СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИЗАТА ТВОРОГА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 A23J3/00 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве бифидобактерина, лактобактерина, бификола и других бифидо-, лактосодержащих препаратов.

В качестве одного из компонентов питательных сред, применяемых для выращивания бифидо- и лактобактерий, используется гидролизат казеина, получаемый из молока, или гидролизат обезжиренного молока (обрат). В последнее время все чаще в качестве сырья для питательных сред используются непищевые белки различного происхождения. Так для производства питательных сред предлагают употреблять сывороточный альбумин, молочную сыворотку, отходы обезжиренного творога.

Известен способ получения гидролизата отходов обезжиренного творога из коровьего молока (Е.А.Слатин, Б.А.Лебедев и др. В сб. "Острые кишечные инфекции", Л. 1978, стр. 143-146). Отходы обезжиренного творога тщательно промывают проточной горячей водой с целью удаления жира и загрязнений. Полученную массу в количестве 4-5 кг укладывают в 10-литровую бутыль, заливают 8 л водопроводной воды при 40-45^oC, добавляют Na₂CO₃, 20% раствора едкого натра до значений pH 7,6-7,8, измельченную поджелудочную железу и хлороформ.

Гидролиз ведут в течение 8-10 суток при комнатной температуре или 5-7 суток при 52±^oC. В процессе гидролиза поддерживают pH смеси в пределах 7,7-7,8, подщелачивая 20%-ным раствором едкого натрия и перемешивая содержимое бутылки в течение первых суток 3-4 раза, в последующие дни по одному разу. По окончании гидролиза гидролизат декантируют, фильтруют, разливают в посуду и стерилизуют при 1 атмосфере 30 мин. Содержание аминного азота в таком гидролизате 580-800 мг
Однако при таком способе гидролиза происходит глубокое расщепление белковых молекул, гидролизаты утрачивают ростстимулирующие свойства и могут быть использованы при выращивании бифидо- и лактобактерий только в качестве составной части питательной среды, состоящей в основном из дрожжевого аутолизата.

В процессе производства лактоглобулина из молозива коров после коагуляции белков пепсином и удаления лактосыворотки остаются отходы, состоящие из молозивного казеина и содержащие до 9-12% лактосыворотки (регламент производства N 328-91 "Лактоглобулин противоколипротейный коровий сухой для перорального применения"). Наличие остаточной лактосыворотки в казеиново-сывороточной смеси позволяет считать остающиеся в процессе производства лактоглобулина отходы творогом ("Технология молочных продуктов" М. 1988 С.387 //Г.К.Крусь, Л.В.Чекулаева, Г.А.Шалыгина, Т.К.Ткаль). Известно, что молозиво содержит в 4-5 раз больше белков, чем молоко, белки молозива по аминокислотному составу более полноценны, чем белки молока, в частности они содержат в 3-4 раза больше аминокислот, в том числе и незаменимых.

Кроме того, в молозиве коров в отличие от молока содержатся вещества, обладающие бифидостимулирующей активностью. Поэтому творог, получаемый из молозива, можно рассматривать как сырье для приготовления питательных сред.

Целью изобретения является разработка способа гидролиза творога, получаемого из молозива, позволяющего получать гидролизаты, пригодные для культивирования бифидо- и лактобактерий.

Это достигается тем, что в качестве сырья берут творог, получаемый из молозива коров при производстве лактоглобулина, а гидролиз ведут в течение 3-4 ч с использованием 0,3-0,6 г панкреатина на 1 л гидролизуемой смеси и с коррекцией среды в течение гидролиза с помощью 25%-ного водного раствора аммиака.

Пример 1. Для гидролиза используют творог, который остается после удаления лактосыворотки при обработке молозива коров 1%-ным раствором пепсина.

В 5-литровую бутыль помещают творог из расчета 100 г творога на 1 л дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают и оставляют в термостате при (45±1)^oC на 1 ч. Затем доводят pH смеси до значения 7,8-8,0 с помощью 25% -ного водного раствора аммиака, добавляют панкреатин в количестве 0,3 г на 1 л смеси и помещают в термостат при (45±1)^oC на 3 ч. В течение первых 2 ч инкубации смеси в термостате каждый час смесь тщательного перемешивают, доводя значения pH до 7,8-8,0 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака.

По окончании 3,0 часовой инкубации смесь вынимают из термостата, останавливают гидролиз, изменяя pH среды до 4,2-4,5 30% раствором уксусной кислоты. Смесь стерилизуют в автоклаве при 1 атм. в течение 30 мин. Фильтруют через миткалевый фильтр непосредственно перед приготовлением питательной среды. Готовый гидролизат имеет соломенно-желтый цвет, прозрачен, содержание аминного азота 50-96 мг
Пример 2. Способ гидролиза творога с использованием оптимального количества панкреатина.

Для гидролиза используют творог, который остается после удаления лактосыворотки при обработке молозива 1%-ным раствором пепсина.

