[ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ]
Настоящая заявка испрашивает преимущественное право приоритета на основании заявки на патент Кореи №10-2018-0045245, поданной 18 апреля 2018 года, заявки на патент Кореи №10-2018-0045246, поданной 18 апреля 2018 года, заявки на патент Кореи №10-2018-0045247, поданной 18 апреля 2018 года, и заявки на патент Кореи №10-2018-0045248, поданной 18 апреля 2018 года, и полное содержание указанных заявок, раскрытое в описании и чертежах, включено в настоящий документ посредством ссылок.
Настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции и вакцине Streptococcus pneumoniae, и, более конкретно, настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции и вакцине, которая содержит конъюгат капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок-носитель.
[УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ]
Streptococcus pneumoniae является основной бактерией, вызывающей пневмонию. Кроме того, она вызывает инвазивные заболевания, такие как септицемия, бактериемия, менингит и т.д. Согласно Национальному статистическому управлению [статистика по причинам смерти за 2014 год] уровень смертности от пневмонии в 2014 году составлял 23,7 человека на сто тысяч, для сравнения в 2015 году он увеличился в 2,8 раза, и уровень смертности от пневмонии продолжает непрерывно расти. Кроме того, согласно отчету ВОЗ, изданному в 2012 году, в 2008 году по всему миру 476000 детей младше 5 лет с отрицательным статусом ВИЧ умерли от инфекции Streptococcus pneumoniae, что составляет 5% смертей детей, не достигших 5-летнего возраста. Пневмококки разделены более чем на 90 серотипов в зависимости от структурных и иммунологических характеристик капсульного полисахарида, который является основным фактором вирулентности, расположенным вокруг их внешней поверхности (в клеточной мембране).
Для предупреждения заболеваний, вызываемых Streptococcus pneumoniae, доктором Робертом Острианом (Robert Austrian) в 1977 году была разработана 14-валентная полисахаридная вакцина, и на ее основе в результате дальнейших разработок была получена 23-валентная полисахаридная вакцина. Было продемонстрировано, что поливалентная пневмококковая полисахаридная вакцина подходит для предупреждения заболеваний, вызванных Streptococcus pneumoniae, у пожилых пациентов и пациентов из группы высокого риска. Тем не менее, у младенцев и детей отсутствует иммунный ответ на большинство полисахаридов Streptococcus pneumoniae, так как у них иммунный ответ не зависит от T-клеток. Таким образом, была разработана конъюгированная вакцина на основе капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae и белка-носителя, которая может вызывать T-зависимый ответ.
7-валентная конъюгированная вакцина Streptococcus pneumoniae (Превенар®) содержит капсульные полисахариды, выделенные из 7 наиболее распространенных серотипов 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F. Было продемонстрировано, что она обладает высокой иммуногенностью и эффективна в отношении инвазивных пневмококковых заболеваний и среднего отита у младенцев и детей, таким образом, она изначально была одобрена в США в 2000 году. Затем последовательно были разработаны Превенар 13®, 13-валентная конъюгированная вакцина, в которую были добавлены 6 серотипов 1, 3, 5, 6A, 7F, 19A, и Синфлорикс, 10-валентная конъюгированная вакцина, в которую были добавлены 3 серотипа 1, 5, 7F, и число инвазивных заболеваний, вызываемых Streptococcus pneumoniae, еще больше сократилось. Тем не менее, изменения серотипов, вызванные введением в оборот Превенара, Превенара 13 и Синфлорикса, и общее снижение числа заболеваний, вызываемых серотипами, содержащимися в вакцине, особенно подчеркивают важность невакцинных серотипов, которые ранее имели относительно низкую значимость.
В частности, в Северной Америке и Бразилии возросла заболеваемость инвазивными пневмококковыми заболеваниями, вызванными серотипом 20 Streptococcus pneumoniae (см., например, [Kendall B. et al., Vaccine. 34:474-478, 2016], [Yildirim I. et al., Pediatr Infect Dis J. 31(10): 1016-1021, 2012] или [Caierão J. et al., PLoS ONE 9(10): e111129, 2014]). Кроме того, в исследовании CASPER, проводившемся в Канаде, наблюдали увеличение заболеваемости серотипами 8 и 12F, а также серотипом 19A (Sá-Leão A. et al., J Clin Microbiol., 49(4): 1369-75, 2011). В опубликованном недавно исследовании сообщалось, что в Норвегии и Израиле после введения в оборот Превенара 13 увеличилось число случаев заболеваний, вызванных невакцинными серотипами, и в качестве примеров невакцинных серотипов были указаны 23A, 23B, 12F, 15A/15B/15C, 31, 33F, 7C и 8 (Martin J., Pediatr Infect Dis J., 33(11):e286-90, 2014).
Несмотря на устойчивое увеличение заболеваемости пневмококковыми заболеваниями, вызываемыми серотипами 2, 9N, 17F и/или 20 Streptococcus pneumoniae, исследования эффективных мер предупреждения или лечения инфекций, вызванных данными серотипами, не проводились.
Таким образом, возрастает необходимость в иммуногенных конъюгатах и иммуногенных композициях, направленных на невакцинные серотипы, содержащих серотипы, которые включены в поливалентные полисахаридные вакцины, но не включены в конъюгированные вакцины, для обеспечения защиты более широкого спектра.
[ОПИСАНИЕ]
[ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА]
Соответственно, задача, которая должна быть решена настоящим изобретением, заключается в обеспечении поливалентной вакцины, которая может обеспечивать широкий спектр защиты.
Кроме того, также предложена иммуногенная композиция, содержащая новый серотип, который ранее не был включен в конъюгированную вакцину.
Кроме того, задача, которая должна быть решена настоящим изобретением, заключается в обеспечении пневмококковой конъюгированной вакцины, обеспечивающей превосходный титр антител.
[ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ]
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащий капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и белок-носитель, конъюгированный с каждым капсульным полисахаридом.
В одном из вариантов реализации предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то полисахарид с молекулярной массой от 100 до 400 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то полисахарид с молекулярной массой от 400 до 900 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то полисахарид с молекулярной массой от 400 до 800 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 2, имеет молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 17F, имеет молекулярную массу от 300 до 4500 кДа, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 20, имеет молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующийся тем, что белок-носитель представляет собой TT (столбнячный анатоксин) или CRM197, и предпочтительно иммуногенная композиция, содержащая только один серотип, может содержать CRM197 в качестве белка-носителя.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то отношение капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 0,5 до 2,0, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то отношение капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 0,5 до 18, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то отношение капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 1 до 5.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где в молекулярно-массовом распределении от 20 до 60% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 2, или
в молекулярно-массовом распределении от 15 до 60% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 17F, или
в молекулярно-массовом распределении от 70 до 90% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 20.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где
в конъюгате степень окисления конъюгированного полисахарида составляет от 2 до 18 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 2, или
в конъюгате степень окисления конъюгированного полисахарида составляет от 1 до 22 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 17F, или
в конъюгате степень окисления конъюгированного полисахарида составляет от 4 до 16 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 20.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 15 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями, и
серотипы включают 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F, и
серотипы конъюгированы с CRM 197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 23 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями, и
серотипы включают 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, и
среди этих серотипов капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 3 и 5, конъюгированы с белком-носителем TT, и капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, конъюгированы с белком-носителем CRM197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 24 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями, и
серотипы включают 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, и
капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 1 и 5, конъюгированы с белком-носителем TT, и капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, конъюгированы с белком-носителем CRM197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, которая содержит физиологически приемлемый наполнитель.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой вакцину.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов, выбранных из группы, состоящей из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида, выделенного из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F Streptococcus pneumoniae, в растворенной клетке;
(c) стадию приведения очищенного полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, связанного с белком-носителем.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения способ получения может дополнительно включать стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae для придания ему нужного размера перед стадией (c) в случае капсульных полисахаридов, выделенных из серотипов 2 и 17F.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующийся тем, что используемый для объединения на стадии (d) белок-носитель образует конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения во взаимодействие с одним или более восстановителями, выбранными из группы, состоящей из цианоборгидрида, борана-пиридина и боргидридной ионообменной смолы.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующийся тем, что стадия (c) включает приведение во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,22 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок для предупреждения или лечения инфекции Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения инфекции, вызванной серотипами 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F Streptococcus pneumoniae у субъекта,
путем введения эффективной дозы иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащий
капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и
один или 2 или более белков-носителей, конъюгированных с соответствующими капсульными полисахаридами, субъекту. «И/или» обозначает «и» или «или».
Способ может предупреждать или лечить инфекции, вызванные одним или более серотипами, выбранными из группы, состоящей из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, или может происходить инфицирование одним или более серотипами, и способ может предупреждать инфицирование 15 серотипами, или способ может предупреждать инфицирование 23 серотипами, или способ может предупреждать инфицирование 24 серотипами.
В одном из примеров настоящего изобретения для предупреждения или лечения пневмококковой инфекции предложено применение конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащего
капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и
один или 2 или более белков-носителей, конъюгированных с соответствующими капсульными полисахаридами.
В одном из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 2, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 2 с молекулярной массой от 100 до 400 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа, и, например, белок-носитель может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 0,5 до 2,0.
От 20 до 60% иммуногенного конъюгата серотипа 2 может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 2 до 18.
Если полисахарид серотипа 2 Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,02 до 0,12 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять 1000 ~ 16000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 20 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 0,5 до 2,0.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 2 Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae для придания полисахариду нужного размера;
(d) стадию приведения во взаимодействие полисахарида нужного размера, полученного на стадии (c), для активации полисахарида; и
(e) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Белок-носитель, используемый для объединения на стадии (e), может образовывать конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения во взаимодействие с восстановителем.
Стадия (d) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,02 ~ 0,12 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, который объединяют с белком-носителем на стадии (e), может иметь молекулярную массу от 100 до 400 кДа.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, в котором белок-носитель представляет собой CRM197.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа.
В одном из примеров начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять от 0,5 до 2:1.
В качестве другого примера может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, где по меньшей мере от 20 до 60% иммуногенного конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В настоящем изобретении предложен иммуногенный конъюгат серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 9N, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
В одном из примеров настоящего изобретения полисахарид серотипа 9N с молекулярной массой от 200 до 700 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 500 до 4000 кДа, и белок-носитель может представлять собой CRM197.
Отношение капсульного полисахарида серотипа 9N к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) составляет от 0,1 до 5 и предпочтительно может составлять 0,5 ~ 2,5.
В одном из примеров от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В одном из примеров конъюгат может иметь степень окисления от 2 до 19.
В одном из примеров настоящего изобретения, если полисахарид серотипа 9N Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением 0,02 ~ 0,19 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять 500 ~ 4000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 15 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять 0,5 ~ 2,5.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 9N Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 9N Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию приведения полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что используемый для объединения на стадии (d) белок-носитель приводят во взаимодействие с восстановителем для получения конъюгата с активированным полисахаридом.
Стадия (c) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,02 ~ 0,19 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Полисахарид, приводимый во взаимодействие с окислителем на стадии (c), может иметь молекулярную массу от 400 до 900 кДа.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (d), может иметь молекулярную массу 200-700 кДа.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 500 до 4000 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 9N к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять от 0,5 до 2,5:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом. В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель. В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В одном из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 17F, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 17F с молекулярной массой от 400 до 900 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 300 до 4500 кДа, и, например, белок-носитель может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 0,5 до 18.
От 15 до 60% иммуногенного конъюгата серотипа 17F может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 1 до 22.
Если полисахарид серотипа 17F Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,01 до 0,22 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять от 300 до 4500 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 15 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 0,5 до 18.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 17F Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae для придания полисахариду нужного размера;
(d) стадию приведения во взаимодействие полисахарида нужного размера, полученного на стадии (c), для активации полисахарида; и
(e) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что используемый для объединения на стадии (e) белок-носитель может образовывать конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения его во взаимодействие с восстановителем.
Стадия (d) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,22 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (e), может иметь молекулярную массу от 400 до 900 кДа.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 300 до 4500 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять 1:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может присутствовать в пределах 0,3 Kd молекулярно-массового распределения при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом. В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель. В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 20, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 20 с молекулярной массой от 400 до 800 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа, и, например, белок-носитель, может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 1 до 5.
От 70 до 90% иммуногенного конъюгата серотипа 20 может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 4 до 16.
Если полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,01 до 0,04 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять от 1000 до 4000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 70 ~ 90% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 1 до 5.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 20 Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию приведения полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Белок-носитель, используемый для объединения на стадии (d), можно приводить во взаимодействие с восстановителем для получения конъюгата с активированным полисахаридом.
Стадия (c) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,04 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (d), может иметь молекулярную массу от 400 до 800 кДа.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат согласно настоящему изобретению, полученный указанным способом, может иметь молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять 1:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 70 до 90% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd молекулярно-массового распределения при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом.
В качестве одного из примеров может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащий капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов, выбранных из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и белок-носитель, конъюгированный с соответствующими капсульными полисахаридами.
