Способ прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии Российский патент 2024 года по МПК G01N33/58 C12Q1/6806 C12Q1/686 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, инфекционным болезням и онкологии, и предназначено для прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии.

Вирус гепатита D (HDV) - открытый в 1977 г. дефектный вирус-сателлит вируса гепатита В (HBV), не имеющий собственных ферментных систем и оболочки, использующий полимеразы клетки для репликации и HBsAg для построения оболочки. Распространенность хронической HDV-инфекции составляет в среднем 4,5% от HBsAg-позитивных лиц, или не менее 12 млн инфицированных HDV в мире. Присоединение HDV к текущей инфекции HBV (суперинфекция HDV) с высокой частотой (до 90%) приводит к развитию хронического гепатита D (ХГD) - наиболее тяжелой и быстропрогрессирующей формы хронического вирусного гепатита, характеризующейся ускоренным, в течение 5-10 лет, формированием цирроза печени у 70-80% пациентов, у 15% - в течение 2 лет, и значительно более высоким риском печеночной недостаточности, гепатоцеллюлярного рака и смерти по сравнению с хроническим гепатитом В.

Оценка ответа на противовирусную терапию пациентов с ХГD основана на обнаружении и количественном определении вирусной РНК в сыворотке крови. Однако разработка надежных методов анализа ответа на противовирусную терапию затруднена ввиду отсутствия корреляции авиремии и достижения устойчивого вирусологического ответа, то есть стойкого отсутствия РНК вируса гепатита D в сыворотке крови после завершения лечения. Отсутствие валидной тест-системы для количественной оценки виремии также обусловлено гетерогенностью вируса (по меньшей мере 8 генотипов), быстрой эволюцией возбудителя и особенностями вторичной структуры РНК. Различные методики экстракции HDV РНК, дизайн тестовых праймеров и зондов, общие недостатки стандартизации способствуют существенной вариабельности эксплуатационных характеристик исследовательских и коммерческих тестов. Многими лабораториями для определения предела чувствительности их тестов используется доступный уже более 10 лет стандарт ВОЗ на РНК HDV, который облегчает сравнение уровней РНК в разных исследовательских центрах.

Главная задача лечения хронических вирусных гепатитов - стойкое подавление репликации вируса, в идеале - сохраняющееся после завершения противовирусной терапии. При лечении хронического гепатита С это называется достижением устойчивого вирусологического ответа, достижение устойчивого вирусологического ответа при лечении хронического гепатита В крайне маловероятно и требует постоянного продолжения противовирусной терапии. Возможность достижения устойчивого вирусологического ответа при лечении гепатита D возможна, но продолжительность терапии до сих пор не определена. Недостатком существующего способа оценки эффективности противовирусного лечения является отсутствие возможности предикции рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии несмотря негативный результат ПНР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови. Несмотря на длительный, от 36 до 96 недель, негативный результат ПНР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови на фоне противовирусной терапии, у большинства пациентов развивается рецидив гепатита D. Вероятность рецидива гепатита D не коррелирует со скоростью наступления и длительностью сохранения негативного результата ПНР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови на фоне противовирусной терапии.

Так, в уровне техники известен способ прогноза рецидива или стойкой ремиссии хронического гепатита С после интерферонотерапии (патент республики Беларусь BY 11036 С1, опубл. 30.08.2008 г.), заключающийся в том, что до и после интерферонотерапии в биоптате печени определяют гистологический индекс активности, а после интерферонотерапии дополнительно определяют количество агрессивных лимфоцитов из расчета на 100 синусоидов печени и при снижении гистологического индекса активности до 4 и менее и отсутствии или наличии единичных агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют стойкую ремиссию, а при снижении гистологического индекса активности до 4 и менее и наличии 30 и более агрессивных лимфоцитов в 100 синусоидах печени прогнозируют рецидив. Недостатками данного способа является, во-первых, то, что способ не предназначен для прогнозирования рецидива гепатита D, а, во-вторых, то, что прогностические маркеры данного способа являются косвенными.

