Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к производным 1,5-бензотиазепина формулы (I). Эти соединения представляют собой модуляторы желчных кислот, обладающие активностью ингибирования апикального натрий-зависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к применению этих соединений при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.
Предшествующий уровень техники
Желчные кислоты - это физиологические детергенты, которые играют важную роль в кишечной абсорбции и транспорте липидов, питательных веществ и витаминов. Они также являются сигнальными молекулами, которые активируют ядерные рецепторы и сигнальные пути клеток, которые регулируют липидный, глюкозный и энергетический метаболизм. Желчные кислоты - это стероидные кислоты, которые синтезируются из холестерина в печени и хранятся в желчном пузыре в виде смешанных мицелл. Во время пищеварения двенадцатиперстная кишка вызывает выброс гормонов, которые вызывают сокращение желчного пузыря, тем самым высвобождая желчные кислоты в тонком кишечнике, где они обеспечивают всасывание жирорастворимых витаминов и холестерина. Когда желчные кислоты достигают подвздошной кишки, они реадсорбируются из кишечника и секретируются в кровь портальной вены для возвращения в печень через портальное венозное кровообращение. Таким образом, более 90% желчных кислот перерабатываются и возвращаются в печень. Эти желчные кислоты затем транспортируются через синусоидальную мембрану гепатоцитов и повторно секретируются через канальцевую мембрану в желчь. При первом прохождении 75-90% желчных кислот поглощаются гепатоцитами, завершая один цикл энтерогепатической циркуляции. Фракция желчных кислот, которая не выводится печенью, попадает в системный кровоток, где свободные желчные кислоты фильтруются почечными клубочками, эффективно регенерируются в проксимальных канальцах и выводятся обратно в большой круг кровообращения. Интересно, что большая часть желчных кислот, секретируемых через канальцевую мембрану в желчь, поступает из рециркулирующего пула, и менее 10% приходится на новый синтез в печени de novo. Небольшая часть желчных кислот, которая не реабсорбируется в подвздошной кишке, достигает толстой кишки. Внутри просвета кишечника первичные желчные кислоты превращаются во вторичные желчные кислоты под действием кишечных бактерий, главным образом, в результате реакций одинарного или двойного дегидроксилирования стероидного ядра. Желчные кислоты, которые не всасываются в кишечнике, затем выводятся с калом.
В целом, эффективная транспортная система помогает поддерживать постоянный пул желчных кислот, обеспечивая достаточно высокий уровень конъюгированных желчных кислот в кишечнике, чтобы способствовать всасыванию липидов, а также снизить бактериальную нагрузку на тонкий кишечник. Система также минимизирует потерю фекальной и мочевой желчных кислот и защищает кишечные и гепатобилиарные компартменты, устраняя потенциально цитотоксические детергенты (по обзору Kosters and Karpen (Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071); по Chiang (J. Lipid Res. 2009, vol. 50, p. 1955-1966); и по Dawson (Handb. Exp. Pharmacol. 2011, vol. 201, p. 169-203)).
Было обнаружено, что регулирование размера пула желчных кислот играет ключевую роль в гомеостазе холестерина за счет преобразования холестерина в желчную кислоту в печени, что является основным путем выведения холестерина из организма. Печень играет важную роль в удалении из организма эндогенных и ксенобиотических соединений. Нормальная гепатобилиарная секреция и энтерогепатическая циркуляция необходимы для выведения из организма эндогенных соединений, таких как холестерин, билирубин и их метаболиты, тем самым поддерживая гомеостаз липидов и желчных кислот. (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071).
Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке может подавляться соединениями-ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT). Сообщалось, что ингибирование реабсорбции желчных кислот полезно при лечении нескольких заболеваний, включая дислипидемию, диабет, ожирение, запоры, холестатические заболевания печени, неалкогольный стеатогепатит и другие заболевания печени. Ряд соединений-ингибиторов ASBT был раскрыт за последние десятилетия, см., например, WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 и EP 1535913.
Несмотря на количество соединений-ингибиторов ASBT, о которых сообщалось ранее, существует потребность в дополнительных соединениях, модулирующих желчные кислоты, которые имеют оптимизированный профиль в отношении эффективности, селективности и биодоступности.
Подробное описание изобретения
Было обнаружено, что некоторые производные 1,5-бензотиазепина являются мощными ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT) и могут быть полезны для лечения заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот.
В первом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I)
(I)
где
каждый из R1 и R2 независимо представляет собой C1-4 алкил;
R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C1-4 алкила, C1-4 галогеналкила, C1-4 алкокси, C1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C1-4 алкил) амино, N,N-ди(С1-4алкил) амино и N-(арил-С1-4алкил)амино;
n - целое число 1, 2 или 3;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, C3-6 циклоалкила, C1-4 алкокси, C3-6 циклоалкилокси, C1-4 алкилтио, C3-6 циклоалкилтио, амино, N-(C1-4 алкил) амино и N,N-ди(C1-4 алкил) амино;
каждый из R5A, R5B, R5C и R5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C1-4 алкила и C1-4 алкокси;
или его фармацевтически приемлемой соли,
при условии, что соединение не является рацемической 3-((7-бромо-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислотой.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой н-бутил.
В некоторых воплощениях R2 представляет собой C2-4 алкил. В предпочтительном воплощении R2 представляет собой метил. В другом предпочтительном воплощении R2 представляет собой этил. В другом предпочтительном воплощении R2 представляет собой н-пропил. В еще одном предпочтительном варианте R2 представляет собой н-бутил.
В некоторых воплощениях R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, циано, C1-4 галогеналкила, C1-4 алкокси и C1-4 галогеналкокси. В другом варианте R3 представляет собой водород. В предпочтительном воплощении R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметила, метокси и трифторметокси.
В предпочтительном воплощении n равно 1, т.е. фенильное кольцо замещено только одним заместителем R3. В другом предпочтительном воплощении R3 находится в пара-положении.
В некоторых воплощениях R4 выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, C1-4 алкокси, C1-4 алкилтио, амино, N-(C1-4 алкил) амино и N, N-ди(С1-4алкил)амино. В предпочтительном воплощении R4 выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метила, метокси, этокси, метилтио, этилтио, амино, метиламино и диметиламино. В другом варианте R4 выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино. В другом воплощении R4 выбран из группы, состоящей из хлора, брома, метилтио и диметиламино.
В некоторых воплощениях R5A, R5B, R5C и R5D каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C1-4 алкила. В некоторых воплощениях R5A и R5B каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, метила и метокси. В некоторых воплощениях R5A и R5B каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и метила. В некоторых воплощениях каждый из R5C и R5D независимо представляет собой водород или метил. В другом воплощении R5C представляет собой водород или метил, а R5D представляет собой водород.
В предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-a):
(I-а)
где
R2 представляет собой C1-4 алкил;
R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, С1-4 галогеналкила, С1-4 алкокси и С1-4 галогеналкокси;
n представляет собой целое число 1 или 2;
R4 выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, C1-4 алкокси, C1-4 алкилтио, амино, N-(C1-4 алкил) амино и N,N-ди(C1-4 алкил) амино;
каждый из R5A и R5B независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C1-4 алкила; и
R5C представляет собой водород или C1-4 алкил;
или его фармацевтически приемлемая соль.
В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b):
(I-b)
где
R2 представляет собой метил, этил, н-пропил или н-бутил;
R3 выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметила, метокси и трифторметокси;
R4 выбран из группы, состоящей из выбранной из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино; и
R5A выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и метила;
или его фармацевтически приемлемая соль.
В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b), как определено выше, но где
R3 выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси и метокси; и
R4 выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино.
Предпочтительными соединениями по изобретению являются соединения формулы (I-b), как определено выше, где от R2 до R5A имеют значения, указанные в таблице 1 ниже, или их фармацевтически приемлемые соли:
Таблица 1
В конкретном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:
(S)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((7-бром-3,3-дибутил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
О-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)серина;
3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серина;
О-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серина;
3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты; и
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты;
или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых воплощениях изобретение относится к соединению формулы (I), как определено выше, при условии, что соединение не является рацемической 3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислотой или любыми ее энантиомерами.
Используемый в данном документе термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду.
Используемый в данном документе термин «C1-6 алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, а термин «C1-4 алкил» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей от 1 до 4 атомов углерода. атомы углерода. Примеры C1-4 алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.
Используемый в данном документе термин «С1-4 галогеналкил» относится к С1-4 алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, как в данном документе определено, в которой один или несколько атомов водорода заменены галогеном. Примеры C1-4 галогеналкила включают хлорметил, фторэтил и трифторметил.
В контексте настоящего описания термины «С1-4 алкокси» и «С1-4 алкилтио» относятся к линейной или разветвленной С1-4 алкильной группе, присоединенной к остатку молекулы через атом кислорода или серы, соответственно.
Используемый в данном документе термин «C3-6 циклоалкил» относится к моноциклическому насыщенному углеводородному кольцу, имеющему от 3 до 6 атомов углерода. Примеры C3-6 циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.
Термин «арил» обозначает ароматическое моноциклическое кольцо, состоящее из 6 атомов углерода, или ароматическую бициклическую кольцевую систему, состоящую из 10 атомов углерода. Примеры арила включают фенил, нафтил и азуленил.
Термин «амино» относится к группе -NH2. Используемые в данном документе термины «N-(С1-4алкил) амино» и «N,N-ди(С1-4алкил) амино» относятся к аминогруппе, в которой один или оба атома водорода, соответственно являются заменен на неразветвленную или разветвленную C1-4 алкильную группу. Примеры N-(С1-4алкил)амино включают метиламино, этиламино и трет-бутиламино, а примеры N,N-ди(С1-4алкил) амино включают диметиламино и диэтиламино.
Используемый в данном документе термин «N-(арил-С1-4алкил) амино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен арил-С1-4 алкильной группой. Примеры N-(арил-С1-4алкил) амино включают бензиламино и фенилэтиламино.
Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый» относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для фармацевтического применения человеком и которые обычно безопасны, нетоксичны и не являются нежелательными с биологической или иной точки зрения.
Используемый в данном документе термин «около» относится к значению или параметру в данном документе, который включает (и описывает) воплощения, которые направлены на это значение или параметр как таковые. Например, описание, относящееся к «около 20», включает описание «20». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Вообще говоря, термин «около» относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего) или в пределах 10 процентов от указанного значения, в зависимости от того, какое из них больше.
1,5-бензотиазепиновые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли являются ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ингибиторы ASBT), переносчика желчных кислот печени (ингибиторы LBAT) или как апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот, так и переносчика желчных кислот печени (двойные ингибиторы ASBT/LBAT). Следовательно, они полезны для обработки или профилактики состояний, нарушений и заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот, таких как сердечно-сосудистые заболевания, нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.
Сердечно-сосудистые заболевания и нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы включают, без ограничения указанным, гиперхолестеринемию; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, в том числе катаракта, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатию, невропатию, нефропатию и замедленное заживление ран, ишемию тканей, диабетическую стопу, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильную стенокардию, стабильную стенокардию, инсульт, окклюзионную болезнь периферических артерий, кардиомиопатию, сердечную недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемию, гиперинсулинемию, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемию, гиперлипидемию, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензию; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.
Заболевания и расстройства желудочно-кишечного тракта включают запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); Болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксная болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и жёлчный рефлюксный гастрит.
Заболевание печени, как определено в данном документе, представляет собой любое заболевание печени и связанных с ней органов, таких как поджелудочная железа, воротная вена, паренхима печени, внутрипеченочные желчные протоки, внепеченочные желчные протоки и желчный пузырь. В некоторых случаях заболевание печени - это заболевание печени, зависимое от желчных кислот. Заболевания и нарушения печени включают, без ограничения указанным, наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезию желчевыводящих путей; билиарную атрезию после проведения операции по Касаи; посттрансплантационную атрезию желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза ЖК; синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ЖК); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (PBC); фиброз печени; неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальную гипертензию; холестаз; холестаз синдрома Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LSC1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатию при СПИДе; ишемическую холангиопатию; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (BAS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (EPP); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле желчных кислот сыворотки, кардиомиопатию, связанную с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; вирусный гепатит (включая гепатит A, гепатит B, гепатит C, гепатит D и гепатит E); гепатоцеллюлярную карциному (гепатому); холангиокарциному; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы. Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли также полезны для усиления терапии кортикостероидами при заболевании печени.
Другие заболевания, которые можно лечить или предотвращать с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, включают синдромы гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоз и остеопетроз; гипертонию; клубочковую гиперфильтрацию; кожный зуд при почечной недостаточности; соединения также полезны для защиты от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.
Транспорт желчных кислот в организме человека контролируется действием членов семейства белков-переносчиков растворенных веществ SLC10, в частности, полипептида, переносящего Na+-таурохолат (NTCP, также называемого транспортером желчных кислот печени (LBAT); символ гена SLC10A1), который экспрессируется в синусоидальной мембране гепатоцитов, и апикальным натрийзависимым переносчиком желчных кислот (ASBT, также называемым переносчиком желчных кислот подвздошной кишки (IBAT), ISBT, ABAT или NTCP2; генный символ SLC10A2), который экспрессируется в апикальной мембране энтероцитов подвздошной кишки, клетки проксимальных почечных канальцев, билиарный эпителий, большие холангиоциты и эпителиальные клетки желчного пузыря. В печени желчные кислоты эффективно извлекаются из портальной крови транспортером желчных кислот печени (LBAT) и повторно секретируются через канальцевую мембрану с помощью насоса экспорта солей желчных кислот (BSEP; символ гена ABCB11). Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке осуществляется апикальным натрийзависимым транспортером желчных кислот (ASBT), где его обычно называют транспортером желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT). Как LBAT, так и ASBT действуют как электрогенные котранспортеры растворенного натрия, которые перемещают два или более иона Na + на молекулу растворенного вещества.
Ксенобиотики и эндобиотики, включая желчные кислоты, поглощаются печенью из портальной крови и секретируются в желчь различными транспортными белками с индивидуальной специфичностью к субстрату. Конъюгированные с глицином и таурином желчные кислоты существуют в анионной форме и не могут проникать через мембраны путем диффузии и, таким образом, полностью зависят от мембранных транспортных белков для входа или выхода из гепатоцита (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071). ASBT и LBAT предпочитают сопряженные с глицином и таурином соли желчных кислот по сравнению с их неконъюгированными аналогами и демонстрируют более высокое сродство к дигидроксильным солям желчных кислот, чем к солям тригидрокси-желчных кислот. Субстратов, не являющихся желчными кислотами, для ASBT пока не обнаружено, однако также было обнаружено, что LBAT переносит различные стероидные сульфаты, гормоны и ксенобиотики.
LBAT не так подробно охарактеризован, как ASBT, с точки зрения требований к ингибированию лекартсвенными средствами. Dong et al. идентифицировали одобренные FDA лекарственные средства, которые ингибируют LBAT человека, и сравнили требования к ингибированию LBAT и ASBT. Был проведен ряд исследований ингибирования LBAT с использованием лекарственных средств, одобренных FDA, в сочетании с разработкой итеративной вычислительной модели. Скрининговые исследования позволили идентифицировать 27 лекарственных средств в качестве новых ингибиторов LBAT, включая ирбесартан (Ki = 11,9 мкМ) и эзетимиб (Ki = 25,0 мкМ). Общая особенность фармакофора указывает на то, что два гидрофоба и один акцептор водородной связи важны для ингибирования LBAT. Из 72 лекарственных средств, проверенных in vitro, в общей сложности 31 лекарственное средство ингибировало LBAT, а 51 лекарственное средство (то есть более половины) ингибировало ASBT. Следовательно, несмотря на перекрытие ингибиторов, ASBT неожиданно оказался более терпимым к ингибированию лекарственного средства, чем LBAT, и это может быть связано с тем, что LBAT обладает меньшим количеством фармакофорных свойств (Dong et al., Mol. Pharm. 2013, vol. 10, p. 1008-1019).
Vaz et al. описывают идентификацию дефицита LBAT как новой врожденной ошибки метаболизма с относительно мягким клиническим фенотипом. Идентификация дефицита LBAT подтверждает, что этот транспортер является основной системой импорта конъюгированных солей желчных кислот в печень, но также указывает на то, что вспомогательные транспортеры способны поддерживать энтерогепатический цикл в его отсутствие (Vaz et al., Hepatology 2015, vol. 61, p. 260-267). Эти данные подтверждают гипотезу о том, что ингибирование LBAT является безопасным механизмом действия, поскольку гепатоциты все еще имеют возможность поглощать необходимое количество желчных кислот.
Liu et al. описывают идентификацию нового типа гиперхоланемии, которая связана с гомозиготностью по мутации p.Ser267Phe в SLC10A1 (LBAT). Частота аллелей этой мутации в гене SLC10A1 варьирует в разных популяциях, при этом наибольшая частота встречается в Южном Китае (8% и 12% у китайских хань и дай, соответственно) и во Вьетнаме (11%). Считалось, что эта «скрытая» гиперхоланемия затронула 0,64% китайской популяции Южных Хань, 1,44% популяции Дай и 1,21% населения Вьетнама. Также наблюдалось повышение уровней конъюгированной и неконъюгированной BA в сыворотке крови у гомозиготных особей. Лю и др. предполагают, что это открытие, скорее всего, связано со снижением транспорта BA из портального кровотока в гепатоциты. Это подтверждает гипотезу о том, что физиологическая функция энтерогепатической циркуляции заключается не только в рециркуляции желчных кислот, но и в удалении желчных кислот из кровотока для достижения гомеостаза (Karpen and Dawson, Hepatology 2015, vol. 61, p. 24-27). С другой стороны, печень может синтезировать повышенные уровни желчных кислот для компенсации пониженной энтерогепатической рециркуляции у гомозиготных носителей. Поскольку LBAT также транспортирует неконъюгированные желчные кислоты, увеличение количества неконъюгированных желчных кислот в этом исследовании не было неожиданным (Liu et al., Scientific Reports 2017, 7: 9214, p. 1-7).
Было обнаружено, что LBAT отрицательно регулируется при нескольких формах холестатического поражения печени и холестаза, тогда как ASBT подавляется при различных желудочно-кишечных расстройствах, таких как болезнь Крона, первичная мальабсорбция желчных кислот, воспалительные заболевания кишечника и воспаление подвздошной кишки, но положительно регулируется при холестазе. LBAT также функционирует как клеточный рецептор для проникновения вируса гепатита B (HBV) и вируса гепатита D (HDV), которые, в свою очередь, являются основной причиной заболеваний печени и гепатоцеллюлярной карциномы.
Ингибирование ASBT было исследовано на предмет снижения уровня холестерина в плазме и улучшения инсулинорезистентности, а также для уменьшения нагрузки желчных кислот в печени при холестатической болезни печени. Кроме того, было обнаружено, что ингибирование ASBT восстанавливает уровни инсулина и нормогликемию, что делает ингибирование ASBT перспективным лечением сахарного диабета 2 типа. Ингибиторы ASBT также используются для лечения функциональных запоров.
Поскольку ASBT преимущественно экспрессируется в подвздошной кишке (где его часто называют IBAT), ингибиторы ASBT не обязательно должны быть доступны системно. С другой стороны, ASBT также экспрессируется в клетках проксимальных канальцев почек. Следовательно, системные ингибиторы ASBT могут также ингибировать обратный захват желчных кислот почками. Считается, что это приведет к повышению уровня желчных кислот в моче и к усиленному удалению желчных кислот из организма с мочой. Поэтому ожидается, что системно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие не только на подвздошную кишку, но и на почки, приведут к большему снижению уровней желчных кислот, чем несистемно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие только на подвздошную кишку.
Соединения, обладающие высокой активностью ингибирования ASBT, особенно подходят для лечения заболеваний печени, вызывающих холестаз, таких как прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля, атрезия желчных путей и неалкогольный стеатогепатит (NASH).
Атрезия желчевыводящих путей - редкое заболевание печени у детей, которое включает частичную или полную закупорку (или даже отсутствие) крупных желчных протоков. Эта блокировка или отсутствие вызывает холестаз, который приводит к накоплению желчных кислот, которые повреждают печень. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внепеченочных желчных протоках. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внутрипеченочных желчных протоках. Текущий стандарт лечения - это процедура Kasai, которая представляет собой операцию по удалению закупоренных желчных протоков и прямому соединению части тонкой кишки с печенью. В настоящее время нет одобренных лекарственных препаратов для лечения этого расстройства.
В настоящем документе представлены способы лечения атрезии желчных путей у объекта, нуждающегося в этом, способы, включающие введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях объект прошел процедуру Kasai перед введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях объекту вводят соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль до прохождения процедуры Kasai. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей включает лечение зуда.
PFIC - это редкое генетическое заболевание, которым, по оценкам, страдает от одного из 50 000 до 100 000 детей, рожденных во всем мире, и вызывающее прогрессирующее, опасное для жизни заболевание печени.
Одним из проявлений PFIC является зуд, который часто приводит к серьезному ухудшению качества жизни. В некоторых случаях PFIC приводит к циррозу и печеночной недостаточности. Текущие методы лечения включают частичное внешнее отведение желчных протоков (PEBD) и трансплантацию печени, однако эти варианты могут нести значительный риск послеоперационных осложнений, а также психологических и социальных проблем.
Были идентифицированы три альтернативных генных дефекта, которые коррелируют с тремя отдельными подтипами PFIC, известными как типы 1, 2 и 3.
- PFIC типа 1, который иногда называют «болезнью Байлера», вызывается нарушением секреции желчи из-за мутаций в гене ATP8B1, который кодирует белок, который помогает поддерживать соответствующий баланс жиров, известных как фосфолипиды, в клеточных мембранах в желчных протоках. Дисбаланс этих фосфолипидов связан с холестазом и повышенным содержанием желчных кислот в печени. У объектов, пораженных PFIC типа 1, холестаз обычно развивается в первые месяцы жизни, а при отсутствии хирургического лечения - до цирроза и терминальной стадии заболевания печени до конца первого десятилетия жизни.
- PFIC, тип 2, который иногда называют «синдромом Байлера», вызван нарушением секреции солей желчных кислот из-за мутаций в гене ABCB11, который кодирует белок, известный как насос экспорта желчной соли, который выводит желчные кислоты из печени. У объектов с PFIC типа 2 часто развивается печеночная недостаточность в течение первых нескольких лет жизни, и они подвергаются повышенному риску развития типа рака печени, известного как гепатоцеллюлярная карцинома.
- PFIC, тип 3, который обычно проявляется в первые годы детства прогрессирующим холестазом, вызван мутациями в гене ABCB4, который кодирует переносчик, перемещающий фосфолипиды через клеточные мембраны.
Кроме того, предполагается, что причиной PFIC являются мутации гена TJP2, гена NR1H4 или гена Myo5b. Кроме того, у некоторых объектов с PFIC нет мутации ни в одном из генов ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или Myo5b. В этих случаях причина состояния неизвестна.
Типичные мутации гена ATP8B1 или полученного белка перечислены в таблицах 2 и 3 с нумерацией, основанной на белке ATP8B1 дикого типа человека (например, SEQ ID NO: 1) или гене (например, SEQ ID NO: 2). Типичные мутации гена ABCB11 или полученного белка перечислены в таблицах 4 и 5 с нумерацией, основанной на человеческом белке ABCB11 дикого типа (например, SEQ ID NO: 3) или гене (например, SEQ ID NO: 4).
Специалистам в данной области понятно, что положение аминокислоты в последовательности референсного белка, которое соответствует конкретному положению аминокислоты в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного белка с SEQ ID NO: 1 или 3 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения в этих остатках (называемые в данном документе «мутациями») могут включать одиночные или множественные аминокислотные замены, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. Как может быть понятно специалистам в данной области, положение нуклеотида в последовательности референсного гена, которое соответствует определенному положению нуклеотида в SEQ ID NO: 2 или 4, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного гена с SEQ ID NO: 2 или 4 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения этих остатков (называемые в данном документе «мутациями») могут включать замены одного или нескольких нуклеотидов, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. См. также Kooistra, et al., “KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database,” Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, который полностью включен в настоящий документ ссылкой.
