Изобретение относится к косметологии и может быть использовано для разработки линейки лечебно-косметических средств нового поколения, способствующих активации регенеративных процессов в коже различных типов, а также в ее производных - волосах и ногтях, в состав которых включены белково-пептидные комплексы (БПК), обладающие свойством регулировать процессы физиологической регенерации и активировать процессы репаративной регенерации в коже и ее производных, способствуя восстановлению морфологической структуры и функции органа, не вызывающих развития негативных реакций в коже и организме в целом.
Одним из основных биологических процессов, определяющих состояние кожи и ее производных - ногтей и волос, является физиологическая регенерация, протекающая постоянно в ходе нормальной жизнедеятельности организма. При физиологической регенерации, представляющей собой процесс, противоположный апоптозу- «запрограммированной» смерти клеток, происходит естественное обновление ткани кожи и ее производных. Данное равновесие имеет место у молодых, нормально развивающихся организмов. Оно может быть нарушено по мере возрастания последствии негативного воздействия на кожу факторов окружающей среды, заболеваний, стресса. В этом случае процессы репаративной регенерации в коже нарушаются и не могут привести к полному восстановлению структуры и функции органа: происходят изменения, например, в дерме, вызывающие сухость, дряблость кожи, образование морщин, а при инфекции и воспалении - соединительнотканных рубцов. Волосы и ногти становятся тонкими и ломкими, начинается алопеция. Развитие этих процессов наступает и усиливается с возрастом как неизбежный атрибут старения организма.
В настоящее время актуальность в проблеме, связанной с поддержанием здоровой неувядающей кожи, приобретают поиск и исследование веществ, способных активировать процессы физиологической и репаративной регенерации кожи, причем не вызывающих при этом развития негативных побочных процессов.
В этом аспекте интерес могут вызвать мембраноторопные гомеостатические тканеспецифические биорегуляторы (МГТБ) - группа ранее не изученных эндогенных веществ, основу которых составляют комплексы взаимодействующих между собой белков и пептидов, которые в виде наноразмерной структуры присутствуют во внеклеточном пространстве тканей животных [1].
МГТБ были обнаружены во всех тканях и биологических жидкостях позвоночных животных, в том числе, млекопитающих [1, 2]. Они оказывают влияние на основные биологические процессы в тканях: на адгезию клеток, их миграцию, пролиферацию, дифференцировку, апоптоз. Биологическое действие МГТБ характеризуется наличием тканевой и отсутствием видовой специфичности и осуществляется при очень низких концентрациях растворов, соответствующих диапазону 10-8-10-17 мг белка/мл. Важнейшим свойством МГТБ является их способность стимулировать процессы восстановления и репарации в патологически измененных тканях за счет дополнительной активации клеточных источников регенерации в организме [1, 3].
В частности, было показано, что МГТБ, выделенный из сыворотки крови крупного рогатого скота, стимулирует пролиферацию фибробластов млекопитающих, увеличивает их жизнеспособность и клоногенность in vitro [2, 3]. Данный МГТБ на модели кожной раны у мышей in vivo вызывает полное восстановление морфологической структуры кожи, образование волосяных фолликулов, сальных и потовых желез, поврежденных мышечных волокон [4].
В изобретении RU 2372922 «Способ лечения глубокого ожога кожи» от 20.11.2009 было показано, что при нанесении на ожоговую поверхность кожи крыс глубиной IIIБ степени биодеградируемого материала, содержащего аллогенные культивированные фибробласты фетусов животного, в виде губчатой композиции, содержащей коллаген, хитозан, а также аскорбиновую кислоту, хондроитинсерную кислоту, D-глюкуроновую кислоту, гепарин и белок, полученный из сыворотки крови КРС по ранее разработанной методике для выделения биорегуляторов группы МГТБ. В результате наблюдали существенное ускорение процесса заживления, полноценное восстановление дермального слоя кожи, а также эпидермиса.
В изобретении RU 2468814 «Ранозаживляющий гель» от 10.12.2012 было показано, что при воздействии композиции, в состав которой входят хитозан, салициловая кислота и биорегулятор группы МГТБ, выделенный из сыворотки крови КРС, на гнойную рану в эксперименте у крыс происходила полная эпителизация раны, отслоение струпа, восстанавливалась структура дермы, в дерме отсутствовали очаги воспаления, происходило формирование волосяных фолликулов, в подкожной жировой ткани. Можно было наблюдать формирование протоков желез, а в отдельных участках под раной отмечено частичное восстановление мышечных элементов. Ранозаживляющий гель способствовал формированию морфологически полностью восстановленной ткани в области травмы, стимулируя регенерацию в инфицированной кожной ране. В этом изобретении было показано, что ранозаживляющий гель подавляет патогенную флору гнойной раны и вызывает активацию восстановительных процессов.
В изобретении RU 2481121 «Противоожоговый гель» от 10.05.2013 было показано, что гелевая композиция, в состав которой входят хитозан, салициловая кислота и биорегулятор группы МГТБ, выделенный из сыворотки крови КРС, обладает выраженным противоожоговым действием. На 12-е и, особенно, на 18-е сутки происходит законченная и полная эпителизация плоскостной ожоговой раны, полное созревание грануляционной ткани, отсутствие некротических изменений поперечнополосатой мускулатуры. Данная композиция обладает выраженным репарирующим действием и способствует восстановлению морфологически и биохимически нормальной ткани кожи. Такому выраженному действию на процессы восстановления кожи при повреждении способствует протекторное действие данного МГТБ, выделенного из сыворотки крови млекопитающих, на эндотелиальные клетки сосудов, что обеспечивает нормальную функцию кровеносной системы организма, в том числе, капилляров кожи и ее производных [5].
Способность данного МГТБ восстанавливать кровообращение показано в изобретении RU № 2787479 «Набор фармакологического средства, предназначенного для улучшения кровотока в коре головного мозга и восстановления двигательных и когнитивных функций организма» от 15 декабря 2021г.
В настоящем изобретении представлена новая косметическая композиция, в состав которой входят биорегулятор группы МГТБ, выделенный из сыворотки крови млекопитающих, а также хроматографически очищенные фракции, выделенные, соответственно, из экстракта семян дерева Bertholletia excelsa, и водного раствор минерала Бракшун. Кроме того, в состав косметической композиции входит гиалуроновая кислота (ГК), которая, как известно, является важнейшим компонентом внеклеточного матрикса, экспрессируется всеми клетками кожи и обеспечивает постоянное увлажнение ткани этого органа [6]. Молекулы ГК взаимодействуют с водой, обеспечивая поддержание высокой концентрации влаги во всех слоях кожи. Именно при таком состоянии межклеточного пространства кожи возможно постоянное протекание процессов физиологической регенерации, которое необходимо для поддержания гомеостаза этого органа, контактирующего с внешней средой. ГК в косметической субстанции применяется в виде смеси фракций с различными молекулярными массами, которые отличаются проницаемостью в слои кожи [7]. Так, например, супернизкомолекулярные фракции ГК (до 10 кДа) способны проникать в дерму, а среднемолекулярные фракции ГК (от 200 кДа до 500 кДа) - только в эпидермис, высокомолекулярная фракция (1000 кДа-2000 кДа), не проникая в слои кожи, образует на ее поверхности пленку.
