КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/198 A61P21/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к комбинации аминокислот с разветвленными боковыми цепями (BCAA) и аминокислоты L-аланина, родственным фармацевтическим композициям и пищевым добавкам для применения для предупреждения и/или лечения мышечной атрофии, связанной с патологическими или возрастными состояниями.

Предпосылки создания изобретения

Скелетная мышца представляет собой пластичный орган, который поддерживается несколькими путями, регулирующими клеточный и белковый обмен. Белки скелетных мышц постоянно и одновременно синтезируются и разрушаются. Количество белка в мышцах и поддержание массы скелетных мышц у зрелого индивидуума зависит от баланса чистого мышечного белка (net muscle protein balance-NBAL), разницы между синтезом белка скелетных мышц (muscle protein synthesis-MPS) и его разрушением (muscle protein breakdown-MPB). Факторы роста, гормоны, цитокины, питательные вещества и механическая нагрузка могут активировать клеточные сигнальные пути, которые способствуют синтезу или разрушению белка, что приводит к увеличению или потере, соответственно, массы скелетных мышц.

Мышцы важны не только для передвижения и поддержания осанки, но также являются крупнейшим резервуаром белка в организме и служат источником аминокислот, которые могут использоваться для выработки энергии и глюконеогенеза различными органами (включая сердце, печень и мозг) при катаболическом метаболизме.

При некоторых патологических состояниях и у пожилых людей может присутствовать повышенная активация протеолитических систем, в результате чего сократительные белки и органеллы удаляются из мышцы, что приводит к атрофии мышц. Чрезмерная потеря мышечной массы связана с плохим прогнозом при некоторых заболеваниях, включая миопатии и мышечные дистрофии, а также при системных заболеваниях, таких как рак, диабет, сепсис и сердечная недостаточность. Мышечная атрофия происходит системно у пожилых людей (состояние, известное как возрастная саркопения), как физиологическая реакция на голодание, недоедание или неподвижность (например, послеоперационная) и при патологических состояниях, таких как нервно-мышечные дегенеративные расстройства (например, мышечная дистрофия или атрофия), хроническое обструктивное заболевание легких, кахексия, связанная с раком, диабет, почечная недостаточность, сердечная недостаточность, синдром Кушинга, сепсис, ожоговые травмы, уремия, цирроз печени и СПИД.

Остро ощущается потребность в разработке композиций, эффективных для предупреждения и/или лечения мышечной атрофии.

Незаменимые аминокислоты представляют собой биомолекулы, которые не могут быть синтезированы человеческим организмом и поэтому должны поступать с пищей. Аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCAA) лейцин, валин и изолейцин составляют 35% незаменимых аминокислот в мышцах и являются наиболее интенсивно потребляемыми незаменимыми аминокислотами во время занятий спортом.

В ряде исследований было продемонстрировано, что BCAA служат субстратом для синтеза белка и выработки энергии и выполняют несколько метаболических и сигнальных функций, в частности, посредством активации сигнального пути mTOR.

Эти эффекты реализуются самими BCAA, особенно лейцином, и их метаболитами. Фактически, лейцин стимулирует синтез белка через сигнальный путь mTOR и фосфорилирование факторов инициации трансляции и рибосомных белков, в то время как ингибирующее действие на протеолиз в основном опосредуется HMG (β-гидрокси-β-метилбутират) и кетокислотами с разветвленной цепью.

Интересно отметить, что в отличие от большинства аминокислот, начальный этап катаболизма BCAA происходит в скелетных мышцах, а не в печени, из-за более высокой активности в этой ткани аминотрансферазы с разветвленной цепью (BCAT), первого фермента, ответственного за катаболический путь BCAA. Это дает уникальное преимущество питательному составу на основе BCAA по сравнению с другими в отношении воздействия на улучшение функции мышц и мозга, поскольку количество циркулирующих BCAA быстро увеличивается после приема белка и становится легко доступным для внепеченочных тканей.

В связи с вышеизложенным, добавки BCAA широко используются спортсменами в качестве эргогенной помощи для здоровья и анаболизма мышц, повышения физической работоспособности и наращивания скелетных мышц, а также для поддержания здоровья мышц и анаболизма.