Каноническая последовательность белка ATP8B1 (SEQ ID NO: 1) - Uniprot ID O43520
MSTERDSETT FDEDSQPNDE VVPYSDDETE DELDDQGSAV EPEQNRVNRE AEENREPFRK ECTWQVKAND RKYHEQPHFM NTKFLCIKES KYANNAIKTY KYNAFTFIPM NLFEQFKRAA NLYFLALLIL QAVPQISTLA WYTTLVPLLV VLGVTAIKDL VDDVARHKMD KEINNRTCEV IKDGRFKVAK WKEIQVGDVI RLKKNDFVPA DILLLSSSEP NSLCYVETAE LDGETNLKFK MSLEITDQYL QREDTLATFD GFIECEEPNN RLDKFTGTLF WRNTSFPLDA DKILLRGCVI RNTDFCHGLV IFAGADTKIM KNSGKTRFKR TKIDYLMNYM VYTIFVVLIL LSAGLAIGHA YWEAQVGNSS WYLYDGEDDT PSYRGFLIFW GYIIVLNTMV PISLYVSVEV IRLGQSHFIN WDLQMYYAEK DTPAKARTTT LNEQLGQIHY IFSDKTGTLT QNIMTFKKCC INGQIYGDHR DASQHNHNKI EQVDFSWNTY ADGKLAFYDH YLIEQIQSGK EPEVRQFFFL LAVCHTVMVD RTDGQLNYQA ASPDEGALVN AARNFGFAFL ARTQNTITIS ELGTERTYNV LAILDFNSDR KRMSIIVRTP EGNIKLYCKG ADTVIYERLH RMNPTKQETQ DALDIFANET LRTLCLCYKE IEEKEFTEWN KKFMAASVAS TNRDEALDKV YEEIEKDLIL LGATAIEDKL QDGVPETISK LAKADIKIWV LTGDKKETAE NIGFACELLT EDTTICYGED INSLLHARME NQRNRGGVYA KFAPPVQESF FPPGGNRALI ITGSWLNEIL LEKKTKRNKI LKLKFPRTEE ERRMRTQSKR RLEAKKEQRQ KNFVDLACEC SAVICCRVTP KQKAMVVDLV KRYKKAITLA IGDGANDVNM IKTAHIGVGI SGQEGMQAVM SSDYSFAQFR YLQRLLLVHG RWSYIRMCKF LRYFFYKNFA FTLVHFWYSF FNGYSAQTAY EDWFITLYNV LYTSLPVLLM GLLDQDVSDK LSLRFPGLYI VGQRDLLFNY KRFFVSLLHG VLTSMILFFI PLGAYLQTVG QDGEAPSDYQ SFAVTIASAL VITVNFQIGL DTSYWTFVNA FSIFGSIALY FGIMFDFHSA GIHVLFPSAF QFTGTASNAL RQPYIWLTII LAVAVCLLPV VAIRFLSMTI WPSESDKIQK HRKRLKAEEQ WQRRQQVFRR GVSTRRSAYA FSHQRGYADL ISSGRSIRKK RSPLDAIVAD GTAEYRRTGD S
Каноническая последовательность ДНК для ATP8B1 (SEQ ID NO: 2)
ATG AGT ACA GAA AGA GAC TCA GAA ACG ACA TTT GAC GAG GAT TCT CAG CCT AAT GAC GAA GTG GTT CCC TAC AGT GAT GAT GAA ACA GAA GAT GAA CTT GAT GAC CAG GGG TCT GCT GTT GAA CCA GAA CAA AAC CGA GTC AAC AGG GAA GCA GAG GAG AAC CGG GAG CCA TTC AGA AAA GAA TGT ACA TGG CAA GTC AAA GCA AAC GAT CGC AAG TAC CAC GAA CAA CCT CAC TTT ATG AAC ACA AAA TTC TTG TGT ATT AAG GAG AGT AAA TAT GCG AAT AAT GCA ATT AAA ACA TAC AAG TAC AAC GCA TTT ACC TTT ATA CCA ATG AAT CTG TTT GAG CAG TTT AAG AGA GCA GCC AAT TTA TAT TTC CTG GCT CTT CTT ATC TTA CAG GCA GTT CCT CAA ATC TCT ACC CTG GCT TGG TAC ACC ACA CTA GTG CCC CTG CTT GTG GTG CTG GGC GTC ACT GCA ATC AAA GAC CTG GTG GAC GAT GTG GCT CGC CAT AAA ATG GAT AAG GAA ATC AAC AAT AGG ACG TGT GAA GTC ATT AAG GAT GGC AGG TTC AAA GTT GCT AAG TGG AAA GAA ATT CAA GTT GGA GAC GTC ATT CGT CTG AAA AAA AAT GAT TTT GTT CCA GCT GAC ATT CTC CTG CTG TCT AGC TCT GAG CCT AAC AGC CTC TGC TAT GTG GAA ACA GCA GAA CTG GAT GGA GAA ACC AAT TTA AAA TTT AAG ATG TCA CTT GAA ATC ACA GAC CAG TAC CTC CAA AGA GAA GAT ACA TTG GCT ACA TTT GAT GGT TTT ATT GAA TGT GAA GAA CCC AAT AAC AGA CTA GAT AAG TTT ACA GGA ACA CTA TTT TGG AGA AAC ACA AGT TTT CCT TTG GAT GCT GAT AAA ATT TTG TTA CGT GGC TGT GTA ATT AGG AAC ACC GAT TTC TGC CAC GGC TTA GTC ATT TTT GCA GGT GCT GAC ACT AAA ATA ATG AAG AAT AGT GGG AAA ACC AGA TTT AAA AGA ACT AAA ATT GAT TAC TTG ATG AAC TAC ATG GTT TAC ACG ATC TTT GTT GTT CTT ATT CTG CTT TCT GCT GGT CTT GCC ATC GGC CAT GCT TAT TGG GAA GCA CAG GTG GGC AAT TCC TCT TGG TAC CTC TAT GAT GGA GAA GAC GAT ACA CCC TCC TAC CGT GGA TTC CTC ATT TTC TGG GGC TAT ATC ATT GTT CTC AAC ACC ATG GTA CCC ATC TCT CTC TAT GTC AGC GTG GAA GTG ATT CGT CTT GGA CAG AGT CAC TTC ATC AAC TGG GAC CTG CAA ATG TAC TAT GCT GAG AAG GAC ACA CCC GCA AAA GCT AGA ACC ACC ACA CTC AAT GAA CAG CTC GGG CAG ATC CAT TAT ATC TTC TCT GAT AAG ACG GGG ACA CTC ACA CAA AAT ATC ATG ACC TTT AAA AAG TGC TGT ATC AAC GGG CAG ATA TAT GGG GAC CAT CGG GAT GCC TCT CAA CAC AAC CAC AAC AAA ATA GAG CAA GTT GAT TTT AGC TGG AAT ACA TAT GCT GAT GGG AAG CTT GCA TTT TAT GAC CAC TAT CTT ATT GAG CAA ATC CAG TCA GGG AAA GAG CCA GAA GTA CGA CAG TTC TTC TTC TTG CTC GCA GTT TGC CAC ACA GTC ATG GTG GAT AGG ACT GAT GGT CAG CTC AAC TAC CAG GCA GCC TCT CCC GAT GAA GGT GCC CTG GTA AAC GCT GCC AGG AAC TTT GGC TTT GCC TTC CTC GCC AGG ACC CAG AAC ACC ATC ACC ATC AGT GAA CTG GGC ACT GAA AGG ACT TAC AAT GTT CTT GCC ATT TTG GAC TTC AAC AGT GAC CGG AAG CGA ATG TCT ATC ATT GTA AGA ACC CCA GAA GGC AAT ATC AAG CTT TAC TGT AAA GGT GCT GAC ACT GTT ATT TAT GAA CGG TTA CAT CGA ATG AAT CCT ACT AAG CAA GAA ACA CAG GAT GCC CTG GAT ATC TTT GCA AAT GAA ACT CTT AGA ACC CTA TGC CTT TGC TAC AAG GAA ATT GAA GAA AAA GAA TTT ACA GAA TGG AAT AAA AAG TTT ATG GCT GCC AGT GTG GCC TCC ACC AAC CGG GAC GAA GCT CTG GAT AAA GTA TAT GAG GAG ATT GAA AAA GAC TTA ATT CTC CTG GGA GCT ACA GCT ATT GAA GAC AAG CTA CAG GAT GGA GTT CCA GAA ACC ATT TCA AAA CTT GCA AAA GCT GAC ATT AAG ATC TGG GTG CTT ACT GGA GAC AAA AAG GAA ACT GCT GAA AAT ATA GGA TTT GCT TGT GAA CTT CTG ACT GAA GAC ACC ACC ATC TGC TAT GGG GAG GAT ATT AAT TCT CTT CTT CAT GCA AGG ATG GAA AAC CAG AGG AAT AGA GGT GGC GTC TAC GCA AAG TTT GCA CCT CCT GTG CAG GAA TCT TTT TTT CCA CCC GGT GGA AAC CGT GCC TTA ATC ATC ACT GGT TCT TGG TTG AAT GAA ATT CTT CTC GAG AAA AAG ACC AAG AGA AAT AAG ATT CTG AAG CTG AAG TTC CCA AGA ACA GAA GAA GAA AGA CGG ATG CGG ACC CAA AGT AAA AGG AGG CTA GAA GCT AAG AAA GAG CAG CGG CAG AAA AAC TTT GTG GAC CTG GCC TGC GAG TGC AGC GCA GTC ATC TGC TGC CGC GTC ACC CCC AAG CAG AAG GCC ATG GTG GTG GAC CTG GTG AAG AGG TAC AAG AAA GCC ATC ACG CTG GCC ATC GGA GAT GGG GCC AAT GAC GTG AAC ATG ATC AAA ACT GCC CAC ATT GGC GTT GGA ATA AGT GGA CAA GAA GGA ATG CAA GCT GTC ATG TCG AGT GAC TAT TCC TTT GCT CAG TTC CGA TAT CTG CAG AGG CTA CTG CTG GTG CAT GGC CGA TGG TCT TAC ATA AGG ATG TGC AAG TTC CTA CGA TAC TTC TTT TAC AAA AAC TTT GCC TTT ACT TTG GTT CAT TTC TGG TAC TCC TTC TTC AAT GGC TAC TCT GCG CAG ACT GCA TAC GAG GAT TGG TTC ATC ACC CTC TAC AAC GTG CTG TAC ACC AGC CTG CCC GTG CTC CTC ATG GGG CTG CTC GAC CAG GAT GTG AGT GAC AAA CTG AGC CTC CGA TTC CCT GGG TTA TAC ATA GTG GGA CAA AGA GAC TTA CTA TTC AAC TAT AAG AGA TTC TTT GTA AGC TTG TTG CAT GGG GTC CTA ACA TCG ATG ATC CTC TTC TTC ATA CCT CTT GGA GCT TAT CTG CAA ACC GTA GGG CAG GAT GGA GAG GCA CCT TCC GAC TAC CAG TCT TTT GCC GTC ACC ATT GCC TCT GCT CTT GTA ATA ACA GTC AAT TTC CAG ATT GGC TTG GAT ACT TCT TAT TGG ACT TTT GTG AAT GCT TTT TCA ATT TTT GGA AGC ATT GCA CTT TAT TTT GGC ATC ATG TTT GAC TTT CAT AGT GCT GGA ATA CAT GTT CTC TTT CCA TCT GCA TTT CAA TTT ACA GGC ACA GCT TCA AAC GCT CTG AGA CAG CCA TAC ATT TGG TTA ACT ATC ATC CTG GCT GTT GCT GTG TGC TTA CTA CCC GTC GTT GCC ATT CGA TTC CTG TCA ATG ACC ATC TGG CCA TCA GAA AGT GAT AAG ATC CAG AAG CAT CGC AAG CGG TTG AAG GCG GAG GAG CAG TGG CAG CGA CGG CAG CAG GTG TTC CGC CGG GGC GTG TCA ACG CGG CGC TCG GCC TAC GCC TTC TCG CAC CAG CGG GGC TAC GCG GAC CTC ATC TCC TCC GGG CGC AGC ATC CGC AAG AAG CGC TCG CCG CTT GAT GCC ATC GTG GCG GAT GGC ACC GCG GAG TAC AGG CGC ACC GGG GAC AGC TGA
Таблица 2. Примерные мутации ATP8B1
insACATCGATGTTGATGTTAGG45
Таблица 3. Избранные мутации ATP8B1, ассоциированные с PFIC-1
A Мутация в «X» обозначает ранний стоп-кодон
Список литературы для Таблиц 2 и 3
1 Folmer et al., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p. 1597-1605.
2 Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p. 625-631.
3 Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p. 2451-2460.
4 Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.
5 Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.
6 Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p. 27-38.
7 Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.
8 Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823.
9 Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p. 435-439.
10 Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p. 6504-6509.
11 Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.
12 Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.
13 Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 67, Supp. Supplement 1, pp. S363. Abstract Number: 615.
14 Miloh et al., Gastroenterology 2006, vol. 130, No. 4, Suppl. 2, pp. A759-A760. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/107th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Los Angeles, CA, USA. May 19.
15 Dröge et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2015, vol. 53, No. 12. Abstract Number: A3-27. Meeting Info: 32. Jahrestagung der Deutschen Arbeitsgemeinschaft zum Studium der Leber. Dusseldorf, Germany. 22 Jan 2016-23 Jan 2016
16 Mizuochi et al., Clin Chim Acta. 2012, vol. 413(15-16), p. 1301-1304.
17 Liu et al., Hepatology International 2009, vol. 3, No. 1, p. 184-185. Abstract Number: PE405. Meeting Info: 19th Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver. Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009
18 McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2
19 Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89.
20 Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p. 41139-51.
21 Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]
22 Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.
23 Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p. 599-602.
24 Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p. 306-311.
25 Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p. 179-183.
26 Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.
27 Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.
28 Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.
29 Ivashkin et al., Hepatology International 2016, vol. 10, No. 1, Supp. SUPPL. 1, pp. S461. Abstract Number: LBO-38. Meeting Info: 25th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2016. Tokyo, Japan. 20 Feb 2016-24 Feb 2016
30 Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.
31 Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.
32 Squires et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2017, vol. 64(3), p. 425-430.
33 Hayshi et al., EBioMedicine. 2018, vol. 27, p. 187-199.
34 Nagasaka et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 45(1), p. 96-105.
35 Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.
36 Narchi et al., Saudi J Gastroenterol. 2017, vol. 23(5), p. 303-305.
37 Alashkar et al., Blood 2015, vol. 126, No. 23. Meeting Info.: 57th Annual Meeting of the American-Society-of-Hematology. Orlando, FL, USA. December 05-08, 2015. Amer Soc Hematol.
38 Ferreira et al., Pediatric Transplantation 2013, vol. 17, Supp. SUPPL. 1, pp. 99. Abstract Number: 239. Meeting Info: IPTA 7th Congress on Pediatric Transplantation. Warsaw, Poland. 13 Jul 2013-16 Jul 2013.
39 Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.
40 Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2015, vol. 60(3), p. 368-374.
41 van der Woerd et al., PLoS One. 2013, vol. 8(11): e80553.
42 Copeland et al., J Gastroenterol Hepatol. 2013, vol. 28(3), p. 560-564.
43 Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.
44 Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.
45 Jirsa et al., Hepatol Res. 2004, vol. 30(1), p. 1-3.
46 van der Woerd et al., Hepatology 2015, vol. 61(4), p. 1382-1391.
В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R.
Каноническая последовательность белка ABCB11 (SEQ ID NO: 3) - Uniprot ID O95342
MSDSVILRSI KKFGEENDGF ESDKSYNNDK KSRLQDEKKG DGVRVGFFQL FRFSSSTDIW LMFVGSLCAF LHGIAQPGVL LIFGTMTDVF IDYDVELQEL QIPGKACVNN TIVWTNSSLN QNMTNGTRCG LLNIESEMIK FASYYAGIAV AVLITGYIQI CFWVIAAARQ IQKMRKFYFR RIMRMEIGWF DCNSVGELNT RFSDDINKIN DAIADQMALF IQRMTSTICG FLLGFFRGWK LTLVIISVSP LIGIGAATIG LSVSKFTDYE LKAYAKAGVV ADEVISSMRT VAAFGGEKRE VERYEKNLVF AQRWGIRKGI VMGFFTGFVW CLIFLCYALA FWYGSTLVLD EGEYTPGTLV QIFLSVIVGA LNLGNASPCL EAFATGRAAA TSIFETIDRK PIIDCMSEDG YKLDRIKGEI EFHNVTFHYP SRPEVKILND LNMVIKPGEM TALVGPSGAG KSTALQLIQR FYDPCEGMVT VDGHDIRSLN IQWLRDQIGI VEQEPVLFST TIAENIRYGR EDATMEDIVQ AAKEANAYNF IMDLPQQFDT LVGEGGGQMS GGQKQRVAIA RALIRNPKIL LLDMATSALD NESEAMVQEV LSKIQHGHTI ISVAHRLSTV RAADTIIGFE HGTAVERGTH EELLERKGVY FTLVTLQSQG NQALNEEDIK DATEDDMLAR TFSRGSYQDS LRASIRQRSK SQLSYLVHEP PLAVVDHKST YEEDRKDKDI PVQEEVEPAP VRRILKFSAP EWPYMLVGSV GAAVNGTVTP LYAFLFSQIL GTFSIPDKEE QRSQINGVCL LFVAMGCVSL FTQFLQGYAF AKSGELLTKR LRKFGFRAML GQDIAWFDDL RNSPGALTTR LATDASQVQG AAGSQIGMIV NSFTNVTVAM IIAFSFSWKL SLVILCFFPF LALSGATQTR MLTGFASRDK QALEMVGQIT NEALSNIRTV AGIGKERRFI EALETELEKP FKTAIQKANI YGFCFAFAQC IMFIANSASY RYGGYLISNE GLHFSYVFRV ISAVVLSATA LGRAFSYTPS YAKAKISAAR FFQLLDRQPP ISVYNTAGEK WDNFQGKIDF VDCKFTYPSR PDSQVLNGLS VSISPGQTLA FVGSSGCGKS TSIQLLERFY DPDQGKVMID GHDSKKVNVQ FLRSNIGIVS QEPVLFACSI MDNIKYGDNT KEIPMERVIA AAKQAQLHDF VMSLPEKYET NVGSQGSQLS RGEKQRIAIA RAIVRDPKIL LLDEATSALD TESEKTVQVA LDKAREGRTC IVIAHRLSTI QNADIIAVMA QGVVIEKGTH EELMAQKGAY YKLVTTGSPI S
Каноническая последовательность ДНК ABCB11 (SEQ ID NO: 4)
ATG TCT GAC TCA GTA ATT CTT CGA AGT ATA AAG AAA TTT GGA GAG GAG AAT GAT GGT TTT GAG TCA GAT AAA TCA TAT AAT AAT GAT AAG AAA TCA AGG TTA CAA GAT GAG AAG AAA GGT GAT GGC GTT AGA GTT GGC TTC TTT CAA TTG TTT CGG TTT TCT TCA TCA ACT GAC ATT TGG CTG ATG TTT GTG GGA AGT TTG TGT GCA TTT CTC CAT GGA ATA GCC CAG CCA GGC GTG CTA CTC ATT TTT GGC ACA ATG ACA GAT GTT TTT ATT GAC TAC GAC GTT GAG TTA CAA GAA CTC CAG ATT CCA GGA AAA GCA TGT GTG AAT AAC ACC ATT GTA TGG ACT AAC AGT TCC CTC AAC CAG AAC ATG ACA AAT GGA ACA CGT TGT GGG TTG CTG AAC ATC GAG AGC GAA ATG ATC AAA TTT GCC AGT TAC TAT GCT GGA ATT GCT GTC GCA GTA CTT ATC ACA GGA TAT ATT CAA ATA TGC TTT TGG GTC ATT GCC GCA GCT CGT CAG ATA CAG AAA ATG AGA AAA TTT TAC TTT AGG AGA ATA ATG AGA ATG GAA ATA GGG TGG TTT GAC TGC AAT TCA GTG GGG GAG CTG AAT ACA AGA TTC TCT GAT GAT ATT AAT AAA ATC AAT GAT GCC ATA GCT GAC CAA ATG GCC CTT TTC ATT CAG CGC ATG ACC TCG ACC ATC TGT GGT TTC CTG TTG GGA TTT TTC AGG GGT TGG AAA CTG ACC TTG GTT ATT ATT TCT GTC AGC CCT CTC ATT GGG ATT GGA GCA GCC ACC ATT GGT CTG AGT GTG TCC AAG TTT ACG GAC TAT GAG CTG AAG GCC TAT GCC AAA GCA GGG GTG GTG GCT GAT GAA GTC ATT TCA TCA ATG AGA ACA GTG GCT GCT TTT GGT GGT GAG AAA AGA GAG GTT GAA AGG TAT GAG AAA AAT CTT GTG TTC GCC CAG CGT TGG GGA ATT AGA AAA GGA ATA GTG ATG GGA TTC TTT ACT GGA TTC GTG TGG TGT CTC ATC TTT TTG TGT TAT GCA CTG GCC TTC TGG TAC GGC TCC ACA CTT GTC CTG GAT GAA GGA GAA TAT ACA CCA GGA ACC CTT GTC CAG ATT TTC CTC AGT GTC ATA GTA GGA GCT TTA AAT CTT GGC AAT GCC TCT CCT TGT TTG GAA GCC TTT GCA ACT GGA CGT GCA GCA GCC ACC AGC ATT TTT GAG ACA ATA GAC AGG AAA CCC ATC ATT GAC TGC ATG TCA GAA GAT GGT TAC AAG TTG GAT CGA ATC AAG GGT GAA ATT GAA TTC CAT AAT GTG ACC TTC CAT TAT CCT TCC AGA CCA GAG GTG AAG ATT CTA AAT GAC CTC AAC ATG GTC ATT AAA CCA GGG GAA ATG ACA GCT CTG GTA GGA CCC AGT GGA GCT GGA AAA AGT ACA GCA CTG CAA CTC ATT CAG CGA TTC TAT GAC CCC TGT GAA GGA ATG GTG ACC GTG GAT GGC CAT GAC ATT CGC TCT CTT AAC ATT CAG TGG CTT AGA GAT CAG ATT GGG ATA GTG GAG CAA GAG CCA GTT CTG TTC TCT ACC ACC ATT GCA GAA AAT ATT CGC TAT GGC AGA GAA GAT GCA ACA ATG GAA GAC ATA GTC CAA GCT GCC AAG GAG GCC AAT GCC TAC AAC TTC ATC ATG GAC CTG CCA CAG CAA TTT GAC ACC CTT GTT GGA GAA GGA GGA GGC CAG ATG AGT GGT GGC CAG AAA CAA AGG GTA GCT ATC GCC AGA GCC CTC ATC CGA AAT CCC AAG ATT CTG CTT TTG GAC ATG GCC ACC TCA GCT CTG GAC AAT GAG AGT GAA GCC ATG GTG CAA GAA GTG CTG AGT AAG ATT CAG CAT GGG CAC ACA ATC ATT TCA GTT GCT CAT CGC TTG TCT ACG GTC AGA GCT GCA GAT ACC ATC ATT GGT TTT GAA CAT GGC ACT GCA GTG GAA AGA GGG ACC CAT GAA GAA TTA CTG GAA AGG AAA GGT GTT TAC TTC ACT CTA GTG ACT TTG CAA AGC CAG GGA AAT CAA GCT CTT AAT GAA GAG GAC ATA AAG GAT GCA ACT GAA GAT GAC ATG CTT GCG AGG ACC TTT AGC AGA GGG AGC TAC CAG GAT AGT TTA AGG GCT TCC ATC CGG CAA CGC TCC AAG TCT CAG CTT TCT TAC CTG GTG CAC GAA CCT CCA TTA GCT GTT GTA GAT CAT AAG TCT ACC TAT GAA GAA GAT AGA AAG GAC AAG GAC ATT CCT GTG CAG GAA GAA GTT GAA CCT GCC CCA GTT AGG AGG ATT CTG AAA TTC AGT GCT CCA GAA TGG CCC TAC ATG CTG GTA GGG TCT GTG GGT GCA GCT GTG AAC GGG ACA GTC ACA CCC TTG TAT GCC TTT TTA TTC AGC CAG ATT CTT GGG ACT TTT TCA ATT CCT GAT AAA GAG GAA CAA AGG TCA CAG ATC AAT GGT GTG TGC CTA CTT TTT GTA GCA ATG GGC TGT GTA TCT CTT TTC ACC CAA TTT CTA CAG GGA TAT GCC TTT GCT AAA TCT GGG GAG CTC CTA ACA AAA AGG CTA CGT AAA TTT GGT TTC AGG GCA ATG CTG GGG CAA GAT ATT GCC TGG TTT GAT GAC CTC AGA AAT AGC CCT GGA GCA TTG ACA ACA AGA CTT GCT ACA GAT GCT TCC CAA GTT CAA GGG GCT GCC GGC TCT CAG ATC GGG ATG ATA GTC AAT TCC TTC ACT AAC GTC ACT GTG GCC ATG ATC ATT GCC TTC TCC TTT AGC TGG AAG CTG AGC CTG GTC ATC TTG TGC TTC TTC CCC TTC TTG GCT TTA TCA GGA GCC ACA CAG ACC AGG ATG TTG ACA GGA TTT GCC TCT CGA GAT AAG CAG GCC CTG GAG ATG GTG GGA CAG ATT ACA AAT GAA GCC CTC AGT AAC ATC CGC ACT GTT GCT GGA ATT GGA AAG GAG AGG CGG TTC ATT GAA GCA CTT GAG ACT GAG CTG GAG AAG CCC TTC AAG ACA GCC ATT CAG AAA GCC AAT ATT TAC GGA TTC TGC TTT GCC TTT GCC CAG TGC ATC ATG TTT ATT GCG AAT TCT GCT TCC TAC AGA TAT GGA GGT TAC TTA ATC TCC AAT GAG GGG CTC CAT TTC AGC TAT GTG TTC AGG GTG ATC TCT GCA GTT GTA CTG AGT GCA ACA GCT CTT GGA AGA GCC TTC TCT TAC ACC CCA AGT TAT GCA AAA GCT AAA ATA TCA GCT GCA CGC TTT TTT CAA CTG CTG GAC CGA CAA CCC CCA ATC AGT GTA TAC AAT ACT GCA GGT GAA AAA TGG GAC AAC TTC CAG GGG AAG ATT GAT TTT GTT GAT TGT AAA TTT ACA TAT CCT TCT CGA CCT GAC TCG CAA GTT CTG AAT GGT CTC TCA GTG TCG ATT AGT CCA GGG CAG ACA CTG GCG TTT GTT GGG AGC AGT GGA TGT GGC AAA AGC ACT AGC ATT CAG CTG TTG GAA CGT TTC TAT GAT CCT GAT CAA GGG AAG GTG ATG ATA GAT GGT CAT GAC AGC AAA AAA GTA AAT GTC CAG TTC CTC CGC TCA AAC ATT GGA ATT GTT TCC CAG GAA CCA GTG TTG TTT GCC TGT AGC ATA ATG GAC AAT ATC AAG TAT GGA GAC AAC ACC AAA GAA ATT CCC ATG GAA AGA GTC ATA GCA GCT GCA AAA CAG GCT CAG CTG CAT GAT TTT GTC ATG TCA CTC CCA GAG AAA TAT GAA ACT AAC GTT GGG TCC CAG GGG TCT CAA CTC TCT AGA GGG GAG AAA CAA CGC ATT GCT ATT GCT CGG GCC ATT GTA CGA GAT CCT AAA ATC TTG CTA CTA GAT GAA GCC ACT TCT GCC TTA GAC ACA GAA AGT GAA AAG ACG GTG CAG GTT GCT CTA GAC AAA GCC AGA GAG GGT CGG ACC TGC ATT GTC ATT GCC CAT CGC TTG TCC ACC ATC CAG AAC GCG GAT ATC ATT GCT GTC ATG GCA CAG GGG GTG GTG ATT GAA AAG GGG ACC CAT GAA GAA CTG ATG GCC CAA AAA GGA GCC TAC TAC AAA CTA GTC ACC ACT GGA TCC CCC ATC AGT TGA
Таблица 4. Примерные мутации ABCB11
insACATCGATGTTGATGTTAGG45
Таблица 5. Избранные мутации ABCB11, связанные с PFIC-2
A Мутация в «X» обозначает ранний стоп-кодон
Список литературы для Таблиц 4 и 5
1 Noe et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(3), p. 536-543.
2 Lam et al., Am J Physiol Cell Physiol. 2007, vol. 293(5), p. C1709-16.
3 Stindt et al., Liver Int. 2013, vol. 33(10), p. 1527-1735.
4 Gao et al., Shandong Yiyao 2012, vol. 52(10), p. 14-16.
5 Strautnieks et al., Gastroenterology. 2008, vol. 134(4), p. 1203-1214.
6 Kagawa et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008, vol. 294(1), p. G58-67.
7 Byrne et al., Hepatology. 2009, vol. 49(2), p. 553-567.
8 Chen et al., J Pediatr. 2008, vol. 153(6), p. 825-832.
9 Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.
