Ферменты лактазы с улучшенными свойствами при кислом pH Российский патент 2024 года по МПК C12N9/38 A23C9/12 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новому улучшенному пептиду или димерным пептидам, проявляющим ферментативную активность бета-галактозидазы, а также к улучшенным способам снижения содержания лактозы в композициях, таких как молочные продукты.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Для роста на молоке наилучшим путем получения глюкозы и галактозы в качестве источников углерода для молочнокислых бактерий является гидролиз лактозы. Лактаза (бета-галактозидаза; ЕС 3.2.1.23) представляет собой фермент, который осуществляет стадию гидролиза молочного сахара лактозы до моносахаридов. Коммерческое применение лактазы состоит в расщеплении лактозы в молочных продуктах. Лица с непереносимостью лактозы испытывают трудности с перевариванием молочных продуктов с высокой концентрацией лактозы. По расчетам около 70% населения всего мира обладает ограниченной способностью к перевариванию лактозы. Соответственно, растет потребность в молочных пищевых продуктах, не содержащих лактозу или содержащих ее в низкой концентрации.

Лактазы выделены из широкого разнообразия организмов, включая такие микроорганизмы, как Kluyveromyces и Bacillus. Kluyveromyces, особенно K. fragilis и К. lactis, и другие грибы, например рода Candida, Torula и Torulopsis, являются распространенными источниками грибных лактаз, тогда как В. coagulans и В. circulans являются известными источниками бактериальных лактаз. В продаже имеется несколько коммерческих препаратов лактазы, полученных из этих организмов, такие как Lactozym® (производства компании Novozymes, Дания), НА-лактаза (производства компании Chr. Hansen, Дания) и Maxilact® (производства компании DSM, Нидерланды); все они получены из K. lactis. Все эти лактазы являются так называемыми нейтральными лактазами, имеющими оптимум рН от рН 6 до рН 8, а также температурный оптимум около 37°С. При использовании таких лактаз в производстве, например, йогурта с низким содержанием лактозы, обработку ферментом приходится либо проводить на отдельной стадии, предшествующей ферментации, либо вероятнее использовать более высокие дозы ферментов, так как по мере снижения рН в процессе ферментации их активность упадет.

В WO 2009/071539 раскрыта лактаза, имеющая происхождение из Bifidobacterium bifidum, которая способна к очень эффективному гидролизу в молоке и обладает активностью в широком диапазоне рН, включая низкие значения рН, например рН ниже 6. Эту лактазу можно применять в процессах производства молока и ферментированных молочных продуктов, таких как сыр, йогурт, сливочное масло, пахта, сметана и т.д., для снижения содержания лактозы.

В WO 2013/160413 раскрыт способ получения ферментированного молочного продукта с использованием комбинации отрицательных по глюкозе штаммов молочнокислых бактерий и традиционной лактазы с целью снижения содержания лактозы в ферментированном молочном продукте при повышении содержания глюкозы.

В ЕР-А1-2 957180 раскрыт способ получения ферментированного молочного продукта с использованием комбинации заквасочных культур и традиционной лактазы с целью снижения содержания лактозы и уровня последующего подкисления в ферментированном молочном продукте.

В WO 2017216000 раскрыт способ получения кисломолочного продукта, включающий стадии получения базового кисломолочного продукта, который имеет рН от 3,0 до 5,0 и содержание лактозы по меньшей мере 1,5 мг/мл, добавление к базовому кисломолочному продукту лактазы, которая при рН 5,0 и при температуре 37°С сохраняет уровень активности по меньшей мере 5% по сравнению с активностью при оптимуме рН лактазы, например, лактазы, имеющей происхождение из Bifidobacterium bifidum, с оптимумом активности при рН 6,0, измеренной при температуре 37°С.

ЦЕЛЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Цель воплощений изобретения состоит в том, чтобы предложить бета-галактозидазы, имеющие свойства, позволяющие получать улучшенные безлактозные или низколактозные продукты в кислых условиях.

Цель настоящего изобретения состоит в обеспечении усовершенствованного способа получения кисломолочного продукта или производимого из молока продукта со сниженным содержанием лактозы.

Следующая цель воплощений изобретения состоит в том, чтобы предложить бета-галактозидазы, имеющие свойства, позволяющие использовать усовершенствованные, то есть более простые, более надежные или менее дорогостоящие способы получения для снижения содержания лактозы в продукте, например безлактозных или низколактозных продуктов, в частности в кислых условиях.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Автор(ы) настоящего изобретения идентифицировали бета-галактозидазы с ранее не описанными свойствами, позволяющими получать улучшенные безлактозные или низколактозные продукты, а также использовать усовершенствованные способы получения таких безлактозных или низколактозных продуктов. В частности, показано, что эти бета-галактозидазы очень стабильны при относительно высокой активности при низких значениях рН. Это позволяет использовать бета-галактозидазы при определенных значениях рН и температуры, о возможности использования которых было неизвестно.

Настоящее изобретение основано на знании о том, что кислая лактаза (т.е. пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы с оптимумом рН ниже рН 6,7 или ниже рН 5,5) обладает несколькими преимуществами при использовании в способе получения кисломолочного продукта, например ферментированного молочного продукта, такого как йогурт, подвергаемого тепловой обработке после ферментации и подходящего для хранения при комнатной температуре. Такой продукт также называют йогуртом последующей пастеризации.

Во-первых, кислая лактаза обладает оптимальной активностью при значении рН ниже 6,7, например ниже рН 5,5 и как правило от рН 3,5 до рН 4,5, и, следовательно, обладает оптимальной активностью при рН, характерном для ферментированного молочного продукта. Таким образом, лактаза обладает оптимальной активностью как в конце ферментации, так и в процессе хранения ферментированного молочного продукта, подвергнутого или не подвергнутого тепловой обработке, что позволяет уменьшить количество лактазы, необходимое для удаления лактозы из кисломолочного продукта с получением безлактозного продукта, по сравнением с лактазой, обладающей оптимальной активностью при нейтральном рН.

Во-вторых, при добавлении лактазы в начале ферментации с целью получения безлактозного продукта, лактаза повлияет на процесс ферментации, поскольку концентрация лактозы будет снижена по сравнению с ситуацией, в которой лактаза отсутствует, и такое влияние часто сопровождается нежелательными эффектами. Таким образом, при добавлении лактазы в начале ферментации может измениться ряд характеристик ферментации, таких как профиль рН, время и скорость ферментации, углеводный метаболизм молочнокислых бактерий, углеводный состав ферментационной среды и конечное значение рН. Таким образом, при использовании лактаз предшествующего уровня техники изменяются основные характеристики процесса ферментации, и обычно необходимо повторное регулирование работы процесса ферментации.

Это влияние добавления лактазы в начале ферментации особенно выражено при использовании лактазы с оптимальной активностью при нейтральном рН, так как под действием лактазы концентрация лактозы значительно снижается раньше, чем произойдет какое-либо значимое падение рН. Кроме того, настоящее изобретение основано на знании того, что кислая лактаза, обладающая оптимальной активностью при низком рН, будет вызывать основное снижение концентрации лактозы в конце ферментации, и, таким образом, будет сведено к минимуму нежелательное влияние преобразования лактозы под действием лактазы.

В-третьих, в способе получения ферментированного молочного продукта тепловой обработки, если желательно, чтобы ферментативное удаление лактозы происходило в процессе хранения после тепловой обработки, до настоящего времени единственным имеющимся в распоряжении вариантом было добавление лактазы после тепловой обработки, так как лактазы термолабильны. Добавление лактазы после тепловой обработки требует дополнительной специализированной стадии способа и оборудования для стерильного добавления лактазы в обработанный нагреванием ферментированный молочный продукт. Тем не менее, настоящее изобретение основано на дополнительном знании того, что кислая лактаза характеризуется термостойкостью, что в способе, включающем тепловую обработку после ферментации, лактазу можно будет добавлять на стадии способа, предшествующей тепловой обработке, при отсутствии необходимости в стерилизации композиции лактазы.

В-четвертых, настоящее изобретение основано на знании того факта, что кислая лактаза устойчива как к нагреванию, так и к кислым условиям, что обеспечивает возможность применения лактазы в способе любого типа для получения кисломолочного продукта и добавления лактазы на любой стадии любого такого способа, в том числе в начале ферментации, а также и до, и после тепловой обработки кисломолочного продукта. Таким образом, настоящее изобретение обеспечило высокую гибкость в применении. Таким образом, для любого существующего способа и установки для производства кисломолочного продукта можно свободно выбирать, на какой стадии добавлять лактазу без модификации способа и тем самым оптимизировать способ в отношении удаления лактозы. Подобным образом, полная гибкость в применении дает возможность свободно выбирать, какую кислую лактазу использовать так, чтобы оптимизировать способ в отношении удаления лактозы.

Следовательно, настоящее изобретение относится к бактериальному пептиду, проявляющему ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающему оптимальной активностью при рН ниже рН 6,7, например, от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С, и возможно имеющему аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20, либо их ферментативно-активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций.

В родственном аспекте настоящее изобретение относится к бактериальному пептиду, проявляющему ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающему оптимальной активностью при рН ниже рН 5,5, например, от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С, возможно имеющему аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14 или их ферментативно-активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций.

В родственном этому аспекте изобретение относится к пептидам, характеризующимся типом GH42 фермента и имеют оптимум рН ниже рН 6,7, например рН 5,5, и возможно выбранным из перечня, состоящего из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 и 18, либо их ферментативно активных фрагментов, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 и 18, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций.

Еще один родственный аспект изобретения относится к бактериальному пептиду в соответствии с любым из вышеописанных аспектов, в котором пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из SEQ ID NO: 1-20 или последовательностью с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей; или к клетке-хозяину, экспрессирующей любой из указанных пептидов, для получения молочного продукта или производного молочного продукта с пониженным содержанием лактозы.

Пептид по изобретению может иметь происхождение предпочтительно из молочнокислой бактерии, такой как, например, бактерия рода Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.

Предпочтительно ферментативную бета-галактозидазную активность пептида по изобретению определяют путем разведения лактазы в буферном растворе (буферный раствор 50 ммоль NaH₂PO₄, рН 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄) и добавления фермента бета-галактозидазы (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 ммоль натрий-цитратного буферного раствора рН 4,5, содержащего 100 мкмоль MgSO₄) к реакционной смеси, которую готовят путем смешивания 13 мкл разведенного фермента к 37 мкл раствора лактозы, и инкубации в течение 10 мин при 37°С.

Соответственно, настоящее изобретение также относится к способу получения кисломолочного продукта, включающему стадии:

а) обеспечения молочной основы и

б) преобразования молочной основы в кисломолочный продукт, который имеет рН от 3,0 до 5,0, и

в) добавления до, во время или после любой из стадий (а) - (б) бактериального пептида, проявляющего ферментативную активность бета-галактозидазы, который обладает оптимумом активности при рН ниже 6,7, измеренной при 37°С, предпочтительно от 1,0 до 6,0, измеренной при 37°С, более предпочтительно ниже 5,5, измеренной при 37°С, еще более предпочтительно от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С.

Или альтернативно, способ получения кисломолочного продукта включает стадии:

а) обеспечения молочной основы и

б) преобразования молочной основы в кисломолочный продукт, который имеет рН от 3,0 до 5,0, и

в) добавления до, во время или после любой из стадий (а) - (б) бактериального пептида, как раскрыто в настоящем документе.

Способ по настоящему изобретению может дополнительно включать стадию (г) подвергания кисломолочного продукта термообработке для снижения концентрации бактерий до не более 1Х10ехр02 КОЕ (колониеобразующая единица) на г, с получением термообработанного кисломолочного продукта и/или стадию (д) хранения кисломолочного продукта, полученного на стадии (б), или термообработанного кисломолочного продукта, полученного на стадии (в), при температуре по меньшей мере 20°С в течение по меньшей мере 1 суток.

Молочная основа, используемая в настоящем изобретении, может быть преобразована в кисломолочный продукт путем добавления химического подкислителя или преобразована в кисломолочный продукт путем ферментации с заквасочной культурой кисломолочных бактерий. Бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, можно предпочтительно добавлять на стадии (б) или альтернативно между стадиями (б) и (в) и/или между стадиями (в) и (г).

Еще в одном предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к способу, где кисломолочный продукт, содержащий бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, можно хранить при температуре по меньшей мере 20°С, или где кисломолочный продукт, полученный на стадии (б), или термообработанный кисломолочный продукт, полученный на стадии (в), хранят при температуре по меньшей мере 20°С в течение по меньшей мере 3 суток.

Соответственно, настоящее изобретение также относится к кисломолочному продукту, содержащему бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, который обладает оптимумом активности при рН ниже 6,7, измеренной при 37°С, предпочтительно ниже 5,5, измеренной при 37°С, более предпочтительно от 1,0 до 5,0, измеренной при 37°С, еще более предпочтительно от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С.

Настоящее изобретение охватывает кисломолочный продукт, который имеет рН от 3,0 до 5.0, где продукт содержит бактериальный пептид в соответствии с настоящим изобретением.

Дополнительно настоящее изобретение относится к кисломолочному продукту, который имеет рН от 3,0 до 5,0, где продукт содержит бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, который обладает оптимумом активности при рН от 1,0 до 5,5, а также к применению лактазы в способе получения кисломолочного продукта из молочной основы с преобразованием по меньшей мере части присутствующей в молочной основе лактозы в глюкозу и галактозу, где лактаза представляет собой кислую лактазу, обладающую оптимумом активности при рН ниже 6,7, измеренной при 37°С, предпочтительно рН ниже 5,5, измеренной при 37°С, более предпочтительно от 1,0 до 5,0, измеренной при 37°С, еще более предпочтительно от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С.

Охватываемый настоящим изобретением аспект состоит в применении лактазы в способе получения кисломолочного продукта из молочной основы с преобразованием по меньшей мере части присутствующей в молочной основе лактозы в глюкозу и галактозу, где лактаза представляет собой кислую лактазу в соответствии с изобретением.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1. Соотношение активности между отдельными значениями рН (рН 6,7, рН 5,5 и рН 4,5), измеренной при 37°С.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что некоторые пептиды и мультимерные пептиды, проявляющие ферментативную активность бета-галактозидазы, неожиданно стабильны при многих различных физических условиях, обеспечивая относительно высокую активность за пределами диапазонов, которые обычно считают оптимальными для этого класса ферментов.

Кислая лактаза по настоящему изобретению определена как лактаза, которая обладает оптимумом активности ниже рН 6,7, например ниже рН 5,5.

В предпочтительном воплощении изобретения измерение проводят в соответствии со следующим протоколом, описанным более подробно в примерах настоящего документа: Лактазы, например, полученные в виде бесклеточных экстрактов, разводят до 40-кратной концентрации в буферном растворе А (50 мМ буферный раствор NaH₂PO₄ рН 6.7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄). В отдельной реакционной смеси разведенный фермент инкубируют с раствором лактозы, приготовленном в буферном растворе F (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 мМ натрий-цитратном буферном растворе при рН 4,5, рН 5,5 и 6,7 соответственно, содержащем 100 мкмоль MgSO₄). Реакционную смесь готовят путем смешивания 13 мкл разведенного фермента и 37 мкл раствора лактозы в пробирке для ПЦР. Реакционную смесь инкубируют в термоциклере для ДНК, используя следующие параметры инкубации (время реакции; 10 мин при 37°С, инактивация фермента; 10 мин при 95°С, хранение; 4°С). Реакционные смеси хранили при -20°С до дальнейшего использования. Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы при рН 4,5, 5,5 и 6,7 при 37°С. Высокая активность при относительно низком рН при 37°С актуальна для гидролиза лактозы в областях применения для ферментированного молока и гидролиза лактозы кислой молочной сыворотки.

Что касается применимости для ферментированных продуктов, высокое преимущество состоит в том, что описанные в настоящем документе ферменты обладают высокой ферментативной активностью бета-галактозидазы в относительно высоком диапазоне рН, таком как до 4,5, или до 4,0, или до 3,5, или даже до рН 3.

Определения

Термин «бактериальный пептид», используемый в настоящем документе и в контексте настоящего изобретения, следует понимать как пептид бактериального происхождения или пептид, имеющий происхождение из бактерии. В контексте настоящего изобретения предпочтительные бактерии включают молочнокислые бактерии, такие как представители родов Lactobacillus, Lactococcus или Bifidobacterium.

Термин «оптимум активности при рН ниже 6,7, измеренной при 37°С», используемый в настоящем документе и в контексте настоящего изобретения, означает, что данный фермент обладает наибольшей активностью при рН ниже 6,7, таком как, например, от рН 3 до рН 5, где указанную активность измеряют при 37°С. Соответственно, наиболее благоприятное значение рН, при котором фермент наиболее активен, составляет рН ниже 6,7.

Термин «оптимум активности при рН ниже 5,5, измеренной при 37°С», используемый в настоящем документе и в контексте настоящего изобретения, означает, что данный фермент обладает наибольшей активностью при рН ниже 5,5, таком как, например, от рН 3 до рН 5, где указанную активность измеряют при 37°С. Соответственно, наиболее благоприятное значение рН, при котором фермент наиболее активен, составляет рН ниже 5,5.

Термин «оптимум активности при рН от рН 3 до рН 5, измеренной при 37°С», используемый в настоящем документе и в контексте настоящего изобретения, означает, что данный фермент обладает наибольшей активностью при рН от рН 3 до рН 5, где указанную активность измеряют при 37°С. Соответственно, наиболее благоприятное значение рН, при котором фермент наиболее активен, составляет рН от рН 3 до рН 5.

Термин «молоко», используемый в настоящем документе и в контексте настоящего изобретения, следует понимать как секрецию молока, полученную в результате доения любого млекопитающего, такого как корова, овца, коза, буйвол или верблюд.

Термин «содержащая лактозу композиция», используемый в настоящем документе, относится к любой композиции, такой как любая жидкость, которая содержит лактозу в значимом измеряемом количестве, таком как содержание лактозы выше 0,002% (0,002 г/100 мл). Этот термин включает молоко и субстраты на основе молока.

Термин «содержащая сниженное количество лактозы композиция», используемый в настоящем документе, относится к любой композиции, такой как любая жидкость, в которой содержание лактозы ниже 0,002% (0,002 г/100 мл). Этим термином охвачено молоко и субстраты на основе молока с содержанием лактозы ниже 0,002% (0,002 г/100 мл).

Термин «молочный продукт или производимый из молока продукт со сниженным содержанием лактозы», используемый в настоящем документе, относится к молочному продукту или производимому из молока продукту, полученным с содержанием лактозы ниже 0,002% (0,002 г/100 мл).

Термин «субстрат на молочной основе» или «молочная основа» в контексте настоящего изобретения может означать любой свежий и/или обработанный молочный материал. Полезные субстраты на молочной основе включают без ограничений растворы/суспензии любых молочных или молокоподобных продуктов, содержащих лактозу, такие как цельное молоко или молоко низкой жирности, обезжиренное молоко, пахту, молоко с низким содержанием лактозы, восстановленное сухое молоко, сгущенное молоко, растворы сухого молока, ультрапастеризованное (UHT) молоко, молочная сыворотка, пермеат молочной сыворотки, кислая молочная сыворотка, сливки, ферментированные молочные продукты, такие как йогурт, сыр, пищевая добавка и пробиотические пищевые продукты. Как правило, термин «субстрат на молочной основе» относится к свежему или обработанному молочному материалу, который обрабатывают дополнительно с целью получения молочного продукта.

Используемый в настоящем документе термин «пастеризация» относится к способу уменьшения или удаления присутствующих живых организмов, таких как микроорганизмы, в субстрате на молочной основе. Предпочтительно пастеризация достигается путем поддержания заданной температуры в течение заданного периода времени. Заданная температура обычно достигается путем нагревания. Температура и продолжительность могут быть выбраны с целью уничтожения или инактивации некоторых бактерий, таких как вредоносные бактерии, и/или инактивации ферментов в молоке. За этим может следовать стадия быстрого охлаждения.

Термин «молочный продукт», используемый в настоящем документе, может представлять собой любой пищевой продукт, в котором один из основных компонентов основан на молоке. Обычно основной компонент основан на молоке, и в некоторых воплощениях изобретения основной компонент представляет собой субстрат на молочной основе, обработанный ферментом, обладающим активностью бета-галактозидазы в соответствии со способом по настоящему изобретению.

Молочный продукт в соответствии с изобретением может представлять собой, например, обезжиренное молоко, молоко низкой жирности, цельное молоко, сливки, UHT-молоко, молоко с длительным сроком годности, ферментированный молочный продукт, сыр, йогурт, сливочное масло, молочный спред, пахту, кисломолочный напиток, сметану, напиток на основе молочной сыворотки, мороженое, сгущенное молоко, вареное сгущенное молоко или ароматизированный молочный напиток.

Молочный продукт может дополнительно содержать немолочные компоненты, например растительные компоненты, такие как, например, растительное масло, растительный белок и/или растительные углеводы. Молочные продукты могут также содержать дополнительные добавки, такие как, например, ферменты, вкусоароматические добавки, культуры микроорганизмов, такие как пробиотические культуры, соли, подсластители, сахара, кислоты, фрукты, фруктовые заготовки, фруктовые соки или любой другой компонент, известный в данной области техники как компонент или добавка к молочному продукту.

Термины «ферментированный молочный продукт» или «продукт из ферментированного молока», используемые в настоящем документе, следует понимать как любой молочный продукт, полученный в технологическом процессе, в состав которого входит любой тип ферментации. Примерами ферментированных молочных продуктов являются продукты, такие как йогурт, пахта, крем фреш, кварк и мягкие сорта сыра. Ферментированный молочный продукт может быть получен любым способом, известным в данной области техники или включающим известные в данной области техники стадии.

