Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят Российский патент 2024 года по МПК A61K39/108 A61K39/39 C12N1/20 A61P31/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при разработке вакцин предназначенных для профилактики эшерихиоза у животных.

Установлено, что эффективными средствами специфической профилактики эшерихиоза у животных являются вакцины, содержащие в своем составе инактивированные экзотоксины патогенных Escherichia coli (Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных / М.К. Пирожков // Дисс. док. вет. наук. - Москва. 2002. - 298 с.).

Известна вакцина против эшерихиоза животных Вероколивак К88, К99, 987Р, F41, ТЛ-, ТС-, VT1 и VT2 анатоксины (организация-производитель ФГУП «Армавирская биофабрика», Россия). Вакцина изготавливается из 18 штаммов эшерихий серогрупп O8, O9, O15, O20, O26, O41, O55, O78, O86, О101, О115, O117, O119, O138, O139, O141, O147 с включением адгезивных антигенов К88, К99, 987Р, F41, а также термолабильного, термостабильного и веротоксинов, инактивированных формалином в количестве 0,4% с добавлением в качестве адъюванта геля гидрата окиси алюминия в количестве 25%. В 1 см³ вакцины содержится 10 млрд микробных тел эшерихий (Вакцинопрофилактика эшерихиоза сельскохозяйственных животных // http://www.armbio.info/verokolivak.html; Вакцина против эшерихиоза животных // http://www.armbio.info/catalog/1006-3).

Недостатком данной вакцины является то, что в ней содержится очень большое количество балластных антигенов в виде целых клеток Е. coli, что негативно сказывается на формировании у животных иммунной защиты, а так же развития у привитых животных побочных реакций и осложнений.

Кроме того, способ получения такой вакцины очень сложен, поскольку требует раздельного культивирования 18 штаммов эшерихий.

Известен способ получения эшерихиозного анатоксина (патент РФ №2213575 от 10.10.2003), заключающийся в выдерживании односуточных мясопептонных бульонных культур Е. coli серотипов 0141:К88ас; 0138:К88ас; 0139:К88ас в присутствии 0,4% формалина при температуре 37-38°С в течение 25 суток и пропускании через фильтр Сальникова. Недостатком данного препарата является отсутствие сведений о токсинах, которые продуцируют используемые автором культуры Е. coli, и ограничение использования (только для поросят-отъемышей). Кроме того, мясо-пептонный бульон не обеспечивает высокую продукцию токсинов эшерихиями, а, следовательно, в предлагаемом препарате будет недостаточное количество антигенного материала, который без добавления адъювантных веществ будет мало эффективным.

Известен способ получения эшерихиозного анатоксина (патент РФ №2432174 от 27.10.2011). Согласно которому, отбирают и раздельно культивируют эпизоотические штаммы Е. coli, обладающие генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием. Инактивацию культур проводят путем добавления формалина до концентрации не более 0,4%, при температуре 37°С в течение 14 суток с ежедневным двукратным перемешиванием. После чего смешивают культуры в равных соотношениях, отделяют бактериальную массу с помощью стерилизующей фильтрации и получают комплексный препарат.

Недостатком данного способа получения препарата для профилактики эшерихиоза у животных является отсутствие в его составе адъюванта, поскольку установлено, что инактивированные токсины эшерихий обладают низкой иммуногенной активностью, повысить которую можно за счет различных адъювантов (Караев Я. М. Иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. канд. вет. наук / Я.М. Караев. - Краснодар: КубГАУ, 2009. - 132 с).

