Способ профилактики эшерихиоза у телят Российский патент 2024 года по МПК A61K39/108 

Изобретение относится к области ветеринарии, касается способа профилактики колибактериоза телят.

Известен способ профилактики колибактериоза, включающий иммунизацию телят вакциной против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ и ТС-анатоксины) внутримышечно перед отъемом с интервалом 10-15 дней; при этом первая доза составляет 1 см³, вторая - 1,5 см³ [Наставление по применению вакцины против эшерихиоза животных (Коли-Вак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ- и ТС-анатоксины)/Утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 20.06.1997 г.].

Установлено, что эффективными средствами специфической профилактики эшерихиоза у животных являются вакцины, содержащие в своем составе инактивированные экзотоксины патогенных Escherichia coli (Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных/М.К. Пирожков//Дисс.док. вет.наук. - Москва, 2002. - 298 с).

В настоящее время есть исследования по использованию биопрепаратов, которые включают сразу три вида токсинов патогенных эшерихий: термолабильный (LT) и термостабильный (ST) и шигагюдобный (STX) токсины, как в чистом виде, так и в сочетании с адъювантами (Караев Я.М. Иммуно-генные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина: дис.… канд. вет.наук/Я.М. Караев. - Краснодар: КубГАУ, 2009. - 132 с.; Тищенко А.С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина: дис.канд. вет. наук/А.С. Тищенко. - Краснодар: КубГАУ, 2011. - 124 с).

Однако этими исследованиями было установлено, что эшерихиозный анатоксин стимулирует клеточные и гуморальные звенья иммунитета в первые сутки после введения препаратов, а использование адъювантов хоть и усиливает иммунный ответ, но на непродолжительное время. Учитывая данные обстоятельства, необходимо искать новые способы повышения иммуногенной активности вакцинных препаратов на основе инактивированных токсинов кишечной палочки.

Известно техническое решение (патент №2432174 от 27.10.2011, МПК А61К 39/108, C12N 1/20, А61Р 1/00), в котором, отбирают и раздельно культивируют эпизоотические штаммы Escherichia coli, обладающие генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием. Инактивацию культур проводят путем добавления формалина до концентрации не более 0,4%, при температуре 37°С в течение 14 суток с ежедневным двукратным перемешиванием. После чего отбирают и смешивают культуры в равных соотношениях, отделяют бактериальную массу с помощью стерилизующей фильтрации и получают комплексный препарат.

Известен способ профилактики эшерихиоза у телят, включающий использование вакцины против эшерихиоза содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты, двукратную иммунизацию телят этой вакциной подкожно в область верхней трети шеи в дозе не более 2 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной стельным коровам, от которых получены телята в дозе не более 10 мл также подкожно в область верхней трети шеи (патент РФ №2766249, кл. А61К 39/00, 2022 г. - прототип).

Недостатком известного технического решения является недостаточная эффективность специфической профилактики эшерихиоза у телят.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности специфической профилактики эшерихиоза у телят и расширение ассортимента препаратов для профилактики этого заболевания. Технический результат достигается тем, что в способе профилактики эшерихиоза у телят, включающем использование вакцины против эшерихиоза, содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильных, термостабильных и шигаподобных токсинов Escherichia coli, полученных путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты, двукратную иммунизацию телят этой вакциной подкожно в область верхней трети шеи - в первый и во второй разы в дозе 2 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной стельных коров, от которых получены телята: первый и второй разы - в дозе 10 мл подкожно в область верхней трети шеи, причем в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора - биологически инертного кремнийорганического соединения цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикона в количестве 1,5% и масляной основы - вакцинного масла "М" в количестве 98,5%, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, состоящая из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100,

при этом первую иммунизацию телят проводят в возрасте 13-15 дней и вторую - в возрасте 19-21 день, а стельным коровам первую иммунизацию проводили за 45 дней до отела, а вторую - за 15 дней до отела.

Новизна технического решения состоит в том, что за счет совместного использования бесклеточных культур эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, инактивированных формалином полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и адъювантов, в качестве которых используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, обеспечивается повышение иммуногенных свойств вакцины и эффективности профилактики эшерихиоза у телят, а также безвредность биопрепарата за счет отсутствия после применения, поствакцинальных реакций.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.

Предложенный способ профилактики эшерихиоза у телят соответствует критерию «промышленная применимость», поскольку может быть широко использован в животноводческих комплексах.

Способ профилактики эшерихиоза у телят осуществляют следующим образом

Для профилактики используют вакцину против эшерихиоза содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli, полученные путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенных поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъювантов. В качестве последних используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5%), при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100

Стельных коров иммунизируют первый раз за 45 дней, а второй раз за 15 дней до отела в дозе не более 10 мл соответственно, телят полученных от этих коров также прививают дважды, первый раз в возрасте 13-15 дней, а второй через 19-21 день в дозе не более 2 мл соответственно.

Периоды двукратной иммунизации стельных коров обусловлены тем, что на последней стадии беременности за 45 дней до отела происходит образование молозива, которое необходимо наполнить антителами, путем вакцинации, а проводить иммунизацию раньше 45 дней до отела нет смысла, т.к. еще не образовалось молозиво. Вторая иммунизация за 15 дней - проводится с целью дополнения молозива антителами для повышения иммунного статуса организма стельной коровы перед отелом, что положительно влияет на плод, также, повышая его иммунитет.