Также в уровне техники известен способ прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии (Галимова С.Ф., Хронический гепатит D, Доказательная гастроэнтерология, 3-4, 2015, с. 32-42), заключающийся в оценке прогностического индекса ожидаемого события для пациентов с хронической HDV-инфекцией (baseline-event-anticipation - ВЕА) и оценке уровня anti-HDV IgM. Факторами, ассоциированными с неблагоприятным отдаленным прогнозом, были возраст (старше 40 лет), мужской пол, тромбоцитопения, высокий уровень билирубина и протромбинового времени, а также происхождение пациентов (жители Средиземноморья). Уровень anti-HDV IgM также может применяться в оценке активности заболевания, прогноза и при решении вопроса о сроках проведения противовирусной терапии. Однако недостатками данного способа являются его сложность, крайне невысокая точность и косвенность прогностических критериев.

Также из уровня техники известен способ прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии (Хронический вирусный гепатит D (ХВГD) у взрослых, Клинические рекомендации, 2021 г., с. 14), включающий проведение ПЦР на определение РНК вируса гепатита D в биоматериале (сыворотке крови) пациента, полученном по окончании лечения, выбранный нами за прототип. Качественное определение РНК вируса гепатита D (Hepatitis D virus) в крови методом ПЦР рекомендуется пациентам с ХВГГ), завершившим этиотропное (противовирусное) лечение, через 24 недель после завершения лечения, для прогнозирования рецидива гепатита D. Недостатком способа является его низкая точность и отсутствие корреляции со стойким исчезновением РНК HDV в крови пациента после завершения противовирусной терапии.

Таким образом, существует потребность в способе прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии, лишенном вышеуказанных недостатков.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии за счет раннего выявления РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате, подготовленном определенным образом, что, в свою очередь позволит улучшить результаты лечения гепатита D.

Для достижения указанного технического результата в способе прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии, включающем проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) на определение РНК вируса гепатита D в сыворотке крови пациента, полученном по окончании лечения, предлагается в качестве биоматериала использовать также гепатобиоптат пациента, полученный в результате пункционной биопсии печени, к которому добавляют 0,5 мл лизирующего раствора и перемешивают пипетированием 3-4 раза, полученный образец помещают в термостат при 65°С на 10 минут, в процессе термостатирования образец перемешивают пипетированием 2 раза, после чего центрифугируют в течение 1 минуты при 13000 об/мин, для проведения ПЦР используют полученную из образца надосадочную жидкость и набор реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови; и при получении положительного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате, несмотря на отрицательный результат ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови, прогнозируют наступление рецидива гепатита D в течение 4-24 недель после окончания лечения.

Достоинством предлагаемого способа прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии является применение стандартного ПЦР-теста для выявления РНК вируса гепатита D со специфичностью 100% в ткани печени, что наряду с многократно более высокой концентрацией РНК вируса гепатита D в ткани печени позволяет верифицировать активную репликацию вируса гепатита D даже при неоднократных отрицательных результатах ПЦР в сыворотке крови.

Способ осуществляется следующим образом.

Пациентам с хроническим гепатитом D назначают противовирусную терапию: ежедневные подкожные инъекции булевиртида в дозе 2 мг/сутки с или без пегилированного интерферона альфа-2b в дозе 1,5 мкг/кг подкожно 1 раз в неделю на срок не менее 48 недель. Лечение продолжается в течение от 36 до 144 недель на фоне достижения и сохранения негативного результата полимеразной цепной реакции (ПЦР) на РНК вируса гепатита D (РНК HDV) в сыворотке крови. ПЦР осуществлялась на наборе РеалБест РНК ВГD (кат. №D-0998) со специфичностью выявления РНК вируса гепатита D - 100% и чувствительностью 100 копий/мл.

С целью оценки динамики гистологической активности и фиброза печени гепатита D на фоне противовирусной терапии, а также исследования РНК HDV в ткани печени, пациентам выполняют пункционную биопсию печени по Менгини. Полученные биоптаты печеночной ткани разделяют для гистологического и вирусологического исследования. Гепатобиоптат для морфологического исследования фиксируют в 10% нейтральном формалине, забуференном по Лилли. Ткань печени размером 3-5 мм для вирусологического исследования помещают в физиологический раствор и доставляют в ПЦР-лабораторию. Доставка гепатобиоптата при температуре 18-25°С осуществляется в течение 2 часов, при температуре 2-8°С не более суток, при температуре минус 18-60°С до 2 недель.

Выделение ДНК/РНК из биоптата проводят с помощью набора реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови (мы использовали «РеалБест экстракция 100», производства АО Вектор-Бест). Биоматериал помещался в эппендорф с 0,5 мл лизирующего раствора из набора реагентов «РеалБест экстракция 100».

