ИНЪЕКЦИОННЫЕ КОМПОЗИЦИИ МИКРОЧАСТИЦ НАЛТРЕКСОНА ДЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K9/16 A61K9/50 A61K31/485 A61P25/36 

Область техники

Настоящей заявке испрашивается приоритет согласно 35 U.S.C §119(e) по заявке США № 62/745805, поданной 15 октября 2018 года, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки.

Настоящее изобретение относится к системам доставки налтрексона с замедленным высвобождением в форме микрочастиц для лечения заболеваний, которые облегчаются налтрексоном. Инъекционная система доставки в форме микрочастиц включает налтрексон, инкапсулированный в биодеградируемые микрочастицы, вводимые в фармацевтически приемлемом носителе.

Уровень техники

Злоупотребление психоактивными веществами представляет собой заболевание, которое остается распространенным в обществе. Cчитавшийся в основном внутригородской проблемой, как это было в ходе героиновой эпидемии 1960-х и 1970-х, вопрос злоупотребления опиоидов стал более острым за пределами городов, распространяясь от городов в села. Число лиц, злоупотребляющих психоактивными веществами, значительно возросло за последние несколько десятилетий, в частности, в отношении опиоидных наркотикотических средств, как в форме фармацевтических составов, так и в виде запрещенных уличных наркотиков.

Хотя пероральное суточное введения налтрексона является эффективным, его основной проблемой является очень низкое соблюдение или не соблюдение пациентом режима лечения. Было показано, что необходимость в введении каждый месяц имеет высокие показатели выбывания (25-36%) через 60 суток после начала лечения [Garbutt et al., Efficacy and tolerability of long-acting injectable naltrexone for alcohol dependence; a randomized controlled trial. JAMA. 293(13): 1617-1625, 2005; Hulse Improving clinical outcomes for naltrexone as a management of problem спирт use. Br. J. Clin. Pharmacol. 76(5) 632-641, 2013.] Таким образом, ожидается, что состав налтрексона более длительного действия улучшит соблюдение пациентом режима лечения, снизит вероятность рецидива и обеспечит более стабильные исходы для пациентов с течением времени.

Были охарактеризованы различные нагруженные налтрексоном микрочастицы с замедленным высвобождением. В Ehrich (US 7919499, Naltrexone long acting formulation and methods of use) и Brittain et al. (US 7279579 B2, Polymorphic forms of naltrexone) описаны составы налтрексона длительного действия в сополимере лактида и гликолида (PLGA), имеющие высвобождение налтрексона от приблизительно 310 мг до приблизительно 480 мг в течение приблизительно четырех недель. В Tice et al. (US 6306425 B1, Injectable naltrexone microsphere compositions and their use in reducing consumption of heroin and alcohol) описаны составы налтрексона замедленного высвобождения в матриксе из поли(D, L-лактида) (PDLL), высвобождающие приблизительно 10-40% в неделю от первоначального количества налтрексона в течение периода 4 недель. В Nuwayser (US 7157102 B1, Multi-layered microcapsules and method of preparing same) описаны многослойные мультикапсулы с высокой нагрузкой налтрексоном (>40% масс./масс.) для доставки в течение одного месяца. Все из описанных составов микрочастиц на основе налтрексона продемонстрировали максимальные профили высвобождения, составляющие приблизительно 4 недели или месяц. Таким образом, в данной области существует потребность в получении составов микрочастиц длительного действия для доставки в течение более чем 4 недель или месяца.

Были разработаны системы доставки налтрексона на основе имплантата с замедленным высвобождением длительного действия, которые осуществляют доставку в течение более чем 4 недель или одного месяца. Во всех из Kuo and Kuzma (US 8343528, Long term drug delivery devices with polyurethane based polymers and their manufacture), Saxena and Saxena (WO/2017/033208, Implantable naltrexone tablets) и O'Neil and Liu (US 7914804, Slow release pharmaceutical preparation and method of administering the same) описаны системы доставки налтрексона на основе имплантатов длительного действия. Эти составы на основе имплантатов, как правило, требуют амбулаторной хирургической процедуры для установки имплантата. В то время как эти системы в некоторых случаях могут демонстрировать более длительные профили высвобождения, чем составы налтрексона на основе микрочастиц, необходимость в хирургической процедуре и риски самоустранения пациента могут перевесить пользу.

Vivitrol^® (Alkermes, Inc.) в настоящее время назначается для предупреждения рецидива опиоидной зависимости после опиоидной детоксикации в течение приблизительно 7-10 дней. Рекомендованная доза составляет 380 мг, доставляемые внутримышечно каждые 4 недели или один раз в месяц. Инъекция состоит из полимерных микрочастиц, суспендированных в разбавителе (водный носитель), инъецируемым посредством иглы калибра 20 (G). Игла 20 G требуется вследствие проведения инъекции внутримышечно в ягодичную область, количества микрочастиц и разбавителя, и, наконец, размера микрочастиц и распределения размеров. Было описано, что микрочастицы имеют d_50,volume 108,49 мкм и d_{50,population} 58,46 мкм (Andhariya et al., Accelerated in vitro release testing methods of naltrexone loaded PLGA microspheres Int. J. Pharm. 520 (1-2) 79-85, 2017), где d_50,volume представляет собой величину, при которой 50% частиц по объему имеют диаметр более 108,49 мкм и 50% частиц по объему имеют диаметр менее 108,49 мкм. Величина d_{50,population} 58,46 указывает на то, что 50% количества частиц имеют диаметр более 58,46 мкм и 50% количества частиц имеют диаметр менее 58,46 мкм. Таким образом, в данной области существует потребность в получении нагруженных налтрексоном микрочастиц с меньшим размером микрочастиц в попытках обеспечить пациентам более низкий диаметр или более высокий калибр иглы для целей введения.

Было показано, что сывороточные уровни налтрексона 2,8 нг/мл были достаточными для блокированиия доз чистого диаморфина вплоть до 500 мг у двух пациентов (C. Brewer. Serum naltrexone and 6-beta-naltrexol levels from naltrexone implants can block very large amounts of heroin: a report of two cases. Addict. Biol., 7:321-323, 2002), 2,4 нг/мл полностью противодействовали 25 мг героина (Verebey et al., Naltrexone: Disposition, metabolism, and effects after acute and chronic dosing. Clin. Pharmacol. Ther., 20:315-328, 1976), и было установлено, что уровни 1-2 нг/мл являются достаточными для обеспечения защиты от летальной передозировки опиоидами (Hulse et al., Reducing hospital presentations for opioid overdose in patients treated with sustained release naltrexone implants. Drug Alcohol Depend., 79:351-357, 2005 и Comer et al. Depot naltrexone: Long-lasting antagonism of the effects of heroin in human. Psychopharmacology, 159:351-360, 2002). В пилотном испытании Vivitrex^® перед второй инъекцией средняя минимальная концентрация налтрексона в плазме составляла 1,23 нг/мл (±0,83 нг/мл), и она оставалась относительно постоянной на протяжении остальной части испытания; средний минимальный уровень налтрексона составлял 1,33 нг/мл (±1,74 нг/мл) (Johnson et al., A pilot evaluation of the safety and tolerability of repeat dose administration of long-acting injectable naltrexone (Vivitrex^®) in patients with alcohol dependence. Alcohol Clin Exp Res. 28:1356-1361, 2004). В модели на крысах было показано, что концентрация налтрексона в плазме ~1-2 нг/мл является эффективной в "испытании индуцируемой морфином аналгезии на горячей пластине" (The preclinical development of Medisorb Naltrexone, a once a month long-acting injection for the treatment of alcohol dependence. Frontiers in Bioscience 10: 643-655, 2005). Таким образом, в данной области существует потребность в достижении быстрых терапевтических уровней налтрексона с минимальным первоначальным скачковым высвобождением, с минимизированной максимальной концентрацией, тем самым обеспечивая более стабильные терапевтические уровни налтрексона в течение более чем одного месяца, и посредством дозированной формы в инъекционном формате.

