СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КСЕНОГЕННОГО БИОМАТЕРИАЛА ИЗ КОЛЛАГЕНА ДЕРМЫ СЕВЕРНОГО ОЛЕНЯ В ВИДЕ ПЛЕНКИ Российский патент 2024 года по МПК A61K38/39 C14C1/00 A61L15/32 A61L17/08 A61L27/14 

Изобретение относится к области медицины, а точнее к созданию биоматериала, применимого в хирургии в качестве регенеративного и гемостатического средства.

Решаемая задача заключается в создании нового биоматериала из шкуры северного оленя на основе пленочного коллагена, обладающего предельно низкими антигенными свойствами.

Известен способ получения нативного коллагена из сухожилий сгибателей копыт телят, включающий удаление оболочки сухожилий, измельчение материала, промывку измельченного материала физиологическим раствором фосфатного буфера, содержащим хлористый калий, экстракцию коллагена 0,5-2 М уксусной кислотой с добавлением этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), осаждением коллагена хлористым натрием и растворением его в уксусной кислоте [1].

Также известен способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма [2]. Способ включает экстрагирование неколлагеновых примесей из шкуры животных (телят, коров, овец, кроликов) 0,2-0,3M Na₂HPO₄ при рН 8,7-9,1, экстрагирование коллагена органической кислотой и его очистку последовательным осаждением из кислого раствора хлористым натрием, диализом против 0,02 М Na₂HPO₄ и растворением коллагена диализом против 0,017-0,1М уксусной кислоты. Полученный по способу коллаген представляет собой нативный коллаген, т.е. коллаген с неповрежденной тройной спиралью, который в физиологических условиях, т.е. при ионной силе 0,15 М хлористого натрия при рН 7,0-7,5 и температуре 37°С дает гели, являющиеся по структуре аналогом для соединительной ткани. Все типы клеток при включении в такие гели или нанесении на их поверхность живут и размножаются. Ввиду своей низкой иммуногенности, использование нативного коллагена для усиления соединительной ткани и лечения различных патологий как в сочетании с клетками, так и с лекарствами предусматривает его высокую степень очистки от неколлагеновых примесей, что делает способ трудоемким и дорогостоящим.

Прототипом заявленного изобретения является способ получения коллагенсодержащего продукта медицинского назначения [3], в котором коллагенсодержащий продукт получают из шкуры северного оленя. Способ заключается в промывании пресно-сухой шкуры северного оленя водой при температуре 18-26°С, из промытой шкуры удаляют остатки мяса, жира, подкожной клетчатки и отмоченную шкуру выдерживают в 4% растворе гидроксида натрия в течение 15-28 часов, из обработанной ткани удаляют волосяной покров и остатки подкожной клетчатки, полученное голье отмывают от щелочи проточной водой и измельчают до фарша, коллаген экстрагируют 3% раствором уксусной кислоты в течение 30-72 часов при периодическом перемешивании и полученную массу гомогенизируют. Особенностью данного способа является сохранение в получаемом материале иммуногенных свойств, что ограничивает его потенциальное медицинское применение.

Задача предлагаемого изобретения: получение доступного биоматериала на основе пленочного коллагена из возобновляемых биоресурсов для хирургии. Технический результат предлагаемого изобретения: получение биоматериала с минимальной антигенной активностью на основе пленочного коллагена.