10 Dröge et al., Sci Rep. 2016, vol. 6: 24827.
11 Lang et al., Pharmacogenet Genomics. 2007, vol. 17(1), p. 47-60.
12 Ellinger et al., World J Gastroenterol. 2017, vol. 23(29), p. :5295-5303.
13 Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.
14 Knisely et al., Hepatology. 2006, vol. 44(2), p. 478-86.
15 Ellis et al., Hepatology. 2018, vol. 67(4), p. 1531-1545.
16 Lam et al., J Hepatol. 2006, vol. 44(1), p. 240-242.
17 Varma et al., Hepatology 2015, vol. 62(1), p. 198-206.
18 Treepongkaruna et al., World J Gastroenterol. 2009, vol. 15(34), p. 4339-4342.
19 Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.
20 Hayashi et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(2), p. 192-200.
21 Guorui et al., Linchuang Erke Zazhi 2013, vol. 31(10), 905-909.
22 van Mil et al., Gastroenterology. 2004, vol. 127(2), p. 379-384.
23 Anzivino et al., Dig Liver Dis. 2013, vol. 45(3), p. 226-232.
24 Park et al., World J Gastroenterol. 2016, vol. 22(20), p. 4901-4907.
25 Imagawa et al., J Hum Genet. 2018, vol. 63(5), p. 569-577.
26 Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.
27 Hu et al., Mol Med Rep. 2014, vol. 10(3), p. 1264-1274.
28 Lang et al,. Drug Metab Dispos. 2006, vol. 34(9), p. 1582-1599.
29 Masahata et al., Transplant Proc. 2016, vol. 48(9), p. 3156-3162.
30 Holz et al., Hepatol Commun. 2018, vol. 2(2), p. 152-154.
31 Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.
32 Francalanci et al., Laboratory Investigation 2011, vol. 91, Supp. SUPPL. 1, pp. 360A. Abstract Number: 1526.
33 Francalanci et al., Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 1, pp. S16. Abstract Number: T.N.5.
34 Shah et al., J Pediatr Genet. 2017, vol. 6(2), p. 126-127.
35 Gao et al., Hepatitis Monthly 2017, vol. 17(10), e55087/1-e55087/6.
36 Evason et al., Am J Surg Pathol. 2011, vol. 35(5), p. 687-696.
37 Davit-Spraul et al., Mol Genet Metab. 2014, vol. 113(3), p. 225-229.
38 Maggiore et al., J Hepatol. 2010, vol. 53(5), p. 981-6.
39 McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32.v2
40 Liu et al., Pediatr Int. 2013, vol. 55(2), p. 138-144.
41 Waisbourd-Zinman et al., Ann Hepatol. 2017, vol. 16(3), p. 465-468.
42 Griffin, et al., Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology 2016, vol. 2016. Abstract Number: A200. Meeting Info: 2016 Canadian Digestive Diseases Week, CDDW 2016. Montreal, QC, United States. 26 Feb 2016-29 Feb 2016
43 Qiu et al., Hepatology 2017, vol. 65(5), p. 1655-1669.
44 Imagawa et al., Sci Rep. 2017, 7:41806.
45 Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]
46 Takahashi et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007, vol. 19(11), p. 942-6.
47 Shimizu et al., Am J Transplant. 2011, vol. 11(2), p. 394-398.
48 Krawczyk et al., Ann Hepatol. 2012, vol. 11(5), p. 710-744.
49 Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.
50 Sattler et al., Journal of Hepatology 2017, vol. 66, No. 1, Suppl. S, pp. S177. Meeting Info.: International Liver Congress / 52nd Annual Meeting of the European-Association-for-the-Study-of-the-Liver. Amsterdam, NETHERLANDS. April 19-23, 2017. European Assoc Study Liver.
51 Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.
52 Sciveres. Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 5, pp. S329. Abstract Number: CO18. Meeting Info: 17th National Congress SIGENP. Pescara, Italy. 07 Oct 2010-09 Oct 2010
53 Sohn et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2019, vol. 22(2), p. 201-206.
54 Ho et al., Pharmacogenet Genomics. 2010, vol. 20(1), p. 45-57.
55 Wang et al., Hepatol Res. 2018, vol. 48(7), p. 574-584.
56 Shaprio et al., J Hum Genet. 2010, vol. 55(5), p. 308-313.
57 Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1C. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.
58 Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.
59 Jankowska et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014, vol. 58(1), p. 92-95.
60 Kim. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 62, Supp. SUPPL. 1, pp. 620. Abstract Number: H-P-045. Meeting Info: 49th Annual Meeting of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2016. Athens, Greece. 25 May 2016-28 May 2016.
61 Pauli-Magnus et al., Hepatology 2003, vol. 38, No. 4 Suppl. 1, pp. 518A. print. Meeting Info.: 54th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases. Boston, MA, USA. October 24-28, 2003. American Association for the Study of Liver Diseases.
62 Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S362. Abstract Number: PP0347. Meeting Info: 26th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2017. Shanghai, China. 15 Feb 2017-19 Feb 2017.
63 Rumbo et al., Transplantation 2018, vol. 102, No. 7, Supp. Supplement 1, pp. S848. Abstract Number: P.752. Meeting Info: 27th International Congress of The Transplantation Society, TTS 2018. Madrid, Spain. 30 Jun 2018-05 Jul 2018.
64 Lee et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2017, vol. 20(2), p. 114-123.
65 Sherrif et al., Liver international: official journal of the International Association for the Study of the Liver 2013, vol. 33, No. 8, pp. 1266-1270.
66 Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.
67 Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.
68 Lin et al., Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2018, vol. 20(9), p. 758-764.
69 Harmanci et al., Experimental and Clinical Transplantation 2015, vol. 13, Supp. SUPPL. 2, pp. 76. Abstract Number: P62. Meeting Info: 1st Congress of the Turkic World Transplantation Society. Astana, Kazakhstan. 20 May 2015-22 May 2015.
70 Herbst et al., Mol Cell Probes. 2015, vol. 29(5), p. 291-298.
71 Moghadamrad et al., Hepatology. 2013, vol. 57(6), p. 2539-2541.
72 Holz et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2016, vol. 54, No. 8. Abstract Number: KV275. Meeting Info: Viszeralmedizin 2016, 71. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Gastroenterologie, Verdauungs- und Stoffwechselkrankheiten mit Sektion Endoskopie - 10. Herbsttagung der Deutschen Gesellschaft fur Allgemein- und Viszeralchirurgie. Hamburg, Germany. 21 Sep 2016-24 Sep 2016.
73 Wang et al., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.
74 Hao et al., International Journal of Clinical and Experimental Pathology 2017, vol. 10(3), p. 3480-3487.
75 Arnell et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 494-499.
76 Sharma et al., Indian Journal of Gastroenterology 2017, vol. 36, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. A99. Abstract Number: M-20. Meeting Info: 58th Annual Conference of the Indian Society of Gastroenterology, ISGCON 2017. Bhubaneswar, India. 14 Dec 2017-17 Dec 2017.
77 Beauséjour et al., Can J Gastroenterol. 2011, vol. 25(6), p. 311-314.
78 Imagawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 63, Supp. Supplement 2, pp. S51. Abstract Number: 166. Meeting Info: World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition 2016. Montreal, QC, Canada. 05 Oct 2016-08 Oct 2016.
79 Peng et al., Zhonghua er ke za zhi (Chinese journal of pediatrics) 2018, vol. 56, No. 6, pp. 440-444.
80 Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923.
81 Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 66, Supp. Supplement 2, pp. 860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018.
82 Wong et al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p. 1141-1148.
83 Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.
84 Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60, vol. 3, p. 368-374.
85 Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp. A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Washington, DC, USA. May 19-24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract.
86 Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p. 52-54.
87 Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp. S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16-21, 2015.
88 Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.
89 Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p. 809-815.
90 Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.
91 Патент США № 9295677
В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.
Предоставлены способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у объекта, которые включают выполнение анализа образца, полученного от объекта, чтобы определить, есть ли у объекта мутация, связанная с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, NR1H4 или мутации Myo5b), и введение (например, специфическое или селективное введение) терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли объекту, у которого определена ассоциированная мутация с PFIC. В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.
Также представлены способы лечения PFIC (например, PFIC-1 и PFIC-2) у объекта, нуждающегося в этом, способ, включающий: (а) обнаружение мутации, связанной с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, TJP2, Мутация NR1H4 или Myo5b) у объекта; и (b) введение объекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях способы лечения PFIC могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли объекту, имеющему мутацию, связанную с PFIC (например, ATP8B1, ABCB11, ABCB4, мутация TJP2, NR1H4 или Myo5b). В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию ATP8B1 или ABCB11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация ATP8B1 выбрана из L127P, G308V, T456M, D554N, F529del, I661T, E665X, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в ABCB11 выбрана из A167T, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, A570T, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.
В некоторых воплощениях изобретения определяется, что у объекта есть мутация, связанная с PFIC, у объекта или в образце биопсии из объекта с помощью любых признанных в данной области тестов, включая секвенирование следующего поколения (NGS). В некоторых воплощениях изобретения у объекта определяется наличие мутации, связанной с PFIC, с использованием одобренного регулирующим органом, например, одобренного FDA теста или анализа для идентификации мутации, связанной с PFIC, у объекта или образца биопсии из объекта, либо путем выполнения любой из неограничивающих примеров анализов, описанных в данном документе. Дополнительные способы диагностики PFIC описаны в Gunaydin, M. et al., Hepat Med. 2018, т. 10, p. 95-104, полностью включено в настоящий документ ссылкой.
В некоторых воплощениях лечение PFIC (например, PFIC-1 или PFIC-2) снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение PFIC включает лечение зуда.
Поскольку LBAT экспрессируется на гепатоцитах, LBAT и вещества с двойным ингибитором ASBT/LBAT должны иметь хотя бы некоторую биодоступность и свободную фракцию в крови. Поскольку соединения-ингибиторы LBAT должны выживать только из кишечника в печень, ожидается, что относительно низкая системная экспозиция таких соединений будет достаточной, тем самым минимизируя потенциальный риск любых побочных эффектов в остальной части тела. Ожидается, что ингибирование LBAT и ASBT будет иметь, по меньшей мере, аддитивный эффект в снижении концентрации внутрипеченочных желчных кислот. Также ожидается, что двойной ингибитор ASBT/LBAT может снижать уровни желчных кислот, не вызывая диареи, как это иногда наблюдается с ингибиторами ASBT.
Ожидается, что соединения, обладающие высокой эффективностью ингибирования LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения гепатита. Ожидается, что соединения, обладающие двойной активностью ингибирования ASBT/LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH).
NASH - это распространенное и серьезное хроническое заболевание печени, которое напоминает алкогольную болезнь печени, но встречается у людей, которые пьют мало или совсем не употребляют алкоголь. У пациентов с NASH накопление жира в печени, известное как неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) или стеатоз, и другие факторы, такие как высокий уровень холестерина ЛПНП и инсулинорезистентность, вызывают хроническое воспаление в печени и могут привести к прогрессирующему рубцеванию ткани, известному как фиброз и цирроз, за которыми в конечном итоге следует печеночная недостаточность и смерть. Было обнаружено, что у пациентов с NASH общие концентрации желчных кислот в сыворотке крови значительно выше, чем у здоровых объектов в условиях голодания (увеличение NASH в 2,2-2,4 раза) и во всех временных точках после приема пищи (увеличение NASH в 1,7-2,2 раза). Они вызваны повышенным содержанием первичных и вторичных желчных кислот, конъюгированных с таурином и глицином. Пациенты с NASH демонстрировали большую вариабельность профиля желчных кислот натощак и после приема пищи. Эти результаты показывают, что пациенты с NASH имеют более высокое воздействие желчных кислот натощак и после приема пищи, включая более гидрофобные и цитотоксические вторичные виды. Повышенное воздействие желчных кислот может быть связано с повреждением печени и патогенезом NAFLD и NASH (Ferslew et al., Dig Dis Sci. 2015, т. 60, p. 3318-3328). Следовательно, вероятно, что ингибирование ASBT и/или LBAT будет полезным для лечения NASH.
NAFLD характеризуется стеатозом печени без вторичных причин стеатоза печени, включая чрезмерное употребление алкоголя, другие известные заболевания печени или длительный прием стеатогенных медикаментов (Chalasani et al., Hepatology 2018, vol. 67(1), p. 328-357). NAFLD можно разделить на неалкогольную жировую болезнь печени (NAFL) и неалкогольный стеатогепатит (NASH). Согласно Chalasani et al., NAFL определяется как наличие ≥ 5% стеатоза печени без признаков гепатоцеллюлярного повреждения в виде баллонирования гепатоцитов. NASH определяется как наличие ≥ 5% стеатоза печени и воспаления с повреждением гепатоцитов (например, баллонирование), с фиброзом печени или без него. NASH также часто связан с воспалением и фиброзом печени, который может прогрессировать до цирроза, терминальной стадии заболевания печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Хотя фиброз печени не всегда присутствует при NASH, тяжесть фиброза, если она присутствует, может быть связана с долгосрочными результатами.
Существует множество подходов, используемых для оценки наличия у объекта NAFLD и, в случае наличия, степени тяжести заболевания, включая определение того, является ли NAFLD NAFL или NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях обработку NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях NAS может быть определен, как описано в Kleiner et al., Hepatology. 2005, 41(6):1313-1321, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. См., например, Таблицу 6, где представлена упрощенная схема NAS, адаптированная из Kleiner.
Таблица 6. Пример оценки активности NAFLD (NAFLD) со стадией фиброза
В некоторых воплощениях NAS определяется неинвазивно, например, как описано в публ. заявки США № 2018/0140219, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях NAS определяется для образца от объекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NAS определяется в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях более низкий балл NAS в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с до введения соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль указывает на лечение NAFLD (например, NASH). Например, уменьшение NAS на 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 указывает на лечение NAFLD (например, NASH). В некоторых воплощениях NAS после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше.
Дополнительные подходы к оценке и оценке NASH у объекта включают определение одного или нескольких из них: стеатоз печени (например, накопление жира в печени); воспаление печени; биомаркеры, указывающие на одно или несколько из поражения печени, воспаления печени, фиброза печени и/или цирроза печени (например, маркеры и панели сыворотки). Дополнительные примеры физиологических показателей NASH могут включать морфологию печени, жесткость печени и размер или массу печени объекта.
В некоторых воплощениях NASH у объекта подтверждается накоплением печеночного жира и обнаружением биомаркера, указывающего на повреждение печени. Например, повышенный уровень ферритина в сыворотке и низкие титры аутоантител в сыворотке могут быть общими признаками NASH.
В некоторых воплощениях способы оценки NASH включают магнитно-резонансную томографию либо с помощью спектроскопии, либо с помощью фракции жира по плотности протонов (MRI-PDFF) для количественной оценки стеатоза, транзиентной эластографии (FIBROSCAN®), градиента венозного давления в печени (HPVG), измерения жесткости печени с помощью MRE для диагностики значительного фиброза и/или цирроза печени и оценки гистологических особенностей биопсии печени. В некоторых воплощениях изобретения магнитно-резонансная томография используется для обнаружения одного или нескольких из стеатогепатита (NASH-МРТ), фиброза печени (Фибро-МРТ) и стеатоза. См., например, публ. заявок США № 2016/146715 и 2005/0215882, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой.
В некоторых воплощениях лечение NASH может включать уменьшение одного или нескольких симптомов, связанных с NASH; уменьшение степени стеатоза печени; снижение NAS; уменьшение воспаления печени; снижение уровня биомаркеров, указывающих на одно или несколько повреждений печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени; и уменьшение фиброза и/или цирроза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза, или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза у объекта после введения одной или нескольких доз соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых воплощениях лечение NASH включает уменьшение одного или нескольких симптомов, связанных с NASH, у объекта. Типичные симптомы могут включать один или несколько из следующих симптомов: увеличение печени, усталость, боль в правом верхнем углу живота, вздутие живота, увеличение кровеносных сосудов непосредственно под поверхностью кожи, увеличение молочных желез у мужчин, увеличение селезенки, красные ладони, желтуха и зуд. В некоторых воплощениях у объекта нет симптомов. В некоторых воплощениях общая масса тела объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях общая масса тела пациента уменьшается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (body mass index, BMI) объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) у объекта снижается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (Waist To Hip, WTH) объекта не увеличивается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (WTH) объекта уменьшается.
В некоторых воплощениях лечение NASH можно оценить путем измерения стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает уменьшение стеатоза печени после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, как описано в данном документе. В некоторых воплощениях стеатоз печени определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из ультрасонографии, компьютерной томографии (CT), магнитно-резонансной томографии, магнитно-резонансной спектроскопии (MRS), магнитно-резонансной эластографии (MRE), транзиентной эластографии (TE) (например, FIBROSCAN®), измерение размера или массы печени или с помощью биопсии печени (см., например, Di Lascio et al., Ultrasound Med Biol. 2018, vol. 44(8), p. 1585-1596; Lv et al., J Clin Transl Hepatol. 2018, vol. 6(2), p. 217-221; Reeder et al., J Magn Reson Imaging. 2011, vol. 34(4), spcone; and de Lédinghen V, et al., J Gastroenterol Hepatol. 2016, vol. 31(4), p. 848-855, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Объект с диагнозом NASH может иметь стеатоз печени более чем около 5%, например, от около 5% до около 25%, от около 25% до около 45%, от около 45% до около 65% или более чем около 65% стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения у объекта со стеатозом печени от более чем около 5% до около 33% имеется стеатоз печени 1 стадии, у объекта со стеатозом печени от около 33% до около 66% имеется стеатоз печени 2 стадии и у объекта со стеатозом печени более чем около 66% стеатоза печени имеет стеатоз печени 3 стадии.
В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени стеатоза печени в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. Например, уменьшение степени стеатоза печени от около 1% до около 50%, от около 25% до около 75% или от около 50% до около 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение степени стеатоза печен на около 5%, около 10%, около 15%, около 20%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, около 65%, около 70%, около 75%, около 80%, около 85%, около 90% или около 95% указывают на лечение NASH.
В некоторых воплощениях наличие воспаления печени определяют одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из биомаркеров, указывающих на воспаление печени, и образца(-ов) биопсии печени из объекта. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют по образцу(-ам) биопсии печени из объекта. Например, воспаление печени в образце биопсии печени можно оценить, как описано в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321 и Brunt et al., Am J Gastroenterol 1999, vol. 94, p. 2467-2474, каждый из которых включен в данный документ ссылкой полностью. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение тяжести воспаления печени в течение временного периода или после временного периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или ее фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. Например, уменьшение тяжести воспаления печени от около 1% до около 50%, от около 25% до около 75% или от около 50% до около 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение тяжести воспаления печени около на 5%, около 10%, около 15%, около 20%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45%, около 50%, около 55%, около 60%, около 65%, около 70%, около 75%, около 80%, около 85%, около 90% или около 95% указывают на лечение NASH.
В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает лечение фиброза и/или цирроза, например, уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза печени или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза. В некоторых воплощениях наличие фиброза и/или цирроза определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), неинвазивных маркеров фиброза печени и гистологических характеристик биопсии печени. В некоторых воплощениях степень тяжести (например, стадия) фиброза определяется одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), системы оценок фиброза, биомаркеров фиброза печени (например, неинвазивные биомаркеры) и градиент печеночного венозного давления (HVPG). Неограничивающие примеры систем оценок фиброза включают систему оценок фиброза NAFLD (см., например, Angulo et al., Hepatology 2007, vol. 45 (4), p. 846-54), систему оценок фиброза в Brunt et al., Am. J. Gastroenterol. 1999, vol. 94, p. 2467-2474, систему оценок фиброза в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321, и систему оценок фиброза ISHAK (см. Ishak et al., J. Hepatol. 1995, vol. 22, p. 696-699), содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ ссылкой.
В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени тяжести фиброза в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяется с использованием системы оценки, такой как любая из систем оценки фиброза, описанных в данном документе, например, оценка может указывать на стадию фиброза, например, стадию 0 (без фиброза), стадию 1, стадию 2, стадию 3 и стадию 4 (цирроз) (см., например, Kleiner et al). В некоторых воплощениях снижение стадии фиброза представляет собой уменьшение степени тяжести фиброза. Например, уменьшение на 1, 2, 3 или 4 стадии - это уменьшение степени тяжести фиброза. В некоторых воплощениях уменьшение стадии, например, от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3. к стадии 1, от стадии 3 к стадии 0, от стадии 2 к стадии 1, от стадии 2 к стадии 0 или от стадии 1 к стадии 0 указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, по сравнению с предыдущими к введению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 в течение периода времени введения соединения формулы (I) или фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от 4 до 3, от 4 до 2, от 4 до 1, от 4 до 0, от 3 до 2, от 3 до 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0, или от стадии 1 до стадии 0 после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых воплощениях присутствие NASH определяется одним или несколькими биомаркерами, указывающими на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени или их системы оценок. В некоторых воплощениях степень тяжести NASH определяется одним или несколькими биомаркерами, указывающими на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени или их системами оценок. Уровень биомаркера можно определить, например, путем измерения, количественной оценки и мониторинга уровня экспрессии гена или мРНК, кодирующей биомаркер и/или пептид или белок биомаркера. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на одно или несколько из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени и/или их системы оценок, включают индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI); соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR); оценка FIB-4, которая основана на уровнях APRI, аланинаминотрансферазы (ALT) и возрасте объекта (см., например, McPherson et al., Gut 2010, vol. 59(9), p. 1265-9, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой); гиалуроновая кислота; провоспалительные цитокины; панель биомаркеров, состоящая из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панель биомаркеров, состоящая из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, т. 51(10), p. 1867-1873), и панель биомаркеров, состоящая из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); панель биомаркеров, состоящая из тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (TIMP-1), амино-концевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценки генерализованного фиброза печени (ELF), см., например, Lichtinghagen R, et al., J Hepatol. 2013 Aug;59(2):236-42, который полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях наличие фиброза определяется по одному или нескольким показателям FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873) и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).
В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) снижается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) снижается. В некоторых воплощениях «уровень» фермента относится к концентрации фермента, например, в крови. Например, уровень AST или ALT может быть выражен в единицах/л.