В одном из вариантов реализации предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то полисахарид с молекулярной массой от 100 до 400 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то полисахарид с молекулярной массой от 400 до 900 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то полисахарид с молекулярной массой от 400 до 800 кДа активируется и связывает белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 2, имеет молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 17F, имеет молекулярную массу от 300 до 4500 кДа, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то иммуногенный конъюгат, содержащий полисахарид, выделенный из серотипа 20, имеет молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующаяся тем, что белок-носитель представляет собой TT (столбнячный анатоксин) или CRM197, и предпочтительно иммуногенная композиция, содержащая только один серотип, может содержать CRM197 в качестве белка-носителя.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 2, то отношение капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 0,5 до 2,0, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 17F, то отношение капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 0,5 до 18, или
если иммуногенная композиция содержит полисахарид, выделенный из серотипа 20, то отношение капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (полисахарид/белок, (масс./масс.)) составляет от 1 до 5.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где в молекулярно-массовом распределении от 20 до 60% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 2, или
в молекулярно-массовом распределении от 15 до 60% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 17F, или
в молекулярно-массовом распределении от 70 до 90% конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 20.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где
степень окисления конъюгированного полисахарида в конъюгате составляет от 2 до 18 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 2, или
степень окисления конъюгированного полисахарида в конъюгате составляет от 1 до 22 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 17F, или
степень окисления конъюгированного полисахарида в конъюгате составляет от 4 до 16 в случае иммуногенного конъюгата, содержащего полисахарид, выделенный из серотипа 20.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 15 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями,
и серотипы включают 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F, и
серотипы конъюгированы с CRM 197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 23 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями,
и серотипы включают 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F,
и среди этих серотипов капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 3 и 5, конъюгированы с белком-носителем TT, и капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, конъюгированы с белком-носителем CRM197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция представляет собой композицию, в которой полисахариды, выделенные из 24 серотипов, отличных друг от друга, конъюгированы с соответствующими белками-носителями,
и серотипы включают 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F,
и среди этих серотипов капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 1 и 5, конъюгированы с белком-носителем TT, и капсульные полисахариды, выделенные из серотипов 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, конъюгированы с белком-носителем CRM197.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, где иммуногенная композиция содержит физиологически приемлемый наполнитель.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложена иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующаяся тем, что указанная иммуногенная композиция представляет собой вакцину.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов, выбранных из группы, состоящей из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида, выделенного из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, в растворенной клетке;
(c) стадию приведения очищенного полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, связанного с белком-носителем.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения способ получения может дополнительно включать стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae для придания полисахариду нужного размера перед стадией (c) в случае капсульных полисахаридов, выделенных из серотипов 2 и 17F.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующийся тем, что используемый для объединения на стадии (d) белок-носитель образует конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения во взаимодействие с одним или более восстановителями, выбранными из группы, состоящей из цианоборгидрида, борана-пиридина и боргидридной ионообменной смолы.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ получения иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, характеризующийся тем, что стадия (c) представляет собой приведение во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,22 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения предложен конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок для предупреждения или лечения инфекции Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом.
В качестве одного из вариантов реализации может быть предложен способ предупреждения или лечения инфекции, вызванной серотипами Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F, у субъекта,
путем введения эффективной дозы иммуногенной композиции, содержащей конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащий
капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и
один или 2 или более белков-носителей, конъюгированных с соответствующими капсульными полисахаридами. «И/или» обозначает «и» или «или».
Способ может предупреждать или лечить инфекцию, вызванную одним или более серотипами, выбранными из группы, состоящей из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, или может происходить инфицирование одним или более серотипами, и способ может предупреждать инфицирование 15 серотипами, или способ может предупреждать инфицирование 23 серотипами, или способ может предупреждать инфицирование 24 серотипами.
В одном из примеров настоящего изобретения для предупреждения или лечения пневмококковой инфекции предложено применение конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, содержащего
капсульный полисахарид, выделенный из одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и
один или 2 или более белков-носителей, конъюгированных с соответствующими капсульными полисахаридами.
В одном из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 2, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 2 с молекулярной массой от 100 до 400 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа, и, например, белок-носитель может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 0,5 до 2,0.
От 20 до 60% иммуногенного конъюгата серотипа 2 может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 2 до 18.
Если полисахарид серотипа 2 Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,02 до 0,12 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять 1000 ~ 16000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 20 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 0,5 до 2,0.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 2 Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae для придания полисахариду нужного размера;
(d) стадию приведения полисахарида нужного размера, полученного на стадии (c), во взаимодействие для активации полисахарида; и
(e) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Белок-носитель, используемый для объединения на стадии (e), может образовывать конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения во взаимодействие с восстановителем.
Стадия (d) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,02 ~ 0,12 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (e), может иметь молекулярную массу от 100 до 400 кДа.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, где белок-носитель представляет собой CRM197.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа.
В одном из примеров начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 2 к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять от 0,5 до 2:1.
В качестве другого примера может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, где по меньшей мере от 20 до 60% иммуногенного конъюгата находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В настоящем изобретении предложен иммуногенный конъюгат серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 9N, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
В одном из примеров настоящего изобретения полисахарид серотипа 9N с молекулярной массой от 200 до 700 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 500 до 4000 кДа, и белок-носитель может представлять собой CRM197.
Отношение капсульного полисахарида серотипа 9N к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 0,1 до 5 и предпочтительно может составлять 0,5 ~ 2,5.
В одном из примеров от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В одном из примеров конъюгат может иметь степень окисления от 2 до 19.
В одном из примеров настоящего изобретения, если полисахарид серотипа 9N Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением 0,02 ~ 0,19 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять 500 ~ 4000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 15 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять 0,5 ~ 2,5.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 9N Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 9N Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию приведения полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что используемый для объединения на стадии (d) белок-носитель приводят во взаимодействие с восстановителем для получения конъюгата с активированным полисахаридом.
Стадия (c) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,02 ~ 0,19 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Полисахарид, взаимодействующий с окислителем на стадии (c), может иметь молекулярную массу от 400 до 900 кДа.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (d), может иметь молекулярную массу 200-700 кДа.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 500 до 4000 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 9N к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять от 0,5 до 2,5:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом. В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель. В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В одном из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 17F, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 17F с молекулярной массой от 400 до 900 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 300 до 4500 кДа, и, например, белок-носитель может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 0,5 до 18.
От 15 до 60% иммуногенного конъюгата серотипа 17F может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 1 до 22.
Если полисахарид серотипа 17F Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,01 до 0,22 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять от 300 до 4500 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 15 ~ 60% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 0,5 до 18.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 17F Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию гидролиза очищенного капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae для придания полисахариду нужного размера;
(d) стадию приведения полисахарида нужного размера, полученного на стадии (c), во взаимодействие для активации полисахарида; и
(e) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, характеризующийся тем, что белок-носитель, используемый для объединения на стадии (e), может образовывать конъюгат с активированным полисахаридом путем приведения во взаимодействие с восстановителем.
Стадия (d) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,22 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (e), может иметь молекулярную массу от 400 до 900 кДа.
Иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 300 до 4500 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 17F к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять 1:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 15 до 60% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd молекулярно-массового распределения при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом. В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель. В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В одном из примеров настоящего изобретения предложен иммуногенный конъюгат серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, содержащий капсульный полисахарид серотипа 20, выделенный из Streptococcus pneumoniae; и белок-носитель, связанный с капсульным полисахаридом.
Полисахарид серотипа 20 с молекулярной массой от 400 до 800 кДа может быть активирован и связывать белок-носитель с образованием конъюгата.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат может иметь молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа, и, например, белок-носитель может представлять собой CRM197.
В одном из примеров настоящего изобретения отношение капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю в иммуногенном конъюгате (масс./масс.) может составлять от 1 до 5.
От 70 до 90% иммуногенного конъюгата серотипа 20 может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В другом примере предложен иммуногенный конъюгат серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, имеющий степень окисления от 4 до 16.
Если полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae окисляют добавлением от 0,01 до 0,04 мкг периодата на 1 мкг сахара и конъюгируют с белком, то молекулярная масса конъюгата может составлять от 1000 до 4000 кДа, и в заданном диапазоне (0,3 kd или менее) молекулярно-массового распределения может находиться 70 ~ 90% конъюгата, и отношение полисахарид/белок может составлять от 1 до 5.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
В качестве другого примера настоящего изобретения может быть предложен способ получения иммуногенного конъюгата серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, включающий
(a) стадию ферментации и растворения бактериальной клетки, вырабатывающей капсульный полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae;
(b) стадию очистки капсульного полисахарида серотипа 20 Streptococcus pneumoniae в растворенной клетке;
(c) стадию приведения полисахарида во взаимодействие с окислителем для его активации; и
(d) стадию объединения активированного полисахарида с белком-носителем для получения конъюгата капсульного полисахарида серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, связанного с белком-носителем.
Белок-носитель, используемый для объединения на стадии (d), можно приводить во взаимодействие с восстановителем для получения конъюгата с активированным полисахаридом.
Стадия (c) может включать процесс приведения во взаимодействие с использованием 0,01 ~ 0,04 мкг периодата на 1 мкг полисахарида при температуре от 20 до 25° в течение периода времени от 15 до 20 часов.
Активированный полисахарид, объединяемый с белком-носителем на стадии (d), может иметь молекулярную массу от 400 до 800 кДа.
В одном из примеров настоящего изобретения иммуногенный конъюгат согласно настоящему изобретению, полученный указанным способом, может иметь молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа.
Начальное отношение вводимого активированного капсульного полисахарида серотипа 20 к белку-носителю (белок-носитель:полисахарид) может составлять 1:1.
В одном из примеров по меньшей мере от 70 до 90% иммуногенного конъюгата может находиться в пределах 0,3 Kd молекулярно-массового распределения при использовании колонки CL-4B.
В качестве одного из примеров настоящего изобретения может быть предложен иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом.
В качестве одного из примеров может быть предложена иммуногенная композиция, содержащая иммуногенный конъюгат, полученный указанным способом, и физиологически приемлемый наполнитель.
В качестве другого примера может быть предложена вакцина, содержащая иммуногенную композицию.
Характеристики конъюгата полисахарид серотипа 20-белок-носитель
В одном из вариантов реализации конъюгат может иметь молекулярную массу от 1300 до 4300 кДа или молекулярную массу от 1250 до 4250 кДа, или молекулярную массу от 1200 до 4200 кДа, или молекулярную массу от 1150 до 4150 кДа, или молекулярную массу от 1100 до 4100 кДа, или молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа. Все числовые значения, включенные в любой из приведенных выше диапазонов, рассматривают в качестве отдельного варианта реализации.
Для приведенных выше диапазонов молекулярных масс может быть получен конъюгат с неизменно превосходным выходом. Кроме того, может быть понижено относительное содержание свободного сахара. Кроме того, приведенные выше диапазоны молекулярных масс могут быть связаны с превосходной иммуногенностью.
Иммуногенную композицию согласно настоящему изобретению получают объединением соответствующих конъюгатов полисахарид-белок после их очистки.
Конъюгат полисахарид-белок серотипов согласно настоящему изобретению может быть охарактеризован отношением сахарида к белку-носителю (количество полисахарида/количество белка) (масс./масс.).
В некоторых вариантах реализации отношение сахарида к белку-носителю для каждого серотипа в конъюгате полисахарид-белок (масс./масс.) может составлять от 0,1 до 7, от 0,2 до 7,5, от 0,3 до 7, от 0,4 до 6,5, от 0,5 до 6, от 0,6 до 6,5, от 0,7 до 6, от 0,8 до 5,8, от 0,9 до 5,6, от 0,95 до 5,3 или от 1 до 5. Например, оно может составлять примерно 1,0, примерно 1,1, примерно 1,2, примерно 1,3, примерно 1,4, примерно 1,5, примерно 1,6, примерно 1,7, примерно 1,8, примерно 1,9, примерно 2,0, примерно 2,1, примерно 2,2, примерно 2,3, примерно 2,4, примерно 2,5, примерно 2,6, примерно 2,7, примерно 2,8, примерно 2,9, примерно 3,0, примерно 3,1, примерно 3,2, примерно 3,3, примерно 3,4, примерно 3,5, примерно 3,6, примерно 3,7, примерно 3,8, примерно 3,9, примерно 4, примерно 4,1, примерно 4,2, примерно 4,3, примерно 4,4, примерно 4,5, примерно 4,6, примерно 4,7, примерно 4,8, примерно 4,9, примерно 5.
В другом варианте реализации отношение сахарида к белку-носителю (масс./масс.) может составлять от 1 до 5, от 1,2 до 4,5 или от 1,3 до 4.
Предпочтительно белок-носитель может представлять собой CRM197.
Если отношение сахарида к белку-носителю является таким, как описано выше, то может быть получен конъюгат с неизменно превосходным выходом. Кроме того, может быть понижено относительное содержание свободного сахара. Кроме того, в случае приведенных выше диапазонов иммуногенность является превосходной, и при этом конъюгат можно сохранять в стабильной форме в отсутствие отрицательного воздействия других серотипов.