Если гепатобиоптат был предварительно заморожен, его размораживают. Аккуратным пипетированием гепатобиоптат перемешивают в лизирующем растворе 3-4 раза. Полученный образец помещают в термостат при 65°С на 10 минут. В процессе термостатирования образец перемешивают пипетированием 2 раза, после чего центрифугируют в течение 1 минуты при 13000 об/мин.

Для проведения ПЦР используют 100 мкл полученной из образца надосадочной жидкости и набор реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови. Выделение нуклеиновых кислот осуществляется согласно инструкции к набору реагентов.

Амплификацию проводят с помощью набора реагентов для выявления РНК вируса гепатита D методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени (мы использовали «РеалБест РНК ВГD)» производства АО «Вектор-Бест»), и набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК вируса гепатита методом ПЦР в режиме реального времени (мы использовали «РеалБест ВГВ ПЦР» (вариант 2), производства АО «Вектор-Бест»). В каждую пробирку с лиофилизированной готовой реакционной смесью для ПЦР пипеткой с отдельным наконечником с фильтром вносят 50 мкл соответствующего раствора выделенной РНК (из пробирок, установленных в магнитный штатив). Обращают внимание на недопустимость захвата частиц сорбента. Пробирки закрывают крышками или оптической пленкой и помещают в амплификатор.

Аналитическая чувствительность (предел обнаружения) набора «РеалБест РНК BГD» гарантированно (в 100% образцов) составляет 100 копий/мл РНК HDV при выделении РНК из 100 мкл пробы; специфичность определения - 100%. Протокол проведения реакции ОТ-ПЦР: 1 стадия: 45°С - 30 мин; 2 стадия: 94°С - 1 мин; 3 стадия: 50 циклов (94°С - 10 сек, 60°С - 20 сек). Измерение флуоресценции проводится при 60°С. Анализ и учет результатов проводится автоматически с помощью программного обеспечения «РеалБест Диагностика».

Нами использовался амплификатор «CFX96», производство BIO-RAD, США.

При получении положительного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате, несмотря на наличие отрицательного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови, прогнозируют наступление рецидива гепатита D в течение 4-24 недель после окончания лечения.

Новым является то, что ПЦР на РНК вируса гепатита D у пациентов с гепатитом D, получающих противовирусную терапию предложено проводить в оптимально подготовленном образце из гепатобиоптата, а не в сыворотке крови. Учитывая многократно более высокую концентрацию РНК HDV в гепатоцитах, чем в сыворотке крови, позитивный результат ПЦР на РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате на фоне противовирусной терапии позволяет достоверно предсказать ранний рецидив HDV-инфекции при негативном результате ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови. Результат состоит в повышении эффективности противовирусного лечения пациентов с гепатитом D благодаря недопущению необоснованного завершения противовирусной терапии несмотря на отрицательный результат ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови.

Высокую точность и ценность предлагаемого способа подтверждают нижеприведенные клинические примеры.

Пример 1. Пациентка К., жен., 48 лет. Наблюдается у гепатолога с 2015 года по поводу компенсированного цирроза печени в исходе гепатита D (HBV ДНК «-», HDV РНК «+»). В анамнезе 48 недель противовирусной терапии ПЕГ-интерфероном без достижения вирусологического и биохимического ответа.

При исходной оценке данных (до противовирусной терапии) выявлены лейкопения легкой степени тяжести - 3,46 тыс., АЧН - 1,69, тромбоцитопения легкой степени тяжести - 129 тыс., умеренное повышение АЛТ - 180 Ед/л при нормальных показателях функции печени: общий билирубин - 19,4 мкмоль/л, альбумин - 39,2 г/л, MHO - 1,22, ПТИ - 73%, протромбиновое время - 15,3 сек., холинэстераза - 9,89 мкмоль/л. По результатам вирусологических тестов HBV ДНК «отр», выявлена HDV РНК, количество - 10*8 коп/мл. При УЗИ органов брюшной полости выявлены признаки незначительных диффузных изменений печени и поджелудочной железы, спленомегалия, воротная и селезеночная вены не расширены. Плотность печени по данным эластографии печени составила 12,3 кПа (F4 по METAVIR).

По результатам обследования был диагностирован цирроз печени в исходе гепатита D без признаков нарушения функции печени (клинико-лабораторная компенсация, отсутствие асцита, признаки портальной гипертензии небольшая спленомегалия по данным УЗИ). Сформулирован диагноз: Цирроз печени в исходе гепатита D (HDV RNA "+", количество 10*8 коп/мл), компенсированный. Child А. Секвестрационная нейтро-, тромбоцитопения легкой степени.