В связи с этим, были испытаны в качестве адъювантов для анатоксина гидрат окиси алюминия, минеральное масло, пирогенал и полиакриловая кислота (Терехов, В.И. Влияние различных адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина / В.И. Терехов, Я.М. Караев, А.С. Тищенко, А.В. Иванов // Тр. / КубГАУ. - 2009. - Вып. №1 45 (ч. 1) Серия: Ветеринарные науки. - С.100-102.; Тищенко А.С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина: дис. … канд. вет. наук / А.С. Тищенко. - Краснодар: КубГАУ, 2011. - 124 с). Результаты этих исследований в случае применения пирогенала и полиакриловой кислоты, гидрата окиси алюминия и минерального масла а качестве адъювантов для эшерихиозного анатоксина были апробированы и опубликованы в широкой печати (Тищенко А.С, Терехов В.И., Сердюченко И.В. Иммуногенность эшерихиозного анатоксина при использовании с пирогеналом и полиакриловой кислотой // Научное обеспечение агропромышленного комплекса: Сб. ст.по материалам X Всерос. конф. молодых ученых. - Краснодар: КубГАУ, 2017. - С. 287-288; Тищенко А.С. Иммуногенные свойства эшерихиозного полианатоксина в сочетании с гидратом окиси алюминия / Итоги научно-исследовательской работы за 2016 год: сб. ст. по материалам 72-й науч. - практ. конф. преподавателей. - Краснодар: КубГАУ, 2017. - С. 199-200; Тищенко А.С., Терехов В.И., Мартыненко Я.Н. Влияние минерального и масляного адъювантов на иммуногенность комплексного эшерихиозного анатоксина / Инновационные технологии в сельском хозяйстве: материалы III Междунар. науч. конф. (г. Казань, май 2017 г.). - Казань: Бук, 2017. - С. 34-39; Киященко А.А., Белик А.Р., Тищенко А.С. Иммуногенные свойства эшерихиозного полианатоксина при совместном использовании с масляным адъювантом / В сборнике: Вестник научно-технического творчества молодежи Кубанского ГАУ. Краснодар: КубГАУ, 2017. - С.32-35.; Тищенко А.С, Мусатова Н.С Изменение показателей крови у кроликов после применения комплексного эшерихиозного анатоксина в сочетании с адъювантами / В сборнике: Проблемы и перспективы развития науки и образования в XXI веке. Материалы Международной (заочной) научно-практической конференции. - 2017. - С.69-73).

Однако, применение по отдельности данных адъювантов не обеспечило желаемый эффект, так как формируемый у животных поствакцинальный иммунитет был недостаточно продолжительным.

Известно техническое решение (патент РФ №2644654, кл. А61К 39/105, 2018 г.) заключающееся в получении вакцины против кампилобактериоза содержащей в качестве адъюванта 2%-ную суспензию AL(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5%) и вспомогательные компоненты.

Известную вакцину используют для кампилобактериоза у КРС, свиней, овец и птиц, который сопровождается поражением репродуктивных органов, вагинитами, частыми перекрытиями, временным бесплодием, массовыми абортами, метритами, задержанием последа, рождением нежизнеспособного приплода; у кур - снижением приростов массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падежом цыплят.

Недостатком известного технического решения является то, что его не возможно использовать для лечения эшерихиоза у молодняка сельскохозяйственных животных, т.к. для получения культуральной среды применяют культуру (колонии) возбудителя кампилобактериоза и для смыва культуры возбудителя и для инактивации биомассы используют вспомогательные компоненты: 0,9%-ный раствор NaCl и теотропин, которые могут вызвать побочные явления.

Известен способ получения вакцины против эшерихиоза животных (патент РФ №2753410 от 16.08.21 - прототип), включающий отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивирование на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, инактивирование формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток с последующим смешиванием в равных объемах и отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации с добавлением адъювантов.

Недостатком этого способа является слабая иммуногенная активность препарата, выражающаяся в низкой продолжительности поствакцинальной защиты у животных против токсинов кишечной палочки.

Техническим результатом изобретения является повышение иммуногенности для обеспечения специфической профилактики эшерихиоза животных и расширения ассортимента вакцинных препаратов.

Технический результат достигается тем, что в способе получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят, включающем отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивировании на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток, смешиванием культур в равных соотношениях и отделением бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации и внесение адъювантов, согласно изобретению в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию AL(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора, в качестве которого используют биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" - 98,5%) при следующих соотношениях компонентов, об %:

2%-ная суспензия AL(OH)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100.

