СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКА С КУТИКУЛОЙ КУКОЛОК ЧЕРНОЙ ЛЬВИНКИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИСБАКТЕРИОЗА ПТИЦ Российский патент 2024 года по МПК A23K10/16 A23K50/70 A61K35/64 A61K35/747 A61P1/00 

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии, в частности к получению препаратов для профилактики и лечения дисбактериозов птицы.

Известен способ «Получения пробиотического препарата» [Патент RU №2032736 С-1, опубл. 10.05.1995] на основе культур штаммов пробиотиков медицинского и ветеринарного назначения, полученных в условиях глубинного выращивания, с последующим обезвоживанием. Микробную суспензию смешивают с мукой злаковых растений в соотношении 1: (1,8-2,0), а контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта проводят цеолитом, охлажденным до минус 8-12°С, с остаточной влажностью 1% при массовом соотношении 1: (4-6) соответственно, с последующей досушкой при 0-4°С в течение 18-24 ч.

Недостатком данного состава получение пробиотиков является обязательное использование муки злаковых растений, контактно-сорбционное обезвоживание целевого продукта цеолитом, а также слишком трудоемкий, сложный и энергетически затратный способ производства.

Данное техническое решение не учитывает возможность использования кутикулы куколок Черной львинки при производстве пробиотика.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является «Способ получения сухого пробиотического препарата «Бацелл»» [Патент RU № 2280464 С-2 опубликован 27.07. 2016 Бюл. №21]. Способ предусматривает раздельное выращивание в условиях глубинного культивирования микроорганизмов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Lactobacillus acidophilus Scav. ВКПМ В-4625, и Rhuminococcus albus Kr. Выращенные маточные культуры В. subtilis ВКПМ В-8130 и L. acidophilus Scav. ВКПМ В-4625 и R. albus Kr смешивают в соотношении 1:1, засевают этой смесью автоклавированный подсолнечниковый шрот, при следующем соотношении компонентов, масс %: автоклавированный подсолнечниковый шрот 45-55, маточная культура Lactobacillus acidophilus Scav. ВКПМ В-4625, Rhuminococcus albus Kr, маточная культура Bacillus subtilis ВКПМ В-8130. Инкубируют полученную смесь при 30-45°С в течение 4-8 дней с получением в полувлажном препарате не менее 1·10⁸ клеток/г препарата, причем смешивают полученный препарат с подсолнечниковым шротом в соотношении 1:10 - 1:12 с получением препарата с остаточной влажностью 8-10%.

Существенным признаком данного решения является обязательное раздельное выращивание в условиях глубинного культивирования микроорганизмов. Выращенные маточные культуры смешиваются в соотношении 1:1, засеваются этой смесью на автоклавированном подсолнечниковом шроте.

Изобретение направленно на создание нового комплексного препарата пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки, расширяющего ассортимент кормовых пробиотиков, с высокими показателями качества, которые обеспечивают дополнительный прирост живой массы птицы, снижение кормозатрат, высокую сохранность птицы.

Это достигается тем, что способ получения пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки для профилактики и лечения дисбактериоза птиц включающий выращивание пробиотических бактерий Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ: В-2707 и Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В-2579, которые выращивают в течение 24 ч на обезжиренном молоке при температуре 37°С, затем смешивают микробные суспензии с термически обработанными при температуре 160°С в течение 2 ч кутикулами куколок Черной львинки в соотношении Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ В-2707 : Enterococcus faecium К-50 ВКПМ В-2579 : кутикулы куколок Черной львинки 1:1:2, где в соотношении указаны объем культуральной жидкости бактерий и вес кутикул куколок Черной львинки, с последующим высушиванием при температуре 45°С в течение 12 ч до влажности 8%.

Сопоставимый анализ с прототипом показывает, что заявляемый пробиотик отличается тем, что содержит кутикулы куколок Черной львинки и позволяет упростить способ получения и повысить качество пробиотического препарата путем смешивания микробной суспензии с термически обработанной при температуре 160°С в течение 2 часов кутикулой куколок Черной львинки в соотношении 1:1:2, где 1:1, объем культуральной жидкости бактерий, а 2 - вес кутикул куколок Черная львинка, с последующим высушиванием при температуре 45°С в течение 12 часов до конечной влажности 8% и измельчении.

При таком составе, вследствие протекания ферментативного гидролиза культуральной жидкости с молочнокислыми бактериями, происходит деструкция склеротинизированных хитин-белковых комплексов с образованием биопленки и наночастиц, что позволяет получить высокую биологическую активность биопрепарата.

Таким образом, заявляемое решение соответствует критерию изобретения «новизна».

Сравнение заявленного решения не только с прототипом, но и с другими известными техническими решениями в данной области техники не подтвердило наличия в последних признаков, совпадающих с его отличительными признаками, или признаков, влияющих на достижение указанного технического результата. Это позволило сделать вывод о соответствии изобретения критерию «изобретательский уровень».

