СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНОГО ГЕНЕРАТОРА С ВЫСОКИМ СОДЕРЖАНИЕМ РАДИЯ-228 Российский патент 2023 года по МПК A61K51/04 B01D15/18 G21G4/08 C01F13/00 C01F15/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к области производства радиоактивных изотопов, также известных как радиоизотопы.

Более конкретно, оно относится к способу приготовления одного или нескольких генераторов с высоким содержанием радия-228 из водного раствора, содержащего торий-232 и радий-228.

Этот или эти генераторы могут, в частности, использоваться для производства тория-228, из которого могут быть получены радий-224, затем свинец-212 и висмут-212.

Таким образом, способ и генератор(ы), которые он позволяет получить, вероятно, найдут применение, в частности, в производстве радиофармацевтических препаратов на основе свинца-212 или висмута-212, подходящих для использования в ядерной медицине и, в частности, в таргетной альфа-лучевой терапии для лечения рака.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Таргетная альфа-лучевая терапия, также известная как таргетная альфатерапия, состоит из инъекции радиоактивного изотопа, связанного с вектором, например, антителом, способным очень точно нацеливаться на определенные участки, присутствующие на поверхности раковых клеток. Энергия, испускаемая при естественном радиоактивным распаде радиоизотопа, затем позволяет разрушать раковые клетки, ограничивая повреждение окружающих здоровых клеток.

Некоторые продукты распада тория-232 и, в частности, свинец-212 и висмут-212, который является дочерним радиоизотопом свинца-212, можно использовать в таргетной альфатерапии, особенно при лечении рака поджелудочной железы, других внутрибрюшинных злокачественных новообразований и меланом, заболеваний, для которых таргетная альфатерапия была предметом доклинических испытаний, в частности, в США.

Как показано на прилагаемой фигуре 1, представляющей процесс естественного распада или радиоактивного распада цепи тория-232, которая включает свинец-212 и висмут-212:

- свинец-212 может быть получен при радиоактивном распаде радия-224,

- радий-224 может быть получен при радиоактивном распаде тория-228,

- торий-228 может быть получен при радиоактивном распаде радия-228, тогда как

- радий-228 может быть получен при радиоактивном распаде тория-232, который представляет собой основной компонент природного тория, извлекаемого из руд, таких как монацит или торит.

Производство свинца-212, радия-224 и тория-228 может осуществляться с помощью так называемого «генератора», то есть хроматографической колонки, которая обычно содержит твердую неподвижную фазу, на которой селективно закреплен исходный радиоизотоп, и которая регулярно промывается жидкой фазой, что позволяет элюировать дочерний радиоизотоп(ы), который образуется в результате радиоактивного распада исходного радиоизотопа.

Известно, что для приготовления генератора, предназначенного для производства тория-228 и содержащего, следовательно, радий-228 в качестве исходного радиоизотопа, в колонке циркулирует водный раствор природной соли тория, содержащий как торий-232, так и радий-228, при этом твердая неподвижная фаза способна удерживать радий избирательно по сравнению с торием.

Материал неподвижной фазы, способный избирательно удерживать радий по сравнению с торием, предлагается, например, компанией IBC Advanced Technologies, Inc. под обозначением AnaLig™ Ra-01 для концентрирования облученных водных растворов перед анализом и для отделения радия от мешающих веществ.

Теоретически ожидается, что количество радия-228, удерживаемого неподвижной фазой хроматографической колонки, будет увеличиваться с увеличением объема раствора соли тория, циркулирующего в этой колонке, в пределах, очевидно, теоретической удерживающей способности радия-228 на материале неподвижной фазы, указанной поставщиком этого материала.

Однако на практике это не так, поскольку уменьшение выхода радия-228 материалом неподвижной фазы происходит по мере того, как объем раствора соли тория, помещенного в циркуляцию в хроматографической колонке, увеличивается, и, следовательно, увеличивается количество радия-228, которое элюируется вместе с торием-232.

В качестве примера, для хроматографической колонки, содержащей 36 г частиц AnaLig™ Ra-01, авторы изобретения обнаружили, что выход удерживания радия-228 этими частицами, который первоначально составлял 99%, не превышает примерно 50% после циркуляции в хроматографической колонке с 2200 л раствора соли тория (неопубликованные данные).

Таким образом, эффективная емкость материала неподвижной фазы, которая соответствует его фактической способности удерживать радий-228 в данных рабочих условиях, значительно меньше его теоретической удерживающей способности, указанной поставщиком.

Следствием этого является то, что, когда хроматографическая колонка впоследствии используется в качестве генератора тория-228, производительность этого генератора меньше, чем она могла бы быть, если бы удерживание радия-228 неподвижной фазой было бы лучше. Это приводит, с одной стороны, к тому факту, что последующие процессы элюирования этого генератора, которые осуществляют для извлечения тория-228, приводят к элюатам, где не только доступен торий-228, но при этом он более разбавлен, и, с другой стороны, к тому факту, что необходима более частая замена генератора.

Кроме того, радий-228, который не удерживается материалом неподвижной фазы при приготовлении генератора, должен быть переработан, иначе этот радий будет потерян.

Поэтому авторы настоящего изобретения поставили перед собой цель найти решение этих проблем.