Термин «ферментация», используемый в настоящем документе, относится к преобразованию углеводов в спирты или кислоты под действием микроорганизма. В некоторых воплощениях изобретения ферментация в соответствии с настоящим изобретением включает преобразование лактозы в молочную кислоту. В контексте настоящего изобретения «микроорганизм» может включать любую бактерию или гриб, способные ферментировать молочный субстрат.

Термин «пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы», используемый в настоящем документе, относится к любому пептиду, обладающему ферментативной активностью, каталзирующей гидролиз дисахарида лактозы до его составляющих моносахаридов глюкозы и галактозы. Этот пептид может быть также обозначен как лактаза или просто бета-галактозидаза (ЕС: 3.2.1.23).

Термины «пептид» и «олигопептид», используемые в контексте настоящей заявки, считают синонимами (что является общепризнанным), и каждый из этих терминов может использоваться взаимозаменяемо, если в контексте требуется указать цепь из по меньшей мере двух аминокислот, соединенных пептидными связями. Для цепей, содержащих более десяти аминокислотных остатков, в настоящем документе используется слово «полипептид». В настоящем документе все формулы или последовательности пептидов и полипептидов написаны слева направо в направлении от амино-конца к карбокси-концу. «Белки» при использовании в настоящем документе относятся к пептидным последовательностям в том виде, в котором они получены из организма-хозяина, и могут включать посттрансляционную модификацию, такую как присоединенные гликаны.

Термин «аминокислота» или «аминокислотная последовательность» при использовании в настоящем документе относится к последовательности олигопептида, пептида, полипептида или белка или к фрагменту любой из них и к природным или синтетическим молекулам. В этом контексте «фрагмент» относится к фрагментам пептида, проявляющим ферментативную активность бета-галактозидазы, которые сохраняют некоторую ферментативную активность. Если в настоящем документе термин «аминокислотная последовательность» используется по отношению к аминокислотной последовательности молекулы белка природного происхождения, «аминокислотная последовательность» и подобные термины не подразумевают как ограничивающие аминокислотную последовательность полноразмерной нативной аминокислотной последовательностью, соответствующей указанной молекуле пептида.

Иллюстративные пептиды по изобретению также включают фрагменты длиной по меньшей мере около 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 900, 1000, 1100 или более остатков, либо превышающей всю длину фермента. Соответственно, «пептидный фрагмент» или «ферментативно-активный фрагмент» по изобретению представляют собой фрагменты, которые сохраняют по меньшей мере некоторую ферментативную активность. Как правило, пептидный фрагмент по изобретению будет все еще содержать функциональный каталитический домен или другие существенные активные центры пептида, проявляющие ферментативную активность бета-галактозидазы. Другие домены могут быть делетированы.

Если не указано иное, термин «идентичность последовательности», используемый в настоящем документе по отношению к аминокислотам, относится к идентичности последовательности, рассчитанной как (n_ref-n_dif)⋅100/n_ref, где n_dif представляет собой общее число неидентичных остатков в двух последовательностях при их выравнивании, и где n_ref представляет собой число остатков в одной из последовательностей.

В некоторых воплощениях изобретения идентичность последовательности определяют традиционными способами, например, Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, путем поиска подобия методом Pearson & Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444, используя алгоритм CLUSTAL W Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Res 22:467380, путем компьютерного применения этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программ Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group). Можно также использовать алгоритм BLAST (Altschul et al., 1990, Mol. Biol. 215:403-10), для которого можно получить программное обеспечение посредством Национального центра биотехнологической информации www.ncbi.nlm.nih.gov/). При использовании любого из вышеупомянутых алгоритмов используют параметры по умолчанию для длины «окна», штрафа на введение гэпа, на удлинение гэпа и т.д.

Пептид с конкретной аминокислотной последовательностью, как описано в настоящем документе, может отличаться от пептидной последовательности сравнения любой из замен, добавлений/вставок или делеций аминокислот.

Некоторые воплощения в соответствии с настоящим изобретением относятся к применению пептида с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 1-20, или последовательностью с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей. В некоторых воплощениях изобретения эта идентичность последовательности может составлять по меньшей мере около 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%, так что пептид имеет не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций по сравнению с любой из аминокислотных последовательностей сравнения, представленных SEQ ID NO: 1-20. Элементами изобретения также являются биологически активные фрагменты пептидов в соответствии с изобретением. Биологически активные фрагменты пептида по изобретению включают пептиды, содержащие аминокислотные последовательности, по существу идентичные аминокислотной последовательности пептида по изобретению или полученные из нее, которые включают в себя меньше аминокислот, чем полноразмерный белок, но проявляют существенную часть биологической активности соответствующего полноразмерного пептида. Как правило, биологически активные фрагменты содержат домен или мотив по меньшей мере с одной активностью варианта белка по изобретению. Биологически активный фрагмент пептида по изобретению может представлять собой пептид, длина которого составляет, например, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100 или более аминокислот.

Используемый в настоящем документе термин «клетка-хозяин» включает клетку любого типа, подверженную трансформации, трансфекции, трансдукции и т.п. нуклеиново-кислотной конструкцией или экспрессионным вектором, которые содержат полинуклеотид, кодирующий пептиды по настоящему изобретению. Клетка-хозяин может представлять собой клетку любого типа, из которой получают конкретный фермент, или альтернативно клетку такого типа, который склонен к продуцированию конкретного фермента. Этот термин включает и штаммы дикого типа, и аттенуированные штаммы.

Подходящей клеткой-хозяином может быть любая бактерия, включающая молочнокислые бактерии в пределах порядка Lactobacillales, который включает Lactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Pseudoleuconostoc spp., Pediococcus spp., Brevibacterium spp., Enterococcus spp. и Propionibacterium spp. Она также включает продуцирующие молочную кислоту бактерии, относящиеся к группе анаэробных бактерий, бифидобактерий, т.е. Bifidobacterium spp., часто используемых в качестве пищевых культур отдельно или в комбинации с молочнокислыми бактериями. В это определение также включают Lactococcus lactis, Lactococcus lactis subsp. cremoris, Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Pseudoleuconostoc mesenteroides subsp. cremoris, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis subsp.lactis biovar. diacetylactis, Lactobacillus casei subsp.casei и Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei и виды термофильных молочнокислых бактерий, включающие в качестве примеров Streptococcus thermophilus, Enterococcus faecium, Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и Lactobacillus acidophilus. Другие конкретные бактерии в пределах этого определения включают бактерии семейства Bifidobacteriaceae, например из рода Bifidobacterium, например штаммы Bifidobacterium animalis или Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium bifodum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium infiantus, или из рода Lactobacillus, например L. sakei, L. amylovorus, L. delbrueckii subsp. Lactis и L. helveticus.

В данное определение клеток-хозяев также включают штамм Agaricus, например А. bisporus; Ascovaginospora; Aspergillus, например A. niger, A. awamori, A. foetidus, A. japonicus, A. oryzae; Candida; Chaetomium; Chaetotomastia; Dictyostelium, например D. discoideum; Kluveromyces, например K. firagilis, K. lactis; Mucor, например M. javanicus, M. mucedo, M. subtilissimus; Neurospora, например N. crassa; Rhizomucor, например R. pusillus; Rhizopus, например R. arrhizus, R. japonicus, R. stolonifier; Sclerotinia, например S. libertiana; Torula; Torulopsis; Trichophyton, например Т. rubrum; Whetzelinia, например W. sclerotiorum; Bacillus, например В. coagulans, В. circulans, В. megaterium, В. novalis, В. subtilis, В. pumilus, В. stearothermophilus, В. thuringiensis; Bifidobacterium, например В. Iongum, В. bifidum, В. animalis; Chryseobacterium; Citrobacter, например С.freundii; Clostridium, например С.perfiringens; Diplodia, например D. gossypina; Enterobacter, например E. aerogenes, E. cloacae Edwardsiella, E. tarda; Erwinia, например E. herbicola; Escherichia, например E. coli; Klebsiella, например К. pneumoniae; Miriococcum; Myrothesium; Mucor; Neurospora, например N. crassa; Proteus, например P. vulgaris; Providencia, например P. stuartii; Pycnoporus, например Pycnoporus cinnabarinus, Pycnoporus sanguineus; Ruminococcus, например R. torques; Salmonella, например S. typhimurium; Serratia, например S. liquefiasciens, S. marcescens; Shigella, например S. flexneri; Streptomyces, например S. antibioticus, S. castaneoglobisporus, S. violeceoruber; Trametes; Trichoderma, например Т. reesei, Т. viride; Corynebacteria; Pichia; Saccharomyces; Hansenula; Yersinia, например Y. enterocolitica.

Последовательности

SEQ ID No 1: G1

SEQ ID No 2: G3

SEQ ID No 3: G32

SEQ ID No 4: G39

SEQ ID No 5 (G40 домен a)

SEQ ID No. 6 (G40 домен b)

SEQ ID No 7: G46

SEQ ID No 8: G60

SEQ ID No 9: G62

SEQ ID No 10: G67

SEQ ID No 11: G137

SEQ ID No 12: G140

SEQ ID No 13: G162

SEQ ID No 14: G166

SEQ ID No 15: G169

SEQ ID No 16: G217

SEQ ID No 17: G262

SEQ ID No 18: G311

SEQ ID No 19. (G330 домен a)

SEQ ID No 20: (G330 домен b)

SEQ ID No 21: G500 (фермент сравнения)

SEQ ID No 22: G600 (фермент сравнения)

ПРИМЕРЫ

Общие материалы и методы

Молекулярное клонирование и генетические методики

Методики расщепления ферментами рестрикции, лигирования, трансформации и других стандартных молекулярно-биологических манипуляций были основаны на методах, описанных в литературе (Maniatis et al. Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989; Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY 2001; Miller, Experiment in molecular genetics, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1972); или предложены производителем. Полимеразную цепную реакцию (ПНР) проводили в термоциклере ДНК, полученном от компании Bio-Rad, США. Секвенирование ДНК было выполнено компанией LGC, г. Берлин, Германия. Белки анализировали методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ электрофорез) в денатурирующих условиях с использованием додецилсульфата натрия в гелях, содержащих 10% ДСН (гель Mini-PROTEAN® TGX stain-free™, Biorad, США). Концентрации белка определяли с использованием метода с бицинхониновой кислотой (ВСА), следуя протоколу, поставляемому с набором.

Штаммы бактерий, плазмиды и условия роста

Для клонирования и выделения плазмид использовали штамм Escherichia coli ТОР10 (Invitrogen). Для продукции рекомбинантного белка использовали штамм Е. coli BW25113 с дефицитом по бета-галактозидазе (Δ(araD-araB)567, ΔlacZ4787(::rrnB-3), λ-, rph-1, Δ(rhaD-rhaB)568, hsdR514) (Datsenko KA, Wanner BL; 2000, Proc Natl Acad Sci U.S.A. 97: 6640-6645) в комбинации с вектором pBAD/His, полученным от компании Invitrogen™ Life Technologies Corporation Europe BV.

Среда для выращивания для экспрессии белка

Для продукции рекомбинантного белка использовали среду 2xPY, содержащую (16 г/л пептона BD BBL™ Phyton ТМ, 10 г/л дрожжевого экстракта, 5 г/л NaCl). В среду для выращивания добавляли ампициллин (100 мкг/мл) для поддержания плазмиды. Продукцию белка инициировали добавлением 0,05% арабинозы в культуральную среду.

Пример 1. Конструирование экспрессионного вектора для продукции лактаз

Геномную ДНК молочнокислых бактерий или бифидобактерий экстрагировали с помощью коммерческого набора для геномной экстракции, следуя стандартному протоколу (DNeasy, Qiagen, Германия). Ген лактазы амплифипировали методом ПЦР, используя два синтетических праймера, очищенную исходную геномную ДНК в качестве биомассы и реактивы для ПЦР, поставляемые в наборе с ДНК-полимеразой Phusion U Hot start (Thermo Scientific, США). Ген лактазы клонировали в стартовый кодон экспрессионного вектора pBAD/His, используя метод клонирования USER (Nour-Eldin НН, Geu-Flores F, Halkier BA, Plant Secondary Metabolism Engineering, Methods in Molecular Biology, 643; 2010), с получением в результате экспрессионной конструкции. В методе клонирования USER создают длинные комплементарные «липкие» концы и в продукте ПЦР, и в векторе назначения. Эти «липкие» концы могут претерпевать отжиг друг с другом с образованием стабильного продукта гибридизации, который использовали для трансформации в Е. coli без лигирования. Для создания «липких» концов в продукте ПЦР в левый участок каждого праймера для амплификации ДНК-мишени одного остатка дезоксиуридина. Ген лактазы амплифицировали с использованием прямого праймера (5'-ATTAACCAUGCGACGCAACTTCGAATGGCC-3') и обратного праймера (ATCTTCTCUTTACCGCCTTACCACGAGCACG), содержащих уридин в 9-м положении (показано полужирным шрифтом) с последующим секвенированием гена лактазы. Параллельно векторную ДНК амплифицировали методом ПЦР, используя пару прямого (5'-AGAGAAGAUTTTCAGCCTGATACAGATTAAATC-3') и обратного праймеров (5'-ATGGTTAAUTCCTCCTGTTAGCCCAAAAAACGG-3'), содержащих по одному остатку дезоксиурацила в 9-х положениях (выделено полужирным шрифтом) с последующим секвенированием векторной ДНК. Продукты ПЦР очищали, используя коммерческий набор для очистки продуктов ПЦР (Qiagen, Дания). Очищенные продукты ПЦР (ген лактазы и векторную ДНК) смешивали в эквимолярном количестве и инкубировали с коммерческой смесью ферментов USER (New England Biolabs, США), следуя протоколу поставщика. Эти ферменты удаляют остаток урацила, а также короткий фрагмент выше уридина, в результате чего в продуктах ПЦР образуются комплементарные «липкие» концы. Эти комплементарные «липкие» концы претерпевают отжиг друг с другом, в результате чего получают экспрессионный вектор гена лактазы pBAD. Аликвоты смеси для лигирования трансформировали в химически компетентные клетки Е. coli ТОР 10. Трансформанты отбирали при 37°С на чашках со средой LB-Amp (LB; среда Лурия-Бертани, Amp; 100 мкг/мл ампициллина). На следующий день проводили ПЦР колоний, используя небольшое количество биомассы из ночной культуры трансформанта и векторные праймеры (праймер 1: 5'-CGGCGTCACACTTTGCTATGCC-3' и прайиер 2: 5'-CCGCGCTACTGCCGCCAGGC-3'). Клоны, давшие положительный результат ПЦР колоний, культивировали в 5 мл среды LB-Amp и выделяли плазмидную ДНК из клеток. Клонированный ген лактазы секвенировали, чтобы удостовериться, что в процессе амплификации гена не было введено дополнительных мутаций. Плазмидной ДНК трансформировали экспрессионный штамм-хозяин Е. coli BW25113.

Пример 2. Экспрессия лактаз в экспрессионном штамме-хозяине Е. coli

Фермент лактазу продуцировали в штамме Е. coli BW25113 с использованием экспрессионной системы pBAD. Трансформированные клетки Е. coli BW25113, несущие плазмидную ДНК, собирали свежими с чашки со средой Lb-Amp с помощью стерильной петли и использовали для инокуляции 5 мл среды Lb-Amp.Выросшую ночную культуру (200 мкл) использовали для инокуляции 50 мл 2-кратной среды PY, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, в колбе вместимостью 250 мл на качалке (Innova® 42). Культуру выращивали при 37°С при 220 об/мин до достижения оптической плотности (OD)600 0,6-0,8. Экспрессию лактазы инициировали добавлением в питательную среду 0,05% арабинозы и дополнительно культивировали клетки в течение 16-20 часов при 18°С при 180 об/мин. Клетки собирали центрифугированием (5000 об/мин, 10 мин при 4°С) и хранили при -20°С до дальнейшего использования.

Пример 3. Определение активности с использованием ферментов на лактозе в качестве субстрата при рН 6,7 при 37°С

Для измерения активности бета-галактозидазы лактазы разводили до 40-кратной концентрации в буферном растворе А (50 мМ буферный раствор NaH₂PO₄ рН 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄). В отдельной реакционной смеси разведенный фермент инкубировали с раствором лактозы, приготовленном в буферном растворе В (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 мМ натрий-цитратном буферном растворе при рН 6,7, содержащем 100 мкмоль MgSO₄. Реакционную смесь готовили путем смешивания 13 мкл разведенного фермента и 37 мкл раствора лактозы в пробирке для ПЦР. Реакционную смесь инкубировали в термоциклере для ДНК, используя следующие параметры инкубации (время реакции; 10 мин при 37°С, инактивация фермента; 10 мин при 95°С, охлаждение; 4°С). Реакционные смеси хранили при -20°С до дальнейшего использования. Чтобы определить количество глюкозы, образовавшейся в ходе реакции, 10 мкл реакционной смеси переносили в одну лунку стандартного микротитрационного планшета (Thermo Fischer Scientific, Дания), содержащего 80 мкл буферного раствора С (100 мМ буферный раствор NaH₂PO₄, рН 7,0, содержащий глюкозооксидазу 0,6 г/л (Sigma Aldrich), 2,2'-азино-бис(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты диаммонийная соль) (ABTS) 1,0 г/л (Sigma Aldrich), пероксидазу хрена 0,02 г/л (Sigma Adrich)), и инкубировали при 30°С в течение 40 мин. Через 40 мин определяли оптическую плотность при 610 нм, используя считывающее устройство для планшетов SpectroStar Omega UV (BMG Labtech, Германия). Для расчетов использовали значения оптической плотности от 0,1 до 1,5; если значение А610 нм превышало 1,5, реакционную смесь разводили до 10-кратной концентрации буферным раствором А. С каждым ферментом реакции проводили в трех повторах и использовали для расчетов среднее значение измерения этих трех повторов. Для нормализации использовали очистку белка, выполненную с клетками Е. coli, трансформированные вектором pBAD/His без вставки. Используя известную концентрацию глюкозы (0-2,5 ммоль), строили стандартную кривую и использовали наклон этой кривой для расчета количества глюкозы, образовавшейся в ходе реакции. Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой при рН и 6,7 при 37°С, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы. Активность последовательностей сравнения SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22 определяли в аналогичных условиях.

Пример 4. Определение активности с использованием ферментов на лактозе в качестве субстрата при рН 5,5 при 37°С

Лактазы разводили до 40-кратной концентрации в буферном растворе А (50 мМ буферный раствор NaH₂PO₄ рН 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄). В отдельной реакционной смеси разведенный фермент инкубировали с раствором лактозы, приготовленном в буферном растворе E (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 мМ натрий-цитратном буферном растворе при рН 5,5, содержащем 100 мкмоль MgSO₄). Реакционную смесь готовили путем смешивания 13 мкл разведенного фермента и 37 мкл раствора лактозы в пробирке для ПЦР. Реакционную смесь инкубировали в термоциклере для ДНК, используя следующие параметры инкубации (время реакции 10 мин при 37°С, инактивация фермента 10 мин при 95°С, хранение 4°С). Реакционные смеси хранили при -20°С до дальнейшего использования. Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой при рН и 5,5 при 37°С, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы. Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой при рН и 5,5 при 37°С, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы. Активность последовательностей сравнения SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22 определяли в аналогичных условиях.

Пример 5. Определение активности с использованием ферментов на лактозе в качестве субстрата при рН 4,5 при 37°С

Лактазы разводили до 40-кратной концентрации в буферном растворе А (50 мМ буферный раствор NaH₂PO₄ рН 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄). В отдельной реакционной смеси разведенный фермент инкубировали с раствором лактозы, приготовленном в буферном растворе F (140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 мМ натрий-цитратном буферном растворе при рН 4,5, содержащем 100 мкмоль MgSO₄). Реакционную смесь готовили путем смешивания 13 мкл разведенного фермента и 37 мкл раствора лактозы в пробирке для ПЦР. Реакционную смесь инкубировали в термоциклере для ДНК, используя следующие параметры инкубации (время реакции 10 мин при 37°С, инактивация фермента 10 мин при 95°С, хранение 4°С). Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой при рН и 4,5 при 37°С, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы. Чтобы определить количество мкмоль глюкозы, образовавшееся в минуту, описываемое как 1 единица активности с лактозой при рН и 4,5 при 37°С, использовали максимальное значение оптической плотности для каждой лактазы. Активность последовательностей сравнения SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22 определяли в аналогичных условиях.