Характеристика компонентов

1. Основным компонентом в кутикуле куколок Черной львинки является хитин. Известно, что хитин - это натуральный биополимер, содержащийся в панцирях и скелетах ракообразных, в грибах, дрожжах, крыльях бабочек и в кутикулах мухи Черная львинка. Он стимулирует клетки врожденного иммунитета; подавляет патогены в кишечнике; улучшает моторику кишечника.

2. Штамм Lactobacillus acidophilus 20. ВКПМ: В-2707 депонированный в коллекции, содержащей, г/л:

бактопентон 10 мясной экстракт 10 дрож. экстракт 5,0 глюкоза 20,0 твин 80 1,0 аммоний лимоннокислый 2,0 натрий уксуснокислый 5,0 MgSO₄×7H₂O 0,1 MnSO₄×5H₂O 0,05 Na₂HPO₄ 2,0 агар 20,0 рН 6,5

3. Штамм Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В-2579 депонированный в коллекции, содержащей, г/л:

папаиновый перевар соевой муки 5,0 пептиновый перевар животной ткани 5,0 дрож. экстракт 2,50 говяжий эксстракт 5,0 лактоза 5,0 аскорбиновая кислота 0,5 сульфат магния 0,25 агар 10,0 рН 7,1

Пример способа получения пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки для профилактики и лечения дисбактериоза птиц

В течение суток выращивали штаммы культуры пробиотиков Lactobacillus acidophilus 20 ВКМП: В-2707 и Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В -2579 на обезжиренном молоке при температуре 37°С.

Кутикулы куколок Черной львинки измельчались, стерилизовались термически в сухожарном шкафу при температуре 160°С 2 ч.

Смешивалась с выращенными штаммами в соотношениях Lactobacillus acidophilus 20 ВКМП: В-2707 и Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В-2579 : кутикулы куколок Черной львинки 1:1:2, где в соотношении указаны объем культуральной жидкости бактерий и вес кутикул куколок Черной львинки.

Высушивание при температуре 45°С в течение 12 часов до влажности 8%.

Первичные качественные характеристики полученного пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки оценивали на группе цыплят-бройлеров кросса «Росс 309».

Исследования проводились в условиях СГЦ «Загорское ЭПХ» в 2022 г на бройлерах кросса «Росс 309» в клеточных батареях типа Р-15, по 35 голов в каждой группе, с суточного до 35 - суточного возраста выращивания.

Нормы посадки, световой, температурный, влажностный режимы, фронт кормления и поения во все возрастные периоды соответствовали рекомендациям ВНИТИП (2015г) и для всех групп были одинаковыми.

Птица кормилась россыпными комбикормами с питательностью согласно нормам ВНИТИП (2021г). В период 1-14 суток скармливаются комбикорма под маркой Стартер; 15-21 день - комбикорм Гроуер; 22-35 суток - комбикорм Финишер.

Из суточных кондиционных цыплят методом случайной выборки было сформировано 2 группы.

Таблица 1.
Схема опыта на цыплятах-бройлерах, n=35 Группа Особенности кормления 1 контрольная Основной рацион, сбалансированный по всем питательным веществам в соответствии с нормами ВНИТИП, 2021 г, (ОР) 2 опытная Основной рацион + препарат в количестве 0,5 г/тонну корма

Учитываемые показатели:

1. Сохранность поголовья путем учета отхода и установление его причин, %;

2. Живая масса бройлеров в возрасте: сутки, 14, 21, и 35 суток, путем индивидуального взвешивания всего поголовья по группам. В возрасте 35 суток учёт живой массы проводился по петушкам и курочкам раздельно, а средняя живая масса цыплят рассчитана как средняя масса петушка плюс средняя масса курочки и эта сумма разделена на 2. Период от взвешивания до взвешивания соответствует одному периоду и фазе кормления (1-14;15-21;22-35 суток выращивания);

3. Среднесуточный прирост живой массы, г;

4. Потребление кормов, за весь период выращивания, кг на голову;

5. Затраты корма на 1кг прироста живой массы в конце опыта, кг;

6. Переваримость и использование птицей основных питательных веществ комбикормов по результатам физиологического опыта в возрасте 30-35 суток;

7. Выход грудных мышц, %;

8. Убойный выход, %.

Результаты обработаны статистически с указанием достоверности различий между группами.

Результаты исследований

Основные зоотехнические показатели на цыплятах-бройлерах приведены в табл. 2.

Сохранность поголовья за 35 суток выращивания цыплят-бройлеров была высокой и находилась на уровне 100%.

Живая масса бройлеров в опытной группе в 14 и 21-суточном возрасте составила 466 и 908 г, а в 35-суточном возрасте 2161 г, что выше контрольной птицы 6,0; 6,1; % соответственно периодам выращивания. Разность по живой массе цыплят во все возрастные периоды была статистически достоверна при Р ≤ 0,05: 0,001.