В заявленной косметической композиции применяются четыре фракции ГК, каждая из которых, удерживая молекулы воды, обеспечивает увлажнение всех слоев кожи и ее поверхности, необходимое для биологического действия МГТБ, выделенного из сыворотки крови млекопитающих [4].
В состав косметической композиции входят также цитрат серебра, который является бактерицидным компонентом; хлорид кальция, необходимый для поддержания стабильной конформации белково-пептидного комплекса (БПК), который представляет собой биологически активную основу МГТБ, выделенного из сыворотки крови животных [1].
Технической задачей заявленного изобретения является расширение ассортимента и создание высокоэффективных косметических средств для кожи и ее производных - волос и ногтей, которые обеспечивают поддержание гладкой, эластичной кожи, ее упругого тургора, предупреждают образование морщин, предотвращают и устраняют выпадение волос, ломкость и неровность ногтей.
Техническим результатом заявленного изобретения в соответствии с поставленной технической задачей является расширение ассортимента и создание косметической композиции, проявляющей свойство активировать процессы восстановления и репарации в дряблой и увядающей коже, а также способствовать восстановлению структуры и функции ее производных - ногтей и волос.
Такая активация способствует поддержанию биосинтеза коллагена, эластина, восстановлению функции сосудистой системы кожи.
Применение новой косметической субстанции характеризуется отсутствием какого-либо негативного воздействия на отдельные ткани, органы и организм в целом
Указанная техническая задача и технический результат достигаются косметической композицией, способствующей активации регенеративных процессов в коже различных типов, а также в ее производных - волосах и ногтях, включающей растворы в фармацевтически приемлемом носителе и/или разбавителе белково-пептидного комплекса, выделенного из сыворотки крови млекопитающих, хроматографически очищенной фракции, выделенной из экстракта плодов Bertholletia excelsa и хроматографически очищенной фракции минерала Бракшун, в диапазоне их концентраций 10-12-10-8 мг белка /мл, а также содержит смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами, включающие сверхнизкомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 2 кДа до 10 кДа, низкомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 40 кДа до 100 кДа, среднемолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 200 кДа до 500 кДа, высокомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 1000 кДа до 2000 кДа, при соотношении между данными фракциями как 1:1:1:1, а также хлорид кальция, цитрат серебра и деминерализованную воду при следующем соотношении компонентов в мас.%:
При этом, косметическая композиция по изобретению в качестве фармацевтически приемлемого носителя и/или разбавителя содержит деминерализованную воду или физиологический раствор.
Нижеследующие представленные примеры и фигуры 1-4 иллюстрируют изобретение (получение заявленной косметической композиции и ее свойства), но не ограничивают его.
Фиг. 1. Мембранотропная активность фракции супернатанта, выделенной из сыворотки крови крупного рогатого скота. По абсциссе - степень десятикратного последовательного разбавления исследуемой фракции; по ординате - величина мембранотропного эффекта, Ма (%). Звездочками отмечены концентрации исследуемой фракции, при которых значения Ма отличались от контрольных (р<0,05), т.е. были биологически активными.
Фиг. 2. Мембранотропная активность фракции супернатанта, выделенной из сыворотки крови лошади. По абсциссе - степень десятикратного последовательного разбавления исследуемой фракции; по ординате - величина мембранотропного эффекта, Ма (%). Звездочками отмечены концентрации исследуемой фракции, при которых значения Ма отличались от контрольных (р<0,05), т.е. были биологически активными.
Фиг. 3. Мембранотропная активность фракции супернатанта, выделенной из экстракта семян Bertholletia excelsa. По абсциссе -степень десятикратного последовательного разбавления исследуемой фракции; по ординате - величина мембранотропного эффекта, Ма (%). Черным цветом отмечены концентрации исследуемой фракции, при которых значения Ма отличались от контрольных (р<0,05), т.е. были биологически активными.
Фиг. 4. Мембранотропная активность хроматографически очищенной фракции, выделенной из раствора минерала Бракшун методом гель-фильтрации. По абсциссе - степень десятикратного последовательного разбавления исследуемой фракции; по ординате - величина мембранотропного эффекта, Ма (%). Звездочками отмечены концентрации исследуемой фракции, при которых значения Ма отличались от контрольных (р<0,05), т.е. были биологически активными.
Пример. 1. Способ получения ВПК из сыворотки крови рогатого скота (например, быка) или лошади
В качестве сырья используют коммерческие препараты «Сыворотка крупного рогатого скота жидкая, для культур клеток», стерильная, рег. удост. - ФСР 2008/03104, 200 мл, а также «Сыворотка лошадиная жидкая», тест на отсутствие микоплазмы, стерильная, стекло, рег. удост. - ФСР 2008/03322, 100 мл, «Биолот».
К охлажденному раствору сыворотки крови постепенно добавляют сернокислый аммоний при постоянном перемешивании до образования насыщенного раствора соли (на 100 мл сыворотки добавляли 78 г соли) в присутствии 10-2 М ЭДТА. Суспензию белков оставляют на 7 суток при температуре +4°С, после чего центрифугируют при 15000g в течение 60 минут. Собирают фракцию супернатанта и осадка. Обе фракции диализуют против воды до полного удаления ионов аммония. Биологически активную фракцию супернатанта концентрируют в 5 раз при 40°С, используя вакуумный роторный испаритель, и далее разделяют на колонке Superdex™ 75 (10×300 мм) GL «GE Helthcare» (Швеция), уравновешенной водой, методом гельфильтрации на хроматографе Bio-Rad NGC Chromatography System Quest Plus (США). Скорость элюции - 0.5 мл/мин. Детекцию проводят спектрофотометрически при 210 и 280 нм (фиг. 1, 2). Фракцию собирают при 280 нм, концентрируют и проверяют на наличие мембранотропной активности, характерной для МГТБ [2] (фиг. 3, 4).
