly
165 170 175
Gln Tyr Lys Gly Tyr Asp Phe Val Asp Asn Asp Tyr Asp Pro Lys Glu
180 185 190
Thr Pro Thr Gly Asp Pro Arg Gly Glu Ala Thr Asp His Gly Thr His
195 200 205
Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Asn Gly Thr Ile Lys Gly Val Ala Pro
210 215 220
Asp Ala Thr Leu Leu Ala Tyr Arg Val Leu Gly Pro Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Thr Thr Glu Asn Val Ile Ala Gly Val Glu Arg Ala Val Gln Asp Gly
245 250 255
Ala Asp Val Met Asn Leu Ser Leu Gly Asn Ser Leu Asn Asn Pro Asp
260 265 270
Trp Ala Thr Ser Thr Ala Leu Asp Trp Ala Met Ser Glu Gly Val Val
275 280 285
Ala Val Thr Ser Asn Gly Asn Ser Gly Pro Asn Gly Trp Thr Val Gly
290 295 300
Ser Pro Gly Thr Ser Arg Glu Ala Ile Ser Val Gly Ala Thr Gln Leu
305 310 315 320
Pro Leu Asn Glu Tyr Ala Val Thr Phe Gly Ser Tyr Ser Ser Ala Lys
325 330 335
Val Met Gly Tyr Asn Lys Glu Asp Asp Val Lys Ala Leu Asn Asn Lys
340 345 350
Glu Val Glu Leu Val Glu Ala Gly Ile Gly Glu Ala Lys Asp Phe Glu
355 360 365
Gly Lys Asp Leu Thr Gly Lys Val Ala Val Val Lys Arg Gly Ser Ile
370 375 380
Ala Phe Val Asp Lys Ala Asp Asn Ala Lys Lys Ala Gly Ala Ile Gly
385 390 395 400
Met Val Val Tyr Asn Asn Leu Ser Gly Glu Ile Glu Ala Asn Val Pro
405 410 415
Gly Met Ser Val Pro Thr Ile Lys Leu Ser Leu Glu Asp Gly Glu Lys
420 425 430
Leu Val Ser Ala Leu Lys Ala Gly Glu Thr Lys Thr Thr Phe Lys Leu
435 440 445
Thr Val Ser Lys Ala Leu Gly Glu Gln Val Ala Asp Phe Ser Ser Arg
450 455 460
Gly Pro Val Met Asp Thr Trp Met Ile Lys Pro Asp Ile Ser Ala Pro
465 470 475 480
Gly Val Asn Ile Val Ser Thr Ile Pro Thr His Asp Pro Asp His Pro
485 490 495
Tyr Gly Tyr Gly Ser Lys Gln Gly Thr Ser Met Ala Ser Pro His Ile
500 505 510
Ala Gly Ala Val Ala Val Ile Lys Gln Ala Lys Pro Lys Trp Ser Val
515 520 525
Glu Gln Ile Lys Ala Ala Ile Met Asn Thr Ala Val Thr Leu Lys Asp
530 535 540
Ser Asp Gly Glu Val Tyr Pro His Asn Ala Gln Gly Ala Gly Ser Ala
545 550 555 560
Arg Ile Met Asn Ala Ile Lys Ala Asp Ser Leu Val Ser Pro Gly Ser
565 570 575
Tyr Ser Tyr Gly Thr Phe Leu Lys Glu Asn Gly Asn Glu Thr Lys Asn
580 585 590
Glu Thr Phe Thr Ile Glu Asn Gln Ser Ser Ile Arg Lys Ser Tyr Thr
595 600 605
Leu Glu Tyr Ser Phe Asn Gly Ser Gly Ile Ser Thr Ser Gly Thr Ser
610 615 620
Arg Val Val Ile Pro Ala His Gln Thr Gly Lys Ala Thr Ala Lys Val
625 630 635 640
Lys Val Asn Thr Lys Lys Thr Lys Ala Gly Thr Tyr Glu Gly Thr Val
645 650 655
Ile Val Arg Glu Gly Gly Lys Thr Val Ala Lys Val Pro Thr Leu Leu
660 665 670
Ile Val Lys Glu Pro Asp Tyr Pro Arg Val Thr Ser Val Ser Val Ser
675 680 685
Glu Gly Ser Val Gln Gly Thr Tyr Gln Ile Glu Thr Tyr Leu Pro Ala
690 695 700
Gly Ala Glu Glu Leu Ala Phe Leu Val Tyr Asp Ser Asn Leu Asp Phe
705 710 715 720
Ala Gly Gln Ala Gly Ile Tyr Lys Asn Gln Asp Lys Gly Tyr Gln Tyr
725 730 735
Phe Asp Trp Asp Gly Thr Ile Asn Gly Gly Thr Lys Leu Pro Ala Gly
740 745 750
Glu Tyr Tyr Leu Leu Ala Tyr Ala Ala Asn Lys Gly Lys Ser Ser Gln
755 760 765
Val Leu Thr Glu Glu Pro Phe Thr Val Glu
770 775
<210> 48
<211> 373
<212> БЕЛОК
<213> Engyodontium album
<400> 48
Met Met Ala Pro Ala Val Glu Gln Arg Ser Glu Ala Ala Pro Leu Ile
1 5 10 15
Glu Ala Arg Gly Glu Met Val Ala Asn Lys Tyr Ile Val Lys Phe Lys
20 25 30
Glu Gly Ser Ala Leu Ser Ala Leu Asp Ala Ala Met Glu Lys Ile Ser
35 40 45
Gly Lys Pro Asp His Val Tyr Lys Asn Val Phe Ser Gly Phe Ala Ala
50 55 60
Thr Leu Asp Glu Asn Met Val Arg Val Leu Arg Ala His Pro Asp Val
65 70 75 80
Glu Tyr Ile Glu Gln Asp Ala Val Val Thr Ile Asn Ala Ala Gln Thr
85 90 95
Asn Ala Pro Trp Gly Leu Ala Arg Ile Ser Ser Thr Ser Pro Gly Thr
100 105 110
Ser Thr Tyr Tyr Tyr Asp Glu Ser Ala Gly Gln Gly Ser Cys Val Tyr
115 120 125
Val Ile Asp Thr Gly Ile Glu Ala Ser His Pro Glu Phe Glu Gly Arg
130 135 140
Ala Gln Met Val Lys Thr Tyr Tyr Tyr Ser Ser Arg Asp Gly Asn Gly
145 150 155 160
His Gly Thr His Cys Ala Gly Thr Val Gly Ser Arg Thr Tyr Gly Val
165 170 175
Ala Lys Lys Thr Gln Leu Phe Gly Val Lys Val Leu Asp Asp Asn Gly
180 185 190
Ser Gly Gln Tyr Ser Thr Ile Ile Ala Gly Met Asp Phe Val Ala Ser
195 200 205
Asp Lys Asn Asn Arg Asn Cys Pro Lys Gly Val Val Ala Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ser Val Asn Ser Ala Ala Ala Arg Leu
225 230 235 240
Gln Ser Ser Gly Val Met Val Ala Val Ala Ala Gly Asn Asn Asn Ala
245 250 255
Asp Ala Arg Asn Tyr Ser Pro Ala Ser Glu Pro Ser Val Cys Thr Val
260 265 270
Gly Ala Ser Asp Arg Tyr Asp Arg Arg Ser Ser Phe Ser Asn Tyr Gly
275 280 285
Ser Val Leu Asp Ile Phe Gly Pro Gly Thr Ser Ile Leu Ser Thr Trp
290 295 300
Ile Gly Gly Ser Thr Arg Ser Ile Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro
305 310 315 320
His Val Ala Gly Leu Ala Ala Tyr Leu Met Thr Leu Gly Lys Thr Thr
325 330 335
Ala Ala Ser Ala Cys Arg Tyr Ile Ala Asp Thr Ala Asn Lys Gly Asp
340 345 350
Leu Ser Asn Ile Pro Phe Gly Thr Val Asn Leu Leu Ala Tyr Asn Asn
355 360 365
Tyr Gln Ala Val Asp
370
<210> 49
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 49
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala
20
<210> 50
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 50
Met Lys Gly Lys Leu Leu Lys Gly Val Leu Ser Leu Gly Val Gly Leu
1 5 10 15
Gly Ala Leu Tyr Ser Gly Thr Ser Ala Gln Ala Glu
20 25
<210> 51
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus cereus
<400> 51
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Val Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala
20
<210> 52
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Clostridium perfringens
<400> 52
Met Lys Arg Lys Ile Cys Lys Ala Leu Ile Cys Ala Thr Leu Ala Thr
1 5 10 15
Ser Leu Trp Ala Gly Ala Ser Thr Lys Val Tyr Ala Trp
20 25
<210> 53
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Streptomyces chromofuscus
<400> 53
Met Leu Ala Gly Pro Leu Ala Ala Ala Leu Pro Ala Arg Ala Thr Thr
1 5 10 15
Gly Thr Pro Ala Phe Leu His Gly Val Ala Ser Gly Asp
20 25
<210> 54
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 54
Met Lys Phe Val Lys Arg Arg Ile Ile Ala Leu Val Thr Ile Leu Met
1 5 10 15
Leu Ser Val Thr Ser Leu Phe Ala Leu Gln Pro Ser Ala Lys Ala
20 25 30
<210> 55
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Caldicellulosiruptor saccharolyticus
<400> 55
Met Cys Glu Asn Leu Glu Met Leu Asn Leu Ser Leu Ala Lys Thr Tyr
1 5 10 15
Lys Asp Tyr Phe Lys Ile Gly Ala Ala Val Thr Ala
20 25
<210> 56
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 56
Met Phe Lys Phe Lys Lys Asn Phe Leu Val Gly Leu Ser Ala Ala Leu
1 5 10 15
Met Ser Ile Ser Leu Phe Ser Ala Thr Ala Ser Ala
20 25
<210> 57
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 57
Met Arg Lys Lys Cys Ser Val Cys Leu Trp Ile Leu Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Cys Leu Ser Gly Lys Ser Ala Tyr Ala
20 25
<210> 58
<211> 27
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus stearothermophilus
<400> 58
Met Lys Leu Lys Lys Lys Met Leu Thr Leu Leu Leu Thr Ala Ser Met
1 5 10 15
Ser Phe Gly Leu Phe Gly Ala Thr Ser Ser Ala
20 25
<210> 59
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 59
Met Lys Ile Ser Met Gln Lys Ala Asp Phe Trp Lys Lys Ala Ala Ile
1 5 10 15
Ser Leu Leu Val Phe Thr Met Phe Phe Thr Leu Met Met Ser Glu Thr
20 25 30
Val Phe Ala
35
<210> 60
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 60
Met Lys Arg Ser Ile Ser Ile Phe Ile Thr Cys Leu Leu Ile Thr Leu
1 5 10 15
Leu Thr Met Gly Gly Met Ile Ala Ser Pro Ala Ser Ala
20 25
<210> 61
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 61
Met Pro Tyr Leu Lys Arg Val Leu Leu Leu Leu Val Thr Gly Leu Phe
1 5 10 15
Met Ser Leu Phe Ala Val Thr Ala Thr Ala Ser Ala
20 25
<210> 62
<211> 38
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus circulans
<400> 62
Met Lys Arg Ser Gln Thr Ser Glu Lys Arg Tyr Arg Gln Arg Val Leu
1 5 10 15
Ser Leu Phe Leu Ala Val Val Met Leu Ala Ser Ile Gly Leu Leu Pro
20 25 30
Thr Ser Lys Val Gln Ala
35
<210> 63
<211> 38
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus circulans
<400> 63
Met Lys Pro Ser His Phe Thr Glu Lys Arg Phe Met Lys Lys Val Leu
1 5 10 15
Gly Leu Phe Leu Val Val Val Met Leu Ala Ser Val Gly Val Leu Pro
20 25 30
Thr Ser Lys Val Gln Ala
35
<210> 64
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 64
Met Lys Lys Gly Ile Ile Arg Phe Leu Leu Val Ser Phe Val Leu Phe
1 5 10 15
Phe Ala Leu Ser Thr Gly Ile Thr Gly Val Gln Ala
20 25
<210> 65
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 65
Met Lys Lys Phe Pro Lys Lys Leu Leu Pro Ile Ala Val Leu Ser Ser
1 5 10 15
Ile Ala Phe Ser Ser Leu Ala Ser Gly Ser Val Pro Glu Ala Ser Ala
20 25 30
<210> 66
<211> 41
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 66
Met Lys Lys Met Ser Leu Phe Gln Asn Met Lys Ser Lys Leu Leu Pro
1 5 10 15
Ile Ala Ala Val Ser Val Leu Thr Ala Gly Ile Phe Ala Gly Ala Glu
20 25 30
Leu Gln Gln Thr Glu Lys Ala Ser Ala
35 40
<210> 67
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 67
Met Lys Val Pro Lys Thr Met Leu Leu Ser Thr Ala Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Ala Thr Ser Val Ser Ala
20 25
<210> 68
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 68
Met Lys Lys Ile Met Ser Ala Phe Val Gly Met Val Leu Leu Thr Ile
1 5 10 15
Phe Cys Phe Ser Pro Gln Ala Ser Ala
20 25
<210> 69
<211> 46
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 69
Met Pro Leu Asn Ile Ser Phe Ile Leu Lys Gly Glu Met Ala Met Arg
1 5 10 15
Ser Gln Lys Phe Thr Leu Leu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Phe Leu Pro
20 25 30
Leu Phe Leu Thr Asn Phe Ile Thr Pro Asn Leu Ala Leu Ala
35 40 45
<210> 70
<211> 27
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 70
Met Leu Asn Lys Phe Lys Phe Phe Cys Cys Ile Leu Val Met Phe Leu
1 5 10 15
Leu Leu Pro Leu Ser Pro Phe Gln Thr Gln Ala
20 25
<210> 71
<211> 43
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 71
Met Asn Lys Ile Ile His Leu Asp Asn Phe Leu Tyr Arg Ser Val Asn
1 5 10 15
Met Leu Asn Lys Phe Lys Phe Phe Cys Cys Ile Leu Val Met Phe Leu
20 25 30
Leu Leu Pro Leu Ser Pro Phe Gln Thr Gln Ala
35 40
<210> 72
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus pseudomycoides
<400> 72
Met Glu Tyr Lys Pro Leu Ile Met Gly Tyr Leu His Thr Trp Ser Lys
1 5 10 15
Gly Phe Ile Gly Gly Tyr Glu
20
<210> 73
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 73
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala His
20 25
<210> 74
<211> 207
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus subtilis
<400> 74
Ala Tyr Asp Asp Leu His Glu Gly Tyr Ala Thr Tyr Thr Gly Ser Gly
1 5 10 15
Tyr Ser Gly Gly Ala Phe Leu Leu Asp Pro Ile Pro Ser Asp Met Glu
20 25 30
Ile Thr Ala Ile Asn Pro Ala Asp Leu Asn Tyr Gly Gly Val Lys Ala
35 40 45
Ala Leu Ala Gly Ser Tyr Leu Glu Val Glu Gly Pro Lys Gly Lys Thr
50 55 60
Thr Val Tyr Val Thr Asp Leu Tyr Pro Glu Gly Ala Arg Gly Ala Leu
65 70 75 80
Asp Leu Ser Pro Asn Ala Phe Arg Lys Ile Gly Asn Met Lys Asp Gly
85 90 95
Lys Ile Asn Ile Lys Trp Arg Val Val Lys Ala Pro Ile Thr Gly Asn
100 105 110
Phe Thr Tyr Arg Ile Lys Glu Gly Ser Ser Arg Trp Trp Ala Ala Ile
115 120 125
Gln Val Arg Asn His Lys Tyr Pro Val Met Lys Met Glu Tyr Glu Lys
130 135 140
Asp Gly Lys Trp Ile Asn Met Glu Lys Met Asp Tyr Asn His Phe Val
145 150 155 160
Ser Thr Asn Leu Gly Thr Gly Ser Leu Lys Val Arg Met Thr Asp Ile
165 170 175
Arg Gly Lys Val Val Lys Asp Thr Ile Pro Lys Leu Pro Glu Ser Gly
180 185 190
Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Val Pro Gly His Val Gln Phe Pro Glu
195 200 205
<210> 75
<211> 711
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(21)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 75
ggagcacgcc gcgtgagtgn ngaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttagggaaga 60
acaagtgcta gttgaataag ctggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg 180
taaagcgcgc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag 240
ggtcattgga aactgggaga cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc atgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatatg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct ggtctgtaac 360
tgacactgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctga agttaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggccgc aaggctgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgaaaact ctagagatag agcttctcct tcgggagcag agtgacaggt 660
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg c 711
<210> 76
<211> 719
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (630)..(630)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (640)..(642)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 76
aaagtctgac ggagcacgcc gcgtgagtga tgaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg 60
ttagggaaga acaagtgcta gttgaataag ctggcacctt gacggtacct aaccagaaag 120
ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa 180
ttattgggcg taaagcgcgc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc 240
aaccgtggag ggtcattgga aactgggaga cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc 300
atgtgtagcg gtgaaatgcg tagagatatg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct 360
ggtctgtaac tgacactgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg 420
tagtccacgc cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctga 480
agttaacgca ttaagcactc cgcctgggga gtacggccgc aaggctgaaa ctcaaaggaa 540
ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac 600
cttaccaggt cttgacatcc tctgaaaacn ctagagatan nncttctcct tcgggagcag 660
agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtccc 719
<210> 77
<211> 709
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<400> 77
ggagcacgcc gcgtgagtga tgaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttagggaaga 60
acaagtgcta gttgaataag ctggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg 180
taaagcgcgc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag 240
ggtcattgga aactgggaga cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc atgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatatg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct ggtctgtaac 360
tgacactgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctga agttaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggccgc aaggctgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgacaacc ctagagatag ggcttcccct tcgggggcag agtgacaggt 660
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtccc 709
<210> 78
<211> 713
<212> ДНК
<213> Bacillus cereus
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (697)..(697)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 78
ggancaacgc cgcgtgagtg angaaggctt tcgggtcgta aaactctgtt gttagggaag 60
aacaagtgct agttgaataa gctggcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta 120
actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttatccgga attattgggc 180
gtaaagcgcg cgcaggtggt ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccacggct caaccgtgga 240
gggtcattgg aaactgggag acttgagtgc agaagaggaa agtggaattc catgtgtagc 300
ggtgaaatgc gtagagatat ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactttc tggtctgtaa 360
ctgacactga ggcgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 420
ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagagg gtttccgccc tttagtgctg aagttaacgc 480
attaagcact ccgcctgggg agtacggccg caaggctgaa actcaaagga attgacgggg 540
gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 600
tcttgacatc ctctgaaaac tctagagata gagcttctcc ttcgggagca gagtgacagg 660
tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgntgg gttaagtccc gca 713
<210> 79
<211> 686
<212> ДНК
<213> Bacillus cereus
<400> 79
aaggctttcg ggtcgtaaaa ctctgttgtt agggaagaac aagtgctagt tgaataagct 60
ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta 120
atacgtaggt ggcaagcgtt atccggaatt attgggcgta aagcgcgcgc aggtggtttc 180
ttaagtctga tgtgaaagcc cacggctcaa ccgtggaggg tcattggaaa ctgggagact 240
tgagtgcaga agaggaaagt ggaattccat gtgtagcggt gaaatgcgta gagatatgga 300
ggaacaccag tggcgaaggc gactttctgg tctgtaactg acactgaggc gcgaaagcgt 360
ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg 420
ttagagggtt tccgcccttt agtgctgaag ttaacgcatt aagcactccg cctggggagt 480
acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg 540
tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgacatcctc tgaaaaccct 600
agagataggg cttctccttc gggagcagag tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc 660
gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcc 686
<210> 80
<211> 717
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 80
gtctgangga ncacgccgcg tgagtgatga aggctttcgg gtcgtaaaac tctgttgtta 60
gggaagaaca agtgctagtt gaataagctg gcaccttgac ggtacctaac cagaaagcca 120
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta tccggaatta 180
ttgggcgtaa agcgcgcgca ggtggtttct taagtctgat gtgaaagccc acggctcaac 240
cgtggagggt cattggaaac tgggagactt gagtgcagaa gaggaaagtg gaattccatg 300
tgtagcggtg aaatgcgtag agatatggag gaacaccagt ggcgaaggcg actttctggt 360
ctgtaactga cactgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 420
tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tagagggttt ccgcccttta gtgctgaagt 480
taacgcatta agcactccgc ctggggagta cggccgcaag gctgaaactc aaaggaattg 540
acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 600
accaggtctt gacatcctct gacaacccta gagatagggc ttccccttcg ggggcagagt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccg 717
<210> 81
<211> 720
<212> ДНК
<213> Bacillus cereus
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 81
tntgacggan cacgccgcgt gagtgatgaa ggctttcggg tcgtaaaact ctgttgttag 60
ggaagaacaa gtgctagttg aataagctgg caccttgacg gtacctaacc agaaagccac 120
ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttat ccggaattat 180
tgggcgtaaa gcgcgcgcag gtggtttctt aagtctgatg tgaaagccca cggctcaacc 240
gtggagggtc attggaaact gggagacttg agtgcagaag aggaaagtgg aattccatgt 300