Новизна технического решения состоит в том, что за счет ввода минерального и масляного адъювантов в бесклеточную и инактивированную формалином культуру эпизоотических штаммов Escherichia coli, продуцирующих термолабильный, термостабильный и шигаподобный токсины, обеспечивается повышение иммуногенной активности вакцинного препарата.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.

Предложенный способ получения вакцины соответствует критерию «промышленная применимость» поскольку легко воспроизводим, не требует сложного технологического оборудования и условий.

Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза животных осуществляют следующим образом.

Предварительно осуществляют отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Затем их культивируют на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием с последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 суток. Далее смешивают культуры в равных соотношениях и отделяют бактериальную массу с помощью стерилизующей фильтрации. Вносят адъюванты, в качестве которых используют 2%-ную суспензию AL(OH)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора в виде биологически инертного кремнийорганического соединения цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 - 98,5% при следующих соотношениях компонентов, об %:

2%-ная суспензия AL(OH)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100.

Количественные значения ввода адъювантов подобраны экспериментальным путем, при этом учитывалась иммуногенная активность гидроокись алюминиевой масляной вакцины. При вводе гидрата окиси алюминия в объеме 18% и масляного адъюванта 48% иммуногенная активность снижалась, и была не достаточной для длительного сохранения поствакцинального иммунитета. При вводе минерального адъюванта в объеме 22%, а масляного 52% увеличения продукции специфических антител более значения, чем при их вводе в объеме 19-21% и 49-51% соответственно, не происходило, а экономические затраты возрастали. Кроме того, вслед за повышением ввода гидрата окиси алюминия возрастала опасность развития местной воспалительной реакции из-за раздражения тканей.

Пример конкретного осуществления способа получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза животных

Предварительно эпизоотические штаммы Е. coli изучались на наличие у них генов термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов. Для этого использовали тест-системы «АмплиСенс E. coli-tox» (Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии МЗ РФ, г. Москва). Подтверждение токсинообразования на искусственной питательной среде осуществляли с помощью биотеста на инфузориях-стилонихиях по патенту РФ на изобретение №2262529 от 20.10.2005. Отобранные штаммы по отдельности засевали в пробирки с 10 мл питательного бульона для накопления токсинов кишечной палочки, в состав которого входят кислотный гидролизат крови (9-11%), аутолизат пекарских дрожжей (9-11%), пептон (0,9-1,1%), нария хлорид (0,4-0,6%), двузамещенный фосфорнокислый натрий (0,05-0,15%) и калия хлорид (0,01-0,03%) (патент РФ на изобретение №2342425 от 27.12.2008). После чего пробирки помещали в термостат и культивировали при 37°С в течение 6-8 ч до появления легкой мути, свидетельствующей о росте микроорганизмов. Затем полученные культуры переносили в колбы с 200-300 мл аналогичного питательного бульона и инкубировали при 37°С.

Культуры продуцирующие термолабильный и термостабильный инкубировали 6 суток, а продуцирующие шигаподобный токсин - 7 суток. Ежедневно 2 раза в сутки колбы встряхивали. Перед окончанием инкубирования из каждой колбы отобрали по 10 мл культуральной жидкости, центрифугировали при 10 тыс.об./мин в течение 30 мин и определяли методом биотестирования на инфузориях наличие токсинов.

При наличии токсинов в культуры добавляли формалин до концентрации 0,3-0,4% и инактивировали в течение 14 суток при температуре 37°С с ежедневным двукратным перемешиванием. После завершения инактивации, равные объемы культур объединяли и с помощью стерилизующей фильтрации отделили микробную массу от среды культивирования, получая, таким образом, бесклеточную культуральную среду Е. coli (эшерихиозный токсоидный компонент). Далее в нее поочередно вносили 2%-ную суспензию AL(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора (биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/1 IIII -10/1 - диметикон) - 1,5% и масляной основы - вакцинное масло "М" по ТУ 381011224 -98,5% (патент РФ №2510845)) при следующем соотношении компонентов, об %:

2%-ная суспензия AL(OH)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100.