Более низкие уровни налтрексона, называемые налтрексоном в низкой дозе (LDN) (от 1 до 5 мг перорально каждые сутки), налтрексоном в очень низкой дозе (VLDN) (от 1 мг до 1 мг) и налтрексоном в сверхнизкой дозе (ULDN) (менее 1 мг) продемонстрировали фармакодинамические ответы, отличные от ответов классически назначаемой дозы 50 мг каждые сутки перорально (Toljan and Vrooman, Low-dose naltrexone (LDN) - Review of therapeutic utilization, Med Sci. 6, 82, 2018). LDN выступает в качестве глиального модулятора, обеспечивая потенциальную пользу при таких состояниях, как фибромиалгия, болезнь Крона, рассеянный склероз, комплексный регионарный болевой синдром и злокачественная опухоль. Механизм ULDN, по-видимому, связан с бимодальным клеточным ответом на опиоиды, где их используют в послеоперационном контроле обезболивания, уменьшая общее количество опиоидов. Таким образом, в данной области существует потребность в достижении стабильных терапевтических концентраций для низких уровней доз налтрексона (таких как LDN, VLDN, ULDN и т.д.).

Для составов, имеющих желаемые свойства, имеется множество ограничений: высвобождение лекарственного средства должно происходить в течение пролонгированного периода времени, нагрузка лекарственным средством должна быть достаточной, полимерный матрикс должен быть биодеградируемым и биосовместимым, остаточные химические вещества и растворители должны быть на уровне ниже максимального приемлемого уровня и микросферы должны быть достаточно мелкими и способными проходить через удобные для пациентов иглы, среди прочих. Физико-химические свойства микрочастиц зависят от свойств лекарственного средства, свойств полимерного матрикса, свойств модификаторов высвобождения, а также стадий переработки, посредством которых получают микрочастицы.

Были описаны различные способы инкапсулирования соединений в форме микрочастиц. В этих способах лекарственное средство или другие активные соединения, как правило, растворяют, диспергируют или эмульгируют с использованием мешалок, гомогенизаторов или других элементов динамического перемешивания в растворителе, обычно органическом растворителе, с получением раствора, содержащего материал матрикса. Затем органический растворитель удаляют из материала лекарственное средство-матрикс в ходе экстракции и/или дополнительных стадий промывания, и после этого получают продукт в форме микрочастиц. Многие параметры, используемые для получения микрочастиц, влияют на свойства полученных микрочастиц.

В данной области существует потребность в получении микрочастиц, которые могут высвобождать налтрексон в течение более чем одного месяца. Настоящее изобретение, описание которого полностью приводится ниже, удовлетворяет потребность в составах, обеспечивающих высвобождение налтрексона в течение более чем одного месяца.

Описание чертежей

На фиг. 1 представлена блок-схема, иллюстрирующая один из вариантов осуществления способа получения микрочастиц.

На фиг. 2. проиллюстрирован профиль высвобождения in vitro (фиг. 2A) и профили фармакокинетики in vivo (фиг. 2B) составов примера 1.

На фиг. 3. проиллюстрировано высвобождение in vitro налтрексона из составов с нагрузкой лекарственным средством в диапазоне 37~40% (масс./масс.) из примера 5.

На фиг. 4. проиллюстрированы профили фармакокинетики in vivo составов 12-3 (фиг. 4A), 12-4 (фиг. 4B), 12-5 (фиг. 4C) и 12-7 (фиг. 4D), приведенных в таблице 10 примера 12.

Способ осуществления изобретения

Настоящее изобретение относится к инъекционным составам налтрексона в форме частиц с контролируемым высвобождением (или с замедленным высвобождением), содержащим налтрексон и биодеградируемый полимер, такой как сополимер лактида и гликолида, также известный как сополимер молочной и гликолевой кислоты (PLGA), в течение более чем одного месяца. Микрочастицы (микросферы) можно без труда инъецировать подкожно или внутримышечно. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу получения инъекционных микрочастиц, имеющих уникальные профили высвобождения налтрексона в течение более чем 4 недель, предпочтительно от приблизительно 8 недель до приблизительно 12 недель, более предпочтительно в течение вплоть до 100 дней. Микрочастицы получают посредством экстракции растворителем/упаривания эмульсии типа "масло в воде", причем дисперсная масляная фаза представляет собой растворы, полученные с использованием органического растворителя, включающие в основном налтрексон и биодеградируемый биосовместимый полимер.

Варианты осуществления изобретения описаны подробно, включая определенные предпочтительные и необязательные варианты, так чтобы различные аспекты изобретения могли бить полностью понятны и восприняты. В настоящем описании описаны инъекционнные составы микрочастиц налтрексона, которые обеспечивают контролируемое высвобождение активного вещества в течение более чем 4 недель, в частности, в течение от приблизительно 8 недель до приблизительно 12 недель (или 100 дней).

Составы длительного действия можно получать посредством распылительной сушки, способов на основе эмульсий, экструзии, способов на основе микрообработки, коацервации и других способов изготовления полимерных микрочастиц с лекарственным средством, которые обладают свойствами контролируемого высвобождения.

В одном варианте осуществления предусматривается способ формирования микрочастиц для применения в качестве средств доставки с контролируемым высвобождением. Способ получения инъекционного состава микрочастиц включает: (a) смешение первой фазы, включающей поливиниловый спирт (PVA) и первый растворитель, и второй фазы, включающей биодеградируемый полимер, налтрексон и второй растворитель, с получением смеси; и (b) проведение процесса экстракции смеси с водой или водным раствором с получением микрочастиц. Предпочтительно, способ включает процесс сушки микрочастиц после процесса экстракции. В другом варианте осуществления способ необязательно включает (c) проведение дополнительного процесса экстракции микрочастиц с водным раствором этанола после (b) проведения процесса экстракции. Когда способ включает дополнительный процесс экстракцит, процесс сушки микрочастиц проводят до и/или после дополнительного процесса экстракции. Например, сушку частиц проводят после (b) проведения процесса экстракции, после (c) проведения дополнительного процесса экстракции, или после каждого из (b) и (c).