gtagcggtga aatgcgtaga gatatggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctttctggtc 360
tgtaactgac actgaggcgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 420
ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgaagtt 480
aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga 540
cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 600
ccaggtcttg acatcctctg aaaaccctag agatagggct tctccttcgg gagcagagtg 660
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 720
<210> 82
<211> 616
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(28)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (39)..(39)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (79)..(80)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (105)..(105)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (123)..(124)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (181)..(181)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (192)..(194)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (205)..(206)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (233)..(233)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (272)..(272)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (287)..(287)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (297)..(297)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (302)..(302)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (314)..(314)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (369)..(369)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (375)..(375)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (385)..(387)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (399)..(399)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (402)..(402)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (420)..(420)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (430)..(430)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (458)..(459)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (466)..(466)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (499)..(499)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (510)..(510)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (513)..(513)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (518)..(518)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (522)..(523)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (548)..(548)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (556)..(556)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (558)..(558)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (561)..(561)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (571)..(572)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (593)..(595)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (597)..(598)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (614)..(614)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 82
ctttcnggnc gnaaaactct gttgttangg aanaacaant gctanttgaa taagctggcg 60
ccttgacggt acctaaccnn aaagccncgg ctaactacgt gccancagcc gcggtaatac 120
gtnngtggca agcgttatcc ggaattattg ggcgtaaagc gcgcgcaggt ggtttcttaa 180
ntctgatgtg annncccacg gctcnnccgt ggagggtcat tggaaactgg ganacttgag 240
tgcagaagag gaaagtggaa ttccatgtgt ancggtgaaa tgcgtanaga tatggangaa 300
cnccagtggc gaangcgact ttctggtctg taactgacac tgaggcgcga aagcgtgggg 360
agcaaacang attanatacc ctggnnntcc acgccgtana cnatgagtgc taagtgttan 420
agggtttccn ccctttagtg ctgaagttaa cgcattannc actccncctg gggagtacgg 480
ccgcaaggct gaaactcana ggaattgacn ggngcccnca cnngcggtgg agcatgtggt 540
ttaattcnaa gcaacncnaa naaccttacc nngtcttgac atcctctgaa aannntnnag 600
atagggcttc tccntc 616
<210> 83
<211> 703
<212> ДНК
<213> Bacillus cereus
<220>
<221> misc_feature
<222> (701)..(701)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 83
cacgccgcgt gagtgatgaa ggctttcggg tcgtaaaact ctgttgttag ggaagaacaa 60
gtgctagttg aataagctgg caccttgacg gtacctaacc agaaagccac ggctaactac 120
gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttat ccggaattat tgggcgtaaa 180
gcgcgcgcag gtggtttctt aagtctgatg tgaaagccca cggctcaacc gtggagggtc 240
attggaaact gggagacttg agtgcagaag aggaaagtgg aattccatgt gtagcggtga 300
aatgcgtaga gatatggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctttctggtc tgtaactgac 360
actgaggcgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta 420
aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgaagtt aacgcattaa 480
gcactccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga cgggggcccg 540
cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg 600
acatcctctg aaaaccctag agatagggct tctccttcgg gagcagagtg acaggtggtg 660
catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa ntc 703
<210> 84
<211> 717
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 84
ctganggnnc aacgccgcgt gagtgatgaa ggctttcggg tcgtaaaact ctgttgttag 60
ggaagaacaa gtgctagttg aataagctgg caccttgacg gtacctaacc agaaagccac 120
ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttat ccggaattat 180
tgggcgtaaa gcgcgcgcag gtggtttctt aagtctgatg tgaaagccca cggctcaacc 240
gtggagggtc attggaaact gggagacttg agtgcagaag aggaaagtgg aattccatgt 300
gtagcggtga aatgcgtaga gatatggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctttctggtc 360
tgtaactgac actgaggcgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 420
ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgaagtt 480
aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga 540
cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta 600
ccaggtcttg acatcctctg aaaaccctag agatagggct tctccttcgg gagcagagtg 660
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgc 717
<210> 85
<211> 712
<212> ДНК
<213> Bacillus megaterium
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 85
ggancacgcc gcgtgagtga tgaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttagggaaga 60
acaagtacna gagtaactgc tngtaccttg acggtaccta accagaaagc cacggctaac 120
tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tatccggaat tattgggcgt 180
aaagcgcgcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc ccacggctca accgtggagg 240
gtcattggaa actggggaac ttgagtgcag aagagaaaag cggaattcca cgtgtagcgg 300
tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cggctttttg gtctgtaact 360
gacgctgagg cgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc 420
gtaaacgatg agtgctaagt gttagagggt ttccgccctt tagtgctgca gctaacgcat 480
taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaat tgacgggggc 540
ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc 600
ttgacatcct ctgacaactc tagagataga gcgttcccct tcgggggaca gagtgacagg 660
tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gc 712
<210> 86
<211> 714
<212> ДНК
<213> Bacillus sp.
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(19)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(22)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 86
ggancacgcc gcgtgnnnng nngaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag 60
aacaagtgca agagtaactg cttgcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg 180
taaagggctc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag 240
ggtcattgga aactgggaaa cttgagtgca gaagaggaga gtggaattcc acgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac 360
tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgacaacc ctagagatag ggctttccct tcggggacag agtgacaggt 660
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caac 714
<210> 87
<211> 718
<212> ДНК
<213> Bacillus circulans
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 87
aagtctgang gancacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa actctgttgt 60
tagggaagaa caagtacaag agtaactgct tgtaccttga cggtacctaa ccagaaagcc 120
acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggaatt 180
attgggcgta aagcgcgcgc aggcggtcct ttaagtctga tgtgaaagcc cacggctcaa 240
ccgtggaggg tcattggaaa ctgggggact tgagtgcaga agagaagagt ggaattccac 300
gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag tggcgaaggc gactctttgg 360
tctgtaactg acgctgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta 420
gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg ttagagggtt tccgcccttt agtgctgcag 480
caaacgcatt aagcactccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt 540
gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct 600
taccaggtct tgacatcctc tgacactcct agagatagga cgttcccctt cgggggacag 660
agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcc 718
<210> 88
<211> 718
<212> ДНК
<213> Bacillus subtilis
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(7)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 88
gtctgnngga ncacgccgcg tgagtgatga aggttttcgg atcgtaaagc tctgttgtta 60
gggaagaaca agtaccgttc gaatagggcg gtaccttgac ggtacctaac cagaaagcca 120
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgttg tccggaatta 180
ttgggcgtaa agggctcgca ggcggtttct taagtctgat gtgaaagccc ccggctcaac 240
cggggagggt cattggaaac tggggaactt gagtgcagaa gaggagagtg gaattccacg 300
tgtagcggtg aaatgcgtag agatgtggag gaacaccagt ggcgaaggcg actctctggt 360
ctgtaactga cgctgaggag cgaaagcgtg gggagcgaac aggattagat accctggtag 420
tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tagggggttt ccgcccctta gtgctgcagc 480
taacgcatta agcactccgc ctggggagta cggtcgcaag actgaaactc aaaggaattg 540
acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 600
accaggtctt gacatcctct gacaatccta gagataggac gtccccttcg ggggcagagt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgc 718
<210> 89
<211> 713
<212> ДНК
<213> Lysinibacillus fusiformis
<220>
<221> misc_feature
<222> (702)..(702)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (711)..(711)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 89
ctgatggagc acgccgcgtg agtgaagaag gatttcggtt cgtaaaactc tgttgtaagg 60
gaagaacaag tacagtagta actggctgta ccttgacggt accttattag aaagccacgg 120
ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg 180
ggcgtaaagc gcgcgcaggt ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccacg gctcaaccgt 240
ggagggtcat tggaaactgg gagacttgag tgcagaagag gatagtggaa ttccaagtgt 300
agcggtgaaa tgcgtagaga tttggaggaa caccagtggc gaaggcgact atctggtctg 360
taactgacac tgaggcgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc 420
acgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttag ggggtttccg ccccttagtg ctgcagctaa 480
cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg 540
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 600
aggtcttgac atcccgttga ccactgtaga gatatggttt ccccttcggg ggcaacggtg 660
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gntgggttaa ntc 713
<210> 90
<211> 715
<212> ДНК
<213> Lysinibacillus sphaericus
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (704)..(704)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (712)..(712)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 90
ctgatggagc ancgccgcgt gagtgaagaa ggttttcgga tcgtaaaact ctgttgtaag 60
ggaagaacaa gtacagtagt aactggctgt accttgacgg taccttatta gaaagccacg 120
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt 180
gggcgtaaag cgcgcgcagg cggtccttta agtctgatgt gaaagcccac ggctcaaccg 240
tggagggtca ttggaaactg ggggacttga gtgcagaaga ggaaagtgga attccaagtg 300
tagcggtgaa atgcgtagag atttggagga acaccagtgg cgaaggcgac tttctggtct 360
gtaactgacg ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 420
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 480
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 540
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 600
caggtcttga catcccgttg accactgtag agatatagtt tccccttcgg gggcaacggt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgtngggtta antcc 715
<210> 91
<211> 717
<212> ДНК
<213> Bacillus aryabhattai
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 91
ggnncaacgc cgcgtgagtg atgaaggctt tcgggtcgta aaactctgtt gttagggaag 60
aacaagtacg agagtaactg ctcgtacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg 180
taaagcgcgc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag 240
ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagagaaaa gcggaattcc acgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcggcttttt ggtctgtaac 360
tgacgctgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctgc agctaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgacaact ctagagatag agcgttcccc ttcgggggac agagtgacag 660
gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacg 717
<210> 92
<211> 718
<212> ДНК
<213> Bacillus aryabhattai
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(10)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 92
tctganggnn cacgccgcgt gagtgatgaa ggctttcggg tcgtaaaact ctgttgttag 60
ggaagaacaa gtacgagagt aactgctcgt accttgacgg tacctaacca gaaagccacg 120
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggaattatt 180
gggcgtaaag cgcgcgcagg cggtttctta agtctgatgt gaaagcccac ggctcaaccg 240
tggagggtca ttggaaactg gggaacttga gtgcagaaga gaaaagcgga attccacgtg 300
tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcggc tttttggtct 360
gtaactgacg ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 420
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgcagcta 480
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 540
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 600
caggtcttga catcctctga caactctaga gatagagcgt tccccttcgg gggacagagt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgc 718
<210> 93
<211> 716
<212> ДНК
<213> Bacillus flexus
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 93
ggancaacgc cgcgtgagtg angaaggctt tcgggtcgta aaactctgtt gttagggaag 60
aacaagtaca agagtaactg cttgtacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg 180
taaagcgcgc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag 240
ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagagaaaa gcggaattcc acgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcggcttttt ggtctgtaac 360
tgacgctgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctgc agctaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgacaact ctagagatag agcgttcccc ttcgggggac agagtgacag 660
gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaac 716
<210> 94
<211> 676
<212> ДНК
<213> Paracoccus kondratievae
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(15)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (44)..(44)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 94
gccgcgtgag tgnnnaagnc cctagggttg taaagctctt tcanctggga agataatgac 60
tgtaccagca gaagaagccc cggctaactc cgtgccagca gccgcggtaa tacggagggg 120
gctagcgttg ttcggaatta ctgggcgtaa agcgcacgta ggcggaccgg aaagttgggg 180
gtgaaatccc ggggctcaac cccggaactg ccttcaaaac tatcggtctg gagttcgaga 240
gaggtgagtg gaattccgag tgtagaggtg aaattcgtag atattcggag gaacaccagt 300
ggcgaaggcg gctcactggc tcgatactga cgctgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac 360
aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgaa tgccagtcgt cgggcagcat 420
gctgttcggt gacacaccta acggattaag cattccgcct ggggagtacg gtcgcaagat 480
taaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga 540
agcaacgcgc agaaccttac caacccttga catcccagga cagcccgaga gatcgggtct 600
ccacttcggt ggcctggaga caggtgctgc atggctgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg 660
ttcggttaag tccggc 676
<210> 95
<211> 728
<212> ДНК
<213> Enterobacter cloacae
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(5)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (719)..(719)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (721)..(722)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 95
ctgnngcagc cntgccgcgt gtatgaagaa ggncttcggg ttgtaaagta ctttcagcgg 60
ggaggaaggt gttgtggtta ataaccacag caattgacgt tacccgcaga agaagcaccg 120
gctaactccg tgccagcagc cgcggtaata cggagggtgc aagcgttaat cggaattact 180
gggcgtaaag cgcacgcagg cggtctgtca agtcggatgt gaaatccccg ggctcaacct 240
gggaactgca ttcgaaactg gcaggctaga gtcttgtaga ggggggtaga attccaggtg 300
tagcggtgaa atgcgtagag atctggagga ataccggtgg cgaaggcggc cccctggaca 360
aagactgacg ctcaggtgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 420
cacgccgtaa acgatgtcga tttggaggtt gtgcccttga ggcgtggctt ccggagctaa 480
cgcgttaaat cgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg 540
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc 600
tggtcttgac atccacagaa ctttccagag atggattggt gccttcggga actgtgagac 660
aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt tgtgaaatgt tgggttaagt cccgcaacna 720
nncgcaac 728
<210> 96
<211> 717
<212> ДНК
<213> Bacillus nealsonii
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 96
tgnngganca acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaaactc tgttgttagg 60
gaagaacaag tacgagagta actgctcgta ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg 120
ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg 180
ggcgtaaagc gcgcgcaggc ggtcctttaa gtctgatgtg aaagcccacg gctcaaccgt 240
ggagggtcat tggaaactgg gggacttgag tgcagaagag aagagtggaa ttccacgtgt 300
agcggtgaaa tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc gaaggcgact ctttggtctg 360
taactgacgc tgaggcgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc 420
acgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttag agggtttccg ccctttagtg ctgcagcaaa 480
cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct gaaactcaaa ggaattgacg 540
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 600
aggtcttgac atctcctgac aatcctagag ataggacgtt ccccttcggg ggacaggatg 660
acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgc 717
<210> 97
<211> 702
<212> ДНК
<213> Bacillus subtilis
<400> 97
cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct gttgttaggg aagaacaagt 60
gccgttcaaa tagggcggca ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt 120
gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg ggcgtaaagg 180
gctcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccccg gctcaaccgg ggagggtcat 240