Для оценки гомогенности данной фракции проводят ее электрофорез по методике Лэммли [9] с использованием пластин ПААГ толщиной 1 мм; 12.5% и 4.0%, составляют концентрирующий и разделяющий гели, соответственно. Для определения молекулярной массы используют набор маркерных белков 2000-250000 Да (BioRad, США). Электрофорез проводят при постоянном токе 20-30 мА в течение 1 час. Затем вырезают полосу шириной 1 см, фиксируют ее раствором изопропанол/уксусная кислота и окрашивают Кумасси R250, и отмывают далее в 5%-ной уксусной кислоте; остальной гель сохраняют на стеклянной пластине при 4°С. По картине электрофоретического разделения, полученной после окрашивания Кумасси R250 1-см контрольный полосы геля, из остальной его части вырезают горизонтальную полосу, соответствующую белку с молекулярной массой 65-66 кДа, и проводят многократную экстракцию этой части геля деминерализованной водой в течение 24 час Экстракты собирают, объединяют, диализуют против деминерализованной воды в течение 24 час с многократной ее заменой, далее концентрируют, используя вакуумный роторный испаритель при 40°С.
Анализ данной фракций осуществляют на время пролетном MALDI-TOF-масс-спектрометре, оснащенным азотным лазером (337 нм) с частотой импульса до 20 Гц. Все измерения проводят в линейном и рефлекторном режиме, определяя положительные ионы. Для накопления масс-спектров мощность лазерного излучения устанавливают на уровне минимального порогового значения, достаточного для десорбции-ионизации образца. Внешнюю калибровку проводят с использованием точных значений молекулярных масс известных белков. Образец наносят на три ячейки планшета, для каждой из которых записывают спектр, полученный в результате суммирования 10 серий спектров по 50 импульсов лазера для каждой. Для записи, обработки и анализа масс-спектров используют программное обеспечение flexControl 2.4 (Build 38) и flexAnalysis 2.4 (Build 11) (Bruker Daltonics, Германия). Точность измерения масс составляет ±2 Да. В качестве матрицы используют насыщенный раствор а-циано-4-гидроксикоричной кислоты в смеси 70%-ного ацетонитрила и 0.1%-ной трифторуксусной кислоты.
На всех стадиях исследования количественное содержание белка во всех изучаемых фракциях определяют спектрофотометрически по методу Варбурга и Кристиана [6]. Полученные результаты показывают, что выделенная из сыворотки КРС фракция, содержит пептиды с молекулярными массами от 1131 Да до 3121 Да и белок с молекулярной массой 66367±2 Да; фракция, выделенная из сыворотки крови лошади содержит пептиды с молекулярным массами 1060-6931 Да и белок с молекулярный массой 75866±2 Да [1].
Полученные фракции проявляют мембраннотропную активность, характерную для МГТБ, представляют собой БПК и их используют для приготовления косметической композиции.
Пример. 2. Определение мембранотропной активности фракций, используемых для получения косметической композиции
Для исследования фракций на биологическую активность был использован ранее разработанный адгезиометрический метод, предназначенный для идентификации МГТБ животного происхождения [2]. Этот метод основан на определении параметра, который характеризует вязкоупругие свойства ткани печени в условиях множественного кратковременного органного культивирования in vitro с применением стандартного деформационного воздействия.
Метод используется для биотестирования фракций, получаемых в процессе выделения и очистки фракций, выделенных из различных источников, и всегда коррелирует с ее специфической активностью.
Исследование проводят на мышах-гибридах F1 CBA/C57BL, весом около 20 г. Из большой доли печени мыши брали фрагменты весом около 1 мг (области печени с крупными кровеносными сосудами не использовали). Во флаконы для культивирования, содержащие питательную среду - 0,9 мл 199 среды и 0,1 мл раствора исследуемой фракции в определенной концентрации, приготовленной десятикратным последовательным разбавлением в питательной среде 199; в контрольные флаконы вместо исследуемого раствора вносили по 1 мл питательной среды. Для исследования дозовой зависимости мембранотропного эффекта изучаемой фракции в ней определяли концентрацию белка [6] и далее приготавливали в отдельных флаконах ее растворы с различной концентрацией (см. пример. 3). Во все флаконы опытной и контрольной серий помещали по пять фрагментов ткани печени. Затем органные культуры инкубировали при 37°С в течение 2 часов. Далее каждый фрагмент ткани осушали и диспергировали в специальном дезинтеграторе ткани с зазором 50 мкм в 0,1 мл 0,1% раствора трипанового синего, приготовленного на питательной среде, при условиях стандартного деформационного воздействия. Исследование полученной суспензии клеток и клеточных ядер проводили микроскопически в камере Горяева (0,02 мм3). Определение интервала активных концентраций изучаемых фракций проводили, исследуя их биологическое действие при последовательном разведении в 10, 100, 1000 и далее раз.
Биологический эффект рассчитывали по формуле:
Ма = 200% - (Noп/Nk) × 100%,
где: Ма - биологический эффект, вызываемый веществом;
Nоп и Nk - количество клеточных ядер, выделившихся из 1 мг ткани, соответственно, в опыте (органные культуры в присутствии изучаемого препарата) и в контроле (органные культуры без добавления препарата).
В каждом отдельном эксперименте на каждую экспериментальную точку (соответствующая концентрация раствора) просчитывали не менее 5 фрагментов ткани.
Для определения биологической активности каждой изучаемой фракции проводили не менее 3-4 опытов. Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (программа Origin 6.0 Profession).
Пример 3. Получение растворов различных концентраций фракций, выделенных из различного сырья, для заявленной косметической композиции
Приготавливали растворы различной концентрации фракций, выделенных из соответствующего сырья, приготовляют на основе базового препарата.
Концентрацию вещества во фракциях определяют по количеству общего белка спектрофотометрическим методом [6], в отдельных случаях использовали колориметрический метод [10].
Во флакон, содержащий 0,1 мл водного раствора изучаемой фракции (концентрация по белку, например, 100±10 мкг/мл), добавляют 0,9 мл растворителя, например, деминерализованной воды, интенсивно встряхивают 25 раз. Отбирают 0,1 мл образовавшегося раствора в следующий флакон и добавляют 0,9 мл того же растворителя, встряхивают 25 раз. Данную процедуру повторяют 15 раз, получая растворы изучаемой фракции с 10-кратным последовательным разбавлением. Таким образом могут быть получены растворы фракции с концентрациями, соответствующими, например, 10-1 по 10-15 мг белка/мл.
Все растворы можно стерилизовать путем пропускания через стерильные мембранные фильтры GV с диаметром пор 0,22 мкм («Millipore», США).
