Гель для монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов Российский патент 2023 года по МПК C12N5/00 C12Q1/00 G01N1/30 G01N33/48 

Изобретение относится к сфере медицины и является дополнительным решением для клинической лабораторной диагностике, а именно к разделу цитологической диагностики и может быть использовано для диагностики опухолевых и неопухолевых заболеваний человека в процессе исследования биоматериала, содержащего клетки человека, полученного различными способами.

Диагностическое цитологическое (цитопатологическое) исследование относится к разделу клинической лабораторной диагностики и прежде всего изучает клеточный состав патологического очага. В основе метода лежит исследование морфологии клеток с оценкой их особенностей и неклеточных компонентов в биоматериале из соответствующего органа или ткани. Современное развитие различных методов исследования способствовало широкому внедрению цитологического исследования преимущественно для диагностики опухолей человека практически из всех органов и тканей организма. Цитологический материал для исследования может быть представлен эксфолиативным вариантом (транссудат, экссудат, промывные воды, мокрота, моча, мазки, полученные с помощью специализированных щеток, например, с шейки матки, поверхности опухолей) и пункционным вариантом, когда материал для исследования получают посредством тонкоигольной пункции под контролем ультразвукового исследования. Основным критическим параметром, определяющим качество приготовления цитологического микропрепарата, является процедура нанесения материала на предметное стекло с последующим распределением клеток.

Все перечисленные способы получения цитологического материала для исследования приводят к возникновению многочисленных артефактов, возникающих при нанесении клеток на предметное стекло, что приводит к возникновению трудностей при просмотре полученных цитологических микропрепаратов в микроскопе. Наиболее удовлетворительным вариантом забора цитологического материала для исследования является жидкостная цитология, которая представляет собой процесс получения монослойных цитологических препаратов из взвеси клеток в фиксирующем растворе с использованием методов центрифугирования, осаждения и∕или фильтрации [Тугулукова А.А. Жидкостная цитология в диагностике опухолей. Новости клинической цитологии России. 2019; 23(1): 19-26.]

Из уровня техники известен гель, используемый при получении гистологических препаратов, «Адгезивная композиция для гистологических препаратов» (CA1338542 «Specimen Mounting Adhesive Composition», 26.08.1983). Изобретение представляет собой композицию для переноса и адгезии закрепленных на ленте гистологических срезов на поверхности стекла для препаратов с целью ускорения и упрощения удаления ленты и последующей обработки закрепленного на стекле среза. Композиция представляет собой полимерную смесь, которая до момента отвердевания обладает высокой липкостью, практически не диффундирует и не затекает в срезы ткани, а после имеет показатель преломления, практически аналогичный показателю преломления среза образца, и устойчива к рутинно применяемым гистологическим растворителям и красителям. Предлагаемая композиция включает полиуретан с концевыми диакрилатными группами, диакрилатный эфир эпоксидной смолы и диэтоксиацетофеноновый инициатор, обычно используемый в виде раствора в обычном органическом растворителе, таком как изопропанол или толуол.

Основным недостатком метода является его применение только при работе с парафиновыми блоками и невозможность его применения с любым незафиксированным в твердой среде материалом, включая цитологический.

Наиболее близким по сущности к заявляемому изобретению является продукт, описанный в патенте «Композиция для фиксации цитологического и гистологического материала и методы её применения» [EP1092141, «Cytological And Histological Fixative Composition And Methods Of Use», 30.06.1999]. Прототип описывает получение фиксирующей композиции, способов её применения в подготовке цитологических и гистологических препаратов, также метод подготовки препаратов, представляющих собой взвесь твёрдых частиц в жидкой фазе, таких как цитологических, гематологических и микробиологических образцов, для микроскопического исследования путём сбора материала и распределения его в монослое и фиксации частиц, в том числе клеток, с помощью предлагаемой композиции. Фиксирующая композиция, представляющая данное изобретение, применяемая для подготовки цитологических, гематологических, микробиологических и гистологических препаратов, содержит альдегидный компонент в качестве фиксатора, полиол и детергент.