Способы согласно вариантам осуществления настоящего изобретения описаны подробно с отсылкой на фиг. 1. В настоящем описании использование термина "первый" или "второй" предназначено только для более удобного объяснения настоящего изобретения, однако эти термины не отражают или не подразумевают, что существует конкретный порядок или степень важности между ними. Кроме того, форма единственного числа для выражения на протяжении настоящего описания включает значение множественного числа, если контекст явно не указывает на то, что существует различие.

Смешение первой фазы и второй фазы проводят в любом порядке. В одном аспекте, но не ограничиваясь ими, первую фазу можно добавлять сверху на вторую фазу, а затем смешивать их с получением смеси. Этот процесс может представлять собой эмульгирование, и смесь представляет собой эмульсию типа "масло-в-воде" из полимера, налтрексона и одного или нескольких растворителей. Масляные частицы в смеси (эмульсии) становятся микрочастицами посредством последующих процессов в рамках настоящего изобретения. Смешение может представлять собой процесс для формирования микрочастиц желаемого диапазона размеров, который может зависеть от условий смешения, таких как скорость вращения, мощность и т.п.

Первая фаза также может быть названа непрерывной фазой в настоящем описании. Первая фаза содержит поливиниловый спирт и первый растворитель, где первый растворитель включает по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из воды, дихлорметана (DCM), бензилового спирта (BA) и этилацетата (EA). В одном аспекте первый растворитель должен содержать воду. Например, первый растворитель может представлять собой воду и первая фаза может быть образована посредством добавления PVA в воду.

В другом аспекте первый растворитель может дополнительно включать органический растворитель, который представляет собой по меньшей мере один растворитель, выбранный из группы, состоящей из дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата. Когда первый растворитель содержит воду и один или несколько органических растворителей, органический растворитель можно смешивать с поливиниловым спиртом и водой при получении первой фазы. В других аспектах, когда первый растворитель включает воду и один или несколько органических растворителей органический растворитель можно смешивать с раствором, включающим поливиниловый спирт и воду, непосредственно после смешения поливинилового спирта и воды при получении первой фазы. В другом аспекте, когда первый растворитель содержит воду и один или несколько органических растворителей, органический растворитель можно смешивать с раствором, содержащим поливиниловый спирт и воду, непосредственно перед смешением первой фазы со второй фазой. Предпочтительно, один или несколько органических растворителей можно смешивать с раствором, содержащим поливиниловый спирт и воду, непосредственно перед смешением со второй фазой.

В одном аспекте непрерывная фаза (первая фаза) содержит приблизительно 0,1~5% (масс./об.) поливинилового спирта (PVA) в воде. В другом аспекте непрерывная фаза, кроме того, может содержать от 0 до 1,8% (масс./об.) дихлорметана (DCM) и/или от 0 до 3,3% (масс./об.) бензилового спирта.

Вторая фаза также может быть названа органической фазой в настоящем описании. Вторая фаза включает биодеградируемый полимер, налтрексон и второй растворитель, где второй растворитель включает по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата. В одном аспекте второй растворитель включает дихлорметан и бензиловый спирт, этилацетат или их комбинацию. В другом аспекте для получения микрочастиц вторая фаза включает приблизительно 1~40% (масс./масс.) биодеградируемого полимера, растворенного в органическом растворителе, таком как дихлорметан (DCM), также известный как метиленхлорид, и 1~50% (масс./масс.) налтрексона, растворенного в другом органическом растворителе, таком как бензиловый спирт. Налтрексон можно использовать в способе в форме свободного основания, соли, сольвата, сокристалла или их комбинаций.

Биосовместимый биодеградируемый полимер может представлять собой гомополимер, сополимер или терполимер, или повторяющиеся мономерные элементы, связанные группами, такими как сложноэфирные группы. Полимер может представлять собой полиэфир, который может состоять из элементов, представляющих собой один или несколько остатков гидроксикарбоновой кислоты, где распределение элементов может быть случайным, блокированным, парным или последовательным. Когда биодеградируемый полимер представляет собой полиэфир, полиэфиры включают полилактид, полигликолид и PLGA. В одном аспекте биодеградируемый полимер представляет собой полилактид, PLGA или их комбинации. Предпочтительно подходящий биодеградируемый полиэфир имеет (молярное) соотношение лактид:гликолид (L:G) от 50:50 до 100:0, предпочтительно от 65:35 до 90:10, более предпочтительно от 75:25 до 85:15. Предпочтительно подходящий биодеградируемый полиэфир представляет собой PLGA от 60:40 до 95:5. Более предпочтительно подходящий биодеградируемый представляет собой PLGA от 70:30 до 90:10. Еще более предпочтительно биодеградируемый полиэфир представляет собой PLGA от 75: 25 до 85:15. Наиболее предпочтительно биодеградируемый полиэфир представляет собой PLGA 85:15. В одном аспекте биодеградируемый полимер имеет среднюю молекулярную массу от 50000 до 150000 Дальтон.

Смесь (эмульсию) подвергают подходящему процессу экстракции растворителем с получением микрочастиц, в конечном итоге снижая уровни растворителя до приемлемого уровня. Термины "экстракт", "проведение экстракции" и "экстракция" в настоящем описании относятся к приведению смеси или эмульсии, содержащей поливиниловый спирт, биодеградируемый полимер, налтрексон и один или несколько растворителей, в контакт с экстракционной фазой. Один или несколько органических растворителей удаляют из смесей масляных частиц (эмульсии) в ходе процесса экстракции растворителем, а затем получают микрочастицы, содержащие полимер и налтрексон.

Процесс экстракции растворителем включает по меньшей мере один процесс экстракции. Процесс экстракции (сначала) проводят для смеси (эмульсии) с экстракционной фазой с получением микрочастиц, где экстракционная фаза представляет собой воду или водный раствор. Водный раствор может включать по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из поливинилового спирта, дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата. Предпочтительно, экстракционная фаза может представлять собой воду с 0-3% (масс./об.) по меньшей мере одним из компонентов, выбранным из группы, состоящей из поливинилового спирта, дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата. Более предпочтительно, экстракционная фаза может представлять собой воду с 0~2% (масс./об.) поливинилового спирта, 0~1,8% (масс./об.) дихлорметана, 0~2% (масс./об.) бензилового спирта или 0~3% (масс./об.) этилацетата.

Когда процесс экстракции растворителем включает два процесса экстракции, дополнительный (второй) экстракционный процесс можно проводить для микрочастиц с водным раствором этанола (его также называют этанольной экстракционной фазой или раствором этанола в настоящем описании). Этанольная экстракционная фаза представляет собой водный раствор приблизительно 1~50% (об./об.) этанола.

Температуры каждого процесса экстракции могут находиться в диапазоне приблизительно 4~30°C. Предпочтительно первый процесс (водной) экстракции можно проводить в диапазоне температур приблизительно от 4 до 10°C. Предпочтительно, второй процесс (этанольной) экстракции можно проводить в диапазоне температур приблизительно от 20 до 30°C. Время экстракции может находиться в диапазоне приблизительно от 2 до 8 часов.