L-аланин представляет собой глюконеогенную аминокислоту и один из продуктов катаболизма BCAA, который также используется в спортивных добавках. Например, Friliver® Sport Performance (Dompé Farmaceutici S.p.A.) представляет собой продаваемую на рынке пищевую добавку, содержащую как BCCA, так и L-аланин, и используется для улучшения спортивных результатов и снижения утомляемости.

Сущность изобретения

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили на моделях животных, что пероральное введение комбинации BCAA в сочетании с L-аланином особенно эффективно для предотвращения или лечения таких патологических или возрастных состояний, при которых происходит мышечная атрофия.

В частности, авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинация с L-аланином увеличивает абсорбцию BCAA плазмой и мышцами.

Соответственно, объектом настоящего изобретения является композиция, содержащая аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCCA) и L-аланин, для применения для предупреждения и/или лечения мышечной атрофии, связанной с патологическими состояниями, возрастными состояниями или недоеданием, неподвижностью или голоданием.

Определения

Как используется в настоящем документе, термин «аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCAA)» относится к аминокислотам L-изолейцину, L-лейцину и L-валину.

Фигуры

На фигуре 1 показана кривые «сила-частота» (Н*мм/кг), создаваемые крутящим моментом подошвенных мышц-сгибателей контрольных мышей (контроль), и мышей, подвергнутых разгрузке задних конечностей и получавших носитель (носитель), BCAA плюс L -аланин при массовом соотношении L-лейцин:L-изолейцин:L-валин:L-аланин 2:1:1:1 (BCAA+1Ala), 2:1:1:2 (BCAA+2Ala) или 2:1:1:3 (BCAA+3Ala), как описано в примере 1 (BCAA+2Ala * в сравнении с BCAA p<0,05; BCAA+2Ala ** в сравнении с BCAA p<0,01).

На фигуре 2 показано:

- на панели A площадь плазмы под кривыми (AUC) каждой меченой аминокислоты, рассчитанная для временного интервала 0-24 часа для мышей, получавших только BCAA (BCAA) или BCAA плюс различные количества L-аланина (смесь 1, 2 или 3), как показано на фигуре 2. Значения выражены как среднее значение±SEM от количества мышей, указанного в скобках. Статистически значимые различия были обнаружены с помощью дисперсионного анализа (ANOVA) и последующего анализа по Бонферрони post hoc в сравнении с ° BCAA (F>4,9; p<0,0001). Статистически значимые различия в сравнении с ^§ BCAA были обнаружены с помощью непарного t-критерия Стьюдента (0,0005<p<0,05).

- на панели B концентрация каждой меченой аминокислоты, измеренная в GC-мышце для каждой экспериментальной группы. Значения выражены как среднее значение±SEM от количества мышей, указанного в скобках. Статистически значимые различия были обнаружены с помощью дисперсионного анализа с последующим исследованием Бонферрони post hoc ° в сравнении с BCAA (F>5,1; p<0,001). Статистически значимые различия в сравнении с ^§ BCAA были обнаружены с помощью непарного t-критерия Стьюдента (0,002<p<0,04).

Описание изобретения

Как продемонстрировано в экспериментальном разделе, авторы настоящего изобретения обнаружили на животных моделях мышечной атрофии, что комбинация BCAA с L-аланином особенно эффективна для поддержания мышечной массы и функции при патологических состояниях, которые вызывают мышечная атрофия.

Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинация BCAA с L-аланином значительно увеличивает концентрацию BCAA в плазме.

Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCCA) L-лейцин, L-валин и L-изолейцин в комбинации с L-аланином, для применения для предупреждения, улучшения и/или лечения мышечной атрофии, связанного со следующим:

i) патологические состояния;

ii) возрастные состояния; или

iii) недоедание, неподвижность или голодание.

