Способ профилактики эшерихиоза у поросят Российский патент 2024 года по МПК A61D99/00 A61K39/108 A61K39/116 

Изобретение относится к области ветеринарии, касается способа профилактики колибактериоза поросят.

Колибактериоз свиней (эшерихиоз) - остро протекающая инфекционная болезнь поросят, характеризующаяся диареей, явлениями токсемии, реже септицемией, и сопровождающаяся высокой смертностью.

Известен способ профилактики колибактериоза поросят, включающий иммунизацию супоросных свиноматок вакциной против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ- и ТС-анатоксины) [Наставление по применению вакцины против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ- и ТС-анатоксины). / Утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 20.06.1997 г] внутримышечно за полтора месяца до опороса с интервалом 10-15 дней, при этом первая и вторая доза составляет -5 см³.

Известен способ профилактики колибактериоза, включающий иммунизацию поросят вакциной против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС-анатоксины) внутримышечно перед отъемом с интервалом 10-15 дней; при этом первая доза составляет 1 см³, вторая - 1,5 см³ [Наставление по применению вакцины против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ- и ТС-анатоксины). / Утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 20.06.1997 г.].

Также установлено, что эффективными средствами специфической профилактики эшерихиоза у животных являются вакцины, содержащие в своем составе инактивированные экзотоксины патогенных Escherichia coli (Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных / М.К. Пирожков // Дисс. док. вет. наук. - Москва. 2002. - 298 с.). В настоящее время есть исследования по использованию биопрепаратов, которые включают сразу три вида токсинов патогенных эшерихий: термолабильный (LT) и термостабильный (ST) и шигаподобный (STX) токсины, как в чистом виде, так и в сочетании с адъювантами (Караев Я.М. Иммуно-генные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. … канд. вет. наук / Я.М. Караев. - Краснодар: КубГАУ, 2009. - 132 с.; Тищенко А.С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. … канд. вет. наук / А.С. Тищенко. - Краснодар: КубГАУ, 2011. - 124 с.). Однако, этими исследованиями было установлено, что эшерихиозный анатоксин стимулирует клеточные и гуморальные звенья иммунитета в первые сутки после введения препаратов, а использование адъювантов хоть и усиливает иммунный ответ, но на непродолжительное время. Учитывая данные обстоятельства, необходимо искать новые способы повышения иммуногенной активности вакцинных препаратов на основе инактивированных токсинов кишечной палочки.

Наиболее близким по технической сущности является способ профилактики эшерихиоза у поросят, включающий использование вакцины против эшерихиоза содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты, двукратную иммунизацию поросят этой вакциной внутримышечно в область внутренней поверхности бедра - первый раз в дозе не более 0,25 мл, а второй - в дозе не более 0,5 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной свиноматок от которых получены поросята: первый и второй разы - в дозе не более 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины (патент РФ №2766549, кл. A61K 39/39, 2022 г.).

Недостатком известного технического решения является недостаточная эффективность специфической профилактики эшерихиоза у поросят.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности специфической профилактики эшерихиоза у поросят и расширение ассортимента препаратов для профилактики этого заболевания..

Технический результат достигается тем, что в способе профилактики эшерихиоза у поросят, включающем использование вакцины против эшерихиоза содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты, двукратную иммунизацию поросят этой вакциной внутримышечно в область внутренней поверхности бедра - первый раз в дозе не более 0,25 мл, а второй - в дозе не более 0,5 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной свиноматок от которых получены поросята: первый и второй разы - в дозе не более 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины отличающийся тем, что в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию Al(OH)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное крем-нийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло «М» - 98,5%), при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(OH)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100,

при этом первую иммунизацию поросят проводили в возрасте 10-12 дней и вторую - за 5 дней до их отъема от свиноматок, которым первую иммунизацию проводили за 40 дней до опороса, а вторую - за 15 дней до опороса.