В одном аспекте после проведения процесса экстракции растворителем необязательно проводят сушку микрочастиц. Сушка может проводиться в вакууме при температуре в диапазоне приблизительно 4~30°C или посредством других процессов сушки, таких как лиофилизация. Когда процесс экстракции растворителем включает два процесса экстракции, между двумя процессами экстракции можно необязательно проводить дополнительный процесс сушки. Промежуточную сушку можно проводить в вакууме в диапазоне температур приблизительно 4~30°C.

Перед каждым процессом сушки способ включает процесс сбора микрочастиц из смеси (эмульсии), раствора, дисперсии и т.д. Процесс сбора проводят с использованием сит, имеющих различные размеры пор. Размеры пор сит находятся в диапазоне 10-200 мкм.

Способ также необязательно может включать процесс ополаскивания после процесса экстракции растворителем. Когда способ включает процесс сбора, процесс ополаскивания можно проводить после сбора, но до сушки. Процесс ополаскивания может представлять собой процесс удаления остатков, таких как растворители, не вступившие в реакцию вещества и т.д., в рамках настоящего изобретения.

В одном варианте осуществления предусматривается инъекционный состав микрочастиц. В одном аспекте инъекционный состав микрочастиц получают способом по настоящему изобретению.

Инъекционный состав микрочастиц по настоящему изобретению содержит микрочастицы, включающие налтрексон и биодеградируемый полимер. Микрочастицы имеют профиль замедленного высвобождения налтрексона. В одном аспекте замедленное высвобождение налтрексона происходит в течение более чем 4 недель и вплоть до 100 дней. В другом аспекте замеленное высвобождение налтрексона происходит в течение от приблизительно 8 недель до приблизительно 12 недель. Микрочастица содержит приблизительно 20-40% (масс./масс.) налтрексона. Налтрексон может иметь форму свободного основания, соли, сольвата, сокристалла или их комбинаций.

Биодеградируемый полимер содержит полилактид, сополимер лактида и гликолида или их комбинации. Предпочтительно соотношение (молярное) лактид: гликолид (L:G) для биодеградируемого полимера может составлять от 50:50 до 100:0, предпочтительно от 65:35 до 90:10, более предпочтительно от 75:25 до 85:15. Молекулярная масса биодеградируемого полимера может составлять от 50000 Дальтон до 150000 Дальтон.

В предпочтительном варианте осуществления инъекционные микрочастицы налтрексона содержат налтрексон в PLGA 85:15 с молекулярной массой по меньшей мере 50000 Дальтон, такие как микрочастицы, описанные ниже в примерах. Предпочтительно молекулярная масса PLGA составляет от 50000 Дальтон до 150000 Дальтон.

В одном предпочтительном варианте осуществления налтрексон присутствует в составе длительного действия в количестве по меньшей мере приблизительно 20% по массе, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 30% по массе, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 35% по массе, как например, приблизительно 40% по массе налтрексона в расчете на общую массу состава. В одном аспекте налтрексон присутствует в составе длительного действия в количестве приблизительно 20-40% (масс./масс.).

Микрочастицы можно получать в диапазоне распределения размеров для подкожной и/или внутримышечной инъекции с использованием игл тоньше 20 G. Диаметр, форму, морфологию и пористость частиц можно модифицировать так, чтобы контролировать характеристики высвобождения и позволить прохождение через шприц и иглу. Нагруженные налтрексоном микрочастицы могут иметь распределение размера частиц в диапазоне от 1 до 200 мкм. Более предпочтительно, распределение размера частиц может иметь диапазон приблизительно 10~125 мкм. Еще более предпочтительно распределение размера частиц может иметь диапазон приблизительно 25~100 мкм. В одном аспекте микрочастицы имеют средний размер частиц в диапазоне от 25 до 125 мкм.

В одном варианте осуществления предусматривается способ инъекции биодеградируемых микрочастиц. Способ включает инъекцию текучей композиции, содержащей биодеградируемые микрочастицы в приемлемом (биосовместимом) носителе. Приемлемый (биосовместимый) носитель включает носитель на водной основе, носитель на масляной основе или их комбинацию. Предпочтительно, приемлемым носителем является система на водной основе. Эта система на водной основе содержит модифицирующее тоничность средство, такое как хлорид натрия, усиливающее вязкость вещество, такое как натрий карбоксиметилцеллюлоза, смачивающее вещество, такое как полисорбат, или их комбинации. В одном аспекте система на водной основе может состоять из смачивающих веществ, таких как полисорбат 20, и усиливающих вязкость веществ, таких как натрий карбоксиметилцеллюлоза, гиалуроновая кислота и т.п. Другим приемлемым носителем может быть носитель на масляной основе, который также может выступать в качестве ограничителя скорости поглощения воды и/или диффузионного барьера, таким образом, изменяя скорость высвобождения либо путем ограничения первоначального высвобождения, либо путем снижения скорости стационарного состояния. Биосовместимый масляный носитель включает арахисовое масло, касторовое масло, кунжутное масло, подсолнечное масло, соевое масло, кукурузное масло, хлопковое масло или любую их комбинацию. В одном аспекте подходящий приемлемый носитель может представлять собой комбинацию носителя на водной основе и носителя на масляной основе. Микрочастицы можно вводить подкожно или внутримышечно.

В одном варианте осуществления состав с контролируемым высвобождением обеспечивает терапевтически полезные количества налтрексона у индивидуума в течение периода, составляющего по меньшей мере 4 недели, предпочтительно по меньшей мере 6 недель, более предпочтительно по меньшей мере 8 или более недель.

В одном предпочтительном варианте осуществления длительность действия налтрексона при использовании той же дозы (380 мг налтрексона), что и в Vivitrol, обеспечивает терапевтически полезные количества налтрексона в течение более чем 4 недель, предпочтительно в течение 6 недель, более предпочтительно в течение 8 недель, и еще более предпочтительно в течение 12 недель.

В одном варианте осуществления предусматривается способ лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировкой опиоидами, алкогольной зависимостью или болью, посредством налтрексона или метаболита. Способ включает введение пациенту (индивидууму), нуждающемуся в таком лечении или предупреждении, эффективного количества микрочастиц, содержащих налтрексон, состава микрочастиц, содержащего микрочастицы, или композиции, содержащей микрочастицы или состав микрочастиц.

В другом варианте осуществления предусматривается композиция, содержащая инъекционный состав микрочастиц. Композиция может содержать биосовместимый носитель, где биосовместимый носитель включает носитель на водной основе, носитель на масляной основе или оба из них. В одном аспекте композицию составляют для инъекции(й).

В одном варианте осуществления предусматривается композиция, содержащая инъекционный состав микрочастиц для применения для лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировкой опиоидами, алкогольной зависимостью или болью. Композиция может содержать биосовместимый носитель, где биосовместимый носитель включает носитель на водной основе, носитель на масляной основе или оба из них. В одном аспекте композицию составляют для инъекции(й).