Конъюгат и иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению могут содержать свободный сахарид, не конъюгированный с белком-носителем посредством ковалентной связи, но присутствующий в композиции конъюгата полисахарид-белок. Свободный сахарид может быть ассоциирован с конъюгатом полисахарид-белок нековалентными связями (т.е. он может быть соединен нековалентными связями или адсорбирован в конъюгате полисахарид-белок, или может быть инкапсулирован в конъюгате полисахарид-белок или конъюгатом полисахарид-белок).
В предпочтительном варианте реализации конъюгат полисахарид-белок содержит свободный полисахарид каждого серотипа в количестве, составляющем менее чем примерно 70%, примерно 60%, примерно 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15% или 10% от общего количества полисахарида каждого типа.
Конъюгат полисахарид-белок каждого серотипа также может быть охарактеризован молекулярно-массовым распределением (Kd). Относительное распределение молекул конъюгата по размерам может быть измерено с использованием среды для эксклюзионной хроматографии (CL-4B, гранулы поперечно-сшитой агарозы, 4%). Профиль молекулярно-массового распределения конъюгата получают путем эксклюзионной хроматографии (SEC) на гравитационной колонке. Крупные молекулы, исключенные из пор среды, элюируются быстрее мелких молекул. Элюаты колонок собирают при помощи коллектора фракций. Проводят колориметрический анализ сахаридов во фракциях. Для измерения Kd калибруют колонку для определения фракций, молекулы которых полностью исключаются из пор (V0), (Kd = 0), и фракций, для которых наблюдается максимальное удерживание (Vi), (Kd = 1). Фракции, в которых достигается указанная характеристика образца (Ve), связаны с Kd уравнением Kd = (Ve - V0)/(Vi - V0).
В предпочтительном варианте реализации по меньшей мере 30% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
В предпочтительном варианте реализации по меньшей мере 95% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В предпочтительном варианте реализации по меньшей мере 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В предпочтительном варианте реализации по меньшей мере 60% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В предпочтительном варианте реализации от 50 до 90% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В предпочтительном варианте реализации от 65 до 90% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B. В предпочтительном варианте реализации от 70 до 90% конъюгата полисахарид-белок каждого серотипа может находиться в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
1.4 Комбинация капсульный сахарид-белок-носитель
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит конъюгат одного или более полисахаридов, выделенных из группы серотипов Streptococcus pneumoniae, состоящей из серотипов 2, 9N, 17F и 20, с белком. В одном из вариантов реализации любая из иммуногенных композиций может содержать конъюгат, в котором полисахарид, выделенный из одного или более серотипов, выбранных из группы, состоящей из 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F, дополнительно конъюгирован с белком-носителем.
В одном из вариантов реализации любые конъюгаты полисахарид-белок в иммуногенной композиции конъюгированы с CRM197 и/или TT, соответственно. Предпочтительно 23-валентная или 24-валентная иммуногенная композиция может содержать одновременно CRM197 и TT в качестве белков-носителей, и в этом случае предпочтительно серотип 5 содержит TT в качестве белка-носителя. В одном из примеров в 23-валентной иммуногенной композиции полисахариды, выделенные из серотипов 3 и 5, конъюгированы с TT, и полисахариды, выделенные из серотипов 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, конъюгированы с CRM197. В одном из примеров в 24-валентной иммуногенной композиции полисахариды, выделенные из серотипов 1 и 5, конъюгированы с TT, и серотипы 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F конъюгированы с CRM197.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция может содержать конъюгат полисахарид-белок, выделенный из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 разных серотипов.
2. Доза иммуногенной композиции
Количество конъюгата(-ов) капсульный сахарид-белок-носитель в каждой дозе выбирают как количество, индуцирующее иммунный защитный ответ в отсутствие значительных побочных эффектов обычных вакцин. Количество, такое как приведено выше, можно изменять в зависимости от применения конкретного иммуногена и способа его обеспечения.
2.1 Количество конъюгата капсульный полисахарид-белок-носитель
Количество конкретного конъюгата капсульный полисахарид-белок-носитель в иммуногенной композиции может быть вычислено на основании отношения общего количества полисахаридов (конъюгированных и неконъюгированных) к конъюгату. Например, если конъюгат капсульный полисахарид-белок-носитель содержит 20% свободных полисахаридов, то это означает, что в 100 мкг дозе полисахарида содержится примерно 80 мкг конъюгированных полисахаридов и примерно 20 мкг неконъюгированных полисахаридов. Количество конъюгата полисахарид-белок может изменяться в зависимости от серотипов пневмококков. Концентрация полисахарида может быть измерена в анализе с использованием антрона или уроновой кислоты.
«Иммуногенное количество» разных полисахаридных компонентов в иммуногенной композиции может быть разным, и композиция может содержать какой-либо специфический полисахаридный антиген в количестве примерно 1 мкг, примерно 2 мкг, примерно 3 мкг, примерно 4 мкг, примерно 5 мкг, примерно 6 мкг, примерно 7 мкг, примерно 8 мкг, примерно 9 мкг, примерно 10 мкг, примерно 15 мкг, примерно 20 мкг, примерно 30 мкг, примерно 40 мкг, примерно 50 мкг, примерно 60 мкг, примерно 70 мкг, примерно 80 мкг, примерно 90 мкг или примерно 100 мкг, соответственно.
В целом, каждая доза может содержать от 0,1 мкг до 100 мкг, в частности, от 0,5 мкг до 20 мкг, более конкретно от 1,0 мкг до 10 мкг и более конкретно от 2,0 мкг до 5,0 мкг полисахаридов данного серотипа. Все числовые значения, включенные в приведенные выше диапазоны, рассматривают в качестве отдельного варианта реализации.
В одном из вариантов реализации каждая доза может содержать полисахариды в количестве примерно 1,0 мкг, примерно 1,2 мкг, примерно 1,4 мкг, примерно 1,6 мкг, примерно 1,8 мкг, примерно 2,0 мкг, примерно 2,2 мкг, примерно 2,4 мкг, примерно 2,6 мкг, примерно 2,8 мкг, примерно 3,0 мкг, примерно 3,2 мкг, примерно 3,4 мкг, примерно 3,6 мкг, примерно 3,8 мкг, примерно 4,0 мкг, примерно 4,2 мкг, примерно 4,4 мкг, примерно 4,6 мкг, примерно 4,8 мкг, примерно 5,0 мкг, примерно 5,2 мкг, примерно 5,4 мкг, примерно 5,6 мкг, примерно 5,8 мкг или примерно 6,0 мкг в каждом конкретном конъюгате капсульный сахарид-белок-носитель.
В одном из вариантов реализации каждая доза может содержать полисахариды в количестве от 1 до 3 мкг в конъюгатах полисахарид-белок, выделенных из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F. Например, доза может содержать полисахариды в количестве примерно 1,1 мкг, примерно 1,2 мкг, примерно 1,3 мкг, примерно 1,4 мкг, примерно 1,5 мкг, примерно 1,6 мкг, примерно 1,7 мкг, примерно 1,8 мкг, примерно 1,9 мкг, примерно 2,0 мкг, примерно 2,1 мкг, примерно 2,2 мкг, примерно 2,3 мкг, примерно 2,4 мкг, примерно 2,5 мкг, примерно 2,6 мкг, примерно 2,7 мкг, примерно 2,8 мкг, примерно 2,9 мкг или примерно 3,0 мкг.
В одном из вариантов реализации, если дополнительно содержится конъюгат полисахарид-белок, выделенный из серотипа 6B, то может содержаться от 2 до 6 мкг полисахаридов.
2.2 Количество белка-носителя
В одном из вариантов реализации белок-носитель может представлять собой CRM197 и/или TT.
В одном из вариантов реализации, если белок-носитель представляет собой CRM197, то каждая доза иммуногенной композиции может содержать белки-носители в количестве от 10 мкг до 150 мкг, от 20 мкг до 100 мкг, от 25 мкг до 95 мкг. Например, 24-валентная иммуногенная композиция согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения может содержать от 70 до 90 мкг белков-носителей.
В одном из вариантов реализации, если белок-носитель представляет собой TT, то каждая доза иммуногенной композиции может содержать белки-носители в количестве от 5 мкг до 15 мкг, от 8 мкг до 10 мкг.
3. Адъювант
В некоторых вариантах реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, может дополнительно содержать один или более адъювантов. Термин «адъювант» относится к соединению или смеси, которое(-ая) повышает иммунный ответ на антиген. Адъювант может усиливать иммунный ответ на антиген, обладающий низкой иммуногенностью, и/или может повышать титр антител к антигену, и/или может снижать эффективную дозу антигена для достижения иммунного ответа у субъекта, если в случае однократного введения повышение титра антител не происходит или является слабовыраженным или клеточный иммунный ответ не индуцируется. Таким образом, действие адъюванта заключается, главным образом, в повышении иммунного ответа, что известно специалистам в данной области техники. Подходящие адъюванты, повышающие эффективность композиции, включают, но не ограничиваются указанными, следующие вещества:
В одном из примеров адъювант может включать соли алюминия (алюм.), например, гидроксид алюминия, фосфат алюминия, сульфат алюминия и т.д.
В конкретном варианте реализации адъювант представляет собой соль алюминия. Адъювант на основе соли алюминия может представлять собой вакцину, осажденную квасцами, или вакцину, адсорбированную на квасцах. Адъюванты на основе солей алюминия известны в данной области техники. Соли алюминия включают гидратированный оксид алюминия, гидрат оксида алюминия, тригидрат оксида алюминия (ATH), гидрат алюминия, тригидрат алюминия, алгидрогель, суперфос, амфогель, гидроксид алюминия (III), гидроксифосфат-сульфат алюминия (адъювант на основе фосфата алюминия (APA)), аморфный оксид алюминия, тригидратированный оксид алюминия или тригидроксиалюминий, но не ограничиваются указанными.
APA представляет собой водную суспензию гидроксифосфата алюминия. APA получают смешением хлорида алюминия и фосфата натрия при объемном отношении 1:1 и осаждением гидроксифосфата алюминия. После завершения процесса смешения целевые агрегированные частицы, имеющие размер в диапазоне 2-8 мкм, получают измельчением материала в смесителе с высоким сдвиговым усилием. Затем проводят диафильтрацию продуктов в солевом растворе и стерилизуют паром.
В конкретном варианте реализации белок адсорбируют при отношении 50-200 г белка/мг гидроксида алюминия с использованием коммерчески доступного Al(OH)3 (например, алгидрогеля или суперфоса производства Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co. (U.S. New York Westbury). В другом варианте реализации уровень адсорбции белка может быть разным в зависимости от pI (изоэлектрический pH) белка и pH среды. Белки с пониженным pI более активно адсорбируются на положительно заряженные ионы алюминия по сравнению с белком с повышенным pI. Соль алюминия может образовывать Al-депо, обеспечивающее медленное высвобождение в течение 2-3 недель, и/или может участвовать в неспецифической активации макрофагов и активации комплемента, и/или может стимулировать врожденный иммунный механизм (возможно, посредством стимуляции мочевой кислотой).
В предпочтительном варианте реализации адъювант представляет собой адъювант на основе алюминия, выбранный из группы, состоящей из фосфата алюминия, сульфата алюминия и гидроксида алюминия. В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем документе, содержит адъювант на основе фосфата алюминия.
4. Состав
Иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению может быть получена в жидкой форме (то есть, в виде раствора или суспензии) или в лиофилизированной форме. Предпочтительно жидкий состав можно вводить напрямую в той форме, в которой он присутствует в упаковке, и, таким образом, этот состав идеально подходит для инъекции и не требует перерастворения в водной среде, что требуется в случае лиофилизированной композиции согласно настоящему изобретению.
Иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению может быть получена способом, одобренным в данной области техники. Например, композиция может быть получена путем объединения отдельного пневмококкового конъюгата с физиологически приемлемым наполнителем. Примеры наполнителей, таких как указано выше, включают без ограничений воду, забуференный солевой раствор, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и раствор декстрозы.
В настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция, содержащая любую из комбинаций описанных конъюгатов полисахарид-белок и фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, носителей или разбавителей.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению имеет жидкую форму, предпочтительно водную жидкую форму.
Иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению может содержать один или более видов буферов, солей, двухвалентных катионов, неионогенных детергентов, криопротекторов, например, сахаров, антиоксидантов, например, поглотителей свободных радикалов, и хелатообразующих агентов и любые разные их комбинации.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит буфер. В одном из вариантов реализации буфер имеет pKa от примерно 3,5 до примерно 7,5. В некоторых вариантах реализации буфер представляет собой фосфатный, сукцинатный, гистидиновый или цитратный буфер. В некоторых вариантах реализации буфер содержит сукцинат в конечной концентрации от 1 мМ до 10 мМ. В одном конкретном варианте реализации конечная концентрация сукцината составляет примерно 5 мМ.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит соль. В некоторых вариантах реализации соль выбрана из группы, состоящей из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинаций. В предпочтительном варианте реализации соль представляет собой хлорид натрия. В одном конкретном варианте реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит 150 мМ хлорид натрия.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция согласно настоящему изобретению содержит поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из сложного эфира полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот, полисорбата-80 (Tween 80), полисорбата-60 (Tween 60), полисорбата-40 (Tween 40) и полисорбата-20 (Tween 20), простого полиоксиэтиленалкильного эфира (включая Brij 58, Brij 35, но не ограничиваясь указанными), а также других материалов, например, одного или более видов неионогенных поверхностно-активных веществ, включая Triton X-100; Triton X-114, NP40, Span 85 и неионогенные поверхностно-активные вещества серии Pluronic (например, Pluronic 121), но не ограничивается указанными. В предпочтительном варианте реализации иммуногенная композиция содержит полисорбат-80 или полисорбат-20, предпочтительно полисорбат-20. В предпочтительном варианте реализации иммуногенная композиция содержит полисорбат-20 в концентрации от примерно 0,001% до примерно 2% (предпочтительно менее чем примерно 0,005%).
В одном из вариантов реализации контейнер согласно настоящему изобретению получен из стекла, металла (например, стали, нержавеющей стали, алюминия и т.д.) и/или полимеров (например, термопластичных материалов, эластомеров, термопластичных эластомеров). В одном из вариантов реализации контейнер согласно настоящему изобретению получен из стекла.
В одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен инъекционный препарат, наполненный любой из иммуногенных композиций, описанных в настоящем изобретении. В одном из вариантов реализации инъекционный препарат обрабатывают силиконом и/или получают в стеклянном контейнере.
5. Применение
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в качестве фармацевтического средства. Количество конъюгата в композиции выбирают как количество, индуцирующее иммунный защитный ответ в отсутствие значительных побочных эффектов. Указанное количество может быть разным в зависимости от серотипов пневмококков.
Иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять в разных терапевтических или профилактических способах для предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболеваний или состояний у субъекта. В частности, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для предупреждения, лечения или облегчения инфекции Streptococcus pneumoniae, заболеваний или состояний у субъекта.
Содержание всех материалов или патентных заявок, цитируемых в описании настоящей патентной заявки, включено в настоящий документ посредством ссылок.
Настоящее изобретение проиллюстрировано в прилагаемых примерах. Последующие примеры реализованы с применением традиционных стандартных способов, известных специалистам в данной области техники, за исключением случаев, где конкретно описано иное. Указанные примеры являются иллюстративными, но не ограничивают настоящее изобретение.
Иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять в разных терапевтических или профилактических способах для предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболеваний или состояний у субъекта. В частности, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для предупреждения, лечения или облегчения инфекции Streptococcus pneumoniae, заболеваний или состояний у субъекта.
В одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен способ предупреждения, лечения или облегчения инфекции Streptococcus pneumoniae, заболеваний или состояний у субъекта, включающий введение иммунологически эффективной дозы иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению субъекту.
В некоторых вариантах реализации, таких как указано выше, инфекция, заболевания или состояния выбраны из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, цереброспинального менингита, бактериемии, септицемии, пиоторакса, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса головного мозга.
В одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен способ индуцирования иммунного ответа на Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающий введение иммунологически эффективной дозы иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению субъекту.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в качестве вакцины. В одном из вариантов реализации, таких как указано выше, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для предупреждения инфекции Streptococcus pneumoniae. Таким образом, в одном из вариантов реализации в настоящем изобретении предложен способ предупреждения инфекции Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающий введение иммунологически эффективной дозы иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению субъекту.
В некоторых вариантах реализации, таких как указано выше, инфекция выбрана из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, цереброспинального менингита, бактериемии, септицемии, пиоторакса, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягкий тканей и абсцесса головного мозга. В одном из вариантов реализации субъект, которому требуется вакцинация, представляет собой млекопитающее, например, человека, кошку, овцу, свинью, лошадь, корову или собаку.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в способе предупреждения, лечения или облегчения инфекции, заболеваний или состояний, связанных со Streptococcus pneumoniae, у субъекта. В некоторых вариантах реализации, таких как указано выше, инфекция, заболевания или состояния выбраны из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, цереброспинального менингита, бактериемии, септицемии, пиоторакса, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса головного мозга.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в качестве вакцины. В одном из вариантов реализации, таких как указано выше, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для предупреждения инфекции Streptococcus pneumoniae у субъекта. Таким образом, в одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в способе профилактики инфекции Streptococcus pneumoniae у субъекта. В некоторых вариантах реализации, таких как указано выше, инфекция выбрана из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, цереброспинального менингита, бактериемии, септицемии, пиоторакса, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса головного мозга. В одном из вариантов реализации субъект, которому требуется вакцинация, представляет собой млекопитающее, например, человека, кошку, овцу, свинью, лошадь, корову или собаку.
Иммуногенную композицию согласно настоящему изобретению можно применять для защиты или лечения человека, восприимчивого к пневмококковой инфекции, путем введения иммуногенной композиции системным или чресслизистым способом. В одном из вариантов реализации иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, вводят внутримышечным, интраперитонеальным, внутрикожным или подкожным способом. В одном из вариантов реализации иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, вводят путем внутримышечной, интраперитонеальной, внутрикожной или подкожной инъекции. В одном из вариантов реализации иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, вводят путем внутримышечной или подкожной инъекции.
В способе ELISA (ферментный иммуносорбентный анализ) антитела из сыворотки вакцинированного субъекта выращивают совместно с полисахаридом, адсорбированным на твердой подложке. Связанное антитело детектируют с использованием вторичного детектирующего антитела, конъюгированного с ферментом.
В ELISA измеряют уровень типоспецифического антитела IgG к капсульному полисахариду Streptococcus pneumoniae (PS), присутствующего в сыворотке человека. При добавлении разбавленной сыворотки человека в планшет для микротитрования с покрытием из типоспецифического капсульного PS антитело, обладающее специфичностью в отношении капсульного PS, связывается с планшетом для микротитрования. Антитело, связанное с планшетом, детектируют с использованием козьего антитела к IgG человека, меченного щелочной фосфатазой, и затем субстрата п-нитрофенилфосфата.
Оптическая плотность окрашенного конечного продукта пропорциональна количеству антитела к капсульному PS, присутствующего в сыворотке.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, содержащая один или более конъюгатов полисахарид серотипа 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae-белок, может индуцировать антитело IgG, которое может связывать полисахарид серотипа 15B Streptococcus pneumoniae, в концентрации по меньшей мере 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,35, 0,4 или 0,5 мкг/мл при измерении в анализе ELISA у человека.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, содержащая один или более конъюгатов полисахарид серотипов 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae-белок, может индуцировать образование антител, способных к фагоцитозу одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из серотипов 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae, в анализе фагоцитоза, инициированного опсонином, как описано в настоящем изобретении.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, содержащая один или более конъюгатов полисахарид серотипа 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae-белок, имеет более высокий титр OPA по сравнению с титром OPA, полученным для натурального неконъюгированного капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae в испытании, проводимом в анализе OPA.
Анализ инициируемого опсонином фагоцитоза пневмококков (OPA), в котором измеряют уровень уничтожения клеток Streptococcus pneumoniae клетками, обладающими фагоцитарным действием, в присутствии функционального антитела и комплемента, рассматривают в качестве важной альтернативы для оценки эффективности пневмококковой вакцины.
Анализ инициируемого опсонином фагоцитоза (OPA) можно проводить путем выращивания смеси клеток Streptococcus pneumoniae, инактивируемой нагреванием сыворотки человека, участвующего в испытании, дифференцированных клеток HL-6 (фагоциты) и экзогенных источников комплемента (например, комплемента крольчат) друг с другом. Инициируемый опсонином фагоцитоз происходит по мере выращивания, и бактериальные клетки с покрытием антитела и комплемента уничтожаются во время инициируемого опсонином фагоцитоза. Число колониеобразующих единиц (КОЕ) выживших бактерий, уклонившихся от инициируемого опсонином фагоцитоза, измеряют путем окрашивания анализируемой смеси. Титр OPA определяют как уровень взаимного разбавления, при котором достигается 50% снижение относительно числа бактерий в контрольной лунке, не содержащей исследуемую сыворотку. Проводят интерполяцию титра OPA для 2 разбавителей, содержащих пороговое количество, обеспечивающее 50% уничтожение.
В OPA, в котором исследуют уничтожение клеток, с учетом используемых количеств в качестве конечного рассматривается титр 1:8 или более.
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, содержащая один или более конъюгатов полисахарид серотипов 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae-белок, может индуцировать титр по меньшей мере 1:8 в отношении одного или более серотипов Streptococcus pneumoniae, выбранных из 2, 9N, 17F и 20, при измерении в анализе уничтожения клеток путем инициируемого опсонином фагоцитоза (OPA). В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, содержащая один или более конъюгатов полисахарид серотипов 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae, может индуцировать титр по меньшей мере 1:8 в отношении серотипов 2, 9N, 17F и 20 Streptococcus pneumoniae у по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или по меньшей мере 93% субъектов при измерении в анализе уничтожения клеток путем инициируемого опсонином фагоцитоза (OPA).
6. Субъект, которого лечат иммуногенной композицией согласно настоящему изобретению
Как описано в настоящем изобретении, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять в разных терапевтических и профилактических способах для предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболеваний или состояний у субъекта.
В предпочтительном варианте реализации субъект представляет собой человека. В наиболее предпочтительном варианте реализации субъект представляет собой новорожденного (т.е. возрастом 3 месяца или младше), младенца (т.е. возрастом от 3 месяцев до 1 года) или ребенка младшего дошкольного возраста (т.е. возрастом от 1 года до 4 лет).
В одном из вариантов реализации иммуногенная композиция, описанная в настоящем изобретении, предназначена для применения в качестве вакцины. В варианте реализации, таком как указано выше, субъект, которому требуется вакцинация, может быть младше 1 года. Например, возраст субъекта, которому требуется вакцинация, составляет примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11 или примерно 12 месяцев. В одном из вариантов реализации возраст субъекта, которому требуется вакцинация, составляет примерно 2, примерно 4 или примерно 6 месяцев. В другом варианте реализации, субъект, которому требуется вакцинация, младше 2 лет. Например, возраст субъекта, которому требуется вакцинация, составляет от примерно 12 месяцев до примерно 15 месяцев. В некоторых случаях может требоваться одна доза иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению, но в некоторых условиях могут быть обеспечены вторая, третья или четвертая дозы.
В одном из вариантов реализации субъект, которому требуется вакцинация, представляет собой взрослого старше 50 лет, более предпочтительно взрослого старше 55 лет.
В одном из вариантов реализации субъект, которому требуется вакцинация, представляет собой взрослого старше 65 лет, 70 лет, 75 лет или 80 лет.
В одном из вариантов реализации субъект, которому требуется вакцинация, представляет собой индивидуума с иммунодефицитом, в частности, человека. Индивидуум с иммунодефицитом, в общем случае, определен как человек с пониженной или уменьшенной способностью инициировать нормальную защиту от атаки инфицирующими агентами, опосредованную физиологическими жидкостями или клетками.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, страдает от заболеваний или состояний, повреждающих иммунную систему, и у него вырабатывается антительный ответ, недостаточный для защиты от пневмококкового заболевания или для лечения заболеваний.
В одном из вариантов реализации заболевания представляют собой первичные иммунодефицитные заболевания. Предпочтительно первичные иммунодефицитные заболевания выбраны из группы, состоящей из комплексного T- и B-клеточного иммунодефицита, дефицита антител, синдрома Уэллса, заболеваний с иммунной дисрегуляцией, заболеваний, опосредованных фагоцитами, врожденного дефицита, аутовоспалительных заболеваний и дефицита комплемента.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может страдать от заболевания, выбранного из группы, состоящей из следующего: инфекция ВИЧ, синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), рак, хроническое заболевание сердца или легких, застойная сердечная недостаточность, диабет, хроническое заболевание печени, алкогольная зависимость, цирроз, истечение спинномозговой жидкости, кардиомиопатия, хронический бронхит, эмфизема, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), дисфункция селезенки (например, серповидноклеточная анемия), недостаточность функции селезенки (аспления), гематологическое злокачественное образование, лейкоз, множественная миелома, лимфома Ходжкина, лимфома, почечная недостаточность, нефротический синдром и астма.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может страдать от нарушения питания.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может принимать лекарственное средство или проходить лечение, которое снижает сопротивление организма инфекции.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может являться курильщиком.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения число белых кровяных телец (число лейкоцитов) у субъекта с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может составлять 5 x 109 клеток/литр или менее или 4 x 109 клеток/литр или менее, или 3 x 109 клеток/литр или менее, или 2 x 109 клеток/литр или менее, или 1 x 109 клеток/литр или менее, или 0,5 x 109 клеток/литр или менее, или 0,3 x 109 клеток/литр или менее, или 0,1 x 109 клеток/литр или менее.