В частности, они поставили перед собой цель успешно увеличить эффективную емкость материала неподвижной фазы, способного удерживать радий избирательно по сравнению с торием, то есть увеличить количество радия-228, удерживаемого этим материалом на единицу веса материала или, другими словами, приготовление генератора с высоким содержанием радия-228 из раствора тория-232 и радия-228.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Эта цель достигается с помощью изобретения, в котором предлагается способ приготовления по меньшей мере одного генератора, содержащего радий-228, из водного раствора A1, содержащего торий-232 и радий-228, где способ включает следующие стадии:

a) циркуляция в первой хроматографической колонке объема V1 водного раствора А1, где первая хроматографическая колонка содержит первую неподвижную фазу, состоящую из твердого материала, который избирательно удерживает радий по сравнению с торием;

b) по меньшей мере одна промывка первой неподвижной фазы водным раствором А2;

c) элюирование радия-228 из первой неподвижной фазы объемом V3 водного раствора A3, содержащего агент, образующий комплекс с радием-228, причем объем V3 составляет от 0,005% до 1% и, предпочтительно, от 0,01% до 1% от объема V1 водного раствора A1, циркулирующего в первой хроматографической колонке, в результате чего получают водный раствор A4, который содержит комплексы радия-228;

d) диссоциация комплексов радия-228, присутствующих в водном растворе A4, путем изменения pH водного раствора A4, в результате чего получают водный раствор A5, содержащий декомплексованный радий-228;

e) загрузка второй хроматографической колонки водным раствором А5, где вторая хроматографическая колонка содержит вторую неподвижную фазу, состоящую из того же материала, что и первая неподвижная фаза; и

f) промывка по меньшей мере один раз второй неподвижной фазы водным раствором А6, в результате чего получают указанный по меньшей мере один генератор.

Согласно изобретению водный раствор А1, который содержит торий-232 и радий-228, предпочтительно, представляет собой водный раствор, полученный растворением в воде соли природного тория, то есть тория, экстрагированного из ториевой руды, такой как монацит или торит.

Эта природная соль тория, предпочтительно, представляет собой нитрат тория, и в этом случае водный раствор A1 содержит азотную кислоту.

Однако природная соль тория также может быть солью, отличной от нитрата, такой как хлорид тория, и в этом случае водный раствор A1 содержит соляную кислоту.

Согласно изобретению материал, составляющий первую и вторую неподвижные фазы, может быть материалом неподвижной фазы, который способен удерживать радий избирательно по сравнению с торием.

Такой материал может включать твердую подложку, которая является неорганической (такой как частицы диоксида кремния или оксида алюминия или силикагель), органической (такой как полимер) или неорганической-органической, которая функционализирована путем прививки или пропитки органическими молекулами, способными к удержанию ионов радия (Ra²⁺), присутствующих в водном растворе A1, посредством ионного обмена, молекулярного распознавания или любого другого механизма селективно от ионов тория (Th⁴⁺), также присутствующих в этом водном растворе.

В частности, он может состоять из материала, который содержит частицы диоксида кремния, привитые молекулами органического лиганда радия, например, оксакриптанда. Одним материалом, который особенно хорошо подходит для варианта осуществления способа согласно изобретению, является, например, материал, предлагаемый компанией IBC Advanced Technologies, Inc. под обозначением AnaLig™ Ra-01.

Содержание азотной кислоты в водном растворе A1, предпочтительно, находится в диапазоне кислотности, рекомендованном поставщиком материала неподвижной фазы, например от 0,01 моль/л до 4 моль/л азотной кислоты для частиц AnaLig™ Ra-01.

Водный раствор А2, предпочтительно, представляет собой водный раствор кислоты, который содержит ту же кислоту и такой же концентрации, что и водный раствор А1.

Следовательно, он предпочтительно состоит из водного раствора, содержащего азотную кислоту, в концентрации от 0,01 моль/л до 4 моль/л, если сам водный раствор A1 имеет такую концентрацию азотной кислоты.

На стадии c) радий-228, удерживаемый первой неподвижной фазой, элюируется с помощью агента, который будет отделять этот радий-228 от первой неподвижной фазы путем комплексообразования или хелатирования (оба термина рассматриваются здесь как синонимы).

Согласно изобретению этот комплексообразующий или хелатирующий агент, предпочтительно, представляет собой аминополикарбоновую кислоту или соль аминополикарбоновой кислоты.

Таким образом, он может, в частности, состоять из нитрилотриуксусной кислоты (или НТУ), этилендиаминтетрауксусной кислоты (или ЭДТА), диэтилентриаминпентауксусной кислоты (или ДТПА) или одной из их солей, однако предпочтение отдается ЭДТА и ее солям, таким как натриевые соли.

Следовательно, водный раствор A3, предпочтительно, представляет собой раствор, который содержит ЭДТА или ее соль с концентрацией, предпочтительно, от 0,03 моль/л до 0,1 моль/л и, более предпочтительно, равной 0,09 моль/л ЭДТА, и pH которого доводится до предпочтительно от 10 до 11 путем добавления сильного основания, такого как гидроксид натрия.

Таким образом, полученный элюат (или водный раствор A4) содержит радий-228, но в закомплексованной форме.

Следовательно, стадия d) предназначена для диссоциации комплексов радия-228, присутствующих в элюате, с тем, чтобы на стадии e) можно было загрузить во вторую хроматографическую колонку водный раствор, содержащий декомплексованный или, другими словами, свободный радий-228.

Согласно изобретению эту диссоциацию осуществляют путем изменения pH водного раствора A4 таким образом, чтобы довести этот pH до значения, при котором способность комплексообразователя образовывать комплекс с радием-228 снижается.