--->

Список последовательностей

<110> Chr. Hansen A/S

<120> LACTASE ENZYMES WITH IMPROVED PROPERTIES AT ACIDIC PH

<130> P6706

<150> EP18200994.4

<151> 2018-10-17

<160> 28

<170> BiSSAP 1.3.5

<210> 1

<211> 698

<212> PRT

<213> Bifidobacterium adolescentis

<400> 1

Met Arg Arg Asn Phe Glu Trp Pro Lys Leu Leu Thr Ala Asp Gly Arg

1 5 10 15

Gly Ile Ala Phe Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Ser Glu Asp

20 25 30

Ile Trp Asp Asp Asp Ile Arg Leu Met Lys Gln Ala Gly Val Asn Thr

35 40 45

Val Ala Leu Ala Ile Phe Ser Trp Asp Arg Ile Gln Pro Thr Glu Asp

50 55 60

Arg Trp Asp Phe Gly Trp Leu Asp Arg Ile Ile Asp Lys Leu Gly Asn

65 70 75 80

Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Thr Ala Pro Leu

85 90 95

Trp Leu Tyr Glu Ser His Pro Glu Val Leu Pro Arg Asp Lys Tyr Gly

100 105 110

His Pro Val Asn Ala Gly Ser Arg Gln Ser Trp Ser Pro Thr Ser Pro

115 120 125

Val Phe Lys Glu Tyr Ala Leu Thr Leu Cys Arg Lys Leu Ala Glu Arg

130 135 140

Tyr Gly Thr Asn Pro Tyr Val Thr Ala Trp His Met Gly Asn Glu Tyr

145 150 155 160

Gly Trp Asn Asn Arg Glu Asp Tyr Ser Asp Asn Ala Leu Asp Ala Phe

165 170 175

Arg Ala Trp Cys Arg Arg Lys Tyr Gly Thr Ile Gly Ala Leu Asn Gln

180 185 190

Ala Trp Gly Thr Thr Phe Trp Gly Gln Glu Met Asn Gly Phe Asp Glu

195 200 205

Val Leu Ile Pro Arg Phe Met Gly Ala Asp Ser Met Val Asn Pro Gly

210 215 220

Gln Lys Leu Asp Phe Glu Arg Phe Gly Asn Asp Met Leu Leu Asp Phe

225 230 235 240

Tyr Lys Ala Glu Arg Asp Ala Ile Ala Glu Ile Cys Pro Asp Lys Pro

245 250 255

Phe Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Thr Asp Gln Cys Cys Met Asp Tyr

260 265 270

Ala Ala Trp Ala Glu Glu Val Asn Phe Val Ser Asn Asp His Tyr Phe

275 280 285

His Glu Gly Glu Ser His Leu Asp Glu Leu Ala Cys Ser Asp Ala Leu

290 295 300

Met Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Pro Trp Tyr Val Met Glu His Ser

305 310 315 320

Thr Ser Ala Val Gln Trp Lys Pro Leu Asn Thr Arg Lys Arg Lys Gly

325 330 335

Glu Thr Val Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala Asp Ala

340 345 350

Ile Asn Phe Phe Gln Trp Arg Ala Ser Ala Phe Gly Ala Glu Ser Phe

355 360 365

His Ser Ala Met Val Pro His Ala Gly Glu Asp Thr Lys Leu Phe Arg

370 375 380

Gln Val Cys Glu Leu Gly Ala Ser Leu His Thr Leu Ala Asp Ala Gly

385 390 395 400

Val Gln Gly Thr Glu Leu Ala His Ser Asp Thr Ala Ile Leu Phe Ser

405 410 415

Ala Glu Ser Glu Trp Ala Thr Arg Ser Gln Thr Leu Pro Ser Met Lys

420 425 430

Leu Asn His Trp His Asp Val Arg Asp Trp Tyr Arg Ala Phe Leu Asn

435 440 445

Ala Gly Ser Arg Ala Asp Ile Val Pro Leu Ala Tyr Asp Trp Ser Ser

450 455 460

Tyr Lys Thr Val Val Leu Pro Thr Val Leu Ile Leu Ser Ala Ala Asp

465 470 475 480

Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly Arg Val Val Val

485 490 495

Gly Tyr Ala Thr Gly Leu Ile Asp Glu His Phe His Thr Trp Leu Gly

500 505 510

Gly Tyr Pro Gly Ala Gly Asp Gly Leu Leu Arg Ser Met Leu Gly Val

515 520 525

Arg Gly Glu Glu Phe Asn Ile Leu Gly Ala Glu Ala Glu Gly Glu Pro

530 535 540

Gly Glu Ile Arg Leu Ser Ser Ala Asp Asp Ser Ala Ala Leu Asp Gly

545 550 555 560

Thr Thr Thr Arg Leu Trp Gln Asn Asp Val Asn Val Thr Gly Glu His

565 570 575

Ala Gln Val Leu Ala Thr Tyr Ala Gly Glu Glu Ala Asp Glu Trp Glu

580 585 590

Leu Asp Gly Thr Ala Ala Val Thr Arg Asn Pro Tyr Gly Ser Gly Glu

595 600 605

Ala Tyr Phe Val Gly Cys Asp Leu Asp Val Ala Asp Leu Thr Lys Leu

610 615 620

Val Arg Ala Tyr Leu Ala Ala Pro Ser Gln Asp Asn Ala Asp Val Leu

625 630 635 640

His Thr Val Arg Glu Ser Ala Asp Ala Thr Phe Asp Phe Tyr Leu Pro

645 650 655

Arg Gly Lys Glu Thr Val Glu Leu Gln Gly Ile Glu Gly Glu Pro Val

660 665 670

Ile Leu Phe Gln Thr Glu Arg Gly Lys Lys Pro Gly Ser Tyr Thr Val

675 680 685

His Arg Asn Gly Val Leu Val Val Arg Arg

690 695

<210> 2

<211> 690

<212> PRT

<213> Bifidobacterium adolescentis

<400> 2

Met Asn Gln Arg Arg Glu His Arg Trp Pro Arg Pro Leu Glu Gly Arg

1 5 10 15

Arg Ala Arg Ile Trp Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Glu Val Trp Asp Glu Asp Val Arg Leu Met Val Lys Ala Gly Val

35 40 45

Asn Leu Val Ser Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Lys Ile Glu Pro Arg

50 55 60

Glu Asp Met Tyr Asp Phe Gly Trp Leu Asp Arg Ile Ile Asp Lys Leu

65 70 75 80

Gly Lys Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Ser Pro

85 90 95

Pro Met Trp Leu Thr Gln Ala His Pro Glu Val Leu Trp Lys Asp Tyr

100 105 110

Arg Gly Asp Val Cys Gln Pro Gly Ala Arg Gln His Trp Arg Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Phe Cys Glu Tyr Ala Leu Lys Leu Cys Arg Ala Met Ala

130 135 140

Glu His Tyr Lys Asp Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Val Gly Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Cys His Asn Arg Phe Asp Tyr Ser Glu Asp Ala Glu Arg

165 170 175

Ala Phe Gln Asp Trp Cys Glu Glu Arg Tyr Gly Thr Ile Glu Ala Val

180 185 190

Asn Asp Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ala Gln His Leu Asn Asp Phe

195 200 205

Ser Glu Ile Val Pro Pro Arg Phe Ile Gly Asp Gly Asn Phe Met Asn

210 215 220

Pro Gly Lys Leu Leu Asp Phe Lys Arg Phe Ser Ser Asp Ala Leu Lys

225 230 235 240

Ser Phe Tyr Val Ala Glu Arg Asp Ala Leu Ala Glu Ile Thr Pro Glu

245 250 255

Lys Pro Leu Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Ala Gly Gly Ser Val Leu

260 265 270

Asp Tyr Asp Asp Trp Gly Gly Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe Ile Pro Gly Glu Ala His Leu Asp Glu Leu Ala Phe Ser Ala

290 295 300

Ser Leu Val Asp Gly Ile Ser Arg Lys Asp Pro Trp Phe Leu Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Asn Trp Arg Pro Ile Asn Tyr Arg Lys Glu

325 330 335

Pro Gly Gln Leu Val Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Val Cys Tyr Phe Gln Trp Arg Gln Ser Arg Ser Gly Ala Glu

355 360 365

Lys Phe His Ser Ala Met Leu Pro His Ala Gly Glu Asp Ser Gln Thr

370 375 380

Phe Arg Asp Val Cys Glu Leu Gly Arg Asp Leu Gly Thr Leu Ala Asp

385 390 395 400

Glu Gly Leu Leu Gly Thr Lys Leu Ala Lys Ser Ser Val Ala Ile Val

405 410 415

Phe Asp Tyr Glu Ser Glu Trp Ala Ser Glu His Thr Ala Thr Pro Thr

420 425 430

Gln Asn Val His His Ile Asp Glu Pro Leu Ala Trp Phe Arg Ala Leu

435 440 445

Ala Asp Val Gly Val Thr Ala Asp Val Val Pro Ile Arg Ser Asn Trp

450 455 460

Asp Glu Tyr Asp Val Ala Ile Leu Pro Ser Val Tyr Ile Leu Ser Glu

465 470 475 480

Glu Asn Thr Arg Arg Val Arg Asp Tyr Val Ala Asn Gly Gly Lys Leu

485 490 495

Ile Ala Thr Tyr Tyr Thr Gly Ile Ser Asp Glu Arg Asp His Val Trp

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ser Ile Arg Asp Val Val Gly Val Arg Ile

515 520 525

Glu Glu Phe Ala Pro Met Gly Ser Asp Trp Pro Gly Val Pro Asp His

530 535 540

Leu Asp Leu Asp Asn Gly Ala Val Ala His Asp Ile Val Asp Val Ile

545 550 555 560

Gly Ser Ile Gly Lys Asp Ala Lys Val Leu Ala Ser Phe Lys Asp Asp

565 570 575

Pro Trp Thr Gly Met Asp Gly Arg Pro Ala Ile Val Ser Asn Pro Tyr

580 585 590

Gly Glu Gly Arg Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Leu Gly Arg Asp Gly

595 600 605

Ile Ala Arg Ser Leu Pro Met Ile Leu Glu Thr Leu Gly Val Glu Val

610 615 620

Lys Asp Ser Ser Asp Pro Asp Leu Leu Arg Ile Glu Arg Val Asp Glu

625 630 635 640

Ser Thr Gly Ala Arg Phe Thr Phe Leu Phe Asn Arg Thr Lys Glu Pro

645 650 655

Val Ser Met Leu Val Glu Gly Arg Pro Val Val Met Ser Leu Ala Asp

660 665 670

Cys Ala Gly Ala Thr Val Thr Ile Asn Pro Asn Gly Val Leu Val Val

675 680 685

Lys Gln

690

<210> 3

<211> 698

<212> PRT

<213> Bifidobacterium adolescentis

<400> 3

Met Arg Arg Asn Phe Glu Trp Pro Lys Leu Leu Thr Ala Asp Gly Arg

1 5 10 15

Gly Ile Ala Phe Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Ser Glu Asp

20 25 30

Ile Trp Asp Asp Asp Ile Arg Leu Met Lys Gln Ala Gly Val Asn Thr

35 40 45

Val Ala Leu Ala Ile Phe Ser Trp Asp Arg Ile Gln Pro Thr Glu Asp

50 55 60

Arg Trp Asp Phe Gly Trp Leu Asp Arg Ile Ile Asp Lys Leu Gly Asn

65 70 75 80

Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Thr Ala Pro Leu

85 90 95

Trp Leu Tyr Glu Ser His Pro Glu Val Leu Pro Arg Asp Lys Tyr Gly

100 105 110

His Pro Val Asn Ala Gly Ser Arg Gln Ser Trp Ser Pro Thr Ser Pro

115 120 125

Val Phe Lys Glu Tyr Ala Leu Thr Leu Cys Arg Lys Leu Ala Glu Arg

130 135 140

Tyr Gly Thr Asn Pro Tyr Val Thr Ala Trp His Met Gly Asn Glu Tyr

145 150 155 160

Gly Trp Asn Asn Arg Glu Asp Tyr Ser Asp Asn Ala Leu Asp Ala Phe

165 170 175

Arg Ala Trp Cys Arg Arg Lys Tyr Gly Thr Ile Gly Ala Leu Asn Gln

180 185 190

Ala Trp Gly Thr Thr Phe Trp Gly Gln Glu Met Asn Gly Phe Asp Glu

195 200 205

Val Leu Ile Pro Arg Phe Met Gly Ala Asp Ser Met Val Asn Pro Gly

210 215 220

Gln Lys Leu Asp Phe Glu Arg Phe Gly Asn Asp Met Leu Leu Asp Phe

225 230 235 240

Tyr Lys Ala Glu Arg Asp Ala Ile Ala Glu Ile Cys Pro Asp Lys Pro

245 250 255

Phe Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Thr Asp Gln Cys Cys Met Asp Tyr

260 265 270

Ala Ala Trp Ala Glu Glu Val Asn Phe Val Ser Asn Asp His Tyr Phe

275 280 285

His Glu Gly Lys Ser His Leu Asn Lys Leu Ala Cys Ser Asp Ala Leu

290 295 300

Met Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Pro Trp Tyr Val Met Glu His Ser

305 310 315 320

Thr Ser Ala Val Gln Trp Lys Pro Leu Asn Thr Arg Lys Arg Lys Gly

325 330 335

Glu Thr Val Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala Asp Ala

340 345 350

Ile Asn Phe Phe Gln Trp Arg Ala Ser Ala Phe Gly Ala Glu Ser Phe

355 360 365

His Ser Ala Met Val Pro His Ala Gly Glu Asp Thr Lys Leu Phe Arg

370 375 380

Gln Val Cys Glu Leu Gly Ala Ser Leu His Thr Leu Ala Asp Ala Gly

385 390 395 400

Val Gln Gly Thr Glu Leu Ala His Ser Asp Thr Ala Ile Leu Phe Ser

405 410 415

Ala Glu Ser Glu Gln Ala Thr Arg Ser Gln Thr Leu Pro Ser Met Lys

420 425 430

Leu Asn His Trp His Asp Val Arg Asp Trp Tyr Arg Ala Phe Leu Asp

435 440 445

Ala Gly Ser Arg Ala Asp Ile Val Pro Leu Ala Tyr Asp Trp Ser Ser

450 455 460

Tyr Lys Thr Val Val Leu Pro Thr Val Leu Ile Leu Ser Ala Ala Asp

465 470 475 480

Thr Gln Arg Leu Ala Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly Arg Val Val Ile

485 490 495

Gly Tyr Ala Thr Gly Leu Ile Asp Glu His Phe His Thr Trp Leu Gly

500 505 510

Gly Tyr Pro Gly Ala Gly Asp Gly Leu Leu Arg Leu Met Leu Gly Val

515 520 525

Arg Gly Glu Glu Phe Asn Ile Leu Gly Ala Glu Ala Glu Gly Glu Pro

530 535 540

Ser Glu Ile Arg Leu Ala Ser Ala Asp Asp Ser Val Ala Met Asp Gly

545 550 555 560

Ser Thr Thr Arg Leu Trp Gln Asn Asp Val Asn Val Thr Gly Glu His

565 570 575

Ala Gln Val Leu Ala Thr Tyr Ala Gly Glu Glu Ala Asp Glu Trp Glu

580 585 590

Leu Asp Gly Thr Ala Ala Val Thr Arg Asn Pro Tyr Gly Ser Gly Glu

595 600 605

Ala Tyr Phe Val Gly Cys Asp Leu Asp Val Ala Asp Leu Thr Lys Leu

610 615 620

Val Arg Ala Tyr Leu Ala Ala Pro Ser Gln Asp Asn Ala Asp Val Leu

625 630 635 640

His Thr Val Arg Glu Ser Ala Asp Ala Thr Phe Asp Phe Tyr Leu Pro

645 650 655

Arg Gly Lys Glu Thr Val Glu Leu Gln Gly Ile Glu Gly Glu Pro Val

660 665 670

Ile Leu Phe Gln Thr Glu Arg Gly Lys Lys Pro Gly Ser Tyr Thr Val

675 680 685

His Arg Asn Gly Val Leu Val Val Arg Arg

690 695

<210> 4

<211> 668

<212> PRT

<213> Lactobacillus amylovorus

<400> 4

Met Thr Lys Thr Leu Ser Arg Phe Leu Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro

1 5 10 15

Asp Gln Trp Thr Glu Glu Thr Trp Pro Glu Asp Ile Lys Val Phe Lys

20 25 30

Lys Val Asp Leu Asn Ser Ala Thr Ile Asn Ile Phe Ser Trp Ala Val

35 40 45

Leu Glu Pro Arg Glu Gly Val Tyr Asp Phe Ser Lys Leu Asp Lys Ile

50 55 60

Val Gln Glu Leu Ser Asp Ala Asn Phe Asp Ile Val Met Gly Thr Ala

65 70 75 80

Thr Ala Ala Met Pro Ala Trp Met Phe Lys Lys Tyr Pro Asp Ile Ala

85 90 95

Arg Val Asp Tyr Gln Gly Arg Arg His Val Phe Gly Gln Arg His Asn

100 105 110

Phe Cys Pro Asn Ser Lys Asn Tyr Gln Arg Leu Asp Ser Glu Leu Val

115 120 125

Glu Lys Leu Ala Gln His Tyr Ala Asp Asn Ser His Ile Val Val Trp

130 135 140

His Val Asn Asn Glu Tyr Gly Gly Asn Cys Tyr Cys Gly Asn Cys Gln

145 150 155 160

Asn Ala Phe Arg Asp Trp Leu Arg Asn Lys Tyr Lys Thr Leu Gly Ala

165 170 175

Leu Asn Lys Ala Trp Asn Met Asn Val Trp Ser His Thr Ile Tyr Asp

180 185 190

Trp Asp Glu Ile Val Val Pro Asn Glu Leu Gly Asp Ala Trp Gly Pro

195 200 205

Glu Ser Ser Glu Thr Ile Val Ala Gly Leu Ser Ile Asp Tyr Leu Arg

210 215 220

Phe Gln Ser Glu Ser Leu Gln Asn Leu Phe Lys Met Glu Lys Ala Val

225 230 235 240

Ile Lys Lys Tyr Asp Pro Glu Thr Pro Val Thr Thr Asn Phe His Ser

245 250 255

Leu Pro Asn Lys Met Ile Asp Tyr Gln Lys Trp Ala Lys Asp Gln Asp

260 265 270

Ile Ile Ser Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr Tyr Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

275 280 285

Pro Ala Phe Leu Tyr Asp Leu Met Arg Ser Leu Lys His Gln Pro Phe

290 295 300

Met Leu Met Glu Ser Ala Pro Ser Gln Val Asn Trp Gln Ser Tyr Ser

305 310 315 320

Pro Leu Lys Arg Pro Gly Gln Met Ala Ala Thr Glu Leu Gln Ala Val

325 330 335

Ala His Gly Ala Asp Thr Val Gln Phe Phe Gln Leu Lys Gln Ala Val

340 345 350

Gly Gly Ser Glu Lys Phe His Ser Ala Ile Ile Ala His Ser Gln Arg

355 360 365

Thr Asp Thr Arg Ala Phe Cys Glu Leu Ala Asp Leu Gly Gln Lys Leu

370 375 380

Lys Glu Ala Gly Pro Thr Ile Leu Gly Ser Lys Thr Lys Ala Lys Val

385 390 395 400

Ala Ile Val Phe Asp Trp Ser Asn Phe Trp Ser Tyr Glu Tyr Val Asp

405 410 415

Gly Ile Thr Gln Asp Leu Asn Tyr Val Asp Ser Ile Leu Asp Tyr Tyr

420 425 430

Arg Gln Phe Tyr Glu Arg Asn Ile Pro Thr Asp Ile Ile Gly Val Asp

435 440 445

Asp Asp Phe Ser Asn Tyr Asp Leu Val Val Ala Pro Val Leu Tyr Met

450 455 460

Val Lys Ala Gly Leu Ala Glu Lys Ile Asn Ser Tyr Val Glu Lys Gly

465 470 475 480

Gly His Leu Val Thr Thr Tyr Met Ser Gly Met Val Asp Ser Thr Asp

485 490 495

Asn Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Pro Leu Lys Asp Val Thr Gly

500 505 510

Ile Trp Val Glu Glu Ser Asp Ala Met Val Pro Gly Gln Lys Val Arg

515 520 525

Val Thr Met Asp Gly Lys Glu Tyr Glu Thr Asn Leu Met Cys Asp Leu

530 535 540

Ile His Pro Asn Lys Ala Lys Val Leu Ala Ser Tyr Ala Asp Glu Phe

545 550 555 560

Tyr Thr Gly Thr Ala Ala Ile Thr Glu Asn Asp Tyr Gly Lys Gly Lys

565 570 575

Ala Trp Tyr Val Gly Thr Lys Leu Gly His Gln Gly Leu Thr Gln Leu

580 585 590

Phe Asn His Ile Val Leu Glu Thr Gly Val Glu Ser Leu Val Cys Asp

595 600 605

Ser His Lys Leu Glu Val Thr Lys Arg Val Thr Ala Asp Gly Lys Glu

610 615 620

Leu Tyr Phe Val Leu Asn Met Ser Asn Glu Glu Arg Glu Leu Pro Asn

625 630 635 640

Lys Phe Ala Asp Tyr Glu Asp Ile Leu Thr Gly Glu Lys Ala Lys Ser

645 650 655

Ser Met Lys Gly Trp Asp Val Gln Val Leu Thr Lys

660 665

<210> 5

<211> 626

<212> PRT

<213> Lactobacillus amylovorus

<400> 5

Met Lys Ala Asn Ile Lys Trp Leu Asp Asp Pro Glu Val Phe Arg Ile

1 5 10 15

Asn Gln Leu Pro Ala His Ser Asp His Pro Phe Tyr Lys Asp Tyr Arg

20 25 30

Glu Trp Gln Asn His Ser Ser Ser Phe Lys Gln Ser Leu Asn Gly Ala

35 40 45

Trp Gln Phe His Phe Ser Lys Asp Pro Gln Ser Arg Pro Ile Asp Phe

50 55 60

Tyr Lys Arg Ser Phe Asp Ser Ser Ser Phe Asp Thr Ile Pro Val Pro

65 70 75 80

Ser Glu Ile Glu Leu Asn Gly Tyr Ala Gln Asn Gln Tyr Thr Asn Ile

85 90 95

Leu Tyr Pro Trp Glu Ser Lys Ile Tyr Arg Lys Pro Ala Tyr Thr Leu

100 105 110

Gly Arg Gly Ile Lys Asp Gly Asp Phe Ser Gln Gly Lys Asp Asn Thr

115 120 125

Val Gly Ser Tyr Leu Lys His Phe Asp Leu Asn Pro Ala Leu Ala Gly

130 135 140

His Asp Ile His Ile Gln Phe Glu Gly Val Glu Arg Ala Met Tyr Val

145 150 155 160

Tyr Leu Asn Gly His Phe Ile Gly Tyr Ala Glu Asp Ser Phe Thr Pro

165 170 175

Ser Glu Phe Asp Leu Thr Pro Tyr Ile Gln Ala Lys Asp Asn Ile Leu

180 185 190

Ala Val Glu Val Phe Lys His Ser Thr Ala Ser Trp Leu Glu Asp Gln

195 200 205

Asp Met Phe Arg Phe Ser Gly Ile Phe Arg Ser Val Glu Leu Leu Ala

210 215 220

Leu Pro Arg Thr His Leu Met Asp Leu Asp Ile Lys Pro Thr Val Val

225 230 235 240

Asn Asp Tyr His Asp Gly Val Phe Asn Ala Lys Leu His Phe Met Gly

245 250 255

Lys Thr Ser Gly Asn Val His Val Leu Ile Glu Asp Ile Asp Gly Lys

260 265 270

Thr Leu Leu Asn Lys Lys Leu Pro Leu Lys Ser Thr Val Glu Ile Glu

275 280 285

Asn Glu Thr Phe Ala Asn Val His Leu Trp Asp Asn His Asp Pro Tyr

290 295 300

Leu Tyr Gln Leu Ile Ile Glu Val His Asp Gln Asp Gly Lys Leu Val

305 310 315 320

Glu Leu Ile Pro Tyr Gln Phe Gly Phe Arg Lys Ile Glu Ile Thr Lys

325 330 335

Asp His Val Val Leu Leu Asn Gly Lys Arg Leu Ile Ile Asn Gly Val

340 345 350

Asn Arg His Glu Trp Asp Ala Lys Arg Gly Arg Ser Ile Thr Leu Ala

355 360 365

Asp Met Lys Gln Asp Ile Ala Thr Phe Lys His Asn Asn Ile Asn Ala

370 375 380

Val Arg Thr Cys His Tyr Pro Asn Gln Ile Pro Trp Tyr Tyr Leu Cys

385 390 395 400

Asp Gln Asn Gly Ile Tyr Met Met Ala Glu Asn Asn Leu Glu Ser His

405 410 415

Gly Thr Trp Gln Lys Leu Gly Gln Val Glu Ala Thr Ser Asn Val Pro

420 425 430

Gly Ser Ile Pro Glu Trp Arg Glu Val Val Val Asp Arg Ala Arg Ser

435 440 445

Asn Tyr Glu Thr Phe Lys Asn His Thr Ala Ile Leu Phe Trp Ser Leu

450 455 460

Gly Asn Glu Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Ile Ala Ala Met Asn Lys Leu