tggaaactgg ggaacttgag tgcagaagag gagagtggaa ttccacgtgt agcggtgaaa 300
tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc gaaggcgact ctctggtctg taactgacgc 360
tgaggagcga aagcgtgggg agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa 420
cgatgagtgc taagtgttag ggggtttccg ccccttagtg ctgcagctaa cgcattaagc 480
actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 540
caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac 600
atcctctgac aatcctagag ataggacgtc cccttcgggg gcagagtgac aggtggtgca 660
tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cc 702
<210> 98
<211> 680
<212> ДНК
<213> Alcaligenes faecalis
<220>
<221> misc_feature
<222> (103)..(103)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (262)..(264)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (272)..(273)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 98
cttcgggttg taaagtactt ttggcagaga agaaaaggta tctcctaata cgagatactg 60
ctgacggtat ctgcagaata agcaccggct aactacgtgc cancagccgc ggtaatacgt 120
agggtgcaag cgttaatcgg aattactggg cgtaaagcgt gtgtaggcgg ttcggaaaga 180
aagatgtgaa atcccagggc tcaaccttgg aactgcattt ttaactgccg agctagagta 240
tgtcagaggg gggtagaatt cnnntgtagc anngaaatgc gtagatatgt ggaggaatac 300
cgatggcgaa ggcagccccc tgggataata ctgacgctca gacacgaaag cgtggggagc 360
aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccctaaacga tgtcaactag ctgttggggc 420
cgttaggcct tagtagcgca gctaacgcgt gaagttgacc gcctggggag tacggtcgca 480
agattaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc ggtggatgat gtggattaat 540
tcgatgcaac gcgaaaaacc ttacctaccc ttgacatgtc tggaaagccg aagagatttg 600
gccgtgctcg caagagaacc ggaacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt 660
gagatgttgg gttaagtccc 680
<210> 99
<211> 640
<212> ДНК
<213> Paenibacillus massiliensis
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(6)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(17)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(23)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(26)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (54)..(54)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (67)..(67)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (73)..(73)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (121)..(121)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (162)..(162)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (164)..(164)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (185)..(185)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (189)..(190)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (193)..(193)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (210)..(211)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (217)..(217)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (229)..(229)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (232)..(232)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (234)..(234)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (240)..(240)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (242)..(242)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (251)..(251)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (256)..(256)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (259)..(259)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (262)..(262)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (284)..(284)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (289)..(289)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (292)..(292)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (314)..(314)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (320)..(320)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (332)..(332)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (341)..(341)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (344)..(344)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (347)..(347)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (350)..(350)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (352)..(352)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (364)..(365)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (373)..(373)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (383)..(383)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (388)..(388)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (391)..(391)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (404)..(404)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (417)..(418)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (420)..(420)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (424)..(424)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (428)..(428)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (432)..(432)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (434)..(434)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (443)..(444)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (446)..(446)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (450)..(450)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (455)..(455)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (471)..(472)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (475)..(475)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (477)..(477)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (490)..(490)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (492)..(496)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (501)..(501)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (503)..(503)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (506)..(506)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (509)..(509)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (516)..(517)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (519)..(519)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (530)..(530)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (538)..(538)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (540)..(540)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (544)..(544)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (546)..(546)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (551)..(551)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (562)..(562)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (564)..(564)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (571)..(572)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (589)..(589)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (594)..(594)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (597)..(598)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (602)..(602)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (607)..(608)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (610)..(610)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (624)..(624)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (633)..(633)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (635)..(635)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (637)..(640)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 99
cttanngnnt gannnnnctt gnnaanaaag ccccggctaa ctacntgcca ncanccgcgg 60
taatacntan ggngcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg taaagcgcgc gcaggcggtc 120
ntttaagtct ggtgtttaag cccggggctc aaccccggat cncncgggaa actggatgac 180
ttgantgcnn aanaagagag tggaattccn ngtgtancgg tgaaatgcnt ananatgtgn 240
angaacacca ntggcnaang cnactctctg ggctgtaact gacnctgang cncgaaagcg 300
tggggagcaa acangattan ataccctggt antccacgcc ntanacnatn antgctaggt 360
gttnngggtt tcnataccct tgntgccnaa nttaacacat taancactcc gcctggnnan 420
tacngtcnca anantgaaac tcnnangaan tgacngggac ccgcacaagc nntgnantat 480
gtggtttaan tnnnnncaac ncnaanaanc ttaccnngnc ttgacatctn aatgaccngn 540
gcananatgt ncctttcctt cngnacattc nngacaggtg gtgcatggnt gtcntcnnct 600
cntgtcnngn gatgttgggt taantccccg cancnannnn 640
<210> 100
<211> 678
<212> ДНК
<213> Bacillus subtilis
<220>
<221> misc_feature
<222> (425)..(425)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (548)..(548)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (640)..(640)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (661)..(661)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 100
aagctctgtt gttagggaag aacaagtacc gttcgaatag ggcggtacct tgacggtacc 60
taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc 120
gttgtccgga attattgggc gtaaagggct cgcaggcggt ttcttaagtc tgatgtgaaa 180
gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggga acttgagtgc agaagaggag 240
agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa 300
ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt 360
agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg gtttccgccc 420
cttantgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa 480
actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 540
acgcgaanaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaat cctagagata ggacgtcccc 600
ttcgggggca gagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcan ctcgtgtcgt gagatgttgg 660
nttaagtccc gcaacgag 678
<210> 101
<211> 743
<212> ДНК
<213> Bacillus megaterium
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(13)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (689)..(691)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (693)..(708)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (712)..(712)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (716)..(717)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (720)..(720)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (727)..(727)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (729)..(730)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (734)..(734)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (740)..(741)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 101
aagnctttcg gnncgtaaaa ctctgttgtt agggaagaac aagtacgaga gtaactgctc 60
gtaccttgac ggtacctaac cagaaagcca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa 120
tacgtaggtg gcaagcgtta tccggaatta ttgggcgtaa agcgcgcgca ggcggtttct 180
taagtctgat gtgaaagccc acggctcaac cgtggagggt cattggaaac tggggaactt 240
gagtgcagaa gagaaaagcg gaattccacg tgtagcggtg aaatgcgtag agatgtggag 300
gaacaccagt ggcgaaggcg gctttttggt ctgtaactga cgctgaggcg cgaaagcgtg 360
gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt 420
tagagggttt ccgcccttta gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta 480
cggtcgcaag actgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt 540
ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatcctct gacaactcta 600
gagatagagc gttccccttc gggggacaga gtgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct 660
cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccnn ncnnnnnnnn nnnnnnnntc tnaganncgn 720
gctgacnann ccangcaccn ngg 743
<210> 102
<211> 980
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (729)..(730)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (746)..(747)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (749)..(750)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (775)..(776)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (785)..(786)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (812)..(816)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (835)..(837)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (840)..(840)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (846)..(847)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (851)..(853)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (884)..(890)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (893)..(893)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (896)..(897)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (902)..(902)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (907)..(907)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (911)..(912)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (915)..(915)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (923)..(925)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (931)..(931)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (937)..(939)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (942)..(944)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (946)..(950)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (952)..(954)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (956)..(956)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (972)..(972)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (975)..(975)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 102
tggacgaagt ctgacgganc acgccgcgtg agtgatgaag gctttcgggt cgtaaaactc 60
tgttgttagg gaagaacaag tgctagttga ataagctggc accttgacgg tacctaacca 120
gaaagccacg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc 180
cggaattatt gggcgtaaag cgcgcgcagg tggtttctta agtctgatgt gaaagcccac 240
ggctcaaccg tggagggtca ttggaaactg ggagacttga gtgcagaaga ggaaagtgga 300
attccatgtg tagcggtgaa atgcgtagag atatggagga acaccagtgg cgaaggcgac 360
tttctggtct gtaactgaca ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac 420
cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt 480
gctgaagtta acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa 540
aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga 600
agaaccttac caggtcttga catcctctga aaaccctaga gatagggctt ctccttcggg 660
agcagagtga caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag 720
tcccgcaann ggccgcaacc caacanncnn cgacacgagc tgacgacaac catgnnccac 780
cagtnnctct gctctcgaag gagaagcccc annnnnaggg tttttcgagg atgtnnngan 840
ctggtnnggg nnntcgcgtt gcttcgaatt aaaccacatg ctcnnnnnnn tgnggnnccc 900
cnagtcnatt nnttngagtc tannnctgga nccggannna annngnnnnn gnnnanttgc 960
gttaattggg gnaancccgg 980
<210> 103
<211> 731
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(8)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(29)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (723)..(723)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (725)..(727)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 103
agtctgnngg ancacgccgc gtgagtgnng aaggctttcg ggtcgtaaaa ctctgttgtt 60
agggaagaac aagtgctagt tgaataagct ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc 120
acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt atccggaatt 180
attgggcgta aagcgcgcgc aggtggtttc ttaagtctga tgtgaaagcc cacggctcaa 240
ccgtggaggg tcattggaaa ctgggagact tgagtgcaga agaggaaagt ggaattccat 300
gtgtagcggt gaaatgcgta gagatatgga ggaacaccag tggcgaaggc gactttctgg 360
tctgtaactg acactgaggc gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta 420
gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg ttagagggtt tccgcccttt agtgctgaag 480
ttaacgcatt aagcactccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt 540
gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct 600
taccaggtct tgacatcctc tgacaaccct agagataggg cttccccttc gggggcagag 660
tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca 720
acnannngca a 731
<210> 104
<211> 714
<212> ДНК
<213> Bacillus pseudomycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (701)..(701)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (706)..(706)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 104
ctgangganc acgccgcgtg agtgatgaag gctttcgggt cgtaaaactc tgttgttagg 60
gaagaacaag tgctagttga ataagctggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg 120
gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttatc cggaattatt 180
gggcgtaaag cgcgcgcagg tggtttctta agtctgatgt gaaagcccac ggctcaaccg 240
tggagggtca ttggaaactg ggagacttga gtgcagaaga ggaaagtgga attccatgtg 300
tagcggtgaa atgcgtagag atatggagga acaccagtgg cgaaggcgac tttctggtct 360
gtaactgaca ctgaggcgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 420
cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gagggtttcc gccctttagt gctgaagtta 480
acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gccgcaaggc tgaaactcaa aggaattgac 540
gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 600
caggtcttga catcctctga aaactctaga gatagagctt ctccttcggg agcagagtga 660
caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ntgggntaag tccc 714
<210> 105
<211> 740
<212> ДНК
<213> Bacillus cereus
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(6)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (703)..(703)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (724)..(724)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (733)..(734)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (736)..(740)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 105
tctgnnggan caacnccgcg tgagtgatga angctttcgg gtcgtaaaac tctgttgtta 60
gggaagaaca agtgctagtt gaataagctg gcaccttgac ggtacctaac cagaaagcca 120
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta tccggaatta 180
ttgggcgtaa agcgcgcgca ggtggtttct taagtctgat gtgaaagccc acggctcaac 240
cgtggagggt cattggaaac tgggagactt gagtgcagaa gaggaaagtg gaattccatg 300
tgtagcggtg aaatgcgtag agatatggag gaacaccagt ggcgaaggcg actttctggt 360
ctgtaactga cactgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 420
tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tagagggttt ccgcccttta gtgctgaagt 480
taacgcatta agcactccgc ctggggagta cggccgcaag gctgaaactc aaaggaattg 540
acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 600
accaggtctt gacatcctct gaaaacccta gagatagggc ttctccttcg ggagcagagt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgntgggtta agtcccgcaa 720
cganccgcaa ccnnannnnn 740
<210> 106
<211> 850
<212> ДНК
<213> Bacillus pumilus