Так, например, если комплексообразующим агентом является ЭДТА или одна из ее солей, диссоциация комплексов радия-228 осуществляется путем подкисления водного раствора A4 таким образом, чтобы довести pH этого раствора до значения по меньшей мере равного 3, для предотвращения осаждения ЭДТА и, предпочтительно, не более 5, чтобы комплексообразующая способность ЭДТА по отношению к радию-228 была достаточно снижена. В этом случае предпочтительное значение pH составляет от 4 до 5.

Это подкисление можно проводить простым добавлением кислоты к водному раствору A4, которая может быть слабой кислотой, такой как уксусная кислота, но, предпочтительно, сильной кислотой, такой как азотная кислота, чтобы ограничить объем добавляемой кислоты.

Однако в рамках изобретения подкисление водного раствора A4, предпочтительно, осуществляют промывкой первой неподвижной фазы по меньшей мере одним водным раствором кислоты и добавлением всего или части водного раствора, полученного в результате этой промывки, в водный раствор А4.

Более предпочтительно, для подкисления водного раствора A4 предпочтительно дважды промыть первую неподвижную фазу:

- первый раз буферным раствором, таким как буферный раствор ацетата натрия, pH которого равен по меньшей мере 3, предпочтительно, самое большее, 5 и, в идеале, равен 4,5; и

- второй раз водным раствором кислоты, который преимущественно содержит ту же кислоту, что и водные растворы А1 и А2, и поэтому предпочтительно представляет собой водный раствор, содержащий азотную кислоту, в концентрации от 0,01 моль/л до 4 моль/л, если сами водные растворы A1 и A2 имеют такую концентрацию азотной кислоты;

и добавить все или часть растворов, полученных в результате этих двух промывок, к водному раствору A4.

Действительно, удобно следовать данному способу, поскольку это позволяет не только подкислить водный раствор A4, но также при первой промывке удалить свободную ЭДТА, а также комплексы 228Ra-ЭДТА, удерживаемые в поровом объеме первой неподвижной фазы и, при второй промывке, восстановить первую неподвижную фазу для последующего повторного использования этой неподвижной фазы.

Когда подкисление водного раствора A4 выполняется путем добавления одного или нескольких растворов, полученных в результате промывки первой неподвижной фазы, тогда способ может включать между стадиями d) и e) мониторинг pH водного раствора A5, полученного в результате этого подкисления, и, если требуется, доведение этого pH до значения от 3 до 5 и, предпочтительно, от 4 до 5.

На стадии е) загрузка второй хроматографической колонки водным раствором А5 состоит из простой циркуляции этой смеси в этой колонке, но, предпочтительно, ее осуществляют при низкой скорости потока, например от 1 мл/мин до 5 мл/мин, чтобы способствовать удержанию радия-228 на второй неподвижной фазе.

Как упоминалось выше, после того, как вторую хроматографическую колонку загружают водным раствором A5, вторую неподвижную фазу, содержащуюся в этой колонке, подвергают по меньшей мере одной промывке водным раствором A6 (стадия f) способа), которым является водный раствор A6, предпочтительно, водный раствор кислоты.

Более предпочтительно, вторую неподвижную фазу подвергают двум промывкам:

- первая промывка для удаления комплексообразующего агента, присутствующего в поровом объеме второй неподвижной фазы, которую осуществляют с помощью буферного раствора, такого как буферный раствор ацетата натрия, например, с pH по меньшей мере равным 3, предпочтительно, не более 5 и, в идеале, 4,5, если комплексообразующим агентом является ЭДТА; и

- вторая промывка для предварительной обработки второй неподвижной фазы с целью последующего использования второй хроматографической колонки в качестве генератора, например, тория-228, и которую осуществляют водным раствором кислоты, содержащим преимущественно ту же кислоту и такой же концентрации, что и в водных растворах A1, A2 и A3; поэтому этот водный раствор содержит, предпочтительно, азотную кислоту в концентрации от 0,01 моль/л до 4 моль/л, если водные растворы A1, A2 и A3 сами имеют такую концентрацию азотной кислоты.

Согласно изобретению стадию а), предпочтительно, осуществляют до тех пор, пока удерживаемый выход радия-228 первой неподвижной фазой больше или равен пороговому значению. Другими словами, стадию а) останавливают, как только удерживаемый выход радия-228 первой неподвижной фазой упадет ниже этого порогового значения.

В результате объем V1 водного раствора A1 из стадии a) соответствует объему водного раствора A1, циркулирующего в этой колонке, до тех пор, пока удерживаемый выход радия-228 первой неподвижной фазой больше или равен пороговому значению.

Предпочтительно это пороговое значение составляет 80% и, более предпочтительно, 90%.

В первом предпочтительном варианте осуществлении способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе, чтобы получить смесь водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5 или смесью водных растворов А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают один генератор.