465 470 475 480

Tyr Lys Asp His Asp Ser Ser Arg Leu Thr His Tyr Glu Gly Val Phe

485 490 495

His Ala Pro Glu Phe Lys Lys Glu Ile Ser Asp Leu Glu Ser Cys Met

500 505 510

Tyr Leu Pro Pro Lys Glu Ala Glu Glu Tyr Leu Gln Asn Pro Lys Lys

515 520 525

Pro Leu Val Glu Cys Glu Tyr Met His Asp Met Gly Thr Pro Asp Gly

530 535 540

Gly Met Gly Ser Tyr Ile Lys Leu Ile Asp Lys Tyr Pro Gln Tyr Met

545 550 555 560

Gly Gly Phe Ile Trp Asp Phe Ile Asp Gln Ala Leu Leu Val His Asp

565 570 575

Pro Val Ser Gly Gln Asp Val Leu Arg Tyr Gly Gly Asp Phe Asp Asp

580 585 590

Arg His Ser Asp Tyr Glu Phe Ser Gly Asp Gly Leu Met Phe Ala Asp

595 600 605

Arg Thr Pro Lys Pro Ala Met Gln Glu Val Arg Tyr Tyr Tyr Gly Leu

610 615 620

His Lys

625

<210> 6

<211> 316

<212> PRT

<213> Lactobacillus amylovorus

<400> 6

Met Ala Tyr Thr Asn Asn Leu His Val Val Tyr Gly Glu Ala Ser Leu

1 5 10 15

Gly Val Asn Gly Gln Asp Phe Ala Tyr Leu Phe Ser Tyr Glu Arg Gly

20 25 30

Gly Leu Glu Ser Leu Lys Ile Lys Asp Lys Glu Trp Leu Tyr Arg Thr

35 40 45

Pro Thr Pro Thr Phe Trp Arg Ala Thr Thr Asp Asn Asp Arg Gly Ser

50 55 60

Gly Phe Asn Gln Lys Ala Ala Gln Trp Leu Gly Ala Asp Met Phe Thr

65 70 75 80

Lys Cys Val Gly Ile His Val Gln Val Asp Asp His Arg Phe Asp Glu

85 90 95

Leu Pro Val Ala Pro Ile Asn Asn Gln Phe Ser Asn Gln Glu Phe Ala

100 105 110

His Glu Val Lys Val Ala Phe Asp Tyr Glu Thr Leu Thr Thr Pro Ala

115 120 125

Thr Lys Val Lys Ile Ile Tyr Asn Ile Asn Asp Phe Gly His Met Thr

130 135 140

Ile Thr Met His Tyr Phe Gly Lys Lys Gly Leu Pro Pro Leu Pro Val

145 150 155 160

Ile Gly Met Arg Phe Ile Met Pro Thr Lys Ala Lys Ser Phe Asp Tyr

165 170 175

Thr Gly Leu Ser Gly Glu Thr Tyr Pro Asp Arg Met Ala Gly Ala Glu

180 185 190

Arg Gly Thr Phe His Ile Asp Gly Leu Pro Val Thr Lys Tyr Leu Val

195 200 205

Pro Gln Glu Asn Gly Met His Met Gln Thr Asn Glu Leu Val Ile Thr

210 215 220

Arg Asn Ser Thr Gln Asn Asn Ala Asp Lys Asp Gly Asp Phe Ser Leu

225 230 235 240

Lys Ile Thr Gln Thr Lys Gln Pro Phe Asn Phe Ser Leu Leu Pro Tyr

245 250 255

Thr Ala Glu Glu Leu Glu Asn Ala Thr His Ile Glu Glu Leu Pro Leu

260 265 270

Ala Arg Arg Ser Val Leu Val Ile Ala Gly Ala Val Arg Gly Val Gly

275 280 285

Gly Ile Asp Ser Trp Gly Ser Asp Val Glu Glu Gln Tyr His Ile Asp

290 295 300

Pro Glu Gln Asp His Glu Phe Ser Phe Thr Leu Asn

305 310 315

<210> 7

<211> 693

<212> PRT

<213> Bifidobacterium bifidum

<400> 7

Met Glu Arg Asn Met Ser Lys Arg Arg Lys His Ser Trp Pro Gln Pro

1 5 10 15

Leu Lys Gly Ala Glu Ser Arg Leu Trp Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro

20 25 30

Asp Gln Trp Pro Glu Glu Val Trp Asp Asp Asp Ile Arg Leu Met Lys

35 40 45

Lys Ala Gly Val Asn Leu Val Ser Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Ile Glu Pro Glu Glu Gly Lys Tyr Asp Phe Asp Trp Leu Asp Arg Ala

65 70 75 80

Ile Asp Lys Leu Gly Lys Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala

85 90 95

Thr Ala Ser Pro Pro Met Trp Leu Thr Gln Ala His Pro Glu Val Leu

100 105 110

Trp Lys Asp Glu Arg Gly Asp Thr Val Trp Pro Gly Ala Arg Glu His

115 120 125

Trp Arg Pro Thr Ser Pro Val Phe Arg Glu Tyr Ala Leu Asn Leu Cys

130 135 140

Arg Arg Met Ala Glu His Tyr Lys Gly Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp

145 150 155 160

His Val Ser Asn Glu Tyr Gly Cys His Asn Arg Phe Asp Tyr Ser Asp

165 170 175

Asp Ala Met Arg Ala Phe Gln Lys Trp Cys Lys Lys Arg Tyr Lys Thr

180 185 190

Ile Asp Ala Val Asn Glu Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ala Gln His

195 200 205

Met Asn Asp Phe Ser Glu Ile Ile Pro Pro Arg Tyr Ile Gly Asp Gly

210 215 220

Asn Phe Met Asn Pro Gly Lys Leu Leu Asp Tyr Lys Arg Phe Ser Ser

225 230 235 240

Asp Ala Leu Lys Glu Leu Tyr Ile Ala Glu Arg Asp Val Leu Glu Ser

245 250 255

Ile Thr Pro Gly Leu Pro Leu Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Ala Gly

260 265 270

Gly Ser Met Leu Asp Tyr Asp Asp Trp Gly Ala Glu Val Asp Phe Val

275 280 285

Ser Asn Asp His Tyr Phe Thr Pro Gly Glu Ala His Phe Asp Glu Val

290 295 300

Ala Tyr Ala Ala Ser Leu Met Asp Gly Ile Ser Arg Lys Glu Pro Trp

305 310 315 320

Phe Gln Met Glu His Ser Thr Ser Ala Val Asn Trp Arg Pro Ile Asn

325 330 335

Tyr Arg Ala Glu Pro Gly Ser Val Val Arg Asp Ser Leu Ala Gln Val

340 345 350

Ala Met Gly Ala Asp Ala Ile Cys Tyr Phe Gln Trp Arg Gln Ser Lys

355 360 365

Ala Gly Ala Glu Lys Trp His Ser Ser Met Val Pro His Ala Gly Glu

370 375 380

Asp Ser Gln Ile Phe Arg Asp Val Cys Glu Leu Gly Ala Asp Leu Gly

385 390 395 400

Arg Leu Ser Asp Glu Gly Leu Met Gly Thr Lys Thr Val Lys Ser Lys

405 410 415

Val Ala Val Val Phe Asp Tyr Glu Ser Gln Trp Ala Thr Glu Tyr Thr

420 425 430

Ala Asn Pro Thr Gln Gln Val Asp His Trp Thr Glu Pro Leu Asp Trp

435 440 445

Phe Arg Ala Leu Ala Asp Asn Gly Ile Thr Ala Asp Val Val Pro Val

450 455 460

Arg Ser Asp Trp Asp Ser Tyr Glu Ile Ala Val Leu Pro Cys Val Tyr

465 470 475 480

Leu Leu Ser Glu Glu Thr Ser Arg Arg Val Arg Glu Phe Val Ala Asn

485 490 495

Gly Gly Lys Leu Phe Val Thr Tyr Tyr Thr Gly Leu Ser Asp Glu Asn

500 505 510

Asp His Ile Trp Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ser Ile Arg Asp Val Val

515 520 525

Gly Val Arg Val Glu Glu Phe Ala Pro Met Gly Asn Asp Met Pro Gly

530 535 540

Ala Leu Asp His Leu Asp Leu Asp Asn Gly Thr Val Ala His Asp Phe

545 550 555 560

Ala Asp Val Ile Thr Ser Thr Ala Asp Thr Ser Thr Val Leu Ala Ser

565 570 575

Tyr Lys Ala Glu Arg Trp Thr Gly Met Asn Glu Val Pro Ala Ile Val

580 585 590

Ala Asn Gly Tyr Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr Val Gly Cys Arg Leu

595 600 605

Gly Arg Gln Gly Leu Ala Lys Ser Leu Pro Ala Met Leu Gly Ser Met

610 615 620

Gly Leu Ser Asp Leu Ala Gly Asp Gly Arg Val Leu Arg Val Glu Arg

625 630 635 640

Ala Asp Ala Ala Ala Ala Ser His Phe Glu Phe Val Phe Asn Arg Thr

645 650 655

His Glu Pro Val Thr Val Asp Val Glu Gly Glu Ala Ile Ala Ala Ser

660 665 670

Leu Ala His Val Asp Asp Gly Arg Ala Thr Ile Asp Pro Thr Gly Val

675 680 685

Val Val Leu Arg Arg

690

<210> 8

<211> 680

<212> PRT

<213> Lactobacillus brevis

<400> 8

Met Lys Arg Glu Leu Lys Ser Lys Val Phe Leu His Gly Gly Asp Tyr

1 5 10 15

Asn Pro Glu Gln Trp Leu Gly Glu Pro Glu Ile Ile Asn Glu Asp Phe

20 25 30

Ala Leu Phe Lys Asn Ala Ala Ile Asn Thr Val Thr Val Gly Ile Phe

35 40 45

Ser Trp Ala Lys Leu Glu Pro Glu Glu Gly Lys Tyr Asp Phe Ala Trp

50 55 60

Leu Asp Asp Ile Phe Asp Arg Val Glu Lys Met Asn Gly Tyr Val Ile

65 70 75 80

Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Leu Ala Arg Lys Tyr

85 90 95

Pro Glu Val Leu Arg Thr Asp Phe Asn Asn Gln Lys Arg Gly Phe Gly

100 105 110

Gly Arg His Asn His Cys Leu Thr Ser Pro Ile Tyr Arg Lys Lys Val

115 120 125

Arg Glu Ile Asn Thr Lys Leu Ala Glu His Phe Gly Lys Arg Pro Ser

130 135 140

Leu Ile Leu Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Ser Gly Glu Cys Tyr Cys

145 150 155 160

Asp Leu Cys Gln Gln Ala Phe Arg Asp Trp Leu Lys Lys Lys Tyr Arg

165 170 175

Thr Leu Glu Arg Leu Asn His Ser Trp Trp Asn Thr Phe Trp Ser His

180 185 190

Thr Phe Ser Asp Trp Asn Gln Ile His Ala Pro Ser Pro Leu Ser Glu

195 200 205

Met Gly Asn Lys Gly Met Asn Leu Asp Trp Lys Arg Phe Val Ser Asp

210 215 220

Gln Ala Ile Ser Phe Ile Asp Asn Glu Val Glu Pro Leu Arg Lys Ile

225 230 235 240

Thr Ser Glu Ile Pro Val Thr Thr Asn Met Met Ala Gly Asn Pro Leu

245 250 255

Met Asp Pro Phe Thr Gly Tyr Asn Tyr Gln Glu Met Ala Lys His Leu

260 265 270

Asp Val Ile Ser Trp Asp Ser Tyr Pro Leu Trp Gly Asn Asp Phe Gln

275 280 285

Ser Thr Glu Lys Leu Gly Gln Asn Val Gly Leu Ile His Asp Phe Phe

290 295 300

Arg Ser Leu Lys His Gln Asn Phe Met Ile Met Glu Asn Thr Pro Ser

305 310 315 320

Arg Val Asn Trp Ala Asp Ile Asp Arg Ala Lys Arg Pro Gly Met His

325 330 335

Gln Leu Ala Ser Leu Gln Asp Ile Ala His Ser Ser Asp Ser Val Leu

340 345 350

Tyr Phe Gln Leu Arg Ala Ser Arg Gly Ser Ala Glu Met Phe His Gly

355 360 365

Ala Val Ile Glu His Arg His Pro Glu Lys Thr Arg Val Phe His Asp

370 375 380

Val Lys Asp Val Gly His Asp Leu Glu Lys Leu Glu Ser Ile Tyr Ser

385 390 395 400

Thr Ser Tyr Thr Lys Ala Lys Val Gly Ile Val Tyr Asp Tyr Asn Asn

405 410 415

Ile Trp Ala Leu Glu Asp Ala Glu Gly Tyr Ser Lys Asp Lys Lys Ile

420 425 430

Trp Gln Thr Ile Gln Ser Gln Tyr Gln Tyr Phe Tyr Gln Asn Asp Ile

435 440 445

Pro Val Asp Phe Val Ser Pro Asn Asp Asn Phe Thr Gln Tyr Lys Leu

450 455 460

Leu Ile Asp Pro Met His Phe Leu Met Thr Lys Glu Tyr Met Asp Lys

465 470 475 480

Leu Glu Ser Phe Val Lys Lys Cys Gly Tyr Val Val Gly Thr Tyr Ile

485 490 495

Ser Gly Val Val Asp Glu Asn Gly Leu Ala Tyr Met Asn Glu Trp Pro

500 505 510

Lys Gln Leu Gln Ser Ile Tyr Gly Ile Glu Pro Leu Glu Thr Asp Ser

515 520 525

Leu Tyr Pro Lys Gln Ser Asn Ser Ile Glu Phe Ala Gly His Arg Tyr

530 535 540

Gln Ala Tyr Asp Phe Cys Glu Thr Ile Phe Lys His Asp Ala Lys Val

545 550 555 560

Leu Ala Lys Tyr Thr Thr Asp Phe Tyr Ser Gly Thr Pro Ala Leu Thr

565 570 575

Ala His Lys Cys Gly Glu Gly Lys Gly Tyr Tyr Ile Ala Cys Arg Thr

580 585 590

Asp Thr Asp Phe Leu Ser Ala Ile Tyr Gly Gln Ile Val Lys Glu Leu

595 600 605

Asp Leu Leu Pro Asn Leu Pro Ile Lys Lys Glu Thr Thr Lys Ile Ser

610 615 620

Leu Gln Val Arg Glu Asn Asp Asp Glu Lys Tyr Leu Phe Val Gln Asn

625 630 635 640

Phe Ser His Glu Gln Gln Ser Ile Leu Leu Lys Gln Lys Met Lys Glu

645 650 655

Met Leu Ser Asp Glu Phe Glu Glu Asn Lys Val Ile Val Lys Pro Tyr

660 665 670

Gly Thr Lys Ile Tyr Gln Met Asn

675 680

<210> 9

<211> 689

<212> PRT

<213> Bifidobacterium catenulatum

<400> 9

Met Thr Gln Arg Arg Ser Tyr Arg Trp Pro Gln Pro Leu Ala Gly Gln

1 5 10 15

Gln Ala Arg Ile Trp Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Glu Val Trp Asp Asp Asp Val Arg Leu Met Lys Lys Ala Gly Val

35 40 45

Asn Leu Val Ser Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Lys Ile Glu Thr Ser

50 55 60

Glu Gly Val Tyr Asp Phe Asp Trp Leu Asp Arg Ile Ile Asp Lys Leu

65 70 75 80

Gly Glu Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Ser Pro

85 90 95

Pro Met Trp Leu Thr Gln Ala His Pro Glu Val Leu Trp Lys Asp Tyr

100 105 110

Arg Gly Asp Val Cys Gln Pro Gly Ala Arg Gln His Trp Arg Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Phe Arg Glu Tyr Ala Leu Lys Leu Cys Arg Ala Met Ala

130 135 140

Glu His Tyr Lys Gly Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Val Ser Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Cys His Asn Arg Phe Asp Tyr Ser Glu Asp Ala Glu Arg

165 170 175

Ala Phe Arg Lys Trp Cys Glu Glu Arg Tyr Gly Thr Ile Asp Ala Val

180 185 190

Asn Asp Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ala Gln Arg Met Asn Asp Phe

195 200 205

Thr Glu Ile Val Pro Pro Arg Phe Ile Gly Asp Gly Asn Phe Met Asn

210 215 220

Pro Gly Lys Leu Leu Asp Phe Lys Arg Phe Ser Ser Asp Ala Leu Lys

225 230 235 240

Ala Phe Tyr Val Ala Glu Arg Asp Ala Leu Ala Glu Ile Thr Pro Asp

245 250 255

Leu Pro Leu Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Ala Ala Gly Ser Val Leu

260 265 270

Asp Tyr Asp Asp Trp Gly Arg Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe Ile Pro Gly Glu Ala His Leu Asp Glu Leu Ala Phe Ser Ala

290 295 300

Ser Leu Val Asp Gly Ile Ala Arg Lys Asp Pro Trp Phe Leu Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Asn Trp Arg Pro Val Asn Tyr Arg Lys Glu

325 330 335

Pro Gly Gln Leu Val Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Val Cys Tyr Phe Gln Trp Arg Gln Ser Lys Ala Gly Ala Glu

355 360 365

Lys Phe His Ser Ala Met Val Pro His Thr Gly Glu Asp Ser Ala Val

370 375 380

Phe Arg Asp Val Cys Glu Leu Gly Ala Asp Leu Asn Thr Leu Ala Asp

385 390 395 400

Asn Gly Leu Leu Gly Thr Lys Leu Ala Lys Ser Lys Val Ala Val Val

405 410 415

Phe Asp Tyr Glu Ser Glu Trp Ala Thr Glu His Thr Ala Thr Pro Thr

420 425 430

Gln Lys Val His His Val Asp Glu Pro Leu Gln Trp Phe Arg Ala Leu

435 440 445

Ala Asp His Gly Val Thr Ala Asp Val Val Pro Val Ser Ser Asn Trp

450 455 460

Asp Glu Tyr Glu Val Val Val Leu Pro Ser Val Tyr Ile Leu Ser Glu

465 470 475 480

Glu Thr Thr Arg Arg Val Arg Asp Tyr Val Val Asn Gly Gly Arg Leu

485 490 495

Ile Val Thr Tyr Tyr Thr Gly Leu Ser Asp Glu Lys Asp His Val Trp

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ser Ile Arg Asp Val Val Gly Val Arg Val

515 520 525

Glu Glu Phe Met Pro Met Gly Asp Asp Phe Pro Gly Val Pro Asp Cys

530 535 540

Leu Gly Leu Ser Asn Gly Ala Val Ala His Asp Ile Ala Asp Val Ile

545 550 555 560

Gly Ser Val Asp Gly Thr Ala Thr Val Leu Glu Thr Phe Arg Asp Asp

565 570 575

Pro Trp Thr Gly Met Asp Gly Ala Pro Ala Ile Val Ala Asn Thr Phe

580 585 590

Gly Glu Gly Arg Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Leu Gly Arg Asp Gly