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (715)..(715)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (718)..(733)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (735)..(735)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (739)..(741)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (743)..(744)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (747)..(747)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (753)..(754)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (756)..(757)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (767)..(768)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (770)..(770)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (775)..(775)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (779)..(784)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (787)..(788)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (791)..(792)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (794)..(794)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (799)..(800)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (802)..(802)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (807)..(807)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (809)..(810)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (815)..(815)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (818)..(818)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (826)..(826)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (829)..(831)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (835)..(835)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (838)..(841)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (846)..(848)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 106
ctgangganc acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg 60
gaagaacaag tgcgagagta actgctcgca ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg 120
ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg 180
ggcgtaaagg gctcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccccg gctcaaccgg 240
ggagggtcat tggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag gagagtggaa ttccacgtgt 300
agcggtgaaa tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc gaaggcgact ctctggtctg 360
taactgacgc tgaggagcga aagcgtgggg agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc 420
acgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttag ggggtttccg ccccttagtg ctgcagctaa 480
cgcattaagc actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg 540
ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc 600
aggtcttgac atcctctgac aaccctagag atagggcttt cccttcgggg acagagtgac 660
aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgnacnnn 720
nnnnnnnnnn nnncntctnn nanncgngct gannanncca tgcaccnncn gtcantctnn 780
nnnnggnnaa nncntattnn tngggtngnn cagangangt cagacnggnn nggtnctnnn 840
nttgcnnnat 850
<210> 107
<211> 711
<212> ДНК
<213> Bacillus mycoides
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(21)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 107
ggagcacgcc gcgtgagtgn ngaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttagggaaga 60
acaagtgcta gttgaataag ctggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 120
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttatccggaa ttattgggcg 180
taaagcgcgc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggag 240
ggtcattgga aactgggaga cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc atgtgtagcg 300
gtgaaatgcg tagagatatg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct ggtctgtaac 360
tgacactgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 420
cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctga agttaacgca 480
ttaagcactc cgcctgggga gtacggccgc aaggctgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 540
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 600
cttgacatcc tctgaaaact ctagagatag agcttctcct tcgggagcag agtgacaggt 660
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg c 711
<210> 108
<211> 21
<212> ДНК
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 108
actcctacgg gaggcagcag t 21
<210> 109
<211> 16
<212> ДНК
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 109
gggttgcgct cgttgc 16
<210> 110
<211> 16
<212> ДНК
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 110
gggttgcgct cgttac 16
<210> 111
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 111
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagaat catatacacc aattgaaaag 60
ttaaacaatt tttctgaagc acttggtggc ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagccggtgg taataagacg agaaagttag aatttttagt tgcggatgca 180
caggaaaagg gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa tcattgccgc 240
ctgacacttg ctgctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta ttcttgtatt agaggaaggg 300
cttgagccag aagagaagag agactttaac ggaaactatt tcttatatca cttattaggt 360
gctgaaaacg tcattgttgt accgaacgga gcagacctga tggaagagat gaataaagta 420
gcgaaagaag taagtgaaaa aggtagtaca ccatatgtaa ttccagttgg tggatcaaac 480
cctacgggcg caatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcgca atcatttgag 540
caaggaattg atttcagttc agttgtttgt gtaagtggta gcggcggtat gcatgctggt 600
ttaattactg gtttttctgg aacacaaagc catattcctg taatcgggat taatgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat ctcgcgcgac gctgttacgt gctttgatga atatgtagga 780
ccaggctatg cgttaccaac gccggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtataca ggtaaggcag tagcgggatt aatcgactta 900
attagaaaag gtaaatttaa taaggaagac aatattttat tcgtacattc aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 112
<211> 996
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 112
atgaatttag ctaaattccc gagaaaaaaa tatacagaat catatacacc aattgaaaag 60
ttaaacaatt tttctgaagc acttggtggc ccgactattt attttaaacg agatgattta 120
cttggtttaa cagccggtgg taataagacg agaaagttag aatttttagt tgcggatgca 180
caggaaaagg gtgcagatac gttaattaca gctggtggta ttcagtcaaa tcattgccgc 240
ctgacacttg ctgctgcggt aaaagaaaaa atgaaatgta ttcttgtatt agaggaaggg 300
cttgagccag aagagaagag agactttaac ggaaactatt tcttatatca cttattaggt 360
gctgaaaacg tcattgttgt accgaacgga gcagacctga tggaagagat gaataaagta 420
gcgaaagaag taagtgaaaa aggtagtaca ccatatgtaa ttccagttgg tggatcaaac 480
cctacgggcg caatgggata cgttgcttgt gcgcaagaaa ttatggcgca atcatttgag 540
caaggaattg atttcagttc agttgtttgt gtaagtggta gcggcggtat gcatgctggt 600
ttaattactg gtttttctgg aacacaaagc catattcctg taatcgggat taatgtaagt 660
agaggaaaag ctgagcaaga agagaaagta gcaaaacttg tagatgaaac ttcagcacac 720
gttggtattc caaactttat ctcgcgcgac gctgttacgt gctttgatga atatgtagga 780
ccaggctatg cgttaccaac gccggaaatg gtagaggcag ttcagttact tgcgaaaaca 840
gaaggtattt tacttgatcc agtgtatgaa ggtaaggcag tagcgggatt aatcgactta 900
attagaaaag gtaaatttaa taaggaagac aatattttat tcgtacattt aggtggttca 960
ccagctttat atgcgaatac ttctttattt gcgtaa 996
<210> 113
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 113
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Ala Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Glu Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Arg Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met Asn Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Ser Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Ser Ser Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ser Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Ser Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Thr Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Arg Lys Gly
290 295 300
Lys Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Ser Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 114
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 114
Met Asn Leu Ala Lys Phe Pro Arg Lys Lys Tyr Thr Glu Ser Tyr Thr
1 5 10 15
Pro Ile Glu Lys Leu Asn Asn Phe Ser Glu Ala Leu Gly Gly Pro Thr
20 25 30
Ile Tyr Phe Lys Arg Asp Asp Leu Leu Gly Leu Thr Ala Gly Gly Asn
35 40 45
Lys Thr Arg Lys Leu Glu Phe Leu Val Ala Asp Ala Gln Glu Lys Gly
50 55 60
Ala Asp Thr Leu Ile Thr Ala Gly Gly Ile Gln Ser Asn His Cys Arg
65 70 75 80
Leu Thr Leu Ala Ala Ala Val Lys Glu Lys Met Lys Cys Ile Leu Val
85 90 95
Leu Glu Glu Gly Leu Glu Pro Glu Glu Lys Arg Asp Phe Asn Gly Asn
100 105 110
Tyr Phe Leu Tyr His Leu Leu Gly Ala Glu Asn Val Ile Val Val Pro
115 120 125
Asn Gly Ala Asp Leu Met Glu Glu Met Asn Lys Val Ala Lys Glu Val
130 135 140
Ser Glu Lys Gly Ser Thr Pro Tyr Val Ile Pro Val Gly Gly Ser Asn
145 150 155 160
Pro Thr Gly Ala Met Gly Tyr Val Ala Cys Ala Gln Glu Ile Met Ala
165 170 175
Gln Ser Phe Glu Gln Gly Ile Asp Phe Ser Ser Val Val Cys Val Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Gly Met His Ala Gly Leu Ile Thr Gly Phe Ser Gly Thr
195 200 205
Gln Ser His Ile Pro Val Ile Gly Ile Asn Val Ser Arg Gly Lys Ala
210 215 220
Glu Gln Glu Glu Lys Val Ala Lys Leu Val Asp Glu Thr Ser Ala His
225 230 235 240
Val Gly Ile Pro Asn Phe Ile Ser Arg Asp Ala Val Thr Cys Phe Asp
245 250 255
Glu Tyr Val Gly Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Thr Pro Glu Met Val Glu
260 265 270
Ala Val Gln Leu Leu Ala Lys Thr Glu Gly Ile Leu Leu Asp Pro Val
275 280 285
Tyr Glu Gly Lys Ala Val Ala Gly Leu Ile Asp Leu Ile Arg Lys Gly
290 295 300
Lys Phe Asn Lys Glu Asp Asn Ile Leu Phe Val His Leu Gly Gly Ser
305 310 315 320
Pro Ala Leu Tyr Ala Asn Thr Ser Leu Phe Ala
325 330
<210> 115
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus cereus
<400> 115
His Glu Asn Asp Gly Gly Ser Lys Ile Lys Ile Val His Arg Trp Ser
1 5 10 15
Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val
20 25 30
Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Lys Thr Leu Val Lys Gln
35 40 45
Asp Arg Val Ala Leu Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly
50 55 60
Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe
65 70 75 80
Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Tyr
85 90 95
Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly
100 105 110
Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly
115 120 125
Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala
130 135 140
Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu
145 150 155 160
Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn
165 170 175
Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly
180 185 190
Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp Tyr Ala Gly Ile Val Asn Asp Asn
195 200 205
Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp
210 215 220
Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp
225 230 235 240
Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr
245 250 255
Gly Asp Arg
<210> 116
<211> 326
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus cereus
<400> 116
Met Arg Asn Lys Lys Leu Ile Leu Lys Leu Phe Ile Cys Ser Thr Ile
1 5 10 15
Phe Ile Thr Phe Val Phe Ala Leu His Asp Lys Arg Val Val Ala Ala
20 25 30
Ser Ser Val Asn Glu Leu Glu Asn Trp Ser Lys Trp Met Gln Pro Ile
35 40 45
Pro Asp Asn Ile Pro Leu Ala Arg Ile Ser Ile Pro Gly Thr His Asp
50 55 60
Ser Gly Thr Phe Lys Leu Gln Asn Pro Ile Lys Gln Val Trp Gly Met
65 70 75 80
Thr Gln Glu Tyr Asp Phe Arg Tyr Gln Met Asp His Gly Ala Arg Ile
85 90 95
Phe Asp Ile Arg Gly Arg Leu Thr Asp Asp Asn Thr Ile Val Leu His
100 105 110
His Gly Pro Leu Tyr Leu Tyr Val Thr Leu His Glu Phe Ile Asn Glu
115 120 125
Ala Lys Gln Phe Leu Lys Asp Asn Pro Ser Glu Thr Ile Ile Met Ser
130 135 140
Leu Lys Lys Glu Tyr Glu Asp Met Lys Gly Ala Glu Asn Ser Phe Ser
145 150 155 160
Ser Thr Phe Glu Lys Asn Tyr Phe Val Asp Pro Ile Phe Leu Lys Thr
165 170 175
Glu Gly Asn Ile Lys Leu Gly Asp Ala Arg Gly Lys Ile Val Leu Leu
180 185 190
Lys Arg Tyr Ser Gly Ser Asn Glu Ser Gly Gly Tyr Asn Asn Phe Tyr
195 200 205
Trp Pro Asp Asn Glu Thr Phe Thr Thr Thr Val Asn Lys Asn Val Asn
210 215 220
Val Thr Val Gln Asp Lys Tyr Lys Val Ser Tyr Asp Glu Lys Val Lys
225 230 235 240
Ser Ile Lys Asp Thr Ile Asn Glu Thr Met Asn Asn Ser Glu Asp Leu
245 250 255
Asn His Leu Tyr Ile Asn Phe Thr Ser Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ala
260 265 270
Trp Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ala Ser Tyr Ile Asn Pro Glu Ile Ala
275 280 285
Ala Tyr Ile Lys Gln Glu Asn Pro Lys Arg Val Gly Trp Val Ile Gln
290 295 300
Asp Tyr Ile Ser Asp Lys Trp Ser Pro Ile Leu Tyr Gln Glu Val Ile
305 310 315 320
Arg Thr Asn Lys Ser Leu
325
<210> 117
<211> 407
<212> БЕЛОК
<213> Acidovorax avenae
<400> 117
Met Ser Gly Gly His Arg Val Ala Leu Leu Gln Gly Ser Ala Glu Leu
1 5 10 15
Phe Ser Ala Leu Val Ala Asp Met Asp Ala Ala Leu Ser Asp Ile Gln
20 25 30
Phe Glu Thr Tyr Ile Phe Asp Cys Thr Gly Ser Gly Ala Asp Ile Ala
35 40 45
Glu Ala Leu Ile Arg Ala Ala Arg Arg Gly Val Arg Val His Leu Val
50 55 60
Val Asp Gly Val Gly Thr Gly Arg Leu Cys Ser Pro Trp Pro Glu Arg
65 70 75 80
Phe Glu Glu Ala Gly Val Arg Met Gln Val Tyr Ser Pro Leu Gly Pro
85 90 95
Leu Gly Leu Leu Leu Pro Arg Arg Trp Arg Arg Leu His Arg Lys Leu
100 105 110
Cys Val Val Asp Gly Cys Val Leu Tyr Cys Gly Gly Ile Asn Val Leu
115 120 125
Asp Asp Leu His Asp Pro Asn His Gly Ala Leu Glu Ser Pro Arg Phe
130 135 140
Asp Phe Ala Val Arg Val Glu Gly Arg Leu Val Glu Glu Ala Gly Glu
145 150 155 160
Ala Met Glu Gln Val Trp Trp Arg Leu Gln Ala Thr Arg Asp Ala Arg
165 170 175
Gln Arg Arg Leu Ala Asp Leu Met Cys Asp Leu Arg Ala Ala Ala Gln
180 185 190
Ala Arg Gln Ala Glu Arg Leu Ala Arg Glu Ala Ala Pro Gly Gly Ala
195 200 205
Ala Ala Ala His Gly Leu Arg Ala Gly Leu Leu Leu Arg Asp Asn Leu
210 215 220
Arg Asn Arg Ser Arg Ile Glu Arg Ala Tyr Arg Arg Ala Ile Gly Asn
225 230 235 240
Ala Arg His Glu Val Ile Ile Ala Asn Ala Tyr Phe Leu Pro Gly Arg
245 250 255
Lys Leu Arg His Ala Leu Val Leu Ala Ala Arg Arg Gly Val Arg Val
260 265 270
Arg Leu Leu Leu Gln Gly Arg Tyr Glu Tyr Phe Met Gln Tyr His Ala
275 280 285
Ala Arg Pro Val Tyr Gly Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Glu Ile His
290 295 300
Glu Tyr Ala Pro Ser Phe Leu His Ala Lys Val Ala Val Ile Asp Ala
305 310 315 320
Gln Gly Glu His Pro Trp Ala Thr Val Gly Ser Ser Asn Leu Asp Pro
325 330 335
Leu Ser Met Leu Leu Ala Arg Glu Ala Asn Val Val Val Glu Asp Ala
340 345 350
Gly Phe Ala Arg Ala Leu Arg Ala Arg Leu Val Asp Ala Met Glu His
355 360 365
Ala Gly Arg Gln Leu Asp Pro Gln Ala Tyr Gly Ala Arg Pro Trp Gly
370 375 380
Gln Arg Leu Arg Asp Arg Val Ala Phe Ala Leu Met Arg Leu Ala Leu
385 390 395 400
Trp Val Thr Gly Ser Arg Tyr
405
<210> 118
<211> 320
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderia cepacia
<400> 118
Ala Ala Gly Tyr Ala Ala Thr Arg Tyr Pro Ile Ile Leu Val His Gly
1 5 10 15
Leu Ser Gly Thr Asp Lys Tyr Ala Gly Val Leu Glu Tyr Trp Tyr Gly
20 25 30
Ile Gln Glu Asp Leu Gln Gln Asn Gly Ala Thr Val Tyr Val Ala Asn
35 40 45
Leu Ser Gly Phe Gln Ser Asp Asp Gly Pro Asn Gly Arg Gly Glu Gln
50 55 60
Leu Leu Ala Tyr Val Lys Thr Val Leu Ala Ala Thr Gly Ala Thr Lys
65 70 75 80
Val Asn Leu Val Gly His Ser Gln Gly Gly Leu Ser Ser Arg Tyr Val
85 90 95
Ala Ala Val Ala Pro Asp Leu Val Ala Ser Val Thr Thr Ile Gly Thr
100 105 110
Pro His Arg Gly Ser Glu Phe Ala Asp Phe Val Gln Asp Val Leu Ala
115 120 125
Tyr Asp Pro Thr Gly Leu Ser Ser Ser Val Ile Ala Ala Phe Val Asn
130 135 140
Val Phe Gly Ile Leu Thr Ser Ser Ser His Asn Thr Asn Gln Asp Ala
145 150 155 160
Leu Ala Ala Leu Gln Thr Leu Thr Thr Ala Arg Ala Ala Thr Tyr Asn
165 170 175
Gln Asn Tyr Pro Ser Ala Gly Leu Gly Ala Pro Gly Ser Cys Gln Thr
180 185 190
Gly Ala Pro Thr Glu Thr Val Gly Gly Asn Thr His Leu Leu Tyr Ser
195 200 205
Trp Ala Gly Thr Ala Ile Gln Pro Thr Leu Ser Val Phe Gly Val Thr
210 215 220
Gly Ala Thr Asp Thr Ser Thr Leu Pro Leu Val Asp Pro Ala Asn Val
225 230 235 240
Leu Asp Leu Ser Thr Leu Ala Leu Phe Gly Thr Gly Thr Val Met Ile
245 250 255
Asn Arg Gly Ser Gly Gln Asn Asp Gly Leu Val Ser Lys Cys Ser Ala
260 265 270
Leu Tyr Gly Lys Val Leu Ser Thr Ser Tyr Lys Trp Asn His Leu Asp
275 280 285
Glu Ile Asn Gln Leu Leu Gly Val Arg Gly Ala Tyr Ala Glu Asp Pro
290 295 300
Val Ala Val Ile Arg Thr His Ala Asn Arg Leu Lys Leu Ala Gly Val
305 310 315 320
<210> 119
<211> 453
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas fluorescens
<400> 119
Ile Thr Leu Tyr Ser Tyr His Asn Leu Asp Asn Gly Phe Ala Val Gly
1 5 10 15
Tyr Gln His Asn Gly Leu Gly Leu Gly Leu Pro Ala Thr Leu Val Gly
20 25 30
Ala Leu Leu Gly Ser Thr Asp Ser Gln Gly Val Ile Pro Gly Ile Pro
35 40 45
Trp Asn Pro Asp Ser Glu Lys Ala Ala Leu Glu Ala Val Gln Lys Ala
50 55 60
Gly Trp Thr Pro Ile Ser Ala Ser Ala Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Val
65 70 75 80
Asp Ala Arg Gly Thr Phe Phe Gly Glu Lys Ala Gly Tyr Thr Thr Ala
85 90 95
Gln Val Glu Val Leu Gly Lys Tyr Asp Asp Ala Gly Lys Leu Leu Glu
100 105 110
Ile Gly Ile Gly Phe Arg Gly Thr Ser Gly Pro Arg Glu Thr Leu Ile
115 120 125
Ser Asp Ser Ile Gly Asp Leu Ile Ser Asp Leu Leu Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Pro Lys Asp Tyr Ala Lys Asn Tyr Ala Gly Glu Ala Phe Gly Gly Leu
145 150 155 160
Leu Lys Asn Val Ala Asp Tyr Ala Gly Ala His Gly Leu Thr Gly Lys
165 170 175
Asp Val Val Val Ser Gly His Ser Leu Gly Gly Leu Ala Val Asn Ser
180 185 190
Met Ala Asp Leu Ser Asn Tyr Lys Trp Ala Gly Phe Tyr Lys Asp Ala
195 200 205
Asn Tyr Val Ala Tyr Ala Ser Pro Thr Gln Ser Ala Gly Asp Lys Val
210 215 220
Leu Asn Ile Gly Tyr Glu Asn Asp Pro Val Phe Arg Ala Leu Asp Gly
225 230 235 240
Ser Ser Phe Asn Leu Ser Ser Leu Gly Val His Asp Lys Pro His Glu
245 250 255
Ser Thr Thr Asp Asn Ile Val Ser Phe Asn Asp His Tyr Ala Ser Thr
260 265 270
Leu Trp Asn Val Leu Pro Phe Ser Ile Val Asn Leu Pro Thr Trp Val
275 280 285
Ser His Leu Pro Thr Ala Tyr Gly Asp Gly Met Thr Arg Ile Leu Glu
290 295 300
Ser Gly Phe Tyr Asp Gln Met Thr Arg Asp Ser Thr Val Ile Val Ala
305 310 315 320
Asn Leu Ser Asp Pro Ala Arg Ala Asn Thr Trp Val Gln Asp Leu Asn
325 330 335
Arg Asn Ala Glu Pro His Lys Gly Asn Thr Phe Ile Ile Gly Ser Asp
340 345 350
Gly Asn Asp Leu Ile Gln Gly Gly Asn Gly Ala Asp Phe Ile Glu Gly
355 360 365