Полученную вакцину фасуют по 100 мл в стерильные флаконы, укупоривают и проверяют на стерильность и безвредность. По внешнему виду готовый препарат представляет собой прозрачную опалесцирующую жидкость соломенного цвета с выпадающим беловато-сероватым осадком на дне, который при встряхивании флакона легко разбивается, образуя равномерную взвесь. Срок хранения в сухом и темном помещении при температуре 4-10°С - 1 год.

При контрольных высевах на МПА, МПБ, среду Китта-Тароцци, Сабуро, Эндо рост бактериальной и грибной флоры отсутствовал, что свидетельствовало о стерильности препарата.

При внутрибрюшинном введении в дозе 0,3 мл белым мышам массой 20-22 г угнетения и гибели их в течение 10 дней не отмечали, что является показателем безвредности препарата.

Для подтверждения достижения технического результата были проведены опыты, для которых были сформированы 4 группы белых крыс по 6 гол в каждой, которым внутримышечно однократно инъецировали по 0,15 мл препарата, в первой группе использовали вакцину против эшерихиоза без адьюванта (ВЭ), во второй - вакцину против эшерихиоза с гидратом окиси алюминия (ВЭ+ГОА), в третьей - вакцину против эшерихиоза с масляным адъювантом (ВЭ+МА), в четверной - вакцину против эшерихиоза с гидратом окиси алюминия и масляным адъювантом (ВЭ+ГОА+МА). Спустя 7, 14, 28, 56, 90 и 120 дней в реакции непрямой гемагглютинации определяли титр антител к токсинам Е. coli результаты опыта отражены в таблице.

Из данных таблицы 1 видно, что у животных всех групп после ввода им вакцины в течение 7 дней вырабатываются антитела. Однако, в группах 2 и 3 где она вводилась с адъювантами, уровень антител был в 1,6 раза выше, чем у животных, которым вакцина вводилась без гидрата окиси алюминия и масляного адъюванта, а у животных группы 4 уровень антител был в 1,8 раза более высоким. В последующие дни у животных 1 группы уровень антител снижался, а вот у животных из опытных групп он повышался, во 2-й - до 14 дня, 3-й и 4-й группе - до 28 дня, превысив показатели 1 группы в 2,1, 2,4 и 2,8 раза соответственно. На 56 день исследования титр антител в опытных группах оставался по-прежнему высоким, максимальное значение регистрировали в группе 4 - 6,2±0,5, что в 3,4 раза превышало значение в 1 группе, и 1,2-1,3 раза значений опытных групп 2 и 3. В последующем во всех группах установили постепенное снижение антител к 120 дню до значения 1,2±0,7, 2,2±0,6, 2,4±0,7 и 3,6±0,4 log2 соответственно. У животных 4 группы уровень антитоксических антител оставался самым высоким даже спустя 120 дней после иммунизации и был достаточным для защитного действия от токсинов Е. coli.

Таким образом, гидроокись алюминиевая масляная вакцина, полученная по предлагаемому способу, оказалась более иммуногенной, она позволила после однократного введения обеспечить сохранение защитного уровня антитоксических антител в течение 120 дней, в то время как применение ее с отдельными адъювантами - 90 дней, а без адъювантов - до 14 дней.

Для подтверждения эффективности использования заявляемого технического решения были приведены производственные опыты над телятами и поросятами (примеры 1и 2).

При использовании способа получения вакцины, защита телят и поросят от эшерихиозной инфекции обеспечивалась продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).

Пример 1.

В хозяйстве Краснодарского края, неблагополучном по эшерихиозу телят. По данным ветеринарной лаборатории этого хозяйства, диарею у молодняка крупного рогатого скота в данном хозяйстве вызывают патогенные штаммы кишечной палочки. Эффективность вакцины, изготовленной по заявляемому способу, сравнивали с эффективностью прототипа, для этого было сформировано 3 группы стельных коров по 25 голов в каждой.