Во втором предпочтительном варианте осуществления изобретения используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, обычно от 3 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе, чтобы получить смесь водных растворов A5;

- стадию e) загрузки m вторых колонок осуществляют n водными растворами A5 или смесью водных растворов A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m вторых неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

В третьем предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов А4, которые собирают по отдельности;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы проводят водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В четвертом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов A4, которые собирают вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к смеси водных растворов A4, в результате чего получают водный раствор A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водным раствором А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В пятом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, обычно от 3 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов А4, которые собирают по отдельности;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки m второй хроматографической колонки осуществляют n водными растворами A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m вторых неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

В шестом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, обычно от 3 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом получают n водных растворов A4, которые собирают вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к смеси водных растворов A4, в результате чего получают водный раствор A5;

- стадию e) загрузки m второй хроматографической колонки осуществляют водным раствором A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

В седьмом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-e) проводят n раз с помощью первой и второй хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В восьмом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-f) проводят n раз с помощью первой и второй хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, при этом один генератор получают после n стадий a)-f).

В девятом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью l первых хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, и l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, в результате чего получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе для получения смеси водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5 или смесью водных растворов А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В десятом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью l первых хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, и l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, при этом получают n водных растворов А4, которые собирают по отдельности;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В одиннадцатом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью l первых хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, и l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, при этом получают n водных растворов A4, которые собирают вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к смеси водных растворов A4, в результате чего получают водный раствор A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водным раствором А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В двенадцатом предпочтительном осуществлении способа согласно изобретению используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-e) проводят n раз с помощью l первой хроматографической колонки и второй хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, где l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, в результате получают одну вторую хроматографическую колонку; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

В тринадцатом предпочтительном варианте осуществления способа согласно изобретению используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и:

- стадии a)-f) проводят n раз с помощью l первой хроматографической колонки и второй хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, обычно от 2 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6, где l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, благодаря чему получают один второй генератор.

Следует отметить, что, когда варианты осуществления с девятого по тринадцатый осуществляют с целым числом l, равным n, это означает, что для выполнения n раз стадий а)-с) или а)-d) каждый раз используют другую первую колонку.

Независимо от варианта осуществления способа согласно изобретению полученный(е) генератор(ы), предпочтительно, предназначен(ы) для производства тория-228.

Дополнительные особенности и преимущества способа согласно изобретению станут очевидны после ознакомления со следующим дополнительным описанием, которое относится к двум предпочтительным вариантам осуществлениям этого способа.

Очевидно, что эти варианты осуществления даны просто в качестве иллюстраций объекта изобретения и никоим образом не служат ограничению этого объекта изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фигуре 1, описанной ранее, представлена цепочка радиоактивного распада тория-232.

На фигуре 2 схематично представлен первый вариант осуществления способа согласно изобретению.

На фигуре 3 схематично представлен второй вариант осуществления способа согласно изобретению.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ КОНКРЕТНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Сначала рассматривается фигура 2, на которой схематично представлен первый вариант осуществления способа согласно изобретению.

В этом первом варианте осуществления способ предназначен для приготовления одного генератора.

Во-первых, он включает n-кратное проведение с помощью одной первой хроматографической колонки 10, содержащей неподвижную фазу 20, следующей последовательности стадий a)-d):

a) циркуляция водного раствора A1, содержащего торий-232, радий-228 и азотную кислоту, в колонке 10 до тех пор, пока выход удерживания радия-228 неподвижной фазой 20 равен по меньшей мере пороговому значению;

b) когда выход удерживаемого радия-228 становится меньше порогового значения, промывка неподвижной фазы 20 водным раствором А2, содержащим азотную кислоту, для удаления из неподвижной фазы 20 тория-232, присутствующего в поровом объеме этой неподвижной фаза;

c) элюирование радия-228 из неподвижной фазы 20 водным раствором A3, содержащим ЭДТА в качестве комплексообразователя, а также сбор в приемнике 30 элюата или водного раствора A4, содержащего радий-228 в виде комплексов 228Ra-ЭДТА; и

d) диссоциация комплексов 228Ra-ЭДТА двумя последовательными промывками неподвижной фазы 20, первая буферным раствором с кислым pH, а вторая водным раствором азотной кислоты, и сбор двух промывочных растворов на их выходе из колонки 10 в резервуары 30, в результате чего получают водный раствор А5, содержащий декомплексованный радий-228;

n обозначает целое число по меньшей мере равное 2, обычно от 2 до 10 и, предпочтительно, равное 4 или 5.

Стадии c) и d) из n последовательностей стадий a)-d) могут быть проведены с использованием n приемников 30, каждый из которых служит для одной стадии c) и одной стадии d), и в этом случае после последней стадии d) из n последовательностей стадий a)-d), получают n водных растворов A5.

Альтернативно, стадии c) и d) из n последовательностей стадий a)-d) могут быть проведены с использованием одного резервуара 30, и в этом случае после последней стадии d) из n последовательностей стадий a)-d), получают смесь n водных растворов А5.

Затем способ включает проведение с помощью одной второй хроматографической колонки 40, содержащей неподвижную фазу 50, следующих двух стадий:

e) загрузка второй колонки 40 n водными растворами A5 или смесью n водных растворов A5 для фиксации на неподвижной фазе 50 радия-228, содержащегося в этих растворах или этой смеси; и

f) две последовательные промывки неподвижной фазы 50, первая буферным раствором с кислым pH для удаления ЭДТА из этой неподвижной фазы, а вторая водным раствором, содержащим азотную кислоту, для предварительной обработки неподвижной фазы 50 с целью последующего использование хроматографической колонки 40 в качестве генератора.

Все стадии способа, которые подробно описаны ниже, предпочтительно, осуществляют при температуре окружающей среды, то есть при температуре от 20°C до 25°C.