Что касается дозы 10 мл для стельных коров, то они были подобраны опытным путем, если эти дозы будут меньше, то не будет вырабатываться достаточное количество антител, если больше, то будет вызывать местную реакцию и экономически нецелесообразно.

Двукратное введение вакцины телятам проводят в соответствии со следующими периодами:

- в возрасте 13-15 дней, так как в этот период содержание антител в молозиве заканчивается и для поддержания иммунитета телят, необходимо ввести в их организм вакцину в количестве 2 мл, которое достаточно для выработки необходимого уровня антител, если взять меньшее количество вакцины, то не будет обеспечиваться требуемый уровень антител, а при большем - наблюдается местная реакция в виде припухлостей и раздражений;

- введение телятам через 19-21 день обусловлено тем, что антитела, которые были получены телятами с молозивом - израсходованы и необходимо формировать собственные антитела, для поддержания иммунитета. Введение в организм вакцины в количестве 2 мл, определено опытным путем и является достаточным для выработки необходимого уровня собственных антител, если взять меньшее количество вакцины, то не будет обеспечиваться требуемый уровень антител, а при большем - наблюдается местная реакция в виде припухлостей и раздражений.

Сроки и дозы вакцинации обусловлены тем, что вакцина с гидроокисью алюминия и масляным адъювантом обладает депонирующим действием, антитела накапливаются постепенно, поэтому первая вакцинация стельных коров проводится за 45 дней до отела, т.к. этого времени достаточно для накопления антител, с целью обеспечения профилактики инфекционного заболевания.

Пример конкретного осуществления способа профилактики эшерихиоза у телят.

В хозяйстве Краснодарского края, неблагополучном по эшерихиозу телят, по данным ветеринарной лаборатории этого хозяйства, диарею у молодняка крупного рогатого скота в данном хозяйстве вызывают патогенные штаммы кишечной палочки. Для подтверждения эффективности заявляемого способа профилактики было сформировано 3 группы стельных коров по 25 голов в каждой.

Первую группу коров иммунизировали заявляемой вакциной первый раз за 45 дней до отела в дозе 10 мл, второй раз за 15 дней до отела в дозе 10 мл. Полученных от этих коров телят также иммунизировали заявляемой вакциной первый раз в возрасте 13-15 дней в дозе 2 мл, а второй через 19-21 день в дозе 2 мл соответственно. Вакцину вводили подкожно в область верхней трети шеи.

Вторую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с гидратом окиси алюминия по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Третью группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с масляным адъювантом по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Четвертую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной без адъювантов по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Пятая группа коров была контрольной, их и полученных от них телята не иммунизировались.

Эффективность заявляемого способа оценивали по достижению телятами 3-месячного возраста и перевода их другой корпус на групповое содержание. Критериями оценки являлись заболеваемость и летальность. Результаты опыта отражены в таблице 1.

По данным таблицы видно, что в первой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 3 телят, при этом диарею у них удалось купировать в течение 3 дней, а на 5 день телята полностью выздоровели. Таким образом, профилактическая эффективность вакцины, используемая в заявляемом способе составила 88%, сохранность 100%.

Во 2-ой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 4 телят, причем у одного теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животного. Профилактическая эффективность аналога составила 74%, сохранность 96%.

В третьей группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 5 телят, у 1 теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Эффективность аналога составила 80%, сохранность 96%.

В четвертой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 9 телят, из них у троих телят она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Профилактическая эффективность прототипа составила 65%, сохранность 88%.

В контрольной группе заболеваемость телят острой кишечной инфекцией составила 68%, а сохранность 72%.

Иммуногенные свойства используемой эшерихиозной вакцины в заявляемом способе профилактики эшерихиоза у телят изучали по телятам, полученных от вакцинированных стельных коров. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.

Влияние применения вакцин на титр антител у телят представлены в таблице 2.

По данным таблицы 2 видно, что иммунизация коров и телят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции.

Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у телят, которых у животных первой группы в 1,1-1,8 раз больше, чем у животных из второй и третьей группы, и 1,5-7,3 раза больше, чем у животных четвертой и пятой групп.

Эффективность использования вакцины в способе профилактики эшерехиоза у телят зависит от свойств подобранных эпизоотических штаммов Escherichia coli, последовательности приготовления и процентного соотношения компонентов входящий в ее состав.

Количественные значения ввода адъювантов подобраны экспериментальным путем, при этом учитывалась иммуногенная активность вакцины. При вводе в объеме 2%-ной суспензии Al(ОН)₃ 19% и масляного адъюванта 49% иммуногенная активность повышалась, но все же была не достаточной для длительного сохранения поствакцинального иммунитета. При вводе адъювантов в объеме 20% и 50% соответственно, увеличения продукции специфических антител более значения, чем при их вводе в объеме 2%-ной суспензии Al(ОН)₃ 21% и масляного адъюванта 50% не происходило, а экономические затраты возрастали.