Указанная задача в предлагаемом способе достигается тем, что пресно-сухую шкуру северного оленя мездрят тупым ножом с целью удаления поверхностного слоя жира, мышц и части дермы, затем намазным способом обрабатывают шкуру с бахтармяной стороны смесью растворов: 9% раствором гидроксида калия, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида калия массой 2% от массы шкуры, 9% раствором сульфида натрия, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого сульфида натрия массой 1% от массы шкуры, и 9% раствором гидроксида кальция, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида кальция массой 1,6% от массы шкуры, затем шкуру выдерживают в течение 2 часов при комнатной температуре и промывают водой, после чего проводят пикелевание в течение 48 часов в 3% растворе уксусной кислоты с добавлением поваренной соли в соотношении 1 кг соли на 1 кг массы шкуры, при этом объем 3% раствора уксусной кислоты должен быть достаточен для полного погружения в него шкуры, после чего шкуру промывают водой с синтетическим моющим средством в соотношении 200:1 в течение 10 минут, затем промывают шкуру проточной водой в течение 20 минут и высушивают в течение 3-х суток, полученный материал обрабатывают мелкозернистой наждачной бумагой с бахтармяной стороны шкуры, после чего разрезают на фрагменты необходимых размеров и затем обрабатывают 20% раствором лаурилсульфата натрия, выдерживая материал в шейкер-инкубаторе в течение 48 часов при температуре 37°С и 200 об/мин, после чего материал промывают проточной водой до тех пор, пока промывные воды не перестанут мылиться и образовывать пену при взбалтывании, промытый материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением и фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом.

Указанный способ осуществляется следующим образом. Пресно-сухую шкуру северного оленя мездрят тупым ножом с целью удаления поверхностного слоя жира, мышц и части дермы. Затем готовят смесь растворов по следующей схеме: смешивают 9% раствор гидроксида калия, получаемый путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида калия массой 2% от массы шкуры, с 9% растворомсульфида натрия, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого сульфида натрия массой 1% от массы шкуры, и с 9% раствором гидроксида кальция, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида кальция массой 1,6% от массы шкуры. Полученной смесью растворов обрабатывают шкуру с бахтармяной стороны намазным способом, распределяя полученный объем смеси растворов равномерно по всей площади шкуры. Покрытую смесью растворов шкуру выдерживают в течение 2 часов при комнатной температуре и затем промывают водой, после чего проводят пикелевание в течение 48 часов в 3% растворе уксусной кислоты с добавлением поваренной соли в соотношении 1 кг соли на 1 кг массы шкуры, при этом объем 3% раствора уксусной кислоты должен быть достаточен для полного погружения в него шкуры. После этого для нейтрализации кислоты шкуру в течение 10 минут промывают водой с растворенным в ней синтетическим моющим средством в соотношении 1 часть синтетического моющего средства на 200 частей воды. В качестве синтетического моющего средства используют стиральный порошок «Пемос», имеющий в составе менее 5% неионогенных поверхностно-активных веществ (ПАВ), амфотерных ПАВ; 5-15% анионных ПАВ, от 5 до 15% фосфатов, пеногаситель и поликарбоксилаты. Затем шкуру промывают проточной водой в течение 20 минут и высушивают в течение 3-х суток. Полученный материал с целью полного обезволашивания и удаления сетчатого слоя дермы обрабатывают мелкозернистой наждачной бумагой на тканевой основе (Н-25(Р-80)) с бахтармяной стороны шкуры, после чего разрезают на фрагменты необходимых размеров и затем обрабатывают 20% раствором лаурилсульфата натрия, выдерживая материал в шейкер-инкубаторе в течение 48 часов при температуре 37°С и 200 об/мин, после чего материал промывают проточной водой до тех пор, пока промывные воды не перестанут мылиться и образовывать пену при взбалтывании. Промытый материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением и фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом.

Способ позволяет получить доступный биоматериал на основе пленочного коллагена из возобновляемых биоресурсов для регенеративной хирургии. Заявленный способ позволяет получить биоматериал с минимальной антигенной активностью на основе пленочного коллагена из шкуры северного оленя.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Kemp Paul D. Collagen compositions and methods for preparation thereof. Патент на изобретение №5106949, заявка 07407465, 21.04.1992.

2. Кухарева Л.В., Парамонов Б.А., Шамолина И.И., Семенова Е.Г. Способ получения коллагена для лечения патологий тканей организма. Патент на изобретение №2214827, Заявка 2002107219/14, 27.10.2003.