* Стадия a):

Колонка 10 содержит неподвижную фазу 20, которая состоит из частиц AnaLig™ Ra-01. Эта неподвижная фаза удерживает радий, независимо от изотопа, избирательно по сравнению с торием, независимо от изотопа.

В качестве примера, эта колонка имеет объем слоя (или BV) 78,54 мл и содержит от 34 до 37 г частиц AnaLig™ Ra-01.

Перед проведением первой стадии а) из n последовательностей стадий неподвижную фазу 20 предварительно обрабатывают путем перколяции водного раствора, содержащего от 0,01 моль/л до 4 моль/л, предпочтительно, от 0,05 моль/л до 1 моль/л и, более предпочтительно, 0,1 моль/л азотной кислоты.

После того, как проведена эта предварительная обработка, в колонку 10 подают водный раствор А1, который получают растворением природного нитрата тория в воде и который имеет содержание азотной кислоты в диапазоне 0,01 моль/л и 4 моль/л, предпочтительно, 0,05 моль/л и 1 моль/л и, более предпочтительно, 0,1 моль/л.

Этот водный раствор содержит радий-228 (например, в количестве 1 МБк/л), предпочтительно, в радиоактивном равновесии с торием-232, из которого он происходит.

В колонку 10 непрерывно подают водный раствор со скоростью потока обычно от 10 мл/мин до 100 мл/мин, пока выход удерживаемого радия-228 больше или равен пороговому значению, которое, предпочтительно, составляет 80% и, более предпочтительно, 90%.

Когда удерживаемый выход радия-228 падает ниже порогового значения, подачу в колонку 10 прекращают.

Удерживаемый выход, обозначаемый R_T, рассчитывают путем определения активности радия-228 в образцах водного раствора A1, которые отбираются на входе и выходе из колонки 10, и используя следующую формулу:

,

где:

A_ini: активность радия-228 в водном растворе A1 на входе в колонку 10, выраженная в МБк;

A_fin: активность радия-228 в водном растворе А1 на выходе из колонки 10, выраженная в МБк.

Как известно само по себе, активность радия-228 определяется косвенно, а именно рассчитывается по активности, проявляемой его дочерним актинием-228 в конце периода в 4 дня после взятия проб, активность самого актиния-228 измеряется непосредственно в образцах с помощью гамма-спектрометрии.

* Стадия b):

Промывка неподвижной фазы 20 осуществляют путем циркуляции в колонке 10 нескольких BV, например 15 BV, водного раствора A2, который содержит от 0,01 моль/л до 4 моль/л, предпочтительно, от 0,05 моль/л до 1 моль/л и, более предпочтительно, 0,1 моль/л азотной кислоты при скорости потока, например, 40 мл/мин.

* Стадия c):

Элюирование радия-228 из неподвижной фазы 20 осуществляют путем циркуляции в колонке 10 водного раствора A3, который содержит от 0,03 моль/л до 0,1 моль/л и, предпочтительно, 0,09 моль/л, и pH доводится до значения предпочтительно от 10 до 11 путем добавления сильного основания, такого как гидроксид натрия.

Количество BV водного раствора A3, которые помещают в циркуляцию в колонке 10, выбирают таким образом, чтобы оно соответствовало объему водного раствора A3 от 0,005% до 1% и, предпочтительно, от 0,01% до 1% от объема водного раствора A1, циркулировавшего в этой колонке на стадии a), для получения концентрирующего элюирования радия-228, то есть элюирования радия-228, которое дает водный раствор A4, в котором активность радия-228 по меньшей мере в 100 раз выше, чем активность радия-228 в водном растворе A1

Так, например, для объема от 1000 до 1200 л водного раствора A1, циркулирующего в колонке 10, элюирование радия-228 проводят с количеством BV водного раствора A3, соответствующим объему между 50 мл и 12 л, предпочтительно, от 250 мл до 12 л, то есть, например, 6 BV для колонки 10, имеющей BV 78,54 мл.

Для оптимального элюирования водный раствор A3, предпочтительно, вводят в циркуляцию в колонке 10 в две стадии. Так, например, для 6 BV сначала используются 2 BV со скоростью потока 10 мл/мин, затем, после 20-минутного перерыва, остальные 4 BV используют со скоростью потока 5 мл/мин.

Однако вполне возможна циркуляция водного раствора A3 в колонке 10 непрерывно (то есть не предусматривая перерыв) и/или с одной скоростью потока, этот поток потенциально может находиться в диапазоне от 1 мл/мин до 30 мл/мин.

С другой стороны, важно поддерживать pH водного раствора A3 на уровне не более 11, чтобы минимизировать риски растворения частиц диоксида кремния, образующих твердый субстрат неподвижной фазы 20.

* Стадия d):

Как указано выше, эта стадия состоит из двух последовательных промывок неподвижной фазы 20 и сбора растворов, полученных в результате этих двух промывок, в приемник 30, где на стадии c) был собран элюат или водный раствор A4, содержащий радий-228 в форме комплексов 228Ra-ЭДТА.

Первую промывку, которая позволяет удалить из неподвижной фазы 20 свободную ЭДТА, а также комплексы 228Ra-ЭДТА, оставшиеся в промежуточном объеме этой неподвижной фазы, осуществляют путем циркуляции в колонке 10 нескольких БВ, например 5 BV буферного раствора, pH которого не менее 3 для предотвращения осаждения ЭДТА внутри колонки 10 и не более 5.

Этот буферный раствор представляет собой, например, буферный раствор ацетата натрия с pH 4,5.