Предпочтительно, указанная мышечная атрофия связано с патологическим состоянием, выбранным из группы, включающей нервно-мышечные дегенеративные нарушения, такие как мышечная дистрофия или мышечная атрофия, хроническое обструктивное заболевание легких; кахексия, связанная с раком; диабет; почечная недостаточность; сердечная недостаточность; синдром Кушинга; сепсис; ожоговые травмы; уремия; цирроз печени и СПИД.

Предпочтительно, указанная мышечная атрофия связано с возрастным состоянием саркопенией.

Предпочтительно, в вышеуказанной композиции массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин составляет между 2:1:1 и 8:1:1.

Согласно предпочтительному варианту осуществлению изобретения L-лейцин, L-валин и L-изолейцин представлены в композиции в массовом соотношении 2:1:1.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин равно 4:1:1.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления изобретения массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин равно 8:1:1.

Предпочтительно, в композиции по изобретению массовое соотношение между BCAA и L-аланином составляет между 5:1 и 1:1, предпочтительно, оно составляет между 2,5:1 и 1,5:1, более предпочтительно, оно равно 2:1 или 1,6:1.

Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин:L-аланин равно 2:1:1:2.

Фактически, как показано в экспериментальном разделе и на фигуре 1, неожиданно при этом конкретном соотношении наблюдается особенно очевидный синергетический эффект между аминокислотами комбинации (BCAA+2Ala) со значительным улучшением нервно-мышечной функции по сравнению с контролем или комбинацией тех же аминокислот в различных весовых соотношениях (см. фигуру 1).

Согласно одному варианту осуществления композиция для применения согласно изобретению представляет собой фармацевтическую композицию.

Указанная фармацевтическая композиция, предпочтительно, содержит указанные BCAA и L-аланин, предпочтительно, в соотношениях, указанных выше, в смеси по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом или адъювантом. Особенно полезными могут быть адъюванты для составов, такие как, например, солюбилизирующие, диспергирующие, эмульгирующие и/или суспендирующие агенты.

Согласно альтернативному варианту осуществления композиция для применения согласно изобретению представляет собой пищевую добавку. Предпочтительно, указанная пищевая добавка содержит указанные BCAA и L-аланин, предпочтительно, в соотношениях, указанных выше, в смеси по меньшей мере с одним приемлемым носителем или вспомогательным веществом для использования человеком.

Предпочтительно, композиция по изобретению, предпочтительно, в качестве фармацевтической композиции или пищевой добавки, подходит для перорального введения.

Композиции для перорального введения по изобретению могут быть твердыми или жидкими. Предпочтительные составы по изобретению включают фармацевтические формы, выбранные из группы, включающей гранулят, таблетку, капсулу, шипучую таблетку, пероральную суспензию, эмульсию, порошок, раствор, гель или сироп. Наиболее предпочтительной фармацевтической формой согласно изобретению является гранулят для пероральной суспензии в жидкости, предпочтительно, в воде.

Предпочтительно, указанная композиция, предпочтительно, в качестве фармацевтической композиции или пищевой добавки, не содержит каких-либо других активных соединений, кроме BCAA и L-аланина.

Предпочтительно, указанная композиция, предпочтительно, в качестве фармацевтической композиции или пищевой добавки, составлена так, чтобы содержать следующее количество BCAA L-аланин на стандартную дозу: между 0,6 и 1 г, предпочтительно, 0,8 г L-лейцина, между 0,3 и 0,5 г, предпочтительно, 0,4 г L-изолейцина, между 0,3 и 0,5 г, предпочтительно, 0,4 г L-валина и от 0,4 г до 1,2 г, предпочтительно 0,8 г L-аланина.

Предпочтительно, указанная стандартная доза вводится два раза в день.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Все эксперименты проводились в соответствии принятыми в Италии рекомендациями по использованию лабораторных животных (D.L, 116/92) и Европейской директивой (2010/63/UE). Исследование относится к исследованиям, одобренными национальным этическим комитетом по вопросам благополучия животных Министерства здравоохранения Италии в том, что касается этических вопросов и соблюдения закона. Большинство экспериментальных процедур, используемых в настоящем исследовании, одобрены международными научными сетями, работающими на животных моделях нервно-мышечных заболеваний (http://www.treat-nmd.eu/research/preclinical/SOPs/).

