СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КСЕНОГЕННОГО БИОМАТЕРИАЛА ИЗ АОРТЫ СЕВЕРНОГО ОЛЕНЯ Российский патент 2023 года по МПК A61L27/22 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, а точнее к созданию нового ксеногенного биоматериала, применимого в качестве тканевого трансплантата для регенеративной хирургии.

Решаемая задача заключается в создании нового биоматериала на основе эластина аорты северного оленя, используемого в регенеративной хирургии и обладающего предельно низкими антигенными свойствами.

Известен способ выделения эластина из выйной связки животных [1], относящийся к области пищевой промышленности, в качестве дополнительного источника аминокислот и добавки, влияющей на консистенцию продукта, заключающийся в том, что сырье очищают от жира и других тканей, мелко нарезают, измельчают на мясорубке и заливают ацетоном, повторяя до тех пор, пока не исчезнет мутность, затем обрабатывают эфиром. Недостатками данного способа являются: потеря физико-механических свойств материала, полная растворимость в водном растворе, использование токсичных веществ при обработке материала.

Также известен способ получения эластина для нужд ветеринарии, зоотехники и косметической промышленности, заключающийся в том, что выйную связку животных измельчают, проводят термохимическую обработку в щелочной среде, кислотную обработку, перерастворение. Явными недостатками метода являются: химическая токсичность материала для использования в медицине, длительный процесс обработки, занимающий 3-5 суток, использование токсичных химических веществ [2].

Прототипом заявленного изобретения является способ получения ксеногенного биоматериала для регенеративной хирургии [3], в котором раскрывается способ получения ксеногенного биоматериала из выйной связки животных, заключающийся в освобождении сырья от жировой клетчатки и мышечной ткани, последовательной обработке анионными и катионными детергентами с целью мембранолиза клеток. Одновременно при осуществлении способа выполняют контроль за разблокированием связей протеогликанов и гликопротеинов в пучках коллагеновых волокон, элиминацией гликозаминогликанов. Контроль проводят гистохимическим методом. По достижении 80-90%-ного разблокирования связи протеогликанов и гликопротеинов, и не более 50%-ной элиминации гликозаминогликанов обработку прекращают. Биоматериал отмывают от реагентов, фасуют в стеклянные флаконы, заливают консервантом и проводят радиационную стерилизацию с использованием ускорителя электронов. Полученный материал подвергают бактериологическому и хирургическому контролю.

Задача предлагаемого изобретения: получение доступного биоматериала на основе эластина из возобновляемых биоресурсов для регенеративной хирургии. Технический результат предлагаемого изобретения: ускорение процесса получения биоматериала с минимальной антигенной активностью на основе эластина без использования токсичных реактивов.

Указанная задача в предлагаемом способе достигается тем, что предложенный материал обрабатывают водными растворами этилового спирта в два этапа, на первом этапе обрабатывают 70% этиловым спиртом в течение 4 часов в термостате при температуре 37°С, на втором этапе обрабатывают 96% этиловым спиртом в течение 4 часов в термостате при температуре 37°С, после каждого этапа материал промывают в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин, после второй промывки проводят ферментативный гидролиз материала коллагеназой II типа с активностью 230 ед/мг в шейкер-инкубаторе в течение 2 часов при температуре 37°С и 250 об/мин, затем проводят промывку в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин, промывку повторяют три раза, затем материал помещают в раствор детергента (20% додецилсульфат натрия) и выдерживают в шейкер-инкубаторе в течение 20 часов при температуре 37°С и 250 об/мин, затем проводят промывку в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин, промывку повторяют 5 раз, полученный материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением и фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом.