Пример 4. Способ получения хроматографически очищенной фракции из плодов Bertholletia excelsa
Источником выделения биологически активной фракции, которую используют для приготовления косметической композиции является экстракт семян южноамериканского растения семейства лецитисовых Bertholletia excelsa. Плоды содержат многие микроэлементы: кальций, цинк, медь, селен, магний, калий, фосфор, натрий; витамины С, D, Е, группы В, пантотеновую и фолиевую кислоты, тиамин, рибофлавин, холин и ниацин, бетаин и др. В плодах содержится много селена, который присутствует в них в биогенной форме - нетоксичной и легко усвояемой организмом. Селен исключительно важен для усвоения жирорастворимых витаминов, он регулирует работу эндокринной и репродуктивной системы как у женщин, так и у мужчин. Биогенный селен имеет принципиальное значение в профилактике и подавлении роста и метастазирования опухолей, а также он предупреждает преждевременное старение: развитие раннего климакса, атеросклероза, катаракты. Семена Bertholletia excelsa содержат большое количество ненасыщенных жирных кислот, которые исключительно важны для работы сердечно-сосудистой системы. Потребление орехов улучшает работу кишечника, предотвращает интоксикацию организма, регулирует углеводный обмен, в том числе, глюкозы.
Для экстракции используют 1 кг свежих семян Bertholletia excelsa без скорлупы и без коричневой поверхностной пленки: измельчают на фрагменты, размером 2-3 мм в блендере и помещают в экстрагирующий физиологический раствор (0, 15 М р-р хлорида натрия; 10-3 М р-р хлорида кальция). Экстракцию проводят в течение 24-30 часов при 4°С. Затем растительную массу отбрасывают, экстракт фильтруют, центрифугируют при 15000g 30 мин при 4°С. Надосадочную жидкость собирают и при постоянном перемешивании добавляют сернокислый аммоний до образования насыщенного раствора соли (780 г/л). Образовавшуюся суспензию белков оставляют на 7 суток при 4°С, далее центрифугируют при 15000 g 45 мин. Супернатант и осадок собирают отдельно, после диализа и удаления ионов аммония определяют мембранотропную активность каждой фракции. 1 мл биологически активного супернатанта разделяют на колонке среднего давления Superdex™ 75 (10×300 мм) GL «GE Helthcare» (Швеция), уравновешенной водой, методом гельфильтрации на хроматографе Bio-Rad NGC Chromatography System Quest Plus (США). Скорость элюции - 0.5 мл/мин. Детекцию проводят спектрофотометрически при 210 и 280 нм. Собирают мажорную фракцию при 280 нм, диализуют против деминерализованной воды в течение 24 час с многократной ее заменой, далее концентрируют, используя вакуумный роторный испаритель при 40°С, и проверяют на наличие мембранотропной активности.
Фракцию исследуют методом электрофореза в ПААГ в денатурирующих условиях. Фракцию далее используют для приготовления косметической композиции. На каждой стадии исследования количественное содержание белка во всех изучаемых фракциях определяли спектрофотометрически по методу Варбурга и Кристиана [6].
Пример 5. Способ получения хромаграфически очищенной фракции раствора минерала Бракшун
Минеральное вещество, которое образуется на поверхности горных пород в труднодоступных гротах и расщелинах скал, в основном, расположенных на Алтае. Считается, что основу минерала составляют алюмомагниевые квасцы, в составе которых содержатся многие элементы, в том числе, редкие металлы. Кроме того, в составе минерала были обнаружены С, N, О, Н, S в небольших количествах, что позволяет предположить наличие в составе минерала также органических соединений, которые могут определять свойственную ему биологическую активность. Бракшун веками применяется в народной медицине как активный стимулятор регенеративных процессов, эффективное ранозаживляющее средство. Он оказывает общеукрепляющее действие на организм в целом, в то же время, способствует нормализации функции каждой отдельной системы организма. Прием минерала эффективен при лечении онкологических заболеваний. Его принимают для омоложения кожи лица, против выпадения волос, укрепления ногтей.
5 мг минерала Бракшун (фито-маркет «Доктор Алтай») растворяют в 5 мл деминерализованной воды при перемешивании при 35-37°С в течение 24 час, фильтруют через 6 слоев марли, центрифигируют при 15000g, 30 мин. Опалесцирующий слабоокрашенный раствор разделяют на колонке среднего давления Superdex™ 75 (10×300 мм) GL «GE Helthcare» (Швеция), уравновешенной водой, методом гельфильтрации на хроматографе Bio-Rad NGC Chromatography System Quest Plus (США). Скорость элюции - 0.5 мл/мин. Детекцию проводят спектрофотометрически при 210 и 280. Собирают мажорную фракцию, поглощающую при 280 нм и определяют ее мембранотропную активность. Биологически активной являлась фракция, элюируемая при 32-34 мин. УФ-спектр фракции показал присутствие ароматических соединений и, возможно, пептидной связи. Концентрация белка согласно данным, полученным колориметрическим методом [10], соответствовала 1-3 мкг белка/мл. Исследование мембранотропной активности данной фракции показало, что она проявляет мембранотропную активность, свойственную МГТБ. Исследование данной фракции методом MALDI TOF масс-спектрометрии показало присутствие пептидов с молекулярными массами 1104, 1476, 2486, 3875 Да, определяемых на пределе чувствительности прибора. Полученную фракцию используют для приготовления заявленной косметической композиции.
Пример 6. Приготовление косметической композиции
В деминерализованной воде (60,0 мас. %) растворяют при перемешивании хлорид кальция (0,01 мас. %), цитрат серебра (1,00 мас. %), смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами, например, 5 «Да, 42 кДа, 500 кДа и 2000 кДа, взятых в соотношении 1,0: 1,0: 1,0: 1,0 (суммарного мас. %) в течение нескольких часов. Далее к этому раствору добавляют приготовленные растворы следующих фракций в интервале концентраций 10-12-10-8 мг белка /мл: БПК, выделенной из сыворотки крови млекопитающих (10,0 мас. %), хроматографически очищенных фракций, выделенных, соответственно, из экстракта семян Bertholletia excelsa (10,0 мас. %.) и минерала Бракшун (10,0 мас. %). Интенсивно перемешивают образовавшийся гель до полного растворения всех компонентов и добавляют деминерализованную воду до 100 мас. %. Данную косметическую композицию хранят в закрытой емкости в течение 1 года при комнатной температуре в защищенном от света месте.