Статистика

Все экспериментальные данные были выражены как среднее значение±стандартная ошибка среднего (SEM). Ряд статистических сравнений между группами был выполнен однофакторным дисперсионным анализом (ANOVA) с апостериорной коррекцией t-критерия Бонферрони, когда нулевая гипотеза была отвергнута (p<0,05), чтобы дать возможность лучше оценить внутри- и межгрупповую изменчивость и избежать ложноположительных результатов. При необходимости проводили однократные сравнения двух средних значений (модифицированные составы в сравнении с носителем или в сравнении со стандартным составом) по непарному t-критерию Стьюдента.

Пример 1

Доклиническая оценка на мышиной модели мышечной атрофии (HU мышь).

a) Лечение животных

Взрослых мышей-самцов C57BL 6J (в возрасте 12-14 недель) приобретали у компании Charles River (Calco, Италия). Мышей разделяли на 4 группы по 8 животных, одна контрольная группа и 3 группы с разгруженными задними конечностями (HU). В специальных клетках животных HU индивидуально подвешивали на 2 недели, используя метод, аналогичный тому, который использовался ранее для крыс HU (Pierno S, et al. J Physiol 2007;584:983-95]. Тонкую веревку одним концом прикрепляли с помощью пластыря к хвосту, а другим концом к верху клетки. Длину веревки регулировали так, чтобы животные могли свободно перемещаться на передних конечностях, при этом тело располагалось под углом 30-40º относительно горизонтальной плоскости. Все мыши получали воду без ограничений и получали стандартный корм для грызунов в течение 8 г в день. Пищу, оставшуюся на следующий день, взвешивали для расчета ежедневного потребления пищи.

Мышей разделяли на 4 группы по 8 животных:

1) Контрольная группа: мышей содержали индивидуально в контрольных условиях в течение 4 недель;

2) Группа носителя: мышей размещали отдельно на 4 недели, и разгружали задние конечности в течение последних 2 недель. В этот период они получили носитель (воду);

3) Группа BCAA: мышей размещали отдельно на 4 недели, они получали смесь BCAA (L-лейцин 328 мг/кг; L-изолейцин 164 мг/кг; L-валин 164 мг/кг) один раз в день в течение 4 недель, и разгружали задние конечности в течение последних 2 недель;

4) Группа BCAA+1Ala: мышей размещали отдельно на 4 недели, они получали смесь BCAA+1Ala (L-лейцин 328 мг/кг; L-изолейцин 164 мг/кг; L-валин 164 мг/кг плюс L-аланин 164 мг/кг) один раз в день в течение 4 недель, и разгружали задние конечности в течение последних 2 недель;

5) Группа BCAA+2Ala: мышей размещали отдельно на 4 недели, они получали смесь BCAA+2Ala (L-лейцин 328 мг/кг; L-изолейцин 164 мг/кг; L-валин 164 мг/кг плюс L-аланин 328 мг/кг) один раз в день в течение 4 недель, и разгружали задние конечности в течение последних 2 недель;

6) Группа BCAA+3Ala: мышей размещали отдельно на 4 недели, они получали смесь BCAA+3Ala (L-лейцин 328 мг/кг; L-изолейцин 164 мг/кг; L-валин 164 мг/кг плюс L-аланин 492 мг/кг) один раз в день в течение 4 недель, и разгружали задние конечности в течение последних 2 недель.

Каждый состав был приготовлен путем растворения порошка в фильтрованной водопроводной воде для получения конечной концентрации. Это было получено путем прямого приготовления, учитывая еженедельное количество воды, потребляемой каждой мышью, и массу ее тела. Продолжительность лечения составила 4 недели.