Gly Lys Gly Asn Asp Thr Ile Arg Asp Asn Ser Gly His Asn Thr Phe
370 375 380
Leu Phe Ser Gly His Phe Gly Asn Asp Arg Val Ile Gly Tyr Gln Pro
385 390 395 400
Thr Asp Lys Leu Val Phe Lys Asp Val Gln Gly Ser Thr Asp Leu Arg
405 410 415
Asp His Ala Lys Val Val Gly Ala Asp Thr Val Leu Thr Phe Gly Ala
420 425 430
Asp Ser Val Thr Leu Val Gly Val Gly His Gly Gly Leu Trp Thr Glu
435 440 445
Gly Val Val Ile Gly
450
<210> 120
<211> 355
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderia stearothermophilus
<400> 120
Met Asp Lys Leu Ile Val Asp Asp Leu His Leu Ser Tyr Gly Ala Asn
1 5 10 15
Pro Ile Leu Lys Gly Val Ser Phe Glu Leu Lys Ala Gly Glu Val Val
20 25 30
Cys Leu Leu Gly Ala Ser Gly Ser Gly Lys Thr Thr Leu Leu Arg Ala
35 40 45
Val Ala Gly Leu Glu Gln Pro Ser Asp Gly Arg Ile Gln Leu Asp Asp
50 55 60
Arg Val Phe Phe Asp Gly Ala Lys Arg Val Asp Leu Pro Val Glu Gln
65 70 75 80
Arg Ser Leu Gly Leu Val Phe Gln Ser Tyr Ala Leu Trp Pro His Arg
85 90 95
Thr Val Ala Asp Asn Val Gly Tyr Gly Leu Lys Leu Arg Arg Val Ala
100 105 110
Pro Ala Glu Gln Lys Arg Arg Val Gln Ser Ala Leu Asp Gln Leu Gly
115 120 125
Leu Gly His Leu Ala Glu Arg Phe Pro His Gln Leu Ser Gly Gly Gln
130 135 140
Gln Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Leu Val Tyr Asn Pro Pro Val
145 150 155 160
Ile Leu Leu Asp Glu Pro Leu Ser Asn Leu Asp Ala Lys Leu Arg Glu
165 170 175
Glu Ala Arg Ala Trp Leu Arg Glu Leu Ile Val Ser Leu Gly Leu Ser
180 185 190
Ala Leu Cys Val Thr His Asp Gln Thr Glu Ala Met Ala Met Ser Asp
195 200 205
Arg Ile Leu Leu Leu Arg Asn Gly Arg Ile Glu Gln Glu Gly Thr Pro
210 215 220
Ala Glu Leu Tyr Gly Ala Pro Arg Ser Leu Tyr Thr Ala Glu Phe Met
225 230 235 240
Gly Ser Asn Asn Arg Ile Asp Ala Arg Val Ala Ala Ile Asp Gly Glu
245 250 255
Cys Val Thr Leu Ala Gly Asp Gly Trp Glu Ile Arg Ala Met Ala Arg
260 265 270
Asp Thr Leu Ala Pro Gly Gln Asp Ala Gln Ala Val Ile Arg Leu Glu
275 280 285
Arg Val Gln Val Thr Asp Gly Pro Gly Ala Asn Arg Leu Gln Ala Asp
290 295 300
Leu Val Thr Ser Met Tyr Leu Gly Asp Arg Trp Glu Tyr Leu Phe His
305 310 315 320
Cys Gly Asp Met Arg Leu Arg Ala Phe Gly His Val Pro Arg Ala Ala
325 330 335
Gly Lys His Trp Ile Glu Phe Pro Thr Asn Asp Cys Trp Ala Phe Ala
340 345 350
Lys Ala Gly
355
<210> 121
<211> 258
<212> БЕЛОК
<213> Thermomyces lanuginosus
<400> 121
Met Val Gly Phe Thr Pro Val Ala Leu Ala Ala Leu Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ala Phe Pro Ala Gly Asn Ala Thr Glu Leu Glu Lys Arg Gln
20 25 30
Thr Thr Pro Asn Ser Glu Gly Trp His Asp Gly Tyr Tyr Tyr Ser Trp
35 40 45
Trp Ser Asp Gly Gly Ala Gln Ala Thr Tyr Thr Asn Leu Glu Gly Gly
50 55 60
Thr Tyr Glu Ile Ser Trp Gly Asp Gly Gly Asn Leu Val Gly Gly Lys
65 70 75 80
Gly Trp Asn Pro Gly Leu Asn Ala Arg Ala Val Arg Val Pro Gln Asp
85 90 95
Arg Asn Arg Ile Val Ile Arg Pro Arg Ser Phe Glu Ser Leu Lys Ala
100 105 110
Phe Leu Thr Pro Thr Ser Leu Thr Cys Thr Gln Ile His Phe Glu Gly
115 120 125
Val Tyr Gln Pro Asn Gly Asn Ser Tyr Leu Ala Val Tyr Gly Trp Thr
130 135 140
Arg Asn Pro Leu Val Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Asn Phe Gly Thr Tyr
145 150 155 160
Asp Pro Ser Ser Gly Ala Thr Asp Leu Gly Thr Val Glu Cys Asp Gly
165 170 175
Ser Ile Tyr Arg Leu Gly Lys Thr Thr Arg Val Asn Ala Pro Ser Ile
180 185 190
Asp Gly Thr Gln Thr Phe Asp Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Asp Lys
195 200 205
Arg Thr Ser Gly Thr Val Gln Thr Gly Cys His Phe Asp Ala Trp Ala
210 215 220
Arg Ala Gly Leu Asn Val Asn Gly Asp His Tyr Tyr Gln Ile Val Ala
225 230 235 240
Thr Glu Gly Tyr Phe Ser Ser Gly Tyr Ala Arg Ile Thr Val Ala Asp
245 250 255
Val Gly
<210> 122
<211> 860
<212> БЕЛОК
<213> Neocallimastix patriciarum
<400> 122
Met Lys Phe Ser Ser Ala Asn Lys Ile Leu Phe Ser Gly Leu Val Ala
1 5 10 15
Ser Ala Asn Ala Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Tyr Ala Gly Asp Leu Lys
20 25 30
Ile Gly Val Ala Ala Asn Ala Met Arg Phe Ser Asn Ser Asn Tyr Val
35 40 45
Asn Ala Met Lys Ala Phe Asn Met Met Val Ala Glu Asn Asp Cys Lys
50 55 60
Leu Ser Gly Ile Gln Gln Gln Lys Gly Val Tyr Asn Phe Asn Gly Cys
65 70 75 80
Asp Asn His Tyr Asn Lys Ala Lys Glu Leu Gly Met Glu Phe Arg Gly
85 90 95
His Cys Leu Ile Trp His Ser Tyr Gln Pro Ser Trp Phe Gln Asn Ala
100 105 110
Asp Ala Asn Thr Leu Lys Asn Ala Ile Val Asp His Ile Thr Lys Thr
115 120 125
Leu Gln His Tyr Glu Gly Lys Ile Lys Val Trp Asp Val Val Asn Glu
130 135 140
Ala Ile Asp Asp Asn Ser Asn Gly Asn Gly Trp Asn Met Arg Arg Ser
145 150 155 160
Phe Leu Tyr Asn Lys Val Pro Asn Phe Val Asp Leu Ala Phe Gln Thr
165 170 175
Ala Arg Lys Val Ser Pro Asn Thr Lys Leu Phe Tyr Asn Asp Tyr Asn
180 185 190
Ala Glu Gly Val Tyr Ala Lys Ala Glu Ser Ile Tyr Asn Phe Val Ser
195 200 205
Asp Leu Lys Lys Arg Asn Ile Pro Ile Asp Gly Val Gly Leu Gln Tyr
210 215 220
His Val Gly Ala Lys Glu Gln Pro Ser Tyr Asn Lys Ile Asn Asp Leu
225 230 235 240
Ile Gly Arg Tyr Cys Lys Leu Gly Leu Glu Val His Ile Thr Glu Leu
245 250 255
Asp Val Lys Leu Gln Gly Asp Gln Asn Gly Gln Ser Gln Ala Phe Ser
260 265 270
Asn Ala Leu Lys Ala Cys Leu Ala Asn Ser Cys Cys Lys Ala Phe Leu
275 280 285
Val Trp Gly Val Gly Asp Asn Asp Ser Trp Leu Gly Ala Asn Glu Gln
290 295 300
Ala Leu Leu Phe Asn Gly Ser Tyr Gln Pro Lys Pro Val Tyr Asn Thr
305 310 315 320
Leu Leu Asn Ile Leu Lys Thr Ser Ala Arg Pro Ala Ser Ser Ser Ala
325 330 335
Lys Thr Leu Pro Gly Asn Ser Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Val Asn
340 345 350
Ser Lys Thr Leu Pro Gly Asn Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Ala Ser
355 360 365
Lys Thr Leu Pro Gly Asn Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
370 375 380
Asn Thr Leu Pro Gly Asn Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
385 390 395 400
Lys Thr Leu Pro Gly Asn Lys Ser Arg Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
405 410 415
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Arg Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
420 425 430
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
435 440 445
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
450 455 460
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
465 470 475 480
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser
485 490 495
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser
500 505 510
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
515 520 525
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser
530 535 540
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
545 550 555 560
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
565 570 575
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
580 585 590
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
595 600 605
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
610 615 620
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
625 630 635 640
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
645 650 655
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
660 665 670
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
675 680 685
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
690 695 700
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
705 710 715 720
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser
725 730 735
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ser Ser
740 745 750
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Ser
755 760 765
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Lys Ser Lys Thr Leu Pro Gly Gly Asn Thr
770 775 780
Lys Thr Leu Pro Gly Gly Ala Cys Lys Pro Thr Thr Val Thr Val Thr
785 790 795 800
Gln Lys Val Thr Val Thr Val Thr Val Glu Ser Gln Pro Thr Gln Gly
805 810 815
Gly Met Asn Gln Gly Gly Gly Asn Cys Ala Ala Lys Trp Gly Gln Cys
820 825 830
Gly Gly Asn Gly Phe Asn Gly Pro Thr Cys Cys Gln Asn Gly Ser Arg
835 840 845
Cys Gln Phe Val Asn Glu Trp Tyr Ser Gln Cys Leu
850 855 860
<210> 123
<211> 535
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus pumilus
<400> 123
Met Lys Ile Thr Asn Pro Val Leu Lys Gly Phe Asn Pro Asp Pro Ser
1 5 10 15
Ile Cys Arg Ala Gly Glu Asp Tyr Tyr Met Ala Val Ser Thr Phe Glu
20 25 30
Trp Phe Pro Gly Val Gln Ile Tyr His Ser Lys Asp Leu Ile His Trp
35 40 45
Arg Leu Ala Ala Arg Pro Leu Gln Lys Thr Ser Gln Leu Asp Met Lys
50 55 60
Gly Asn Pro Asp Ser Gly Gly Val Trp Ala Pro Cys Leu Ser Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Gly Gln Phe Trp Leu Ile Tyr Ser Asp Ile Lys Val Val Asp Gly
85 90 95
Pro Phe Lys Asp Gly His Asn Tyr Leu Val Thr Ala Asp Ala Val Asp
100 105 110
Gly Glu Trp Ser Asp Pro Val Arg Leu Asn Ser Ser Gly Phe Asp Pro
115 120 125
Ser Leu Phe His Asp Pro Ser Gly Lys Lys Tyr Val Leu Asn Met Leu
130 135 140
Trp Asp His Arg Glu Lys His His Ser Phe Ala Gly Ile Ala Leu Gln
145 150 155 160
Glu Tyr Ser Val Ser Glu Lys Lys Leu Val Gly Glu Arg Lys Val Ile
165 170 175
Phe Lys Gly Thr Pro Ile Lys Leu Thr Glu Ala Pro His Leu Tyr Tyr
180 185 190
Ile Asn Asp Val Tyr Tyr Leu Leu Thr Ala Glu Gly Gly Thr Arg Tyr
195 200 205
Glu His Ala Ala Thr Ile Ala Arg Ser Ser Arg Ile Asp Gly Pro Tyr
210 215 220
Glu Val His Pro Asp Asn Pro Ile Leu Thr Ala Phe His Ala Pro Ser
225 230 235 240
His Pro Leu Gln Lys Cys Gly His Ala Ser Ile Val Gln Thr His Thr
245 250 255
Asn Glu Trp Tyr Leu Ala His Leu Thr Gly Arg Pro Ile His Ser Ser
260 265 270
Lys Glu Ser Ile Phe Gln Gln Arg Gly Trp Cys Pro Leu Gly Arg Glu
275 280 285
Thr Ala Ile Gln Lys Leu Glu Trp Lys Asp Gly Trp Pro Tyr Val Val
290 295 300
Gly Gly Lys Glu Gly Leu Leu Glu Val Glu Ala Pro Ala Met Ser Val
305 310 315 320
Lys Glu Phe Ser Pro Thr Tyr His Ile Val Asp Glu Phe Lys Asp Ser
325 330 335
Ser Leu Asn Arg His Phe Gln Thr Leu Arg Ile Pro Phe Thr Asp Gln
340 345 350
Ile Gly Ser Val Thr Glu Asn Pro His His Leu Arg Leu Tyr Gly Gln
355 360 365
Glu Ser Leu Thr Ser Lys Phe Thr Gln Ala Phe Val Ala Arg Arg Trp
370 375 380
Gln Ser Phe Tyr Phe Glu Ala Glu Thr Ala Val Ser Phe Phe Pro Lys
385 390 395 400
Asn Phe Gln Gln Ala Ala Gly Leu Val Asn Tyr Tyr Asn Thr Glu Asn
405 410 415
Trp Thr Ala Leu Gln Val Thr Tyr Asp Asp Ala Leu Gly Arg Ile Leu
420 425 430
Glu Leu Ser Val Cys Glu Asn Leu Ala Phe Ser Gln Pro Leu Ile Lys
435 440 445
Lys Ile Ile Ile Pro Asp Glu Ile Pro Tyr Val Tyr Leu Lys Val Thr
450 455 460
Val Gln Arg Glu Thr Tyr Thr Tyr Ser Tyr Ser Phe Asp Gln Gln Glu
465 470 475 480
Trp Glu Lys Ile Asp Val Pro Leu Glu Ser Thr His Leu Ser Asp Asp
485 490 495
Phe Ile Arg Gly Gly Gly Phe Phe Thr Gly Ala Phe Val Gly Met Gln
500 505 510
Cys Gln Asp Thr Ser Gly Glu Arg Leu Pro Ala Asp Phe Lys Tyr Phe
515 520 525
Arg Tyr Glu Glu Thr Thr Glu
530 535
<210> 124
<211> 238
<212> БЕЛОК
<213> Streptomyces species N174
<400> 124
Ala Gly Ala Gly Leu Asp Asp Pro His Lys Lys Glu Ile Ala Met Glu
1 5 10 15
Leu Val Ser Ser Ala Glu Asn Ser Ser Leu Asp Trp Lys Ala Gln Tyr
20 25 30
Lys Tyr Ile Glu Asp Ile Gly Asp Gly Arg Gly Tyr Thr Gly Gly Ile
35 40 45
Ile Gly Phe Cys Ser Gly Thr Gly Asp Met Leu Glu Leu Val Gln His
50 55 60
Tyr Thr Asp Leu Glu Pro Gly Asn Ile Leu Ala Lys Tyr Leu Pro Ala
65 70 75 80
Leu Lys Lys Val Asn Gly Ser Ala Ser His Ser Gly Leu Gly Thr Pro
85 90 95
Phe Thr Lys Asp Trp Ala Thr Ala Ala Lys Asp Thr Val Phe Gln Gln
100 105 110
Ala Gln Asn Asp Glu Arg Asp Arg Val Tyr Phe Asp Pro Ala Val Ser
115 120 125
Gln Ala Lys Ala Asp Gly Leu Arg Ala Leu Gly Gln Phe Ala Tyr Tyr
130 135 140
Asp Ala Ile Val Met His Gly Pro Gly Asn Asp Pro Thr Ser Phe Gly
145 150 155 160
Gly Ile Arg Lys Thr Ala Met Lys Lys Ala Arg Thr Pro Ala Gln Gly
165 170 175
Gly Asp Glu Thr Thr Tyr Leu Asn Ala Phe Leu Asp Ala Arg Lys Ala
180 185 190
Ala Met Leu Thr Glu Ala Ala His Asp Asp Thr Ser Arg Val Asp Thr
195 200 205
Glu Gln Arg Val Phe Leu Lys Ala Gly Asn Leu Asp Leu Asn Pro Pro
210 215 220
Leu Lys Trp Lys Thr Tyr Gly Asp Pro Tyr Val Ile Asn Ser
225 230 235
<210> 125
<211> 363
<212> БЕЛОК
<213> Paenibacillus species
<400> 125
Ala Asp Ala Ser Gln Ile Val Ser Glu Met Gly Ala Gly Trp Asn Leu
1 5 10 15
Gly Asn Gln Leu Glu Ala Ala Val Asn Gly Thr Pro Asn Glu Thr Ala
20 25 30
Trp Gly Asn Pro Thr Val Thr Pro Glu Leu Ile Lys Lys Val Lys Ala
35 40 45
Ala Gly Phe Lys Ser Ile Arg Ile Pro Val Ser Tyr Leu Asn Asn Ile
50 55 60
Gly Ser Ala Pro Asn Tyr Thr Ile Asn Ala Ala Trp Leu Asn Arg Ile
65 70 75 80
Gln Gln Val Val Asp Tyr Ala Tyr Asn Glu Gly Leu Tyr Val Ile Ile
85 90 95
Asn Ile His Gly Asp Gly Tyr Asn Ser Val Gln Gly Gly Trp Leu Leu
100 105 110
Val Asn Gly Gly Asn Gln Thr Ala Ile Lys Glu Lys Tyr Lys Lys Val
115 120 125
Trp Gln Gln Ile Ala Thr Lys Phe Ser Asn Tyr Asn Asp Arg Leu Ile
130 135 140
Phe Glu Ser Met Asn Glu Val Phe Asp Gly Asn Tyr Gly Asn Pro Asn
145 150 155 160
Ser Ala Tyr Tyr Thr Asn Leu Asn Ala Tyr Asn Gln Ile Phe Val Asp
165 170 175
Thr Val Arg Gln Thr Gly Gly Asn Asn Asn Ala Arg Trp Leu Leu Val
180 185 190
Pro Gly Trp Asn Thr Asn Ile Asp Tyr Thr Val Gly Asn Tyr Gly Phe
195 200 205
Thr Leu Pro Thr Asp Asn Tyr Arg Ser Ser Ala Ile Pro Ser Ser Gln
210 215 220
Lys Arg Ile Met Ile Ser Ala His Tyr Tyr Ser Pro Trp Asp Phe Ala
225 230 235 240
Gly Glu Glu Asn Gly Asn Ile Thr Gln Trp Gly Ala Thr Ser Thr Asn
245 250 255
Pro Ala Lys Lys Ser Thr Trp Gly Gln Glu Asp Tyr Leu Glu Ser Gln
260 265 270
Phe Lys Ser Met Tyr Asp Lys Phe Val Thr Gln Gly Tyr Pro Val Val
275 280 285
Ile Gly Glu Phe Gly Ser Ile Asp Lys Thr Ser Tyr Asp Ser Ser Asn
290 295 300
Asn Val Tyr Arg Ala Ala Tyr Ala Lys Ala Val Thr Ala Lys Ala Lys
305 310 315 320
Lys Tyr Lys Met Val Pro Val Tyr Trp Asp Asn Gly His Asn Gly Gln
325 330 335
His Gly Phe Ala Leu Phe Asn Arg Ser Asn Asn Thr Val Thr Gln Gln
340 345 350
Asn Ile Ile Asn Ala Ile Met Gln Gly Met Gln
355 360
<210> 126
<211> 442
<212> БЕЛОК
<213> Helix pomatia
<400> 126
Met Leu Ser Leu Val Ile Ala Leu Cys Val Val Gly Ser Leu Ser Ala
1 5 10 15
His Leu Pro Glu Val Phe Val His Tyr Gln Asp Gly Ala Leu His Phe
20 25 30
Lys Met Gln His Val Pro Gly Leu Lys Glu Val Asn Phe Asn Tyr Gln
35 40 45
Leu Gly Ser Gln Ala Lys Asn Val Ile Pro Lys Met Gly Thr Ala Asn
50 55 60
Lys Gly Gly Asp Gly Tyr Trp His Leu Thr Asp Lys Lys Ile Asp Leu
65 70 75 80
Gln Pro Gly Asp Ser Ile Gln Tyr Asn Ala Val Ala Trp Gly Thr Ala
85 90 95
Gly Lys Leu His Ala Pro Val Ala Ser Trp Val Tyr Ala Pro Glu Pro
100 105 110
Thr Arg Gly Pro Arg Arg Leu Arg Gly Ala Val Met Phe Arg Asp Asp
115 120 125
Phe Asn Gly Gly Gly Leu Asp Thr Asn Asn Trp Asn Tyr Glu Val Ser
130 135 140
Met Tyr Gly Gly Met Asn Trp Glu Phe Gln Val Tyr Thr Asn Asp Lys
145 150 155 160
Ser Asn Val Tyr Thr Asn Asn Gly Lys Leu Phe Leu Lys Pro Thr Lys
165 170 175
Thr Val Asp Asp Pro Arg Trp Asp Glu Asn Phe Leu His Ser Gly Val
180 185 190
Met Asp Val Ala Gln Ile Trp Gly Tyr Cys Thr Gln Ser Ala Gln Tyr
195 200 205
Gly Cys His Arg Glu Gly Lys Asn Gly Ile Leu Pro Pro Val Met Ser
210 215 220
Gly Lys Val Lys Ser Lys Pro Val Leu Lys Tyr Gly Thr Val Glu Val
225 230 235 240
Arg Ala Arg Ile Pro Lys Gly Asp Trp Leu Trp Pro Ala Ile Trp Met
245 250 255
Leu Pro Arg Asp Ser His Tyr Gly Gly Trp Pro Arg Ser Gly Glu Ile
260 265 270
Asp Ile Met Glu Ser Arg Gly Asn Val Arg Ala Ser Gly His Gly Val
275 280 285
Asn Glu Val Ser Ser Thr Leu His Trp Gly Thr Ser Ala Gly Asp Asn
290 295 300
His Tyr Gly Gln Thr Thr His Ala Lys Gln Ala Ala Asp Trp Ser Asn
305 310 315 320
Ser Phe His Thr Trp Arg Leu Glu Trp Thr His Asp His Ile Ala Thr
325 330 335
Phe Val Asp Asn Gln Gln Ile Leu Arg Val Thr Pro Pro Ser Gly Gly
340 345 350
Phe Ser Glu Leu Gly His Thr Ser Asn Ile Trp Ala Gly Asn Asp Lys
355 360 365
Met Ala Pro Phe Asp Lys Glu Phe Tyr Ala Ile Phe Asn Val Ala Val
370 375 380
Gly Gly Thr Asn Gly Phe Phe Pro Glu Asn Trp Asp Tyr Gly Tyr Pro
385 390 395 400
Lys Pro Trp Ser Asn Thr Ser Pro His Ala Ala Gln Asp Trp Trp Asn
405 410 415
Gly Arg Ser Lys Trp Glu Ser Ser Trp Gln Gly Asp Lys Val Ala Met
420 425 430
Glu Ile Asp Tyr Ile Glu Met Arg Tyr Leu
435 440
<210> 127
<211> 374
<212> БЕЛОК
<213> Aspergillus saitoi
<400> 127
Ala Pro Ala Pro Thr Arg Lys Gly Phe Thr Ile Asn Gln Ile Ala Arg
1 5 10 15
Pro Ala Asn Lys Thr Arg Thr Val Asn Leu Pro Gly Leu Tyr Ala Arg
20 25 30
Ser Leu Ala Lys Phe Gly Gly Thr Val Pro Gln Ser Val Lys Glu Ala
35 40 45
Ala Ser Lys Gly Ser Ala Val Thr Thr Pro Gln Asn Asn Asp Glu Glu
50 55 60
Tyr Leu Thr Pro Val Thr Val Gly Lys Ser Thr Leu His Leu Asp Phe
65 70 75 80
Asp Thr Gly Ser Ala Asp Leu Trp Val Phe Ser Asp Glu Leu Pro Ser
85 90 95
Ser Glu Gln Thr Gly His Asp Leu Tyr Thr Pro Ser Ser Ser Ala Thr
100 105 110
Lys Leu Ser Gly Tyr Ser Trp Asp Ile Ser Tyr Gly Asp Gly Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Gly Asp Val Tyr Arg Asp Thr Val Thr Val Gly Gly Val Thr
130 135 140
Thr Asn Lys Gln Ala Val Glu Ala Ala Ser Lys Ile Ser Ser Glu Phe
145 150 155 160
Val Gln Asp Thr Ala Asn Asp Gly Leu Leu Gly Leu Ala Phe Ser Ser
165 170 175
Ile Asn Thr Val Gln Pro Lys Ala Gln Thr Thr Phe Phe Asp Thr Val
180 185 190
Lys Ser Gln Leu Asp Ser Pro Leu Phe Ala Val Gln Leu Lys His Asp
195 200 205
Ala Pro Gly Val Tyr Asp Phe Gly Tyr Ile Asp Asp Ser Lys Tyr Thr
210 215 220
Gly Ser Ile Thr Tyr Thr Asp Ala Asp Ser Ser Gln Gly Tyr Trp Gly
225 230 235 240
Phe Ser Thr Asp Gly Tyr Ser Ile Gly Asp Gly Ser Ser Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Phe Ser Ala Ile Ala Asp Thr Gly Thr Thr Leu Ile Leu Leu Asp
260 265 270
Asp Glu Ile Val Ser Ala Tyr Tyr Glu Gln Val Ser Gly Ala Gln Glu
275 280 285
Ser Tyr Glu Ala Gly Gly Tyr Val Phe Ser Cys Ser Thr Asp Leu Pro
290 295 300
Asp Phe Thr Val Val Ile Gly Asp Tyr Lys Ala Val Val Pro Gly Lys
305 310 315 320
Tyr Ile Asn Tyr Ala Pro Val Ser Thr Gly Ser Ser Thr Cys Tyr Gly
325 330 335
Gly Ile Gln Ser Asn Ser Gly Leu Gly Leu Ser Ile Leu Gly Asp Val
340 345 350
Phe Leu Lys Ser Gln Tyr Val Val Phe Asn Ser Glu Gly Pro Lys Leu
355 360 365
Gly Phe Ala Ala Gln Ala
370
<210> 128
<211> 298
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus sp.