595 600 605

Ile Ala Lys Ser Leu Pro Glu Ile Phe Glu Ser Leu Gly Met Ala Glu

610 615 620

Thr Gly Glu Asn Asp Ser Arg Val Leu Arg Val Glu Arg Glu Gly Ser

625 630 635 640

Asp Gly Ser Arg Phe Val Phe Ser Phe Asn Arg Thr His Glu Ala Val

645 650 655

Gln Ile Pro Phe Glu Gly Lys Ile Val Val Ser Ser Phe Ala Glu Val

660 665 670

Ser Gly Glu Asn Val Ser Ile Lys Pro Asn Gly Val Ile Val Thr Lys

675 680 685

Gln

<210> 10

<211> 689

<212> PRT

<213> Bifidobacterium pseudocatenulatum

<400> 10

Met Thr Gln Arg Arg Ala Tyr Arg Trp Pro Gln Pro Leu Ala Gly Gln

1 5 10 15

Gln Ala Arg Ile Trp Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Glu Val Trp Asp Asp Asp Val Arg Leu Met Lys Lys Ala Gly Val

35 40 45

Asn Leu Val Ser Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Lys Ile Glu Thr Ser

50 55 60

Glu Gly Val Tyr Asp Phe Asp Trp Leu Asp Arg Ile Ile Asn Lys Leu

65 70 75 80

Gly Glu Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Ser Pro

85 90 95

Pro Met Trp Leu Thr Gln Ala His Pro Glu Val Leu Trp Lys Asp Tyr

100 105 110

Arg Gly Asp Val Cys Gln Pro Gly Ala Arg Gln His Trp Arg Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Phe Arg Glu Tyr Ala Leu Lys Leu Cys Arg Ala Met Ala

130 135 140

Glu His Tyr Lys Gly Asn Pro Tyr Val Val Ala Trp His Val Ser Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Cys His Asn Arg Phe Asp Tyr Ser Glu Asp Ala Glu Arg

165 170 175

Ala Phe Arg Lys Trp Cys Glu Glu Arg Tyr Gly Thr Ile Asp Ala Val

180 185 190

Asn Asp Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ala Gln Arg Met Asn Asp Phe

195 200 205

Thr Glu Ile Val Pro Pro Arg Phe Ile Gly Asp Gly Asn Phe Met Asn

210 215 220

Pro Gly Lys Leu Leu Asp Phe Lys Arg Phe Ser Ser Asp Ala Leu Lys

225 230 235 240

Ala Phe Tyr Val Ala Glu Arg Asp Ala Leu Ala Glu Ile Thr Pro Asp

245 250 255

Leu Pro Leu Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Ala Ala Gly Ser Val Leu

260 265 270

Asp Tyr Asp Asp Trp Gly Arg Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe Ile Pro Gly Glu Ala His Leu Asp Glu Leu Ala Phe Ser Ala

290 295 300

Ser Leu Val Asp Gly Ile Ala Arg Lys Asp Pro Trp Phe Leu Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Asn Trp Arg Pro Val Asn Tyr Arg Lys Glu

325 330 335

Pro Gly Gln Leu Val Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Val Cys Tyr Phe Gln Trp Arg Gln Ser Lys Ala Gly Ala Glu

355 360 365

Lys Phe His Ser Ala Met Val Pro His Ala Gly Glu Asp Ser Ala Val

370 375 380

Phe Arg Asp Val Cys Glu Leu Gly Ala Asp Leu Asn Thr Leu Ala Asp

385 390 395 400

Asn Gly Leu Leu Gly Thr Lys Leu Ala Lys Ser Lys Val Ala Val Val

405 410 415

Phe Asp Tyr Glu Ser Glu Trp Ala Ser Glu His Thr Ala Thr Pro Thr

420 425 430

Gln Lys Val His His Val Asp Glu Pro Leu Gln Trp Phe Arg Ala Leu

435 440 445

Ala Asp His Gly Val Thr Ala Asp Val Val Pro Val Arg Gly Ala Trp

450 455 460

Asp Asp Tyr Glu Met Val Val Leu Pro Ser Val Tyr Leu Leu Ser Glu

465 470 475 480

Glu Thr Thr Arg Arg Val Arg Asp Tyr Val Val Gly Gly Gly Arg Leu

485 490 495

Val Val Thr Tyr Tyr Thr Gly Ile Ser Asp Glu Lys Asp His Val Trp

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ser Ile Arg Asp Val Val Gly Val Arg Val

515 520 525

Glu Glu Phe Met Pro Met Gly Asp Asp Phe Pro Gly Val Pro Asp Cys

530 535 540

Leu Gly Leu Ser Asn Gly Ala Val Ala His Asp Ile Ala Asp Val Ile

545 550 555 560

Gly Ser Val Asp Gly Thr Ala Thr Val Leu Glu Thr Phe Lys Asp Asp

565 570 575

Pro Trp Thr Gly Met Asp Gly Ala Pro Ala Ile Val Ala His Thr Phe

580 585 590

Gly Glu Gly Arg Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Leu Gly Arg Asp Gly

595 600 605

Ile Ala Leu Ser Leu Pro Glu Ile Leu Asp Ser Leu Gly Met Ala Glu

610 615 620

Ala Gly Gly Asn Asp Gly Arg Val Leu Arg Val Glu Arg Glu Gly Ala

625 630 635 640

Asp Gly Ser Arg Phe Val Phe Ser Phe Asn Arg Thr His Glu Thr Val

645 650 655

Arg Val Pro Val Glu Gly Glu Val Val Val Ser Ser Phe Ala Glu Val

660 665 670

Ser Gly Glu Thr Ile Ser Ile Lys Pro Asn Gly Val Ile Val Thr Lys

675 680 685

Gln

<210> 11

<211> 680

<212> PRT

<213> Lactobacillus gasseri

<400> 11

Met Lys Arg Ile Leu Asn Thr Asn Glu Phe Leu His Gly Gly Asp Tyr

1 5 10 15

Asn Pro Glu Gln Trp Trp Asp Glu Pro Asp Val Ile Asn Gln Asp Phe

20 25 30

Ala Leu Phe Lys Gln Ala Lys Ile Asn Thr Val Thr Val Gly Ile Phe

35 40 45

Ser Trp Ala Lys Leu Glu Pro Glu Glu Gly Asn Tyr Asp Phe Ser Trp

50 55 60

Leu Asp Ser Ile Phe Asp Arg Val Glu Glu Met Asn Gly His Val Val

65 70 75 80

Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Leu Ala Gln Lys Tyr

85 90 95

Pro Glu Val Leu Arg Thr Asp Asn Leu Gly Asn Lys Arg Gly Phe Gly

100 105 110

Gly Arg His Asn His Cys Leu Thr Ser Pro Ile Tyr Arg Glu Lys Val

115 120 125

Arg Glu Ile Asn Thr Lys Leu Ala Glu His Phe Gly Gln Arg Lys Ser

130 135 140

Leu Val Leu Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Ser Gly Glu Cys Tyr Cys

145 150 155 160

Glu Ser Cys Lys Asn Ala Phe Arg Asp Trp Leu Lys Asn Lys Tyr Gly

165 170 175

Asn Leu Asp Asn Leu Asn His Ala Trp Trp Asn Thr Phe Trp Ser His

180 185 190

Thr Tyr Asn Asp Trp Ser Gln Val Asn Pro Pro Ser Pro Leu Gly Glu

195 200 205

Met Gly Asn Lys Gly Met Asn Leu Asp Trp Lys Arg Phe Ile Thr Asp

210 215 220

Gln Thr Ile Ser Phe Ile Asp Asn Glu Ala Ala Pro Leu Arg Lys Ile

225 230 235 240

Thr Pro Asn Val Pro Val Thr Thr Asn Met Met Ala Gly Asn Pro Leu

245 250 255

Met Asp Pro Phe Ala Gly Phe Asp Tyr Gln Lys Val Ala Lys His Leu

260 265 270

Asp Phe Ile Ser Trp Asp Ser Tyr Pro Ala Trp Gly Asn Asp Asn Gln

275 280 285

Thr Thr Ala Glu Leu Gly Arg Asn Val Gly Leu Val His Asp Phe Phe

290 295 300

Arg Ser Leu Lys His Gln Asn Phe Leu Val Met Glu Asn Thr Pro Ser

305 310 315 320

Arg Val Asn Trp His Ser Val Asp Arg Ala Lys Arg Pro Gly Met His

325 330 335

Glu Leu Ala Ser Leu Gln Asp Val Ala Arg Gly Ser Gln Gly Val Leu

340 345 350

Tyr Phe Gln Leu Arg Ala Ser Arg Gly Ser Ser Glu Met Phe His Gly

355 360 365

Ala Val Ile Glu His Leu His Pro Glu Gln Thr Arg Ala Phe Lys Asp

370 375 380

Val Thr Thr Val Gly Lys Asp Leu Glu Asn Ile Arg Pro Ile Ile Asn

385 390 395 400

Thr Asn Tyr Ala Lys Ala Arg Val Ala Ile Val Phe Ser Tyr Asp Ser

405 410 415

Tyr Trp Ala Leu Gln Asp Ala Glu Ser Tyr Ser Lys Asp Lys Lys Ile

420 425 430

Trp Gln Thr Ile Gln Lys His Tyr Arg Tyr Phe Tyr Lys His Asp Ile

435 440 445

Pro Val Asp Phe Val Ser Val Glu Asp Asp Phe Ser Asn Tyr Asp Leu

450 455 460

Leu Ile Asp Pro Met His Phe Leu Met Ser Lys Ala Tyr Leu Lys Lys

465 470 475 480

Leu Ala Ser Tyr Val Lys Asn Gly Gly Arg Val Val Gly Thr Tyr Ile

485 490 495

Ser Gly Val Val Asp Glu Asn Asp Leu Ala Tyr Met Asn Glu Trp Pro

500 505 510

Lys Glu Leu Gln Asp Ile Tyr Gly Val Glu Pro Leu Glu Thr Asp Val

515 520 525

Leu Tyr Pro Gly Gln Ser Asn Thr Leu Asn Phe Asp Gly His Glu Tyr

530 535 540

Lys Ala His Asp Tyr Cys Glu Thr Leu Ile Asn Cys Arg Gly Lys Val

545 550 555 560

Leu Ala Lys Tyr Ala Ser Asp Phe Tyr Gln Asp Thr Pro Ala Val Val

565 570 575

Glu His Glu Tyr Gly Ala Gly Lys Gly Tyr Tyr Leu Ala Cys Arg Thr

580 585 590

Asp Tyr Asp Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Glu Lys Ile Thr Ala Asn Leu

595 600 605

Ile Pro Glu Phe Pro Val Lys Lys Phe Ser Ser Asn Ile Ser Ile Gln

610 615 620

Val Arg Glu Asn Lys Asp Gln Lys Tyr Tyr Phe Val Gln Asn Phe Ser

625 630 635 640

Asp Lys Ser Glu Gln Ile Lys Val Asp Gly Glu Leu Glu Asp Leu Leu

645 650 655

Glu Lys Lys Ile Asp Arg Gly Glu Val Val Leu Asn Pro Phe Gly Ser

660 665 670

Lys Ile Tyr Tyr Lys Lys Gly Asn

675 680

<210> 12

<211> 621

<212> PRT

<213> Lactobacillus helveticus

<400> 12

Met Leu Glu Pro Glu Glu Gly Lys Tyr Asp Phe Ser Glu Leu Asp Lys

1 5 10 15

Val Val Lys Lys Leu Ser Asp Ala Asn Phe Asp Ile Val Ile Gly Thr

20 25 30

Ser Thr Ala Ala Met Pro Ala Trp Met Phe Lys Lys Tyr Pro Asp Val

35 40 45

Ala Arg Val Asp Tyr Gln Gly Arg Arg His Val Phe Gly Gln Arg Tyr

50 55 60

Asn Phe Cys Pro Asn Ser Lys Asn Tyr Gln Arg Leu Ala Gly Asn Leu

65 70 75 80

Val Glu Glu Leu Ala Lys His Tyr Gln Asn Asn Pro Asn Ile Val Val

85 90 95

Trp His Val Asn Asn Glu Tyr Gly Gly Asn Cys Tyr Cys Glu Asn Cys

100 105 110

Gln His Glu Phe Arg Lys Trp Leu Lys Asp Lys Tyr Gln Thr Leu Asp

115 120 125

Ala Leu Asn Lys Ala Trp Asn Met Asn Val Trp Ser His Thr Ile Tyr

130 135 140

Asp Trp Asp Glu Ile Val Val Ser Asn Glu Leu Gly Asp Ala Trp Gly

145 150 155 160

Pro Glu Gly Ser Glu Thr Ile Val Ala Gly Leu Ser Ile Asp Tyr Leu

165 170 175

Arg Phe Gln Ser Glu Ser Leu Gln Asn Leu Phe Lys Met Glu Lys Gln

180 185 190

Ile Ile Lys Lys His Asp Ser Glu Ala Pro Val Thr Thr Asn Phe His

195 200 205

Ser Leu Pro Asn Lys Met Ile Asp Tyr Gln Lys Trp Ala Lys Asp Gln

210 215 220

Asp Ile Ile Ser Tyr Asp Ser Tyr His Thr Tyr Asp Ala Pro Thr Tyr

225 230 235 240

Lys Pro Ala Phe Leu Tyr Asn Leu Met Arg Ser Leu Lys His Gln Pro

245 250 255

Phe Met Leu Met Glu Ser Ala Pro Ser Gln Val Asn Trp Gln Pro Tyr

260 265 270

Ser Pro Leu Lys Arg Pro Gly Gln Met Ala Ala Thr Glu Leu Gln Ala

275 280 285

Val Ala His Gly Ala Asp Thr Val Gln Phe Phe Gln Leu Lys Gln Ala

290 295 300

Val Gly Gly Ser Glu Lys Phe His Ser Ala Val Ile Ala His Ser Gln

305 310 315 320

Arg Thr Asp Thr Arg Val Phe Lys Glu Leu Val Asp Leu Gly His Lys

325 330 335

Leu Lys Arg Ala Gly Ser Thr Ile Leu Gly Ser Thr Ile Asn Ala Lys

340 345 350

Val Gly Ile Val Phe Asp Trp Ser Asn Phe Trp Ser Tyr Glu Tyr Val

355 360 365

Asp Gly Ile Ser Gln Asp Met Asp Tyr Val Asp Ser Ile Leu Asp Tyr

370 375 380

Tyr Arg Gln Phe Tyr Glu Arg Asn Ile Pro Thr Asp Ile Ile Ser Val

385 390 395 400

Asp Asp Asp Phe Ser Lys Tyr Asp Leu Ile Val Ala Pro Val Leu Tyr

405 410 415

Met Val Lys Asp Gly Leu Ala Glu Lys Ile Asn Asn Tyr Val Glu Cys

420 425 430

Gly Gly Asn Phe Val Thr Thr Tyr Met Ser Gly Met Val Asp Ser Thr

435 440 445

Asp Asn Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Pro Leu Lys Asn Val Thr

450 455 460

Gly Ile Trp Val Glu Glu Ser Asp Ala Val Val Pro Gly His Thr Thr

465 470 475 480

Thr Val Ser Leu Lys Gly Lys Asp Tyr Lys Ala Gly Phe Val Cys Asp

485 490 495

Leu Ile His Pro Glu Gln Ala Lys Val Leu Ala Glu Tyr Ser Asn Glu

500 505 510

Phe Tyr Ala Gly Thr Pro Ala Ile Thr Glu Asn Lys Tyr Gly Gln Gly

515 520 525

Lys Ala Trp Tyr Val Gly Thr Arg Leu Asp His Thr Gly Leu Thr Gln

530 535 540

Leu Phe Asn His Ile Val Leu Glu Ser Asn Ile Glu Ser Leu Val Cys

545 550 555 560

Asp Gly Asp Lys Leu Glu Val Thr Lys Arg Val Thr Gln Asp Gly Gln

565 570 575

Glu Leu Tyr Phe Val Leu Asn Met Ser Asn Glu Val Arg Asn Leu Pro

580 585 590

Gln Lys Phe Ile Gly Tyr Gln Asp Ile Leu Thr Asp Lys Lys Ala Ser

595 600 605

Asp Lys Leu Glu Arg Trp Gly Val Gln Val Leu Thr Lys

610 615 620

<210> 13

<211> 710

<212> PRT

<213> Bifidobacterium longum

<400> 13

Met Thr Thr His Arg Ala Phe Arg Trp Pro Ser Leu Leu Thr Glu Ser

1 5 10 15

Gly Arg Gly Ile Ala Phe Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Glu Thr Leu Asp Glu Asp Ile Arg Leu Met Gly Glu Ala Gly Val

35 40 45

Asn Val Val Ser Leu Ala Ile Phe Ser Trp Asp Lys Ile Glu Pro Val

50 55 60

Glu Gly Ala Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp His Val Ile Asp Arg Leu

65 70 75 80

Gly Arg Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Ala Ala

85 90 95

Pro Leu Trp Leu Tyr Glu Ser His Pro Glu Val Leu Pro Val Asp Arg

100 105 110

Tyr Gly His Thr Val Asn Ala Gly Ser Arg Gln Ser Trp Gln Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Phe Lys Glu Tyr Ala Leu Arg Leu Cys Arg Lys Leu Ala

130 135 140

Glu His Tyr Lys Asp Asn Pro Tyr Val Thr Ala Trp His Met Gly Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Trp Asn Asn Arg Tyr Asp Tyr Ser Asp Asn Ala Leu Ala

165 170 175

Ala Phe Arg Thr Trp Cys Glu Ala Lys Tyr Gly Thr Ile Asp Ala Leu

180 185 190

Asn Glu Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ser Gln His Val Asn Ser Phe

195 200 205

Asp Glu Val Leu Leu Pro Arg His Met Gly Gly Asp Ala Met Val Asn

210 215 220

Pro Ser Gln Gln Leu Asp Tyr Glu Arg Phe Gly Asn Asp Met Leu Leu

225 230 235 240

Asp Phe Tyr Lys Ala Glu Arg Asp Ala Ile Glu Gln Ile Cys Pro Asp

245 250 255

Lys Pro Phe Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Thr Asp Gln Cys Val Met

260 265 270

Asn Tyr Ala Lys Trp Ala Asp Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe His Glu Gly Glu Ser His Leu Asp Glu Leu Ala Cys Ser Asp

290 295 300

Ala Leu Met Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Pro Trp Tyr Val Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Gln Trp Lys Pro Leu Asn Thr Arg Lys Arg

325 330 335

Ala Gly Glu Leu Met Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Ile Cys Phe Phe Gln Trp Arg Gln Ser Lys Ser Gly Ala Glu

355 360 365

Ala Phe His Ser Ala Met Leu Pro His Ala Gly Ala Asp Ser Lys Val

370 375 380

Phe Arg Gly Val Cys Glu Leu Gly Lys Ala Leu Lys Thr Leu Ser Asp

385 390 395 400

Ala Gly Leu Gln Gly Thr Glu Leu Glu Arg Ala Gly Thr Ala Ile Leu

405 410 415

Phe Ser Ala Glu Ser Glu Trp Ala Thr Arg Ser Glu Thr Leu Pro Ser

420 425 430

Met Lys Leu Asn His Trp His Asp Val Arg Asp Trp Tyr Arg Gly Phe

435 440 445

Leu Asp Ala Gly Leu Arg Ala Asp Val Val Pro Leu Ala Tyr Asp Trp

450 455 460

Thr Gly Tyr Lys Thr Ile Val Leu Pro Thr Val Leu Ser Leu Ser Asp

465 470 475 480

Glu Asp Val Leu Arg Ile Ala Asp Phe Ala Lys Ala Gly Gly Thr Val

485 490 495

Ile Val Gly Tyr Ala Ala Gly Leu Ile Asp Glu His Phe His Ile Gly

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ala Gly Asn Gly Leu Leu Arg Asp Met Leu

515 520 525

Gly Ile Arg Ser Glu Glu Phe Asn Ile Leu Gly Glu Glu Ala Glu Gly

530 535 540

Glu Pro Ser Glu Ile Ser Leu Ser Asn Gly Leu Thr Thr Arg Leu Trp

545 550 555 560

Gln Asn Asp Val Thr Ser Val Ala Ala Asp Thr Thr Val Leu Ala Ser

565 570 575

Tyr Ala Gly Glu Ser Ala Ala Asp Trp Glu Leu Glu Arg Thr Pro Ala

580 585 590

Ile Thr Ser Arg Pro Tyr Gly Asn Gly Thr Ala Ile Tyr Val Gly Cys

595 600 605

Asp Leu Asn Arg His Asp Ile Ala Gln Leu Leu Lys Ala Leu Gly Ser

610 615 620

Arg Trp Gln Glu Leu Ser Ala Gln Pro Thr Glu Ser Gly Gln Thr Pro

625 630 635 640

Thr Tyr Pro Thr Thr Asp Pro Arg Ile Leu His Thr Ile Arg Arg Ser

645 650 655

Ala Asp Gly Ser Thr Arg Phe Asp Phe Tyr Leu Asn Arg Ser Asn Gln

660 665 670

Pro Val Ala Ile Asn Gly Val Glu Gly Asp Pro Ile Ile Ala His Arg

675 680 685

Cys Glu Thr Asp Ala Val Gly Tyr Thr Leu Asn Arg Asn Ala Ile Leu

690 695 700

Ile Ala Lys Thr Ser Cys

705 710

<210> 14

<211> 691

<212> PRT

<213> Bifidobacterium longum

<400> 14

Met Glu Arg Lys Glu Phe Lys Trp Pro Gln Pro Leu Ala Gly Asn Lys

1 5 10 15

Pro Arg Ile Trp Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro Glu

20 25 30

Glu Val Trp Asp Glu Asp Val Ala Leu Met Gln Gln Ala Gly Val Asn

35 40 45

Leu Val Ser Val Ala Ile Phe Ser Trp Ala Lys Leu Glu Pro Glu Glu

50 55 60

Gly Val Tyr Asp Phe Asp Trp Leu Asp Arg Val Ile Asp Lys Leu Gly

65 70 75 80

Lys Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Gly Thr Ala Ser Pro Pro

85 90 95

Met Trp Met Thr Gln Ala His Pro Glu Ile Leu Trp Val Asp Tyr Arg

100 105 110

Gly Asp Val Cys Gln Pro Gly Ala Arg Gln His Trp Arg Ala Thr Ser

115 120 125

Pro Val Phe Leu Asp Tyr Ala Leu Ser Leu Cys Arg Lys Met Ala Glu

130 135 140

His Tyr Lys Asp Asn Pro Tyr Val Val Ser Trp His Val Ser Asn Glu

145 150 155 160

Tyr Gly Cys His Asn Arg Phe Asp Tyr Ser Glu Asp Ala Glu Arg Ala

165 170 175

Phe Gln Lys Trp Cys Glu Lys Lys Tyr Gly Thr Ile Asp Ala Val Asn

180 185 190

Asp Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ala Gln Arg Met Asn Asn Phe Ser