В других вариантах осуществления предусматривается применение инъекционного состава микрочастиц для лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировками опиоидами, злоупотреблением алкоголем или болью.

В другом варианте осуществления предусматривается применение инъекционного состава микрочастиц для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировками опиоидами, алкогольной зависимостью или болью.

Профиль высвобождения может варьироваться в зависимости от соотношения L:G, молекулярной массы, концевой группы и полидисперсности биодеградируемого биосовместимого полимера PLGA, остаточного содержания растворителя, способа производства, а также других факторов. Во-вторых, профиль высвобождения может варьироваться между условиями in vitro и in vivo вследствие таких факторов, как температурные различия между экспериментами in vitro и in vivo, различия между средой высвобождения и интерстициальной жидкостью, и/или носитель, используемый для введения.

Вследствие предоставления микрочастиц, которые имеют способность к высвобождению в течение более чем 4 недель, в частности, приблизительно от 8 до 12 недель (или 100 суток), индивидуумам будет проводиться меньше инъекций и будет требоваться меньшей посещений кабинета врача. Микрочастицы по настоящему изобретению демонстрируют образцовое замедленное высвобождение налтрексона в условиях как in vivo, так и in vitro. Для обеспечения лучшего соблюдения пациентом режима лечения можно модифицировать размер микрочастиц и/или количество налтрексона.

Следующие примеры приведены в качестве иллюстрации и не должны истолковываться как ограничение.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

Эффект переработки PLGA 75:25

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г поливинилового спирта (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 75:25 (Resomer RG756S) и 267 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 1,333 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл, или 500 мг PLGA 75:25 (Resomer RG756S) и 294 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 1,333 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляцонном флаконе объемом 20 мл. 10 мл непрерывной фазы добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл 1% (масс./об.) PVA в воде, и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удержанный на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Эти два состава оценивали в фармакокинетических испытаниях на крысах Sprague-Dawley в дозе 38 мг/кг.

Конечная нагрузка лекарственным средством и остаточное содержание бензилового спирта представлены в таблице 1. Оба состава обеспечили эффективность инкапсулирования приблизительно 90%, но с высвобождением только приблизительно в течение 4-5 недель, причем более высокая нагрузка лекарственным средством приводила к более быстрой кинетике. Уровень корреляции in vitro-in vivo указан на фиг. 2 для F.1-1, в то время как тест in vitro прогнозирует более быстрый ответ in vivo, чем ответ, наблюдаемый для F.1-2.

Таблица 1. Обобщение составления для примера 1

Состав (F) Начальная масса налтрексона (мг) Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточный BA (% масс./масс.) EE (%) F.1-1 267 31,2 1,31 89,7 F.1-2 294 33,5 1,51 90,6

Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) указывает на количество налтрексона, содержащееся в микрочастицах, и EE (%) указывает на конечное количество оставшегося налтрексона по сравнению с начальным количеством налтрексона при получении микрочастиц.

Пример 2

Эффект молекулярной массы и поставщика PLGA 75:25

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г поливинилового спирта (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 75:25 (Resomer RG756S) и 267 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 1,333 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. 10 мл непрерывной фазы добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл деионизированной воды и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удержанный на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством и остаточное содержание бензилового спирта представлены в таблице 2.

Resomer RG 750 и 756 приводили к сходной нагрузке лекарственным средством и профилям высвобождения, вероятно вследствие сходной присущей вязкости, причем RG 750 имел более широкий диапазон. Resomer RG 755 и Lactel B6007-1, с практически сходными присущими характеристиками вязкости также приводили сходной нагрузке лекарственным средством и профилям высвобождения. Хотя и вызывая сходную нагрузку лекарственным средством с другими протестированными PLGA, Lactel B6007-2 приводил к профилю высвобождения со значительно более быстрой кинетикой. Составы с F.2-1 по F.2-5 обеспечивали профили высвобождения лекарственного средства в течение приблизительно 30-35 суток.

Таблица 2. Обобщение составления для составов, изготовленных с 75:25 PLGA

Состав (F) PLGA Присущая вязкость (дл/г) Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточный BA (% масс./масс.) EE (%) F.2-1 Resomer RG 750 0,8-1,2 29,2 2,86 83,8 F.2-2 Resomer RG 755 0,5-0,7 28,9 1,73 83,0 F.2-3 Resomer RG 756 0,71-1,0 29,6 2,73 85,0 F.2-4 Lactel B6007-1 0,55-0,75 29,3 1,95 84,2 F.2-5 Lactel B6007-2 0,8-1,2 29,6 1,70 85,0

Пример 3

Получение микрочастиц налтрексона: состав 3

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г поливинилового спирта (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S Evonik Cyro, Parsippany, NJ) и 294 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 2,0 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), и 467 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с DCM и 10 мл непрерывной фазы с 1,8% (масс./об.) DCM добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл деионизированной воды с 0,5% масс./об. DCM и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удержанный на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством составляла 28,1% (75,9% EE) и остаточное количество бензилового спирта составляло 0,55%. Профиль высвобождения лекарственного средства in vitro практически нулевую кинетику высвобождения в течение приблизительно 50 суток.

Пример 4

Получение микрочастиц налтрексона: состав 4

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S Evonik Cyro, Parsippany, NJ) и 294 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 2,0 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с DCM и 10 мл непрерывной фазы с 1,8% (масс./об.) DCM добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл деионизированной воды с 0,66% масс./об. DCM, при 4°C. Затем микрочастицам позволяли перемешаться в течение 8 ч, а затем собирали с использованием 23-мкм сита. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удержанный на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125-мкм сито, собирали на 23-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством составляла 21,7% (58,6% EE) и остаточное количество бензилового спирта составляло 0,83%. Более высокое количество (0,66% (масс./об.) DCM в экстракционной фазе и более высокое исходное содержание бензилового спирта в органической фазе значительно снижало нагрузку лекарственным средством в составе. Профиль высвобождения лекарственного средства in vitro приводил к кинетике высвобождения практически нулевого порядка в течение приблизительно 60 суток.

Пример 5

Получение микрочастиц налтрексона: эффект растворителя в эмульгирующей среде

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 1,0 г PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 818 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC), растворенного в 4,0 г DCM и 1,908 г бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл, или 1,0 г PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 818 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC), растворенного в 4,0 г DCM и 1,04 г бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. 15 мл непрерывной фазы далее смешивали с DCM или бензиловым спиртом (ВА) (описано в таблице 3) и непрерывную фазу добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA Т25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в 7 60 мл экстракционной фазы (описанной в таблице 3) и перемешивали при 4°С в течение 4 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удержанный на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°С и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 400 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°С для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125- мкм сито, собирали на 23-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством и остаточное содержание бензилового спирта могут быть найдены в таблице 3. Повышение остаточного содержания бензилового спирта наблюдают в случае большего исходного количества бензилового спирта. Может быть достигнута эффективность инкапсулирования 80-90%.