<400> 128
Ala Ala Ala Thr Gly Phe Tyr Val Asn Gly Gly Lys Leu Tyr Asp Ser
1 5 10 15
Thr Gly Lys Pro Phe Tyr Met Arg Gly Ile Asn His Gly His Ser Trp
20 25 30
Phe Lys Asn Asp Leu Asn Thr Ala Ile Pro Ala Ile Ala Lys Thr Gly
35 40 45
Ala Asn Thr Val Arg Ile Val Leu Ser Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Lys
50 55 60
Asp Asp Leu Asn Ser Val Lys Asn Ile Ile Asn Val Val Asn Ala Asn
65 70 75 80
Lys Met Ile Ala Val Leu Glu Val His Asp Ala Thr Gly Lys Asp Asp
85 90 95
Phe Asn Ser Leu Asp Ala Ala Val Asn Tyr Trp Ile Ser Ile Lys Glu
100 105 110
Ala Leu Ile Gly Lys Glu Asp Arg Val Ile Val Asn Ile Ala Asn Glu
115 120 125
Trp Tyr Gly Thr Trp Asn Gly Ser Ala Trp Ala Asp Gly Tyr Lys Lys
130 135 140
Ala Ile Pro Lys Leu Arg Asp Ala Gly Ile Lys Asn Thr Leu Ile Val
145 150 155 160
Asp Ala Ala Gly Trp Gly Gln Tyr Pro Gln Ser Ile Val Asp Tyr Gly
165 170 175
Gln Ser Val Phe Ala Ala Asp Ser Gln Lys Asn Thr Ala Phe Ser Ile
180 185 190
His Met Tyr Glu Tyr Ala Gly Lys Asp Ala Ala Thr Val Lys Ser Asn
195 200 205
Met Glu Asn Val Leu Asn Lys Gly Leu Ala Leu Ile Ile Gly Glu Phe
210 215 220
Gly Gly Tyr His Thr Asn Gly Asp Val Asp Glu Tyr Ala Ile Met Lys
225 230 235 240
Tyr Gly Leu Glu Lys Gly Val Gly Trp Leu Ala Trp Ser Trp Tyr Gly
245 250 255
Asn Ser Ser Gly Leu Asn Tyr Leu Asp Leu Ala Thr Gly Pro Asn Gly
260 265 270
Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Asn Thr Val Val Asn Asp Thr Tyr Gly Ile
275 280 285
Lys Asn Thr Ser Gln Lys Ala Gly Ile Phe
290 295
<210> 129
<211> 349
<212> БЕЛОК
<213> Aspergillus japonicus
<400> 129
Ala Pro Ser Arg Val Ser Asp Phe Thr Lys Arg Ser Thr Cys Thr Phe
1 5 10 15
Thr Asp Ala Ala Thr Ala Ser Glu Ser Lys Thr Ser Cys Ser Asp Ile
20 25 30
Val Leu Lys Asp Ile Thr Val Pro Ala Gly Glu Thr Leu Asn Leu Lys
35 40 45
Asp Pro Asn Asp Gly Thr Thr Val Thr Phe Glu Gly Thr Thr Thr Trp
50 55 60
Glu Tyr Glu Glu Trp Asp Gly Pro Leu Leu Arg Ile Ser Gly Lys Asp
65 70 75 80
Ile Thr Val Thr Gln Ser Ser Asp Ala Val Leu Asp Gly Asn Gly Ala
85 90 95
Lys Trp Trp Asp Gly Glu Gly Thr Asn Gly Gly Lys Thr Lys Pro Lys
100 105 110
Phe Phe Tyr Ala His Asp Leu Asp Asp Ser Lys Ile Ser Gly Leu Tyr
115 120 125
Ile Lys Asn Thr Pro Val Gln Ala Ile Ser Val Glu Ser Asp Asn Leu
130 135 140
Val Ile Glu Asp Val Thr Ile Asp Asn Ser Asp Gly Asp Ser Glu Gly
145 150 155 160
Gly His Asn Thr Asp Gly Phe Asp Ile Ser Glu Ser Thr Tyr Ile Thr
165 170 175
Ile Thr Gly Ala Thr Val Lys Asn Gln Asp Asp Cys Val Ala Ile Asn
180 185 190
Ser Gly Glu Asn Ile Tyr Phe Ser Gly Gly Thr Cys Ser Gly Gly His
195 200 205
Gly Leu Ser Ile Gly Ser Val Gly Gly Arg Asp Asp Asn Thr Val Lys
210 215 220
Asn Val Thr Phe Ile Asp Ser Thr Val Ser Asp Ser Glu Asn Gly Val
225 230 235 240
Arg Ile Lys Thr Val Tyr Asp Ala Thr Gly Thr Val Glu Asp Ile Thr
245 250 255
Tyr Ser Asn Ile Gln Leu Ser Gly Ile Ser Asp Tyr Gly Ile Val Ile
260 265 270
Glu Gln Asp Tyr Glu Asn Gly Asp Pro Thr Gly Thr Pro Ser Asn Gly
275 280 285
Val Thr Ile Ser Asp Val Thr Leu Glu Asp Ile Thr Gly Ser Val Asp
290 295 300
Ser Asp Ala Val Glu Ile Tyr Ile Leu Cys Gly Asp Gly Ser Cys Ser
305 310 315 320
Asp Trp Thr Met Ser Gly Ile Asp Ile Thr Gly Gly Glu Thr Ser Ser
325 330 335
Asp Cys Glu Asn Val Pro Ser Gly Ala Ser Cys Asp Gln
340 345
<210> 130
<211> 310
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 130
Glu Leu Pro Leu Val Glu His Pro Ala Lys Asn Asp Gly Ser Leu Ser
1 5 10 15
Leu Leu Val Val Gly Asp Trp Gly Arg Asn Gly Thr Tyr Asn Gln Ser
20 25 30
Arg Val Ala Glu Gln Met Gly Lys Val Gly Glu Arg Leu Asp Ile Asp
35 40 45
Phe Val Val Ser Thr Gly Asp Asn Phe Tyr Glu Asn Gly Leu Thr Gly
50 55 60
Val His Asp Gln Gln Phe Glu Glu Ser Phe Thr Asn Ile Tyr Thr Ala
65 70 75 80
Gln Ser Leu Gln Lys Pro Trp Tyr Leu Val Leu Gly Asn His Asp Tyr
85 90 95
Arg Gly Asp Ala Leu Ala Gln Leu Asp Pro Val Met Arg Lys Leu Asp
100 105 110
Glu Arg Phe Val Cys Met Arg Ser Phe Leu Val Asn Ala Glu Ile Val
115 120 125
Glu Phe Phe Phe Ile Asp Thr Thr Pro Phe Gln Leu Lys Tyr Trp Thr
130 135 140
His Pro Lys Asp Ser His Tyr Asp Trp Arg Gly Val Ala Pro Arg Lys
145 150 155 160
Asp Tyr Ile Ala Asn Leu Leu Lys Asp Leu Asp Glu Ala Met Lys Lys
165 170 175
Ser Thr Ala Lys Trp Lys Ile Ala Ile Gly His His Thr Met Arg Ser
180 185 190
Val Ser Asp His Gly Asp Thr Glu Glu Leu Leu Gln Leu Leu Leu Pro
195 200 205
Val Leu Lys Val Asn Gly Ile Asp Phe Tyr Ile Asn Gly His Asp His
210 215 220
Cys Leu Glu His Ile Ser Ser Arg Asp Ser Pro Ile Gln Tyr Phe Thr
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Ser Lys Ala Trp Arg Gly Val Tyr Gln Pro Asn Asp
245 250 255
Asp Lys Ile Gln Phe Phe Tyr Asp Gly Gln Gly Phe Met Ser Leu Gln
260 265 270
Leu Asn Gln Asp Gln Ala Asp Phe Ile Phe Tyr Asp Val Ser Gly Lys
275 280 285
Val Leu Tyr Glu Phe Thr Ser His Lys Thr Asn His Phe Gln Pro Ser
290 295 300
Ile Tyr Val Thr Ala Glu
305 310
<210> 131
<211> 447
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 131
Arg Ser Glu Phe Pro Ser Thr Asp Met Pro Leu Asp Ser Glu Trp Phe
1 5 10 15
Ala Thr Pro Lys Gly Tyr Asn Ala Pro Gln Gln Val His Ile Thr Gln
20 25 30
Gly Asp Tyr Asp Gly Lys Ala Val Ile Val Ser Trp Val Thr Pro Ser
35 40 45
Glu Pro Ala Pro Ser Gln Val Phe Tyr Ser Lys Glu Glu Asn Arg Tyr
50 55 60
Asp Gln Lys Ala Glu Gly Thr Met Thr Asn Tyr Thr Phe Tyr Asp Tyr
65 70 75 80
Lys Ser Gly Tyr Ile His His Cys Leu Val Asp Gly Leu Glu Tyr Asn
85 90 95
Thr Lys Tyr Tyr Tyr Lys Ile Gly Thr Gly Asp Ser Ala Arg Glu Phe
100 105 110
Trp Phe Gln Thr Pro Pro Ala Ile Asp Thr Asp Ala Ser Tyr Thr Phe
115 120 125
Gly Ile Ile Gly Asp Leu Gly Gln Thr Phe Asn Ser Leu Ser Thr Leu
130 135 140
Gln His Tyr Leu Lys Ser Gly Gly Glu Ser Val Leu Phe Val Gly Asp
145 150 155 160
Leu Ser Tyr Ala Asp Arg Tyr Gln His Asn Asp Gly Ile Arg Trp Asp
165 170 175
Ser Trp Gly Arg Phe Val Glu Arg Ser Thr Ala Tyr Gln Pro Trp Ile
180 185 190
Trp Asn Ser Gly Asn His Glu Ile Glu Tyr Arg Pro Asp Leu Gly Glu
195 200 205
Thr Ser Thr Phe Lys Pro Tyr Leu His Arg Tyr Ser Thr Pro Tyr Leu
210 215 220
Ala Ser Lys Ser Ser Ser Pro Met Trp Tyr Ala Val Arg Arg Ala Ser
225 230 235 240
Ala His Ile Ile Val Leu Ser Ser Tyr Ser Pro Phe Val Lys Tyr Thr
245 250 255
Pro Gln Trp Met Trp Leu Lys Gly Glu Leu Lys Arg Val Asp Arg Glu
260 265 270
Lys Thr Pro Trp Leu Ile Val Leu Met His Ala Pro Met Tyr Asn Ser
275 280 285
Asn Asn Ala His Tyr Met Glu Gly Glu Ser Met Arg Ala Ala Phe Glu
290 295 300
Lys Trp Phe Val Lys Tyr Lys Val Asp Leu Val Phe Ala Gly His Val
305 310 315 320
His Ala Tyr Glu Arg Ser Tyr Arg Ile Ser Asn Ile Asn Tyr Asn Val
325 330 335
Thr Ser Gly Asn Arg Tyr Pro Val Pro Asp Lys Ser Ala Pro Val Tyr
340 345 350
Ile Thr Val Gly Asp Gly Gly Asn Gln Glu Gly Leu Ala Trp Arg Phe
355 360 365
Asn Asp Pro Gln Pro Asp Tyr Ser Ala Phe Arg Glu Ala Ser Phe Gly
370 375 380
His Ser Thr Leu Gln Leu Val Asn Arg Thr His Ala Val Tyr Gln Trp
385 390 395 400
Asn Arg Asn Asp Asp Gly Lys His Val Pro Thr Asp Asn Val Val Phe
405 410 415
His Asn Gln Tyr Trp Ala Gly Asn Thr Arg Arg Arg Arg Leu Lys Lys
420 425 430
Lys His Leu Arg Tyr Glu Ser Leu Gln Ser Leu Met Ser Met Leu
435 440 445
<210> 132
<211> 530
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 132
Ala Ala Glu Pro Ala Ser Thr Leu Thr Gly Pro Ser Arg Pro Val Thr
1 5 10 15
Val Ala Leu Arg Lys Asp Arg Gly His Ala Val Asp Leu Pro Asp Thr
20 25 30
Asp Pro Arg Val Gln Arg Arg Ala Thr Gly Trp Ala Pro Glu Gln Ile
35 40 45
Thr Val Ala Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Ala Trp Val Ser Trp Ile
50 55 60
Thr Gly Glu Phe Gln Met Gly Gly Thr Val Lys Pro Leu Asn Pro Gly
65 70 75 80
Thr Val Ala Ser Val Val Arg Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Ser Leu Val
85 90 95
His Glu Ala Thr Gly Asp Ala Leu Val Tyr Ser Gln Leu Tyr Pro Phe
100 105 110
Glu Gly Leu Gln Asn Tyr Thr Ser Gly Ile Ile His His Val Arg Leu
115 120 125
Gln Gly Leu Glu Pro Ala Thr Lys Tyr Tyr Tyr Gln Cys Gly Asp Pro
130 135 140
Gly Ile Pro Gly Ala Met Ser Ala Val His Ala Phe Arg Thr Met Pro
145 150 155 160
Ala Val Gly Pro Arg Ser Tyr Pro Gly Arg Ile Ala Val Val Gly Asp
165 170 175
Leu Gly Leu Thr Tyr Asn Thr Thr Ser Thr Val Asp His Met Val Ser
180 185 190
Asn Arg Pro Asp Leu Val Leu Leu Val Gly Asp Val Cys Tyr Ala Asn
195 200 205
Met Tyr Leu Thr Asn Gly Thr Gly Ala Asp Cys Tyr Ser Cys Ala Phe
210 215 220
Gly Lys Ser Thr Pro Ile His Glu Thr Tyr Gln Pro Arg Trp Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Arg Tyr Met Glu Ala Val Thr Ser Gly Thr Pro Met Met Val
245 250 255
Val Glu Gly Asn His Glu Ile Glu Glu Gln Ile Gly Asn Lys Thr Phe
260 265 270
Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Phe Ala Phe Pro Ser Thr Glu Ser Gly Ser
275 280 285
Phe Ser Pro Phe Tyr Tyr Ser Phe Asp Ala Gly Gly Ile His Phe Ile
290 295 300
Met Leu Ala Ala Tyr Ala Asp Tyr Ser Arg Ser Gly Glu Gln Tyr Arg
305 310 315 320
Trp Leu Val Lys Asp Leu Ala Lys Val Asp Arg Ala Val Thr Pro Trp
325 330 335
Leu Val Ala Gly Trp His Ala Pro Trp Tyr Thr Thr Tyr Lys Ala His
340 345 350
Tyr Arg Glu Val Glu Cys Met Arg Val Ala Met Glu Glu Leu Leu Tyr
355 360 365
Ser His Gly Leu Asp Ile Ala Phe Thr Gly His Val His Ala Tyr Glu
370 375 380
Arg Ser Asn Arg Val Phe Asn Tyr Thr Leu Asp Pro Cys Gly Ala Val
385 390 395 400
His Ile Ser Val Gly Asp Gly Gly Asn Arg Glu Lys Met Ala Thr Thr
405 410 415
His Ala Asp Glu Pro Gly His Cys Pro Asp Pro Arg Pro Lys Pro Asn
420 425 430
Ala Phe Ile Gly Cys Phe Cys Ala Phe Asn Phe Thr Ser Gly Pro Ala
435 440 445
Ala Gly Arg Phe Cys Trp Asp Arg Gln Pro Asp Tyr Ser Ala Tyr Arg
450 455 460
Glu Ser Ser Phe Gly His Gly Ile Leu Glu Val Lys Asn Glu Thr His
465 470 475 480
Ala Leu Trp Arg Trp His Arg Asn Gln Asp His Tyr Gly Ser Ala Gly
485 490 495
Asp Glu Ile Tyr Ile Val Arg Glu Pro His Arg Cys Leu His Lys His
500 505 510
Asn Ser Thr Arg Pro Ala His Gly Arg Gln Asn Thr Thr Arg Glu Ser
515 520 525
Gly Gly
530
<210> 133
<211> 521
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 133
Ala Ala Glu Pro Ala Ser Thr Leu Thr Gly Pro Ser Arg Pro Val Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Arg Glu Asp Arg Gly His Ala Val Asp Leu Pro Asp Thr
20 25 30
Asp Pro Arg Val Gln Arg Arg Ala Thr Gly Trp Ala Pro Glu Gln Ile
35 40 45
Ala Val Ala Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Ala Trp Val Ser Trp Ile
50 55 60
Thr Gly Glu Phe Gln Met Gly Gly Thr Val Lys Pro Leu Asp Pro Gly
65 70 75 80
Thr Val Ala Ser Val Val Arg Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Ser Leu Val
85 90 95
Arg Gln Ala Thr Gly Asp Ala Leu Val Tyr Ser Gln Leu Tyr Pro Phe
100 105 110
Glu Gly Leu Gln Asn Tyr Thr Ser Gly Ile Ile His His Val Arg Leu
115 120 125
Gln Gly Leu Glu Pro Ala Thr Lys Tyr Tyr Tyr Gln Cys Gly Asp Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Gly Ala Met Ser Ala Val His Ala Phe Arg Thr Met Pro
145 150 155 160
Ala Val Gly Pro Arg Ser Tyr Pro Gly Arg Ile Ala Val Val Gly Asp
165 170 175
Leu Gly Leu Thr Tyr Asn Thr Thr Ser Thr Val Asp His Met Ala Ser
180 185 190
Asn Arg Pro Asp Leu Val Leu Leu Leu Gly Asp Val Ser Tyr Ala Asn
195 200 205
Leu Tyr Leu Thr Asn Gly Thr Gly Ala Asp Cys Tyr Ser Cys Ala Phe
210 215 220
Gly Lys Ser Thr Pro Ile His Glu Thr Tyr Gln Pro Arg Trp Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Arg Tyr Met Glu Ala Val Thr Ser Gly Thr Pro Met Val Val
245 250 255
Val Glu Gly Asn His Glu Ile Glu Glu Gln Ile Gly Asn Lys Thr Phe
260 265 270
Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Phe Ala Phe Pro Ser Thr Glu Ser Gly Ser
275 280 285
Phe Ser Pro Phe Tyr Tyr Ser Phe Asp Ala Gly Gly Ile His Phe Val
290 295 300
Met Leu Gly Ala Tyr Ala Asp Tyr Gly Arg Ser Gly Glu Gln Tyr Arg
305 310 315 320
Trp Leu Glu Lys Asp Leu Ala Lys Val Asp Arg Ser Val Thr Pro Trp
325 330 335
Leu Val Ala Gly Trp His Ala Pro Trp Tyr Thr Thr Tyr Lys Ala His
340 345 350
Tyr Arg Glu Val Glu Cys Met Arg Val Ala Met Glu Glu Leu Leu Tyr
355 360 365
Ser His Gly Leu Asp Ile Ala Phe Thr Gly His Val His Ala Tyr Glu
370 375 380
Arg Ser Asn Arg Val Phe Asn Tyr Thr Leu Asp Pro Cys Gly Ala Val
385 390 395 400
His Ile Ser Val Gly Asp Gly Gly Asn Arg Glu Lys Met Ala Thr Thr
405 410 415
His Ala Asp Glu Pro Gly His Cys Pro Glu Pro Arg Ala Lys Pro Asn
420 425 430
Ala Phe Ile Gly Gly Phe Cys Ala Phe Asn Phe Thr Ser Gly Pro Ala
435 440 445
Ala Gly Arg Phe Cys Trp Asp Arg Gln Pro Asp Tyr Ser Ala Tyr Arg
450 455 460
Glu Ser Ser Phe Gly His Gly Ile Leu Glu Val Lys Asn Glu Thr His
465 470 475 480
Ala Leu Trp Arg Trp His Arg Asn Gln Asp Met Tyr Gly Ser Ala Gly
485 490 495
Asp Glu Ile Tyr Ile Val Arg Glu Pro His Arg Cys Leu His Lys His
500 505 510
Asn Ser Thr Arg Pro Thr His Gly Arg
515 520
<210> 134
<211> 521
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 134
Ala Ala Ala Ala Glu Pro Ala Ser Thr Leu Glu Gly Pro Ser Trp Pro
1 5 10 15
Val Thr Val Pro Leu Arg Glu Asp Arg Gly His Ala Val Asp Leu Pro
20 25 30
Asp Thr Asp Pro Arg Val Gln Arg Arg Val Thr Gly Trp Ala Pro Glu
35 40 45
Gln Ile Ala Val Ala Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Ala Trp Val Ser
50 55 60
Trp Ile Thr Gly Asp Phe Gln Met Gly Gly Ala Val Lys Pro Leu Asp
65 70 75 80
Pro Gly Thr Val Gly Ser Val Val Arg Tyr Gly Leu Ala Ala Asp Ser
85 90 95
Leu Val Arg Glu Ala Thr Gly Asp Ala Leu Val Tyr Ser Gln Leu Tyr
100 105 110
Pro Phe Glu Gly Leu Gln Asn Tyr Thr Ser Gly Ile Ile His His Val
115 120 125
Arg Leu Gln Gly Leu Glu Pro Gly Thr Lys Tyr Tyr Tyr Gln Cys Gly
130 135 140
Asp Pro Ala Ile Pro Gly Ala Thr Ser Ala Val His Ala Phe Arg Thr
145 150 155 160
Met Pro Ala Val Gly Pro Arg Ser Tyr Pro Gly Arg Ile Ala Val Val
165 170 175
Gly Asp Leu Gly Leu Thr Tyr Asn Thr Thr Ser Thr Val Glu His Met
180 185 190
Ala Ser Asn Gln Pro Asp Leu Val Leu Leu Leu Gly Asp Val Ser Tyr
195 200 205
Ala Asn Leu Tyr Leu Thr Asn Gly Thr Gly Thr Asp Cys Tyr Ser Cys
210 215 220
Ser Phe Ala Lys Ser Thr Pro Ile His Glu Thr Tyr Gln Pro Arg Trp
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Arg Tyr Met Glu Ser Val Thr Ser Thr Thr Pro Met
245 250 255
Met Val Val Glu Gly Asn His Glu Ile Glu Gln Gln Ile Gly Asn Lys
260 265 270
Thr Phe Ala Ala Tyr Ser Ala Arg Phe Ala Phe Pro Ser Lys Glu Ser
275 280 285
Asp Ser Phe Ser Pro Phe Tyr Tyr Ser Phe Asp Ala Gly Gly Ile His
290 295 300
Phe Ile Met Leu Ala Ala Tyr Ala Ala Tyr Ser Lys Ser Gly Glu Gln
305 310 315 320
Tyr Arg Trp Leu Glu Lys Asp Leu Ala Lys Val Asp Arg Ser Val Thr
325 330 335
Pro Trp Leu Val Ala Gly Trp His Ala Pro Trp Tyr Ser Thr Tyr Lys
340 345 350
Ala His Tyr Arg Glu Ala Glu Cys Met Arg Val Ala Met Glu Glu Leu
355 360 365
Leu Tyr Ser Tyr Gly Leu Asp Ile Val Phe Thr Gly His Val His Ala
370 375 380
Tyr Glu Arg Ser Asn Arg Val Phe Asn Tyr Thr Leu Asp Pro Cys Gly
385 390 395 400