Новизна технического решения состоит в том, что за счет использования бесклеточных культур эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, инактивированных формалином полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации с адъювантами, в качестве которых используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, обеспечивается повышение иммуногенных свойств вакцины и эффективности профилактики эшерихиоза у поросят, а также безвредность биопрепарата за счет отсутствия после применения, поствакцинальных реакций.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.

Предложенный способ профилактики эшерихиоза у поросят соответствует критерию «промышленная применимость», поскольку может быть широко использован в свиноводческих комплексах.

Способ профилактики эшерихиоза у поросят осуществляют следующим образом.

Для профилактики используют вакцину против эшерихиоза содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты. В качестве последних используют 2%-ную суспензию Al(OH)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5%), при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(OH)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100.

Этой вакциной проводят двукратную иммунизацию поросят внутримышечно в область внутренней поверхности бедра - первый раз в возрасте 10-12 дней в дозе не более 0,25 мл, а второй - за 5 дней до их отъема от свиноматок в дозе не более 0,5 мл. Также проводят двукратную иммунизацию этой же вакциной свиноматок, от которых получены поросята: первый раз за 40 дней до опороса и второй раз за 15 дней до опороса - в дозе не более 5 мл внутримышечно в область основания ушной. Режим вакцинации обусловлен тем, что вакцина с гидроокисью алюминия и масляным адъювантом обладает депонирующим действием, антитела накапливаются постепенно, поэтому первая вакцинация свиноматок проводится за 40 дней до опороса, т.к. этого времени достаточно для накопления антител, с целью обеспечения профилактики инфекционного заболевания.

Периоды двукратной иммунизации супоросных свиноматок обусловлены тем, что на последней стадии беременности за 40 дней до опороса происходит образование молозива, которое необходимо наполнить антителами, путем вакцинации, а проводить иммунизацию раньше 40 дней до опороса нет смысла, т.к. еще не образовалось молозиво. Вторая иммунизация за 15 дней - проводится с целью дополнения молозива антителами для повышения иммунного статуса организма свиноматки перед опоросом, что положительно влияет на плод, также, повышая его иммунитет.

Что касается дозы 5 мл для свиноматок, то она была подобрана опытным путем, если доза будет меньше 5 мл, то не будет вырабатываться достаточное количество антител, если больше, то будет вызывать местную реакцию и экономически нецелесообразно.

Внутримышечное введение препарата в область основания ушной раковины объясняется тем, что препарат необходимо ввести в мышцу, в которую можно попасть только в области основания ушной раковины, поскольку все туловище животного покрыто слоем жира.

Двукратное введение вакцины поросятам проводят в соответствии со следующими периодами:

- в возрасте 10-12 дней, так как в этот период содержание антител в молозиве заканчивается и для поддержания иммунитета поросят, необходимо ввести в их организм вакцину в количестве 0,25 мл, которое достаточно для выработки необходимого уровня антител, если взять меньшее количество вакцины, то не будет обеспечиваться требуемый уровень антител, а при большем - наблюдается местная реакция в виде припухлостей и раздражений;

- введение препарата за 5 дней до отъема поросят от свиноматки обусловлено тем, что антитела, которые были получены поросятами с молозивом - израсходованы и необходимо формировать собственные антитела, для поддержания иммунитета. Введение в организм вакцину в количестве 0,5 мл, определено опытным путем и является достаточным для выработки необходимого уровня собственных антител, если взять меньшее количество вакцины, то не будет обеспечиваться требуемый уровень антител, а при большем - наблюдается местная реакция в виде припухлостей и раздражений. Вакцинацию осуществляют внутримышечно в область внутренней поверхности бедра, поскольку, у поросят эта область туловища не имеет большого количества кровеносных сосудов.

Пример конкретного осуществления способа профилактики эшерихиоза у поросят

Для обоснования эффективности профилактики, в хозяйстве длительно неблагополучном по эшерихиозу поросят сформировали 5 групп супоросных свиноматок по 5 животных в каждой.