В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяется одним или несколькими из числа оценки FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина A1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) в сочетании с возрастом и полом объекта для создания меры фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина в сочетании с возрастом и полом объекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, т. 51(10), p. 1867-1873, который полностью включен в настоящий документ ссылкой), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (HA) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).
В некоторых воплощениях изобретения воспаление печени определяется уровнем биомаркеров воспаления печени, например, провоспалительных цитокинов. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на воспаление печени, включают интерлейкин-(IL) 6, интерлейкин-(IL) 1β, фактор некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующий фактор роста (TGF)-β, хемотаксический белок моноцитов (MCP)-1, С-реактивный белок (CRP), PAI-1 и изоформы коллагена, такие как Col1a1, Col1a2 и Col4a1 (см., например, Neuman, et al., Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618 и Пат. США № 9872844, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Воспаление печени также можно оценить по изменению инфильтрации макрофагами, например, по изменению уровня экспрессии CD68. В некоторых воплощениях изобретения воспаление печени может быть определено путем измерения или мониторинга уровней в сыворотке или циркулирующих уровней одного или нескольких из числа: интерлейкин-(IL) 6, интерлейкин-(IL)1β, фактор некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующий фактор роста (TGF)-β, хемотаксический белок моноцитов (MCP)-1 и C-реактивный белок (CRP).
В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяется для образца от объекта до введения соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на один или несколько из следующих признаков: повреждение, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, определяется в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с предшествующим введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, по меньшей мере, около на 5%, по меньшей мере, около на 10%, по меньшей мере, около на 15%., по меньшей мере, около 20%, по меньшей мере, около 25%, по меньшей мере, около 30%, по меньшей мере, около 35%, по меньшей мере, около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или по меньшей мере около 99% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или по меньшей мере около 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95% или, по меньшей мере, около 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или нескольких биомаркеров, указывающих на одно или несколько из числа повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере около 5%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере, около 45%, по меньшей мере, около 50%, по меньшей мере, около 55%, по меньшей мере, около 60%, по меньшей мере, около 65%, по меньшей мере, около 70%, по меньшей мере, около 75%, по меньшей мере, около 80%, по меньшей мере, около 85%, по меньшей мере, около 90%, по меньшей мере, около 95% или, по меньшей мере, около 99%.
В некоторых воплощениях лечение NASH снижает уровень желчных кислот в сыворотке у объекта. В некоторых воплощениях уровень желчных кислот в сыворотке определяется, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% уровня желчных кислот в сыворотке до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NASH представляет собой NASH с сопутствующим холестазом. При холестазе выделение желчи, в том числе желчных кислот, из печени блокируется. Желчные кислоты могут вызывать повреждение гепатоцитов (см., например, Perez MJ, Briz O. World J. Gastroenterol. 2009, vol. 15(14), p. 1677-1689), вероятно, приводя или увеличивая прогрессирование фиброза (например, цирроза) и увеличивая риск гепатоцеллюлярной карциномы (см., например, Sorrentino P et al., Dig. Dis. Sci. 2005, vol. 50(6), p. 1130-1135 и Satapathy SK and Sanyal AJ. Semin. Liver Dis. 2015, vol. 35(3), p. 221-235, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение зуда. В некоторых воплощениях лечение NASH с сопутствующим холестазом включает лечение зуда. В некоторых воплощениях у объекта с NASH с сопутствующим холестазом наблюдается зуд.
Типичные биомаркеры NASH представлены в Таблице 7.
Таблица 7. Типичные биомаркеры NASH
Список литературы для Таблицы 7
1 McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p. 1265-1269.
2 Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873.
3 Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p. 236-242.
4 Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618.
5 Пат. США № 9872844
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь более высокую свободную фракцию в плазме. В некоторых воплощениях свободная фракция составляет более чем около 0,2%, например, более чем около 0,4%, например, более чем около 0,6%, например, более чем около 0,8%, например, более чем около 1,0%, например, больше чем около 1,25%, например, более чем около 1,5%, например, более чем около 1,75%, например, более чем около 2,0%, например, более чем около 2,5%, например, более чем около 3%, например, более чем около 4%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7,5%, например, более чем около 10%, или, например, более чем около 20%.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут выделяться с мочой. В некоторых воплощениях доля соединения, которая выводится с мочой, составляет более чем около 0,2%, например, более чем около 0,4%, например, более чем около 0,6%, например, более чем около 0,8%, например, более чем около 1,0%, например, более чем около 2%, например, более чем около 3%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7,5%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30% или например, более чем около 50%.
После абсорбции из кишечника некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут циркулировать через энтерогепатическую циркуляцию. В некоторых воплощениях доля соединения, которая циркулирует через энтерогепатическую циркуляцию, составляет более чем около 0,1%, например, более чем около 0,2%, например, более чем около 0,3%, например, более чем около 0,5%, например, более чем около 1,0%, например, более чем около 1,5%, например, более чем около 2%, например, более чем около 3%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30% или например, более чем около 50%.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать почечную экскрецию солей желчных кислот. В некоторых воплощениях доля циркулирующих желчных кислот, которая выводится почечным путем, составляет более чем около 1%, например, более чем около 2%, например, более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20% или например, более чем около 25%.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную проницаемость. Проницаемость может быть измерена в клетках Caco2, и значения даны как значения Papp (кажущаяся проницаемость) в см/с. В некоторых воплощениях проницаемость больше, чем, по меньшей мере, около 0,1 × 10-6 см/с, например, больше, чем около 0,2 ⋅ 10-6 см/с, например, больше, чем около 0,4 × 10-6 см/с, например, как больше чем около 0,7 × 10-6 см/с, например, больше чем около 1,0 × 10-6 см/с, например, как больше чем около 2 × 10-6 см/с, например, больше чем около 3 × 10-6 см/с, например, более чем около 5 × 10-6 см/с, например, более чем около 7 × 10-6 см/с, например, более чем около 10 × 10-6 см/с, например, более чем около 15 × 10-6 см/с.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную биодоступность. В некоторых воплощениях пероральная биодоступность составляет более чем около 5%, например, более чем около 7%, например, более чем около 10%, например, более чем около 15%, например, более чем около 20%, например, более чем около 30%, например, более чем около 40%, например, более чем около 50%, например, более чем около 60%, например, более чем около 70% или например, более чем около 80%. В других воплощениях пероральная биодоступность составляет от около 10 до около 90%, например, от около 20 до около 80%, например, от около 30 до около 70% или, например, от около 40 до около 60%.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть субстратом для соответствующих переносчиков в почках.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать повышение концентраций желчных кислот в кишечнике, печени и сыворотке, которые не вызывают неблагоприятных желудочно-кишечных эффектов.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут снижать концентрацию желчных кислот в печени, не вызывая желудочно-кишечных расстройств, таких как диарея.
Используемые в данном документе термины «лечение», «проводить лечение» и «лечить» относятся к обращению вспять, облегчению, отсрочке начала или ингибированию развития заболевания или расстройства, или одного или нескольких их симптомов, описанных в данном документе. В некоторых воплощениях лечение можно проводить после развития одного или нескольких симптомов. В других воплощениях лечение можно проводить при отсутствии симптомов. Например, лечение может быть назначено восприимчивому индивиду до появления симптомов (например, в свете симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов восприимчивости). Лечение также может быть продолжено после исчезновения симптомов, например, для предотвращения или отсрочки их повторения.
Подходящей фармацевтически приемлемой солью соединения изобретения является, например, основно-аддитивная соль соединения изобретения, которая является достаточно кислой, такой как соль щелочного металла (например, соль натрия или калия), соль щелочно-земельного металла (например, соль кальция или магния), соль аммония или соль с органическим основанием, которое дает физиологически приемлемый катион, например, соль с метиламином, диметиламином, триметиламином, пиперидином, морфолином или трис-(2-гидроксиэтил)амином.
Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь хиральные центры и/или геометрические изомерные центры (E- и Z-изомеры). Следует понимать, что изобретение охватывает все такие оптические изомеры, диастереоизомеры и геометрические изомеры, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Изобретение также охватывает любые и все таутомерные формы соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах, таких как, например, гидратированные формы. Следует понимать, что изобретение охватывает все такие сольватированные формы, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT.
В другом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей. Наполнители могут, например, включают наполнители, связующие, разрыхлители, скользящие вещества и смазки. Как правило, фармацевтические композиции могут быть приготовлены обычным способом с использованием обычных наполнителей.
Примеры подходящих наполнителей включают, без ограничения указанным, дикальций фосфат дигидрат, сульфат кальция, лактозу (например, моногидрат лактозы), сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, сухой крахмал, гидролизованный крахмал и прежелатинизированный крахмал. В некоторых воплощениях наполнитель представляет собой маннит и/или микрокристаллическую целлюлозу.
Примеры подходящих связующих включают, без ограничения указанным, крахмал, прежелатинизированный крахмал, желатин, сахара (такие как сахароза, глюкоза, декстроза, лактоза и сорбитол), полиэтиленгликоль, воски, натуральные и синтетические камеди (такие как камедь акации и трагакантовая камедь), альгинат натрия, производные целлюлозы (такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза и этилцеллюлоза) и синтетические полимеры (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты и поливинилпирролидон (повидон)). В некоторых воплощениях связующее представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу (гипромеллозу).
Примеры подходящих разрыхлителей включают, без ограничения указанным, сухой крахмал, модифицированный крахмал (такой как (частично) прежелатинизированный крахмал, гликолят крахмала натрия и карбоксиметилкрахмал натрия), альгиновую кислоту, производные целлюлозы (такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилцеллюлоза и низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза (L-HPC)) и перекрестно-сшитые полимеры (такие как кармеллоза, кроскармеллоза натрия, кармеллоза кальция и перекрестно-сшитый PVP (кросповидон)). В некоторых воплощениях разрыхлитель представляет собой натрий кроскармеллозу.
Примеры подходящих глидантов и лубрикантов включают, без ограничения указанным, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, глицерил бегенат, коллоидный диоксид кремния, водный диоксид кремния, синтетический силикат магния, тонкодисперсный оксид кремния, крахмал, лаурилсульфат натрия, борная кислота, оксид магния, воски (такие как карнаубский воск), гидрогенизированное масло, полиэтиленгликоль, бензоат натрия, полиэтиленгликоль и минеральное масло. В некоторых воплощениях глидант или лубрикант представляет собой стеарат магния или коллоидный диоксид кремния.
Фармацевтическая композиция может быть обычно покрыта одним или несколькими покровными слоями. Также рассматриваются слои энтеросолюбильного покрытия или слои покрытия для замедленного или целевого высвобождения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Слои покрытия могут содержать один или несколько агентов покрытия и необязательно могут содержать пластификаторы и/или пигменты (или красители).
Примеры подходящих покрывающих агентов включают, без ограничения указанным, полимеры на основе целлюлозы (такие как этилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза, фталат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы и сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы) полимеры на основе (например, поливиниловый спирт) и полимеры на основе акриловой кислоты и ее производных (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты и полиметакриловой кислоты). В некоторых воплощениях покрывающий агент представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу. В других воплощениях покрывающий агент представляет собой поливиниловый спирт.
Примеры подходящих пластификаторов включают, без ограничения указанным, триэтилцитрат, глицерилтриацетат, трибутилцитрат, диэтилфталат, ацетилтрибутилцитрат, дибутилфталат, дибутилсебацинат и полиэтиленгликоль. В определенных воплощениях пластификатор представляет собой полиэтиленгликоль.
Примеры подходящих пигментов включают, без ограничения указанным, диоксид титана, оксиды железа (такие как желтые, коричневые, красные или черные оксиды железа) и сульфат бария.
Фармацевтическая композиция может быть в форме, подходящей для перорального введения, для парентеральной инъекции (включая внутривенную, подкожную, внутримышечную и внутрисосудистую инъекцию), для местного введения или для ректального введения. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетка или капсула.
Дозировка, необходимая для терапевтического или профилактического лечения, будет зависеть от пути введения, тяжести заболевания, возраста и массы пациента и других факторов, обычно рассматриваемых лечащим врачом при определении подходящего режима и уровня дозировки для конкретного пациента.
Количество вводимого соединения будет варьировать для пациента, которого лечат, и может варьировать от около 1 мкг/кг массы тела до около 50 мг/кг массы тела в день. Форма стандартной дозы, такая как таблетка или капсула, обычно будет содержать от около 1 до около 250 мг активного ингредиента, например, от около 1 до около 100 мг, или от около 1 до около 50 мг, или от около 1 до около 20 мг, например, около 2,5 мг, или около 5 мг, или около 10 мг или около 15 мг. Суточная доза может вводиться как разовая доза или разделена на одну, две, три или более стандартных доз. Суточная доза модулятора желчной кислоты, вводимая перорально, предпочтительно составляет от около 0,1 до около 250 мг, более предпочтительно от около 1 до около 100 мг, например, от около 1 до около 5 мг, например, от около 1 до около 10 мг, например, от около 1 до около 15 мг или от около 1 до около 20 мг.
В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I).
(I)
где
каждый из R2 и R2 независимо представляет собой C1-4 алкил;
R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C1-4 алкила, C1-4 галогеналкила, C1-4 алкокси, C1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C1-4 алкил) амино, N,N-ди(С1-4алкил)амино и N-(арил-С1-4алкил)амино;
n - целое число 1, 2 или 3;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, C3-6 циклоалкила, C1-4 алкокси, C3-6 циклоалкилокси, C1-4 алкилтио, C3-6 циклоалкилтио, амино, N-(C1-4 алкил)амино и N,N-ди(C1-4 алкил)амино;
каждый из R5A, R5B, R5C и R5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино и C1-4 алкила и C1-4 алкокси;
или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства.
В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения при лечении или профилактике любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к способу лечения или профилактики любого из перечисленных в данном документе заболеваний у объекта, такого как человек, включающему введение объекту, нуждающемуся в таком лечении или профилактике, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли.
Комбинированная терапия
В одном аспекте изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводятся в комбинации по меньшей мере с одним другим терапевтически активным агентом, например, с одним, двумя, тремя или более другими терапевтически активными агентами. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере один другой терапевтически активный агент можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Терапевтически активные агенты, которые подходят для комбинации с соединениями формулы (I), включают, без ограничения указанным, известные активные агенты, которые полезны при лечении любого из вышеупомянутых состояний, нарушений и заболеваний.
В одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с другим ингибитором ASBT. Подходящие ингибиторы ASBT описаны в WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449., WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205 и EP 1535913, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании со связующим желчных кислот (также называемым секвестрантом желчных кислот или смолой), таким как колесевелам, холестирамин или холестипол. В предпочтительном воплощении такой комбинации связующее желчных кислот составлено для высвобождения из толстой кишки. Примеры таких составов раскрыты, например, в WO 2017/138877, WO 2017/138878, WO 2019/032026 и WO 2019/032027, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором DPP-IV, включая глиптины, такие как ситаглиптин, вилдаглиптин, саксаглиптин, линаглиптин, гемиглиптин, анаглиптин, тенелиглиптин, трелаглиптин, аллоглиптин. омариглиптин, эвоглиптин, гозоглиптин и дутоглиптин или их фармацевтически приемлемые соли.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором HMG CoA редуктазы, таким как флувастатин, ловастатин, правастатин, симвастатин, аторвастатин, питавастатин, церивастатин, мевастатин, розувастатин, бервастатин или далвастатин или их фармацевтически приемлемая соль.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором абсорбции холестерина, таким как эзетимиб, или его фармацевтически приемлемой солью.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводятся в комбинации с агонистом PPAR-альфа, включая фибраты, такие как клофибрат, безафибрат, ципрофибрат, клинофрибрат, клофибрид, фенофибрат, гемфиброзил, ронифибрат и симфрибрат, или его фармацевтически приемлемая соль.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с гамма-агонистом PPAR, включая тиазолидиндионы, такие как пиоглитазон, розиглитазон и лобеглитазон, или их фармацевтически приемлемые соли.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/гамма, включая глитазары, такие как сароглитазар, алеглитазар, мураглитазар или тесаглитазар, или их фармацевтически приемлемые соли.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом альфа/дельта PPAR, таким как элафибранор.
В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с пан-агонистом PPAR (т.е. агонистом PPAR, который обладает активностью во всех подтипах: α, γ и δ), таким как IVA337.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модуляторами рецептора фарнезоида X (FXR), включая агонисты FXR, такие как кафестол, хенодезоксихолевая кислота, 6α-этилхенодезоксихолевая кислота (обетихолевая кислота; INT-747), фексарамин, тропифексор, цилофексор и MET409.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модулятором рецептора TGR5, включая агонисты TGR5, такие как 6α-этил-23 (S)-метилхолевая кислота (INT-777).
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с двойным агонистом FXR/TGR5, таким как INT-767.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с урсодезоксихолевой кислотой (UDCA). В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с нор-урсодезоксихолевой кислотой (нор-UDCA).
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с модулятором FGF19, таким как NGM282.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом FGF21, таким как BMS-986036.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором интегрина, таким как PLN-74809 и PLN-1474.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором CCR2/CCR5, таким как ценикривирок.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором протеазы каспазы, таким как эмриказан.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором галектина-3, таким как GR-MD-02.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором стеароил-CoA десатуразы (SCD), таким как арамхол (арахидиламидохолановая кислота).
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором киназы 1 (ASK1), регулирующим сигнал апоптоза, таким как селонсертиб.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором LOXL2, таким как симтузумаб.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором ACC, таким как GS-0976.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора тироидного гормона-β, таким как MGL3196.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом GLP-1, таким как лираглутид.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойными агонистами глюкагоноподобного пептида и рецептора глюкагона, такими как SAR425899.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором митохондриального переносчика пирувата, таким как MSDC-0602K.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антиоксидантным агентом, таким как витамин Е.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором SGLT1, ингибитором SGLT2 или двойным ингибитором SGLT1 и SGLT2. Примерами таких соединений являются дапаглифлозин, сотаглифлозин, канаглифлозин, эмпаглифлозин, LIK066 и SGL5213.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором диацилглицерин-O-ацилтрансферазы 2 (DGAT2), таким как DGAT2RX и PF-06865571.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором синтазы жирных кислот (FASN), таким как TVB-2640.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с активатором AMP-активированной протеинкиназы (AMPK), таким как PXL-770.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора глюкокортикоидов (GR), антагонистом рецептора минералокортикоидов (MR) или двойным антагонистом GR/MR. Примерами таких соединений являются MT-3995 и CORT-118335.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом каннабиноидного рецептора 1 (CB1), таким как IM102.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с Klothoβ (KLB) и активатором рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), таким как MK-3655 (ранее известный как NGM-313).
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором хемокинового (c-c-мотив) лиганда 24 (CCL24), таким как CM101.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом A3, таким как PBF-1650.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом рецептора P2x7, таким как SGM 1019.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистами рецептора P2Y13, такими как CER-209.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с сульфатированным оксистеролом, таким как Dur-928.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора лейкотриена D4 (LTD4), таким как MN-001.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором Т-клеток-естественных киллеров 1 типа (NKT1), таким как GRI-0621.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с анти-липополисахаридным (LPS) соединением, таким как IMM-124E.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором VAP1, таким как BI1467335.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом аденозинового рецептора A3, таким как CF-102.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с активатором SIRT-1, таким как NS-20.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора 1 никотиновой кислоты, таким как ARI-3037MO.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с антагонистом TLR4, таким как JKB-121.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором кетогексокиназы, таким как PF-06835919.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с агонистом рецептора адипонектина, таким как ADP-335.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором аутотаксина, таким как PAT-505 и PF8380.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом хемокинового (c-c-мотив) рецептора 3 (CCR3), таким как бертилимумаб.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании со стимулятором хлоридных каналов, таким как кобипростон и любипростон.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором белка теплового шока 47 (HSP47), таким как ND-L02-s0201.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором фактора транскрипции белка, связывающегося с регуляторным элементом стерола (SREBP), таким как CAT-2003 и MDV-4463.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с бигуанидином, таким как метформин.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с инсулином.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором гликогенфосфорилазы и/или ингибитором глюкозо-6-фосфатазы.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с сульфонилмочевиной, такой как глипизид, глибенкламид и глимепирид.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с меглитинидом, таким как репаглинид, натеглинид и ормиглитинид.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором глюкозидазы, таким как акарбоза или миглитол.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором скваленсинтазы, таким как TAK-475.
В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в сочетании с ингибитором PTPB1, таким как тродускемин, эртипротафиб, JTT-551 и кларамин.
Получение соединений
Соединения по настоящему изобретению можно получить в виде свободной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли способами, описанными ниже. В последующем описании таких процессов понятно, что, где это уместно, подходящие защитные группы будут добавлены и впоследствии удалены из различных реагентов и промежуточных продуктов способом, который будет легко понят специалистам в области органического синтеза. Обычные процедуры применения таких защитных групп, а также примеры подходящих защитных групп описаны, например, в книге Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis P.G.M Wutz and T.W. Greene, 4th Edition, John Wiley & Sons, Hoboken, 2006.
Общие способы
Все использованные растворители были аналитической чистоты. Для реакций обычно использовались коммерчески доступные безводные растворители. Исходные материалы были доступны из коммерческих источников или были получены в соответствии с описанными в литературе процедурами. 7-бром-3,3-дибутил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид может быть получен, как описано в WO 02/50051 (Способ 26). 7-бром-3-бутил-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид может быть получен, как описано в WO 96/16051 (Пример 21). 3-бутил-3-этил-8-метокси-7-(метиламино)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид может быть получен, как описано в WO 2019/234077 (промежуточное соединение 154). Комнатная температура относится к 20-25°C. Составы смеси растворителей даны в объемных процентах или объемных соотношениях.
LCMS:
Название прибора: Agilent 1290 infinity II.
Способ A: Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в H2O: ACN (95: 5), B: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ZORBAX XDB C-18 (50 × 4,6 мм) 3,5 мкМ.
Способ B: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4HCO3 в воде, B: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50 × 4,6 мм), 3,5 мкМ.
Способ C: Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в воде: ACN (95: 5), B: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (50 × 4,6 мм), 5 мкМ.
Способ D: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4OAc в воде, B: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: Zorbax Extend C18 (50 × 4,6 мм) 5 мкМ.
Способ E: Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в воде: ACN (95: 5), B: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50 × 4,6 мм), 3,5 мкМ.
Способ F. Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: ZORBAX ECLIPSE PLUS C18 (50 × 2,1 мм), 1,8 мкМ.
Способ G: Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: Acquity UPLC BEH C18 (2,1 × 50 мм), 1,7 мкм.
CHPLC:
Название прибора: Water Acquity I Class.
Способ A: Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в воде, B: 0,1% HCOOH в ACN; Скорость потока: 0,8 мл/мин; Колонка: Acquity UPLC HSS T3 (2,1 × 50) мм; 1,8 мкм.
HPLC:
Название прибора: приборы серии Agilent 1260 Infinity II с использованием % с УФ-детектированием (maxplot).
Способ A: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4HCO3 в воде, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50 × 4,6 мм, 3,5 мкм).
Способ B: Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в воде, B: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50 × 4,6 мм, 3,5 мкм).
Способ C: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4OAc в milli-q воды, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: Phenomenex Gemini C18 (150 × 4,6 мм, 3,0 мкм).
Способ D: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4HCO3 в milli-q воды, B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: X-Bridge C8 (50 × 4,6 мм, 3,5 мкм).
Хиральная SFC:
Название прибора: PIC SFC 10 (аналитический) (аналитический)
Соотношение CO2 и сорастворителя составляет от 60:40 до 80:20.
Способ A: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ B: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ C: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250 х 4,6 мм, 5 мкм).
Способ Е: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Lux C4.
Способ F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC.
Способ G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1.
Способ Н: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ I: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ J: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC AD-H (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ К: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 4 мл/мин; колонка: (R, R)-Whelk-01 (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ L: подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ М: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250 × 4,6 мм, 5 мкм).
Способ N: Подвижная фаза: метанол, скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250 х 4,6 мм, 5 мкм).
Препаративная HPLC:
Название прибора: Agilent 1290 Infinity II
Способ A: Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в воде; Мобильная фаза; B: 0,1% TFA в CAN; скорость потока: 2,0 мл/мин; Колонка: X-Bridge C8 (50 × 4,6 мм, 3,5 мкМ).
Способ B: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4OAc в воде; B: ACN; скорость потока: 35 мл/мин; столбец: X выберите C18 (30 × 150 мм, 5 мкм).
Способ C: Подвижная фаза: A: 10 мМ NH4HCO3 в воде; B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge C8 (50 × 4,6 мм, 3,5 мкм).
Способ D: Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в воде; B: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: X-select C18 (30 × 150 мм, 5 мкм).
Хиральная препаративная SFC:
Название прибора: PIC SFC 100 и PSC SFC 400
Соотношение CO2 и сорастворителя составляет от 60:40 до 80:20.
Способ A: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ B: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ C: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ E: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux A1 (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ Н: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA, скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SC (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ J: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ K: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламина в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250 × 30 мм, 5 мкм).
Способ L: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Chiralcel OX-H (250 × 30 мм, 5 мкм).