Ala Val His Ile Ser Val Gly Asp Gly Gly Asn Arg Glu Lys Met Ala
405 410 415
Thr Thr His Ala Asp Asp Pro Gly Arg Cys Pro Glu Pro Leu Ser Thr
420 425 430
Pro Asp Asp Phe Met Gly Gly Phe Cys Ala Phe Asn Phe Thr Ser Asp
435 440 445
Pro Ala Ala Gly Ser Phe Cys Trp Asp Arg Gln Pro Asp Tyr Ser Ala
450 455 460
Tyr Arg Glu Ser Ser Phe Gly His Gly Ile Leu Glu Val Lys Asn Glu
465 470 475 480
Thr His Ala Leu Trp Lys Trp His Arg Asn Gln Asp Leu Tyr Gln Gly
485 490 495
Gly Val Gly Asp Glu Ile Tyr Ile Val Arg Glu Pro Glu Arg Cys Leu
500 505 510
Leu Lys Ser Ser Ile Ala Ala Tyr Phe
515 520
<210> 135
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus cereus
<400> 135
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Asn Val Ala Phe Ala
20
<210> 136
<211> 876
<212> ДНК
<213> Bacillus thuringiensis
<400> 136
tctgacggag caacgccgcg tgagtgatga aggctttcgg gtcgtaaaac tctgttgtta 60
gggaagaaca agtgctagtt gaataagctg gcaccttgac ggtacctaac cagaaagcca 120
cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgtta tccggaatta 180
ttgggcgtaa agcgcgcgca ggtggtttct taagtctgat gtgaaagccc acggctcaac 240
cgtggagggt cattggaaac tgggagactt gagtgcagaa gaggaaagtg gaattccatg 300
tgtagcggtg aaatgcgtag agatatggag gaacaccagt ggcgaaggcg actttctggt 360
ctgtaactga cactgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 420
tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tagagggttt ccgcccttta gtgctgaagt 480
taacgcatta agcactccgc ctggggagta cggccgcaag gctgaaactc aaaggaattg 540
acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt 600
accaggtctt gacatcctct gaaaacccta gagatagggc ttctccttcg ggagcagagt 660
gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 720
cgagcgcaac ccttgatctt agttgccatc attaagttgg gcactctaag gtgactgccg 780
gtgacaaacc ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc 840
tacacacgtg ctacaatgga cggtacaaag agctgc 876
<210> 137
<211> 44
<212> БЕЛОК
<213> Burkholderia cepacia
<400> 137
Met Ala Arg Thr Met Arg Ser Arg Val Val Ala Gly Ala Val Ala Cys
1 5 10 15
Ala Met Ser Ile Ala Pro Phe Ala Gly Thr Thr Ala Val Met Thr Leu
20 25 30
Ala Thr Thr His Ala Ala Met Ala Ala Thr Ala Pro
35 40
<210> 138
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Pseudomonas fluorescens
<400> 138
Met Gly Ile Phe Asp Tyr Lys Asn Leu Gly Thr Glu Gly Ser Lys Thr
1 5 10 15
Leu Phe Ala Asp Ala Met Ala
20
<210> 139
<211> 40
<212> БЕЛОК
<213> Streptomyces species N174
<400> 139
Met His Ser Gln His Arg Thr Ala Arg Ile Ala Leu Ala Val Val Leu
1 5 10 15
Thr Ala Ile Pro Ala Ser Leu Ala Thr Ala Gly Val Gly Tyr Ala Ser
20 25 30
Thr Gln Ala Ser Thr Ala Val Lys
35 40
<210> 140
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Paenibacillus species
<400> 140
Met Phe Lys Lys Trp Lys Lys Phe Gly Ile Ser Ser Leu Ala Leu Val
1 5 10 15
Leu Val Ala Ala Val Ala Phe Thr Gly Trp Ser Ala Lys Ala Ser Ala
20 25 30
<210> 141
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Aspergillus saitoi
<400> 141
Met Val Val Phe Ser Lys Thr Ala Ala Leu Val Leu Gly Leu Ser Thr
1 5 10 15
Ala Val Ser Ala
20
<210> 142
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Bacillus sp.
<400> 142
Met Ala Lys Leu Gln Lys Gly Thr Ile Leu Thr Val Ile Ala Ala Leu
1 5 10 15
Met Phe Val Ile Leu Gly Ser Ala Ala Pro Lys Ala
20 25
<210> 143
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> Aspergillus japonicus
<400> 143
Met Pro Ser Ala Lys Pro Leu Phe Cys Leu Ala Thr Leu Ala Gly Ala
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro
20
<210> 144
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 144
Met Ala Arg Gly Ser Met Ala Ala Val Leu Ala Val Leu Ala Val Ala
1 5 10 15
Ala Leu Arg Cys Ala Pro Ala Ala Ala
20 25
<210> 145
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 145
Met Arg Gly Leu Gly Phe Ala Ala Leu Ser Leu His Val Leu Leu Cys
1 5 10 15
Leu Ala Asn Gly Val Ser Ser Arg Arg Thr Ser Ser Tyr Val
20 25 30
<210> 146
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 146
Met Trp Trp Gly Ser Leu Arg Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Val
1 5 10 15
Ala Ala
<210> 147
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Triticum aestivum
<400> 147
Met Gly Ile Trp Arg Gly Ser Leu Pro Leu Leu Leu Leu Ala Ala
1 5 10 15
<---
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ КЛЕТКИ BACILLUS И ИНСЕКТИЦИД | 2015 |
|
RU2736562C2 |
КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ КЛЕТКИ BACILLUS И ДРУГОЙ АГЕНТ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ | 2015 |
|
RU2736827C2 |
ЛИПОЛИТИЧЕСКИЙ ФЕРМЕНТ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ХЛЕБОПЕЧЕНИИ | 2018 |
|
RU2763469C2 |
ФЕРМЕНТЫ ЛАКТАЗЫ С УЛУЧШЕННЫМИ СВОЙСТВАМИ | 2018 |
|
RU2788608C2 |
Ферменты лактазы с улучшенными свойствами | 2018 |
|
RU2806709C2 |
Ферменты биосинтеза люциферина и их применение | 2018 |
|
RU2730038C2 |
СПОСОБ УДАЛЕНИЯ СМОЛИСТЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО МАСЛА И ЕГО РАФИНИРОВАНИЯ | 2018 |
|
RU2772452C2 |
НОВЫЕ ФЕРМЕНТЫ И СИСТЕМЫ CRISPR | 2016 |
|
RU2737537C2 |
Ферменты лактазы с улучшенными свойствами при кислом pH | 2019 |
|
RU2814542C2 |
НОВЫЕ ФЕРМЕНТЫ И СИСТЕМЫ CRISPR | 2016 |
|
RU2777988C2 |
Изобретение относится к области биохимии, в частности к композиции для стимулирования роста растения, содержащей эффективное количество удобрения и эффективное количество свободного фермента. Раскрыты семя растения, покрытое указанной композицией, и среда для стимулирования роста растения, содержащая указанную композицию. Также раскрыт способ стимулирования роста растения с помощью указанной композиции. Изобретение позволяет эффективно стимулировать рост растения. 4 н. и 42 з.п. ф-лы, 62 табл., 33 пр.
1. Композиция для стимулирования роста растения, содержащая эффективное количество удобрения и эффективное количество свободного фермента, причем фермент выбран из фосфолипазы, липазы, АЦК-дезаминазы, маннаназы, ксиланазы, ксилозидазы, лактоназы, пектиназы, хитозаназы, протеазы, кислой фосфатазы, фитазы, глюканазы и комбинации любых из перечисленных; и при этом указанный фермент проявляет ферментативную активность, и при этом
если композиция содержит глюканазу, указанная глюканаза не содержит ксилоглюканазу; и
при этом удобрение содержит азот, фосфат, калий или комбинацию любых из перечисленных.
2. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент содержит фосфолипазу.
3. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит фосфолипазу C, фосфолипазу A, фосфолипазу B, фосфолипазу D или комбинацию любых из перечисленных.
4. Композиция по п. 3, характеризующаяся тем, что:
фосфолипаза содержит фосфолипазу C, причем фосфолипаза C содержит фосфолипазу C бета 1, фосфолипазу C бета 2, фосфолипазу C бета 3, фосфолипазу C бета 4, фосфолипазу C дельта 1, фосфолипазу C дельта 3, фосфолипазу C дельта 4, фосфолипазу C эпсилон 1, фосфолипазу C гамма 1, фосфолипазу C гамма 2, фосфолипазу C эта 1, фосфолипазу C эта 2, фосфолипазу C зета 1 или комбинацию любых из перечисленных;
фосфолипаза содержит фосфолипазу A, причем фосфолипаза A содержит фосфолипазу A1, фосфолипазу A2 или их комбинацию;
фосфолипаза содержит фосфолипазу B, причем фосфолипаза B содержит фосфолипазу B1; или
фосфолипаза содержит фосфолипазу D, причем фосфолипаза D содержит фосфолипазу D1, фосфолипазу D2, фосфолипазу D член 3, фосфолипазу D член 4, фосфолипазу D член 5, фосфолипазу D член 6 или комбинацию любых из перечисленных.
5. Композиция по п. 4, характеризующаяся тем, что фосфолипаза A содержит фосфолипазу A2, причем фосфолипаза A2 содержит фосфолипазу A2 группы IIА, фосфолипазу A2 группы IIC, фосфолипазу A2 группы IID, фосфолипазу A2 группы IIE, фосфолипазу A2 группы IIF, фосфолипазу A2 группы III, фосфолипазу A2 группы IVА, фосфолипазу A2 группы IVB, фосфолипазу A2 группы IVC, фосфолипазу A2 группы IVD, фосфолипазу A2 группы IVE, фосфолипазу A2 группы VIF, фосфолипазу A2 группы V, фосфолипазу A2 группы VI, фосфолипазу A2 группы VII, фосфолипазу A2 группы X, фосфолипазу A2 группы XIIА, фосфолипазу A2 группы XIIB, фосфолипазу A2 группы XV, фосфолипазу A2 группы XVI или комбинацию любых из перечисленных.
6. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит 1-алкил-2- ацетилглицерофосфохолинэстеразу, фосфатидилинозитолдеацилазу, фосфоинозитидфосфолипазу C, сфингомиелинфосфодиэстеразу, сфингомиелинфосфодиэстеразу D, алкилглицерофосфоэтаноламинфосфодиэстеразу, специфичную в отношении вариабельного поверхностного гликопротеина фосфолипазу C, гликозилфосфатидилинозитолфосфолипазу D, N-ацетилфосфатидилэтаноламин-гидролизирующую фосфолипазу D, фосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, гликозилфосфатидилинозитолдиацилглицеринлиазу, содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 2 (PNPLA2), содержащий пататин-подобный домен фосфолипазы белок 3 (PNPLA3) или комбинацию любых из перечисленных.
7. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит фосфолипазу Bacillus, фосфолипазу Streptomyces, фосфолипазу Clostridium, фосфолипазу Acidovorax или комбинацию любых из перечисленных.
8. Композиция по п. 7, характеризующаяся тем, что фосфолипаза Bacillus содержит фосфолипазу Bacillus thuringiensis или фосфолипазу Bacillus cereus, фосфолипаза Streptomyces содержит фосфолипазу Streptomyces chromofuscus, или тем, что фосфолипаза Clostridium содержит фосфолипазу Clostridium perfringens.
9. Композиция по п. 8, где фосфолипаза Bacillus thuringiensis содержит фосфолипазу C Bacillus thuringiensis, где фосфолипаза Bacillus cereus содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу C Bacillus cereus или специфичную в отношении фосфатидилинозитола фосфолипазу C Bacillus cereus, где фосфолипаза Streptomyces chromofuscus содержит фосфолипазу D Streptomyces chromofuscus или где фосфолипаза Clostridium perfringens содержит фосфолипазу C Clostridium perfringens.
10. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичную любой из SEQ ID NO: 14, 13, 15–19 и 115–117.
11. Композиция по п. 10, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности SEQ ID NO: 14, 19 или 116.
12. Композиция по п. 10, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 14.
13. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что фосфолипаза содержит специфичную в отношении фосфатидилхолина фосфолипазу C Bacillus cereus и при этом
композиция дополнительно содержит маннаназу.
14. Композиция по п. 13, характеризующаяся тем, что:
фосфолипаза C и маннаназа присутствуют в синергически эффективных количествах.
15. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент содержит неочищенный клеточный экстракт, содержащий фермент.
16. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент содержит частично очищенный фермент.
17. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент содержит по существу очищенный фермент.
18. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент не содержит фермент, связанный с экзоспорием представителя вида Bacillus cereus.
19. Композиция по п. 18, характеризующаяся тем, что фермент не связан с экзоспорием интактной споры представителя вида бактерий Bacillus cereus.
20. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фермент содержит фермент, иммобилизированный на матрице или подложке.
21. Композиция по п. 20, характеризующаяся тем, что матрица или подложка содержит древесный уголь, биоуголь, наноуглерод, агарозу, альгинат, целлюлозу, производное целлюлозы, диоксид кремния, пластмассу, нержавеющую сталь, стекло, полистирол, керамику, доломит, глину, диатомовую землю, тальк, полимер, камедь, вододиспергируемый материал или комбинацию любых из перечисленных.
22. Композиция по п. 20, характеризующаяся тем, что иммобилизация фермента на матрице или подложке приводит к более медленному высвобождению указанного фермента в окружающую среду, или на растение, или семя растения по сравнению со скоростью высвобождения того же неиммобилизированного фермента при одинаковых условиях.
23. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что указанная композиция дополнительно содержит белок экспансин и при этом белок экспансин способствует увеличению клеточной стенки растения.
24. Композиция по п. 23, характеризующаяся тем, что фермент содержит глюконазу.
25. Композиция по п. 24, характеризующаяся тем, что глюконаза содержит целлюлазу.
26. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фосфат содержит моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, ортофосфат, ортополифосфат или комбинацию любых из перечисленных; или тем, что калий содержит ацетат калия.
27. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что удобрение содержит 12% аммиачного азота и 58% доступного фосфата.
28. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что удобрение дополнительно содержит микронутриентный материал для удобрения и указанный микронутриентный материал для удобрения содержит борную кислоту, борат, борную фритту, сульфат меди, медную фритту, хелат меди, декагидрат тетрабората натрия, сульфат железа, оксид железа, сульфат железа-аммония, железную фритту, хелат железа, сульфат марганца, оксид марганца, хелат марганца, хлорид марганца, марганцевую фритту, молибдат натрия, молибденовую кислоту, сульфат цинка, оксид цинка, карбонат цинка, цинковую фритту, фосфат цинка, хелат цинка или комбинацию любых из перечисленных.
29. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что указанное удобрение дополнительно содержит сульфат аммония, нитрат аммония, сульфат-нитрат аммония, хлорид аммония, бисульфат аммония, полисульфид аммония, тиосульфат аммония, аммиачную воду, безводный аммоний, полифосфат аммония, сульфат алюминия, нитрат кальция, нитрат кальция-аммония, сульфат кальция, обожженный магнезит, кальцинированный известняк, оксид кальция, нитрат кальция, доломитовый известняк, гашеную известь, карбонат кальция, диаммонийфосфат, моноаммонийфосфат, нитрат магния, сульфат магния, нитрат калия, хлорид калия, сульфат калия-магния, сульфат калия, нитраты натрия, магнезиальный известняк, оксид магния, мочевину, мочевинные формальдегиды, мочевинный нитрат аммония, покрытую серой мочевину, покрытую полимером мочевину, изобутилидендимочевину, K2SO4–2MgSO4, каинит, сильвинит, кизерит, соли Эпсома, элементарную серу, известковую глину, измельченные устричные раковины, рыбную муку, шроты, рыбный тук, кровяную муку, фосфатную руду, суперфосфаты, шлак, костную муку, древесный пепел, навоз, пещерное гуано, торфяной мох, компост, песок из карьера, муку из жмыха семян хлопчатника, перьевую муку, крабовую муку, рыбную эмульсию, гумусовую кислоту или комбинацию любых из перечисленных.
30. Композиция по п. 1, дополнительно содержащая биостимулирующий агент.