Дихлорметан в экстракционной среде приводит к более низкому остаточному содержанию бензилового спирта для этого примера, хотя налтрексон также утрачивается в ходе этого процесса. Как оказалось, кривые высвобождения лекарственного средства не демонстрируют отличий в высвобождении между 3,3% ВА (бензиловый спирт) в 1% PVA против 1% PVA отдельно. 1,8% DCM в 1% PVA первоначально демонстрировал несколько более низкую скорость высвобождения вследствие более низкой нагрузки лекарственным средством.

Таблица 3. Эффекты композиций непрерывной фазы и экстракционной фазы на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (ВА) и эффективность инкапсулирования (ЕЕ).

Пример 6

Получение микрочастиц налтрексона: эффект соотношения масло/вода

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 0, 630 г PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 370 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC), растворенного в 3,15 г этилацетата (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) и 1,17 г бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с этилацетатом, и 20 мл непрерывной органической фазы с 6,525% (масс./об.) этилацетата эмульгировали с органической фазой при 4000 или 7000 об/мин в течение 30 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 250 мл 2,5% (масс./об.) этилацетата в воде и перемешивали при 4°C в течение 2 или 4 ч. Затем микрочастицы собирали с помощью 10-мкм сита и сушили при 4°C в вакууме в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 150 мл a 25% раствора (об./об.) этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 150-мкм и собирали на 10-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством и остаточное содержание бензилового спирта могут быть найдены в таблице 4.

Эффективность инкапсулирования оказалась более низкой, чем в составах, полученных в сходных условиях с дихлорметаном. Минимальные отличия наблюдают в профилях высвобождения in vitro для трех составов, причем все составы имели длительность действия немного более чем приблизительно 55 суток.

Таблица 4. Эффекты соотношения O/W, скорости гомогенизации и времени экстракции растворителем на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (BA) и эффективность инкапсулирования (EE).

Состав (F) Соотношение O/W (об./об.) Скорость гомогенизации (об/мин) Время экстракции растворителем (ч) Остаточное содержание BA (% масс./масс.) EE (%) F.6-1 1/2,82 4000 4 0,72 74,3 F.6-2 1/4,35 4000 2 0,43 67,6 F.6-3 1/4,35 7000 4 0,17 62,7

Пример 7.

Определение молекулярной массы PLGA с использованием четырехкомпонентного детектора гель-фильтрации

Образцы Resomer RG 858S и Lactel B6006-2P растворяли в ацетоне до концентрации приблизительно 2,5 мг/мл, фильтровали через 0,22-мкм фильтр из PTFE и собирали в емкость автоматического пробоотборника ВЭЖХ для инжектирования. Образцы анализировали с использованием GPC-4D. Система GPC-4D состояла из Agilent 1260 Infinity II HPLC, подсоединенной к Dawn Heleos II (MALLS), соединенный с Dynapro Nanostar DLS через оптический кабель, Optilab T-rEX (детектор RI) и вискозиметром Viscostar III, работающим с использованием программного обеспечения Astra 7. Анализ GPC проводили путем инжектирования 50,0 мкл раствора полимера. Разделение проводили с использованием колонки с линейным градиентом (Tosoh Bioscience LLC, TSKgel GMHHR-L, 7,8 мм × 30 см) при скорости потока ацетона 0,6 мл/мин с временем пробега 60 минут. Молекулярная масса образцов полимеров представлена в таблице 5.

Таблица 5. M_n (среднечисловая молекулярная масса), M_w (средневзвешенная молекулярная масса), M_z (верхняя средняя молекулярная масса), M_avg (средняя молекулярная масса) и полидисперсность

Эксципиент (E) Полимер Номер партии M_n (кДа) M_w (кДа) M_z (кДа) M_avg (кДа) Полидисперсность
(M_W/M_N) E.7-1 Resomer RG 858S D161000568 120,15 141,07 171,75 121,95 1,17 E.7-2 Lactel B6006-2P A17-028 66,01 78,19 94,40 65,41 1,19

Пример 8

Получение микрочастиц налтрексона: эффект молекулярной массы и времени экстракции для 85:15

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S (IV 1,3-1,7 дл/г, партия номер D161000568, Evonik Cyro, Parsippany, NJ) или Lactel B6006-2P (IV 0,76-0,85 дл/г, партия номер A17-068, Durect, Cupertino, CA)) и 267 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC), растворенного в 2,0 г DCM и 623 мг бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с DCM, и 10 мл непрерывной фазы, содержавшей 1,8% (масс./об.) DCM, добавляли к органической фазе и эмульгировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу (380 мл 0,5% (масс./об.) дихлорметан в воде) и перемешивали при 4°C в течение 2, 4 или 7 ч. Затем микрочастицы собирали с помощью 25-мкм сита и сушили при 4°C в вакууме в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления PVA и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125-мкм сито и собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта и эффективность инкапсулирования могут быть найдены в таблице 6. Минимальные эффекты времени экстракции были отмечены между двумя типами PLGA и их соответствующей нагрузкой лекарственным средством. Остаточное содержание бензилового спирта оказалось несколько более высоким для партий Lactel против партий Resomer. Как оказалось, время экстракции не имеет эффекта на скорость высвобождения, в то время как различия в профилях высвобождения между двумя полимерами очевидны. Оказалось, что партии Resomer имеют более короткую lag-фазу относительно партий Lactel, что приводит к более устойчивому высвобождению в течение 60 суток in vitro по сравнению с партиями Lactel.

Таблица 6. Эффекты PLGA и времени экстракции на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (BA) и эффективность инкапсулирования (EE).

Состав (F) PLGA Время экстракции (ч) Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточное содержание BA (% масс./масс.) EE (%) F.8-1 Resomer КП 858S 2 28,0 0,88 80,5 F.8-2 4 27,7 0,88 79,6 F.8-3 7 28,6 0,89 82,2 F.8-4 Lactel B6006-2 2 27,5 1,16 79,0 F.8-5 4 28,1 1,06 80,7 F.8-6 7 28,5 1,12 81,9

Пример 9

Получение микрочастиц налтрексона: эффект отсутствия промывания этанолом против промывания 25% этанолом

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 267 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC), растворенного в 2,0 г of DCM и 623 мг бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с DCM, и 10 мл непрерывной фазы, содержавшей 1,8% (масс./об.) DCM, добавляли к органической фазе и эмульгировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу (380 мл 0,5% (масс./об.) DCM в воде) и перемешивали при 4°C в течение 2 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита и сушили при 4°C в вакууме в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали в 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления PVA и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц или пропускали через 125-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125-мкм сито и собирали на 25-мкм сите и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта и эффективность инкапсулиирования могут быть найдены в таблице 7. Промывание этанолом приводило к микрочастицам, которые имели более низкое остаточное содержание бензилового спирта и более высокую нагрузку лекарственным средством - вероятно вследствие экстракции бензиловым спиртом. Первоначальные 10 суток промывания являются сходными между промытыми и не промытыми частицами, однако после 10 суток скорость была более высокой для непромытых частиц против промытых частиц.

Таблица 7. Эффекты PLGA и времени экстракции на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (BA) и эффективность инкапсулирования (EE).