3. Хван В.В., Костин А.В. Коллагенсодержащий продукт медицинского назначения "кололень" и способ его получения. Патент на изобретение 2240818. Заявка 2003136947/15, 27.11.2004.

Изобретение относится к медицине, в частности к средствам регенеративного и гемостатического назначения. Способ получения биоматериала на основе пленочного коллагена включает обработку пресно-сухой шкуры северного оленя путем удаления жира, мышц и части дермы, обработку щёлочью, обезволашивание и промывку, при этом шкуру обрабатывают с бахтармяной стороны намазным способом смесью растворов: 9% раствором гидроксида калия, получаемым путём смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида калия массой 2% от массы шкуры, 9% раствором сульфида натрия, получаемым путём смешивания с дистиллированной водой химически чистого сульфида натрия массой 1% от массы шкуры, и 9% раствором гидроксида кальция, получаемым путём смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида кальция массой 1,6% от массы шкуры. Затем шкуру выдерживают в течение 2 ч при комнатной температуре и промывают водой. Далее проводят пикелевание в течение 48 ч в 3% растворе уксусной кислоты с добавлением поваренной соли в соотношении 1 кг соли на 1 кг массы шкуры, и объём 3% раствора уксусной кислоты должен быть достаточен для полного погружения в него шкуры. Затем шкуру промывают водой с синтетическим моющим средством в соотношении 200:1 в течение 10 мин проточной водой в течение 20 мин и высушивают в течение 3-х суток. Полученный материал обрабатывают мелкозернистой наждачной бумагой с бахтармяной стороны шкуры, разрезают на фрагменты и обрабатывают 20% раствором лаурилсульфата натрия, выдерживая материал в шейкер-инкубаторе в течение 48 ч при температуре 37°С и 200 об/мин. Далее полученный материал промывают проточной водой до тех пор, пока промывные воды не перестанут мылиться и образовывать пену при взбалтывании. Промытый материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением и фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом. Предлагаемый способ получения биоматериала на основе пленочного коллагена обеспечивает получение регенеративного и гемостатического средства с минимальной антигенной активностью. 1 пр.

Способ получения биоматериала на основе пленочного коллагена, заключающийся в обработке пресно-сухой шкуры северного оленя путем удаления жира, мышц и части дермы, обработки щелочью, обезволашивания и промывки, отличающийся тем, что намазным способом обрабатывают шкуру с бахтармяной стороны смесью растворов: 9% раствором гидроксида калия, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида калия массой 2% от массы шкуры, 9% раствором сульфида натрия, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого сульфида натрия массой 1% от массы шкуры, и 9% раствором гидроксида кальция, получаемым путем смешивания с дистиллированной водой химически чистого гидроксида кальция массой 1,6% от массы шкуры, затем шкуру выдерживают в течение 2 ч при комнатной температуре и промывают водой, после чего проводят пикелевание в течение 48 ч в 3% растворе уксусной кислоты с добавлением поваренной соли в соотношении 1 кг соли на 1 кг массы шкуры, при этом объем 3% раствора уксусной кислоты должен быть достаточен для полного погружения в него шкуры, после чего шкуру промывают водой с синтетическим моющим средством в соотношении 200:1 в течение 10 мин, затем промывают шкуру проточной водой в течение 20 мин и высушивают в течение 3-х суток, полученный материал обрабатывают мелкозернистой наждачной бумагой с бахтармяной стороны шкуры, после чего разрезают на фрагменты и затем обрабатывают 20% раствором лаурилсульфата натрия, выдерживая материал в шейкер-инкубаторе в течение 48 ч при температуре 37°С и 200 об/мин, после чего материал промывают проточной водой до тех пор, пока промывные воды не перестанут мылиться и образовывать пену при взбалтывании, промытый материал подвергают стерилизации ионизирующим излучением и фасуют в стеклянные емкости, наполненные консервантом.