Хиральная препаративная HPLC:
Название прибора: Agilent 1260 Infinity II
Способ A: Подвижная фаза: A: 0,1% TFA в н-гексане; B: этанол; скорость потока: 15 мл/мин; Колонка: Chiralpak IA (250 × 19 мм, 5,0 мкм).
Сокращения
ACN ацетонитрил
DCM дихлорметан
DMAP 4-диметиламинопиридин
DMF диметилформамид
IPA изопропиловый спирт
LCMS жидкостная хроматография - масс-спектрометрия
HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография
PE петролейный эфир
SFC сверхкритическая жидкостная хроматография
TFA трифторуксусная кислота
THF тетрагидрофуран
TLC тонкослойная хроматография
UPLC сверхэффективная жидкостная хроматография
Теперь изобретение будет описано с помощью следующих примеров, которые не ограничивают изобретение никоим образом. Все процитированные документы и источники включены ссылкой.
ПРИМЕРЫ
Промежуточное соединение 1
Этил (E)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) акрилат и этил (Z)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилат
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (0,5 г, 1,1 ммоль) в сухом DMF (20 мл), добавляли этил (E)-3-бромакрилат (0,59 г, 3,3 ммоль), карбонат натрия (0,35 г, 3,3 ммоль) и бромид тетрабутиламмония (0,035 г, 0,1 ммоль) при комнатной температуре, и нагревали реакционную смесь при 85-90°C в течение 5 часов. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь выливали в ледяную воду и экстрагировали EtOAc (3 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением сырого указанного в заголовке соединения в виде смеси (E)- и (Z)-изомеров (соотношение 1:1). Смесь очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-9% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением первой элюируемой фракции, соответствующей (E)-изомеру, и второй элюирующей фракции, соответствующей (Z)-изомеру.
(E)-изомер: Выход: 32% (0,28 г, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,80 (д, J = 12,2 Гц, 1H), 7,66 (с, 1H), 7,38-7,25 (м, 4H), 7,10-7,04 (м, 2H), 5,47. (д, J = 12,3 Гц, 1H), 4,13 (кв, J = 7,1 Гц, 2H), 3,81-3,78 (м, 2H), 3,46 (с, 2H), 1,54-1,50 (м, 1H), 1,43-1,30 (м, 3H), 1,21 (т, J = 7,08 Гц, 3H), 1,12-0,98 (м, 4H), 0,74-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 552,1 (M + 2), Rt. 3,33 мин, 97,8% (Макс).
(Z)-изомер: Выход: 41% (0,23 г, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,60 (с, 1H), 7,37-7,31 (м, 2H), 7,21-7,19 (м, 3H), 7,07-7,03 (м, 2H), 5,32 (д, J = 6,9 Гц, 1H), 4,11 (кв., J = 6,9 Гц, 2H), 3,78-3,74 (м, 2H), 3,42-3,38 (м, 2H), 1,51-1,29 (м, 4H), 1,22 (т, J = 7,2 Гц, 3H), 1,08-1,01 (м, 4H), 0,73-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 552,1 (M + 2), Rt. 3,18 мин, 98,2% (Макс).
Промежуточное соединение 2
(E)-3-((7-Бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота
К перемешиваемому раствору этил (E)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилата (промежуточное соединение 1; 0,28 г, 0,48 ммоль) в смесь 1,4-диоксана и воды (3 мл; 5:1), добавляли гидроксид лития (0,04 г, 0,96 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл), и водную часть экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 2-3% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (150 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,29 (с, 1H), 7,73 (д, J = 12,0 Гц, 1H), 7,65-7,64 (м, 1H), 7,37-7,34 (м, 2H), 7,28.-7,25 (м, 2H), 7,09-7,05 (м, 2H), 5,39 (д, J = 12,0 Гц, 1H), 3,88-3,73 (м, 2H), 3,46 (с, 2H), 1,52-1,34 (м, 4H), 1,08-0,98 (м, 4H), 0,72-0,69 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 296,0 (M + H), Rt. 2,86 мин, 95,59% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,03 мин, 97,02% (Макс).
Промежуточное соединение 3
7-бром-3,3-дибутил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (2,0 г, 4,04 ммоль) в DCM (20 мл) при -10°C, добавляли BBR3 (1M в DCM, 8,0 мл, 8,09 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили метанолом (5 мл) и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (1,6 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,84 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 7,24 (т, J = 4,0 Гц, 2H), 7,08 (с, 1H), 7,01 (д, J = 7,9 Гц, 2H), 6,89 (т, J = 7,4 Гц, 1H), 3,68 (шир. с, 2H), 3,42 (с, 2H), 1,36-1,30 (м, 4H), 1,14-1,11 (м, 8H) 0,75 (т, J = 8,00 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 482,0 (M++2), Rt. 3,15 мин, 91,28% (Макс).
Промежуточное соединение 4
Этил 3-((3,3-дибутил-7-бром-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропаноат
К перемешиваемой суспензии 7-бром-3,3-дибутил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 3; 1,5 г, 3,12 ммоль) в этилакрилате (10 мл) при комнатной температуре, добавляли DMAP (0,04 г, 0,31 ммоль). Реакционную смесь нагревали в запаянной пробирке в течение 24 часов при 100°C. За ходом реакции следили с помощью ТСХ, которая указывала на неполное превращение (~ 20%) исходного материала. Затем реакционную смесь упаривали и сушили в вакууме с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое без какой-либо дополнительной очистки направляли на следующую стадию. Выход: 1,5 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ C) 583,2 (M++2), Rt. 3,59 мин, 17,45% (Макс).
Промежуточное соединение 5
5-хлор-6-метоксибензо[d]тиазол-2-амин
К перемешиваемому раствору 3-хлор-4-метоксианилина (10 г, 63,4 ммоль) в уксусной кислоте (100 мл) при комнатной температуре добавляли тиоцианат аммония (5,3 г, 69,8 ммоль), и затем смесь перемешивали в течение 30 минут. Бром (3,2 мл, 63,4 ммоль), растворенный в уксусной кислоте (20 мл), добавляли по каплям к реакционной смеси при 15°C, и полученную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции полученное твердое вещество отфильтровывали, промывали уксусной кислотой (20 мл) и затем сушили в вакууме. Затем твердое вещество суспендировали в воде (20 мл) и подщелачивали 10% раствором NaOH примерно до pH 10. Твердое вещество отфильтровывали, промывали водой (3 × 25 мл) и затем сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 80% (11 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,53 (с, 1H), 7,41 (шир. С, 2H), 7,36 (с, 1H), 3,82 (с, 3H). LCMS: (Способ A) 215,0 (M++H), Rt. 1,39 мин, 97,22% (Макс).
Промежуточное соединение 6
2-(((2-Амино-4-хлор-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилгексановая кислота
К перемешиваемому раствору 5-хлор-6-метоксибензо [d] тиазол-2-амина (промежуточное соединение 5; 8 г, 0,037 моль) в воде (120 мл) добавляли КОН (34 г, 0,596 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при 120°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. По каплям добавляли 2-(бромметил)-2-этилгексановую кислоту (13,29 г, 0,0558 моль; растворено в 40 мл THF) и затем смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (отслеживаемой с помощью LCMS) реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли концентрированной HCl (pH ~ 2). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл). Затем объединенный органический слой промывали водой (30 мл) и рассолом (30 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением сырого вещества. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 21 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
UPLC: (Способ A) 345,8 (M++H), Rt. 1,58 мин, 90,21% (Макс).
Промежуточное соединение 7
3-Бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-хлор-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилгексановой кислоты (промежуточное соединение 6; 21 г, 0,0607 моль) в EtOAc (130 мл) при 0°C, по каплям добавляли триэтиламин (12,26 г, 0,1214 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% EtOAc; 23,16 г, 0,073 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем UPLC) к реакционной смеси добавляли воду (25 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 55% (11 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,61 (с, 1H), 7,16 (д, J = 14,8 Гц, 2H), 3,82 (с, 3H), 2,98 (с, 2H), 1,51-1,53 (м, 4H), 1,32-1,26 (м, 4H), 0,92-0,91 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 328,1 (M++H), Rt. 2,60 мин, 95,79% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,51 мин, 97,62% (Макс).
Промежуточное соединение 8
3-Бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 7; 11 г, 0,034 моль) в иодбензоле (110 мл), добавляли иодид меди (I) (0,640 г, 0,0034 моль) и K2CO3 (9,25 г, 0,067 моль) и раствор продували азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем в атмосфере азота добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (2,16 г, 0,0067 моль) и полученную реакционную смесь нагревали в течение 40 часов до 135°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (25 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением неочищенного материала, который очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 3-5% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 86% (11,7 г, бледно-коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ 7,40-7,39 (м, 3H), 7,29 (д, J = 7,2 Гц, 1H), 7,09 (д, J = 6,9 Гц, 2H), 6,96 (с, 1H).), 3,91 (с, 3H), 3,16 (с, 2H), 1,57-1,55 (м, 4H), 1,19 (д, J = 6,9 Гц, 5H), 0,79 (т, J = 6,3 Гц, 7H). LCMS: (Способ A) 404,1 (M++H), Rt. 3,19 мин, 98,20% (Макс).
Промежуточное соединение 9
3-бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 8; 11,7 г, 0,029 моль) в THF (110 мл) при 0°C по каплям добавляли диметилсульфид борана (2M в THF; 73 мл, 0,144 моль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 40 часов при 75°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили метанолом (50 мл). Полученный раствор нагревали в течение 2 часов до 65°C, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 90% (10,2 г, бесцветная жидкость).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,19 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,08 (с, 1H), 6,93 (с, 2H), 6,79 (д, J = 4,0 Гц, 2H), 3,82 (с, 3H), 2,76 (с, 2H), 1,26-1,24 (м, 9H), 0,76-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 390,2 (M++H), Rt. 3,01 мин, 99,61% (Макс).
Промежуточное соединение 10
3-Бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 9; 10,2 г, 0,0261 моль) в 1,4-диоксане (100 мл) при комнатной температуре добавляли воду (100 мл) и оксон (81 г, 0,2615 моль), и перемешивали реакционную смесь в течение 24 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь отфильтровывали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 56% (6,2 г, желтоватое твердое вещество).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ 7,50 (с, 1H), 7,27 (т, J = 7,8 Гц, 2H), 7,07-7,04 (м, 4H), 3,94 (с, 3H), 3,69 (с, 2H), 3,33 (с, 2H), 1,52-1,37 (м, 8H), 0,77-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 422,1 (M++H), Rt. 3,18 мин, 98,51% (Макс).
Промежуточное соединение 11
3-Бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 10; 1.1 г, 2,60 ммоль) в DCM (11 мл) при 0°C, добавляли BBR3 (1M в DCM, 13,03 мл, 13,03 ммоль) и раствор перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) по каплям добавляли метанол при 0°C до прекращения вспенивания. Реакционную смесь разбавляли DCM (20 мл) и промывали водой (2 × 20 мл) и рассолом (20 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 30-32% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 94% (1,0 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,83 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,23 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,97 (с, 1H), 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 3,64 (с, 2H), 3,28 (с, 2H), 1,51-1,34 (м, 4H), 1,12-1,02 (м, 4H) 0,77-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 408,2 (M++H), Rt. 2,87 мин, 93,25% (Макс).
Разделение энантиомеров:
(S)-3-бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и (R)-3-бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
Два энантиомера рацемического 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (2,0 г, 4,9 ммоль) были разделены хиральной SFC (Способ F). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 45% (900 мг, белое твердое вещество). LCMS: (Способ A) 408,1 (M++H), Rt. 2,86 мин, 94,09% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,93 мин, 96,49% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,32 мин, 95,52% (Макс). (AR.NO: B601758)
Энантиомер 2: Выход: 45% (900 мг, белое твердое вещество). LCMS: (Способ A) 408,2 (M++H), Rt. 2,88 мин, 94,34% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,93 мин, 94,42% (Макс). Хиральная чистота: (Способ H) Rt. 4,32 мин, 100% (Макс).
Промежуточное соединение 12
Этил-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропаноат
К перемешиваемой суспензии 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 11; 2,0 г, 4,91 ммоль) в этилакрилате (10 мл) при комнатной температуре, добавляли DMAP (0,06 г, 0,49 ммоль). Реакционную смесь нагревали в запаянной пробирке в течение 24 часов при 100°C. За ходом реакции следили с помощью ТСХ, которая указывала на неполное превращение (~ 25%) исходного материала. Затем реакционную смесь упаривали и сушили в вакууме с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое без какой-либо дополнительной очистки направляли на следующую стадию. Выход: 3,0 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ C) 510,1 (M++2), Rt. 3,23 мин, 10% (Макс).
Промежуточное соединение 13
2-(((2-Амино-4-хлор-5-метоксифенил)тио)метил)-2-бутилгексановая кислота
К перемешиваемому раствору 5-хлор-6-метоксибензо [d] тиазол-2-амина (промежуточное соединение 5; 10 г, 0,046 моль) в воде (150 мл) добавляли КОН (40 г, 0,74 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при 120°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Затем по каплям добавляли 2-(бромметил)-2-бутилгексановую кислоту (12,33 г, 0,046 моль; растворено в 50 мл THF) и смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (отслеживаемой с помощью LCMS) реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли концентрированной HCl (pH ~ 2). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Затем объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением сырого вещества. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 18,1 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
UPLC: (Способ A) 374,9 (M++H), Rt. 1,74 мин, 44,37% (Макс).
Промежуточное соединение 14
3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-хлор-5-метоксифенил)тио)метил)-2-бутилгексановой кислоты (промежуточное соединение 13; 18,1 г, 0,048 моль) в EtOAc (110 мл) при 0°C, по каплям добавляли триэтиламин (9,77 г, 0,096 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% EtOAc) (18,47 г, 0,058 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем UPLC) к реакционной смеси добавляли воду (25 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 28% (4,78 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,60 (с, 1H), 7,16 (т, J = 11,6 Гц, 1H), 6,90 (с, 1H), 3,83 (с, 3H), 3,00 (с, 2H).), 1,59-1,43 (м, 4H), 1,24-1,17 (м, 8H), 0,76 (т, J = 4,0 Гц, 6H). LCMS: (Способ A) 358,1 (M++2), Rt. 3,10 мин, 92,74% (Макс).
Промежуточное соединение 15
3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 14; 4,78 г, 0,013 моль) в иодбензоле (40 мл) добавляли иодид меди (I) (0,25 г, 0,0013 моль) и K2CO3 (3,7 г, 0,026 моль), и раствор продували азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (0,86 г, 0,0026 моль) в атмосфере азота, и полученную реакционную смесь нагревали в течение 40 часов до 135°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (15 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме с получением неочищенного материала, который очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 3-5% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 70,6% (4,1 г, бледно-коричневое твердое вещество).
LCMS: (Способ C) 434,1 (M++2), Rt. 3,55 мин, 96,03% (Макс).
Промежуточное соединение 16
3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 15, 4,1 г, 0,009 моль) в THF (40 мл) при 0°C, по каплям добавляли диметилсульфид борана (1M в THF, 47 мл, 0,047 моль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 40 часов при 75°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили метанолом (50 мл). Полученный раствор нагревали в течение 2 часов до 65°C, затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 84% (3,3 г, бесцветная жидкость).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,21 (т, J = 9,6 Гц, 2H), 7,06 (с, 1H), 6,95 (д, J = 10,4 Гц, 2H), 6,83 (т, J = 9,2 Гц, 2H), 6,77 (с, 1H), 3,82 (с, 3H), 3,57 (с, 2H), 3,32 (с, 2H), 1,30-1,20 (м, 4H), 1,10-1,00 (м, 8H) 0,76 (т, J = 4,00 Гц, 6H).
Промежуточное соединение 17
3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 16; 3,3 г, 0,008 моль) в 1,4-диоксан (42 мл) при комнатной температуре добавляли воду (16 мл) и оксон (24,26 г, 0,08 моль), и перемешивали реакционную смесь в течение 24 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь отфильтровывали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 68,7% (2,4 г, желтоватое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,49 (с, 1H), 7,27 (т, J = 8,1 Гц, 2H), 7,08 (д, J = 7,5 Гц, 2H), 6,98 (с, 1H), 6,95 (т, J = 7,3 Гц, 1H), 3,93 (с, 3H), 3,70 (шир. с, 2H), 3,35 (с, 2H), 1,36-1,24 (м, 4H), 1,17-1,00 (м, 8H) 0,75 (т, J = 4,00 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 452,3 (M++2), Rt. 3,53 мин, 96,85% (Макс).
Промежуточное соединение 18
3,3-дибутил-7-хлор-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-7-хлор-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 17; 1,5 г, 3,33 ммоль) в DCM (10 мл), BBR3 (1M в DCM, 6,6 мл, 6,66 ммоль) добавляли при -10°C и полученную смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили метанолом (5 мл) и реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (1,2 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,79 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,24 (т, J = 8,2 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,8 Гц, 2H), 6,91 (т, J = 9,0 Гц, 2H), 3,65 (шир. с, 2H), 3,29 (с, 2H), 1,40-1,30 (м, 5H), 1,20-1,12 (м, 7H), 0,74 (т, J = 4,0 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 438,1 (M++2), Rt. 3,1 мин, 96,07% (Макс).
Промежуточное соединение 19
Этил 3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропаноат
К перемешиваемой суспензии 3,3-дибутил-7-хлор-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 18; 1,2 г, 2,75 ммоль) в этилакрилате (5 мл) при комнатной температуре, добавляли DMAP (30 мг, 0,27 ммоль). Реакционную смесь нагревали в запаянной пробирке в течение 24 часов при 100°C. За ходом реакции следили с помощью ТСХ, которая указывала на неполное превращение (~ 20%) исходного материала. Затем реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 1 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ C) 537,3 (M++H), Rt. 3,55 мин, 12,14% (Макс).
Промежуточное соединение 20
Метил 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (0,5 г, 0,001 ммоль) в DMF (4 мл) при комнатной температуре, добавляли Cs2CO3 (0,73 г, 0,002 ммоль) и метилоксиран-2-карбоксилат (0,170 г, 0,002 ммоль), и затем реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при 70°C. За ходом реакции следили с помощью ТСХ, которая указывала на неполное превращение исходного материала и образование продукта элиминирования. Реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением неочищенного материала, который очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 8% (50 мг, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 550,2 (M++H), Rt. 2,79 мин и 532,2 (M++H), Rt. 2,96 мин, 88,39% (Макс).
Промежуточное соединение 21
7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (1,0 г, 2 ммоль) в сухом DMF (15 мл) при 0°C, добавляли гидрид натрия (60% в минеральном масле) (0,09 мг, 2,40 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 10 минут. Затем к реакционной смеси добавляли метилиодид (0,4 мл, 6 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл), рассолом (15 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный сырой материал без какой-либо дополнительной очистки направляли на следующую стадию. Выход: 96% (900 мг, неочищенное, коричневое смолистое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,45 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,18 - 7,16 (м, 1H), 7,06 - 7,04 (м, 2H), 6,93. (т, J = 7,2 Гц, 1H), 3,93 (с, 3H), 3,70 - 3,61 (м, 2H), 3,10 (с, 2H), 1,51 - 0,90 (м, 8H), 0,80 - 0,72 (м, 6H)). LCMS: (Способ A) 468,1 (M + 2), Rt. 3,21 мин, 96,82% (Макс).
Промежуточное соединение 22
3-Бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 21; 0,9 г, 1,90 ммоль) в сухом DMF (15 мл), тиометоксид натрия (687 мг, 9,5 ммоль) добавляли при комнатной температуре и перемешивали реакционную смесь при 60°C в течение 16 часов. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь гасили ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл), рассолом (15 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 93% (750 мг, бледно-коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,16 - 7,12 (м, 3H), 6,85 - 6,83 (м, 2H), 6,71 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,60 (с, 1H), 3,74. - 3,61 (м, 2H), 3,12 (с, 2H), 2,13 (с, 3H), 1,70 - 1,08 (м, 8H), 0,80 - 0,74 (м, 6H). UPLC: (Способ A) 420,5 (M+H), Rt. 1,86 мин, 91,84% (Макс).
Промежуточное соединение 23
(S)-3-Бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и (R)-3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
Два энантиомера рацемического 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 22) были разделены хиральной SFC (Способ F). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 44% (3,1 г, бледно-коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,54 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,21-7,17 (м, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 3,65 (шир. с, 2H), 3,20 (с, 2H), 2,18 (с, 3H), 1,60-1,50 (м, 1H), 1,50-1,40 (м, 1H), 1,40-1,25 (м, 2H), 1,20-1,00 (м, 4H), 0,80-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 419,9 (M++H), Rt. 3,04 мин, 95,84% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,93 мин, 96,07% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,58 мин, 99,19% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 42% (3,0 г, бледно-коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,52 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,18 (т, J = 11,2 Гц, 2H), 6,90 (д, J = 10,4 Гц, 2H), 6,78 (т, J = 9,6 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 3,64 (шир. с, 2H), 3,19 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,51-1,49 (м, 1H), 1,50-1,20 (м, 3H), 1,20-0,95 (м, 4H), 0,85-0,65 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 419,9 (M++H), Rt. 3,04 мин, 97,11% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,93 мин, 98,25% (Макс). Хиральная чистота: (Способ H) Rt. 5,03 мин, 98,68% (Макс).
Промежуточное соединение 24
Этил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропаноат
К перемешиваемой суспензии 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 22; 1,0 г, 2,38 ммоль) в этилакрилате (5 мл) при комнатной температуре, добавляли DMAP (30 мг, 0,23 ммоль). Реакционную смесь нагревали в запаянной пробирке в течение 24 часов при 100°C. За ходом реакции следили с помощью ТСХ, которая указала на неполное превращение (~ 30%) исходного материала. Затем реакционную смесь упаривали и сушили в вакууме с получением сырого указанного в заголовке соединения, которое без какой-либо дополнительной очистки направляли на следующую стадию. Выход: 1,3 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 520,2 (M++H), Rt. 6,18 мин, 29,31% (Макс).
Промежуточное соединение 25
Этил (E)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилат и этил (Z)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) акрилат
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (4 г, 8,93 ммоль) в сухом DMF (50 мл), добавляли этил (E)-3-бромакрилат (2,4 г, 13,4 ммоль), карбонат калия (2,46 г, 17,87 ммоль) и бромид тетрабутиламмония (0,287 г, 0,89 ммоль) при комнатной температуре, и нагревали реакционную смесь при 90°C в течение 12 часов. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь выливали в ледяную воду и экстрагировали EtOAc (3 × 25 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси (E)- и (Z)-изомеров (соотношение 1,7: 1). Эту смесь разделяли с помощью Prep-HPLC (Способ A), чтобы получить первую элюируемую фракцию, соответствующую (Z)-изомеру, и вторую элюируемую фракцию, соответствующую (E)-изомеру, с общим выходом 73%.
(E)-изомер: Выход: 39% (1,9 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,72 (д, J = 16,0 Гц, 1H), 7,48 (с, 1H), 7,32-7,27 (м, 2H), 7,19-7,16 (м, 2H), 7,02.-6,97 (м, 1H), 6,63 (с, 1H), 5,48 (д, J = 16,0 Гц, 1H), 4,14-4,07 (м, 2H), 3,75 (шир. с, 2H), 3,36 (с, 2H), 2,14 (с, 3H), 1,40-1,31 (м, 4H), 1,27-1,08 (м, 11H), 0,75-0,73 (м, 6H). LCMS: (Способ C) 546,1 (M + H), Rt. 3,47 мин, 97,89% (Макс)
(Z)-изомер: Выход: 34% (1,65 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,47 (с, 1H), 7,32-7,28 (м, 2H), 7,20-7,19 (м, 2H), 7,16-7,14 (м, 1H), 7,01-6,97 (м, 1H), 6,66 (с, 1H), 5,26 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,13-4,08 (м, 2H), 3,75 (шир. с, 2H), 3,33 (с, 2H), 2,18 (с, 3H), 1,43-1,36 (м, 2H), 1,33-1,30 (м, 2H), 1,22 (м, 3H), 1,10-0,98 (м, 8H), 0,76-0,73 (м, 6H). LCMS: (Способ C) 546,1 (M + H), Rt. 3,34 мин, 98,32% (Макс).
Промежуточное соединение 26
Этил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропаноат
К перемешиваемому раствору смеси этил (E)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) акрилат и этил (Z)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) акрилат (промежуточное соединение 25; 2,8 г, 0,51 ммоль) в EtOAc (15 мл), Pd/C (0,56 г, 52,6 ммоль) и AcOH (0,1 мл) добавляли в атмосфере азота, и смесь перемешивали в атмосфере водорода в крошечной камере (под давлением 2,5-3,0 кг) в течение 12 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный фильтрат концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 64% (1,8 г, грязно-белое твердое вещество).