Таблица 2.
Зоотехнические показатели выращивания цыплят-бройлеров Показатель 1к 2о Начальное поголовье, гол. 35 35 Сохранность, % 100,0 100,0 Живая масса, г: сутки 43,62±0,18 43,55±0,23 14 440±5,26 466±8,11 % к контролю 100,0 106,0 21 855±9,74 908±10,48 % к контролю 100,0 106,1 35 суток, в среднем 2047 2161 % к контролю 100,0 105,6 курочки 1951±10,67 2042±10,99 % к контролю 100,0 104,7 петушки 2143±27,88 2280±25,03 % к контролю 100,0 106,4 Расход корма на 1 голову за весь период, кг 3,361 3,383 % к контролю 100,0 100,7 Расход корма на 1кг прироста живой массы, кг 1,678 1,598 % к контролю 100,0 95,23 Среднесуточный прирост живой массы, г 57,23 60,49 % к контролю 100,0 105,7 Выход грудных мышц, % 29,1 29,9 Убойный выход, % 72,2 72,8

Р ≤ 0,001

В 35-суточном возрасте живая масса у курочек в опытных группах была выше на 4,7 %, а у петушков - на 6,4 % по сравнению этого показателя с птицей контрольной группы. Результаты исследований показали, что петушки в большей степени отреагировали повышением живой массы при включении в комбикорма препарата по сравнению с курочками. При применении препарата в рационах бройлеров среднесуточный прирост живой массы за весь период выращивания находился в пределах 60,49 г и был выше контрольных цыплят на 5,7 %.

За весь период выращивания затраты кормов на 1 кг прироста живой массы в опытной группе цыплят, получавших препарат составили 1,598 кг и были ниже контрольной группы на 4,77 %. Более высокие затраты корма на 1 кг прироста живой массы отмечены у бройлеров контрольной группы (1,678 кг против 1,598 кг).

Основные показатели переваримости и использования питательных веществ корма представлены в табл. 3.

Таблица 3.
Основные показатели переваримости и использования питательных веществ корма у цыплят-бройлеров в возрасте 30-35 суток Показатель 1к 2о Переваримость, %:
протеина 89,5 92,0 жира 76,3 77,9

Переваримость протеина в опытных группах цыплят, которые получали в составе комбикорма препарат, составляла 92,0 % и была выше показателей контрольной группы на 2,5 %.

Переваримость жира из опытных комбикормов с добавкой препарата была высокой и составляла 77,9%, и этот показатель был выше контрольной группы на 1,6 %.

Включение препарата в дозе 0,5 г/т комбикорма повышает прирост живой массы в 35-суточном возрасте цыплят-бройлеров кросса «Росс 309» на 5,7% по сравнению с бройлерами контрольной группы, обеспечивая высокую сохранность птицы. При этом затраты корма на 1 кг прироста живой массы за период выращивания снижаются на 4,77% за счёт повышения показателей переваримости и использования питательных веществ корма.

При таком составе вследствие протекания ферментативного гидролиза культуральной жидкости с лактобацилой происходит деструкция склеротинизированных хетин-белковых комплексов с образованием биопленки наночастиц, что позволяет получить высокую биологическую активность биопрепарата.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии, в частности к получению препаратов для профилактики и лечения дисбактериозов птицы. Способ получения пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки включает выращивание пробиотических бактерий Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ: В-2707 и Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В-2579 в течение 24 ч на обезжиренном молоке при температуре 37°С, смешивание полученных микробных суспензий с термически обработанными при температуре 160°С в течение 2 ч кутикулами куколок Черной львинки в соотношении Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ В-2707 : Enterococcus faecium К-50 ВКПМ В-2579 : кутикулы куколок Черной львинки, составляющем 1:1:2, где в соотношении указаны объем культуральной жидкости бактерий и вес кутикул куколок Черной львинки, с последующим высушиванием при температуре 45°С в течение 12 ч до влажности 8%. Полученный заявленным способом кормовой пробиотик обеспечивает дополнительный прирост живой массы птицы, снижение кормозатрат и высокую сохранность птицы. 3 табл., 1 пр.

Способ получения пробиотика с кутикулой куколок Черной львинки для профилактики и лечения дисбактериоза птиц, включающий выращивание пробиотических бактерий Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ: В-2707 и Enterococcus faecium К-50 ВКПМ: В-2579, которые выращивают в течение 24 ч на обезжиренном молоке при температуре 37°С, затем смешивают микробные суспензии с термически обработанными при температуре 160°С в течение 2 ч кутикулами куколок Черной львинки в соотношении Lactobacillus acidophilus 20 ВКПМ В-2707 : Enterococcus faecium К-50 ВКПМ В-2579 : кутикулы куколок Черной львинки 1:1:2, где в соотношении указаны объем культуральной жидкости бактерий и вес кутикул куколок Черной львинки, с последующим высушиванием при температуре 45°С в течение 12 ч до влажности 8%.