С 27.05.2020 пациентке назначена комбинированная противовирусная терапия: Пегилированный интерферон альфа-2а (далее Пег-ИФН) 180 мкг в неделю, подкожно + Булевиртид 2 мг в сутки, подкожно на 48 недель, далее монотерапия Булевиртидом 2 мг в сутки подкожно еще на 96 недель.

Во время противовирусной терапии у пациентки оценивались вирусологический (HDV RNA, HBV DNA), биохимический (анализ крови) и гистологический (в том числе по данным неинвазивной диагностики фиброза печени) ответы, а также безопасность проводимого лечения.

Вирусологический ответ:

Количество HDV RNA методом ПЦР оценивалось через 12, 24, 48, 72, 96, 144 недели противовирусной терапии. Отмечено достижение авиремии через 12 недель от начала и сохранение негативного результата теста на HDV RNA до завершения терапии. Таким образом, был достигнут полный вирусологический ответ на противовирусную терапию. HBV DNA весь период противовирусной терапии не определялась. Биохимический ответ:

Начиная с 4-й недели противовирусной терапии отмечено постепенное снижение уровней трансаминаз. Полный биохимический ответ достигнут через 12 недель терапии. В дальнейшем, уровни АЛТ и ACT сохранялись в пределах верхней границы норма (ВГН) в течение всего периода лечения.

Во время лечения производился контроль уровня желчных кислот в сыворотке крови, который сохранялся повышенным в течение всей терапии. Максимальное содержание желчных кислот было зарегистрировано после 96 недель лечения и составило 112 мкмоль/л, что может быть, отчасти, показателем эффективности проводимой терапии.

Гистологический ответ:

Выраженность фиброза печени была оценена с помощью неинвазивного метода диагностики - транзиентной эластографии печени на аппарате Фиброскан. Исходно был зарегистрирован уровень фиброза F4 (12,3 кПа) по шкале METAVIR. Через 48 недель терапии повторное исследование показало F3 (10,1 кПа) по шкале METAVIR. Снижение плотности печени по данным транзиентной эластографии продолжалось во время противовирусной терапии и на момент окончания лечения через 144 недели составила 9,2 кПа (METAVIR).

С целью оценки достижения вирусологического ответа в ткани печени пациентке с длительной авиремией в сыворотке крови по завершении лечения, то есть через 144 недели от начала противовирусной терапии, выполнена биопсия печени с выполнением ПНР на HDV RNA в гепатобиоптате по предлагаемому способу. К гепатобиоптату добавили 0,5 мл лизирующего раствора и перемешали пипетированием 3 раза. Полученный образец поместили в термостат при 65°С на 10 минут, в процессе термостатирования образец перемешивали пипетированием 2 раза. Центрифугировали образец в течение 1 минуты при 13000 об/мин. Для проведения ПЦР использовали полученную из образца надосадочную жидкость и набор реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови. Результат ПЦР в гепатобиоптате - положительный.

После завершения противовирусной терапии пациентке был рекомендован мониторинг с ежемесячным контролем общего, биохимического и вирусологического анализов крови. Через 2 недели после завершения противовирусной терапии, при негативном результате ПЦР на HDV RNA в сыворотке крови у пациентки зафиксировано повышение АЛТ до 1,4 ВГН. Через 4 недели после завершения противовирусной терапии получен позитивный тест на HDV RNA: верифицирован рецидив гепатита

Безопасность проводимой терапии.

За 144-недельный период наблюдения за пациенткой во время противовирусной терапии у пациентки зарегистрированы прогрессирующая лейкопения и, как следствие, нейтропения, а также тромбоцитопения. Данные изменения были оценены как нежелательные явления интерферонотерапии, но, не потребовавшая модификации дозы Пег-ИФН. Нежелательных явлений, связанных с применением Булевиртида, не зарегистрировано за весь период лечения пациента.

Через 2 недели лечения в анализах отмечено снижение уровня лейкоцитов до 2,38×10*9/л, абсолютное число нейтрофилов, при этом, составило 0,95×10*9/л. Зарегистрированы ИФН-индуцированные лейкопения и нейтропения. Уровень тромбоцитов снижался до минимального значения - 94×10*9/л с дальнейшей стабилизацией и в течение всего периода интерферонотерапии. В дальнейшем уровень тромбоцитов не снижался. Наблюдение за пациенткой продолжено без изменения доз получаемых препаратов противовирусного действия.