Первую группу коров иммунизировали заявляемой вакциной первый раз за 45 дней до отела в дозе 5 мл, второй раз за 15 дней до отела в дозе 10 мл. Полученных от этих коров телят также иммунизировали заявляемой вакциной первый раз в возрасте 13-15 дней в дозе 1 мл, а второй через 19-21 день в дозе 2 мл соответственно. Вакцину вводили подкожно в область верхней трети шеи.

Вторую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с гидратом окиси алюминия по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Третью группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной с масляным адъювантом по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Четвертую группу коров и полученных от них телят иммунизировали эшерихиозной вакциной без адъювантов по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Пятая группа коров была контрольной, они и полученные от них телята не иммунизировались.

Эффективность вакцины полученной заявляемым способом оценивали по достижении телятами 3-месячного возраста и перевода их другой корпус на групповое содержание. Критериями оценки служили показатели заболеваемости и летальности.

Результаты опыта отражены в таблице 2, из материалов которой, видно, что в первой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 3 телят, при этом диарею у них удалось купировать в течение 3 дней, а на 5 день телята полностью выздоровели. Таким образом, профилактическая эффективность вакцины полученной заявляемым способом составила 88%, сохранность 100%.

Во 2-ой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 4 телят, причем у одного теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животного. Профилактическая эффективность аналога составила 74%, сохранность 96%.

В третьей группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 5 телят, у 1 теленка она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Профилактическая эффективность аналога составила 80%, сохранность 96%.

В четвертой группе эшерихиозная инфекция была зарегистрирована у 9 телят, из них у троих телят она протекала очень тяжело и закончилась гибелью животных. Профилактическая эффективность прототипа составила 65%, сохранность 88%.

В контрольной группе заболеваемость телят острой кишечной инфекцией составила 68%, а сохранность 72%.

Иммуногенные свойства эшерихиозной вакцины изучали у телят, полученных от вакцинированных стельных коров. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.

Влияние применения вакцин на титр антител у телят представлены в таблице 3.

Из материалов таблицы 3 видно, что иммунизация коров и телят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции.

Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у телят, которых у животных первой группы в 1,1-1,8 раз больше, чем у животных из второй и третьей группы, и 1,5-7,3 раза больше, чем у животных четвертой и пятой групп.

Пример 2.

Обоснование эффективности использования вакцины для профилактики эшерихиоза у поросят.

В хозяйстве длительно неблагополучном по эшерихиозу поросят сформировали 5 групп супоросных свиноматок по 5 животных в каждой.

В первой группе свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали предлагаемой вакциной (ВЭ+ГОА+МА). Свиноматок иммунизировали первый раз за 40 дней до опороса в дозе 5 мл, второй раз - за 15 дней в дозе 5 мл внутримышечно в область основания ушной раковины. Поросят иммунизировали дважды первый раз в возрасте 10-12 дней в дозе 0,25 мл, а второй за 5 дней до отъема поросят от свиноматок в дозе 0,5 мл внутримышечно в области внутренней поверхности бедра.

Вторую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с гидратом окиси алюминия (ВЭ+ГОА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Третью группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной эшерихиозной с масляным адъювантом (ВЭ+МА) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Четвертую группу свиноматок и полученных от них поросят иммунизировали вакциной против эшерихиоза без адъювантов (ВЭ) по схеме и в дозах аналогичных в первой группе.

Пятая группа свиноматок была контрольной, они и полученные от них поросята не иммунизировались.

За поросятами в течение 90 дней вели клиническое наблюдение, учитывали количество заболевших и павших животных. Результаты проведенного исследования представлены в таблице 4.