Промежуточное соединение 27
3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 21, 3 г, 6,43 ммоль) в толуоле (10 мл), добавляли Cs2CO3 (5,2 г, 16,1 ммоль) и реакционную смесь дегазировали в течение 10 минут с помощью N2. Затем добавляли диметиламин (2M в THF, 6,4 мл, 12,8 ммоль), Pd (OAc) 2 (0,04 г, 0,16 ммоль), а затем X-Phos (0,08 г, 0,16 ммоль), и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 90°С. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (100 мл). Объединенную органическую часть концентрировали под вакуумом и полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 13-15% EtOAc/PE, силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 26% (0,7 г, желтое смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,28 (с, 1H), 7,22-7,18 (м, 2H), 6,97 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,83 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,34 (с, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,70 (ш.с, 2H), 3,29 (с, 2H), 2,66 (с, 6H), 1,54-1,41 (м, 2H), 1,35-1,24 (м, 2H), 1,20-1,12 (м, 4H), 0,85-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 431,2 (M++H), Rt. 3,19 мин, 83,34% (Макс).
Промежуточное соединение 28
3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 27; 1,9 г, 4,41 ммоль) в DMF (15 мл) при комнатной температуре, добавляли тиометоксид натрия (1,54 г, 22,06 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 12 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (15 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл), и объединенный органический слой промывали водой (20 мл) и рассолом (20 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме, получая неочищенное соединение, которое отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 1,8 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 417,2 (M++H), Rt. 2,11 мин, 55,04% (Макс).
Промежуточное соединение 29
Метил 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноат
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (500 мг, 1,11 ммоль) в N-метил-2-пирролидоне (5 мл), добавляли Cs2CO3 (723 мг, 2,23 ммоль) и метил 2-метилглицидат (260 мг, 2,23 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 40% (250 мг, белое смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,29 (с, 1H), 7,21 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,65 (с, 1H), 4,16-4,01 (м, 2H), 3,67-3,59 (м, 5H), 3,26 (с, 2H), 2,13 (с, 3H), 1,42-1,35 (м, 5H), 1,34-1,25 (м, 2H), 1,24-1,05 (м, 8H), 0,77-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 564,1 (M++H), Rt. 3,15 мин, 99,13% (Макс).
Промежуточное соединение 30
2-(((2-Амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилгексановая кислота
К перемешиваемому раствору 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-амина (63 г, 0,243 моль) в воде (630 мл) добавляли КОН (218,2 г, 3,89 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при 120°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Затем по каплям добавляли раствор 2-(бромметил)-2-метилгексановой кислоты (70,5 г, 6,31 моль) в THF (210 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (отслеживаемой с помощью LCMS) реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли конц. HCl (pH ~ 2). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 350 мл), и объединенный органический слой промывали водой (150 мл) и рассолом (150 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал как таковой направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 75 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ A) 376,1 (M+), 378,0 (M++2), Rt. 2,44 мин, 92,97% (Макс).
Промежуточное соединение 31
7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилгексановой кислоты (промежуточное соединение 30; 75,0 г, 0,199 моль) в EtOAc (750 мл) при 0°C, по каплям добавляли триэтиламин (60,4 г, 0,59 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc, 95,1 г, 0,29 моль). Реакционную смесь перемешивали 16 ч при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь гасили водой (150 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (150 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 63% (45 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,62 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 3,83 (с, 3H), 3,17 (с, 2H), 1,46-1,44 (м, 2H), 1,22 (с, 3H), 1,17-1,14 (м, 4H), 0,79 (т, J = 6,8 Гц, 3H). LCMS: (Способ A) 360,0 (M++2), Rt. 2,64 мин, 97,14% (Макс).
Промежуточное соединение 32
7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 31; 45 г, 0,12 моль) в иодбензоле (225 мл), добавляли иодид меди (I) (2,4 г, 0,012 моль) и K2CO3 (34,6 г, 0,251 моль), и продували смесь азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем в атмосфере азота добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (8,11 г, 0,025 моль) и полученную реакционную смесь нагревали в течение 40 часов при 135°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (200 мл). Фильтрат концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали перекристаллизацией из МеОН, получая указанные в заголовке соединения. Выход: 88% (47,5 г, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 434,1 (M+) для 7-бромзамещенного соединения и 482,1 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,23 мин, 99,31% (вместе для бром- и йодзамещенных соединений) (Макс).
Промежуточное соединение 33
7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3-бутил-7-иод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она и 3-бутил-7-иод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 32; 47,5 г, 0,109 моль) в THF (475 мл) при 0°C по каплям добавляли диметилсульфид борана (1M в THF, 82 мл, 0,16 моль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 40 часов при 75°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили метанолом (475 мл). Полученный раствор нагревали в течение 2 часов при 65°C, а затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 8-10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 46 г (неочищенная бесцветная жидкость).
LCMS: (Способ E) 421,8 (M++2H), 467,8 (M++H) Rt. 3,62 мин, 54,71% (Макс).
Промежуточное соединение 34
7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3-бутил-7-иод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 33; 23 г, 0,05 моль) в уксусной кислоте (230 мл) добавляли вольфрамат натрия (2,3 г, 10% масс./масс.) И H2O2 (30% в воде, 18,6 мл, 0,16 моль), и перемешивали реакционную смесь в течение 5 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (200 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (150 мл) и рассолом (150 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 72% (18 г, желтоватое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,47 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,27-7,20 (м, 2H), 6,99-6,94 (м, 2H), 6,89-6,85 (м, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,40-3,33 (м, 2H), 2,53 (с, 2H), 1,46-1,30 (м, 2H), 1,27-1,20 (м, 4H), 1,10-1,06 (м, 3H), 0,78 (т, J = 6,80 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 454,1 (M++2H) для 7-бромзамещенного соединения и 500,1 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,25 мин, 92,56% (Макс).
Промежуточное соединение 35
3-Бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида и 3-бутил-7-иод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 34; 31 г, 0,07 моль) в DMF (310 мл), добавляли тиометоксид натрия (24,01 г, 0,34 моль) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивали в течение ночи при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (150 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 300 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (150 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали перекристаллизацией из МеОН с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (23 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,60 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,18-7,14 (м, 2H), 6,86 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,77 (с, 1H), 6,76-6,73 (м, 1H), 3,27-3,15 (м, 2H), 2,54 (с, 2H), 2,26 (с, 3H), 1,47-1,29 (м, 2H), 1,27-1,20 (м, 4H), 1,18-1,12 (м, 3H), 0,81 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 406,2 (M++H), Rt. 2,98 мин, 95,07% (Макс).
Разделение энантиомеров:
(S)-3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и (R)-3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
Два энантиомера рацемического 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (2,9 г 0,01 моль) разделяли хиральной SFC (Способ М). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 41% (1,2 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,51 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,18-7,14 (м, 2H), 6,85 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,77-6,73 (м, 2H), 3,27-3,15 (м, 2H), 2,53 (с, 2H), 2,21 (с, 3H), 1,46-1,31 (м, 2H), 1,29-1,12 (м, 4H), 1,06-1,01 (м, 3H), 0,81 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ A) 406,1 (M++H), Rt. 2,72 мин, 97,0% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,61 мин, 97,78% (Макс). Хиральная SFC: (Способ M) Rt. 2,36 мин, 98,75% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 38% (1,1 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,57 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,18-7,14 (м, 2H), 6,85 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,77-6,73 (м, 2H), 3,27-3,15 (м, 2H), 2,53 (с, 2H), 2,21 (с, 3H), 1,48-1,31 (м, 2H), 1,29-1,18 (м, 4H), 1,12-1,01 (м, 3H), 0,81 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ A) 406,2 (M++H), Rt. 2,85 мин, 99,57% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,61 мин, 99,83% (Макс). Хиральная SFC: (Способ M) Rt. 3,58 мин, 100% (Макс).
Промежуточное соединение 36
7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (3,0 г, 0,007 моль) в 4-бром-1,2-дифторбензоле (5 мл), добавляли иодид меди (I) (0,286 мг, 0,0015 моль) и K2CO3 (2,07 г, 0,015 моль) и продували реакционную смесь азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем в атмосфере азота добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (0,242 мл, 0,00075 моль) и полученную реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 130°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (50 мл). Фильтрат промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 74% (2,8 г, бледно-коричневое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 512,1 (M+), Rt. 3,07 мин, 85% (Макс).
Промежуточное соединение 37
7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 36; 2,8 г, 0,0054 ммоль) в THF (15 мл) при 0°C, по каплям добавляли диметилсульфид борана (2M в THF; 8 мл, 0,016 ммоль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 3 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем UPLC) реакционную смесь охлаждали до 0°C, гасили метанолом (10 мл) и затем нагревали в течение 2 часов до 60°C. Затем полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом, получая неочищенный продукт. Полученный неочищенный материал как таковой направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 1,49 г (неочищенная бесцветная жидкость).
Промежуточное соединение 38
1,1-диоксид 7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 37; 1,49 г 0,01 ммоль) в THF (75 мл) и воде (7,5 мл), оксон (38,3 г, 0,13 ммоль) добавляли при комнатной температуре и затем реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов при этой температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь отфильтровывали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл). Объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 62% (1 г, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ A) 532,0 (M++2), Rt. 3,31 мин, 93,84% (Макс).
Промежуточное соединение 39
3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 38; 500 мг, 0,9757 ммоль) в DMF (5 мл), добавляли тиометоксид натрия (102 мг, 1,46 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали в течение 2 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) к реакционной смеси добавляли воду (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (500 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 18-20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (0,45 г, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 498,2 (M++H), Rt. 3,57 мин, 90,72% (Макс).
Промежуточное соединение 40
3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-метокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 39; 450 мг, 0,9042 ммоль) в DCM (5 мл), добавляли BBR3 (1M в DCM; 3 мл, 2,712 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (отслеживаемого с помощью ТСХ) по каплям добавляли метанол (10 мл) при 0°C до прекращения вспенивания. Затем реакционную смесь разбавляли DCM (10 мл), и слой DCM промывали водой (2 × 10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 100% EtOAc; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 91% (0,4 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,63 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,28-7,19 (м, 1H), 7,03-6,98 (м, 1H), 6,72 (с, 1H)., 6,64-6,59 (м, 1H), 3,62 (шир. с, 2H), 3,22 (с, 2H), 2,22 (с, 3H), 1,40-1,34 (м, 4H), 1,15-1,05 (м, 8H), 0,79 (т, J = 6,80 Гц, 6H). LCMS: (Способ A) 484,2 (M++H), Rt. 2,97 мин, 94% (Макс).
Промежуточное соединение 41
7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3,3-дибутил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (3 г, 7,49 ммоль) в 4-фториодбензоле (30 мл), добавляли иодид меди (I) (0,14 г, 0,74 ммоль) и K2CO3 (2,07 г, 14,9 ммоль), и продували реакционную смесь азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (0,49 г, 1,49 ммоль) в атмосфере азота, и полученную реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 135°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (25 мл). Фильтрат промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 95% (3,5 г, бледно-желтое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 494,0 (M+) для 7-бромзамещенного соединения и 541,9 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,50 мин, 96,61% (Макс).
Промежуточное соединение 42
7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил))-7-иод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 41; 3,5 г, 7,07 ммоль) в THF (35 мл) при 0°C по каплям добавляли диметилсульфид борана (2M в THF; 5,3 мл, 10,61 ммоль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 16 часов при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°C, гасили метанолом (10 мл) и нагревали в течение 2 часов при 65°C. Затем полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали под вакуумом и остаток распределяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл). Водный слой экстрагировали DCM (2 × 50 мл), и объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом, получая неочищенный продукт. Полученный неочищенный материал как таковой направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 3,6 г (неочищенное, бледно-желтое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 482,0 (M++2H) для 7-бромзамещенного соединения и 527,9 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,86 мин, 81,04% (вместе для бром- и йодзамещенных соединений) (Макс).
Промежуточное соединение 43
7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 42; 3,6 г, 7,49 ммоль) в уксусной кислоте (36 мл), добавляли вольфрамат натрия (360 мг, 0,01 ммоль) и пероксид водорода (30% в H2O; 2,6 мл, 22,47 ммоль) при 0°C и полученную реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь отфильтровывали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 12% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 79% (3,4 г, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: ((Способ A) 512,2 (M++H) для 7-бромзамещенного соединения и 560,2 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения; Rt. 3,40 мин, 70,63% (Макс).
Промежуточное соединение 44
3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида и 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-йод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 43; 1,6 г, 3,12 ммоль) в DMF (16 мл), добавляли тиометоксид натрия (1,09 г, 15,6 ммоль) при комнатной температуре и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (15 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл), и объединенный органический слой промывали рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 90% (1,3 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,48 (с, 1H), 7,28 (д, J = 4,4 Гц, 1H), 7,08-7,01 (м, 4H), 6,59 (с, 1H), 3,80-3,67 (м, 2H), 3,22 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,36-1,33 (м, 4H), 1,12-1,03 (м, 8H), 0,79-0,77 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 466,0 (M++H), Rt. 3,23 мин, 88,86% (Макс).
Промежуточное соединение 45
2-(((2-Амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилпентановая кислота
К раствору 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-амина (20 г, 77,2 ммоль) в воде (200 мл) добавляли КОН (69,1 г, 123 ммоль) и Na2SO3 (9,7 г, 77,2 ммоль), и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 120°C. Затем реакционную смесь охлаждали до 10°C. По каплям добавляли раствор 2-(бромметил)-2-этилпентановой кислоты (26 г, 115 ммоль) в THF (30 мл), и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили конц. HCl, подкисляли и затем экстрагировали EtOAc (2 × 150 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (150 мл) и рассолом (150 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение. Выход: 30 г (неочищенная, пурпурная жидкость).
LCMS: (Способ E) 377,8 (M++2), Rt. 2,60 мин, 77,37% (Макс).
Промежуточное соединение 46
7-бром-3-этил-8-метокси-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К раствору 2-(((2-амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилпентановой кислоты (промежуточное соединение 45; 30 г, 80 ммоль) в DCM (200 мл), триэтиламин (21,5 мл, 159 ммоль), и реакционную смесь охлаждали до 0°C. По каплям добавляли раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc; 50,8 г, 159 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (25 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть отфильтровывали, концентрировали под вакуумом и полученный остаток растирали с холодным метанолом. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 32% (9 г, серое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,63 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 3,83 (с, 3H), 2,99 (с, 2H), 1,73-1,40 (м, 4H), 1,24-1,16 (м, 2H), 0,84-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 357,8 (M+), Rt. 2,83 мин, 99,18% (Макс).
Промежуточное соединение 47
7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он и 3-этил-7-йод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К раствору 7-бром-3-этил-8-метокси-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 46; 9 г, 25,1 ммоль) в иодбензоле (90 мл), добавляли K2CO3 (3,81 г, 27,62 ммоль), трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (1,62 г, 5,02 ммоль) и CuI (0,48 г, 2,51 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 135°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (25 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал растирали с петролейным эфиром, получая указанное в заголовке соединение. Выход: 64% (7 г, бледно-желтое твердое вещество).
LCMS: (Способ B) 434,0 (M++H) для 7-бромзамещенного соединения Rt. 14,82 мин, 37,52% (Макс) И 482,0 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения Rt. 15,04 мин, 57,75% (Макс).
Промежуточное соединение 48
7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3-этил-7-иод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она и 3-этил-7-иод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 47; 7,0 г, 16,12 ммоль) в THF (70 мл) при 0°C добавляли диметилсульфид борана (1M в THF; 48,38 мл, 48,38 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 70°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли метанол (150 мл) и смесь нагревали в течение 2 часов при 60°C. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток распределяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл), и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 7,5 г (неочищенное, бледно-коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 419,8 (M++H) для 7-бромзамещенного соединения и 467,8 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения; Rt. 3. 77 мин, 80,10% (Макс).
Промежуточное соединение 49
7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и 3-этил-7-йод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К раствору смеси 7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3-этил-7-йод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 48; 7,5 г, 17,83 ммоль) в THF (60 мл) и воде (30 мл), добавляли оксон (27,4 г, 89,19 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 13% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 62% (5 г, бледно-коричневое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 452,9 (M++H) для 7-бромзамещенного соединения и 499,7 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,24 мин, 96,49% (Макс).
Промежуточное соединение 50
3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К раствору смеси 7-бром-3-этил-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида и 3-этил-7-йод-8-метокси-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 49; 1 g, 2,00 ммоль) в DMF (5 mL), добавляли тиометоксид натрия (0.78 г, 1.0 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 12 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (25 мл), а затем экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (10 мл), а затем рассолом (10 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 61% (0,49 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,54 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,19 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 3,64 (шир. с, 2H), 3,21 (с, 2H), 2,18 (с, 3H), 1,57-1,55 (м, 1H), 1,45-1,33 (м, 3H), 1,31-1,18 (м, 2H), 0,78-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 406,2 (M++H), Rt. 2,93 мин, 95,46% (Макс).
Промежуточное соединение 51
Метил тритилсеринат
К перемешиваемому раствору гидрохлорида метилсерината (0,65 г, 0,5 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли триэтиламин (2 мл, 1,50 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли тритилхлорид (1,67 г, 0,6 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (10 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 7% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 33% (0,7 г, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,54-7,50 (м, 6H), 7,32-7,27 (м, 6H), 7,24-7,20 (м, 3H), 3,74-3,72 (м, 1H), 3,62-3,51 (м, 2H), 3,33 (с, 3H), 3,00 (шир. с., 1H), 2,33 (шир. с., 1H).
Промежуточное соединение 52
Метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритилсеринат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 22; 470 мг, 1,12 ммоль) в толуоле (10 мл) при 0°C, добавляли трифенилфосфин (653 мг, 2,24 ммоль) и метилтрилсеринат (промежуточное соединение 51; 504 мг, 2,24 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 5 минут. Затем по каплям добавляли диизопропилазодикарбоксилат (452 мг, 2,24 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 4 часов при 90°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали, концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 41% (350 мг, бледно-желтое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,48-7,45 (м, 6H), 7,33-7,29 (м, 7H), 7,23-7,20 (м, 5H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H)., 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,26-4,22 (м, 1H), 4,09-4,05 (м, 1H), 3,81-3,55 (м, 3H), 3,27 (с, 2H), 3,21 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,62-1,53 (м, 1H), 1,52-1,41 (м, 1H), 1,41-1,36 (м, 2H), 1,23-0,95 (м, 4H), 0,84-0,73 (м, 6H).
Промежуточное соединение 53
Метил-O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил) серинат
К перемешиваемому раствору метил-O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритилсерината (промежуточное соединение 52; 340 мг, 0,44 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°C, добавляли TFA (152 мг, 1,33 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь выливали в ледяную воду (10 мл), и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 170 мг (неочищенное, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 521,2 (M++H), Rt. 2,40 мин, 37,79% (Макс).
Промежуточное соединение 54
Метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 35; 300 мг, 0,74 ммоль) в DMF (5 мл), добавляли Cs2CO3 (482 мг, 1,47 ммоль) и метил 2-метилглицидат (227 мг, 2,21 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 72 часов при комнатной температуре. После превращения ~ 70% исходного материала (контроль ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 45% (170 мг, бледно-желтое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 508,0 (M++H), Rt. 2,91 мин, 97,36% (Макс).
Промежуточное соединение 55
Метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору энантиомера 1 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 35; 300 мг, 0,74 ммоль) в DMF (5 мл), добавляли Cs2CO3 (482 мг, 1,47 ммоль) и метил-2-метилглицидат (227 мг, 2,21 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 48 часов. при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 40% EtOAc PE; силикагель: 230-400 меш) с получением смеси диастереомеров 1 и 2 указанного в заголовке соединения. Выход: 53% (200 мг, бледно-желтое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 508,2 (M++H), Rt. 2,92 мин, 97,98% (Макс).
Промежуточное соединение 56
Метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноат (отдельные диастереомеры)
Диастереомеры 1 и 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 1, 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 35; 230 мг, 0,56 ммоль) в DMF (2,5 мл), добавляли Cs2CO3 (0,37 г, 1,13 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем добавляли метил 2-метилоксиран-2-карбоксилат (0,19 г, 1,70 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 48 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 10 мл) и разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл), и объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 84% (250 мг, розовое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 2,6 мин, 95,83% (Макс).
Диастереомеры 3 и 4
К перемешиваемому раствору энантиомера 2, 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 35; 250 мг, 0,61 ммоль) в DMF (2,5 мл), добавляли Cs2CO3 (0,4 г, 1,23 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем добавляли метил 2-метилоксиран-2-карбоксилат (0,21 г, 1,84 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 48 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 10 мл) и разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл), и объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 25% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 62% (200 мг, розовое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 3,39 мин, 97,06% (Макс).
Диастереомеры 3 и 4 указанного в заголовке соединения (200 мг, 0,38 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ F). Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2. Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного диастереомера указанного в заголовке соединения.
Диастереомер 3: Выход: 25% (50 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,19 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,92 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 5,72 (с, 1H), 4,16-4,11 (м, 2H), 3,68 (с, 3H), 3,33-3,31 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 1,43 (с, 3H), 1,24-1,12 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,20 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 2,61 мин, 98,51% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 3,27 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 4: Выход: 30% (60 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,32 (с, 1H), 7,19 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,92 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 5,73 (с, 1H), 4,20-4,17 (м, 1H), 4,12-4,10 (м, 1H), 3,68 (с, 3H), 3,34-3,26 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 1,43 (с, 3H), 1,31-1,24 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,20 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 2,61 мин, 96,58% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 5,59 мин, 100% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 57
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 22; 500 мг, 1,19 ммоль) в DMF (5 мл), добавляли Cs2CO3 (0,77 г, 2,38 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем добавляли метил-2-метилглицидат (0,41 г, 3,57 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 72 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (15 мл) и разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл), и объединенный слой EtOAc промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 24% (150 мг, бесцветное смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 536,2 (M++H), Rt. 2,93 мин, 83,35% (Макс).
Промежуточное соединение 58
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноат
К перемешиваемому раствору энантиомера 2 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 23; 780 мг, 1,85 ммоль) в DMF (5 мл), добавляли Cs2CO3 (0,1,21 г, 3,71 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем добавляли метил-2-метилглицидат (647 мг, 5,57 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 72 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 15 мл) и разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл), и объединенный органический слой промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40-50% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 65% (650 мг, бесцветное смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 536,1 (M++H), Rt. 3,07 мин, 94,03% (Макс).
Промежуточное соединение 59
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропаноат
К перемешиваемому раствору метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 57; 130 мг, 0,24 ммоль) в DCM (5 мл) при -10°C, добавляли трифторид диэтиламиносеры (0,08 г, 0,48 ммоль) и реакционную смесь перемешивали 2 часа. Затем добавляли метил-2-метилглицидат (0,41 г, 3,57 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 30% (40 мг, бесцветное смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 538,2 (M++H), Rt. 3,10 мин, 74,80% (Макс).
Промежуточное соединение 60
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропаноат (отдельные диастереомеры)
К перемешиваемому раствору метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 58; 650 мг, 1,21 ммоль) в DCM (15 мл) при -10°C, добавляли трифторид диэтиламиносеры (235 мг, 1,45 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при 0-15°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (5 мл) при 0°C, и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (20 мл) и рассолом (20 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 40% (160 мг, белое смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,50-4,39 (м, 2H), 3,74 (шир. с, 3H), 3,69 (с, 2H), 3,28 (с, 2H), 2,18 (с, 3H), 1,71-1,62 (м, 1H), 1,51-1,49 (м, 3H), 1,48-1,41 (м, 1H), 1,39-1,25 (м, 2H), 1,24-0,92 (м, 4H), 0,85-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 537,9 (M++H), Rt. 3,24 мин, 99,74% (Макс), HPLC: (Способ B) Rt. 6,27 мин, 98,45% (Макс).
Диастереомеры 1 и 2 указанного в заголовке соединения (160 мг, 0,29 ммоль) разделяли с помощью SFC (Способ F). Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2. Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного диастереомера указанного в заголовке соединения.
Диастереомер 1: Выход: 63% (51 мг, бледно-желтое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,53-4,39 (м, 2H), 3,76 (шир. с, 3H), 3,69 (с, 2H), 3,28 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,69-1,57 (м, 3H), 1,56-1,51 (м, 1H), 1,50-1,39 (м, 1H), 1,37-1,25 (м, 2H), 1,21-0,98 (м, 4H), 0,78-0,69 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 538,2 (M++H), Rt. 3,21 мин, 99,68% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,21 мин, 99,40% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 68% (55 мг, бледно-желтое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,53-4,39 (м, 2H), 3,76 (шир. с, 3H), 3,69 (с, 2H), 3,28 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,69-1,57 (м, 3H), 1,56-1,51 (м, 1H), 1,50-1,39 (м, 1H), 1,37-1,25 (м, 2H), 1,21-0,98 (м, 4H), 0,78-0,69 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 537,8 (M++H), Rt. 3,24 мин, 99,72% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,78 мин, 99,44% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 61
Метил тритил-D-серинат
К перемешиваемому раствору гидрохлорида метил-D-серината (2 г, 12,8 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°C добавляли триэтиламин (6,1 мл, 45,9 ммоль). Затем добавляли тритилхлорид (4,26 г, 15,3 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (20 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2 × 30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (30 мл) и рассолом (30 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 27% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 95% (2,5 г, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,43 (д, J = 8,0 Гц, 6H), 7,29 (т, J = 8,0 Гц, 6H), 7,20 (т, J = 7,2 Гц, 3H), 4,95-4,92 (м, 1H), 3,63-3,51 (м, 1H), 3,46-3,40 (м, 1H), 3,24-3,18 (м, 1H), 3,13 (с, 3H), 2,82-2,71 (м, 1H).