Вакцину для использования в способе профилактики эшерихиоза телят производят следующим образом.

Предварительно эпизоотические штаммы Е. coli изучались на наличие у них генов термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Для этого использовали тест-системы «АмплиСенс E.coli-tox» (Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии М3 РФ, г. Москва). Подтверждение токсинообразования на искусственной питательной среде осуществляли с помощью биотеста на инфузориях-стилонихиях по патенту РФ на изобретение №2262529 от 20.10.2005. Отобранные штаммы по отдельности засевали в пробирки с 10 мл питательного бульона для накопления токсинов кишечной палочки, в состав которого входят кислотный гидролизат крови (9-11%), аутолизат пекарских дрожжей (9-11%), пептон (0,9-1,1%)), нария хлорид (0,4-0,6%)), двузамещенный фосфорнокислый натрий (0,05-0,15%) и калия хлорид (0,01-0,03%) (патент РФ на изобретение №2342425 от 27.12.2008). После чего пробирки помещали в термостат и культивировали при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносили в колбы с 200-300 мл аналогичного питательного бульона и инкубировали при 37°С. Культуры продуцирующие термолабильный и термостабильный инкубировали 6 суток, а продуцирующие шигаподобный токсин - 7 суток. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивали. Перед окончанием инкубирования из каждой колбы отобрали по 10 мл культуральной жидкости, центрифугировали при 10 тыс.об/мин в течение 30 мин и определяли методом биотестирования на инфузориях наличие токсинов.

При наличии токсинов в культуры добавляли формалин до концентрации 0,3-0,4% и инактивировали в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием. После завершения инактивации, равные объемы культур объединяли и с помощью стерилизующей фильтрации отделили микробную массу от среды культивирования, получая, таким образом, бесклеточную культуральную среду Е. coli (эшерихиозный токсоидный компонент). Далее в нее поочередно вносили 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 -98,5% (патент РФ №2510845)) при следующем соотношении компонентов, об%:

2%-ная суспензия Al(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100

Полученную вакцину фасуют по 100 мл в стерильные флаконы, укупоривают и проверяют на стерильность и безвредность. По внешнему виду готовый препарат представляет собой прозрачную опалесцирующую жидкость соломенного цвета с выпадающим беловато-сероватым осадком на дне, который при встряхивании флакона легко разбивается, образуя равномерную взвесь. Срок хранения в сухом и темном помещении при температуре 4-10°С - 1 год.

Использование вакцины в заявляемом способе профилактики позволяет обеспечить защиту телят от эшерихиозной инфекции продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).

Изобретение относится к области ветеринарии, касается способа профилактики колибактериоза телят. Способ профилактики эшерихиоза у телят включает использование вакцины против эшерихиоза, содержащей бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильных, термостабильных и шигаподобных токсинов Escherichia coli, полученных путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты. Проводят двукратную иммунизацию телят этой вакциной подкожно в область верхней трети шеи - в первый и во второй разы в дозе 2 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной стельных коров, от которых получены телята: первый и второй разы - в дозе 10 мл подкожно в область верхней трети шеи. Причем в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора - биологически инертного кремнийорганического соединения цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикона в количестве 1,5% и масляной основы - вакцинного масла "М" в количестве 98,5%. Компоненты вакцины берут при следующем соотношении компонентов, мас. %: 2%-ная суспензия Al(ОН)₃ - 19-21, масляный адъювант - 49-51, бесклеточная культуральная среда, состоящая из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильных, термостабильных и шигаподобных токсинов Escherichia coli - до 100. При этом первую иммунизацию телят проводят в возрасте 13-15 дней и вторую - в возрасте 19-21 день. А стельным коровам первую иммунизацию проводят за 45 дней до отела, а вторую - за 15 дней до отела. Изобретение направлено на повышение эффективности специфической профилактики эшерихиоза у телят и расширение ассортимента препаратов для профилактики этого заболевания. 2 табл.

Способ профилактики эшерихиоза у телят, включающий использование вакцины против эшерихиоза, содержащую бесклеточную культуральную среду, состоящую из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильных, термостабильных и шигаподобных токсинов Escherichia coli, полученных путем смешивания в равных соотношениях эпизоотических штаммов Escherichia coli с последующим отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесенные поочередно с последующим перемешиванием в бесклеточную культуральную среду адъюванты, двукратную иммунизацию телят этой вакциной подкожно в область верхней трети шеи - в первый и во второй разы в дозе 2 мл и двукратную иммунизацию этой же вакциной стельных коров, от которых получены телята: первый и второй разы - в дозе 10 мл подкожно в область верхней трети шеи, причем в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию Al(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора - биологически инертного кремнийорганического соединения цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикона в количестве 1,5% и масляной основы - вакцинного масла "М" в количестве 98,5%, при следующем соотношении компонентов, мас. %:

2%-ная суспензия Al(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, состоящая из инактивированных формалином до его конечной концентрации 0,4% термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100,

при этом первую иммунизацию телят проводят в возрасте 13-15 дней и вторую - в возрасте 19-21 день, а стельным коровам первую иммунизацию проводили за 45 дней до отела, а вторую - за 15 дней до отела.