Число белых кровяных телец (число лейкоцитов): число белых кровяных телец (WBC) в крови. WBC измеряют в рамках ОАК (общий анализ крови). Белые кровяные тельца представляют собой клетки, затрудняющие инфицирование, и отличаются от красных (доставляющих кислород) кровяных телец.
Существуют разные типы белых кровяных телец, например, нейтрофилы (полиморфонуклеарные белые кровяные тельца; PMN), базальные клетки (некоторые незрелые нейтрофилы), T-лимфоциты (T-клетки), B-лимфоциты (B-клетки), моноциты, эозинофилы и базофилы. Все указанные выше типы белых кровяных телец включены в общее число белых кровяных телец. Нормальный диапазон числа белых кровяных телец в большинстве случаев составляет от 4300 до 10800 клеток/кубический миллилитр крови. Его также называют числом белых кровяных телец, и в международной системе измерений он может быть указан как 4,3 - 10,8 x 109/литр.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, страдает от нейтропении. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения число нейтрофилов у субъекта с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может составлять 2 x 109 клеток/литр или менее или 1 x 109 клеток/литр или менее, или 0,5 x 109 клеток/литр или менее, или 0,1 x 109 клеток/литр или менее, или 0,05 x 109 клеток/литр или менее.
Низкое число белых кровяных телец, или «нейтропения», представляет собой состояние, характеризующееся аномально низким уровнем нейтрофилов в кровотоке. Нейтрофилы представляют собой уникальный вид белых кровяных телец, которые помогают предупреждать инфекцию и затрудняют инфицирование. Наиболее распространенной причиной, по которой пациенты с раком страдают от нейтропении, являются побочные эффекты химиотерапии. Нейтропения, вызванная химиотерапией, повышает риск инфицирования пациентов и приводит к приостановке лечения рака.
В конкретном варианте реализации настоящего изобретения число CD4+ клеток у субъекта с иммунодефицитом, которому требуется вакцинация, может составлять 500/мм3 или менее или 300/мм3 или менее, или 200/мм3 или менее, или 100/мм3 или менее, или 75/мм3 или менее, или 50/мм3 или менее.
Результаты исследования числа CD4 клеток обычно указывают как число клеток на мм3. Нормальное число CD4 составляет от 500 до 1600, и число CD8 составляет от 375 до 1100. Число CD4 значительно снижается у людей с ВИЧ.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения субъект с иммунодефицитом, описанный в настоящем документе, может представлять собой мужчину или женщину.
7. Назначаемое введение
В некоторых случаях может требоваться одна доза иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению, но в некоторых условиях, например, с более выраженным иммунодефицитом, могут быть обеспечены вторая, третья или четвертая дозы. После начальной вакцинации субъекту можно проводить одну дополнительную иммунизацию или более с соответствующими интервалами.
В одном из вариантов реализации схема вакцинации иммуногенной композицией согласно настоящему изобретению включает одну дозу. В конкретном варианте реализации схема с введением одной дозы предназначена для здорового человека возрастом по меньшей мере 2 года.
В одном из вариантов реализации схема вакцинации иммуногенной композицией согласно настоящему изобретению представляет собой схему с введением нескольких доз. В конкретном варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 2 доз, разделенных интервалом от примерно одного месяца до примерно двух месяцев. В конкретном варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 2 доз, разделенных интервалом примерно 1 месяц, или из серии из 2 доз, разделенных интервалом примерно 2 месяца.
В другом варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 3 доз, разделенных интервалом от примерно 1 месяца до примерно 2 месяцев. В другом варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 3 доз, разделенных интервалом примерно 1 месяц, или из серии из 3 доз, разделенных интервалом примерно 2 месяца.
В другом варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 3 доз, разделенных интервалом от примерно 1 месяца до примерно 2 месяцев, и последующей четвертой дозы, вводимой с интервалом от примерно 10 месяцев до примерно 13 месяцев после первой дозы. В другом варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 3 доз, разделенных интервалом примерно 1 месяц, и последующей четвертой дозы, вводимой с интервалом от примерно 10 месяцев до примерно 13 месяцев после первой дозы, или из серии из 3 доз, разделенных интервалом примерно 2 месяца, и последующей четвертой дозы, вводимой с интервалом от примерно 10 месяцев до примерно 13 месяцев после первой дозы.
В одном из вариантов реализации схема с введением нескольких доз состоит из по меньшей мере 1 дозы (например, 1, 2 или 3 доз), вводимых в возрасте 1 года, и последующей по меньшей мере 1 дозы, вводимой в младшем дошкольном возрасте.
В одном из вариантов реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 2 или 3 доз, разделенных интервалом от примерно 1 месяца до примерно 2 месяцев (например, от 28 до 56 дней между дозами) после начального введения в возрасте 2 месяцев, и последующей дозы, вводимой в младшем дошкольном возрасте от 12 до 18 месяцев. В одном из вариантов реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 3 доз, разделенных интервалом от примерно 1 месяца до примерно 2 месяцев (например, от 28 до 56 дней между дозами) после начального введения в возрасте 2 месяцев, и последующей дозы, вводимой в младшем дошкольном возрасте от 12 до 15 месяцев. В другом варианте реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 2 доз, разделенных интервалом примерно 2 месяца после начального введения в возрасте 2 месяцев, и последующей дозы, вводимой в младшем дошкольном возрасте от 12 до 18 месяцев.
В одном из вариантов реализации схема с введением нескольких доз состоит из серии из 4 доз вакцины, вводимых в возрасте 2, 4, 6 месяцев и от 12 до 15 месяцев.
В одном из вариантов реализации начальная доза обеспечивается на 0 день, и одна или более дополнительных доз обеспечиваются с интервалом от примерно 2 до примерно 24 недель, где предпочтительно интервал между процедурами введения составляет от 4 до 8 недель.
В одном из вариантов реализации начальная доза обеспечивается на 0 день, дополнительная доза обеспечивается примерно через 3 месяца.
[ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ]
В настоящем изобретении предложен иммуногенный конъюгат для нового серотипа, такого как серотип 17F, который ранее не использовался для обеспечения защитного действия.
В настоящем изобретении предложена поливалентная пневмококковая вакцина, обеспечивающая широкий спектр защиты благодаря тому, что содержит конъюгат нового серотипа, который ранее не использовался для обеспечения защитного действия.
Кроме того, возможно образование антител к разных серотипам пневмококков в отсутствие специфического феномена интерференции и обеспечение тем самым иммунитета широкого спектра.
Настоящее изобретение может обеспечивать превосходный титр антител.
Для поливалентной пневмококковой вакцины согласно настоящему изобретению отмечается меньше побочных эффектов.
Вакцину согласно настоящему изобретению можно инокулировать младенцам и детям младшего дошкольного возраста, а также пожилым людям.
[РЕАЛИЗАЦИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ]
Настоящее изобретение далее будет более подробно описано при помощи следующих примеров и т.д. Тем не менее, примеры настоящего изобретения могут быть модифицированы с образованием разных других форм, и объем настоящего изобретения не следует рассматривать как ограниченный примерами, описанными ниже. Примеры настоящего изобретения приведены для иллюстрации настоящего изобретения и более точного понимания настоящего изобретения.
Пример 1. Получение вакцины на основе конъюгата полисахарид, выделенный из серотипа 2, 9N, 17F или 20,-белок
[1. Конъюгат полисахарид, выделенный из серотипа 2 Streptococcus pneumoniae,-белок]
Получение конъюгата полисахарид-белок из серотипа 2 Streptococcus pneumoniae
Получение маточного банка клеток и подготовка препаратов
Серотип 2 Streptococcus pneumoniae приобретали в Американской коллекции типовых культур (ATCC) (штамм ATCC 6302). Для выделения штамма и удаления компонентов животного происхождения выращивали несколько поколений посевного материала. Замораживали пробирку с посевным материалом с использованием синтетического глицерина в качестве криоконсерванта (< -70°). Для получения банка клеток проводили пролиферацию всех культур в питательной среде на основе соевых бобов. Перед заморозкой концентрировали клетки центрифугированием и удаляли использованную среду, а затем повторно суспендировали сгусток клеток в новой среде, содержащей криоконсервант (например, синтетический глицерин).
Ферментация
Для подготовки препарата использовали культуры, выделенные из клеточного банка, которые инокулировали в бутыль для посевного материала, содержащую питательную среду на основе соевых бобов. Клетки выращивали при определенной температуре без перемешивания до достижения определенного требуемого уровня роста. Их инокулировали из бутыли для посевного материала в ферментер посевного материала, содержащий питательную среду на основе соевых бобов, с контролируемой температурой, pH и скоростью перемешивания. После прекращения роста или после достижения порога производительности ферментера ферментацию останавливали. После того, как ферментацию останавливали, добавляя инактиватор, удаляли оставшиеся компоненты клеток, используя комбинацию центрифугирования с непрерывным протоком и фильтрования.
Очистка
Очистка пневмококкового полисахарида включала фильтрование через многослойный фильтр, несколько стадий концентрирования/диафильтрации и стадии осаждения/элюирования.
Активация
Конечную концентрация полисахарида доводили примерно до 2,0 г/л в 0,01н. растворе хлороводородной кислоты, последовательно добавляя рассчитанное количество 0,1н. раствора хлороводородной кислоты и WFI (вода для инъекций). Реакцию гидролиза полисахарида проводили при 60° в течение 60 минут. После снижения температуры реакционного раствора до комнатной доводили pH реакционной смеси примерно до 6,0, добавляя 0,1M раствор моногидрофосфата натрия. После регулирования pH доводили температуру до 23°. Инициировали окисление, добавляя периодат натрия в количестве примерно 0,023~0,114 мг на 1 мг сахара. Реакцию окисления проводили при 23° в течение 18 часов.
Проводили концентрирование и диафильтрацию активированного полисахарида на мембране ультрафильтрации с MWCO 100 кДа. Диафильтрацию проводили с использованием WFI при 10-кратном объеме диафильтрации. Затем хранили очищенный активированный полисахарид при 2 ~ 8°. Очищенный активированный полисахарид был охарактеризован, в частности, при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации альдегида, определенной колориметрически, (iii) степени окисления, и (iv) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
SEC-MALLS используют для определения молекулярной массы полисахарида и конъюгата полисахарид-белок. SEC используют для разделения полисахарида в движущемся потоке текучей среды. Детектор показателя преломления (RI) и многоуглового рассеяния лазерного света используют для определения молекулярной массы. При взаимодействии света с веществом свет рассеивается, и количество рассеянного света зависит от концентрации, квадрата dn/dc (коэффициент приращения показателя преломления) и молекулярной массы материала. Определяемое значение молекулярной массы вычисляют на основании считываемой величины сигнала рассеянного света на детекторе MALLS и сигнала концентрации на детекторе RI.
Степень окисления (DO) активированного полисахарида определяли как «число молей повторяющихся звеньев сахара ÷ число молей альдегида». Число молей повторяющихся звеньев сахара определяли разными колориметрическими способами, например, способом с использованием антрона. Кроме того, в это же время определяли число молей альдегида колориметрическим способом Парка-Джонсона.
Предпочтительно активированный капсульный полисахарид серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом, имеет степень окисления от 2 до 18 и молекулярную массу от примерно 100 кДа до 400 кДа.
Способ конъюгации
Объединяли активированный полисахарид с сахарозой при отношении от 2 до 8 г сахарозы на грамм активированного полисахарида. Затем лиофилизировали бутыль со смесью. После лиофилизации хранили бутыль, содержащую лиофилизированный активированный полисахарид, при температуре от -20 до -30°. Отдельно лиофилизировали рассчитанное количество CRM197. Хранили лиофилизированный CRM197 при температуре от -20 до -30°.
Перерастворяли лиофилизированный активированный полисахарид в растворе безводного диметилсульфоксида (ДМСО). После завершения растворения полисахарида, для перерастворения лиофилизированного CRM197 к нему добавляли безводный ДМСО. В реакционном контейнере объединяли перерастворенный активированный полисахарид и перерастворенный CRM197 (отношение вводимых веществ от 0,5 до 2:1), а затем тщательно перемешивали. Инициировали реакцию конъюгации, добавляя в реакционную смесь 1,0 мольного эквивалента цианоборгидрида натрия (NaBH3CN). В реакционную смесь добавляли WFI при целевой концентрации 1% (об./об.) и проводили взаимодействие при 23° в течение периода времени от 22 до 26 часов. Обрывали реакцию конъюгации, добавляя в реакционную смесь 2,0 мольного эквивалента боргидрида натрия (NaBH4) и WFI в целевой концентрации 5% (об./об.) и блокировали тем самым непрореагировавший альдегид. Проводили реакцию блокирования при 23° в течение 4,5 часа.
Разбавляли раствор конъюгата 0,9% раствором хлорида натрия, подготавливая его для очистки путем концентрирования и диафильтрации через мембрану с MWCO 100 кДа. Пропускали разбавленный раствор конъюгата через 0,8 мкм фильтр и проводили диафильтрацию с использованием 0,9% хлорида натрия при 15-40-кратном объеме диафильтрации. После завершения диафильтрации фильтровали остаточный раствор через 0,2 мкм фильтр. Разбавляли раствор конъюгата 0,9% раствором хлорида натрия до концентрации менее чем примерно 0,55 мг/мл и после стерильного фильтрования хранили при температуре от 2 до 8°.