Из материалов таблицы 4 видно, что в 1-й группе от 5 свиноматок было 5 получено 55 поросят, из которых заболело 8 голов и пало 2. Заболеваемость по группе составила 14,5%, смертность 3,6%. Следовательно, профилактическая эффективность заявляемого способа составила 85,5% при сохранности поросят в группе 96,4%.

Во 2-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с гидратом окиси алюминия, родилось 54 поросенка, из которых 12 заболело и 5 пало. Заболеваемость по этой группе составила 22,2%, смертность 9,2%, профилактическая эффективность 77,8%, при сохранности 90,8%.

В 3-й группе, где свиноматки иммунизировались вакциной с масляным адъювантом, было получено 53 поросенка, из них 11 заболело, 4 пало. Заболеваемость составила 20,7%, смертность 7,5%, профилактическая эффективность 79,3%, а сохранность 92,5%.

В четвертой группе, где свиноматки вакцинировались вакциной без адъювантов, родилось 55 поросят, из них 19 заболело, 8 пало. Заболеваемость составила 34,5%, смертность 14,5%, профилактическая эффективность 65,5%, а сохранность 85,5%.

В 5-й группе было получено 53 поросенка, из них 27 заболело, 11 пало. Заболеваемость составила 50,9%, смертность 20,7%, сохранность 79,3%.

Следовательно, применение вакцины против эшерихиоза, полученной по заявляемому способу позволило более эффективно профилактировать заболевание поросят с эшерихиозной инфекцией. При этом заболеваемость снизилась по сравнению с аналогом на 7,7%, аналогом 2 на 6,2%, аналогом 3 на 20%, а в сравнении с группой (контроль) на 36,4%, при этом падеж сократился в 1,4-5,5 раза, что свидетельствует о высокой эффективности заявляемой вакцины.

Иммуногенные свойства эшерихиозной вакцины изучали у поросят, полученных от вакцинированных супоросных свиноматок. Сыворотку крови для определения наличия антитоксических антител в реакции диффузной преципитации отбирали через 7, 14, 28 и 56 дней после последней их вакцинации.

Влияние применения вакцин на титр антител у поросят представлены в таблице 5.

Из материалов таблицы 5 видно, что иммунизация свиноматок и поросят заявляемым способом обеспечивает более напряженный и продолжительный специфический иммунитет против эшерихиозной инфекции. Об этом свидетельствуют количество антител к токсинам кишечной палочки у поросят, которых у животных первой группы в 1,2-9 раз больше, чем у животных из остальных опытных групп.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят, включающий отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивирование на питательном бульоне при 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 сут, смешивание культур в равных соотношениях и отделение бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации, при этом в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию AL(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора, в качестве которого используют биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон - 1,5% и масляную основу - вакцинное масло "М" - 98,5% при заданном соотношении. Изобретение обеспечивает повышение иммуногенности вакцины для обеспечения специфической профилактики эшерихиоза телят и поросят и расширения ассортимента вакцинных препаратов. 5 табл., 2 пр.

Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят, включающий отбор эпизоотических штаммов Escherichia coli, обладающих генами термолабильного, термостабильного и шигаподобного токсинов, их культивирование на питательном бульоне при температуре 37°С в течение 6-7 дней с ежедневным двукратным перемешиванием, последующей инактивацией формалином до его конечной концентрации 0,4% в течение 14 сут, смешивание культур в равных соотношениях и отделение бактериальной массы с помощью стерилизующей фильтрации, отличающийся тем, что в качестве адъювантов используют 2%-ную суспензию AL(ОН)₃ и масляный адъювант, состоящий из эмульгатора, в качестве которого используют биологически инертное кремнийорганическое соединение цетил-ПЭГ/ППГ-10/1-диметикон - 1,5% и масляную основу - вакцинное масло "М" - 98,5% при следующих соотношениях компонентов, об.%:

2%-ная суспензия AL(ОН)₃ 19-21 масляный адъювант 49-51 бесклеточная культуральная среда, содержащая инактивированные термолабильные, термостабильные и шигаподобные токсины Escherichia coli до 100