Недостатком метода, прежде всего, является его направленность прежде всего на обеспечение химической фиксации исследуемых образцов за счет применения формальдегида, тогда как сам процесс распределения обеспечивается уже за счет использования специальной техники (цитоцентрифуга и ее аналоги) и материалов (специально подготовленные стекла для микроскопии), а также существенные затраты времени на реализацию процедуры приготовления цитологического препарата. Недостатком метода также является многокомпонентный состав смеси, требующий многоступенчатого этапа приготовления продукта, состоящего из 19 манипуляций, и включающего приготовление нескольких вариантов буфера (фосфатный буфер, трис-ацетатный буфер или Triton X-100, Nonidet P40, Igepal Ca-630, различные варианты твин буфера, такие как Tween® 85, Tween® 80, или Tween® 65) для различных этапов обработки препарата. Другим недостатком является использование при приготовлении канцерогенных веществ, требующих особого обращения, таких как формальдегид. Также недостатком метода является применение нескольких вариантов спиртовых растворов (глицерол, этанол, метанол, изопропанол), что удорожает и удлиняет время производства продукта.

Технической задачей предлагаемого решения является упрощение композиционного состава геля, упрощение способа его получения при сохранении монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов, использующих данный гель.

Техническим результатом предлагаемого решения является сокращение набора компонентов геля до дистиллированной воды, агар и 95% спирт, а также сокращение оборудования и этапов приготовления геля.

Указанный технический результат достигается тем, что предложен гель для монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов, содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонент, масс. %:

раствор агара 70-89 этанол 11-30

при этом используется раствор агара, представляющий собой 0,06 масс. % водную суспензию и 95% этанол.

Возможность достижения технического результата обеспечивается тем, что данная композиция может быть получена с минимальным оборудованием, включающем в себя весы и плиту, и без каких-либо дополнительных приборов, таких как pH-метр, магнитная мешалка, центрифуга и прочее.; в доступном и немногочисленном наборе компонентов, включающем дистиллированную воду, агар и 95% спирт; в простой процедуре приготовления продукта, включающем три этапа.

ПРИМЕР 1

Растворили в 200 мл кипящей дистиллированный воды 0,12 г агара с последующим добавлением 74,3 мл 95% этанола и постепенным остыванием полученного раствора при комнатной температуре, при этом получили гель содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонент, масс. %:

раствор агара 70,0 этанол 30,0

ПРИМЕР 2

Растворили в 200 мл кипящей дистиллированный воды 0,12 г агара с последующим добавлением 55,0 мл 95% этанола и постепенным остыванием полученного раствора при комнатной температуре, при этом получили гель содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонент, масс. %:

раствор агара 77,8 этанол 22,2

ПРИМЕР 3

Растворили в 200 мл кипящей дистиллированный воды 0,12 г агара с последующим добавлением 27,2 мл 95% этанола и постепенным остыванием полученного раствора при комнатной температуре, при этом получили гель содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонент, масс. %:

раствор агара 89,0 этанол 11,0

На Фигуре 1 представлено изображение клеток в цитологическом препарате после применения геля для распределения клеток. Достаточная визуализация клеток в монослое.

На Фигуре 2 представлено изображение клеток после приготовления цитологического препарата традиционным способом с помощью щетки, при этом визуализация клеток невозможна вследствие формирования многослойных структур.

При проведении апробационных испытаний геля для монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов было исследовано 105 проб цитологического материала. Во всех случаях при использовании геля описанного состава в указанном в формуле диапазоне удалось осуществить распределение клеток в монослой, избежать деформации клеток с сохранением их тинкториальных свойств.

Таким образом, решается техническая задача упрощения процедуры и сокращение времени для приготовления цитологического препарата с формированием монослоя клеток.

Изобретение относится к сфере медицины и является дополнительным решением для клинической лабораторной диагностики, а именно к разделу цитологической диагностики, и может быть использовано для диагностики опухолевых и неопухолевых заболеваний человека в процессе исследования биоматериала, содержащего клетки человека, полученного различными способами. Представлен гель для монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов, содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонентов, масс. %: раствор агара 70-89, этанол 11-30, при этом используется раствор агара, представляющий собой 0,06 масс. % водную суспензию и 95% этанол. Изобретение обеспечивает сокращение набора компонентов геля до дистиллированной воды, агара и 95% спирта, а также сокращение оборудования и этапов приготовления геля. 2 ил., 3 пр.

Гель для монослойного распределения клеток при изготовлении цитологических препаратов, содержащий: раствор агара, этанол в следующем соотношении компонент, масс. %:

раствор агара 70-89 этанол 11-30

при этом используется раствор агара, представляющий собой 0,06 масс. % водную суспензию и 95% этанол.