Очищенный конъюгат серотипа 2 был охарактеризован при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации белка, определенной колориметрически (по Лоури), (iii) отношения полисахаридов к белку, (iv) молекулярно-массового распределения, определенного путем эксклюзионной хроматографии (CL-4B), (iv) содержания свободного сахара, и (v) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 2 при регулировании степени окисления (DO). Результаты приведены в таблице 1.
[Таблица 1]
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 2 при регулировании используемого при смешении отношения активированных полисахаридов к CRM197 во время лиофилизации. Результаты приведены в таблице 2.
[Таблица 2]
Исследование иммуногенности конъюгата полисахарид серотипа 2-белок
Получали моновалентную композицию конъюгата, содержащую конъюгат полисахарида серотипа 2 Streptococcus pneumoniae, конъюгированного с белком CRM197.
Анализировали иммуногенность моновалентных иммуногенных композиций, приведенных в таблице 1 и таблице 2, с использованием ELISA у кроликов и тем самым измеряли серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке.
Группу из 5 самок новозеландских белых кроликов с массой тела от 2,5 кг до 3,5 кг иммунизировали внутримышечно на 0-й неделе предполагаемой для человека клинической дозой (конъюгат, 2,2 мкг; + алюминий, 0,25 мг/мл в виде AlPO4). Дополнительно иммунизировали кроликов на 2-й неделе такой же дозой конъюгированной вакцины и затем собирали кровь на 4-й неделе. Проводили серотип-специфический анализ ELISA образцов сыворотки, собранных на 0-й и 4-й неделе.
Результаты анализа показаны в таблице 3. У кроликов, иммунизированных моновалентной конъюгированной композицией (конъюгат №1-6), отмечали значительное увеличение общего титра IgG в отношении серотипа 2. У кроликов, иммунизированных другим конъюгатом, наблюдали значительное увеличение общего титра IgG.
Значения, приведенные в следующей таблице 3, соответствуют измеренным значениям концентрации IgG после иммунизации конъюгатом № 1-6, приведенным в таблице 1.
[Таблица 3]
[2. Конъюгат полисахарид, выделенный из серотипа 9N Streptococcus pneumoniae-белок]
Получение конъюгата полисахарид, выделенный из серотипа 9N Streptococcus pneumoniae,-белок
Получение маточного банка клеток и подготовка препаратов
Серотип 9N Streptococcus pneumoniae получали в Американской коллекции типовых культур (ATCC) (штамм ATCC 6309). Его обрабатывали так же, как и серотип 2.
Ферментация
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Очистка
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Активация
Конечная концентрация полисахарида примерно 2,0 г/л была обеспечена добавлением рассчитанного количества WFI. При необходимости доводили pH реакционной смеси примерно до 6,0. После регулирования pH доводили температуру реакционной смеси до 23°. Инициировали окисление, добавляя периодат натрия в количестве 0,024~0,189 мг примерно на 1 мг сахара. Проводили реакцию окисления при 23°C в течение 18 часов.
Проводили концентрирование и диафильтрацию активированного полисахарида на мембране ультрафильтрации с MWCO 100 кДа. Диафильтрацию проводили с использованием WFI при 10-кратном объеме диафильтрации. Затем хранили очищенный активированный полисахарид при 2 ~ 8°. Очищенный активированный полисахарид был охарактеризован, в частности, при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации альдегида, определенной колориметрически, (iii) степени окисления, и (iv) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
SEC-MALLS используют для определения молекулярной массы полисахарида и конъюгата полисахарид-белок. SEC используют для разделения полисахарида в движущемся потоке текучей среды. Детектор показателя преломления (RI) и многоуглового рассеяния лазерного света используют для определения молекулярной массы. При взаимодействии света с веществом свет рассеивается, и количество рассеянного света зависит от концентрации, квадрата dn/dc (коэффициент приращения показателя преломления) и молекулярной массы материала. Определяемое значение молекулярной массы вычисляют на основании считываемой величины сигнала рассеянного света на детекторе MALLS и сигнала концентрации на детекторе RI.
Степень окисления (DO) активированного полисахарида определяли как «число молей повторяющихся звеньев сахара ÷ число молей альдегида». Число молей повторяющихся звеньев сахара определяли разными колориметрическими способами, например, способом с использованием антрона. Кроме того, в это же время определяли число молей альдегида колориметрическим способом Парка-Джонсона.
Предпочтительно активированный капсульный полисахарид серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом, имел степень окисления от 2 до 19 и молекулярную массу от примерно 200 кДа до 700 кДа.
Способ конъюгации
Объединяли активированный полисахарид с белком-носителем, CRM197, при отношении от 0,5 до 2 граммов CRM197 на грамм активированного полисахарида. Затем лиофилизировали смесь. После лиофилизации хранили лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 при -20°.
Перерастворяли лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 в 0,1M растворе фосфата натрия, а затем перемешивали надлежащим образом. Конечная концентрация полисахарида в реакционном растворе составляла от примерно 10 до 20 г/л. Инициировали конъюгацию, добавляя в смесь 1,2 мольного эквивалента цианоборгидрида натрия (NaBH3CN), и проводили взаимодействие при 37° в течение 48 часов. Обрывали реакцию конъюгации, добавляя 0,9% раствор хлорида натрия в таком же объеме, что и объем реакционного раствора, в котором проводили конъюгацию, а затем добавляли 2,0 мольного эквивалента боргидрида натрия (NaBH4) и блокировали тем самым непрореагировавший альдегид. Проводили реакцию блокирования при 23° в течение 4,5 часа.
Разбавляли раствор конъюгата 0,9% раствором хлорида натрия, подготавливая его для очистки путем концентрирования и диафильтрации на мембране с MWCO 100 кДа. Пропускали разбавленный раствор конъюгата через 0,45 мкм фильтр и проводили очистку путем концентрирования и диафильтрации. Проводили диафильтрацию на мембране с MWCO 100 кДа с использованием 0,9% раствора хлорида натрия при 15-40-кратном объеме диафильтрации. После завершения диафильтрации фильтровали остаточный раствор через 0,2 мкм фильтр. Разбавляли раствор конъюгата до концентрации менее чем примерно 0,55 мг/мл и после стерильного фильтрования хранили при температуре от 2 до 8°.
Очищенный конъюгат серотипа 9N был, в частности, охарактеризован при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации белка, определенной колориметрически (по Лоури), (iii) отношения полисахаридов к белку, (iv) молекулярно-массового распределения, определенного путем эксклюзионной хроматографии (CL-4B), (iv) содержания свободного сахара, и (v) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 9N при регулировании степени окисления (DO). Результаты приведены в таблице 4.
[Таблица 4]
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 9N при регулировании используемого при смешении отношения активированных полисахаридов CRM197 во время лиофилизации. Результаты приведены в таблице 5.
[Таблица 5]
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 9N при регулировании концентрации полисахарида в реакционном растворе, в котором проводили конъюгацию. Результаты приведены в таблице 6.
[Таблица 6]
Исследование иммуногенности конъюгата полисахарид серотипа 9N-белок
Получали моновалентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгат полисахарида серотипа 9N Streptococcus pneumoniae, конъюгированного с белком CRM197.
Анализировали иммуногенность моновалентных иммуногенных композиций, приведенных в таблицах 4-6, с использованием ELISA у кроликов и тем самым измеряли серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке.
Группу самок новозеландского белого кролика иммунизировали внутримышечным способом так же, как и в случае серотипа 2.
Результаты анализа показаны в таблице 7. У кроликов, которых иммунизировали моновалентной конъюгированной композицией (конъюгат №2-8), отмечали значительное увеличение общего титра IgG в отношении серотипа 9N. У кроликов, иммунизированных другим конъюгатом, наблюдали значительное увеличение общего титра IgG.
Значения, приведенные в следующей таблице 7, соответствуют измеренным значениям концентрации IgG после иммунизации конъюгатом № 2-8, приведенным в таблице 5.
[Таблица 7]
[3. Конъюгат полисахарид, выделенный из серотипа 17F Streptococcus pneumoniae,-белок]
Получение конъюгата полисахарида, выделенного из серотипа 17F Streptococcus pneumoniae,-белок
Получение маточного банка клеток и подготовка препаратов
Получали серотип 17F Streptococcus pneumoniae в Американской коллекции типовых культур (ATCC) (штамм ATCC 6317). Для отделения штамма и удаления компонентов животного происхождения выращивали несколько поколений посевного материала. Это проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Ферментация
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Очистка
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Активация
Доводили конечную концентрацию полисахарида примерно до 2,0 г/л в 0,01н. растворе хлороводородной кислоты, последовательно добавляя рассчитанные количества 0,1н. раствора хлороводородной кислоты и WFI. Проводили реакцию гидролиза полисахарида примерно при 60° в течение 60 минут. После снижения температуры реакционного раствора до комнатной доводили pH реакционной смеси примерно до 6,0, добавляя 0,1M раствор моногидрофосфата натрия. После регулирования pH доводили температуру до 23°. Инициировали окисление, добавляя периодат натрия в количестве примерно 0,008~0,219 мг на 1 мг сахара. Проводили реакцию окисления при 23° в течение 18 часов.
Проводили концентрирование и диафильтрацию активированного полисахарида на мембране ультрафильтрации с MWCO 100 кДа. Проводили диафильтрацию с использованием WFI при 10-кратном объеме диафильтрации. Затем хранили очищенный активированный полисахарид при 2 ~ 8°. Очищенный активированный полисахарид был охарактеризован, в частности, при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации альдегида, определенной колориметрически, (iii) степени окисления, и (iv) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
SEC-MALLS используют для определения молекулярной массы полисахарида и конъюгата полисахарид-белок. SEC используют для разделения полисахарида в движущемся потоке текучей среды. Детектор показателя преломления (RI) и многоуглового рассеяния лазерного света используют для определения молекулярной массы. При взаимодействии света с веществом свет рассеивается, и количество рассеянного света зависит от концентрации, квадрата dn/dc (коэффициент приращения показателя преломления) и молекулярной массы материала. Определяемое значение молекулярной массы вычисляют на основании считываемой величины сигнала рассеянного света на детекторе MALLS и сигнала концентрации на детекторе RI.
Степень окисления (DO) активированного полисахарида определяли как «число молей повторяющихся звеньев сахара ÷ число молей альдегида». Число молей повторяющихся звеньев сахара определяли разными колориметрическими способами, например, способом с использованием антрона. Кроме того, в это же время определяли число молей альдегида колориметрическим способом Парка-Джонсона.
Предпочтительно активированный капсульный полисахарид серотипа 17F Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом, имел степень окисления от 1 до 22 и молекулярную массу от примерно 400 кДа до 900 кДа.
Способ конъюгации
Объединяли активированный полисахарид с белком-носителем, CRM197, при отношении 1,0 грамма CRM197 на грамм активированного полисахарида. Затем лиофилизировали смесь. После лиофилизации хранили лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 при -20°.
Перерастворяли лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 в 0,1M растворе фосфата натрия (pH 7,2±0,1). Конечная концентрация полисахарида в реакционном растворе составляла от 15,0 до 25,0 г/л. Инициировали конъюгацию, добавляя в смесь 1,2 мольного эквивалента цианоборгидрида натрия (NaBH3CN), и проводили взаимодействие при 37° в течение 48 часов. Обрывали реакцию конъюгации, добавляя 0,9% раствор хлорида натрия в том же объеме, что и объем реакционного раствора, в котором проводили конъюгацию, а затем добавляли 2,0 мольного эквивалента боргидрида натрия (NaBH4) и блокировали тем самым непрореагировавший альдегид. Проводили реакцию блокирования при 23° в течение 4,5 часа.
Разбавляли раствор конъюгата 0,9% раствором хлорида натрия, подготавливая его для очистки путем концентрирования и диафильтрации на мембране с MWCO 100 кДа. Пропускали разбавленный раствор конъюгата через 0,45 мкм фильтр и проводили очистку путем концентрирования и диафильтрации. Проводили диафильтрацию на мембране с MWCO 100 кДа с использованием 0,9% раствора хлорида натрия при 15-40-кратном объеме диафильтрации. После завершения первичной диафильтрации фильтровали остаточный раствор через 0,2 мкм фильтр и хранили при температуре от 2 до 8°.
Очищенный конъюгат серотипа 17F был, в частности, охарактеризован при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации белка, определенной колориметрически (по Лоури), (iii) отношения полисахаридов к белку, (iv) молекулярно-массового распределения, определенного путем эксклюзионной хроматографии (CL-4B), (iv) содержания свободного сахара, и (v) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 17F при регулировании степени окисления (DO) и концентрации полисахарида в реакционном растворе. Результаты приведены в таблице 8.
[Таблица 8]
Исследование иммуногенности конъюгата полисахарид серотипа 17F-белок
Получали моновалентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгат полисахарида серотипа 17F Streptococcus pneumoniae-белок, конъюгированного с белком CRM197.