Промежуточное соединение 62
Метил O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритил-D-серинат и метил O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритил-D-серинат
Диастереомер 1
К перемешиваемому раствору энантиомера 1 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 23; 400 мг, 0,95 ммоль) в толуоле (10 мл) при 0°C, добавляли трифенилфосфин (533 мг, 1,90 ммоль) и метилтритил-D-серинат (промежуточное соединение 61; 460 мг, 1,14 ммоль) и перемешивали реакционную смесь 5 минут. Затем добавляли DIAD (320 мг, 1,42 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 4 часов при 90°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 98% (740 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,47-7,42 (м, 6H), 7,33-7,27 (м, 7H), 7,24-7,20 (м, 6H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,33-4,19 (м, 1H), 4,01-4,07 (м, 1H), 3,74 (шир. с, 2H), 3,69-3,59 (м, 1H), 3,23 (с, 2H), 3,21 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,65-1,51 (м, 1H), 1,52-1,41 (м, 1H), 1,41-1,36 (м, 2H) 1,23-0,95 (м, 4H), 0,84-0,73 (м, 6H).
Диастереомер 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 2 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 23; 400 мг, 0,95 ммоль) в толуоле (10 мл) при 0°C, добавляли трифенилфосфин (533 мг, 1,90 ммоль) и метилтритил-D-серинат (промежуточное соединение 61; 460 мг, 1,14 ммоль) и перемешивали реакционную смесь 5 минут. Затем по каплям добавляли DIAD (320 мг, 1,42 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 4 часов при 90°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный остаток распределяли между водой (10 мл) и EtOAc (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 20% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (600 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,47-7,42 (м, 6H), 7,33-7,27 (м, 7H), 7,24-7,20 (м, 6H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 4,33-4,19 (м, 1H), 4,01-4,07 (м, 1H), 3,74 (шир. с, 2H), 3,69-3,59 (м, 1H), 3,23 (с, 2H), 3,21 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,65-1,51 (м, 1H), 1,52-1,41 (м, 1H), 1,41-1,36 (м, 2H) 1,23-0,95 (м, 4H), 0,84-0,73 (м, 6H).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 63
Метил O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серинат и метил O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серинат
Диастереомер 1
К перемешиваемому раствору диастереомера 1 метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритил-D-серината (промежуточное соединение 62; 740 мг, 0,98 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°C, добавляли TFA (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 час при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь выливали в ледяную воду (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 5-10% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 79% (400 мг, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ F) 521,2 (M++H), Rt. 0,21 мин, 58,92% (Макс).
Диастереомер 2
К перемешиваемому раствору диастереомера 2, метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-N-тритил-D-серината (промежуточное соединение 62; 600 мг, 0,78 ммоль), в DCM (6 мл) при 0°C, добавляли TFA (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 час при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь выливали в ледяную воду (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 5-10% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 90% (370 мг, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 521,2 (M++H), Rt. 2,57 мин, 59,57% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 64
2-(((2-Амино-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилгексановая кислота
К перемешиваемому раствору 6-метоксибензо[d]тиазол-2-амина (270 г, 1,498 моль) в воде (2700 мл) добавляли КОН (1345 г, 23,96 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при 120°С. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Затем по каплям добавляли раствор 2-(бромметил)-2-этилгексановой кислоты (533 г, 2,25 моль) в THF (1000 мл) и полученную реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (отслеживаемой с помощью LCMS) реакционную смесь охлаждали до 0°C и подкисляли концентрированной HCl (pH ~ 2). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 4000 мл), и объединенный органический слой промывали водой (1000 мл) и рассолом (1000 мл). Затем органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного материала, который отправляли как таковой на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 590 г (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ A) 312,1 (M++H), Rt. 2,24 мин, 97,34% (Макс).
Промежуточное соединение 65
3-Бутил-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-5-метоксифенил)тио)метил)-2-этилгексановой кислоты (промежуточное соединение 64; 590 г, 1,89 моль) в EtOAc (2500 мл) при 0°C, триэтиламин (530 мл, 3,78 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc; 785 г, 2,46 моль) добавляли по каплям, и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем LCMS) к реакционной смеси добавляли воду (2000 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 2000 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (800 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Неочищенное вещество очищали промыванием метанолом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 48% (265 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ 9,53 (с, 1H), 7,04-7,01 (м, 2H), 6,87-6,86 (м, 1H), 3,72 (с, 3H), 2,50 (с, 2H)., 1,68-1,66 (м, 4H), 1,50-1,48 (м, 4H), 0,79-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 294,3 (M++H), Rt. 2,68 мин, 99,47% (Макс).
Промежуточное соединение 66
7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 65; 265 г, 0,903 моль) в соотношении 1:1 смесь DCM и ацетонитрила (2650 мл), N-бромсукцинимид (209 г, 1,17 моль) добавляли по частям и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали. Полученный неочищенный материал обрабатывали холодным ацетонитрилом и перемешивали в течение 30 минут. Полученный осадок отфильтровывали, промывали холодным ацетонитрилом (2 × 100 мл) и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 179 г (79%, неочищенное, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ 9,61 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,10 (с, 1H), 3,82 (с, 3H), 2,98 (с, 2H), 1,70-1,68 (м, 4H), 1,48-1,45 (м, 4H), 0,84-0,82 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 372,0 (M++H), Rt. 2,83 мин, 99,20% (Макс).
Промежуточное соединение 67
7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 66; 15 г, 40,2 ммоль) добавляли 1-фтор-4-иодбензол (50 мл), иодид меди (I) (1,58 г, 0,8 ммоль) и K2CO3 (11 г, 80,5 ммоль), и продували реакционную смесь азотом в течение 20 минут для дегазации. Затем в атмосфере азота добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (1,3 мл, 4,0 ммоль), и полученную реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 135°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (200 мл). Фильтрат промывали водой (100 мл) и рассолом (75 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 5% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 64% (12,2 г, грязно-белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 467,1 (M++2) для 7-бромзамещенного соединения и 514,1 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения), Rt. 3,33 мин, 92,83% (Макс).
Промежуточное соединение 68
7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-йод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-йод-8-метокси-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 67; 12 г, 25,7 ммоль) в THF (100 мл) при 0°C по каплям добавляли диметилсульфид борана (2M в THF; 38 мл, 77 ммоль) и кипятили реакционную смесь с обратным холодильником в течение 16 часов при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°C, гасили метанолом (20 мл) и нагревали в течение 2 часов при 65°C. Затем полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли водой (100 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2 × 100 мл). Затем объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали под вакуумом, и полученное неочищенное вещество направляли на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 10 г (сырая, черное смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 451,8 (M++H) для 7-бромзамещенного соединения и 499,7 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 3,78 мин, 75,13% (Макс).
Промежуточное соединение 69
7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-йод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-иод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 68; 10 г, 26,6 ммоль) в THF (100 мл) и воду (60 мл), оксон (81 г, 26,6 ммоль) добавляли при 0°C. Полученную реакционную смесь перемешивали 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь отфильтровывали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2 × 200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (100 мл) и рассолом (100 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 54% (7 г, белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 486,0 (M++2) для 7-бромзамещенного соединения и 532,0 (M++H) для 7-иодзамещенного соединения, Rt. 2,87 мин, 91,53% (Макс).
Промежуточное соединение 70
3-Бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида и 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-йод-8-метокси-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 69; 3 г, 6,2 ммоль) в DMF (16 мл), тиометоксид натрия (2,1 г, 31 ммоль) добавляли при комнатной температуре и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (25 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 77% (2,13 г, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,49 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,06-6,96 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 3,62 (ш.с, 2H), 3,21. (с, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,61-1,25 (м, 4H), 1,20-1,01 (м, 4H), 0,81-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 438,1 (M++H), Rt. 2,78 мин, 87,79% (Макс).
Разделение энантиомеров:
(S)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,5-тиазепин 1,1-диоксид и (R)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,5-тиазепин 1,1-диоксид
Два энантиомера рацемического 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (2,8 г, 0,01 моль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 35,7% (1,0 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,49 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,07-6,98 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 3,62 (с, 2H), 3,21. (с, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,50-1,34 (м, 4H), 1,29-1,11 (м, 4H), 0,76-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 438,1 (M++H), Rt. 3,01 мин, 96,38%. HPLC: (Способ B) Rt. 5,80 мин, 98,35% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,46 мин, 100% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 39,2% (1,1 г, белое твердое вещество). LCMS: (Способ E) 438,1 (M++H), Rt. 3,04 мин, 96,52% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,17 мин, 99,68% (Макс).
Промежуточное соединение 71
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 22; 400 мг, 0,95 ммоль) в DMF (4 мл), добавляли Cs2CO3 (621 мг, 1,90 ммоль) и метилоксиран-2-карбоксилат (291 мг, 2,85 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 16 часов при комнатной температуре. После 70-80% конверсии исходного материала (отслеживаемой ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (300 мг, желтое смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 10,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 10,0 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 9,6 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 5,89 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,47 (т, J = 6,0 Гц, 1H), 4,27 (д, J = 5,2 Гц, 2H), 3,68 (с, 3H), 3,60-3,55 (м, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,81-1,70 (м, 1H), 1,60-1,25 (м, 3H), 1,22-0,95 (м, 4H), 0,85-0,65 (м, 6H). LCMS: (Способ F) 522,3 (M++H), Rt. 2,76 мин, 98,34% (Макс).
Промежуточное соединение 72
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат (отдельные диастереомеры)
Диастереомеры 1 и 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 1, 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 23; 400 мг, 0,95 ммоль), в DMF (4 мл) добавляли Cs2CO3 (621 мг, 1,90 ммоль) и метилоксиран-2-карбоксилат (291 мг, 2,85 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 48 часов при комнатной температуре. После завершения реакции на 70-80% (контроль с помощью ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), затем объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (300 мг, коричневое смолистое вещество). LCMS: (Способ E) 522,1 (M++H), Rt. 3,03 мин, 98,51% (Макс).
Два диастереомера (290 мг, 0,55 ммоль) разделяли с помощью прибора для хиральной SFC (Способ N). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2.
Диастереомеры 3 и 4
Смесь диастереомеров 3 и 4 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, исходя из 400 мг энантиомера 2 промежуточного соединения 23. Выход: 49% (280 мг, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ F) 522,2 (M++H), Rt. 2,759 мин., 99,04% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,681 мин, 98,07% (Макс).
Два диастереомера (270 мг, 0,52 ммоль) разделяли с помощью прибора для хиральной SFC (Способ G). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 3, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 4.
Диастереомер 1: Выход: 37% (110 мг, светло-коричневое смолистое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 5,90 (д, J = 6,0 Гц, 1H), 4,50-4,47 (м, 1H), 4,27 (т, J = 2,4 Гц, 2H), 3,69 (с, 5H)), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,65-1,40 (м, 2H), 1,36-1,31 (м, 2H), 1,13-1,08 (м, 4H), 0,79-0,74 (м, 6H)). LCMS: (Способ E) 522,1 (M++H), Rt. 3,03 мин, 96,69% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,604 мин., 97,44% (Макс). Хиральная SFC: (Способ N) Rt. 2,93 мин, 99,72% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 37% (110 мг, светло-коричневое смолистое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 10,4 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 10,4 Гц, 2H), 6,87 (д, J = 10,0 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 5,89 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,49-4,47 (м, 1H), 4,27-4,26 (м, 2H), 3,69 (с, 5H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,62-1,50 (м, 1H), 1,50-1,28 (м, 3H), 1,20-0,90 (м, 4H), 0,82-0,70 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 522,1 (M++H), Rt. 3,039 мин, 97,48% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,604 мин, 99,06% (Макс). Хиральная SFC: (Способ N) Rt. 3,76 мин, 98,78% (Макс).
Диастереомер 3: Выход: 37% (100 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 10,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 10,8 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 9,2 Гц, 1H), 6,69 (с, 1H), 5,89 (д, J = 7,6 Гц, 1H), 4,55-4,45 (м, 1H), 4,30-4,20 (м, 2H), 3,68 (с, 5H), 3,29-3,27 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,60-1,50 (м, 2H), 1,50-1,30 (м, 2H), 1,20-0,95 (м, 4H), 0,80-0,70 (м, 6H) . LCMS: (Способ E) 522,0 (M++H), Rt. 3,05 мин, 95,91% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,74 мин, 99,94% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 3,09 мин, 99,20% (Макс).
Диастереомер 4: Выход: 37% (100 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 9,6 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 9,6 Гц, 2H), 6,87 (с, 1H), 6,69 (с, 1H), 5,90 (д, J = 7,2 Гц, 1H), 4,48 (д, J = 6,8 Гц, 1H), 4,27 (с, 2H), 3,69-3,67 (м, 5H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,60-1,50 (м, 2H), 1,45-1,30 (м, 2H), 1,20-1,00 (м, 4H), 0,79-0,73 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 522,0 (M++H), Rt. 3,06 мин, 95,26% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,74 мин, 93,32% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 5,13 мин, 99,07% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 73
Метил 3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 70; 100 мг, 0,22 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли Cs2CO3 (148 мг, 4,40 ммоль) и метилоксиран-2-карбоксилат (26 мг, 0,26 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После ~ 70% завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и дополнительно разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 45% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (60 мг, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,11-7,07 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 5,87-5,84 (м, 1H), 4,48 (д, J = 5,6 Гц, 1H), 4,25 (т, J = 2,8 Гц, 2H), 3,76 (с, 3H), 3,69-3,68 (м, 2H), 3,33-3,29 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,52-1,51 (м, 2H), 1,38-1,33 (м, 2H), 1,18-1,10 (м, 4H), 0,78-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M++H), Rt. 3,03 мин, 76,03% (Макс).
Промежуточное соединение 74
Метил 3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат (индивидуальные диастереомеры)
Диастереомеры 1 и 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 1, 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 70; 160 мг, 0,36 ммоль), в DMF (3 мл) добавляли Cs2CO3 (230 мг, 0,73 ммоль) и метилоксиран-2-карбоксилат (44 мг, 0,43 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 48 часов при комнатной температуре. После завершения реакции на 70-80% (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 30-40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 40% (80 мг, коричневое смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,41 (с, 1H), 7,08-7,04 (м, 2H), 7,03-7,06 (м, 2H), 6,55 (с, 1H), 4,57-4,56 (м, 1H)., 4,46 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,87 (с, 3H), 3,75-3,65 (м, 2H), 3,19-3,17 (м, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,79-1,61 (м, 2H), 1,49-1,42 (м, 2H), 1,28-1,20 (м, 2H), 1,18-1,10 (м, 2H), 0,85-0,79 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,1 (M++H), Rt. 3,03 мин, 95,30% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,70 мин, 93,00% (Макс).
Два диастереомера разделяли с помощью прибора для хиральной SFC (Способ G). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2.
Диастереомеры 3 и 4
Смесь диастереомеров 3 и 4 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, исходя из 160 мг энантиомера 2 промежуточного соединения 70. Выход: 40% (80 мг, коричневое смолистое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,41 (с, 1H), 7,29-6,97 (м, 4H), 6,55 (с, 1H), 4,57-4,55 (м, 1H), 4,39-4,38 (м, 2H)., 3,80 (с, 3H), 3,78-3,60 (м, 2H), 3,19-3,15 (м, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,49-1,40 (м, 4H), 1,27-1,20 (м, 2H) 1,18-1,10 (м, 2H), 0,80-0,78 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M++H), Rt. 3,04 мин, 95,89% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,75 мин, 93,07% (Макс).
Два диастереомера разделяли с помощью прибора для хиральной SFC (Способ G). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 3, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 4.
Диастереомер 1: Выход: 37% (30 мг, коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,09-7,07 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 5,89 (д, J = 6,0 Гц, 1H), 4,48-4,48 (м, 1H), 4,28-4,26 (м, 2H), 3,68-3,51 (м, 5H), 3,37-3,35 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,61-1,52 (м, 1H), 1,38-1,31 (м, 3H), 1,24-1,01 (м, 4H), 0,78-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M++H), Rt. 3,05 мин, 99,79% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,75 мин, 99,24% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 1,4 мин, 99,58% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 37% (30 мг, коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,33 (с, 1H), 7,09-7,07 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 5,89 (д, J = 6,0 Гц, 1H), 4,49-4,48 (м, 1H), 4,26-4,26 (м, 2H), 3,68-3,51 (м, 5H), 3,37-3,35 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,50-1,41 (м, 1H), 1,38-1,31 (м, 3H), 1,24-1,01 (м, 4H), 0,78-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M++H), Rt. 3,05 мин, 99,10% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,76 мин, 97,56% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 2,16 мин, 99,40% (Макс).
Диастереомер 3: Выход: 12% (10 мг, коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,09-7,07 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 5,88 (д, J = 6,0 Гц, 1H), 4,48-4,47 (м, 1H), 4,26-4,24 (м, 2H), 3,69-3,68 (м, 5H), 3,33-3,21 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,68-1,50 (м, 1H), 1,42-1,38 (м, 3H), 1,35-1,01 (м, 4H), 0,76-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M++H), Rt. 2,39 мин, 99,79% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,72 мин, 99,52% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 2,01 мин, 98,91% (Макс).
Диастереомер 4: Выход: 12% (10 мг, коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,09-7,07 (м, 4H), 6,61 (с, 1H), 5,88 (д, J = 5,2 Гц, 1H), 4,49-4,45 (м, 1H), 4,27-4,24 (м, 2H), 3,69-3,68 (м, 5H), 3,33-3,21 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,68-1,50 (м, 1H), 1,42-1,38 (м, 3H), 1,34-1,01 (м, 4H), 0,78-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 540,0 (M + H), Rt. 3,04 мин, 99,30% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt 5,72 мин, 98,98% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 3,78 мин, 98,58% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 75
3-Бутил-3-этил-8-гидрокси-7-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (1 г, 2,21 ммоль) в метоксиде натрия (21%, 4,42 мл, 4,42 ммоль), CuBr (0,1 г, 0,31 ммоль) добавляли при комнатной температуре и полученную смесь нагревали в течение 6 часов при 85°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученную неочищенную массу распределяли между EtOAc (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл), а затем объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме, и полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 5% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 41% (0,36 г, бледно-розовое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,71 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,19 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,92 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,54 (с, 1H), 3,63 (с, 3H), 3,16 (с, 2H), 2,45 (с, 2H), 1,62-1,51 (м, 2H), 1,40-1,31 (м, 2H), 1,28-1,18 (м, 4H), 0,78-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 404,2 (M + H), Rt. 2,64 мин, 94,56% (Макс).
Промежуточное соединение 76
7-бром-3,3-дибутил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (0,8 г, 1,62 ммоль) в DCM (20 мл) при 0°C по каплям добавляли BBR3 (0,78 мл, 8,1 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°C. По каплям добавляли EtOAc (10 мл) и ледяную воду (5 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем реакционную смесь распределяли между водой (15 мл) и DCM (15 мл), и водный слой экстрагировали DCM (3 × 15 мл). Объединенную органическую часть промывали рассолом (15 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал отправляли на следующую стадию как таковой без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 90% (700 мг, неочищенное, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,83 (с, 1H), 7,46 (с, 1H), 7,23 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,07 (с, 1H), 6,99 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 3,80-3,72 (м, 2H), 3,27 (с, 2H), 1,34-1,31 (м, 4H), 1,13-0,99 (м, 8H), 0,75-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 480,1 (M+), Rt. 3,19 мин, 89,95% (Макс).
Промежуточное соединение 77
3,3-дибутил-8-гидрокси-7-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 7-бром-3,3-дибутил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 76; 0,9 г, 1,87 ммоль) в метоксиде натрия (21%, 10 мл, 10,2 ммоль), добавляли CuBr (0,15 г, 1,05 ммоль) при комнатной температуре и полученную смесь нагревали при 85°C в течение 6 часов. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученную неочищенную массу распределяли между EtOAc (25 мл) и водой (25 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 25 мл), и объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме, и полученный неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 5% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 78% (0,63 г, светло-розовое смолистое вещество).
UPLC: (Способ A) 432,5 (M + H), Rt. 1,93 мин, 90,07% (Макс).
Промежуточное соединение 78
Метил 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропаноат
К суспензии гидрида натрия (60%, 7,2 мг, 0,18 ммоль) в DMF (1 мл) при 0°C добавляли раствор метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1, 1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 20; 200 мг, 0,36 ммоль) в DMF (3 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем по каплям добавляли раствор метилиодида (0,12 мл, 2,3 ммоль) в DMF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и дополнительно разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 20-30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 48% (100 мг, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,32 (с, 1H), 7,25-7,20 (м, 2H), 7,01 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,88 (т, J = 9,6 Гц, 1H), 6,65 (с, 1H), 4,39-4,26 (м, 2H), 4,04-4,01 (м, 1H), 3,77 (с, 3H), 3,47-3,45 (м, 5H), 3,33-3,20 (м, 2H)), 2,13 (с, 3H), 1,40-1,26 (м, 4H), 1,20-1,03 (м, 8H), 0,78-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 564,1 (M + H), Rt. 3,35 мин, 95,11% (Макс).
Промежуточное соединение 79
Метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноат (отдельные диастереомеры)
К перемешиваемому раствору энантиомера 2, 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (Промежуточное соединение 23, 250 мг, 0,59 ммоль), в DMF (5 мл), добавляли Cs2CO3 (0,38 г, 1,19 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при комнатной температуре. Затем добавляли метил-2-метилглицидат (0,2 г, 1,78 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 72 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (150 мг, бесцветное смолистое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,31 (с, 1H), 7,21-7,19 (м, 2H), 6,99-6,96 (м, 3H), 6,68 (с, 1H), 4,15-4,12 (м, 3H), 3,89-3,59 (м, 4H), 3,26 (с, 2H), 2,14 (с, 3H), 1,55-1,33 (м, 5H), 1,28-1,15 (м, 6H), 0,85-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 536,2 (M++H), Rt. 3,05 мин, 99,11% (Макс).
Два диастереомера-энантиомера (150 мг, 0,28 ммоль) разделяли с помощью SFC (Способ H). Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2. Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного диастереомера указанного в заголовке соединения.
Диастереомер 1: Выход: 33% (50 мг, грязно-белое твердое вещество). LCMS: (Способ E) 535,8 (M++H), Rt. 2,69 мин, 97,06% (Макс). Хиральная SFC: (Способ F) Rt. 1,94 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 33% (50 мг, грязно-белое твердое вещество). LCMS: (Способ E) 535,8 (M++H), Rt. 2,69 мин, 96,50% (Макс). Хиральная SFC: (Способ F) Rt. 3,20 мин, 100% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Промежуточное соединение 80
7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-он
К раствору 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 31; 5 г, 14 ммоль) в 1-бром-4-фторбензоле (50 мл), добавляли сухой K2CO3 (3,9 г, 28 ммоль), CuI (0,26 г, 1,4 ммоль) и трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (0,9 г, 2,8 ммоль), и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 135°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Полученный остаток затем распределяли между водой (25 мл) и EtOAc (25 мл). Водную часть экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл), и объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток растирали с петролейным эфиром. Полученное твердое вещество затем отфильтровывали и сушили, получая указанное в заголовке соединение. Выход: 85% (5,5 г, бледно-коричневое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 451,9 (M++H), Rt. 3,26 мин., 81,86% (Макс).
Промежуточное соединение 81
7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин
К раствору 7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5H)-она (промежуточное соединение 80; 5,2 г, 11,5 ммоль) в THF (50 мл) при 0°C, добавляли диметилсульфид борана (1M в THF, 58 мл, 58 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 75°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли метанол (60 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 2 часов при 60°C. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали под вакуумом и полученный остаток распределяли между водой (50 мл) и EtOAc (50 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл), и объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 5,3 г (неочищенная бесцветное смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 439,9 (M++H), Rt. 3,55 мин., 87,61% (Макс).
Промежуточное соединение 82
7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К раствору 7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 81; 5,3 г, 12,1 ммоль) в смеси THF и воды (8: 2, 55 мл), добавляли оксон (37,16 г, 120,8 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл), и объединенный органический слой промывали ледяной водой (100 мл) и рассолом (100 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 15% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 75% (4,3 г, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,45 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 7,12-7,05 (м, 4H), 3,93 (с, 3H), 3,85-3,61 (м, 2H)., 3,29 (с, 2H), 1,52-1,39 (м, 1H), 1,37-1,26 (м, 1H), 1,25-1,03 (м, 4H), 0,98 (с, 3H), 0,81-0,74 (м, 3H) . LCMS: (Способ E) 470,1 (M+), Rt. 3,21 мин., 98,04% (Макс).
Промежуточное соединение 83
3-Бутил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К раствору 7-бром-3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-метокси-3-метил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 82; 4,3 г, 9,14 ммоль) в DMF (43 мл), добавляли тиометоксид натрия (3,2 г, 45,7 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 12 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (25 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 90% (3,5 г, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 10,57 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,04-6,98 (м, 2H), 6,92-6,88 (м, 2H), 6,71 (с, 1H)., 3,81-3,65 (м, 2H), 3,34-3,20 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,55-1,39 (м, 1H), 1,38-1,05 (м, 5H), 0,99 (с, 3H) 0,81-0,77 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 424,2 (M++H), Rt. 2,78 мин., 98,08% (Макс).