В первой группе свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали предлагаемой вакциной (ВЭ+ГОА+МА). Свиноматок иммунизировали первый раз за 40 дней до опороса в дозе 5 мл, второй раз - за 15 дней в дозе 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины. Поросят иммунизировали дважды первый раз в возрасте 10-12 дней в дозе 0,25 мл, а второй за 5 дней до отъема поросят от свиноматок в дозе 0,5 мл внутримышечно в области внутренней поверхности бедра.

Вторую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с гидратом окиси алюминия (ВЭ+ГОА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Третью группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с масляным адъювантом (ВЭ+МА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Четвертую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной против эшерихиоза без адъювантов (ВЭ) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Пятая группа свиноматок была контрольной, они и полученные от них поросята не иммунизировались.

За поросятами в течение 90 дней вели клиническое наблюдение, учитывали количество заболевших и павших животных. Результаты проведенного исследования представлены в таблице 1.

Из материалов таблицы 1 видно, что в 1-й группе от 5 свиноматок было 5 получено 55 поросят, из которых заболело 8 голов и пало 2. Заболеваемость по группе составила 14,5%, смертность 3,6%. Следовательно, профилактическая эффективность заявляемого способа составила 85,5% при сохранности поросят в группе 96,4%.

Во 2-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с гидратом окиси алюминия, родилось 54 поросенка, из которых 12 заболело и 5 пало. Заболеваемость по этой группе составила 22,2%, смертность 9,2%, профилактическая эффективность 77,8%, при сохранности 90,8%.

В 3-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с масляным адъювантом, было получено 53 поросенка, из них 11 заболело, 4 пало. Заболеваемость составила 20,7%, смертность 7,5%, профилактическая эффективность 79,3%, а сохранность 92,5%.

В четвертой группе, где свиноматки вакцинировались вакциной без адъювантов, родилось 55 поросят, из них 19 заболело, 8 пало. Заболеваемость составила 34,5%, смертность 14,5%, профилактическая эффективность 65,5%, а сохранность 85,5%.

В 5-й группе было получено 53 поросенка, из них 27 заболело, 11 пало. Заболеваемость составила 50,9%, смертность 20,7%, сохранность 79,3%.

Следовательно, применение вакцины против эшерихиоза в заявляемом способе позволило более эффективно профилактировать заболевание поросят с эшерихиозной инфекцией. При этом заболеваемость снизилась по сравнению с аналогом на 7,7%, аналогом 2 на 6,2%, аналогом 3 на 20%, а в сравнении с группой (контроль) на 36,4%, при этом падеж сократился в 1,4-5,5 раза, что свидетельствует о высокой эффективности заявляемой вакцины.

Иммуногенные свойства эшерихиозной вакцины изучали у поросят, полученных от вакцинированных супоросных свиноматок. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.

Влияние применения вакцин на титр антител у поросят представлены в таблице 2.

Из материалов таблицы 1 видно, что иммунизация свиноматок и поросят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции. Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у поросят, которых у животных первой группы в 1,2-9 раз больше, чем у животных из остальных опытных групп.

Эффективность использования вакцины с определенным режимом в способе профилактики эшерехиоза у поросят зависит от свойств подобранных эпизоотических штаммов Escherichia coli, последовательности приготовления и процентного соотношения компонентов входящий в ее состав.

Количественные значения ввода адъювантов подобраны экспериментальным путем, при этом учитывалась иммуногенная активность вакцины. При вводе в объеме 2%-ной суспензии Al(OH)₃ 19% и масляного адъюванта 49% иммуногенная активность повышалась, но все же была не достаточной для длительного сохранения поствакцинального иммунитета. При вводе адъювантов в объеме 20% и 50% соответственно, увеличения продукции специфических антител более значения, чем при их вводе в объеме 2%-ной суспензии Al(OH)₃ 21% и масляного адъюванта 50% не происходило, а экономические затраты возрастали.