Анализировали иммуногенность моновалентной иммуногенной композиции, приведенной в таблице 8, с использованием ELISA у кроликов и измеряли тем самым серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке.
Группу самок новозеландского белого кролика иммунизировали внутримышечным способом так же, как и в случае серотипа 2.
Результаты анализа показаны в таблице 9. У кроликов, иммунизированных моновалентной конъюгированной композицией (конъюгат №3-8), отмечали значительное увеличение общего титра IgG в отношении серотипа 17F. У кроликов, иммунизированных другим конъюгатом, наблюдали значительное увеличение общего титра IgG.
Значения, приведенные в следующей таблице 9, соответствуют измеренным значениям концентрации IgG после иммунизации конъюгатом № 3-8, приведенным в таблице 8.
[Таблица 9]
[4. Конъюгат полисахарида, выделенного из серотипа 20 Streptococcus pneumoniae,-белок]
Получение конъюгата полисахарида, выделенного из серотипа 20 Streptococcus pneumoniae,-белок
Получение маточного банка клеток и подготовка препаратов
Получали серотип 20 Streptococcus pneumoniae в Американской коллекции типовых культур (ATCC) (штамм ATCC 6320). Обработку проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Ферментация
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Очистка
Проводили так же, как и в случае серотипа 2.
Активация
Доводили конечную концентрацию полисахарида примерно до 2,0 г/л в 0,01н. растворе хлороводородной кислоты, последовательно добавляя рассчитанное количество 0,1н. раствора хлороводородной кислоты и WFI. Инициировали окисление, добавляя периодат натрия в количестве примерно 0,010~0,038 мг на 1 мг сахара. Проводили реакцию окисления при 23° в течение 18 часов.
Проводили концентрирование и диафильтрацию активированного полисахарида на мембране ультрафильтрации с MWCO 100 кДа. Проводили диафильтрацию с использованием WFI при 10-кратном объеме диафильтрации. Затем хранили очищенный активированный полисахарид при 2 ~ 8°. Очищенный активированный полисахарид был охарактеризован, в частности, при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации альдегида, определенной колориметрически, (iii) степени окисления, и (iv) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
SEC-MALLS используют для определения молекулярной массы полисахарида и конъюгата полисахарид-белок. SEC используют для разделения полисахарида в движущемся потоке текучей среды. Детектор показателя преломления (RI) и многоуглового рассеяния лазерного света используют для определения молекулярной массы. При взаимодействии света с веществом свет рассеивается, и количество рассеянного света зависит от концентрации, квадрата dn/dc (коэффициент приращения показателя преломления) и молекулярной массы материала. Определяемое значение молекулярной массы вычисляют на основании считываемой величины сигнала рассеянного света на детекторе MALLS и сигнала концентрации на детекторе RI.
Степень окисления (DO) активированного полисахарида определяли как «число молей повторяющихся звеньев сахара - число молей альдегида». Число молей повторяющихся звеньев сахара определяли разными колориметрическими способами, например, способом с использованием антрона. Кроме того, в это же время определяли число молей альдегида колориметрическим способом Парка-Джонсона.
Предпочтительно активированный капсульный полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, полученный указанным способом, имел степень окисления от 4 до 16 и молекулярную массу от примерно 400 кДа до 800 кДа.
Способ конъюгации
Объединяли активированный полисахарид с белком-носителем, CRM197, при отношении 1,0 грамма CRM197 на грамм активированного полисахарида. Затем лиофилизировали смесь. После лиофилизации хранили лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 при -20°.
Перерастворяли лиофилизированную смесь активированного полисахарида и CRM197 в 0,1M растворе фосфата натрия (pH 7,2±0,1). Конечная концентрация полисахарида в реакционном растворе составляла 15,0 г/л. Инициировали конъюгацию, добавляя в смесь 1,2 мольного эквивалента цианоборгидрида натрия (NaBH3CN), и проводили взаимодействие при 37° в течение 48 часов. Обрывали реакцию конъюгации, добавляя 0,9% раствор хлорида натрия в таком же объеме, что и реакционный раствор, в котором проводили конъюгацию, и затем добавляли 2,0 мольного эквивалента боргидрида натрия (NaBH4) и блокировали тем самым непрореагировавший альдегид. Проводили реакцию блокирования при 23° в течение 4,5 часа.
Разбавляли раствор конъюгата 0,9% раствором хлорида натрия, подготавливая для очистки путем концентрирования и диафильтрации на мембране с MWCO 100 кДа. Пропускали разбавленный раствор конъюгата через 0,45 мкм фильтр и проводили 2-стадийную очистку путем концентрирования и диафильтрации. Проводили диафильтрацию на мембране с MWCO 100 кДа с использованием 0,9% раствора хлорида натрия при 20-кратном объеме диафильтрации. После завершения первичной диафильтрации фильтровали остаточный раствор через 0,2 мкм фильтр и хранили при температуре от 2 до 8°. Разбавляли раствор конъюгата до концентрации менее чем примерно 0,55 мг/мл и после стерильного фильтрования хранили при температуре от 2 до 8°.
Очищенный конъюгат серотипа 20 был, в частности, охарактеризован при помощи (i) концентрации полисахарида, определенной колориметрически, (ii) концентрации белка, определенной колориметрически (по Лоури), (iii) отношения полисахаридов к белку, (iv) молекулярно-массового распределения, определенного путем эксклюзионной хроматографии (CL-4B), (iv) содержания свободного сахара, и (v) молекулярной массы, определенной путем SEC-MALLS.
В рамках способа получения наблюдали изменения характеристик конъюгата серотипа 20 при регулировании степени окисления (DO). Результаты приведены в таблице 10.
[Таблица 10]
Исследование иммуногенности конъюгата полисахарид серотипа 20 Streptococcus pneumoniae-белок
Получали моновалентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгат полисахарида серотипа 20 Streptococcus pneumoniae, конъюгированного с CRM197.
Анализировали иммуногенность моновалентной иммуногенной композиции, приведенной в таблице 10, с использованием ELISA у кроликов и измеряли тем самым серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке.
Самок новозеландского белого кролика иммунизировали внутримышечным способом так же, как и в случае серотипа 2.
Результаты анализа показаны в таблице 11. У кроликов, иммунизированных моновалентной конъюгированной композицией (конъюгат №4-7), отмечали значительное увеличение общего титра IgG в отношении серотипа 20. У кроликов, иммунизированных другим конъюгатом, наблюдали значительное увеличение общего титра IgG.
Значения, приведенные в следующей таблице 11, соответствуют измеренным значениям концентрации IgG после иммунизации конъюгатом № 4-7, приведенным в таблице 10.
[Таблица 11]
Пример 2. Получение поливалентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
[5. 15-валентный конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок]
Получение 15-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Получали 15-валентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгат полисахарид-белок, выделенный из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9N, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F, во всех случаях полисахариды были конъюгированы с CRM197 (15vPnC).
В случае серотипов 2 и 9N конъюгат получали указанным выше способом, а в случае других серотипов конъюгат получали согласно способу, описанному в заявке на патент Кореи №2012-0065893.
Вычисляли требуемый объем конечного нефасованного концентрата на основании объема партии и концентрации сахарида в нефасованном концентрате. В предварительно помеченный контейнер для смешения добавляли требуемые количества 0,85% хлорида натрия, полисорбата 80 и сукцинатного буфера, а затем добавляли нефасованный концентрат. Перемешивали смесь надлежащим образом и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. Во время и после добавления сыпучего фосфата алюминия медленно перемешивали полученный нефасованный раствор. Проверяли pH и регулировали по мере необходимости. Хранили полученный нефасованный продукт при температуре от 2 до 8°. Полученная вакцинная композиция содержала по 2,2 мкг каждого сахарида, но 4,4 мкг 6B; примерно 32 мкг белка-носителя CRM 197; 0,125 мг алюминия в качестве адъюванта (0,5 мг фосфата алюминия); примерно 4,25 мг хлорида натрия; примерно 295 мкг сукцинатного буфера; и примерно 100 мкг полисорбата 80 при общем объеме 0,5 мл.
Исследование иммуногенности 15-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Измерение концентрации IgG
Анализировали иммуногенность 15-валентной иммуногенной композиции у кроликов с использованием ELISA и измеряли тем самым серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке.
Группу из 6 самок новозеландского белого кролика с массой тела от 2,5 кг до 3,5 кг иммунизировали внутримышечным способом на 0-й неделе предполагаемой для человека клинической дозой (2,2 мкг конъюгата, за исключением серотипа 6b, для которого было определено количество 4,4 мкг; + 0,25 мг/мл алюминия в виде AlPO4). Кролика дополнительно иммунизировали на 3-ей неделе такой же дозой конъюгированной вакцины и затем с интервалом в 3 недели собирали образцы крови. Проводили серотип-специфический ELISA образцов сыворотки на каждой неделе.
Серотип-специфический иммунный ответ на вакцинный состав согласно настоящему изобретению и вакцинный состав согласно примеру сравнения оценивали путем IgG ELISA. Результаты анализа приведены в таблице 12. Показаны значения концентрации IgG (МЕ/мл) в разные моменты времени после инокуляции. Было показано, что у кроликов, иммунизированных 15vPnC, вырабатывались антитела к серотипам 2 и 9N, которые не могли вырабатываться при использовании Превенара 13, и, в частности, 15vPnC мог индуцировать эквивалентный или повышенный титр IgG в сыворотке по сравнению с Превенаром 13 даже несмотря на то, что в результате добавления серотипа увеличилась ее валентность.
[Таблица 12]
Результаты анализа OPA
Для подтверждения возможной индукции реакции в виде выработки функциональных антител при использовании 15-валентного конъюгата полисахарид-белок проводили мультиплексный анализ опсонофагоцитарного уничтожения клеток (MOPA).
Благодаря тому, что у каждого субъекта собирали одинаковые количества сыворотки, образцы сыворотки были объединены по группам одинакового размера. Выращивали Streptococcus pneumoniae в среде THY для каждого образца сыворотки и разбавляли до 1000 КОЕ/10 мкл. Смешивали 200 мкл буфера для опсонизации, 10 мкл разбавленной сыворотки и 10 мкл разбавленных Streptococcus pneumoniae и проводили взаимодействие при комнатной температуре в течение 1 часа. Добавляли смешанный раствор предварительно дифференцированных клеток HL-60 и комплемента и проводили взаимодействие в CO2-инкубаторе (37°) в течение 1 часа. Обрывали фагоцитоз, понижая температуру, и окрашивали 5 мкл реакционного раствора в среде с агаром, предварительно высушенной в течение периода времени от 30 до 60 минут. Культивировали материал в CO2-инкубаторе (37°) в течение периода времени от 12 до 18 часов и подсчитывали число колоний. Титру OPA соответствовал уровень разбавления, при котором наблюдалась гибель 50% клеток. В качестве примера сравнения использовали 13-валентную вакцину (Превенар 13, Pfizer) для оценки в таких же условиях, результаты приведены в таблице 13.
[Таблица 13]
[6. 23-валентный конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок]
Получение 23-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Получали 23-валентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгаты полисахарид-белок, где полисахариды, выделенные из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F, были конъюгированы с CRM197, и конъюгаты полисахарид-белок, где серотипы 3 и 5 Streptococcus pneumoniae были конъюгированы с TT (столбнячный анатоксин) (23vPnC).
В случае серотипов 2, 9N, 17F и 20 конъюгат получали указанным выше способом, а в случае других серотипов конъюгаты либо с CRM197, либо с TT, получали согласно способам, описанным в заявке на патент Кореи №2012-0065893, заявках на патент США №62/371529, 62/371553 и 62/626482.
Вычисляли требуемый объем конечного нефасованного концентрата на основании объема партии и концентрации сахарида в нефасованном концентрате. В предварительно помеченный контейнер для смешения добавляли требуемые количества 0,85% хлорида натрия, полисорбата 80 и сукцинатного буфера, а затем добавляли нефасованный концентрат. Перемешивали смесь надлежащим образом и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. Во время и после добавления сыпучего фосфата алюминия медленно перемешивали полученный нефасованный раствор. Проверяли pH и регулировали по мере необходимости. Хранили полученный нефасованный продукт при температуре от 2 до 8°. Полученная вакцинная композиция содержала по 2,2 мкг каждого сахарида, но 4,4 мкг 6B; от примерно 50 до 85 мкг белка-носителя; экспериментальное количество алюминия в качестве адъюванта (например, в случае группы 4, приведенной в таблице 14, 0,125 мг элементного алюминия, т.е. 0,5 мг фосфата алюминия); примерно 4,25 мг хлорида натрия; примерно 295 мкг сукцинатного буфера; и примерно 100 мкг полисорбата 80 при общем объеме 0,5 мл.
Исследование иммуногенности 23-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Измерение концентрации IgG
Анализировали иммуногенность 23-валентной иммуногенной композиции у кроликов с использованием ELISA и измеряли тем самым серотип-специфическую концентрацию IgG в сыворотке. Изучали способность вакцины 23vPnC, содержащей адъювант, индуцировать серотип-специфический иммунный ответ.