Вторую промывку, которая сама по себе позволяет восстановить неподвижную фазу 20 с целью ее повторного использования при выполнении следующей последовательности стадий а)-d), осуществляют путем циркуляции в колонке 10 нескольких BV, например, 5 BV водного раствора азотной кислоты, кислотность которого позволяет очистить неподвижную фазу 20, но без добавления раствора, полученного в результате этой второй промывки, к смеси, уже присутствующей в резервуаре 30, что снижает pH этой смеси ниже 3 для предотвращения осаждения ЭДТА.

Таким образом, этот водный раствор азотной кислоты, предпочтительно, имеет содержание азотной кислоты от 0,1 моль/л до 1 моль/л и, более предпочтительно, 0,1 моль/л.

Скорость циркуляции буферного раствора и водного раствора азотной кислоты в колонке 10 составляет преимущественно 10 мл/мин, но может варьироваться от 1 мл/мин до 60 мл/мин.

Сбор растворов из этих двух промывок осуществляют при перемешивании, так что промывочные растворы смешиваются с элюатом по мере их сбора и, таким образом, подкисляют этот элюат.

Это позволяет снизить комплексообразующую способность ЭДТА по отношению к радию-228 и таким образом получить водный раствор А5, в котором радий-228 декомплексован.

* Стадия e):

Хроматографическая колонка 40, предпочтительно, является колонкой, полностью идентичной колонке 10, с таким же BV и таким же массовым количеством частиц AnaLig™ Ra-01.

Перед проведением стадии е) неподвижную фазу 50 предварительно обрабатывают путем перколяции раствора буферного раствора, pH которого равен по крайней мере 3, чтобы предотвратить присутствие ЭДТА в n водных растворах A5 (если в процессе стадий c) и d) n последовательностей стадий a)-d) использовались n приемников 30) или смеси водных растворов A5 (если в процессе n последовательностей стадий a)-d) использовалась один резервуар 30), от осаждения внутри колонки 40, но не более 5.

Этот буферный раствор представляет собой, например, буферный раствор ацетата натрия с pH 4,5.

После того, как проводят эту предварительную обработку, и после необязательного регулирования pH до значения, равного, по меньшей мере 3 и, предпочтительно, не более чем 5, а в идеале от 4 до 5, n водных растворов A5 или смеси водных растворов A5, в колонку 40 загружают n водных растворов A5 или их смесь.

Эту загрузку осуществляют путем циркуляции в этой колонке n водных растворов A5 (вводимых в колонку один за другим) или смеси водных растворов A5 при низкой скорости потока, например, от 1 мл/мин до 5 мл/мин, чтобы способствовать удержанию радия-228 частицами Analig™ Ra-01.

* Стадия f):

Как указано выше, эта стадия состоит из двух последовательных промывок неподвижной фазы 50, первая буферным раствором с pH от 3 до 5, а вторая водным раствором азотной кислоты.

Первую промывку, которая позволяет удалить из неподвижной фазы 50 свободную ЭДТА, оставшуюся в поровом объеме этой неподвижной фазы, осуществляют путем циркуляции в колонке 40 нескольких BV, например 2,5 BV, буферного раствора, pH которого равен по меньшей мере 3, чтобы снова предотвратить осаждение ЭДТА внутри колонки 40, и не более 5, чтобы предотвратить повторное комплексообразование поровой ЭДТА с радием-228.

Как и в случае первой промывки на стадии d), этот буферный раствор представляет собой, например, буферный раствор ацетата натрия с pH 4,5.

Вторую промывку, которая позволяет предварительно обработать неподвижную фазу 50, осуществляют путем циркуляции в колонке 40 нескольких BV, например 3 BV, слабо концентрированного водного раствора азотной кислоты, такого как водный раствор, содержащий от 0,1 моль/л до 1 моль/л и, предпочтительно, 0,1 моль/л азотной кислоты.

Скорость циркуляции буферного раствора и водного раствора азотной кислоты в колонке 40, предпочтительно, составляет 5 мл/мин, но может варьироваться от 1 мл/мин до 5 мл/мин.

Теперь рассматривается фигура 3, на которой представлен второй вариант осуществления способа согласно изобретению.

Этот вариант осуществления, который предназначен для приготовления ряда генераторов, отличается от варианта осуществления, показанного на фигуре 1, только тем, что:

- число последовательностей стадий а)-d) больше или равно 3, обычно от 3 до 10 и, более предпочтительно, от 4 до 6;

- стадии e) и f) проводят с m вторыми колонками 40, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше чем количество n последовательностей стадий a)-d).

Таким образом, стадия e) включает загрузку m вторых колонок 40 n водными растворами A5 или смесью водных растворов A5, полученных после стадии d) последней из n последовательностей стадий a)-d), предпочтительно, равномерным распределением, то есть с равными долями, n водных растворов A5 или смеси водных растворов A5 между m вторых колонок 40.

Затем стадия f) включает две последовательные промывки каждой из m неподвижных фаз 50, первая буферным раствором с кислым pH для удаления из неподвижных фаз 50 свободной ЭДТА, оставшейся в этих неподвижных фазах, а вторая водным раствором, содержащим азотную кислоту для предварительной обработки вторых неподвижных фаз 50 с целью последующего использования вторых хроматографических колонок 40 в качестве генераторов.