Пример 7. Определение мембранотропной активности косметической композиции
К небольшому объему косметической композиции (3-5 мл), помещенной в пенициллиновый флакон, аккуратно наслаивают с помощью пипетки несколько миллилитров питательной среды 199 и оставляют на 16-18 часов при +4-+8°С. Аккуратно пипеткой забирают экстракт, полученный обработкой средой 199 косметической композиции. Данный экстракт разбавляют свежей питательной средой 199 в 10, 100 и 1000 раз, как это указано в примере 3, приготавливая таким образом среду для культивирования ткани печени (см. пример 3). Фрагменты печени мыши Fl C57BL/CBA (самец, 20-22г) помещают по 5 шт в каждый пенициллиновый флакон, содержащий экстракт косметической композиции в питательной среде 199, в разных концентрациях. Органные культуры печени инкубируют при 37°С в течение 2 часов и определяют параметр, отражающий вязкоупругие свойства ткани в каждом опытной флаконе относительно контроля, которой являлась органная культура печени мыши, инкубируемая в питательной среде 199 (см. пример 2). При контакте питательной среды 199 с заявленной косметической композицией в нее переходят вещества, активность которых определяется методом оценки мембранотропной активности, характерной для МГТБ. С помощью данного метода осуществляют проверку качества каждой партии косметических средств, приготовленных на основе заявляемой косметической композиции.
Пример 8. Влияние косметической композиции на заживление кожной раны у мышей in vivo
Исследовали заявленную косметическую композицию для кожи лица и шеи на экспериментальной модели кожной раны у мышей in vivo. Ранее на данной модели было показано, что МГТБ, выделенный из сыворотки крови млекопитающих (КРС, лошади, крысы), способствовал регенерации экспериментальной раны с восстановлением структуры всех морфологических элементов кожи [1, 3].
Эксперименты проводили на мышах Fl (CBA/C57BI) самцах, весом 20-22 г, содержащихся в стандартных условиях вивария ФГБУН института биологии гена РАН.
У каждого животного под наркозом на спине вырезали лоскут кожи, размером около 1 см2.
В эксперименте использовали следующие варианты экспериментальных точек:
1. Контрольная группа мышей, которым наносили травму и не подвергали далее никакому воздействию;
2. Опытная группа мышей, которым после экспериментальной травмы ежедневно наносили в область раны 100 мкл изучаемой косметической композиции.
На 12-ые сутки после нанесения раны животных выводили из эксперимента, вырезали фрагменты кожи, захватывая область раны, и фиксировали в растворе Буэна. Далее в течение 12 час трижды отмывали 70%-ным этанолом. Затем по стандартной методике фрагменты ткани заливали в парафин и приготавливали гистологические срезы толщиной 7 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином по стандартной методике. Просмотр и съемку гистологических препаратов производили на микроскопе Keyence BZ 9000 (Япония).
В контрольной группе животных (необработанная рана) на сроке 12 дней после нанесения раны наблюдали практически полную эпителизацию, незначительное воспаление. В дерме наблюдали много мелких капилляров, волокна коллагена располагающиеся плотными тяжами параллельно эпидермису, то есть происходило формирование фиброзного рубца. В подкожной ткани присутствовали жировые клетки, которые имели неправильную форму и разделялись участками соединительной ткани. Наблюдали восстановление небольшого количества протоков желез. В подкожной ткани также происходило формирование рубца, волокна коллагена более рыхлые, чем в дерме.
У животных опытной группы в области раны наблюдали сильное стягивание краев раны и практически полную ее эпителизацию, более выраженную, чем у животных контрольной серии - происходило восстановление всех слоев многослойного эпителия. Отмечалось отсутствие очагов воспаления. Структура дермы практически полностью была восстановлена. В дерме (особенно под раной) и в подкожной ткани отмечалось восстановление многочисленных протоков желез и волосяных фолликулов. Жировая ткань была развита. В отдельных участках под раной отмечалось частичное восстановление мышечных элементов.
Полученные данные указывают на исключительно эффективное ранозаживляющее действие изучаемой косметической композиции, которая не только стимулировала процесс регенерации в кожной ране, но, самое главное, способствовали формированию в области травмы морфологически полностью восстановленной ткани.
Пример 9. Исследование влияния заявленной композиции на состояние кожи лица и шеи
На 33 добровольцах - 24 женщины, 9 мужчин, возрастом от 38 до 68 лет, было проведено исследование влияния заявленной композиции, содержащей смесь фракций, выделенной из сыворотки крови КРС, выделенной из семян Bertholletia excelsa, фракции из минерала Бракшун, а также смесь фракций гиалуроновой кислоты с разными молекулярными массами, на состояние кожи лица и шеи. Эксперимент проводили 30 дней.
Все добровольцы при проведении эксперимента были здоровы, не принимали фармакологические препараты или БАД, не имели в анамнезе аллергических реакций и атопии. Опытная группа - всего 18 человек: 13 женщин и 5 мужчин, возраст 43-68 лет; контрольная группа добровольцев - всего 15 человек: 11 женщин, 4 мужчины, возрастом 38-54 года.
У нескольких добровольцев как опытной, так и контрольной групп, была жирная кожа; у всех мужчин-участников эксперимента, была чувствительная кожа, на которой после процедуры бритья образовывались покраснения в области шеи, она могла воспаляться.
Состав косметической композиции (мас. %. на 100 мл косметической композиции)
Композиция содержит хлорид кальция (0,01), цитрат серебра (1,00); смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами 5 кДа, 42 кДа, 500 кДа и 2000 кДа при соотношении их в смеси как 1:1:1:1 (по 0, 25 мас. % каждой фракции, всего 1,0 мас. %) и следующие растворы:
- БПК, выделенного из сыворотки крови млекопитающих, содержащий 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из семян Bertholletia excelsa, содержащей 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку (10,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из минерала Бракшун, содержащей 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
остальное: деминерализованная вода - до 100 мас. %.
В качестве препарата сравнения исследовали «Детский крем», производство АОА «Свобода», туба 68 г, активные компоненты: экстракт ромашки, ланолин, витамин А, ментол. Крем питает, смягчает и защищает кожу от раздражения, опрелостей, оказывает легкое охлаждающее действие, не содержит парфюмерной композиции.
При проведении эксперимента изучаемую гелевую композицию по изобретению или детский крем помещали в стандартные пластиковые флаконы с пипеткой и раздавали участникам опыта.
Косметическую композицию или детский крем стандартно, приблизительно в одно время суток наносили на очищенную кожу лица после протирания ватным тампоном, смоченным кипяченой водой комнатной температуры, и осушения следующим образом: на центр лба, подбородка и носа - по 1 капле; на центральную область щек, подбородка и шеи- по 2 капли, Нанесенную композицию или детский крем аккуратно распределяли подушечками указательного и среднего пальца по поверхности кожи. Легкими движениями распределяли композицию по коже в области век.