Животных с HU обследовали ежедневно в течение всего периода HU на предмет поведения, чистоты, состояния волос и глаз, потребления пищи и воды. Ежедневное потребление пищи измеряли как среднее значение количества коммерческой пищи (в граммах), съедаемой каждый день в течение 14 дней мышами, принадлежащими к группам CTRL и HU. Все мыши прошли протокол упражнений/лечения без каких-либо признаков стресса (отсутствие аппетита, аномальная потеря массы тела, выпадение волос, стереотипное или агрессивное поведение и т. д.) или макроскопических изменений жизненно важных функций. Никаких значительных изменений в массе тела животных, подвергшихся лечению или нет, не наблюдалось в течение всего экспериментального окна.

b) Эксперимент определения крутящего момента in vivo

Нервно-мышечную функцию in vivo оценивали у всех вышеуказанных групп животных путем измерения максимального изометрического крутящего момента, создаваемого группой подошвенных мышц-сгибателя (GC и камбаловидная мышца) в различные моменты времени у анестезированных мышей. Мышей анестезировали путем ингаляции (~4% изофлурана и 1,5% O₂ л/мин) и помещали на термостатируемый стол; анестезию поддерживали через носовой конус (~2% изофлурана и 1,5% O₂ л/мин). Правую заднюю конечность брили и обрабатывали в асептических условиях, и ступню помещали на педаль, соединенную с серводвигателем (модель 300C-LR; Aurora Scientific, Aurora, ON, Канада). Сокращения вызывали чрескожной электрической стимуляцией большеберцового нерва с помощью игольчатых электродов (Chalgren Enterprises), подключенных к стимулятору (модель 701B; Aurora Scientific), чтобы вызвать сокращение группы подошвенных мышц сгибателей. Ток регулировали от 30 до 50 мА до достижения максимального изометрического крутящего момента. Затем выполняли серию стимуляций с возрастающими частотами: 1, 10, 30, 50, 80, 100 и 120 Гц с последовательностью импульсов 200 мс. Данные анализировали с использованием программного обеспечения Dynamic Muscle Analysis (DMAv5,201; Aurora Scientific) для получения крутящего момента, который нормализовали по массе тела мыши. Нормализованные значения использовали для построения кривых крутящего момента от частоты.

Полученные результаты показаны на фигуре 1.

Пик мышечного сокращения достигался при частоте около 80-120 Гц. Между 10 и 60 Гц сила, регистрируемая в группе, аналогична, потому что на низких частотах создается меньшая сила, чем на более высоких частотах стимуляции, по этой причине нет значительной разницы между здоровым волокном (контроль) и больным волокном (носитель). На частотах выше 60 Гц мышца начинает сокращаться, достигая пика сокращения при 80-120 Гц. Именно на этом этапе начинают проявляться различия между здоровым и больным волокном. Кроме того, при таком же пульсе волокно, поврежденное неиспользованием, имеет меньшую прочность, чем здоровое волокно.

Как видно на фигуре 1, измерения крутящего момента у анестезированных животных выявили состояние неиспользования мышц (то есть слабость) у мышей с разгрузкой задних конечностей по сравнению с малоподвижной группой. Кроме того, данные ясно показывают, что введение BCAA и L-аланина усиливает нервно-мышечную функцию подошвенной мышцы-сгибателя (в основном GC и камбаловидной мышцы). Этот эффект на удивление выше в группе BCAA+2Ala по сравнению со всеми другими группами. Эта группа показывает значительно более высокие значения крутящего момента и частоты по сравнению с другой обработанной группой. В частности, максимальное значение крутящего момента, создаваемого при 120 Гц, практически перекрывало значение для группы малоподвижных мышей (385±7 в сравнении с 366±5 Н*мм/кг; n=8).

Пример 2

Фармакокинетическое исследование

Была проведена предварительная фармакокинетическая оценка распределения исследуемых аминокислот в плазме и скелетных мышцах мышей C57BL/6J дикого типа (WT).