Диагноз через 144 недели противовирусной терапии и 12 недель наблюдения после ее завершения:

Основной диагноз: Цирроз печени в исходе гепатита D (HDV RNA "+", количество 10*8 коп/мл; HBV DNA "-"), компенсированный. Child А. ПЕГ-ИФН + Булевиртид (05.2020-04.2021) с достижением вирусологического ответа (08.2020 - отрицательный результат ПЦР), достижением биохимического ответа. ИФН-индуцированная тромбоцитопения легкой ст. Булевиртид 2 мг/сут (04.2021-02.2023). Рецидив (07.2023 - HDV RNA «+»).

Эластография печени (07.2023): 9,2 кПа- F3 (METAVIR); 221 дБ/см - S0.

Вывод: положительный ПЦР-тест на HDV RNA в ткани печени несмотря на достижение и длительное (до 136 недель) сохранении на фоне противовирусной терапии авиремии (HDV RNA «отр») явился достоверным ранним предиктором рецидива HDV-инфекции после завершения лечения.

Пример 2. Пациент В., муж., 51 год. Наблюдается с 2019 года по поводу хронического гепатита D (HBV ДНК «-», HDV РНК «+»).

При обследовании до противовирусной терапии выявлены умеренное повышение АЛТ - 120 Ед/л при нормальных показателях функции печени: общий билирубин - 17,6 мкмоль/л, альбумин - 40,2 г/л, MHO - 0,9, холинэстераза - 8,9 мкмоль/л. По результатам вирусологических тестов HBV ДНК «отр», выявлена HDV РНК, количество - 10*6 коп/мл. При УЗИ органов брюшной полости выявлены признаки незначительных диффузных изменений печени и поджелудочной железы, воротная и селезеночная вены не расширены. Плотность печени по данным эластографии печени составила 4,3 кПа (F0 по METAVIR).

По результатам обследования был сформулирован диагноз: хронический гепатит D (HDV RNA "+", количество 10*6 коп/мл).

С мая 2020 пациенту назначена комбинированная противовирусная терапия: Пегилированный интерферон альфа-2а (далее Пег-ИФН) 180 мкг в неделю, подкожно + Булевиртид 2 мг в сутки, подкожно на 48 недель, далее монотерапия Булевиртидом 2 мг в сутки подкожно еще на 96 недель.

Во время противовирусной терапии у пациента оценивались вирусологический (HDV RNA, HBV DNA), биохимический (анализ крови) и гистологический (в том числе по данным неинвазивной диагностики фиброза печени) ответы, а также безопасность проводимого лечения.

Вирусологический ответ:

Наличие в сыворотке крови HDV RNA методом ПЦР оценивалось через 12, 24, 48, 72, 96, 144 недели противовирусной терапии. Отмечено достижение авиремии через 12 недель от начала и сохранение негативного результата теста на HDV RNA до завершения терапии. Таким образом, был достигнут полный вирусологический ответ на противовирусную терапию. HBV DNA весь период противовирусной терапии не определялась.

Биохимический ответ

Начиная с 4-й недели противовирусной терапии отмечено постепенное снижение уровней трансаминаз. Полный биохимический ответ (нормализация АЛТ) достигнут через 8 недель терапии. В дальнейшем, уровни АЛТ и ACT сохранялись в пределах верхней границы норма (ВГН) в течение всего периода лечения.

Во время лечения производился контроль уровня желчных кислот в сыворотке крови, который сохранялся повышенным в течение всей терапии. Максимальное содержание желчных кислот было зарегистрировано после 48 недель лечения и составило 96 мкмоль/л, что может быть показателем эффективности проводимой терапии.

Гистологический ответ

Выраженность фиброза печени была оценена с помощью неинвазивного метода диагностики - транзиентной эластографии печени на аппарате Фиброскан. Исходно был зарегистрирован уровень фиброза F0 (4,3 кПа) по шкале METAVIR, сохранявшийся весь период противовирусной терапии.