ПРИМЕР ВАРИАНТА ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ СПОСОБА ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ

Способ согласно изобретению осуществляли согласно тринадцатому варианту осуществления, описанному в разделе «Описание изобретения», чтобы приготовить один генератор, содержащий радий-228.

В этом примере использовалось следующее:

- три первых колонки 10 (то есть l равно 3) и одна вторая колонка 40, каждая из которых имеет BV 78,54 мл и каждая содержит от 34 г до 37 г частиц Analig™ Ra-01;

- один резервуар 30 на первую колонку 10 (то есть всего три резервуара 30); и

- следующие рабочие параметры:

* количество n раз, когда выполнялись последовательности a)-f): 3, причем для каждой последовательности:

* стадия a): циркуляция в одной из первых колонок 10 1200 л водного раствора A1, содержащего 1 МБк/л радия-228 (то есть 1200 МБк для 1200 л) и 0,1 мол/л азотной кислоты, при средней скорости потока 35 мл/мин; затем

* стадия b): циркуляция в одной из первых колонок 10 15 BV водного раствора A2, содержащего 0,1 моль/л азотной кислоты, при скорости потока 40 мл/мин; затем

* стадия c): циркуляция в одной из первых колонок 10 водного раствора A3, содержащего 0,09 моль/л EDTA, и при pH 10-11, в следующей последовательности: 2 BV при скорости потока 10 мл/мин. - перерыв 20 минут - 4 BV при расходе 5 мл/мин; затем

* стадия d): циркуляция в одной из первых 10 колонок 5 BV буферного раствора ацетата натрия с pH 4,5 при скорости потока 10 мл/мин, затем 5 BV водного раствора, содержащего 0,1 моль/л азотной кислоты. кислоты, при скорости потока 10 мл/мин, чтобы собрать 16 BV раствора A5, содержащего декомплексованный радий-228, в каждый резервуар 30

* стадия e): циркуляция в одной второй колонке 40 16 BV, собранных в каждом из резервуаров 30 после стадии d), при скорости потока 5 мл/мин;

* стадия f): циркуляция во второй колонке 40 2,5 BV буферного раствора ацетата натрия с pH 4,5 при скорости потока 5 мл/мин, затем 3 BV водного раствора, содержащего 0,1 моль/л азотной кислоты, при скорости потока 5 мл/мин.

После двух повторений стадий а)-f) была получена колонка 40, содержащая 82 МБк радия-228 на 1 г частиц AnaLig™ Ra-01, то есть всего 3018 МБк радия-228.

Это означает, что эффективная емкость частиц AnaLig™ Ra-01, образующих неподвижную фазу 50, была увеличена в 2,5 раза по сравнению с эффективной емкостью частиц AnaLig™ Ra-01, образующих неподвижную фазу 20.

Изобретение относится к производству радиофармпрепаратов для использования в таргетной альфа-лучевой терапии для лечения злокачественных новообразований, конкретно к способу приготовления одного или нескольких генераторов с высоким содержанием радия-228 из водного раствора, содержащего торий-232 и радий-228. Способ включает циркуляцию в первой хроматографической колонке водного раствора азотной кислоты, причем колонка содержит неподвижную фазу, состоящую из твердого материала, который избирательно удерживает радий по сравнению с торием, промывку неподвижной фазы водным раствором азотной кислоты, элюирование радия-228 из неподвижной фазы водным раствором комплексона, избирательного к радию-228. Диссоциацию водных комплексов радия-228 осуществляют путем изменения pH водного раствора, в результате чего получают раствор, содержащий радий-228 в декомплексованной форме, который затем загружают во вторую хроматографическую колонку с неподвижной фазой, состоящей из того же материала, что и первая неподвижная фаза. Промывка второй неподвижной фазы осуществляется кислым водным раствором, в результате чего получают по меньшей мере один генератор радия-228. Техническим результатом изобретения является предоставление способа для увеличения эффективной емкости материала неподвижной фазы на единицу веса материала и приготовление генератора с высоким содержанием радия-228. 22 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 пр.

1. Способ приготовления по меньшей мере одного генератора, содержащего радий-228, из кислотного водного раствора A1, содержащего торий-232 и радий-228, где способ включает по меньшей мере следующие стадии:

a) циркуляция в первой хроматографической колонке (10) объема V1 водного раствора А1, где первая хроматографическая колонка содержит первую неподвижную фазу (20), состоящую из твердого материала, который избирательно удерживает радий по сравнению с торием;

b) промывка по меньшей мере один раз первой неподвижной фазы (20) кислотным водным раствором А2, содержащим ту же кислоту, что и кислотный водный раствор A1;

c) элюирование радия-228 из первой неподвижной фазы объемом V3 водного раствора A3, содержащего агент, образующий комплекс с радием-228, где объем V3 составляет от 0,005% до 1% от объема V1 водного раствора A1, циркулирующего в первой хроматографической колонке, в результате чего получают водный раствор A4, который содержит комплексы радия-228;

d) диссоциация комплексов радия-228, присутствующих в водном растворе A4, путем изменения pH водного раствора A4, в результате чего получают водный раствор A5, содержащий радий-228 в декомплексованной форме;

e) загрузка второй хроматографической колонки (40) водным раствором A5, где вторая хроматографическая колонка содержит вторую неподвижную фазу (50), состоящую из того же материала, что и первая неподвижная фаза; и

f) промывка по меньшей мере один раз второй неподвижной фазы (50) кислотным водным раствором A6, в результате чего получают упомянутый по меньшей мере один генератор.