31. Композиция по п. 30, характеризующаяся тем, что биостимулирующий агент содержит гиббереллиновую кислоту, индол-3-масляную кислоту, кинетин, ауксин, гомолог или производное ауксина или комбинацию любых из перечисленных.
32. Композиция по п. 1, дополнительно содержащая приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель, дополнительный агрохимикат или их комбинацию.
33. Композиция по п. 32, характеризующаяся тем, что приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит диспергирующее вещество, поверхностно-активное вещество, добавку, воду, загуститель, антислеживающий агент, продукт для разрушения остатков, компостирующий состав, гранулирующий состав, диатомовую землю, масло, краситель, стабилизатор, консервант, полимер, покрытие или комбинацию любых из перечисленных.
34. Композиция по п. 32, характеризующаяся тем, что приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит добавку и указанная добавка содержит масло, камедь, смолу, глину, полиоксиэтиленгликоль, терпен, вязкие органические вещества, сложный эфир жирной кислоты, сульфатированный спирт, алкилсульфонат, нефтяной сульфонат, спирт-сульфат, натрий алкилбутандиамат, сложный полиэфир тиобутандиоата натрия, производное бензолацетонитрила, белковый материал или комбинацию любых из перечисленных; приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит загуститель и указанный загуститель содержит длинноцепочечный алкилсульфонат полиэтиленгликоля, полиоксиэтилен олеат или комбинацию любых из перечисленных; приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит поверхностно-активное вещество и указанное поверхностно-активное вещество содержит тяжелое нефтяное масло, тяжелый нефтяной дистиллят, сложный эфир полиола и жирной кислоты, сложный эфир полиэтоксилированной жирной кислоты, арилалкилполиоксиэтиленгликоль, алкиламиноацетат, алкиларилсульфонат, многоатомный спирт, алкилфосфат или комбинацию любых из перечисленных; или приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит антислеживающий агент и указанный антислеживающий агент содержит натриевую соль, карбонат кальция, диатомовую землю или комбинацию любых из перечисленных.
35. Композиция по п. 33, где поверхностно-активное вещество содержит неионогенное поверхностно-активное вещество.
36. Композиция по п. 34, где добавка содержит белковый материал и указанный белковый материал содержит молочный продукт, пшеничную муку, соевую муку, кровь, альбумин, желатин, люцерновую муку, дрожжевой экстракт или комбинацию любых из перечисленных; антислеживающий агент содержит натриевую соль и указанная натриевая соль содержит натриевую соль монометилнафталинсульфоната, натриевую соль диметилнафталинсульфоната, сульфит натрия, сульфат натрия или комбинацию любых из перечисленных.
37. Композиция по п. 32, где приемлемый с точки зрения сельского хозяйства носитель содержит вермикулит, древесный уголь, фильтр-прессную грязь от процесса карбонизации при сахарном производстве, рисовую шелуху, карбоксиметилцеллюлозу, торф, перлит, мелкий песок, карбонат кальция, муку, алюминиевые квасцы, крахмал, тальк, поливинилпирролидон или комбинацию любых из перечисленных.
38. Композиция по п. 32, где дополнительный агрохимикат содержит инсектицид, нематоцид, гербицид, добавку для улучшения роста растения, фунгицид, инсектицид, моллюскоцид, альгицид, бактериальный инокулят, инокулят грибов, растительный гормон или комбинацию любых из перечисленных.
39. Композиция по п. 38, где агрохимикат содержит инсектицид и инсектицид содержит органофосфат, карбамат, пиретроид, акарицид, алкилфталат, борную кислоту, борат, фторид, серу, ароматическую замещенную галогеном мочевину, сложный углеводородный эфир, биологический инсектицид или комбинацию любых из перечисленных; агрохимикат содержит гербицид и гербицид содержит хлорфенокси- соединение, нитрофенольное соединение, нитрокрезольное соединение, дипиридильное соединение, ацетамид, алифатическую кислоту, анилид, бензамид, бензойную кислоту, производное бензойной кислоты, анисовую кислоту, производное анисовой кислоты, бензонитрил, диоксид бензотиадиазинона, тиокарбамат, карбамат, карбанилат, хлорпиридинил, производное циклогексенона, производное динитроаминобензола, фтординитротолуидиновое соединение, изоксазолидинон, никотиновую кислоту, изопропиламин, производное изопропиламина, оксадиазолинон, фосфат, фталат, соединение пиколиновой кислоты, триазин, триазол, урацил, производное мочевины, эндоталь, хлорат натрия или комбинацию любых из перечисленных; агрохимикат содержит фунгицид и фунгицид содержит замещенный бензол, тиокарбамат, этилен-бис-дитиокарбамат, тиофталидамид, соединение меди, ртутьорганическое соединение, оловоорганическое соединение, соединение кадмия, анилазин, беномил, циклогексамид, додин, этридиазол, ипродион, метлаксил, тиамимефон, трифорин или комбинацию любых из перечисленных; агрохимикат содержит инокулят грибов и инокулят грибов содержит инокулят грибов семейства Glomeraceae, инокулят грибов семейства Claroidoglomeraceae, инокулят грибов семейства Gigasporaceae, инокулят грибов семейства Acaulosporaceae, инокулят грибов семейства Sacculosporaceae, инокулят грибов семейства Entrophosporaceae, инокулят грибов семейства Pacidsporaceae, инокулят грибов семейства Diversisporaceae, инокулят грибов семейства Paraglomeraceae, инокулят грибов семейства Archaeosporaceae, инокулят грибов семейства Geosiphonaceae, инокулят грибов семейства Ambisporaceae, инокулят грибов семейства Scutellosporaceae, инокулят грибов семейства Dentiscultataceae, инокулят грибов семейства Racocetraceae, инокулят грибов отдела Basidiomycota, инокулят грибов отдела Ascomycota, инокулят грибов отдела Zygomycota или комбинацию любых из перечисленных; или агрохимикат содержит бактериальный инокулят и бактериальный инокулят содержит инокулят бактерий рода Rhizobium, инокулят бактерий рода Bradyrhizobium, инокулят бактерий рода Mesorhizobium, инокулят бактерий рода Azorhizobium, инокулят бактерий рода Allorhizobium, инокулят бактерий рода Sinorhizobium, инокулят бактерий рода Kluyvera, инокулят бактерий рода Azotobacter, инокулят бактерий рода Pseudomonas, инокулят бактерий рода Azospirillium, инокулят бактерий рода Bacillus, инокулят бактерий рода Streptomyces, инокулят бактерий рода Paenibacillus, инокулят бактерий рода Paracoccus, инокулят бактерий рода Enterobacter, инокулят бактерий рода Alcaligenes, инокулят бактерий рода Mycobacterium, инокулят бактерий рода Trichoderma, инокулят бактерий рода Gliocladium, инокулят бактерий рода Glomus, инокулят бактерий рода Klebsiella или комбинацию любых из перечисленных.
40. Композиция по п. 38, где агрохимикат содержит фунгицид и указанный фунгицид содержит альдиморф, ампропилфос, ампропилфос калий, андоприм, анилазин, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беноданил, беномил, бензамакрил, бензамакрилизобутил, биалафос, бинапакрил, бифенил, битертанол, бластицидин-S, боскалид, бромуконазол, бупиримат, бутиобат, полисульфид кальция, капсимицин, каптафол, каптан, карбендазим, карвон, хинометионат, хлобентиазон, хлорфеназол, хлорнеб, хлорпикрин, хлорталонил, хлозолинат, клозилакон, куфранеб, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, ципрофурам, дебакарб, дихлорофен, диклобутразол, диклофлуанид, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, диметиримол, димероморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-M, динокап, дифениламин, дипиритион, диталимфос, дитианон, додеморф, додин, дразоксолон, эдифенфос, эпоксиконазол, этаконазол, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенапанил, фенаримол, фенбуконазол, фенфурам, фенитропан, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, фентинацетат, фентингидроксид, фербам, феримзон, флуазинам, флуметовер, флуоромид, флухинконазол, флурпримодол, флусилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фосетил-алюминий, фосетил-натрий, фталид, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, фуркарбонил, фурконазол, фурконазол-цис, фурмециклокс, гуазатин, гексахлорбензол, гексаконазол, гимексазол, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иминоктадин альбесилат, иминоктадин триацетат, йодокарб, ипробенфос (ИБФ), ипродион, ирумамицин, изопротиолан, изоваледион, касугамицин, крезоксимметил, медьсодержащие препараты, такие как: гидроксид меди, нафтенат меди, оксихлорид меди, сульфат меди, оксид меди, комплекс оксин-медь и бордосскую смесь, манкоппер, манкозеб, манеб, меферимзон, мепанипирим, мепронил, метконазол, метасульфокарб, метфуроксам, метирам, метомеклам, метсульфовакс, мильдиомицин, миклобутанил, миклозолин, диметилдитиокарбамат никеля, нитроталь-изопропил, нуаримол, офурак, оксадиксил, оксамокарб, оксолиновую кислоту, оксикарбоксим, оксифентиин, паклобутразол, пефуразоат, пенконазол, пенцикурон, фосдифен, пимарицин, пипералин, полиоксин, полиоксорим, пробеназол, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропанозин натрия, пропиконазол, пропинеб, протиоциназол, пиразофос, пирифенокс, пириметанил, пирохилон, пироксифур, хинконазол, хинтозен (PCNB), серу и препараты серы, тебуконазол, теклофталам, текназен, тетциклазис, тетраконазол, тиабендазол, тициофен, тифлузамид, тиофанат-метил, тиоксимид, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триазбутил, триазоксид, трикламид, трициклазол, тридеморф, трифлоксистробин, трифлумизол, трифорин, униконазол, валидамицин A, винклозолин, виниконазол, зариламид, зинеб, зирам и также Dagger G, OK-8705, OK-8801, a-(1,1-диметилэтил)-(3-(2-феноксиэтил)-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, a-(2,4-дихлорфенил)-3-фтор-3-пропил-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, a-(2,4-дихлорфенил)-3-метокси-a-метил-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, a-(5-метил-1,3-диоксан-5-ил)-[3-[[4-(трифторметил)фенил]метилен]-1H-1,2,4-триазол-1-этанол, (5RS,6RS)-6-гидрокси-2,2,7,7-тетраметил-5-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-3-октанон, (E)-a-(метоксиимино)-N-метил-2-фенокси-фенилацетамид, 1-изопропил{2-метил-1-[[[1-(4-метилфенил)этил]амино]карбонил]пропил}карбамат, 1-(2,4-дихлорфенил)-2-(1-H-1,2,4-триазол-1-ил)этанон-O-(фенилметил)оксим, 1-(2-метил-1-нафталенил)-1-H-пиррол-2,5-дион, 1-(3,5-дихлорфенил)-3-(2-пропенил)-2,5-пирролидиндион, 1-[(дийодометил)-сульфонил]-4-метилбензол, 1-[[2-(2,4-дихлорфенил)-1,3-диоксолан-2-ил]метил]-1-H-имидазол, 1-[[2-(4-хлорфенил)-3-фенилоксиранил]метил]-1-H-1,2,4-триазол, 1-[1-[2-[(2,4-дихлорфенил)метокси]фенил]-этенил]-1-H-имидазол, 1-метил-5-нонил-2-(фенилметил)-3-пирролидинол, 2',6'-дибром-2-метил-4'-трифторметокси-4'-трифторметил-1, 3-тиазолкарбоксанилид, 2,2-дихлор-N-[1-(4-хлорфенил)этил]-1-этил-3-метилциклопропанкарбоксамид, 2,6-дихлор-5-(метилтио)-4-пиримидинилтиоцианат, 2,6-дихлор-N-(4-трифторметилбензил)бензамид, 2,6-дихлор-N-[[4-(трифторметил)фенил]метил]бензамид, 2-(2,3,3-трийод-2-пропенил)-2H-тетразол, 2-[(1-метилэтил)-сульфонил]-5-(трихлорметил)-1,3,4-тиадиазол, 2-[[6-дезокси-4-O-(4-O-метил-(3-D-гликопиранозил)-a-D-глюкопиранозил]-амино]-4-метокси-1-H-пирролo[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил, 2-аминобутан, 2-бром-2-(бромметил)пентандинитрил, 2-хлор-N-(2,3-дигидро-1,1,3-триметил-1-H-инден-4-ил)-3-пиридинкарбоксамид, 2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)-N-(изотиоцианатометил)ацетамид, 2-фенилфенол (OPP), 3,4-дихлор-1-[4-(дифторметокси)фенил]пиррол-2,5-дион, 3,5-дихлор-N-[циано[(1-метил-2-пропинил)окси]метил]бензамид, 3-(1,1-диметилпропил-1-оксо-1H-инден-2-карбонитрил, 3-[2-(4-хлорфенил)-5-этокси-3-изоксазолидинил]пиридин, 4-хлор-2-циано-N,N-диметил-5-(4-метилфенил)-1H-имидазол-l-сульфонамид, 4-метилтетразоло[1,5-a]хиназолин-5(4H)-он, 8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4.5]декан-2-метанамин, 8-гидроксихинолинсульфат, 9H-ксантен-2-[(фениламино)карбонил]-9-карбоксилгидразид, бис-(1-метилэтил)-3-метил-4-[(3-метилбензоил)окси]-2,5-тиофендикарбоксилат, цис-1-(4-хлорфенил)-2-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)-циклогептанол, цис-4-[3-[4-(1,1-диметилпропил)фенил-2-метилпропил]-2,6-диметилморфолин гидрохлорид, этил-[(4-хлорфенил)азо]цианоацетат, бикарбонат калия, натриевую соль метантетратиола, метил-1-(2,3-дигидро-2,2-диметил-инден-1-ил)-1H-имидазол-5-карбоксилат, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(5-изоксазолилкарбонил)-DL-аланинат, метил-N-(хлорацетил)-N-(2,6-диметилфенил)-DL-аланинат, N-(2,3-дихлор-4-гидроксифенил)-1-метилциклогексанкарбоксамид, N-(2,6-диметил-фенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-фуранил)ацетамид, N-(2,6-диметилфенил)-2-метокси-N-(тетрагидро-2-оксо-3-тиенил)ацетамид, N-(2-хлор-4-нитрофенил)-4-метил-3-нитробензолсульфонамид, N-(4-циклогексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(4-гексилфенил)-1,4,5,6-тетрагидро-2-пиримидинамин, N-(5-хлор-2-метилфенил)-2-метокси-N-(2-оксо-3-оксазолидинил)ацетамид, N-(6-метокси)-3-пиридинил)-циклопропанкарбоксамид, N-[2,2,2-трихлор-1-[(хлорацетил)амино]этил]бензамид, N-[3-хлор-4,5-бис(2-пропинилокси)фенил]-N'-метоксиметанимидамид, N-формил-N-гидрокси-DL-аланин-натриевую соль, О,О-диэтил-[2-(дипропиламино)-2-оксоэтил]этилфосфорамидотиоат, О-метил-S-фенил-фенилпропилфосфорамидотиоат, S-метил-1,2,3-бензотиадиазол-7-карботиоат и спиро[2H]-1-бензопиран-2,1'(3'H)-изобензофуран]-3'-он, N-трихлорметил)тио-4-циклогексан-1,2-дикарбоксимид, тетраметилтиопероксидикарбоновый диамид, метил-N-(2,6-диметилфенил)-N-(метоксиацетил)-DL-аланинат, 4-(2,2-дифтор-l,3-бензодиоксол-4-ил)-l-H-пиррол-3-карбонитрил или комбинацию любых из перечисленных.
41. Композиция по п. 38, где агрохимикат содержит инокулят бактерий рода Bacillus и инокулят бактерий рода Bacillus содержит Bacillus argri, Bacillus aizawai, Bacillus albolactis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus cereus, Bacillus coagulans, Bacillus endoparasiticus, Bacillus endorhythmos, Bacillus kurstaki, Bacillus lacticola, Bacillus lactimorbus, Bacillus lactis, Bacillus laterosporus, Bacillus lentimorbus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus medusa, Bacillus metiens, Bacillus natto, Bacillus nigrificans, Bacillus popillae, Bacillus pumilus, Bacillus siamensis, Bacillus sphearicus, Bacillus spp., Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus unifagellatu или комбинацию любых из перечисленных.
42. Композиция по п. 38, где агрохимикат содержит гербицид и указанный гербицид содержит 2,4-D, 2,4-DB, ацетохлор, ацифлуорфен, атахлор, аметрин, атразин, аминопиралид, бенефин, бенсульфурон, бенсулид, бентазон, бромацил, бромоксинил, бутилат, карфентразон, хлоримурон, хлорсульфурон, клетодим, кломазон, клопиралид, клорансулам, циклоат, DCPA, десмедифам, дикамбу, дихлобенил, диклофоп, диклосулам, дифлуфензопир, диметенамид, дикват, диурон, DSMA, эндоталь, EPTC, этальфлуралин, этофумесат, феноксапроп, флуазифоп-P, флукарбазон, флуфенацет, флуметсулам, флумиклорак, флумиоксазин, флуометурон, флуроксипир, фомесафен, форамсульфурон, глюфосинат, глифосат, галосульфурон, гексазинон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазахин, имазетапир, изоксабен, изоксафлутол, лактофен, линурон, MCPA, MCPB, мезотрион, метолахлор-s, метрибузин, метсульфурон, молинат, MSMA, напропамид, напталам, никосульфурон, норфлуразол, оризалин, оксадиазон, оксифлуорофен, паракват, пеларгоновую кислоту, пендиметалин, фенмедифам, пиклорам, примисульфурон, продиамин, прометрин, пронамид, пропанил, просульфурон, пиразон, пиритиобак, хинклорак, хизалофоп, римсульфурон, сетоксидим, сидурон, симазин, сульфентразон, сульфометурон, сульфосульфурон, тебутиурон, тербацил, тиазопир, тифенсульфурон, тиобенкарб, тралкоксидим, траиллат, триасульфурон, трибенурон, триклопир, трифлуралин, трифлусульфурон или комбинацию любых из перечисленных.
43. Композиция по п. 38, где растительный гормон содержит гибберелин, ауксин, кинетин или комбинацию любых из перечисленных.
44. Семя растения для получения растения, характеризующегося улучшенным ростом и/или здоровьем растения, причем указанное семя покрыто композицией по п. 1.
45. Способ стимулирования роста растения, включающий нанесение композиции по п. 1 на среду для выращивания растения, растение, семя растения или область, окружающую указанное растение или семя растения.
46. Среда для стимулирования роста растения, содержащая а) композицию по п. 1; b) почву, воду, водный раствор, песок, гравий, полисахарид, дерновой грунт, компост, торфяной мох, солому, древесину, глину, соевую муку, дрожжевой экстракт или комбинацию любых из перечисленных.
RU 2012129907 A, 27.01.2014 | |||
US 2014274707 A1, 18.09.2014 | |||
WO 2010135588 A2, 25.11.2010 | |||
ФЕРМЕНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБНАЯ ЭФФЕКТИВНО РАЗЛАГАТЬ ЦЕЛЛЮЛОЗНЫЙ МАТЕРИАЛ | 2009 |
|
RU2529949C2 |
Авторы
Даты
2023-09-05—Публикация
2017-03-16—Подача