Группу из 5 самок новозеландского белого кролика с массой тела от 2,5 кг до 3,5 кг иммунизировали внутримышечным способом на 0-й неделе предполагаемой для человека клинической дозой (2,2 мкг конъюгата, за исключением серотипа 6b, для которого было определено количество 4,4 мкг), в которых содержание алюминия в виде AlPO4 составляло 0,0625 мг/мл, 0,125 мг/мл, 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1 мг/мл, соответственно. Кроликов дополнительно иммунизировали на 2-й неделе такой же дозой конъюгированной вакцины и затем собирали образцы крови на 4-й неделе. Проводили серотип-специфический ELISA для образцов сыворотки, собранных на 0-й и 4-й неделе.
В качестве примера сравнения использовали 13-валентную вакцину (Превенар 13, Pfizer) для оценки в таких же условиях, результаты анализа приведены в таблице 14. Показаны значения концентрации IgG (МЕ/мл) на 4-й неделе после инокуляции.
Было получено среднее геометрическое титра (GMT), измеренного в объединенной выборке образцов сыворотки после введения вакцины 23vPnV и Превенара 13. Полученные данные демонстрируют, что при использовании состава 23vPnV, содержащего адъювант, антитела IgG индуцируются на повышенном уровне по сравнению с такой же вакциной, не содержащей адъювант. В частности, была подтверждена возможность получения 23-валентной иммуногенной вакцины, содержащей все из серотипов 2, 9N, 17F и 20. Как можно увидеть в результатах, приведенных далее, в частности, могли вырабатываться антитела к серотипу 2 и т.д., которые не вырабатывались при использовании Превенара 13. Кроме того, было подтверждено, что вакцина могла индуцировать иммунный ответ в отношении всех содержащихся серотипов, не влияя в значительной степени на выработку антител на антигены других серотипов, несмотря на значительно увеличенную валентность.
[Таблица 14]
Контрол. группа
(Превенар® 13)
Группа сравнения
[7. 24-валентный конъюгат полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок]
Получение 24-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Получали 24-валентную конъюгированную композицию, содержащую конъюгаты полисахарид-белок, где полисахариды, выделенные из серотипов Streptococcus pneumoniae 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F были конъюгированы с CRM197, и конъюгаты полисахарид-белок, где серотипы 1 и 5 Streptococcus pneumoniae были конъюгированы с TT (столбнячный анатоксин) (24vPnC). В случае серотипов 2, 9N, 17F и 20 конъюгат получали указанным выше способом, и в случае других серотипов конъюгат с CRM197 или TT получали согласно способам, описанным в заявке на патент Кореи №2012-0065893, заявкам на патент США №62/371529, 62/371553 и 62/626482.
Вычисляли требуемый объем конечного нефасованного концентрата на основании объема партии и концентрации сахарида в нефасованном концентрате. В предварительно помеченный контейнер для смешения добавляли требуемые количества 0,85% хлорида натрия, полисорбата 80 и сукцинатного буфера, а затем добавляли нефасованный концентрат. Перемешивали смесь надлежащим образом и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. Во время и после добавления сыпучего фосфата алюминия медленно перемешивали полученный нефасованный раствор. Проверяли pH и регулировали по мере необходимости. Хранили полученный нефасованный продукт при температуре от 2 до 8°. Полученная вакцинная композиция содержала по 2,2 мкг каждого сахарида, но 4,4 мкг 6B; примерно от 50 до 90 мкг белка-носителя CRM 197; 0,125 мг элементного алюминия в качестве адъюванта (0,5 мг фосфата алюминия); примерно 4,25 мг хлорида натрия; примерно 295 мкг сукцинатного буфера; и примерно 100 мкг полисорбата 80 при общем объеме 0,5 мл.
Исследование иммуногенности 24-валентного конъюгата полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок
Результаты анализа OPA
Для подтверждения возможного индуцирования реакции в виде выработки функциональных антител при использовании 24-валентного конъюгата полисахарид-белок проводили опсонофагоцитарный анализ уничтожения клеток (OPA) у трех кроликов так же, как и в случае 15-валентной вакцины.
[Таблица 15]
Согласно результатам была подтверждена возможность получения 24-валентной вакцины, содержащей все из серотипов 2, 9N, 17F и 20. Как можно увидеть в результатах, в частности, могли вырабатываться антитела к серотипам 2, 17F и т.д., которые не вырабатывались при использовании Превенара 13. Кроме того, было подтверждено, что вакцина могла индуцировать иммунный ответ в отношении всех содержащихся серотипов, не влияя в значительной степени на выработку антител на антигены других серотипов, несмотря на то, что по сравнению с Превенаром 13 было добавлено 11 серотипов.
[ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ]
Иммуногенную композицию согласно одному из примеров настоящего изобретения можно применять в качестве лекарственного средства.
Иммуногенную композицию согласно одному из примеров настоящего изобретения можно применять в разных терапевтических или профилактических способах для предупреждения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболеваний или состояний. В частности, иммуногенную композицию, описанную в настоящем изобретении, можно применять для предупреждения, лечения или облегчения инфекции Streptococcus pneumoniae, заболеваний или состояний у субъекта.
В одном из вариантов реализации может быть предложен способ индуцирования иммунного ответа на Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающий введение эффективной дозы иммуногенной композиции согласно настоящему изобретению субъекту.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Мультивалентная композиция на основе конъюгатов пневмококковый полисахарид-белок | 2013 |
|
RU2606152C1 |
| ИММУНОГЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ПНЕВМОКОККОВЫХ ВАКЦИНАХ | 2016 |
|
RU2712622C2 |
| ПОЛИВАЛЕНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ КОНЪЮГАТЫ ПНЕВМОКОККОВЫЙ ПОЛИСАХАРИД-БЕЛОК | 2013 |
|
RU2605834C2 |
| Способ получения иммуногенного конъюгата капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок-носитель | 2015 |
|
RU2710393C2 |
| ПНЕВМОКОККОВЫЕ ПОЛИСАХАРИДЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ИММУНОГЕННЫХ КОНЪЮГАТАХ ПОЛИСАХАРИД-БЕЛОК-НОСИТЕЛЬ | 2018 |
|
RU2785429C2 |
| ПОВЫШЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ КОНЪЮГАТОВ ПОЛИСАХАРИД STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE-БЕЛОК | 2018 |
|
RU2774891C2 |
| СПОСОБ ГЛИКОКОНЪЮГАЦИИ | 2013 |
|
RU2672053C2 |
| ИММУНОГЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ КОНЪЮГИРОВАННЫЕ КАПСУЛЬНЫЕ САХАРИДНЫЕ АНТИГЕНЫ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2774075C1 |
| Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты | 2015 |
|
RU2805417C1 |
| ИММУНОГЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ КОНЪЮГИРОВАННЫЕ КАПСУЛЬНЫЕ САХАРИДНЫЕ АНТИГЕНЫ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2015 |
|
RU2771293C2 |
Изобретение относится к иммуногенной композиции и ее применению. Предложена иммуногенная композиция для предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта, содержащая эффективное количество 24 различных конъюгатов капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок, причем каждый конъюгат капсульный полисахарид-белок содержит белок-носитель, конъюгированный с капсульным полисахаридом, выделенным из другого серотипа Streptococcus pneumoniae. При этом серотипы Streptococcus pneumoniae выбраны из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F. Капсульные полисахариды из серотипов 1 и 5 конъюгированы со столбнячным анатоксином, а капсульные полисахариды из серотипов 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F конъюгированы с CRM197. Также предложена вакцина, содержащая указанную иммуногенную композицию. Также предложены способ предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта и способ индуцирования иммунного ответа на Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающие введение субъекту указанной иммуногенной композиции или указанной вакцины. Изобретение обеспечивает широкий спектр защиты против Streptococcus pneumoniae. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 15 табл., 2 пр.
1. Иммуногенная композиция для предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта, содержащая эффективное количество 24 различных конъюгатов капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae-белок,
причем каждый конъюгат капсульный полисахарид-белок содержит белок-носитель, конъюгированный с капсульным полисахаридом, выделенным из другого серотипа Streptococcus pneumoniae, где серотипы Streptococcus pneumoniae выбраны из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F; и
при этом капсульные полисахариды из серотипов 1 и 5 конъюгированы со столбнячным анатоксином, и капсульные полисахариды из серотипов 2, 3, 4, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F конъюгированы с CRM197,
при этом капсульный полисахарид из серотипа 2 имеет молекулярную массу, составляющую от 100 до 400 кДа, и степень окисления, составляющую от 2 до 18,
при этом капсульный полисахарид из серотипа 9N имеет молекулярную массу, составляющую от 200 до 700 кДа, и степень окисления, составляющую от 2 до 19,
капсульный полисахарид из серотипа 17F имеет молекулярную массу, составляющую от 400 до 900 кДа, и степень окисления, составляющую от 1 до 22, и
капсульный полисахарид из серотипа 20 имеет молекулярную массу, составляющую от 400 до 800 кДа, и степень окисления, составляющую от 4 до 16.
2. Иммуногенная композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
указанный конъюгат капсульный полисахарид-белок, содержащий капсульный полисахарид из серотипа 2, имеет молекулярную массу от 1000 до 16000 кДа, или
конъюгат капсульный полисахарид-белок, содержащий капсульный полисахарид из серотипа 17F, имеет молекулярную массу от 300 до 4500 кДа, или
конъюгат капсульный полисахарид-белок, содержащий капсульный полисахарид из серотипа 20, имеет молекулярную массу от 1000 до 4000 кДа.
3. Иммуногенная композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
массовое отношение капсульного полисахарида из серотипа 2 к белку-носителю составляет от 0,5 до 2,0, или
массовое отношение капсульного полисахарида из серотипа 17F к белку-носителю составляет от 0,5 до 18, или
массовое отношение капсульного полисахарида из серотипа 20 к белку-носителю составляет от 1 до 5.
4. Иммуногенная композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
от 20 до 60% от общей молекулярной массы конъюгата капсульный полисахарид-белок, содержащего капсульный полисахарид из серотипа 2, находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B, или
от 15 до 60% от общей молекулярной массы конъюгата капсульный полисахарид-белок, содержащего капсульный полисахарид из серотипа 17F, находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B, или
от 70 до 90% от общей молекулярной массы конъюгата капсульный полисахарид-белок, содержащего капсульный полисахарид из серотипа 20, находится в пределах 0,3 Kd при использовании колонки CL-4B.
5. Иммуногенная композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная иммуногенная композиция содержит физиологически приемлемый наполнитель.
6. Вакцина для предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта, содержащая иммуногенную композицию по п.1 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель или разбавитель.
7. Способ предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта, включающий введение указанному субъекту иммунологически эффективной дозы иммуногенной композиции по п. 1.
8. Способ по п. 7, где указанная инфекция, заболевание или состояние, вызванное Streptococcus pneumoniae, представляет собой пневмонию, синусит, средний отит, острый средний отит, цереброспинальный менингит, бактериемию, септицемию, пиоторакс, конъюнктивит, остеомиелит, септический артрит, эндокардит, перитонит, перикардит, мастоидит, целлюлит, инфекцию мягких тканей и абсцесс головного мозга.
9. Способ индуцирования иммунного ответа на Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающий введение указанному субъекту иммунологически эффективной дозы иммуногенной композиции по п. 1.
10. Способ предупреждения инфекции, заболевания или состояния, вызванного Streptococcus pneumoniae, у субъекта, включающий введение указанному субъекту иммунологически эффективной дозы вакцины по п. 6.
11. Способ по п. 10, где указанная инфекция, заболевание или состояние, вызванное Streptococcus pneumoniae, представляет собой пневмонию, синусит, средний отит, острый средний отит, цереброспинальный менингит, бактериемию, септицемию, пиоторакс, конъюнктивит, остеомиелит, септический артрит, эндокардит, перитонит, перикардит, мастоидит, целлюлит, инфекцию мягких тканей и абсцесс головного мозга.
12. Способ индуцирования иммунного ответа на Streptococcus pneumoniae у субъекта, включающий введение указанному субъекту иммунологически эффективной дозы вакцины по п. 6.
| CN 103656631 B, 19.08.2015 | |||
| DOTRES C.P | |||
| ET AL | |||
| Safety and preliminary immunogenicity of Cuban pneumococcal conjugate vaccine candidate in healthy children: a randomized phase I clinical trial | |||
| Vaccine | |||
| Способ защиты переносных электрических установок от опасностей, связанных с заземлением одной из фаз | 1924 |
|
SU2014A1 |
| Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами | 1921 |
|
SU10A1 |
| Способ получения цианистых соединений | 1924 |
|
SU2018A1 |
| ПОЛИВАЛЕНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ КОНЪЮГАТЫ ПНЕВМОКОККОВЫЙ ПОЛИСАХАРИД-БЕЛОК | 2013 |
|
RU2605834C2 |
| ANDERSON P | |||
| ET AL | |||