В 5-литровую бутыль помещают творог из расчета 100 г творога на 1 л дистиллированной воды. Смесь тщательно перемешивают и оставляют в термостате при (45±1)^oC на 1 ч. Затем измеряют pH, доводят значение pH до 7,8-8,0 с помощью 25% водного раствора аммиака, добавляют панкреатин в количестве 0,5 на 1 л смеси и вновь помещают в термостат при (45±)^oC на 3,5 ч. В течение первых 2 ч инкубации смеси в термостате каждый час смесь тщательно перемешивают, доводя значение pH до 7,8-8,0 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака.

По окончании 3,5-часовой инкубации смесь вынимают из термостата, останавливают гидролиз, изменяя pH среды до 4,2-4,5 30% раствором уксусной кислоты. Смесь стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере 30 мин. Смесь фильтруют через миткалевый фильтр непосредственно перед приготовлением питательных сред. Готовый гидролизат имеет соломенно-желтый цвет, прозрачен, содержание аминного азота в нем 56-105 мг
Пример 3. Способ гидролиза творога с использованием максимального количества панкреатина.

В 5-литровую бутыль помещают творог из расчета 100 г творога на 1 л дистиллированной воды. Смесь хорошо перемешивают и помещают в термостат при (45±1)^oC на 1 ч. Затем измеряют pH, доводят значение pH до 7,8-8,0 с помощью 25% -ного водного раствора аммиака, добавляют панкреатин в количестве 0,6 г на 1 л смеси и помещают в термостат при (45±1)^oC на 4 ч. В течение первых 2 ч инкубации смеси в термостате каждый час смесь тщательной перемешивают и доводят значение pH до 7,8-8,0 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака. По окончании 4-х часовой инкубации смеси останавливают гидролиз, изменяя pH среды до 4,2-4,5 30%-ным раствором уксусной кислоты. Смесь стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 30 мин. Фильтруют через миткалевый фильтр. Готовый гидролизат имеет соломенно-желтый цвет, прозрачен, содержание аминного азота в нем 82-120 мг
Пример 4. Приготовление питательной среды для выращивания бифидобактерий.

Обработанную в автоклаве смесь фильтруют через миткалевый фильтр. Готовый гидролизат используют в качестве основы для приготовления питательной среды следующего состава,г/л:
Хлорид натрия 0,5 г
Пептон 2 г
Лактоза 10 г
Аскорбиновая кислота 1 г
Сернокислое железо 0,002 г
L-Цистин 0,1 г
Агар 0,75 г
Гидролизат молозивного творога Остальное
Доводят pH среды до значений 7,2-7,4 25%-ного водным раствором аммиака. Среду стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 30 мин.

На данной среде бифидобактерий штамма B. bifidum 1 через 30-32 ч выращивания при (38±1)^oC дают рост в виде рыхлой массы во флаконе с образованием прозрачного надосадочного слоя. Количество жизнеспособных бифидобактерий в 1 мл биомассы составляет 4-5•10⁹. Бактерии имеют типичную морфологию и биохимические свойства, обладают антагонистической активностью.

Пример 5. Приготовление среды для выращивания лактобактерий.

Готовый гидролизат используют в качестве основы для приготовления сред МРС-1, МРС-4, МРС-5, заменяя им гидролизованное молоко (по Богданову) и дистиллированную воду или в качестве основы в среде следующего состава, г/л:
Натрий хлорида 5 г
Глюкоза 10 г
Пептон 2 г
L-Циатит 0,1 г
Аскорбиновая кислота 1 г
Сернокислое железо 0,002 г
Агар 0,75-2,0 г
Гидролизат молозивного творога Остальное.

pH среды устанавливают 6,4±0,2 с помощью 25%-ного водного раствора аммиака.

На среде данного состава лактобактерий штаммов и через 24 ч выращивания при ±1)^oC образуют рост в виде равномерной мути и гомогенного белого осадка на дне. Содержание жизнеспособных бактериальных клеток 1 мл бакмассы 3-5•10⁹. Лактобактерии, выращенные на данной среде, имеют типичную морфологию, биохимические свойства, антагонистическую способность.

Получаемые при использовании данных гидролизатов бифидосодержащие препараты не уступают по качеству (количество живых микробных клеток в 1 дозе, антагонистическая активность, кислотообразование, выживаемость в процессе хранения) препаратам, выращенным на среде Блаурокк и КД-5, но имеют более низкую себестоимость, что позволяет существенно увеличить их производство.

Использование: в молочной и микробиологической промышленности. Сущность изобретения: творог, полученный из молозева коров, смешивают с водой и проводят корректировку PК полученной смеси раствором аммиака, осуществляют гидролиз панкреатином в течении 3-4 ч, при этом панкреатин используют в количестве 0,3-0,6 г на 1 л смеси.

Способ получения гидролизата творога для приготовления питательных сред, включающий смешивание исходного сырья творога с водой, корректировку рН полученной смеси и ферментативный гидролиз панкреатином, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют творог, получаемый из молозива коров, корректировку рН проводят раствором аммиака, а гидролиз осуществляют в течение 3 4 ч, при этом панкреатин используют в количестве 0,3 0,6 г на 1 л смеси.