Состав (F) Процесс Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточное содержание BA (% масс./масс.) EE (%) F.9-1 Без промывания этанолом 27,9 1,71 80,2 F.9-2 С промыванием 25% этанолом 28,3 0,86 81,3

Пример 10

Получение микрочастиц налтрексона: эффект концентрации этанола для промывания

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 305 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC) растворенного в 2,0 г of DCM и 467 мг бензилового спирта, в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с DCM, и 10 мл непрерывной органической фазы с 1,8% (масс./об.) DCM добавляли к органической фазе и эмульгировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу (380 мл с 0,33% (масс./об.) DCM в воде) и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Затем микрочастицы собирали с помощью 25-мкм сита и сушили при 4°C в вакууме в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 6,25, 12,5, 25 или 50% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления PVA и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125-мкм сито и собирали на 25-мкм сите и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Конечная нагрузка лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта и эффективность иннкапсулирования представлены в таблице 8. Нагрузка лекарственным средством для 6,25, 12,5 и 25% (об./об.) не приводила как каким-либо значимым отличиям или тенденции. Остаточное содержание бензилового спирта снижается при повышении концентрации этанола для промывания для этих условий. При 50% (об./об.) значительное количество налтрексона утрачивается в ходе промывания, и высвобождение налтрексона является значительно более быстрым относительно условий 6,25, 12,5 и 25%.

Таблица 8. Эффекты концентрации этанола для промывания на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (BA) и эффективность инкапсулирования (EE).

Состав (F) Концентрация этанола для промывания (% об./об.) Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточное содержание BA (% масс./масс.) EE (%) F.10-1 6,25 29,5 0,77 77,8 F.10-2 12,5 29,2 0,67 77,0 F.10-3 25 29,4 0,41 77,5 F.10-4 30 23,9 0,00 63,1

Пример 11.

Получение микрочастиц налтрексона: эффект температуры промывания этанолом

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г PVA и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) и 294 мг свободного основания налтрексона (SpecGx, LLC) растворенного в 2,0 г of DCM и 467 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с дихлорметаном, и 10 мл непрерывной органической фазы с 1,8% (масс./об.) дихлорметаном добавляли к органической фазе и эмульгировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу (380 мл 1% (масс./об.) PVA в воде) и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита и сушили при 4°C в вакууме в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 4°C или 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы пропускали через 125-мкм сито и собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч. Конечная нагрузка лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта и эффективность инкапсулирования могут быть найдены в таблице 9.

Промывание этанолом при 22°C приводило к микрочастицам, которые имели более низкое остаточное содержание бензилового спирта и более высокую нагрузку лекарственным средством, вероятно вследствие экстракции бензиловым спиртом. Высвобождение налтрексона из микрочастиц, промытых при 22°C, приводило к более быстрой скорости высвобождения до 10 суток. Высвобождение налтрексона из микрочастиц при 4°C приводило к более быстрой скорости высвобождения после первоначальных 10 суток и длилось только приблизительно 35 суток in vitro, в то время как промытые при 22°C частицы обеспечивали высвобождение налтрексона в течение приблизительно 50 суток.

Таблица 9. Эффекты концентрации этанола для промывания на конечную нагрузку лекарственным средством, остаточное содержание бензилового спирта (BA) и эффективность инкапсулирования (EE)

Состав (F) Температура этанола для промывания (°С) Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) Остаточное содержание BA (% масс./масс.) EE (%) F.11-1 4 32,1 1,61 86,6 F.11-2 22 32,9 0,76 88,9

Пример 12.

Составы для ответа in vivo

Семь составов с нагрузкой налтрексоном (свободное основание) от ~20% до ~40% оценивали в фармакокинетических испытаниях с крысами Sprague-Dawley. Среди семи составов каждый из F.12-1, F.12-2, F.12-4 и F.12-6 получали аналогично тому, как и F.3-5, F.4-1, F.8-6 и F.5-4, в то время как F.12-3, F.12-5 и F.12-7 получали, как описано ниже.

F.12-3

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г поливинилового спирта (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG858S) и 294 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA) растворенного в 2,0 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) и 467 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ). 10 мл непрерывной фазы добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл 1% (масс./об.) PVA в воде и перемешивали при 4°C в течение 8 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удерживаемый на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали в 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

F.12-5

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г of поли(винил спирт) (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG858S) и 409 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 2,0 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с дихлорметаном, и 10 мл непрерывной органической фазы с 1,8% (масс./об.) DCM добавляли к на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл 0,5% (масс./об.) DCM в воде и перемешивали при 4°C в течение 4 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удерживаемый на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали в 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сито и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

F.12-7

Непрерывную фазу получали путем отвешивания 40 г поливинилового спирта (PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и смешения с 4 л деионизированной воды. Органическая фаза состояла из 500 мг PLGA 85:15 (Resomer RG858S) и 267 мг свободного основания налтрексона (Tecoland Corporation, Irvine, CA), растворенного в 2,0 г дихлорметана (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) и 623 мг бензилового спирта (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), в сцинтилляционном флаконе объемом 20 мл. Непрерывную фазу далее смешивали с дихлорметаном, и 10 мл непрерывной органической фазы с 1,8% (масс./об.) DCM добавляли на органическую фазу и гомогенизировали при 7000 об/мин в течение 60 с с использованием гомогенизатора IKA T25 с генератором S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC). Затем смесь переносили в экстракционную фазу, которая представляла собой 380 мл 0,5% (масс./об.) DCM в воде и перемешивали при 4°C в течение 7 ч. Затем микрочастицы собирали с использованием 25-мкм сита. Продукт, удерживаемый на сите, обезвоживали в течение 15 мин при 22°C и подвергали вакуумной сушке в течение приблизительно 16 ч. Затем микрочастицы суспендировали и промывали в 200 мл 25% (об./об.) раствора этанола в течение 8 ч при 22°C для удаления эмульгатора (PVA) и каких-либо остаточных растворителей из микрочастиц. Затем промытые микрочастицы собирали на 25-мкм сите и подвергали вакуумной сушке в течение 48 ч.

Проводили оценку эффекта нагрузки лекарственным средством, системы растворителей и концентрации растворителей на высвобождение налтрексона. Оказалось, что образец с наиболее низкой нагрузкой лекарственным средством (F.12-2) приводил к наибольшему скачковому высвобождению относительно составов с устойчивым высвобождением. Поскольку нагрузка лекарственным средством возрастала приблизительно от 28% до 38%, наблюдались более высокие концентрации приблизительно с 2 по 20 сутки, однако для составов наблюдались сходные стационарные концентрации в плазме после 20 суток, составляющие приблизительно от 1,5 до 4 нг/мл приблизительно до 60 суток. Концентрация налтрексона 0,5 нг/мл сохранялась в течение приблизительно 100 суток.