2. Способ по п.1, где кислотный водный раствор А1 представляет собой раствор, полученный растворением природной соли тория в воде.

3. Способ по п.1 или 2, где кислотный водный раствор А1 содержит от 0,01 моль/л до 4 моль/л азотной кислоты.

4. Способ по любому из пп.1-3, где кислотный водный раствор А2 содержит от 0,01 моль/л до 4 моль/л азотной кислоты.

5. Способ по любому из пп.1-4, где агент, образующий комплекс с радием-228, представляет собой аминополикарбоновую кислоту или соль аминополикарбоновой кислоты.

6. Способ по п.5, где аминополикарбоновая кислота представляет собой нитрилотриуксусную кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту или диэтилентриаминпентауксусную кислоту.

7. Способ по любому из пп.1-6, где водный раствор A3 содержит от 0,03 моль/л до 1 моль/л этилендиаминтетрауксусной кислоты или ее соли и имеет pH от 10 до 11.

8. Способ по любому из пп.1-7, где на стадии d) модификация pH водного раствора A4 представляет собой подкисление для доведения pH водного раствора A4 до значения от 3 до 5.

9. Способ по п.8, где стадия d) включает по меньшей мере одну промывку первой неподвижной фазы (20) кислотным водным раствором и добавление всего или части водного раствора, полученного в результате промывки, к водному раствору A4.

10. Способ по п.9, где стадия d) включает:

- первую промывку первой неподвижной фазы (20) буферным раствором, pH которого равен от 3 до 5; и

- вторую промывку первой неподвижной фазы (20) кислотным водным раствором, содержащим от 0,1 моль/л до 4 моль/л азотной кислоты;

и добавление всех или части растворов, полученных после промывок, к водному раствору A4.

11. Способ по п.8, где стадия d) включает добавление кислоты к водному раствору A4.

12. Способ по любому из пп.1-11, где водный раствор А5 имеет pH равный от 3 до 5.

13. Способ по любому из пп.1-12, где стадия f) включает:

- первую промывку второй неподвижной фазы (50) буферным раствором, pH которого равен, по меньшей мере, 3; и

- вторую промывку второй неподвижной фазы (50) кислотным водным раствором A6.

14. Способ по любому из пп.1-13, где стадию а) циркуляции водного раствора А1 осуществляют до тех пор, пока выход удерживания радия-228 в первой неподвижной фазе больше или равен пороговому значению.

15. Способ по п.14, где пороговое значение составляет 80%.

16. Способ по любому из пп.1-10 и 12-15, где используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и где:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, в результате чего получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе для получения смеси водных растворов А5;

- стадию е) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5 или смесью водных растворов А5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5 или смесью водных растворов А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

17. Способ по любому из пп.1-10 и 12-15, где используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и где:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, в результате чего получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе для получения смеси водных растворов А5;

- стадию e) загрузки m вторых колонок осуществляют n водными растворами A5 или смесью водных растворов A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m вторых неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

18. Способ по любому из пп.1-8 и 11-15, где используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и где:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, в результате чего получают n водных растворов A4, которые собирают по отдельности;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

19. Способ по любому из пп.1-8 и 11-15, где используют одну первую хроматографическую колонку и одну вторую хроматографическую колонку, и где:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 2, в результате чего получают n водных растворов A4, которые собирают вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к смеси водных растворов A4, в результате чего получают водный раствор A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водным раствором А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

20. Способ по любому из пп.1-8 и 11-15, где используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и где:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, в результате чего получают n водных растворов A4, которые собирают по отдельности;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки m вторых хроматографических колонок осуществляют n водными растворами A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m вторых неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

21. Способ по любому из пп.1-8 и 11-15, где используют одну первую хроматографическую колонку, m вторых хроматографических колонок и m вторых неподвижных фаз, и где:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью первой хроматографической колонки, где n обозначает целое число большее или равное 3, в результате чего получают n водных растворов A4, которые собирают вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к смеси водных растворов A4, в результате чего получают водный раствор A5;

- стадию e) загрузки m вторых хроматографических колонок осуществляют водным раствором A5, где m обозначает целое число большее или равное 2, но меньше n; и

- стадию f) промывки m неподвижных фаз осуществляют водным раствором A6, в результате чего получают m генераторов.

22. Способ по любому из пп.1-10 и 12-15, где используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и где:

- стадии a)-d) проводят n раз с помощью l первых хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2 и l обозначает целое число большее или равное 2, но меньшее или равное n, при этом получают n водных растворов A5, которые собирают по отдельности или вместе для получения смеси водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5 или смесью водных растворов А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.

23. Способ по любому из пп.1-8 и 11-15, где используют l первых хроматографических колонок, l первых неподвижных фаз и одну вторую хроматографическую колонку, и где:

- стадии a)-c) проводят n раз с помощью l первых хроматографических колонок, где n обозначает целое число большее или равное 2 и l обозначает целое число большее или равное 2, но меньше или равное n, при этом получают n водных растворов А4, которые собирают по отдельности или вместе для получения смеси водных растворов A4;

- стадию d) осуществляют путем добавления кислоты к n водным растворам A4 или к смеси водных растворов A4, в результате чего получают n водных растворов A5;

- стадию e) загрузки второй хроматографической колонки осуществляют водными растворами А5; и

- стадию f) промывки второй неподвижной фазы осуществляют водным раствором А6, в результате чего получают один генератор.