Анализировали параметры, отражающие степень увлажнения кожи и ряд ее свойств.
Индекс увлажнения кожи определяли у всех участников до начала эксперимента с помощью датчика Corneometer®CM 825 (Courage&Khazaka), исследуя область центра лба и подбородка. Было выявлено три человека в опытной группе (женщины, возраст - 47, 54, 68 лет), которые имели параметр влажности ниже 50. Эти данные указывали на сухую кожу у трех добровольцев. Остальные участники эксперимента имели значения данного параметра выше 50. К концу эксперимента у этих трех добровольцев параметр, отражающий влажность кожи, приобрел значение выше 50 (55-58), что указывало на устранение сухости кожи при воздействии изучаемой композиции. Мужчины отмечали значительное улучшение состояния кожи после процедуры ежедневного бритья: после применения гелевой композиции увеличилась ее влажность, исчезло ощущение стянутости, ее покраснение и раздражение, в то время как при использовании детского крема эти неприятные ощущения после бритья имели место более длительное время.
С помощью дерматоскана VISIOSCAN VC 98. исследовали ряд характеристик кожи лица у участников эксперимента: на 3-ий, 8-ой, 15-ый, 22-ой и 30-ый дни исследования. Следует отметить, что в контрольной группе, (применение детского крема) не отмечалось принципиального изменения параметров, отражающих состояние кожи, в то время как в опытной группе наблюдали значительные изменения таких характеристик как гладкость, шероховатость, отторжение ороговевшего слоя (чешуйчатость), была отмечена динамика уменьшения параметров основных морщин. У добровольцев опытной группы наблюдали исчезновение мелких морщин («сеточки» на висках и щеках), уменьшение параметров крупных носогубных складок, морщин на лбу и «гусиных лапок» около глаз, чешуйчатое™ и шероховатости кожи практически исчезли и вместе с параметрами, отражающими влажность кожи, достигли значения нормы. Отмечалось также уменьшение отечности лица, восстановление овала. Полученные результаты не подлежали статистическому анализу для обеих групп, но для каждого участника эксперимента можно было отметить вполне достоверное изменение индивидуальных параметров. Например, для добровольца, жен. 68 лет, отмечалось увеличение гладкости кожи к концу эксперимента на 25-30%, влажности на 15%, уменьшение параметров носогубных складок на 23-27%. Важно, что все добровольцы опытной группы не обнаружили каких-либо негативных реакций кожи в течение проведения и в после эксперимента. Было отмечено, что изучаемая композиция быстро впитывалась в кожу (10-12 минут), не оставляя пленки на ее поверхности. Результаты исследования свидетельствуют об эффективном действии данной композиции на кожу лица различного типа у людей разного возраста.
Пример 10. Влияния заявленной композиции, на состояние кожи лица при куперозе
На 12 добровольцах - все женщины, возрастом от 45 до 62 лет, было проведено исследование влияния заявленной композиции, на состояние кожи лица при куперозе.
Состав косметической композиции (мас. %. на 100 мл косметической композиции)
Композиция содержит хлорид кальция (0,01), цитрат серебра (1,00); смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами 5 кДа, 42 кДа, 500 кДа и 2000 кДа при соотношении их в смеси как 1:1:1:1 (по 0, 25 мас. % каждой фракции, всего 1,0 мас. %) и следующие растворы:
- БПК, выделенного из сыворотки крови лошади, содержащий 10-12 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из семян Bertholletia excelsa, содержащей 10-8 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из минерала Бракшун, содержащей 10-8 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
деминерализованная вода - до 100 мас. %.
Все добровольцы при проведении эксперимента не принимали фармакологические препараты или БАД, не имели в анамнезе аллергических реакций и атопии. У всех добровольцев на коже лица обнаруживались изменения, характерные для купероза: в области носа, на щеках обнаруживались сеточки капилляров, выступающие как окрашенные островки. Кожа у всех участников была тонкая, сухая, склонная к появлению воспаления, покраснению, а также обладала повышенной чувствительностью к изменению температуры окружающей среды. Все участники категорически избегали прямых солнечных лучей. Врач-косметолог подтвердил после осмотра всех участников наличие у них симптомов купероза.
При проведении эксперимента изучаемую композицию по изобретению помещали в стандартные пластиковые флаконы с пипеткой и раздавали участникам.
Изучаемую композицию приблизительно в одно время суток дважды (утром и вечером) наносили на очищенную кожу лица после осторожного протирания ватным тампоном, смоченным кипяченой водой комнатной температуры, и осушения следующим образом: на центр лба, подбородка и носа; на центральную область щек, на область подбородка по 1 капле. Нанесенную композицию аккуратно распределяли с помощью ватного тампона по поверхности кожи лица. Все участники эксперимента не использовали более никаких косметических или лечебных средств, не наносили макияж.
На 28-ой день исследования все участники были осмотрены врачом-косметологом для оценки состояния кожи лица. У всех участников было отмечено значительное улучшение состояния кожи, которое выражалось в исчезновении ее повышенной чувствительности и сухости. Значительно уменьшилась термочувствительность кожи лица, она стала более упругой, увлажненной. Резко уменьшились интенсивность окраски и площади, занимаемые сеточками капилляров. Осмотр врачом-косметологом показал уменьшение симптомов купероза и характеризовал состояние кожи как приближенное нормальному.
Пример 11. Влияние заявленной композиции на состояние кожи головы и ее производных - волос и ногтей
На 14 добровольцах, женщины, возрастом от 25 до 47 лет, было проведено исследование влияния заявленной композиции на состояние кожи головы и ее производных - волос и ногтей. Эксперимент проводили 45 дней. Все участники эксперимента перенесли вирусную инфекцию, после которой у них появились сухость и сильный зуд кожи головы, образование областей воспаления из-за регулярного расчесывания кожи. Началось резкое истончение волос и их интенсивное выпадение. Особенно подвергалась алопеции заушная область волосяного покрова и область надо лбом. У многих наблюдалось значительное ухудшение состояния ногтей - увеличилась их ломкость, тусклость, появились неровности поверхности (бороздки). У всех добровольцев ногти росли медленно и расслаивались. Катикула была в поврежденном состоянии: или отслоившаяся от поверхности ногтя, или, напротив, сильно разрасталась.
Все участники опыта при проведении эксперимента были здоровы, не принимали фармакологические препараты или Б АД, не имели аллергических реакций и атопии.