Указанный способ осуществляется следующим образом. Материал (аорту северного оленя, очищенную от крови и сгустков), разрезают на фрагменты требуемого размера, обрабатывают водными растворами этилового спирта в 2 этапа: 1 этап - обработка 70% этиловым спиртом в течение 4 часов в термостате при температуре 37°С, объем водного раствора этилового спирта должен составлять 10 объемов фрагмента материала, таким образом, биоматериал в емкости должен быть полностью погружен в раствор спирта; 2 этап - обработка 96% этиловым спиртом в течение 4 часов в термостате при температуре 37°С, объем водного раствора этилового спирта должен составлять 10 объемов фрагмента материала, таким образом, биоматериал в емкости должен быть полностью погружен в раствор спирта. После каждого этапа материал промывают в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин. После промывки промывные воды сливают и проводят ферментативный гидролиз материала 1% раствором коллагеназы II типа с ферментативной активностью 230 ед/мг. Емкость помещают в шейкер-инкубатор на 2 часа при температуре 37°С и 250 об/мин. После этого проводят промывку материала в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин 3 раза. Затем материал помещают в 20% раствор додецилсульфата натрия, выдерживают в шейкер-инкубаторе в течение 20 часов при температуре 37°С и 250 об/мин. После этого проводят промывку в дистиллированной воде в центрифуге при 3400 об/мин в течение 5 мин, цикл промывки повторяют 5 раз. Полученный материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением, фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом.

Способ позволяет получить доступный биоматериал на основе эластина из возобновляемых биоресурсов для регенеративной хирургии. Заявленный способ позволяет ускорить процесс получения биоматериала с минимальной антигенной активностью на основе эластина без использования токсичных реактивов.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Битуева Э.Б. Жамсаранова С.Д. Способ получения сухого гидролизата. Патент №2245078, заявка 2003123478/13, 23.07.2003.

2. Сапожникова А.И., Каспаръянц С.А., Месропова Н.В., Гордиенко Н.М. Способ получения эластина. Патент №2092071, заявка 95117244/13, 06.10.1995.

3. Мулдашев Э.Р., Нигматуллин Р.Т., Галимова В.У. и др. Ксеногенный биоматериал для регенеративной хирургии. Патент №2440148, заявка 2009147644/15, 21.12.2009.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения ксеногенного биоматериала, заключающемуся в обработке аорты северного оленя путем промывки, фрагментации, мембранолиза клеток, элиминации гликозамингликанов, стерилизации. Способ получения ксеногенного биоматериала, заключающийся в обработке аорты северного оленя путем промывки, фрагментации, мембранолиза клеток, элиминации гликозамингликанов, стерилизации, отличающийся тем, что аорту северного оленя обрабатывают в 2 этапа водными растворами этилового спирта в концентрации 70% и 96%, соответственно, объем водного раствора этилового спирта должен составлять 10 объемов фрагмента аорты, при температуре 37°С в течение 4 часов с промывкой материала в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, проводят ферментативный гидролиз в шейкер-инкубаторе при температуре 37°С и 250 об/мин в течение 2 часов с применением 1% раствора коллагеназы II типа с активностью 230 ед/мг с дальнейшей трехкратной промывкой материала путем центрифугирования в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, обрабатывают 20% раствором додецилсульфата натрия в шейкер-инкубаторе при температуре 37°С и 250 об/мин в течение 20 часов, проводят пятикратную промывку материала центрифугированием в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, стерилизуют ионизирующим излучением и помещают в стеклянные емкости с консервантом. Вышеуказанное изобретение позволяет ускорить процесс получения биоматериала с минимальной антигенной активностью на основе эластина без использования токсичных реактивов.

Способ получения ксеногенного биоматериала, заключающийся в обработке аорты северного оленя путем промывки, фрагментации, мембранолиза клеток, элиминации гликозамингликанов, стерилизации, отличающийся тем, что аорту северного оленя обрабатывают в 2 этапа водными растворами этилового спирта в концентрации 70% и 96%, соответственно, объем водного раствора этилового спирта составляет 10 объемов фрагмента аорты, при температуре 37°С в течение 4 часов с промывкой материала в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, проводят ферментативный гидролиз в шейкер-инкубаторе при температуре 37°С и 250 об/мин в течение 2 часов с применением 1% раствора коллагеназы II типа с активностью 230 ед/мг с дальнейшей трехкратной промывкой материала путем центрифугирования в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, обрабатывают 20% раствором додецилсульфата натрия в шейкер-инкубаторе при температуре 37°С и 250 об/мин в течение 20 часов, проводят пятикратную промывку материала центрифугированием в дистиллированной воде при 3400 об/мин в течение 5 минут, стерилизуют ионизирующим излучением и помещают в стеклянные емкости с консервантом.