С целью оценки достижения вирусологического ответа в ткани печени пациенту с длительной авиремией в сыворотке крови по завершении лечения, то есть через 144 недели от начала противовирусной терапии, выполнена биопсия печени с выполнением ПЦР на HDV RNA в гепатобиоптате. К гепатобиоптату добавили 0,5 мл лизирующего раствора и перемешали пипетированием 4 раза. Полученный образец поместили в термостат при 65°С на 10 минут, в процессе термостатирования образец перемешивали пипетированием 2 раза. Центрифугировали образец в течение 1 минуты при 13000 об/мин. Для проведения ПЦР использовали полученную из образца надосадочную жидкость и набор реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови. Результат ПЦР в гепатобиоптате - положительный.

После завершения противовирусной терапии пациенту был рекомендован мониторинг с ежемесячным контролем общего, биохимического и вирусологического анализов крови. Через 16 недель после завершения противовирусной терапии, при негативном результате ПЦР на HDV RNA в крови у пациента зафиксировано повышение АЛТ до 1,1 ВГН. Через 24 недель после завершения противовирусной терапии получен позитивный тест на HDV RNA: верифицирован рецидив гепатита D.

Безопасность проводимой терапии.

За 144-недельный период наблюдения за пациентом во время противовирусной терапии значимые нежелательные явления не зарегистрированы.

Диагноз через 144 недели противовирусной терапии и 24 недели наблюдения:

Основной диагноз: Хронический гепатит D (HDV RNA "+", количество 10*6 коп/мл; HBV DNA "-"). ПЕГ-ИФН + Булевиртид (05.2020-04.2021) с достижением вирусологического ответа (08.2020 - отрицательный результат ПЦР), достижением биохиимического ответа. Булевиртид 2 мг/сут (04.2021-02.2023). Рецидив (08.2023 - HDV RNA «+»).

Эластография печени (08.2023): 4,2 кПа- F0 (METAVIR); 221 дБ/см - S0.

Вывод: положительный ПЦР-тест на HDV RNA в ткани печени несмотря на достижение и длительное сохранение на фоне противовирусной терапии авиремии (HDV RNA «отр») явился предиктором позднего (через 24 недели) рецидива HDV-инфекции после завершения лечения.

Всего нами было исследовано 24 пациента с хроническим гепатитом D, которые получали противовирусную терапию Пегилированным интерфероном альфа-2b в дозе 1,5 мкг/кг подкожно 1 раз в неделю в течение 48 недель и ежедневные подкожные инъекции булевиртидом в дозе 2 мг/сут в течение 96 - 144 недель. У всех пациентов через 12-24 недели от начала противовирусной терапии был зафиксирован негативный результат ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови, то есть достигнут полный вирусологический ответ (негативный результат ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови), который сохранялся до конца противовирусного лечения (от 84 до 132 недель). Всем пациентам в конце противовирусной терапии произведена биопсия печени с гистологическим и вирусологическим исследованием ткани печени. У 16 пациентов при проведении ПЦР в биоптате печени выявлена РНК вируса гепатита D. В течение 4-24 недель после завершения противовирусной терапии у всех из них зафиксирован рецидив гепатита D: появление РНК вируса гепатита D в сыворотке крови.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии за счет раннего выявления РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате, подготовленном определенным образом, что, в свою очередь позволит улучшить результаты лечения гепатита D.

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, инфекционным болезням и онкологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии. В гепатобиоптате пациента определяют РНК вируса гепатита D методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При получении положительного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате при наличии отрицательного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови прогнозируют наступление рецидива гепатита D в течение 4-24 недель после окончания лечения. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии за счет раннего выявления РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате. 2 пр.

Способ прогнозирования рецидива гепатита D после завершения противовирусной терапии, включающий проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) на определение РНК вируса гепатита D в биоматериале пациента, полученном по окончании лечения, отличающийся тем, что в качестве биоматериала используют гепатобиоптат пациента, полученный в результате пункционной биопсии печени, к которому добавляют 0,5 мл лизирующего раствора и перемешивают пипетированием 3-4 раза, полученный образец помещают в термостат при 65°С на 10 минут, в процессе термостатирования образец перемешивают пипетированием 2 раза, после чего центрифугируют в течение 1 минуты при 13000 об/мин, для проведения ПЦР используют полученную из образца надосадочную жидкость и набор реагентов для качественного определения РНК вируса гепатита D в сыворотке крови; и при получении положительного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в гепатобиоптате, при наличии отрицательного результата ПЦР на РНК вируса гепатита D в сыворотке крови, прогнозируют наступление рецидива гепатита D в течение 4-24 недель после окончания лечения.