Композиция содержит: хлорид кальция (0,01 мас. %), цитрат серебра (1,00 мас. %); смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами 2,5 кДа, 50 кДа, 200 кДа и 1000 кДа при соотношении их в смеси как 1:1:1:1 (по 0,05 мас. % каждой фракции, всего 0,2 мас. %), а также:
- раствор БПК, выделенный из сыворотки крови КРС, содержащий 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку) (10,0 мас. %);
- раствор хроматографически очищенной фракции, выделенной из семян Bertholletia excelsa, содержащей 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку (10,0 мас. %);
- раствор хроматографически очищенной фракции, выделенной из минерала Бракшун, содержащей 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку (10,0 мас. %);
деминерализованная вода - до 100 мас. %.
Участники эксперимента пользовались для мытья головы детским шампунем один раз в течение 5 дней. Изучаемую композицию наносили по 1 капле в разные области кожи головы, всего 10 капель, используя стандартный пластиковый флакон с пипеткой. Далее средство втирали в кожу головы, массируя ее пальцами до полного впитывания композиции. Процедуру проводили один раза в день, утром. По одной капле наносили на каждый отдельный ноготь обеих рук с распределением композиции по поверхности ногтей и коже фаланги. Эксперимент длился 45 дней. По окончании все участники эксперимента отметили увеличение количества волос на голове -увеличение их густоты и появление новых волос, их утолщение, полное исчезновение зуда кожи головы и выпадения волос. У нескольких участниц опыта стала восстанавливаться курчавость волос, полностью исчезнувшая перед началом эксперимента, а также отмечалось уменьшение седины. Кроме того, участники эксперимента отметили улучшение состояния ногтей: они утратили ломкость, слоистость, исчезли их неровности и тусклость. Ногти обрели блеск и стали быстрее расти. Катикула восстановилась: она стала нежной и эластичной, восстановилась ее обычная толщина.
Пример 12. Влияние косметической композиции в виде очищающего лосьона для жирной и проблемной кожи
На 9 добровольцах - все женщины, возрастом от 19 до 35 лет, было проведено исследование влияния композиции в виде очищающего лосьона для жирной и проблемной кожи.
Все добровольцы при проведении эксперимента не принимали фармакологические препараты или БАД, не имели в анамнезе аллергических реакций и атопии. У всех добровольцев на коже лица обнаруживались изменения, характерные для проблемной, комбинированной кожи, склонной к воспалениям, и с широкими порами. У 3-х женщин (26-35 лет) кожа была охарактеризована врачом-косметологом как жирная, возрастная с широкими порами. У 6 добровольцев (возраст 19-24 г) кожа лица была охарактеризована как проблемная, склонная к воспалениям с широкими порами; у всех добровольцев обнаружено акне.
Состав косметической композиции (мас. %. на 100 мл косметической композиции)
Композиция содержит хлорид кальция (0,01), цитрат серебра (1,00); смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами 5 кДа, 42 кДа, 200 кДа и 1000 кДа при соотношении их в смеси как 1:1:1:1 (по 0,1 мас. % каждой фракции, всего 0,4 мас. %) и следующие растворы:
- БПК, выделенного из сыворотки крови лошади, содержащий 10-12 мг белка /мл (концентрация по белку) (20,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из семян Bertholletia excelsa, содержащей 10-10 мг белка /мл (концентрация по белку) (20,0 мас. %);
- хроматографически очищенной фракции, выделенной из минерала Бракшун, содержащей 10-8 мг белка /мл (концентрация по белку) (20,0 мас. %);
деминерализованная вода - до 100 мас. %.
При проведении эксперимента изучаемую композицию по изобретению помещали в стандартные пластиковые флаконы с пипеткой и раздавали участникам.
Композицию приблизительно в одно время суток дважды (утром и вечером) наносили на очищенную кожу лица после осторожного протирания ватным тампоном, смоченным кипяченой водой комнатной температуры и осушения следующим образом: на центр лба, подбородка и носа; на центральную область щек, на область подбородка, шеи и линии декольте по 1 капле. Нанесенную композицию аккуратно распределяли по поверхности кожи лица с помощью подушечек указательного и среднего пальцев. Все участники эксперимента не использовали более никаких косметических или лечебных средств, не наносили макияж.
На 29-ый день эксперимента все участники были осмотрены врачом-косметологом для оценки состояния кожи лица. У всех участников было отмечено значительное улучшение состояния кожи: цвет лица значительно улучшился и приблизился к здоровому. Полностью исчез жирный блеск кожи, она приобрела матовый оттенок и стала более увлажненной и упругой. Полностью исчезли участки воспаления; у 5 добровольцев исчезло акне; у остальных акне значительно уменьшилось (более, чем на 50%).
Выводы
Разработана новая косметическая композиция, предназначенная для ухода за кожей и ее производными (волосами и ногтями). Композиция содержит белково-пептидный комплекс, выделенный из сыворотки крови млекопитающих, а также хроматографически очищенные фракции, полученные, соответственно, из экстракта семян Bertholletia excelsa минерала Бракшун. Как показали результаты исследования данных фракций методами электрофореза в ПААГ и масс-спектрометрии они содержат белки и пептиды. Поскольку эти фракции проявляют в низких концентрациях мембранотропную активность, свойственную природным биорегуляторам группы МГТБ [1, 2], можно предположить, что они представляют собой также белково-пептидные комплексы. Возможно, что в минерале Бракшун, представляющим собой смесь алюмомагниевых квасцов, присутствуют также органические вещества, способные стимулировать восстановительные процессы в тканях высших организмов.
Косметическая композиция содержит фракции гиалуроновой кислоты с молекулярными массами четырех интервалов: 2-10 кДа; 40 - 100 «Да; 200-500 кДа и 1000 - 2000 кДа в соотношении между фракциями как 1:1:1:1, которые обладают различной проникающей способностью в ткани кожи. Гиалуроновая кислота обеспечивает сохранение и депонирование воды в тканях, которая необходима для биологического действия белково-пептидных фракций, например, БПК, выделенного их сыворотки крови млекопитающих.
Хлориды серебра и кальция, компонентами, обеспечивающими бактерицидные свойства косметических средств и поддерживающие конформацию молекул белков и пептидов. Показано, что косметические средства, разработанные на основе заявляемой косметической композиции, не имеют противопоказаний при длительном применении, не вызывают развития негативных процессов в коже, ее производных и в организме в целом. Разработанные косметические средства могут быть рекомендованы в качестве основы для макияжа, дневного или ночного косметического средства, а также средства после бритья. Эти средства проявляют способность активировать процессы регенерации в коже и ее производных, которая выражается в восстановлении тургора ткани, ее увлажнения, исчезновении мелких морщин, уменьшении площади крупных морщин у людей разного возраста, в поддержании эластичности тонкой чувствительной кожи, быстрой репарации мелких кожных дефектов. Применение заявленной косметической композиции способствует исчезновению акне, нормализации функции сальных и потовых желез кожи, а также восстановлению структуры и функции капилляров и мелких сосудов кожи, восстанавливает в ней процессы микроциркуляции. У мужчин после процедуры бритья применение косметической композиции предупреждает развитие раздражения кожи, ее покраснения, способствует заживлению мелких порезов, царапин и ссадин.