195 200 205

Glu Ile Ile Pro Pro Arg Phe Ile Gly Asp Gly Asn Phe Met Asn Pro

210 215 220

Gly Lys Leu Leu Asp Trp Lys Arg Phe Ser Ser Asp Ala Leu Leu Asp

225 230 235 240

Phe Tyr Lys Ala Glu Arg Asp Ala Leu Leu Glu Ile Ala Pro Lys Pro

245 250 255

Gln Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Ala Gly Gly Thr Gly Ile Asp Tyr

260 265 270

Asp Lys Trp Gly Tyr Asp Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His Tyr Phe

275 280 285

Thr Pro Gly Glu Ala His Phe Asp Glu Leu Ala Tyr Ser Ala Ser Leu

290 295 300

Cys Asp Gly Ile Ala Arg Lys Asn Pro Trp Phe Leu Met Glu His Ser

305 310 315 320

Ser Ser Ala Val Asn Trp Arg Pro Ile Asn Tyr Arg Val Glu Pro Gly

325 330 335

Glu Leu Val Arg Asp Ser Leu Ala His Leu Ala Met Gly Ser Asp Ala

340 345 350

Ile Cys Tyr Phe Gln Trp Arg Gln Ser Lys Ala Gly Ala Glu Lys Trp

355 360 365

His Ser Ser Met Val Pro His Ala Gly Pro Asp Ser Gln Ile Phe Arg

370 375 380

Asp Val Cys Glu Leu Gly Ala Asp Leu Asn Lys Leu Ala Asp Glu Gly

385 390 395 400

Leu Leu Ser Thr Lys Leu Val Lys Ser Lys Val Ala Val Val Phe Asp

405 410 415

Tyr Glu Ser Gln Trp Val Thr Glu His Thr Ala Thr Pro Thr Gln Glu

420 425 430

Val Arg His Trp Thr Glu Pro Leu Ala Trp Phe Arg Ala Leu Ala Asp

435 440 445

Asn Gly Leu Thr Ala Asp Val Val Pro Val Arg Gly Ser Trp Asp Glu

450 455 460

Tyr Glu Ala Val Val Leu Pro Ser Leu Thr Ile Leu Ser Glu Glu Thr

465 470 475 480

Thr Arg Arg Val Arg Glu Tyr Val Ala Asn Gly Gly Lys Leu Phe Val

485 490 495

Thr Tyr Tyr Thr Gly Leu Val Asp Asp Lys Asp His Val Trp Leu Gly

500 505 510

Gly Tyr Pro Gly Ser Ile Arg Asp Val Val Gly Val Arg Val Glu Glu

515 520 525

Phe Ala Pro Met Gly Asn Asp Phe Pro Gly Ala Met Asp His Leu Asp

530 535 540

Leu Asp Asn Gly Thr Val Ala His Asp Phe Ala Asp Val Ile Thr Ser

545 550 555 560

Val Ala Asp Thr Ala His Val Val Ala Ser Phe Lys Ala Asp Lys Trp

565 570 575

Thr Gly Phe Asp Gly Ala Pro Ala Ile Thr Val Asn Asp Phe Gly Asp

580 585 590

Gly Lys Ala Ala Tyr Val Gly Ala Arg Leu Gly Arg Glu Gly Leu Ala

595 600 605

Lys Ser Leu Pro Ala Leu Leu Glu Glu Leu Gly Ile Glu Thr Ser Ala

610 615 620

Glu Asp Asp Arg Gly Glu Val Leu Arg Val Glu Arg Ala Asp Glu Thr

625 630 635 640

Gly Glu Asn His Phe Val Phe Leu Phe Asn Arg Thr His Asp Val Ala

645 650 655

Val Val Asp Val Glu Gly Glu Pro Leu Val Ala Ser Leu Ala Gln Val

660 665 670

Asn Glu Ser Glu Arg Thr Ala Ala Ile Gln Pro Asn Gly Val Leu Val

675 680 685

Val Lys Leu

690

<210> 15

<211> 719

<212> PRT

<213> Bifidobacterium longum

<400> 15

Met Thr Thr Arg Arg Thr Phe Arg Trp Pro Ser Leu Leu Thr Glu Ser

1 5 10 15

Gly Arg Gly Ile Ala Phe Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Glu Thr Leu Asp Glu Asp Ile Arg Leu Met Val Gln Ala Gly Val

35 40 45

Asn Thr Val Ala Leu Ala Ile Phe Ser Trp Asp Lys Ile Glu Pro Arg

50 55 60

Glu Gly Glu Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp His Val Ile Asp Lys Leu

65 70 75 80

Gly Ala Ala Ser Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Thr Ala

85 90 95

Pro Leu Trp Leu Tyr Glu Arg His Pro Glu Val Leu Pro Ile Asp Arg

100 105 110

Tyr Gly His Val Val Asn Ala Gly Ser Arg Gln Ser Trp Gln Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Leu Lys Glu Tyr Ala Leu Arg Leu Cys Arg Lys Leu Ala

130 135 140

Glu His Tyr Lys Asp Asn Pro Tyr Val Thr Ala Trp His Met Gly Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Trp Asn Asn Arg Tyr Asp Tyr Ser Asp Asn Ala Leu Ala

165 170 175

Ala Phe Arg Thr Trp Cys Glu Ala Lys Tyr Gly Thr Val Asp Ala Leu

180 185 190

Asn Glu Ala Trp Gly Thr Ala Phe Trp Ser Gln His Val Asn Ser Phe

195 200 205

Asp Glu Val Leu Leu Pro Arg His Met Gly Gly Asp Ser Met Val Asn

210 215 220

Pro Pro Gln Gln Leu Asp Tyr Glu Arg Phe Gly Asn Asp Met Leu Leu

225 230 235 240

Asp Phe Tyr Lys Ala Glu Arg Asp Ala Ile Glu Glu Ile Cys Pro Gly

245 250 255

Lys Pro Phe Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Thr Asp Gln Cys Thr Met

260 265 270

Asp Tyr Ala Gln Trp Ala Asn Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe His Glu Gly Glu Ser His Leu Asp Glu Leu Ala Cys Ser Asp

290 295 300

Ala Leu Met Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Pro Trp Tyr Val Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Gln Trp Lys Pro Leu Asn Thr Arg Lys Arg

325 330 335

Ala Gly Glu Leu Met Arg Asp Ser Leu Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Ile Asn Phe Phe Gln Trp Arg Gln Ser Ala Ser Gly Ala Glu

355 360 365

Ala Phe His Ser Ala Met Val Pro His Ala Gly Ser Asp Thr Lys Leu

370 375 380

Phe Arg Gly Val Cys Glu Leu Gly Ala Ala Leu Lys Thr Leu Ser Asp

385 390 395 400

Ala Gly Val Gln Asp Thr Glu Leu Lys Arg Ala Asp Thr Ala Ile Leu

405 410 415

Phe Ser Ala Glu Ser Glu Trp Ala Thr Arg Ser Glu Thr Leu Pro Ser

420 425 430

Met Lys Leu Asn His Trp His Asp Val Arg Asp Trp Tyr Arg Gly Tyr

435 440 445

Leu Asp Ala Gly Ala Arg Ala Asp Val Val Pro Leu Ala Tyr Asp Trp

450 455 460

Ser Gly Tyr Gln Thr Ile Val Leu Pro Thr Val Ile Ala Leu Ser Asp

465 470 475 480

Glu Asp Thr Arg Arg Ile Ala Asp Phe Ala Glu Asn Gly Gly Thr Val

485 490 495

Ile Val Gly Tyr Ala Thr Gly Leu Ile Asp Glu His Phe His Ile Gly

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ala Gly Asn Gly Leu Leu Arg Asp Met Leu

515 520 525

Gly Ile Arg Ser Glu Glu Phe Asn Ile Leu Gly Glu Glu Ala Glu Asp

530 535 540

Glu Pro Ala Glu Ile Gly Leu Ser Asn Gly Leu Thr Thr Arg Leu Trp

545 550 555 560

Gln Asn Asp Val Thr Ser Val Ala Pro Asp Thr Arg Val Leu Ala Thr

565 570 575

Tyr Val Gly Thr Ala Ala Ala Asp Trp Glu Leu Asp Gly Val Pro Ala

580 585 590

Ile Thr Ser His Pro His Gly Gln Gly Ala Ala Ile Tyr Val Gly Cys

595 600 605

Asp Leu Gly Arg His Asp Ile Thr His Leu Leu Lys Glu Leu Asn Thr

610 615 620

Thr Ala Pro Ser Asp Glu Arg Ala Pro Asp Gln Arg Pro Gly Gly Gly

625 630 635 640

Glu Ile Asn Ala Ala Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Thr His Asp Pro

645 650 655

Arg Ile Leu His Thr Ile Arg Gln Ser Ser Asp Gly Thr Ile Arg Phe

660 665 670

Asp Phe Tyr Leu Asn Arg Ser Lys Gln Pro Val Ala Val Asn Gly Val

675 680 685

Glu Gly Asp Pro Ile Ile Ala His Arg Cys Glu Thr Asp Ala Val Gly

690 695 700

Tyr Thr Leu Asn Arg Asn Ala Ile Leu Ile Ala Lys Thr Ser Cys

705 710 715

<210> 16

<211> 672

<212> PRT

<213> Lactobacillus reuteri

<400> 16

Met Met Lys Lys Glu Leu Pro Arg Phe Leu Tyr Gly Gly Asp Tyr Asn

1 5 10 15

Pro Glu Gln Trp Pro Glu Glu Thr Trp Asp Glu Asp Ile Lys Val Phe

20 25 30

Lys Gln Ala Asp Ile Asn Ser Ala Thr Ile Asn Val Phe Ser Trp Ala

35 40 45

Leu Leu Glu Pro Gln Glu Gly Lys Tyr Asp Phe Thr Lys Leu Asp Lys

50 55 60

Ile Ile Lys Glu Leu Thr Val Ala Asp Phe Asp Ile Val Leu Ala Thr

65 70 75 80

Ser Thr Ala Ala Met Pro Ala Trp Met Phe Lys Lys Tyr Pro Asp Val

85 90 95

Ala Arg Val Asp Tyr Gln Gly Arg Arg His Val Phe Gly Ala Arg His

100 105 110

Asn Phe Cys Pro Ser Ser Lys Asn Tyr Arg Arg Leu Ala Lys Asn Leu

115 120 125

Val Glu Gln Leu Ala Lys Arg Tyr Gly Asp Asn Pro His Ile Val Ala

130 135 140

Trp His Val Asn Asn Glu Tyr Gly Gly Asn Cys Tyr Cys Glu Glu Cys

145 150 155 160

Gln Thr Glu Phe Gln Gln Trp Leu Lys Ala Arg Tyr Gln Thr Leu Asp

165 170 175

Asn Leu Asn His Ala Trp Asn Met Asn Val Trp Ser His Thr Ile His

180 185 190

Asp Trp Asn Glu Ile Val Val Pro Asn Glu Leu Gly Asp Ala Trp Gly

195 200 205

Pro Glu Gly Ser Glu Thr Ile Val Ala Gly Leu Ser Ile Asp Tyr Leu

210 215 220

Arg Phe Gln Ser Ala Gln Met Leu Asp Leu Phe Lys Met Glu Lys Gln

225 230 235 240

Ile Ile Glu Lys Tyr Asp Pro Thr Thr Leu Val Thr Thr Asn Phe His

245 250 255

Ser Leu Pro Asn Lys Met Ile Asp Tyr Gln Gln Trp Ala Ser Ala Gln

260 265 270

Asp Ile Ile Ser Tyr Asp Ser Tyr Pro Ala Tyr Asp Ala Pro Ile Tyr

275 280 285

Gln Pro Ala Phe Leu Tyr Asp Leu Met Arg Ser Leu Lys His Gln Pro

290 295 300

Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Gln Val Asn Trp Gln Pro Tyr

305 310 315 320

Ser Pro Leu Lys Arg Pro Gly Gln Met Ala Ala Thr Glu Leu Gln Ala

325 330 335

Val Ala His Gly Ala Asp Thr Val Gln Phe Phe Gln Leu Lys Gln Ala

340 345 350

Leu Gly Gly Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Ile Ser His Ala Asn

355 360 365

Arg Thr Asp Thr Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Lys Leu Gly His Asp

370 375 380

Leu Arg Lys Val Gly Pro Val Ile Lys Asp Ser Gln Thr Lys Ala Arg

385 390 395 400

Val Ala Leu Ile Phe Asp Trp Ser Asn Phe Trp Ser Phe Glu Tyr Val

405 410 415

Asp Gly Ile Thr Gln Asp Leu Lys Tyr Val Pro Ile Ile Leu Asp Tyr

420 425 430

Tyr Arg Gln Phe Tyr Glu Leu Asn Ile Pro Thr Asp Val Ile Ser Val

435 440 445

Asp Asp Asp Phe Arg Gln Tyr Asp Leu Val Val Ala Pro Val Leu Tyr

450 455 460

Met Val Lys Gly Gly Leu Gly Lys Lys Ile Thr Asp Tyr Val Ala Asn

465 470 475 480

Gly Gly Asn Phe Ile Thr Ser Phe Met Ser Gly Met Val Asn Glu Ser

485 490 495

Asp Asn Ile Tyr Pro Gly Gly Tyr Pro Gly Pro Leu Lys Asp Val Met

500 505 510

Gly Leu Trp Val Glu Glu Ser Asp Ala Ile Leu Pro Asn Lys Asp Val

515 520 525

Lys Leu Thr Met Thr Thr Gly Asp Glu Leu Thr Gly Tyr Leu Ile Ala

530 535 540

Asp Leu Ile Arg Leu Asn Gly Ala His Val Leu Ala Glu Tyr Ala Ser

545 550 555 560

Glu Phe Tyr Ala Gly Thr Pro Ala Val Thr Glu Asn Thr Tyr Ser Lys

565 570 575

Gly Lys Ala Trp Tyr Val Gly Ser Arg Leu Asp His Ala Ser Leu Arg

580 585 590

Lys Ile Ile Met His Ile Val Asp Asp Val His Leu Ser Ala Leu Val

595 600 605

Lys Glu Pro Thr Glu Leu Glu Ile Thr Lys Arg Gln Asn Ser Ala Gly

610 615 620

Gln Asp Ile Tyr Phe Val Leu Asn Met Gly Lys Gly Lys Gln Pro Leu

625 630 635 640

Pro Val Glu Phe Gln Lys Gly Tyr Arg Asp Leu Leu Thr Gly Asp Ser

645 650 655

Pro Glu Thr Met Leu Asp Ser Trp Asp Val Glu Ile Leu Val Gln Glu

660 665 670

<210> 17

<211> 1007

<212> PRT

<213> Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis

<400> 17

Met Ser Asn Lys Leu Val Lys Glu Lys Arg Val Asp Gln Ala Asp Leu

1 5 10 15

Ala Trp Leu Thr Asp Pro Glu Val Tyr Glu Val Asn Thr Ile Pro Pro

20 25 30

His Ser Asp His Glu Ser Phe Gln Ser Gln Glu Glu Leu Glu Glu Gly

35 40 45

Lys Ser Ser Leu Val Gln Ser Leu Asp Gly Asn Trp Leu Ile Asp Tyr

50 55 60

Ala Glu Asn Gly Gln Gly Pro Ile Asn Phe Tyr Ala Glu Asp Phe Asp

65 70 75 80

Asp Ser Asn Phe Lys Ser Val Lys Val Pro Gly Asn Leu Glu Leu Gln

85 90 95

Gly Phe Gly Gln Pro Gln Tyr Val Asn Ile Gln Tyr Pro Trp Asp Gly

100 105 110

Ser Glu Glu Ile Phe Pro Pro Gln Val Pro Ser Lys Asn Pro Leu Ala

115 120 125

Ser Tyr Val Arg Tyr Phe Asp Leu Asp Glu Ala Leu Trp Asp Lys Glu

130 135 140

Val Ser Leu Lys Phe Ala Gly Ala Ala Thr Ala Ile Tyr Val Trp Leu

145 150 155 160

Asn Gly His Phe Val Gly Tyr Gly Glu Asp Ser Phe Thr Pro Ser Glu

165 170 175

Phe Met Val Thr Lys Phe Leu Lys Lys Glu Gly Asn Arg Leu Ala Val

180 185 190

Ala Leu Tyr Lys Tyr Ser Ser Ala Ser Trp Leu Glu Asp Gln Asp Phe

195 200 205

Trp Arg Leu Ser Gly Leu Phe Arg Ser Val Thr Leu Glu Ala Lys Pro

210 215 220

Leu Leu His Leu Glu Asp Leu Lys Leu Thr Ala Ser Leu Thr Asp Asn

225 230 235 240

Tyr Gln Lys Gly Lys Leu Glu Val Glu Ala Asn Ile Ala Tyr Arg Leu

245 250 255

Pro Asn Ala Ser Phe Lys Leu Glu Val Arg Asp Ser Glu Gly Asp Leu

260 265 270

Val Ala Glu Lys Val Gly Pro Ile Arg Ser Glu Lys Leu Gly Phe Ser

275 280 285

Leu Ala Asp Leu Pro Val Ala Ala Trp Ser Ala Glu Lys Pro Asn Leu

290 295 300

Tyr Gln Val Arg Leu Tyr Leu Tyr Gln Ala Gly Ser Leu Leu Glu Val

305 310 315 320

Ser Arg Gln Glu Val Gly Phe Arg Asn Phe Glu Leu Lys Asp Gly Ile

325 330 335

Met Tyr Leu Asn Gly Gln Arg Ile Val Phe Lys Gly Val Asn Arg His

340 345 350

Glu Phe Asp Ser Lys Leu Gly Arg Ala Ile Thr Glu Ala Asp Met Ile

355 360 365

Trp Asp Ile Lys Thr Met Lys Gln Ser Asn Ile Asn Ala Val Arg Cys

370 375 380

Ser His Tyr Pro Asn Gln Ser Leu Phe Tyr Arg Leu Cys Asp Lys Tyr

385 390 395 400

Gly Leu Tyr Val Ile Asp Glu Ala Asn Leu Glu Ser His Gly Thr Trp

405 410 415

Glu Lys Val Gly His Glu Asp Pro Ser Phe Asn Val Pro Gly Asp Asp

420 425 430

Gln His Trp Leu Gly Ala Ser Leu Ser Arg Val Lys Asn Met Met Ala

435 440 445

Arg Asp Lys Asn His Ala Ser Ile Leu Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu

450 455 460

Ser Tyr Ala Gly Thr Val Phe Ala Gln Met Ala Asp Tyr Val Arg Lys

465 470 475 480

Ala Asp Pro Thr Arg Val Gln His Tyr Glu Gly Val Thr His Asn Arg

485 490 495

Lys Phe Asp Asp Ala Thr Gln Ile Glu Ser Arg Met Tyr Ala Pro Ala

500 505 510

Lys Glu Ile Glu Glu Tyr Leu Thr Lys Lys Pro Ala Lys Pro Phe Ile

515 520 525

Ser Val Glu Tyr Ala His Ala Met Gly Asn Ser Val Gly Asp Leu Ala

530 535 540

Ala Tyr Thr Ala Leu Glu Lys Tyr Pro His Tyr Gln Gly Gly Phe Ile

545 550 555 560

Trp Asp Trp Ile Asp Gln Gly Leu Glu Lys Asp Gly His Leu Leu Tyr

565 570 575

Gly Gly Asp Phe Asp Asp Arg Pro Thr Asp Tyr Glu Phe Cys Gly Asp

580 585 590

Gly Leu Val Phe Ala Asp Arg Thr Thr Ser Pro Lys Leu Ala Asn Val

595 600 605

Lys Ala Leu Tyr Ser Asn Leu Lys Leu Glu Val Lys Asp Gly Gln Leu

610 615 620

Phe Ile Lys Asn Asp Asn Leu Phe Thr Asn Ser Ser Ala Tyr Tyr Phe

625 630 635 640

Leu Ala Ser Leu Leu Val Asp Gly Lys Leu Thr Tyr Gln Ser Gln Pro

645 650 655

Leu Thr Phe Gly Leu Glu Pro Gly Glu Ser Gly Thr Phe Val Leu Pro

660 665 670

Trp Pro Glu Val Glu Asp Glu Lys Gly Glu Ile Val Tyr Gln Val Thr

675 680 685

Ala His Leu Lys Glu Asp Leu Pro Trp Ala Asp Glu Gly Phe Thr Val

690 695 700

Ala Glu Ala Glu Glu Ala Val Thr Lys Leu Pro Glu Phe Tyr Pro Ala

705 710 715 720

Gly Arg Pro Glu Leu Val Asp Ser Asp Phe Asn Leu Gly Leu Lys Gly

725 730 735

Asn Gly Phe Arg Ile Leu Phe Ser Lys Ala Lys Gly Trp Pro Val Ser

740 745 750

Ile Lys Tyr Ala Gly Arg Glu Tyr Leu Lys Arg Leu Pro Glu Phe Thr

755 760 765

Phe Trp Arg Ala Leu Thr Asp Asn Asp Arg Gly Ala Gly Tyr Gly Tyr

770 775 780

Asp Leu Ala Lys Trp Glu Asn Ala Gly Lys Tyr Ala Arg Leu Gln Asp

785 790 795 800

Ile Ser Tyr Glu Ile Lys Glu Asn Ser Ala Leu Val Lys Thr Thr Phe

805 810 815

Thr Leu Pro Val Ala Leu Lys Gly Asp Leu Thr Ile Thr Tyr Glu Val

820 825 830

Asp Ser Leu Gly Lys Ile Ala Val Thr Ala Asn Phe Pro Gly Ala Val

835 840 845

Glu Asn Gly Leu Leu Pro Ala Phe Gly Leu Asn Phe Ala Leu Pro Lys

850 855 860

Glu Leu Ser Asp Tyr Arg Tyr Tyr Gly Leu Gly Pro Asn Glu Ser Tyr

865 870 875 880

Ala Asp Arg Leu Glu Gly Ser Tyr Leu Gly Ile Tyr Gln Gly Ala Val

885 890 895

Glu Lys Asn Phe Thr Pro Tyr Leu Arg Pro Gln Glu Ala Gly Asn Arg

900 905 910

Ser Lys Val Arg Tyr Tyr Gln Leu Phe Asp Glu Glu Gly Gly Leu Glu

915 920 925

Phe Thr Ala Asn Gly Ala Asp Leu Asn Leu Ser Ala Leu Pro Tyr Ser

930 935 940

Ala Ala Gln Ile Glu Ala Ala Asp His Ala Phe Glu Leu Thr Asn Asn

945 950 955 960

Tyr Thr Trp Val Arg Ala Leu Ala Ala Gln Met Gly Val Gly Gly Asp

965 970 975

Asp Ser Trp Gly Gln Lys Val His Pro Glu Phe Cys Leu Asp Ala Gln

980 985 990

Glu Ala Arg Gln Leu Lys Leu Val Ile Gln Pro Leu Leu Leu Lys

995 1000 1005

<210> 18

<211> 705

<212> PRT

<213> Bifidobacterium angulatum

<400> 18

Met Ala His Arg Arg Thr Phe His Trp Pro Ser Leu Leu Thr Glu Ser

1 5 10 15

Gly Arg Gly Ile Ala Phe Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Pro

20 25 30

Glu Asp Val Trp Asp Asp Asp Ile Arg Leu Met Lys Gln Ala Gly Val

35 40 45

Asn Thr Val Ala Leu Ala Ile Phe Ser Trp Asp Arg Ile Gln Pro Glu

50 55 60

Lys His Arg Trp Glu Phe Gly Trp Leu Asp Cys Ile Ile Asp Lys Leu

65 70 75 80

Gly Lys Ala Gly Ile Ala Val Asp Leu Ala Ser Ala Thr Ala Thr Ala

85 90 95

Pro Leu Trp Leu Tyr Glu Gln His Pro Glu Val Leu Pro His Asp Lys

100 105 110

Tyr Gly His Pro Ile Asn Ala Gly Ser Arg Gln Ser Trp Ser Pro Thr

115 120 125

Ser Pro Val Phe Lys Glu Tyr Ala Leu Thr Leu Cys Arg Lys Leu Ala

130 135 140

Glu Arg Tyr Gly Thr Asn Pro Tyr Val Thr Ala Trp His Met Gly Asn

145 150 155 160

Glu Tyr Gly Trp Asn Asn Arg Tyr Asp Tyr Cys Asp Asn Ala Leu His

165 170 175

Ala Phe Arg Ala Trp Cys Glu Arg Lys Tyr Gly Thr Ile Glu Ala Leu

180 185 190

Asn Ala Ala Trp Gly Thr Thr Phe Trp Gly Gln Glu Met Asn Gly Phe

195 200 205

Asp Glu Val Leu Ile Pro Arg Phe Met Gly Ala Asp Ser Met Val Asn

210 215 220

Pro Gly Gln Lys Leu Asp Phe Glu Arg Phe Gly Asn Asp Met Leu Leu

225 230 235 240

Asp Phe Tyr Arg Ala Glu Arg Asp Ala Ile Ala Glu Ile Cys Pro Asp

245 250 255

Lys Pro Phe Thr Thr Asn Phe Met Val Ser Thr Asp Gln Cys Cys Met

260 265 270

Asp Tyr Ala Asp Trp Ala Asn Glu Val Asp Phe Val Ser Asn Asp His

275 280 285

Tyr Phe His Glu Gly Glu Ser His Ile Asp Glu Leu Phe Cys Ser Asp

290 295 300

Ala Leu Met Asp Ser Leu Ala Leu Gly Arg Pro Trp Tyr Val Met Glu

305 310 315 320

His Ser Thr Ser Ala Val Gln Trp Lys Asp Leu Asn Ile Arg Lys Arg

325 330 335

Lys Gly Glu Thr Val Arg Asp Ser Val Ala His Val Ala Met Gly Ala

340 345 350

Asp Ala Ile Asn Phe Phe Gln Trp Arg Ala Ser Ala Phe Gly Ala Glu

355 360 365

Ser Phe His Ser Ala Met Val Pro His Ala Gly Glu His Thr Lys Leu

370 375 380

Tyr Arg Ser Val Cys Glu Leu Gly Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Asp

385 390 395 400

Ala Gly Val Gln Gly Ser Glu Leu Val Arg Ser Asp Thr Ala Ile Leu

405 410 415

Phe Ser Ala Glu Ser Glu Trp Ala Thr Arg Ser Glu Thr Leu Pro Ser

420 425 430

Lys Lys Leu Asn His Trp His Asp Val Arg Asp Trp Tyr Arg Ala Tyr

435 440 445

Leu Asp Ala Gly Thr Arg Ala Asp Ile Val Pro Leu Lys Tyr Asp Trp

450 455 460

Ser Gly Tyr Ala Thr Val Val Leu Pro Thr Val Leu Met Leu Ser Ala

465 470 475 480

Ala Asp Thr Ala Arg Leu Glu Arg Phe Val Arg Asp Gly Gly Thr Val

485 490 495

Val Val Gly Tyr Ala Ser Gly Leu Ile Asp Glu Asn Phe His Thr Trp

500 505 510

Leu Gly Gly Tyr Pro Gly Ala Gly Asp Gly Met Leu Arg Thr Met Leu

515 520 525

Gly Ile Arg Gly Glu Glu Phe Asn Ile Leu Gly Ala Gln Ala Glu Gly

530 535 540

Glu Pro Ser Glu Ile Arg Leu Ser Asn Gly Met Val Thr Arg Leu Trp

545 550 555 560

Gln Asn Asp Ile Ala Val Asp Gly Ala Asp Thr Glu Val Leu Ala Ser

565 570 575

Tyr Ala Gly Thr Gln Ala Asp Glu Trp Glu Leu Asp Gly Thr Ala Ala

580 585 590

Ile Thr Arg Asn Pro Tyr Gly Lys Gly Met Ala Tyr Phe Val Gly Cys

595 600 605

Asp Leu Asn Val Ala Asp Leu Ala Val Phe Val Gly Asp His Leu Thr

610 615 620

Val Gly Gln Ala Cys Glu Ala Gly Asp Gly Ala Asp Tyr Asp Pro Thr

625 630 635 640

Ile Thr Leu His Thr Glu Arg Ala Ser Ala Glu Ala Ile Phe Asp Phe

645 650 655

Tyr Leu Pro Arg Gly Lys Asn Glu Thr Val Val Ser Gly Ile Ser Gly

660 665 670

Glu Pro Val Tyr Arg Phe Gln Cys Asp Glu Gly Glu Ala Pro Gly Val

675 680 685

Tyr Thr Ile Arg Arg Asn Gly Val Leu Val Val Lys Arg Tyr Asn Arg

690 695 700

Gln

705

<210> 19

<211> 626

<212> PRT

<213> Lactobacillus fermentum

<400> 19

Met Glu Ala Glu Leu Lys Trp Leu Asp Asp Pro Glu Val Phe Arg Val

1 5 10 15

Asn Gln Leu Pro Ala His Ser Asp His Arg Phe Tyr Arg Asp Gln Glu

20 25 30

Glu Ala Ala Leu Glu Lys Ser Ser Tyr Val Gln Asn Leu Asn Gly Arg

35 40 45

Trp Gly Phe Lys Phe Ser Lys Asn Pro Met Glu Arg Pro Val Asp Phe

50 55 60

Tyr Lys Leu Asp Phe Asp Arg Asn Asp Phe Gly Glu Ile Glu Val Pro

65 70 75 80

Ser Glu Ile Glu Leu Ser Asn Phe Ala Gln Ile Asn Tyr Thr Asn Ile

85 90 95

Thr Met Pro Trp Thr Gly Lys Ile Tyr Arg Arg Pro Ala Tyr Thr Leu

100 105 110

Gly Asp Asn Lys Glu Glu Gly Ser Phe Ser Gln Gly Gln Asp Asn Thr

115 120 125

Val Gly Ser Tyr Val Arg His Phe Thr Leu Ala Glu Gly Leu Lys Asn

130 135 140

His Asp Val His Val Val Phe Glu Gly Val Glu Arg Ala Met Tyr Val

145 150 155 160

Trp Leu Asn Gly His Phe Ile Gly Tyr Ala Glu Asp Ser Phe Thr Pro

165 170 175

Ser Glu Phe Asp Leu Thr Pro Tyr Leu Val Asp Gly Asp Asn Leu Leu

180 185 190

Ala Val Glu Val Tyr Lys His Ala Thr Ser Ser Trp Ile Glu Asp Gln

195 200 205

Asp Met Phe Arg Phe Ser Gly Ile Phe Arg Asp Val Asn Leu Val Ala

210 215 220

Gln Pro Ser Ile His Val Gln Asp Leu Lys Ile Asn Ala Arg Val Ala

225 230 235 240

Asp Asp Met Lys Thr Gly Ser Leu Gly Leu Val Leu Lys Met Val Gly

245 250 255

Gln Pro Gly Ser Val Gln Val Glu Val Ala Asp Gln Thr Gly Ala Ala

260 265 270

Val Leu Asn Arg Gln Leu Asn Ala Asp Gly Asn Trp Thr Met Ala Pro

275 280 285

Val Gln Leu Val Gly Ile His Leu Trp Asp Asn His His Pro Tyr Leu

290 295 300

Tyr Gln Leu Thr Leu Thr Val Arg Asp Ala Thr Gly Arg Val Val Glu

305 310 315 320

Val Ile Pro Tyr Gln Phe Gly Phe Arg Arg Val Glu Ile Asp Gln Asp

325 330 335

Lys Val Leu Arg Leu Asn Gly Lys Arg Leu Ile Ile Asn Gly Val Asn

340 345 350

Arg His Glu Trp Asn Cys His Arg Gly Arg Ala Val Thr Ile Glu Asp

355 360 365

Met His Thr Asp Leu Gly Ile Phe Lys Glu Asn Asn Ile Asn Ala Val

370 375 380

Arg Thr Ser His Tyr Pro Asp Gln Ile Pro Trp Tyr Tyr Leu Cys Asp

385 390 395 400

Arg Glu Gly Ile Tyr Met Met Ala Glu Asn Asn Leu Glu Ser His Ala

405 410 415

Thr Trp Gln Lys Phe Gly Gln Asp Glu Pro Ser Tyr Asn Val Pro Gly

420 425 430

Ser Leu Pro Gln Trp Lys Glu Ala Val Val Asp Arg Ala Arg Ser Asn

435 440 445

Tyr Glu Ile Phe Lys Asn His Thr Ala Ile Leu Phe Trp Ser Val Gly

450 455 460

Asn Glu Ser Tyr Ala Gly Glu Asp Ile Leu Ala Met Asn Asn Tyr Tyr

465 470 475 480

Lys Glu Val Asp Asp Thr Arg Pro Val His Tyr Glu Gly Val Val His

485 490 495

Thr Lys Glu Tyr Arg Asp Gln Ile Ser Asp Phe Glu Ser Trp Met Tyr

500 505 510

Leu Pro Pro Lys Glu Val Glu Ala Tyr Leu Lys Lys Asn Pro Asp Lys

515 520 525

Pro Phe Ile Glu Cys Glu Tyr Met His Ser Met Gly Asn Ser Val Gly

530 535 540

Gly Met Gly Ser Tyr Ile Lys Leu Leu Asp Lys Tyr Pro Gln Tyr Cys

545 550 555 560

Gly Gly Phe Ile Trp Asp Phe Val Asp Gln Ala Ile Glu Val Val Asp

565 570 575

Pro Val Thr Gly Gln Lys Ser Met Arg Tyr Gly Gly Asp Phe Asp Asp

580 585 590

His His Ala Asp Asn Glu Phe Ser Gly Asp Gly Ile Cys Phe Ala Asp

595 600 605

Arg Thr Pro Lys Pro Ala Met Gln Glu Val Lys Tyr Tyr Tyr Gly Leu

610 615 620

His Lys

625

<210> 20

<211> 320

<212> PRT

<213> Lactobacillus fermentum

<400> 20

Met Asp Tyr Thr Asn Lys Leu His Val Val Tyr Asp Asp Asn Ile Leu

1 5 10 15

Gly Leu Asp Gly Lys Asp Phe Gln Tyr Leu Phe Ser Tyr Glu Gln Gly

20 25 30

Gly Pro Glu Ser Phe Lys Ile Lys Gly Lys Glu Trp Leu Tyr Arg Ser

35 40 45

Pro Arg Pro Thr Phe Trp Arg Ala Thr Thr Asp Asn Asp Arg Gly Asn

50 55 60

Gly Phe Asn Val Ser Ser Val Gln Trp Leu Ala Ala Asp Tyr Val Leu

65 70 75 80

Pro Cys Gln Asp Ile Ala Leu Gln Val Asp Gly Lys Asp Lys Lys Leu

85 90 95

Pro Leu Ala Pro Lys Thr Asn Arg Tyr Ser Asn Gln Glu Phe Ala Lys

100 105 110

Lys Val Lys Ile Thr Phe Thr Tyr Gln Thr Gln Thr Val Pro Ala Thr

115 120 125

Thr Val Gln Val Ser Tyr Thr Val Lys Ala Ser Gly Lys Ile Lys Val

130 135 140

Asn Val His Tyr Thr Gly Ala Gln Leu Pro Ser Leu Pro Val Leu Gly

145 150 155 160

Trp Arg Met Ile Met Pro Thr Pro Ala Thr Ser Phe Asp Tyr Glu Gly

165 170 175

Leu Ser Gly Glu Thr Tyr Pro Asp Arg Met Ala Gly Gly Ile Glu Gly

180 185 190

Thr Tyr His Val Glu Gly Leu Pro Val Thr Pro Tyr Leu Val Pro Gln

195 200 205

Glu Asn Gly Met His Met Ala Asn Lys Trp Val Gln Ile Thr Arg Ala

210 215 220

Thr Thr Leu Asn Asn Ala Asp Pro Asp Ala Ala Pro Phe Arg Leu Lys

225 230 235 240

Phe Glu Ala Pro Lys Lys Gly Lys Leu Asn Phe Ser Cys Leu Pro Tyr

245 250 255

Thr Ser Ala Glu Leu Glu Asn Ala Thr His Pro Glu Glu Leu Pro Ala

260 265 270

Ala His Arg Thr Val Leu Val Ile Ala Gly Glu Val Arg Gly Val Gly

275 280 285

Gly Ile Asp Ser Trp Gly Ala Asp Val Glu Glu Lys Tyr His Ile Asp

290 295 300

Ala Thr Val Asp His Asp Phe Ser Phe Lys Ile Val Pro Glu Leu Asn

305 310 315 320

<210> 21

<211> 1025

<212> PRT

<213> Kluyveromyces lactis

<400> 21

Met Ser Cys Leu Ile Pro Glu Asn Leu Arg Asn Pro Lys Lys Val His

1 5 10 15

Glu Asn Arg Leu Pro Thr Arg Ala Tyr Tyr Tyr Asp Gln Asp Ile Phe

20 25 30

Glu Ser Leu Asn Gly Pro Trp Ala Phe Ala Leu Phe Asp Ala Pro Leu

35 40 45

Asp Ala Pro Asp Ala Lys Asn Leu Asp Trp Glu Thr Ala Lys Lys Trp

50 55 60

Ser Thr Ile Ser Val Pro Ser His Trp Glu Leu Gln Glu Asp Trp Lys

65 70 75 80

Tyr Gly Lys Pro Ile Tyr Thr Asn Val Gln Tyr Pro Ile Pro Ile Asp

85 90 95

Ile Pro Asn Pro Pro Thr Val Asn Pro Thr Gly Val Tyr Ala Arg Thr

100 105 110

Phe Glu Leu Asp Ser Lys Ser Ile Glu Ser Phe Glu His Arg Leu Arg

115 120 125

Phe Glu Gly Val Asp Asn Cys Tyr Glu Leu Tyr Val Asn Gly Gln Tyr

130 135 140

Val Gly Phe Asn Lys Gly Ser Arg Asn Gly Ala Glu Phe Asp Ile Gln

145 150 155 160

Lys Tyr Val Ser Glu Gly Glu Asn Leu Val Val Val Lys Val Phe Lys

165 170 175

Trp Ser Asp Ser Thr Tyr Ile Glu Asp Gln Asp Gln Trp Trp Leu Ser

180 185 190

Gly Ile Tyr Arg Asp Val Ser Leu Leu Lys Leu Pro Lys Lys Ala His

195 200 205

Ile Glu Asp Val Arg Val Thr Thr Thr Phe Val Asp Ser Gln Tyr Gln

210 215 220

Asp Ala Glu Leu Ser Val Lys Val Asp Val Gln Gly Ser Ser Tyr Asp

225 230 235 240

His Ile Asn Phe Thr Leu Tyr Glu Pro Glu Asp Gly Ser Lys Val Tyr

245 250 255

Asp Ala Ser Ser Leu Leu Asn Glu Glu Asn Gly Asn Thr Thr Phe Ser

260 265 270

Thr Lys Glu Phe Ile Ser Phe Ser Thr Lys Lys Asn Glu Glu Thr Ala

275 280 285

Phe Lys Ile Asn Val Lys Ala Pro Glu His Trp Thr Ala Glu Asn Pro

290 295 300

Thr Leu Tyr Lys Tyr Gln Leu Asp Leu Ile Gly Ser Asp Gly Ser Val

305 310 315 320

Ile Gln Ser Ile Lys His His Val Gly Phe Arg Gln Val Glu Leu Lys

325 330 335

Asp Gly Asn Ile Thr Val Asn Gly Lys Asp Ile Leu Phe Arg Gly Val

340 345 350

Asn Arg His Asp His His Pro Arg Phe Gly Arg Ala Val Pro Leu Asp

355 360 365

Phe Val Val Arg Asp Leu Ile Leu Met Lys Lys Phe Asn Ile Asn Ala

370 375 380

Val Arg Asn Ser His Tyr Pro Asn His Pro Lys Val Tyr Asp Leu Phe

385 390 395 400

Asp Lys Leu Gly Phe Trp Val Ile Asp Glu Ala Asp Leu Glu Thr His

405 410 415

Gly Val Gln Glu Pro Phe Asn Arg His Thr Asn Leu Glu Ala Glu Tyr

420 425 430

Pro Asp Thr Lys Asn Lys Leu Tyr Asp Val Asn Ala His Tyr Leu Ser

435 440 445

Asp Asn Pro Glu Tyr Glu Val Ala Tyr Leu Asp Arg Ala Ser Gln Leu

450 455 460

Val Leu Arg Asp Val Asn His Pro Ser Ile Ile Ile Trp Ser Leu Gly

465 470 475 480

Asn Glu Ala Cys Tyr Gly Arg Asn His Lys Ala Met Tyr Lys Leu Ile

485 490 495

Lys Gln Leu Asp Pro Thr Arg Leu Val His Tyr Glu Gly Asp Leu Asn

500 505 510

Ala Leu Ser Ala Asp Ile Phe Ser Phe Met Tyr Pro Thr Phe Glu Ile

515 520 525

Met Glu Arg Trp Arg Lys Asn His Thr Asp Glu Asn Gly Lys Phe Glu

530 535 540

Lys Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Gly His Ala Met Gly Asn Gly Pro