Для исследования PK использовали в общей сложности 24 (n=6 мышей в группе) 10-недельных самцов мышей линии WT C57BL/6J (Harlan, Италия). После получения от поставщика всех мышей подвергали медицинскому обследованию и принятию, и затем помещали в подходящие клетки (максимум 5 мышей на клетку) и давали возможность акклиматизироваться к местным условиям содержания в течение приблизительно 5 дней. Животных обычно содержали в следующих условиях, за исключением коротких периодов времени, когда экспериментальные процедуры требовали иного. Мышей помещали в отдельную эксклюзивную комнату с кондиционером, обеспечивающую минимум 15 воздухообменов в час. Контроль окружающей среды устанавливали для поддержания температуры в диапазоне от 22 до 24ºC и относительной влажности в диапазоне от 50 до 60% с приблизительно 12-часовым световым и 12-часовым циклом темноты, который контролировался автоматически. Пища (стандартная диета GLP, Mucedola, Settimo Milanese, MI, Италия) и вода были доступны в неограниченном количестве на протяжении всего исследования. В день лечения всех животных взвешивали (с массой тела от 25 до 30 г) и затем случайным образом распределяли в каждую экспериментальную группу, однозначно идентифицируя с помощью цветного спрея на спине перед экспериментом. Клинические признаки контролировали через регулярные промежутки времени на протяжении всего исследования, чтобы оценить какую-либо реакцию на лечение. В ночь перед введением меченых аминокислот животных не кормили; корм повторно помещали в клетки через 3 часа после добавления аминокислот.

Мышей разделяли на четыре экспериментальные группы, перорально вводили смесь одних BCAA, меченных ¹³C6 и ¹⁵N (BCAA), или в комбинации с различными количествами L-аланина (смесь 1, смесь 2 и смесь 3) с целью оценить влияние добавки L-аланина на фармакокинетические параметры BCAA. Кроме того, оценивалось содержание аминокислот в мышцах GC.

Детально животных лечили следующими аминокислотами:

Группа 1 (группа BCAA): L-лейцин-¹³C6, ¹⁵N: 328 мг/кг; L-изолейцин-¹³C6, ¹⁵N: 164 мг/кг; L-валин-¹³C5, ¹⁵N: 164 мг/кг;

Группа 2 (группа смеси 1): L-лейцин-¹³C6, ¹⁵N: 328 мг/кг; L-изолейцин-¹³C6, ¹⁵N: 164 мг/кг; L-валин-¹³C5, ¹⁵N: 164 мг/кг, L-аланин: 164 мг/кг;

Группа 3 (группа смеси 2): L-лейцин-¹³C6, ¹⁵N: 328 мг/кг; L-изолейцин-¹³C6, ¹⁵N: 164 мг/кг; L-валин-¹³C5, ¹⁵N: 164 мг/кг, L-аланин: 328 мг/кг;

Группа 4 (группа смеси 3): L-лейцин-¹³C6, ¹⁵N: 328 мг/кг; L-изолейцин-¹³C6, ¹⁵N: 164 мг/кг; L-валин-¹³C5, ¹⁵N: 164 мг/кг, L-аланин 492 мг/кг.

Составы получали растворением порошка смеси аминокислот в 1,5% мас./мас. водном растворе лимонной кислоты. Животных обрабатывали с помощью разового перорального зонда в дозе 15 мл/кг в качестве вводимого объема. Образцы крови (50-60 мкл) собирали через 15 минут, 30 минут, 1 час, 3 часа, 8 часов, 24 часа в гепаринизированные центрифужные пробирки (Heparin Vister 5000 IU/ml), осторожно перемешивали и сразу помещали на лед. Затем пробирки центрифугировали (15 мин, 3500×g, 4ºC), полученную плазму собирали и переносили в пробирки с особой меткой и замораживали при температуре -80ºC до последующего анализа PK. В конце исследования мышей умерщвляли путем обескровливания под глубокой анестезией изофлураном (система EZ-B800, предоставленная WPI, США). В процессе умерщвления брали икроножную мышцу (GC), промывали физиологическим раствором, сушили на промокательной бумаге и гомогенизировали в физиологическом растворе с использованием пробирок CK14 (Precellys® 0,5 мл Soft Tissue Homogenizing Lysing Kit, Cayman Chemical, MI, США) и гомогенизатора Bertin с разведением 1/5 мас./об. (г/мл). После гомогенизации образцы центрифугировали. В качестве заменителя для построения калибровочной кривой для анализа аминокислот от 25 до 2000 мкг/мл использовали человеческий альбумин, тогда как некоторые образцы дополнительно разбавляли 1:5 в буфере. Образцы как плазмы, так и мышц анализировали путем очистки и дериватизации с использованием набора для аминокислотного анализ EZfaast^TM (Phenomenex, Castel Maggiore, BO, Italy) и анализировали с помощью UPLC-MSMS (модель UPLC Shimadzu LC-20AD, оснащенная масс-спектрометром ABSciex API 4500Q).