Применение заявленной косметической композиции для кожи головы и роста волос, способствовало восстановлению волосяного покрова у женщин после инфекционного вирусного заболевания, уменьшению или исчезновению зуда кожи головы, останавливало выпадение волос, вызывало восстановление их структуры. Косметическая композиция положительно влияла на состояние ногтей- их структуры и внешний вид.
Заявленная косметическая композиция не оказывала негативного воздействия на кожу при длительном применении, не вызывала побочных реакций со стороны других тканей и организма в целом.
Литература
1. Краснов М.С., Ильина А.П., Ямскова В.П. Роль альбуминов сыворотки крови в проведении регуляторного сигнала у млекопитающих // Успехи современной биологии. 2021. Т. 141, №4, С. 336-350.
2. Ямскова В.П., Резникова М.М. Низкомолекулярный полипептид сыворотки крови теплокровных: влияние на клеточную адгезию и пролиферацию // Журнал общей биологии. 1991. Т. 52. №2. С. 181-191.
3. Буеверова Э.И., Брагина Е.В., Резникова М.М., Ямскова В.П., Хрущов Н.Г. Действие адгезионного фактора сыворотки крови на пролиферацию клеток млекопитающих in vitro // ДАН СССР. 1985. Т. 281. №1. С. 158-160.
4. Yamskova V.P., Krasnov M.S., Rybakova E.Yu., Vecherkin V.V., Borisenko A.V., Yamskov I.A. "Analysis of regulatory proteins from bovine blood serum that display biological activity at ultra low doses: 2. Tissue localization and role in wound healing", pp. 71-78 // In the book "Biochemical Physics Frontal Research", Ed. by S.D. Varfolomeev, E.B. Burlakova, A.A. Popov and G.E. Zaikov, Hauppauge NY, Nova Science Publishers Inc. 2007. 127 P.
5. Краснов M.C., Ямскова В.П. Влияние биорегуляторов, выделенных из сыворотки крови и роговицы глаза быка, на состояние ткани и клеток роговицы кролика при культивировании и хранении // Офтальмология. 2021. Т. 18(3). С. 488-494.
6. Snetkov P.1, Zakharova K.1, Morozkina S.1, Olekhnovich R.1, Uspenskaya M.1 Hyaluronic Acid: The Influence of Molecular Weight on Structural, Physical, Physico-Chemical, and Degradable Properties of Biopolymer // Polymers (Basel). 2020 Aug 11. T. 12(8). P. 1800.
7. Essendoubi M., Gobinet C, Reynaud R., Angiboust J. F., Manfait M., Piot O. Human skin penetration of hyaluronic acid of different molecular weights as probed by Raman spectroscopy // Skin Research and Technology. 2018. V. 24, Issuel. February. P. 129-134.
8. Warburg, O., Christian, W. Isolierung und Kristiallisation des Garungfermens Enolase// Biochem. Ztschr. 1941. V. 310. P. 384-421.
9. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. // Nature. 1970. V. 227. №. 5259. P. 680-685.
10. Smith D.S. Identification, molecular cloning and expression of an a-N-acetylgalactosaminidase gene from clostridium perfringens. Measurement of protein using bicinchoninic acid. // Anal Biochem. 1985. V. 150. P. 76-85.
Изобретение относится к косметологии. Косметическая композиция, способствующая активации восстановительных и регенеративных процессов в коже различных типов и в ее производных - волосах и ногтях, содержит растворы в фармацевтически приемлемом носителе и/или разбавителе белково-пептидного комплекса, выделенного из сыворотки крови млекопитающих (10 масс. %), хроматографически очищенную фракцию, выделенную из экстракта плодов Bertholletiaexcelsa (10 масс. %), хроматографически очищенную фракцию минерала Бракшун (10 масс. %) в концентрациях диапазона 10-12-10-8 мг белка /мл, фракции гиалуроновой кислоты (ГК) с различными молекулярными массами: сверхнизкомолекулярную ГК - от 2 кДа до 10 кДа; низкомолекулярную ГК - от 40 кДа до 100 кДа; среднемолекулярную ГК - от 200 кДа до 500 кДа; высокомолекулярную ГК - от 1000 кДа до 2000 кДа, при соотношении между данными фракциями как 1:1:1:1 - всего (0,2 - 1,0 масс. %), хлорид кальция (0,01 масс. %), цитрат серебра (1,00 масс. %.) и деминерализованную воду (до 100%). Изобретение обеспечивает способность активировать процессы регенерации в коже. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 12 пр.
1. Косметическая композиция, способствующая активации восстановительных и регенеративных процессов в коже различных типов и в ее производных - волосах и ногтях, содержащая растворы в фармацевтически приемлемом носителе и/или разбавителе белково-пептидного комплекса, выделенного из сыворотки крови млекопитающих, хроматографически очищенной фракции, выделенной из экстракта плодов Bertholletia excelsa и хроматографически очищенной фракции минерала Бракшун, в диапазоне их концентраций 10-12-10-8 мг белка /мл, а также содержит смесь фракций гиалуроновой кислоты с различными молекулярными массами, включающие сверхнизкомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 2 кДа до 10 кДа, низкомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 40 кДа до 100 кДа, среднемолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 200 кДа до 500 кДа, высокомолекулярную гиалуроновую кислоту с мол. массой от 1000 кДа до 2000 кДа, при соотношении между данными фракциями как 1:1:1:1, а также хлорид кальция, цитрат серебра и деминерализованную воду при следующем соотношении компонентов в масс.%:
2. Косметическая композиция, способствующая активации восстановительных и регенеративных процессов в коже различных типов и в ее производных - волосах и ногтях, по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве фармацевтически приемлемого носителя и/или разбавителя она содержит деминерализованную воду или физиологический раствор.
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГЛУБОКОГО ОЖОГА КОЖИ | 2008 |
|
RU2372922C1 |
| КОСМЕТИЧЕСКАЯ МАСКА | 1996 |
|
RU2120792C1 |
| Приспособление к посадочным маши нам для перемещения растений | 1929 |
|
SU19384A1 |
| Фазовый дискриминатор | 1979 |
|
SU809484A1 |
| US 20030059484 A1, 27.03.2003. | |||