Таблица 10. Обобщение составления для составов, охарактеризованных in vivo

Состав (F) Концентрация PLGA в DCM или EA (% масс./масс.) Концентрация налтрексона в BA (% масс./масс.) Система растворителей органической фазы Уровень дозы (мг/кг) Нагрузка лекарственным средством (%масс./масс.) EE (%) F.12-1 20,0 38,6 DCM/BA 76 28,1 80,7 F.12-2 20,0 32,1 DCM/BA 76 21,7 58,6 F.12-3 20,0 38,6 DCM/BA 50 34,2 92,4 F.12-4 15,0 24,0 EA/BA 50 28,5 77,0 F.12-5 20,0 39,6 DCM/BA 50 36,1 80,2 F.12-6 20,0 44,0 DCM/BA 50 37,8 84,0 F.12-7 20,0 30,0 DCM/BA 50 27,8 79,9

Нагрузка лекарственным средством (% масс./масс.) основана на массе микрочастиц.

МЕТОДИКИ ТЕСТИРОВАНИЯ

Высвобождение налтрексона in vitro из тестируемых составов

Среду, 20 мл pH 7,4 фосфатно-солевого буфера с 0,05% Tween 20 (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и 0,0625% (масс./об.) аскорбата натрия (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и приблизительно 5 мг тестируемого образца помещали 50-мл колбу Erlenmeyer с пробкой и помещали на водяную баню при 37°C при 100 об/мин. Образцы отбирали в различные моменты времени и заменяли свежей средой для высвобождения. Содержание налтрексона в буфере определяли посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Обращенно-фазовая ВЭЖХ для количественного определения налтрексона

Условия ВЭЖХ были следующими: подвижная фаза: 65:35 метанол:калий-фосфатный буфер, pH 6,6; скорость потока: 1,0 мл/мин; температура автоматического пробоотборника: комнатная температура; температура колонки: 30°C; детекция: 210 нм (УФ); общее время прогона: 7 мин; инжектируемый объем: 10 мкл; колонка: Zorbax SB-C18 150×4,6 мм, 5 мкм; приблизительное время удержания налтрексона: 4,8 мин.

Испытания фармакокинетики in vivo

Все доклинические испытания на крысах проводили на крысах Sprague-Dawley. Крысам в количестве от трех до пяти на тестируемый состав инъецировали подкожно в загривок шеи или в лопаточную область дозировку налтрексона в диапазоне от 50 мг/кг до 100 мг/кг в 1 мл носителя на водной основе, состоящего из 0,9% хлорида натрия, 0,02% Tween 20, и 0,5% натрий карбоксиметилцеллюлозы.

В ходе испытания животных наблюдали в отношении выраженной токсичности и каких-либо существующих аномалий области тестирования, включая покраснение, опухание, кровотечение, выделения и кровоподтеки в области инъекции. Кроме того, массу тела определяли и регистрировали при введении и при завершении исследования.

В выбранные моменты времени крыс подвергали анестезии и взятию крови (приблизительно 250 мкл) через хвостовую или поднижнечелюстную вену. Взятие крови проводили в маркированные пробирки с калий этилендиаминтетрауксусной кислотой. Кровь центрифугировали в течение 10 мин при 4000 об/мин при 4°C. Фракцию плазмы переносили в маркированные 1-мл пластмассовые пробирки и хранили при -80°C перед анализом.

Настоящее изобретение относится к системам доставки налтрексона с замедленным высвобождением в форме микросфер для лечения заболеваний, которые облегчаются налтрексоном. Инъекционная система доставки в форме микросфер включает налтрексон, инкапсулированный в биодеградируемые микросферы, вводимые в фармацевтически приемлемом носителе. 5 н. и 6 з.п. ф-лы, 10 табл., 8 ил., 12 пр.

1. Инъекционный состав микрочастиц для замедленного высвобождения налтрексона, содержащий микрочастицу, включающую налтрексон и поли(лактид-со-гликолид) с соотношением лактид:гликолид 85:15,

где налтрексон находится в форме свободного основания или комбинации свободного основания и сольвата и

где замедленное высвобождение налтрексона длится от 8 недель вплоть до 100 дней,

где микрочастицы имеют размер частиц в диапазоне от 25 до 125 мкм.

2. Состав микрочастиц по п. 1, где налтрексон составляет 20-40% (масс./масс.) микрочастицы.

3. Состав микрочастиц по п. 1, где поли(лактид-со-гликолид) имеет среднечисловую молекулярную массу от 50000 до 150000 Дальтон.

4. Состав микрочастиц по п. 1, где микрочастицу вводят в носителе на водной основе,

где носитель на водной основе содержит модифицирующее тоничность вещество, такое как хлорид натрия, повышающее вязкость вещество, такое как натрий карбоксиметилцеллюлоза, смачивающее вещество, такое как полисорбат, или их комбинации.

5. Способ лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировками опиоидов, алкогольной зависимостью или болью, включающий введение эффективного количества инъекционного состава микрочастиц по п. 1 индивидууму, нуждающемуся в таком лечении или предупреждении.

6. Способ получения инъекционного состава микрочастиц по п. 1, включающий:

(a) смешение первой фазы, включающей поливиниловый спирт и первый растворитель, и второй фазы, включающей поли(лактид-со-гликолид) с соотношением лактид:гликолид 85:15, налтрексон и второй растворитель, с получением смеси,

где налтрексон находится в форме свободного основания или комбинации свободного основания и сольвата,

где первый растворитель содержит по меньшей мере один растворитель, выбранный из группы, состоящей из воды, дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата, и

где второй растворитель содержит по меньшей мере один растворитель, выбранный из группы, состоящей из дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата; и

(b) проведение процесса экстракции смеси водой или водным раствором с получением микрочастиц.

7. Способ по п. 6, где водный раствор содержит по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из поливинилового спирта, дихлорметана, бензилового спирта и этилацетата.

8. Способ по п. 6, где способ дополнительно включает (c) проведение дополнительного процесса экстракции микрочастиц с водным раствором этанола после (b) проведения процесса экстракции.

9. Способ по п. 8, где способ дополнительно включает сушку микрочастиц, где сушку проводят после (b) проведения процесса экстракции, после (c) проведения дополнительного процесса экстракции или после каждого из (b) и (c).

10. Применение инъекционного состава микрочастиц, содержащего микрочастицу, включающую налтрексон и поли(лактид-со-гликолид) с соотношением лактид:гликолид 85:15, где налтрексон находится в форме свободного основания или комбинации свободного основания и сольвата и где замедленное высвобождение налтрексона длится от 8 недель вплоть до 100 дней, где микрочастицы имеют размер частиц в диапазоне от 25 до 125 мкм, для лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировками опиоидами, алкогольной зависимостью или болью.

11. Применение инъекционного состава микрочастиц, содержащего микрочастицу, включающую налтрексон и поли(лактид-со-гликолид) с соотношением лактид:гликолид 85:15, где налтрексон находится в форме свободного основания или комбинации свободного основания и сольвата, где замедленное высвобождение налтрексона длится от 8 недель вплоть до 100 дней, где микрочастицы имеют размер частиц в диапазоне от 25 до 125 мкм, для производства лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, связанных со злоупотреблением или передозировкой опиоидами, алкогольной зависимостью или болью.