545 550 555 560

Gly Ser Leu Lys Glu Tyr Gln Glu Leu Phe Tyr Lys Glu Lys Phe Tyr

565 570 575

Gln Gly Gly Phe Ile Trp Glu Trp Ala Asn His Gly Ile Glu Phe Glu

580 585 590

Asp Val Ser Thr Ala Asp Gly Lys Leu His Lys Ala Tyr Ala Tyr Gly

595 600 605

Gly Asp Phe Lys Glu Glu Val His Asp Gly Val Phe Ile Met Asp Gly

610 615 620

Leu Cys Asn Ser Glu His Asn Pro Thr Pro Gly Leu Val Glu Tyr Lys

625 630 635 640

Lys Val Ile Glu Pro Val His Ile Lys Ile Ala His Gly Ser Val Thr

645 650 655

Ile Thr Asn Lys His Asp Phe Ile Thr Thr Asp His Leu Leu Phe Ile

660 665 670

Asp Lys Asp Thr Gly Lys Thr Ile Asp Val Pro Ser Leu Lys Pro Glu

675 680 685

Glu Ser Val Thr Ile Pro Ser Asp Thr Thr Tyr Val Val Ala Val Leu

690 695 700

Lys Asp Asp Ala Gly Val Leu Lys Ala Gly His Glu Ile Ala Trp Gly

705 710 715 720

Gln Ala Glu Leu Pro Leu Lys Val Pro Asp Phe Val Thr Glu Thr Ala

725 730 735

Glu Lys Ala Ala Lys Ile Asn Asp Gly Lys Arg Tyr Val Ser Val Glu

740 745 750

Ser Ser Gly Leu His Phe Ile Leu Asp Lys Leu Leu Gly Lys Ile Glu

755 760 765

Ser Leu Lys Val Lys Gly Lys Glu Ile Ser Ser Lys Phe Glu Gly Ser

770 775 780

Ser Ile Thr Phe Trp Arg Pro Pro Thr Asn Asn Asp Glu Pro Arg Asp

785 790 795 800

Phe Lys Asn Trp Lys Lys Tyr Asn Ile Asp Leu Met Lys Gln Asn Ile

805 810 815

His Gly Val Ser Val Glu Lys Gly Ser Asn Gly Ser Leu Ala Val Val

820 825 830

Thr Val Asn Ser Arg Ile Ser Pro Val Val Phe Tyr Tyr Gly Phe Glu

835 840 845

Thr Val Gln Lys Tyr Thr Ile Phe Ala Asn Lys Ile Asn Leu Asn Thr

850 855 860

Ser Met Lys Leu Thr Gly Glu Tyr Gln Pro Pro Asp Phe Pro Arg Val

865 870 875 880

Gly Tyr Glu Phe Trp Leu Gly Asp Ser Tyr Glu Ser Phe Glu Trp Leu

885 890 895

Gly Arg Gly Pro Gly Glu Ser Tyr Pro Asp Lys Lys Glu Ser Gln Arg

900 905 910

Phe Gly Leu Tyr Asp Ser Lys Asp Val Glu Glu Phe Val Tyr Asp Tyr

915 920 925

Pro Gln Glu Asn Gly Asn His Thr Asp Thr His Phe Leu Asn Ile Lys

930 935 940

Phe Glu Gly Ala Gly Lys Leu Ser Ile Phe Gln Lys Glu Lys Pro Phe

945 950 955 960

Asn Phe Lys Ile Ser Asp Glu Tyr Gly Val Asp Glu Ala Ala His Ala

965 970 975

Cys Asp Val Lys Arg Tyr Gly Arg His Tyr Leu Arg Leu Asp His Ala

980 985 990

Ile His Gly Val Gly Ser Glu Ala Cys Gly Pro Ala Val Leu Asp Gln

995 1000 1005

Tyr Arg Leu Lys Ala Gln Asp Phe Asn Phe Glu Phe Asp Leu Ala Phe

1010 1015 1020

Glu

1025

<210> 22

<211> 1305

<212> PRT

<213> Bifidobacterium bifidum

<400> 22

Met Val Glu Asp Ala Thr Arg Ser Asp Ser Thr Thr Gln Met Ser Ser

1 5 10 15

Thr Pro Glu Val Val Tyr Ser Ser Ala Val Asp Ser Lys Gln Asn Arg

20 25 30

Thr Ser Asp Phe Asp Ala Asn Trp Lys Phe Met Leu Ser Asp Ser Val

35 40 45

Gln Ala Gln Asp Pro Ala Phe Asp Asp Ser Ala Trp Gln Gln Val Asp

50 55 60

Leu Pro His Asp Tyr Ser Ile Thr Gln Lys Tyr Ser Gln Ser Asn Glu

65 70 75 80

Ala Glu Ser Ala Tyr Leu Pro Gly Gly Thr Gly Trp Tyr Arg Lys Ser

85 90 95

Phe Thr Ile Asp Arg Asp Leu Ala Gly Lys Arg Ile Ala Ile Asn Phe

100 105 110

Asp Gly Val Tyr Met Asn Ala Thr Val Trp Phe Asn Gly Val Lys Leu

115 120 125

Gly Thr His Pro Tyr Gly Tyr Ser Pro Phe Ser Phe Asp Leu Thr Gly

130 135 140

Asn Ala Lys Phe Gly Gly Glu Asn Thr Ile Val Val Lys Val Glu Asn

145 150 155 160

Arg Leu Pro Ser Ser Arg Trp Tyr Ser Gly Ser Gly Ile Tyr Arg Asp

165 170 175

Val Thr Leu Thr Val Thr Asp Gly Val His Val Gly Asn Asn Gly Val

180 185 190

Ala Ile Lys Thr Pro Ser Leu Ala Thr Gln Asn Gly Gly Asn Val Thr

195 200 205

Met Asn Leu Thr Thr Lys Val Ala Asn Asp Thr Glu Ala Ala Ala Asn

210 215 220

Ile Thr Leu Lys Gln Thr Val Phe Pro Lys Gly Gly Lys Thr Asp Ala

225 230 235 240

Ala Ile Gly Thr Val Thr Thr Ala Ser Lys Ser Ile Ala Ala Gly Ala

245 250 255

Ser Ala Asp Val Thr Ser Thr Ile Thr Ala Ala Ser Pro Lys Leu Trp

260 265 270

Ser Ile Lys Asn Pro Asn Leu Tyr Thr Val Arg Thr Glu Val Leu Asn

275 280 285

Gly Asp Thr Val Leu Asp Thr Tyr Asp Thr Glu Tyr Gly Phe Arg Trp

290 295 300

Thr Gly Phe Asp Ala Thr Ser Gly Phe Ser Leu Asn Gly Glu Lys Val

305 310 315 320

Lys Leu Lys Gly Val Ser Met His His Asp Gln Gly Ser Leu Gly Ala

325 330 335

Val Ala Asn Arg Arg Ala Ile Glu Arg Gln Val Glu Ile Leu Gln Lys

340 345 350

Met Gly Val Asn Ser Ile Arg Thr Thr His Asn Pro Ala Ala Lys Ala

355 360 365

Leu Ile Asp Val Cys Asn Glu Lys Gly Val Leu Val Val Glu Glu Val

370 375 380

Phe Asp Met Trp Asn Arg Ser Lys Asn Gly Asn Thr Glu Asp Tyr Gly

385 390 395 400

Lys Trp Phe Gly Gln Thr Ile Ala Gly Asp Asn Ala Val Leu Gly Gly

405 410 415

Asp Lys Asp Glu Thr Trp Ala Lys Phe Asp Leu Thr Ser Thr Ile Asn

420 425 430

Arg Asp Arg Asn Ala Pro Ser Val Ile Met Trp Ser Leu Gly Asn Glu

435 440 445

Met Met Glu Gly Ile Ser Gly Ser Val Ser Asp Phe Pro Ala Thr Ser

450 455 460

Ala Lys Leu Val Ala Trp Thr Lys Ala Ala Asp Ser Thr Arg Pro Met

465 470 475 480

Thr Tyr Gly Asp Asn Lys Ile Lys Ala Asn Trp Asn Glu Ser Asn Thr

485 490 495

Met Gly Asp Asn Leu Thr Ala Asn Gly Gly Val Val Gly Thr Asn Tyr

500 505 510

Ser Asp Gly Ala Asn Tyr Asp Lys Ile Arg Thr Thr His Pro Ser Trp

515 520 525

Ala Ile Tyr Gly Ser Glu Thr Ala Ser Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ile

530 535 540

Tyr Asn Arg Thr Thr Gly Gly Ala Gln Ser Ser Asp Lys Gln Leu Thr

545 550 555 560

Ser Tyr Asp Asn Ser Ala Val Gly Trp Gly Ala Val Ala Ser Ser Ala

565 570 575

Trp Tyr Asp Val Val Gln Arg Asp Phe Val Ala Gly Thr Tyr Val Trp

580 585 590

Thr Gly Phe Asp Tyr Leu Gly Glu Pro Thr Pro Trp Asn Gly Thr Gly

595 600 605

Ser Gly Ala Val Gly Ser Trp Pro Ser Pro Lys Asn Ser Tyr Phe Gly

610 615 620

Ile Val Asp Thr Ala Gly Phe Pro Lys Asp Thr Tyr Tyr Phe Tyr Gln

625 630 635 640

Ser Gln Trp Asn Asp Asp Val His Thr Leu His Ile Leu Pro Ala Trp

645 650 655

Asn Glu Asn Val Val Ala Lys Gly Ser Gly Asn Lys Val Pro Val Val

660 665 670

Val Tyr Thr Asp Ala Ala Lys Val Lys Leu Tyr Phe Thr Pro Lys Gly

675 680 685

Ser Thr Glu Lys Arg Leu Ile Gly Glu Lys Ser Phe Thr Lys Lys Thr

690 695 700

Thr Ala Ala Gly Tyr Thr Tyr Gln Val Tyr Glu Gly Thr Asp Lys Asp

705 710 715 720

Ser Thr Ala His Lys Asn Met Tyr Leu Thr Trp Asn Val Pro Trp Ala

725 730 735

Glu Gly Thr Ile Ser Ala Glu Ala Tyr Asp Glu Asn Asn Arg Leu Ile

740 745 750

Pro Glu Gly Ser Thr Glu Gly Asn Ala Ser Val Thr Thr Thr Gly Lys

755 760 765

Ala Ala Lys Leu Lys Ala Asp Ala Asp Arg Lys Thr Ile Thr Ala Asp

770 775 780

Gly Lys Asp Leu Ser Tyr Ile Glu Val Asp Val Thr Asp Ala Asn Gly

785 790 795 800

His Ile Val Pro Asp Ala Ala Asn Arg Val Thr Phe Asp Val Lys Gly

805 810 815

Ala Gly Lys Leu Val Gly Val Asp Asn Gly Ser Ser Pro Asp His Asp

820 825 830

Ser Tyr Gln Ala Asp Asn Arg Lys Ala Phe Ser Gly Lys Val Leu Ala

835 840 845

Ile Val Gln Ser Thr Lys Glu Ala Gly Glu Ile Thr Val Thr Ala Lys

850 855 860

Ala Asp Gly Leu Gln Ser Ser Thr Val Lys Ile Ala Thr Thr Ala Val

865 870 875 880

Pro Gly Thr Ser Thr Glu Lys Thr Val Arg Ser Phe Tyr Tyr Ser Arg

885 890 895

Asn Tyr Tyr Val Lys Thr Gly Asn Lys Pro Ile Leu Pro Ser Asp Val

900 905 910

Glu Val Arg Tyr Ser Asp Gly Thr Ser Asp Arg Gln Asn Val Thr Trp

915 920 925

Asp Ala Val Ser Asp Asp Gln Ile Ala Lys Ala Gly Ser Phe Ser Val

930 935 940

Ala Gly Thr Val Ala Gly Gln Lys Ile Ser Val Arg Val Thr Met Ile

945 950 955 960

Asp Glu Ile Gly Ala Leu Leu Asn Tyr Ser Ala Ser Thr Pro Val Gly

965 970 975

Thr Pro Ala Val Leu Pro Gly Ser Arg Pro Ala Val Leu Pro Asp Gly

980 985 990

Thr Val Thr Ser Ala Asn Phe Ala Val His Trp Thr Lys Pro Ala Asp

995 1000 1005

Thr Val Tyr Asn Thr Ala Gly Thr Val Lys Val Pro Gly Thr Ala Thr

1010 1015 1020

Val Phe Gly Lys Glu Phe Lys Val Thr Ala Thr Ile Arg Val Gln Arg

1025 1030 1035 1040

Ser Gln Val Thr Ile Gly Ser Ser Val Ser Gly Asn Ala Leu Arg Leu

1045 1050 1055

Thr Gln Asn Ile Pro Ala Asp Lys Gln Ser Asp Thr Leu Asp Ala Ile

1060 1065 1070

Lys Asp Gly Ser Thr Thr Val Asp Ala Asn Thr Gly Gly Gly Ala Asn

1075 1080 1085

Pro Ser Ala Trp Thr Asn Trp Ala Tyr Ser Lys Ala Gly His Asn Thr

1090 1095 1100

Ala Glu Ile Thr Phe Glu Tyr Ala Thr Glu Gln Gln Leu Gly Gln Ile

1105 1110 1115 1120

Val Met Tyr Phe Phe Arg Asp Ser Asn Ala Val Arg Phe Pro Asp Ala

1125 1130 1135

Gly Lys Thr Lys Ile Gln Ile Ser Ala Asp Gly Lys Asn Trp Thr Asp

1140 1145 1150

Leu Ala Ala Thr Glu Thr Ile Ala Ala Gln Glu Ser Ser Asp Arg Val

1155 1160 1165

Lys Pro Tyr Thr Tyr Asp Phe Ala Pro Val Gly Ala Thr Phe Val Lys

1170 1175 1180

Val Thr Val Thr Asn Ala Asp Thr Thr Thr Pro Ser Gly Val Val Cys

1185 1190 1195 1200

Ala Gly Leu Thr Glu Ile Glu Leu Lys Thr Ala Thr Ser Lys Phe Val

1205 1210 1215

Thr Asn Thr Ser Ala Ala Leu Ser Ser Leu Thr Val Asn Gly Thr Lys

1220 1225 1230

Val Ser Asp Ser Val Leu Ala Ala Gly Ser Tyr Asn Thr Pro Ala Ile

1235 1240 1245

Ile Ala Asp Val Lys Ala Glu Gly Glu Gly Asn Ala Ser Val Thr Val

1250 1255 1260

Leu Pro Ala His Asp Asn Val Ile Arg Val Ile Thr Glu Ser Glu Asp

1265 1270 1275 1280

His Val Thr Arg Lys Thr Phe Thr Ile Asn Leu Gly Thr Glu Gln Glu

1285 1290 1295

Phe Pro Ala Asp Ser Asp Glu Arg Asp

1300 1305

<210> 23

<211> 30

<212> DNA

<213> synthetic

<223> "комбинированная ДНК/РНК молекула"

<220>

<223> комбинированная ДНК/РНК молекула

<400> 23

attaaccaug cgacgcaact tcgaatggcc 30

<210> 24

<211> 31

<212> DNA

<213> synthetic

<223> "комбинированная ДНК/РНК молекула"

<220>

<223> комбинированная ДНК/РНК молекула

<400> 24

atcttctcut taccgcctta ccacgagcac g 31

<210> 25

<211> 33

<212> DNA

<213> synthetic

<223> "комбинированная ДНК/РНК молекула"

<220>

<223> комбинированная ДНК/РНК молекула

<400> 25

agagaagaut ttcagcctga tacagattaa atc 33

<210> 26

<211> 33

<212> DNA

<213> synthetic

<223> "комбинированная ДНК/РНК молекула"

<220>

<223> комбинированная ДНК/РНК молекула

<400> 26

atggttaaut cctcctgtta gcccaaaaaa cgg 33

<210> 27

<211> 22

<212> DNA

<213> synthetic

<400> 27

cggcgtcaca ctttgctatg cc 22

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> synthetic

<400> 28

ccgcgctact gccgccaggc 20

<---

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения кисломолочного продукта, предусматривающий (а) обеспечение молочной основы, и (б) преобразование молочной основы в кисломолочный продукт, который имеет pH от 3,0 до 5,0, при этом до, во время или после любой из стадий (a)-(б) добавляют бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающий оптимальной активностью при pH от 4,0 до ниже pH 6,7, измеренной при 37°C. Также предложены кисломолочный продукт, полученный указанным способом и содержащий указанный бактериальный пептид, и применение указанного бактериального пептида в качестве лактазы в способе получения кисломолочного продукта. Изобретение позволяет получить кисломолочный продукт при использовании на любой стадии способа стабильных при относительно высокой активности при низких значениях рН бета-галактозидаз. 3 н. и 22 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 5 пр.

1. Способ получения кисломолочного продукта, включающий стадии:

а) обеспечения молочной основы, и

б) преобразования молочной основы в кисломолочный продукт, который имеет pH от 3,0 до 5,0, и

в) добавления до, во время или после любой из стадий (a)-(б) бактериального пептида,

проявляющего ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающего оптимальной активностью при pH от 4,0 до ниже pH 6,7, измеренной при 37°C, где бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20, либо их ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

2. Способ по п. 1, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

3. Способ по п. 1 или 2, где указанный бактериальный пептид обладает оптимальной активностью при pH ниже pH 5,5, измеренной при 37°C, предпочтительно обладает оптимальной активностью при pH от pH 3 до pH 5, измеренной при 37°C.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14 или ее ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где указанный бактериальный пептид имеет происхождение из молочнокислой бактерии, предпочтительно имеет происхождение из молочнокислой бактерии родов Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где ферментативная бета-галактозидазная активность определена путем разведения бактериального пептида в буфере и добавления указанного бактериального пептида к реакционной смеси, которая приготовлена путем смешивания 13 мкл разведенного бактериального пептида к 37 мкл раствора лактозы, и инкубации в течение 10 мин при 37°C.

7. Способ по п. 6, где буфер представляет собой буферный раствор 50 ммоль NaH₂PO₄, pH 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄, и раствор лактозы представляет собой 140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 ммоль натрий-цитратного буферного раствора с pH 4,5, содержащего 100 мкмоль MgSO₄.

8. Способ по любому из пп. 1-7, дополнительно включающий стадию:

г) подвергания кисломолочного продукта термообработке для снижения содержания бактерий до не более 1х10exp02 КОЕ(колониеобразующая единица) на г, с получением термообработанного кисломолочного продукта.

9. Способ по любому из пп. 1-8, дополнительно включающий стадию:

д) хранения кисломолочного продукта, полученного на стадии (б), или термообработанного кисломолочного продукта, полученного на стадии (г), при температуре по меньшей мере 20°C, предпочтительно в течение по меньшей мере 1 суток, более предпочтительно в течение по меньшей мере 3 суток.

10. Способ по любому из пп. 1-9, при котором молочную основу преобразуют в кисломолочный продукт путем добавления химического подкислителя и/или путем ферментации заквасочной культуры молочнокислых бактерий.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют на стадии (б), и/или бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют между стадиями (б) и (в), и/или где бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, добавляют между стадиями (в) и (г).

12. Кисломолочный продукт, полученный способом по любому из пп. 1-11, который имеет pH от 3,0 до 5,0, содержащий бактериальный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, обладающий оптимальной активностью при pH от 4,0 до ниже pH 6,7, измеренной при 37°C, где бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20, либо их ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

13. Продукт по п. 12, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

14. Продукт по п. 12 или 13, где указанный бактериальный пептид обладает оптимальной активностью при pH ниже pH 5,5, измеренной при 37°C, предпочтительно обладает оптимальной активностью при pH от pH 3 до pH 5, измеренной при 37°C.

15. Продукт по любому из пп. 12-14, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14 или ее ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

16. Продукт по любому из пп. 12-15, где указанный бактериальный пептид имеет происхождение из молочнокислой бактерии, предпочтительно имеет происхождение из молочнокислой бактерии родов Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.

17. Продукт по любому из пп. 12-16, где ферментативная бета-галактозидазная активность определена путем разведения бактериального пептида в буфере и добавления указанного бактериального пептида к реакционной смеси, которая приготовлена путем смешивания 13 мкл разведенного бактериального пептида к 37 мкл раствора лактозы, и инкубации в течение 10 мин при 37°C.

18. Продукт по п. 17, где буфер представляет собой буферный раствор 50 ммоль NaH₂PO₄, pH 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄, и раствор лактозы представляет собой 140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 ммоль натрий-цитратного буферного раствора с pH 4,5, содержащего 100 мкмоль MgSO₄.

19. Применение бактериального пептида в качестве лактазы в способе получения кисломолочного продукта по п. 12 из молочной основы для преобразования по меньшей мере части лактозы, присутствующей в молочной основе, в глюкозу и галактозу, где

бактериальный пептид проявляет ферментативную активность бета-галактозидазы, которая обладает оптимальной активностью при pH от 4,0 до ниже pH 6,7, измеренной при 37°C, и где бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и/или 20, либо их ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную любой из следующих последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

20. Применение по п. 19, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность с по меньшей мере 90% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

21. Применение по п. 19 или 20, где указанный бактериальный пептид обладает оптимальной активностью при pH ниже pH 5,5, измеренной при 37°C, предпочтительно обладает оптимальной активностью при pH от pH 3 до pH 5, измеренной при 37°C.

22. Применение по любому из пп. 19-21, где указанный бактериальный пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14 или ее ферментативно активными фрагментами, или аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 5, 6, 7, 11, 12 и/или 14, имеющую не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 80% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей, предпочтительно с по меньшей мере 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей.

23. Применение по любому из пп. 19-22, где указанный бактериальный пептид имеет происхождение из молочнокислой бактерии, предпочтительно имеет происхождение из молочнокислой бактерии родов Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus.

24. Применение по любому из пп. 19-23, где ферментативная бета-галактозидазная активность определена путем разведения бактериального пептида в буфере и добавления указанного бактериального пептида к реакционной смеси, которая приготовлена путем смешивания 13 мкл разведенного бактериального пептида к 37 мкл раствора лактозы, и инкубации в течение 10 мин при 37°C.

25. Применение по п. 24, где буфер представляет собой буферный раствор 50 ммоль NaH₂PO₄, pH 6,7, содержащий 100 мкмоль MgSO₄, и раствор лактозы представляет собой 140 ммоль лактозы, приготовленной в 100 ммоль натрий-цитратного буферного раствора с pH 4,5, содержащего 100 мкмоль MgSO₄.