Площадь плазмы под кривыми (AUC) рассчитывали для интервала времени 0-24 ч и они указаны на фигуре 2, панель A.

Удивительно, но все группы, получавшие L-аланин, показали значительное увеличение концентрации в плазме BCAA. В частности, воздействие BCAA в плазме в группе, получавшей L-аланин, было более чем вдвое по сравнению с группой, получавшей BCAA.

Эти результаты показывают, что L-аланин способствует увеличению абсорбции BCAA.

Также в процессе умерщвления (24 ч) брали GC-мышцы и анализировали на содержание аминокислот. Концентрации меченых BCAA указаны на фигуре 1B.

Эти данные показывают, что статистически значимое увеличение мышечного содержания BCAA было обнаружено для всех групп, обработанных ALA, по сравнению с BCAA. В частности, группа смеси 2 показала самые высокие концентрации каждого BCAA по сравнению со стандартным составом (фигура 2, панель B).

Эти данные демонстрируют, что соотношение BCAA/ALA сильно влияет на распределение BCAA в мышечной ткани, таким образом обеспечивая правдоподобное обоснование специфических эффектов на функцию мышц, наблюдаемых на животной модели в примере 1.

Настоящее изобретение относится к применению композиции, содержащей аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCCA): L-лейцин, L-валин и L-изолейцин в комбинации с L-аланином, для предупреждения, улучшения и/или лечения мышечной атрофии, связанной со следующим: iv) патологические состояния; v) возрастные состояния или vi) недоедание, неподвижность или голодание, где массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин:L-аланин составляет 2:1:1:2. Настоящее изобретение обеспечивает синергетический эффект между комбинацией L-лейцина, L-валина и L-изолейцина с L-аланином в соотношении 2:1:1:2, со значительным улучшением нервно-мышечной функции по сравнению с контролем или комбинацией тех же аминокислот в различных весовых соотношениях. 7 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

1. Применение композиции, содержащей аминокислоты с разветвленными боковыми цепями (BCCA): L-лейцин, L-валин и L-изолейцин в комбинации с L-аланином, для предупреждения, улучшения и/или лечения мышечной атрофии, связанной со следующим:

iv) патологические состояния;

v) возрастные состояния; или

vi) недоедание, неподвижность или голодание,

где массовое соотношение L-лейцин:L-валин:L-изолейцин:L-аланин составляет 2:1:1:2.

2. Применение по п.1, где указанное мышечное истощение связано с патологическим состоянием, выбранным из группы, включающей нервно-мышечные дегенеративные нарушения, такие как мышечная дистрофия или мышечная атрофия; хроническое обструктивное заболевание легких; кахексия, связанная с раком; диабет; почечная недостаточность; сердечная недостаточность; синдром Кушинга; сепсис; ожоговые травмы; уремия; цирроз печени и СПИД.

3. Применение по п.1, где указанное мышечное истощение связано с возрастным состоянием саркопенией.

4. Применение по пп.1-3, где композиция является фармацевтической композицией.

5. Применение по пп.1-4 для перорального введения.

6. Применение по пп.1-5, где композиция содержит на стандартную дозу: между 0,6 и 1 г L-лейцина, между 0,3 и 0,5 г L-изолейцина, между 0,3 и 0,5 г L-валина и от 0,4 до 1,2 г L-аланина.

7. Применение по пп.1-6, где композиция содержит на стандартную дозу: 0,8 г L-лейцина, и/или 0,4 г L-изолейцина, и/или 0,4 г L-валина, и/или 0,8 г L-аланина.

8. Применение по п.6 или 7, где указанная стандартная доза вводится два раза в день.