Вакцину для использования в способе профилактики эшерихиоза поросят производят следующим образом.

Предварительно эпизоотические штаммы Е. coli изучались на наличие у них генов термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Для этого использовали тест-системы «АмплиСенс E. coli-tox» (Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии МЗ РФ, г. Москва). Подтверждение токсинообразования на искусственной питательной среде осуществляли с помощью биотеста на инфузориях-стилонихиях по патенту РФ на изобретение №2262529 от 20.10.2005. Отобранные штаммы по отдельности засевали в пробирки с 10 мл питательного бульона для накопления токсинов кишечной палочки, в состав которого входят кислотный гидролизат крови (9-11%), аутолизат пекарских дрожжей (9-11%), пептон (0,9-1,1%), нария хлорид (0,4-0,6%), двузамещенный фосфорнокислый натрий (0,05-0,15%) и калия хлорид (0,01-0,03%) (патент РФ на изобретение №2342425 от 27.12.2008). После чего пробирки помещали в термостат и культивировали при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносили в колбы с 200-300 мл аналогичного питательного бульона и инкубировали при 37°С. Культуры продуцирующие термолабильный и термостабильный инкубировали 6 суток, а продуцирующие шигаподобный токсин - 7 суток. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивали. Перед окончанием инкубирования из каждой колбы отобрали по 10 мл культуральной жидкости, центрифугировали при 10 тыс. об./мин в течение 30 мин и определяли методом биотестирования на инфузориях наличие токсинов.

При наличии токсинов в культуры добавляли формалин до концентрации 0,3-0,4% и инактивировали в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием. После завершения инактивации, равные объемы культур объединяли и с помощью стерилизующей фильтрации отделили микробную массу от среды культивирования, получая, таким образом, бесклеточную культуральную среду Е. coli (эшерихиозный токсо-идный компонент). Далее в нее поочередно вносили 2%-ную суспензию Al(OH)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1 - димети-кон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 -98,5% (патент РФ №2510845)) при следующем соотношении компонентов, об %:

2%-ная суспензия АЦОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100.

Полученную вакцину фасуют по 100 мл в стерильные флаконы, укупоривают и проверяют на стерильность и безвредность. По внешнему виду готовый препарат представляет собой прозрачную опалесцирующую жидкость соломенного цвета с выпадающим беловато-сероватым осадком на дне, который при встряхивании флакона легко разбивается, образуя равномерную взвесь. Срок хранения в сухом и темном помещении при температуре 4-10°С - 1 год.

Использование вакцины в заявляемом способе профилактики позволяет обеспечить защиту поросят от эшерихиозной инфекции продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).

Изобретение относится к области ветеринарии. Описан способ профилактики эшерихиоза у поросят, включающий использование вакцины против эшерихиоза, содержащей бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli и адъюванты Al(OH)₃ и масляный адъювант. Первую иммунизацию поросят проводят в возрасте 10-12 дней и вторую - за 5 дней до отъема их от свиноматок, которым первую иммунизацию проводят за 40 дней до опороса, а вторую - за 15 дней до опороса. Технический результат заключается в повышении эффективности специфической профилактики эшерихиоза у поросят и расширении ассортимента препаратов для профилактики этого заболевания. 2 табл., 1 пр.

Способ профилактики эшерихиоза у поросят, включающий использование вакцины против эшерихиоза, содержащей бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенных поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъювантов, двукратную иммунизацию поросят этой вакциной внутримышечно в область внутренней поверхности бедра - первый раз в дозе не более 0,25 мл, а второй - в дозе не более 0,5 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной свиноматок, от которых получены поросята, в дозе не более 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины, отличающийся тем, что в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию Al(OH)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора - биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло «М» - 98,5%, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100,

при этом первую иммунизацию поросят проводят в возрасте 10-12 дней и вторую - за 5 дней до их отъема от свиноматок, которым первую иммунизацию проводят за 40 дней до опороса, а вторую - за 15 дней до опороса.