Способ выделения сывороточных белков из молозива коров Российский патент 2023 года по МПК A61K35/20 A61K38/00 A23J3/08 A23J3/28 C07K1/16 C07K1/34 C07K1/36 

Изобретение относится к биохимии, а именно к выделению сывороточных белков из молозива коров.

Описан способ получения молозивной сыворотки первого удоя от крупного рогатого скота, включающий сбор молозива первого удоя, осаждение казеина путем добавления пепсина из расчета 4-6 г на 1 л молозива, отделение сгустка казеина путем фильтрации с последующим консервированием молозивной сыворотки сорбатом калия из расчёта 1 г на 1 л сыворотки и хранением при температуре 0 - +2 °С в течение пяти дней (Воронцова Л.А., Воронцов Е.В. Рекомендации по изготовлению и использованию молозивных препаратов для профилактики заболеваний телят. – Благовещенск: Зея, 2006. – 19 с.).

Недостатки данного способа связаны с коротким сроком хранения препарата при низких температурах в условиях холодильника. Кроме того, конечный продукт получается недостаточно чистым.

Задача изобретения заключается в концентрировании сывороточных белков из молозива коров первого удоя, упрощении условий и повышении чистоты целевого продукта.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что из молозивной сыворотки извлекаются сывороточные белки путем добавления 10% раствора трихлоруксусной кислоты с последующим центрифугированием, диализом, очисткой белка гельхроматографией, высушиванием в сушильном шкафу, тиндализацией.

Способ получения сывороточных белков предусматривает сбор молозива от первого удоя коров, осаждение казеина с использование пепсина из расчета 3 г на 1 л молозива, отделение сгустка казеина путем фильтрации, осаждение сывороточных белков 10% раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4, центрифугирование, отделение осадка от раствора с последующим добавлением к осадку белка 0,9% раствора хлорида натрия из расчета 1:10, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, очистку белков гельхроматографией на сефадексе G-200 с порогом проницаемости от 5 до 600 кДа, высушивание осадка в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, тиндализацию. Изобретение позволяет получить сухой концентрат сывороточных белков из молозива коров с повышенной чистотой целевого продукта.

Способ получения белков из молозивной сыворотки первого удоя осуществляют следующим образом:

Свежее молозиво собирают от клинически здоровых животных в хозяйствах, благополучных по инфекционным болезням. Молозиво фильтруют, нагревают до температуры 35-38°С и добавляют пепсин из расчета 3 г на 1 л молозива. После перемешивание происходит выпадение в осадок молозивной массы. Молозиво отделяют от сыворотки путем фильтрации через тройной слой марли. К молозивной сыворотке для осаждения белка добавляют 10% раствор трихлоруксусной кислоты из расчета 1:4. Осадок белка отделяют от раствора центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мин. Отделяют осадок от раствора, к белковому осадку добавляют 0,9% раствор хлорида натрия в соотношении 1:10. Полученные таким образом белки для дальнейшей очистки подвергают диализу с целью полного удаления растворов трихлоруксусной кислоты и восстановления гидратных оболочек пептида. Для этого раствор белка помещают в емкость, отделенную от низкомолекулярного раствора (проточная либо дистиллированная вода) коллодиевой пленкой. Диализ проводят проточной водой в течение 1 суток при непрерывной подаче и дистиллированной водой в течение 1 часа. Отсутствие соли контролируют нейтральной реакцией с индикатором. Очистку белка проводят гельхроматографией путем пропускания через колонку, заполненную сефадексом G-200 с проницаемостью от 5 до 600 кДа, при температуре +4°С и давлении не более 0,5 атм. Высушивание осуществляют в сушильном шкафу при температуре 40-45°С. Тиндализацию проводят двукратно с интервалом 24 часа при температуре 40-45°С в течение часа. Препарат взвешивают и хранят в стеклянных емкостях. Выход препарата составляет 100-130 г на 1 л. Белок представляет собой аморфный порошок кремового цвета.

Экспериментальные исследования по изучению влияния концентрированных сывороточных белков из молозива коров на иммунитет телят проводили в производственных условиях. По принципу аналогов были сформированы подопытная и контрольная группы животных по 10 голов в каждой. Телятам подопытной группы с первого дня жизни ежедневно три раза в день за 30 минут до кормления выпаивали 200 мл 5% раствора молозивного препарата в течение девяти дней. Животным контрольной группы препарат не применяли. Отбор проб крови у телят осуществляли из ярёмной по общепринятой методике на девятый и 18-й дни их жизни.

Применение препарата с первых дней жизни телят способствовало повышению уровня общего белка в сыворотке крови. На девятый день различие с контролем составило 28,54±2,54%. Содержание общего белка в сыворотке крови опытных животных на 18-й день превышало фоновые значения на 21,56±3,12%. На фоне контроля процент гамма-глобулинов в опытных группах был максимально высоким во все дни исследования. Значительное достоверное увеличение γ1- и γ2-глобулинов по сравнению с контролем отмечено уже на 9-й день опыта – на 12,27±0,53% и 68,22±1,29%, что указывает на высокий уровень создаваемого пассивного иммунитета. Максимальная эффективность использования организмом молодняка препарата, богатого иммунными белками, проявилось достоверным повышением уровня иммуноглобулинов. На девятый день различие с контрольными показателями составило 28,39±1,69%, на 18-й день - 16,73±0,88%.

За период наблюдение в контрольной и подопытной группах были больные и павшие телята. Сохранность в подопытной группе составило 97,4%, тогда как в контроле – 84,0%.

Исходя из вышеизложенного следует, что применение белкового препарата из молозивной сыворотки первого удоя в профилактических целях способствует повышению иммунитета телят и повышает их сохранность. Технология получения белкового препарата из молозивной сыворотки не требует значительных финансовых затрат, доступная для использования в хозяйствах.

Изобретение относится к биохимии, а именно к способу выделения сывороточных белков из молозивной сыворотки первого удоя. Способ выделения белков из молозивной сыворотки первого удоя предусматривает сбор молозива от коров, нагревание молозива до температуры 35-38°С, осаждение казеина с использованием пепсина из расчета 3 г пепсина на 1 л молозива, отделение сгустка казеина путем фильтрации, осаждение сывороточных белков 10% раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, отделение осадка от раствора, добавление к осадку белка 0,9% раствора хлорида натрия из расчета 1:10, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, очистку белка гельхроматографией на сефадексе G-200 с порогом проницаемости от 5 до 600 кДа при температуре +4°С и давлении не более 0,5 атм, высушивание целевого продукта в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, двукратную тиндализацию с интервалом 24 ч при температуре 40-45°С в течение одного часа. Изобретение позволяет получить из молозивной сыворотки белковый препарат с выходом 100-130 г на 1 л.

Способ выделения белков из молозивной сыворотки первого удоя предусматривает сбор молозива от коров, нагревание молозива до температуры 35-38°С, осаждение казеина с использованием пепсина из расчета 3 г пепсина на 1 л молозива, отделение сгустка казеина путем фильтрации, осаждение сывороточных белков 10% раствором трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:4, центрифугирование при 3000 об/мин в течение 5 мин, отделение осадка от раствора, добавление к осадку белка 0,9% раствора хлорида натрия из расчета 1:10, диализ проточной водой в течение суток и дистиллированной водой в течение 1 ч, очистку белка гельхроматографией на сефадексе G-200 с порогом проницаемости от 5 до 600 кДа при температуре +4°С и давлении не более 0,5 атм, высушивание целевого продукта в сушильном шкафу при температуре 40-45°С, двукратную тиндализацию с интервалом 24 ч при температуре 40-45°С в течение одного часа.