Промежуточное соединение 84
Метил 3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноат
К перемешиваемому раствору 3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 83; 200 мг, 0,47 ммоль) в DMF (3 мл), добавляли Cs2CO3 (300 мг, 0,94 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут при 0°C. Затем добавляли β-пропиолактон (144 мг, 1,41 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 25-30% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш). Выход: 64% (160 мг, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 526,0 (M++H), Rt. 2,94 мин, 99,11% (Макс).
Промежуточное соединение 85
3-Бутил-7-(диметиламино)-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К дегазированному раствору 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 34; 1 г, 2,2 ммоль) в 1,4-диоксане (8 мл) в автоклаве, добавляли трет-бутоксид натрия (570 мг, 4,4 ммоль), ксантфос (127 мг, 0,22 ммоль) и диметиламин (2 М раствор в THF, 10 мл, 10 об.), и дополнительно дегазировали реакционную смесь в течение еще 15 минут. Затем добавляли pd2(dba)3 (101 мг, 0,11 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (25 мл). Часть фильтрата концентрировали под вакуумом и полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 0-24% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 76% (0,7 г, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,29 (с, 1H), 7,17 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,77 (с, 1H), 6,43 (с, 1H), 3,86 (с, 3H), 3,81-3,72 (м, 2H), 3,25-3,14 (м, 2H), 2,69 (с, 6H), 1,55-1,43 (м, 1H), 1,33-1,11 (м, 5H), 1,00 (с, 3H), 0,82-0,78 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 417,2 (M++H), Rt. 2,21 мин, 97,88% (макс).
Промежуточное соединение 86
3-Бутил-7-(диметиламино)-8-гидрокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 85; 0,7 г, 1,68 ммоль) в DMF (7 мл), добавляли тиометоксид натрия (0,65 г, 8,40 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 12 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (15 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали ледяной водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть концентрировали под вакуумом, получая указанное в заголовке соединение. Выход: 600 мг (неочищенное, коричневое смолистое вещество).
LCMS: (Способ E) 403,2 (M++H), Rt. 2,01 мин., 96,67% (Макс).
Промежуточное соединение 87
3-Бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метиламино)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксид
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-метокси-7-(метиламино)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (200 мг 0,48 ммоль) в DMF (6 мл), добавляли тиометоксид натрия (52 мг, 0,96 ммоль) и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 90°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2 × 10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 95% (180 мг, твердое вещество розового цвета).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 9,88 (с, 1H), 7,17-7,13 (м, 3H), 6,89 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,74 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 5,96 (с, 1H), 5,71-5,68 (м, 1H), 3,65 (с, 2H), 3,06 (с, 2H), 2,54 (с, 3H), 1,63-1,49 (м, 2H), 1,47-1,28 (м, 2H), 1,17-1,01 (м, 4H), 0,80-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 564,1 (M++H), Rt. 3,00 мин, 99,35% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,47 мин, 97,83% (Макс).
Пример 1
3-((7-Бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору (E)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) акриловой кислоты (промежуточное соединение 2; 0,5 г, 0,95 ммоль) в этаноле (8 мл), добавляли PtO2 (0,021 г, 0,095 ммоль) в атмосфере азота и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в TINYCLAVE (под давлением 2 кг) в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь фильтровали через целит, и слой целита промывали EtOAc (2 × 15 мл). Объединенный фильтрат концентрировали в вакууме, получая неочищенный материал, который очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 16% (80 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,46 (шир. С, 1H), 7,45 (с, 1H), 7,26 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,13 (с, 1H), 7,05 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,93 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 4,29 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,75 (шир. С, 2H), 3,47 (с, 2H), 2,75 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 1,37-1,30 (м, 4H), 1,17-1,12 (м, 4H), 0,73 (т, J = 6,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ D) 525,2 (M++H), Rt. 2,76 мин, 99,55% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 10,41 мин, 99,39% (Макс).
Примеры 2 и 3
(S)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 1; 80 мг, 0,15 ммоль) разделяли с помощью хиральной препаративной SFC (Способ E); подвижная фаза: CO2: MeOH (60:40); длина волны: 210 нм; время цикла: 4 мин; противодавление: 100 бар. Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 29% (23 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (шир. С, 1H), δ 7,45 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,14 (с, 1H), 7,05 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,92 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 4,29 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,69 (шир. с, 2H), 3,34 (с, 2H), 2,72 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 1,51-1,32 (м, 4H), 1,16-1,12 (м, 4H), 0,74 (т, J = 8,00 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 525,1 (M++H), Rt. 2,82 мин, 99,36% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,91 мин, 99,39% (Макс). Хиральная SFC: (Способ D) Rt. 2,46 мин, 100% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 37% (30 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (шир. С, 1H), 7,45 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,14 (с, 1H), 7,05 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,92 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 4,28 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,69 (шир. с, 2H), 3,34 (с, 2H), 2,68 (т, J = 6,4 Гц, 2H), 1,50-1,32 (м, 4H), 1,23-0,99 (м, 4H), 0,74 (т, J = 4,00 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 526,1 (M++2), Rt. 2,61 мин, 97,99% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,91 мин, 99,31% (Макс). Хиральная SFC: (Способ D) Rt. 3,89 мин, 99,04% (Макс).
Пример 4
3-((7-Бром-3,3-дибутил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору этил-3-((3,3-дибутил-7-бром-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ила)окси) пропаноата (промежуточное соединение 4; 1,5 г, 2,58 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл), HCl (6 н., 20 мл) добавляли по каплям при комнатной температуре и нагревали реакционную смесь 16 ч при 100°C. завершение реакции (подтвержденное LCMS), реакционную смесь разбавляли ледяной водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и упаривали в вакууме. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 35-40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 59% (150 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,45 (с, 1H), 7,27 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,11 (с, 1H), 7,08 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,95 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 4,29 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,70 (шир. с, 2H), 3,36 (с, 2H), 2,74 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 1,36-1,30 (м, 4H), 1,16-1,00 (м, 8H), 0,75 (т, J = 6,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 554,2 (M++2), Rt. 3,08 мин, 94,37% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,43 мин, 95,0% (Макс).
Пример 5
3-((3-Бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору этил 3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропаноата (промежуточное соединение 12; 3,0 г, 5,9 ммоль) в 1,4-диоксане (200 мл) при комнатной температуре, по каплям добавляли HCl (6 н., 30 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем LCMS) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (30 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и упаривали в вакууме. Неочищенное вещество очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 5-10% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 73% (205 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,46 (шир. С, 1H), 7,50 (д, J = 2,0 Гц, 1H), 7,26 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 7,06 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (с, 1H), 6,94 (т, J = 6,8 Гц, 1H), 4,31 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,67 (шир. с, 2H), 3,36 (с, 2H), 2,75 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 1,51-1,32 (м, 4H), 1,24-0,99 (м, 4H), 0,75 (т, J = 6,80 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 482,2 (M++2), Rt. 2,78 мин, 96,49% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,83 мин, 97,44% (Макс).
Примеры 6 и 7
(S)-3-((3-Бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 5; 100 мг, 0,20 ммоль) разделяли с помощью хиральной препаративной SFC (Способ E); подвижная фаза: CO2: MeOH (60:40); длина волны: 210 нм; время цикла: 5 мин; противодавление: 100 бар. Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 25% (25 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,49 (с, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,05 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,99 (с, 1H), 6,93 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 4,30 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,70 (с, 2H), 3,40 (с, 2H), 2,74 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 1,50-1,33 (м, 4H), 1,15-0,98 (м, 4H), 0,74 (т, J = 4,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 482,1 (M++2), Rt. 2,81 мин, 95,89% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,87 мин, 98,01% (Макс). Хиральная SFC: (Способ D) Rt. 2,71 мин, 98,45% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 15% (15 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,37 (шир. С, 1H), 7,50 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,05 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,99 (с, 1H), 6,93 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 4,30 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,70 б (с, 2H), 3,41 (с, 2H), 2,73 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 1,50-1,30 (м, 4H), 1,15-0,99 (м, 4H), 0,74 (т, J = 4,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 482,1 (M++2), Rt. 2,81 мин, 96,76% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,87 мин, 99,5% (Макс). Хиральная SFC: (Способ D) Rt. 4,33 мин, 100% (Макс).
Пример 8
3-((3,3-Дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору этил-3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ила)окси) пропаноата (промежуточное соединение 19; 1,0 г, 1,86 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) при комнатной температуре, по каплям добавляли HCl (6 н., 10 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 100°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и упаривали в вакууме. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 35-40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 89% (100 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,49 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,08 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,94 (т, J = 4,8 Гц, 2H), 4,29 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,70 (шир. с, 2H), 3,32 (с, 2H), 2,71 (т, J = 4,4 Гц, 2H), 1,40-1,29 (м, 5H), 1,13-0,99 (м, 7H), 0,75 (т, J = 4,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 509,1 (M++H), Rt. 2,80 мин, 91,44% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,36 мин, 96,12% (Макс)
Пример 9
3-((3,3-Дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
К перемешиваемому раствору метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 20; 50 мг, 0,00009 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) при комнатной температуре, по каплям добавляли HCl (6 н., 1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (10 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (Способ A), получая указанное в заголовке соединение. Выход: 23% (11 мг, белое твердое вещество).
1H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,21 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,31 (д, J = 5,6 Гц, 1H), 4,06 (с, 2H), 3,50 (шир. с, 2H), 3,26 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,51-1,29 (м, 4H), 1,23-1,02 (м, 8H), 0,85-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 536,2 (M++H), Rt. 2,84 мин, 97,46% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,94 мин, 98,00% (Макс).
Примеры 10 и 11
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота и (R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ила)окси)-2-гидроксипропановой кислоты (Пример 9; 2,9 г, 5,41 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ G). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 7,8% (7,3 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,33-4,15 (м, 3H), 3,78 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,51-1,25 (м, 4H), 1,24-0,93 (м, 8H), 0,77 (т, J = 6,4 Гц, 6H). LCMS: (Способ A) 536,3 (M++H), Rt. 2,82 мин, 95,59% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,77 мин, 99,06% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 2,47 мин, 99,16% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 8% (7,7 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,33-4,15 (м, 3H), 3,78 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,49-1,25 (м, 4H), 1,24-0,93 (м, 8H), 0,77 (т, J = 6,4 Гц, 6H). LCMS: (Способ A) 536,2 (M++H), Rt. 2,82 мин, 94,18% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,78 мин, 96,55% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 3,24 мин, 91,11% (Макс).
Пример 12
3-((3-Бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору этил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропаноата (промежуточное соединение 24; 1,3 г 2,5 ммоль) в 1,4-диоксане (3 мл) при комнатной температуре, по каплям добавляли HCl (6 н., 13 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 100°С. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (10 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (Способ A), получая указанное в заголовке соединение. Выход: 83% (235 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,32 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,27 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,68 (шир. с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,68 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,56-1,31 (м, 4H), 1,20-1,10 (м, 4H), 0,76 (т, J = 5,20 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 492,1 (M++H), Rt. 2,82 мин, 98,71% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,76 мин, 99,16% (Макс).
Примеры 13 и 14
(S)-3-((3-Бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 10; 140 мг, 0,28 ммоль) разделяли с помощью хиральной препаративной SFC (Способ D); подвижная фаза: CO2: MeOH (60:40); длина волны: 210 нм; время цикла: 3 мин; противодавление: 100 бар. Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 38% (53 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,31 (с, 1H), 7,21 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,84 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,24 (т, J = 6,4 Гц, 2H), 3,65 (шир. с, 2H), 3,17 (с, 2H), 2,58 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,54-1,31 (м, 4H), 1,14-1,04 (м, 4H), 0,77 (т, J = 6,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 492,1 (M++H), Rt. 2,74 мин, 98,94% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,76 мин, 97,76% (Макс). Хиральная SFC: (Метод B) Rt. 2,34 мин, 100% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 10% (14 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,31 (с, 1H), 7,21 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 6,8 Гц, 2H), 6,84 (т, J = 6,8 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,24 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,67 (шир. с, 2H), 3,17 (с, 2H), 2,55 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,37-1,31 (м, 2H), 1,24-1,10 (м, 2H), 1,09-1,04 (м, 4H), 0,77 (т, J = 6,40 Гц, 6H). LCMS: (Способ C) 492,1 (M++H), Rt. 2,74 мин, 99,69% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,87 мин, 99,5% (Макс). Хиральная SFC: (Метод B) Rt. 2,78 мин, 99,24% (Макс).
Пример 15
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору этил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропаноата (промежуточное соединение 26; 200 мг, 0,37 ммоль) в 1,4-диоксане (20 мл), добавляли HCl (10%, 20 мл) по каплям при комнатной температуре и нагревали реакционную смесь в течение 12 часов при 80°С. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь концентрировали под вакуумом с получением неочищенной массы. Неочищенную массу экстрагировали EtOAc (2 × 500 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4 и упаривали в вакууме. Полученный неочищенный материал очищали колоночной флэш-хроматографией с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 22% (0,04 г, бесцветная жидкость).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,46 (шир. С, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,68 (с, 1H), 4,27 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,67 (шир. с, 2H), 3,36 (с, 2H), 2,73 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 2,14 (с, 3H), 1,43-1,30 (м, 4H), 1,18-1,02 (м, 8H), 0,77 (т, J = 8,00 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 520,2 (M++H), Rt. 3,00 мин, 92,89% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,24 мин, 92,03% (Макс).
Пример 16
3-((3-Бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 28; 100 мг, 0,24 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (27 мг, 0,24 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли β-пропиолактон (19 мг, 0,26 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (2 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 3% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 15% (18 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 7,20 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,83 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,33 (с, 1H), 4,20 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,78 (с, 2H), 3,20 (с, 2H), 2,75 (т, Дж = 5,6 Гц, 2H), 2,65 (с, 6H), 1,55-1,39 (м, 2H), 1,38-1,27 (м, 2H), 1,25-0,95 (м, 4H), 0,85-0,67 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 489,3 (M++H), Rt. 2,70 мин, 97,55% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,65 мин, 97,46% (Макс).
Примеры 17 и 18
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 16; 86 мг, 0,17 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 25% (22 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,41 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 7,20 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,82 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,32 (с, 1H), 4,19 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,78 (с, 2H), 3,20 (с, 2H), 2,76-2,73 (м, 2H), 2,65 (с, 6H), 1,60-1,18 (м, 4H), 1,19-0,92 (м, 4H), 0,78-0,73 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 489,1 (M++H), Rt. 2,75 мин, 98,71% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,63 мин, 98,12% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,37 мин, 100% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 21% (18,5 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,41 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 7,20 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,96 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,82 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,32 (с, 1H), 4,19 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 3,65 (с, 2H), 3,19 (с, 2H), 2,76-2,73 (м, 2H), 2,65 (с, 6H), 1,65-0,92 (м, 8H), 0,78-0,73 (м, 6H). LCMS: (Способ A) 489,2 (M++H), Rt. 2,74 мин, 99,41% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,64 мин, 98,06% (Макс). Хиральная HPLC: (Способ H) Rt. 3,06 мин, 99,50% (Макс).
Пример 19
3-((3,3-Дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановая кислота
К перемешиваемому раствору метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 29; 150 мг, 0,26 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (4: 1, 5 мл), добавляли гидроксид лития (33 мг, 0,76 ммоль)), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4), а затем разбавляли ледяной водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 8% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 70% (100 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,31 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц., 1H), 6,67 (с, 1H), 4,11 (с, 2H), 3,69 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,44-1,27 (м, 7H), 1,20-1,02 (м, 8H), 0,77 (т, J = 6,8 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 550,0 (M++H), Rt. 3,11 мин, 98,54% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,10 мин, 99,14% (Макс).
Примеры 20 и 21
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановая кислота и (R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ила)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты (Пример 19; 75 мг, 0,13 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного энантиомера указанного в заголовке соединения.
Энантиомер 1: Выход: 26% (10 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,71 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,11 (с, 2H), 3,69 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,51-1,25 (м, 8H), 1,24-0,95 (м, 8H), 0,77 (т, J = 6,4 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 550,1 (M++H), Rt. 3,15 мин, 92,15% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,05 мин, 96,01% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,61 мин, 95,05% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 26% (10 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,66 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,11 (с, 2H), 3,69 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,51-1,27 (м, 8H), 1,24-0,95 (м, 8H), 0,77 (т, J = 6,4 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 550,0 (M++H), Rt. 3,15 мин, 94,83% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,05 мин, 96,40% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,62 мин, 97,50% (Макс).
Пример 22
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 35; 300 мг, 0,74 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (91 мг, 0,81 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (58,6 мг, 0,81 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 3 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 3% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 17% (60 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,44 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H), 4,29 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,78 (м, 2H), 3,30-3,26 (м, 2H), 2,74 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,19 (с, 3H), 1,58-1,45 (м, 1H), 1,35-1,10 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 478,0 (M++H), Rt. 2,88 мин, 97,42% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,50 мин, 97,96% (Макс).
Примеры 23 и 24
(S)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 22; 60 мг, 0,12 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного энантиомера указанного в заголовке соединения.
Энантиомер 1: Выход: 30% (18 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H), 4,28 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,78-3,74 (м, 1H), 3,29-3,21 (м, 1H), 2,75-2,65 (м, 2H), 2,57-2,45 (м, 2H), 2,19 (с, 3H), 1,58-1,42 (м, 1H), 1,33-1,12 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 6,8 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 478,2 (M++H), Rt. 2,89 мин, 98,93% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,50 мин, 98,36% (Макс). Хиральная SFC: (Способ K) Rt. 8,44 мин, 99,61% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 13% (8,2 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H), 4,28 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,75-3,78 (м, 1H), 3,29-3,21 (м, 1H), 2,75-2,65 (м, 2H), 2,57-2,45 (м, 2H), 2,19 (с, 3H), 1,58-1,42 (м, 1H), 1,33-1,12 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 6,8 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 478,2 (M++H), Rt. 2,89 мин, 97,83% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,50 мин, 96,14% (Макс). Хиральная SFC: (Способ K) Rt. 9,49 мин, 98,42% (Макс).
Пример 25
3-((3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 40; 100 мг, 0,21 ммоль) в THF (1 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (26 мг, 0,23 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (15 мг, 0,21 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 3 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали препаративной HPLC (Способ A), получая указанное в заголовке соединение. Выход: 17% (19,5 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,47 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,27-7,20 (м, 1H), 7,77-7,05 (м, 1H), 6,76 (с, 1H)., 6,71-6,64 (м, 1H), 4,28 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,69 (шир. с, 2H), 3,29 (с, 2H), 2,72-2,68 (м, 2H), 2,22 (с, 3H)), 1,45-1,25 (м, 4H), 1,20-1,05 (м, 8H), 0,86-0,81 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 556,0 (M++H), Rt. 3,19 мин, 97,95% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,25 мин, 97,84% (Макс).
Пример 26
3-((3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 44; 100 мг, 0,21 ммоль) в THF (1 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (26 мг, 0,23 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (17 мг, 0,23 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 3 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 60% (70 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,41 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,09 (д, J = 6,4 Гц, 4H), 6,60 (с, 1H), 4,26 (т, Дж = 5,6 Гц, 2H), 3,78 (с, 2H), 3,30 (с, 2H), 2,71 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,14 (с, 3H), 1,49-1,37 (м, 4H), 1,20-0,97 (м, 8H), 0,78-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 537,8 (M++H), Rt. 3,19 мин, 95,96% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,22 мин, 95,82% (Макс).
Пример 27
3-((3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 3-этил-8-гидрокси-7-(метилтио)-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (промежуточное соединение 50; 300 мг, 0,74 ммоль) в THF (5 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (92 мг, 0,81 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 5 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (53 мг, 0,74 ммоль) в THF (2 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 4 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 3 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 6% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 5% (12 мг, бледно-коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,47 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,71 (с, 1H), 4,28 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,69 (с, 2H), 3,28 (с, 2H), 2,72 (т, Дж = 6,0 Гц, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,65-1,50 (м, 1H), 1,43-1,30 (м, 3H), 1,24-1,19 (м, 2H), 0,81-0,55 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 478,2 (M++H), Rt. 2,88 мин, 94,89% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,37 мин, 95,20% (Макс).
Пример 28
О-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил) серин
К перемешиваемому раствору метил-O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил) серината (промежуточное соединение 53; 170 мг, 0,33 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли гидроксид лития (28 мг, 0,65 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали, концентрировали в вакууме и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 24% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш). Полученный остаток повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 58% (95 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,91-7,61 (м, 2H), 7,39 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 8,0 Гц, 2H)., 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,43-4,40 (м, 1H), 4,27-4,22 (м, 1H), 3,69 (с, 2H), 3,59-3,57 (м, 1H), 2,68 (с, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,61-1,41 (м, 2H), 1,38-1,29 (м, 2H), 1,29-0,97 (м, 4H), 0,81-0,71 (м, 6Н). LCMS: (Способ E) 507,2 (M++H), Rt. 2,26 мин, 99,37% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,46 мин., 99,16% (Макс).
Пример 29
3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-7-(диметиламино)-8-гидрокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 86; 600 мг, 1,40 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (167 мг, 1,4 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (118 мг, 1,6 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 4 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 5 мл) и разбавляли водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл), и объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 3% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) и снова повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения.
LCMS: (Способ E) 474,8 (M++H), Rt. 2,12 мин, 98,47% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,43 мин, 99,05% (Макс).
Разделение энантиомеров:
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (140 мг, 0,29 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ F). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного энантиомера указанного в заголовке соединения.
Энантиомер 1: Выход: 30% (42 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,42 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,17 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,77 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,42 (с, 1H), 4,21 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,91-3,32 (м, 2H), 3,26-3,15 (м, 2H), 2,77 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 2,68 (с, 6H), 1,58-1,48 (м, 1H), 1,47-1,18 (м, 3H), 1,17-1,05 (м, 2H), 1,00 (с, 3H)), 0,85-0,78 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 475,1 (M++H), Rt. 2,08 мин, 99,82% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,44 мин, 99,39% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,2 мин, 100% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 35% (50 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,41 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,17 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,77 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,42 (с, 1H), 4,21 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,89-3,31 (м, 2H), 3,26-3,15 (м, 2H), 2,77 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 2,68 (с, 6H), 1,55-1,44 (м, 1H), 1,47-1,18 (м, 3H), 1,17-1,05 (м, 2H), 1,02 (с, 3H)), 0,85-0,78 (м, 3H). LCMS: (Способ A) 475,2 (M++H), Rt. 2,60 мин, 98,32% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,43 мин., 99,79% (Макс). Хиральная HPLC: (Способ H) Rt. 2,82 мин, 93,27% (Макс).
Пример 30
3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) бутановая кислота (индивидуальные диастереомеры)
Диастереомеры 1 и 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 2, 3-бутил-7-хлор-3-этил-8-гидрокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 11; 0,22 г, 0,52 ммоль), в сухом THF (5 мл), добавляли трет-бутоксид калия (0,06 г, 0,52 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C медленно добавляли раствор 4-метилоксетан-2-она (0,05 г, 0,58 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 12 часов при 60°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл), сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме при 50°C. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 30-40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением смеси диастереомеров 1 и 2 указанного в заголовке соединения.
Диастереомеры 1 и 2: Выход: 27% (0,07 г, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,55 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,07 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,94 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 4,81 (кв, J = 6,4 Гц, 1H), 3,71 (шир. с, 2H), 3,36-3,33 (м, 2H), 2,67-2,62 (м, 2H), 1,51-1,48 (м, 1H), 1,37-1,31 (м, 6H), 1,23-1,09 (м, 4H), 0,72 (т, J = 5,6 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 494,1 (M++H), Rt. 2,73 мин, 98,62% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,06 мин, 98,06% (Макс).
Два диастереомера (60 мг, 0,12 ммоль) разделяли SFC (метод J). Материал концентрировали под вакуумом при 40 oC. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2.
Диастереомер 1: Выход: 23% (14 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,55 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,07 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,93 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 4,81 (кв., J = 6,0 Гц, 1H), 3,72 (ш.с, 2H), 3,31 (с, 2H), 2,61-2,59 (м, 2H), 1,49-1,35 (м, 1H), 1,33-1,23 (м, 6H), 1,09-1,06 (м, 4H), 0,73 (т, J = 7,20 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 494,1 (M++H), Rt. 2,74 мин, 99,57% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,06 мин, 99,49% (Макс). Хиральная SFC: (Метод L) Rt. 2,37 мин, 99,7% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 24% (14,5 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,55 (с, 1H), 7,26 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,07 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,93 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 4,82-4,80 (м, 1H), 3,72 (шир. с, 2H), 3,32 (с, 2H), 2,62-2,60 (м, 2H), 1,51-1,36 (м, 1H), 1,32-1,26 (м, 6H), 1,10-1,02 (м, 4H), 0,72 (т, J = 7,2 Гц, 6H). LCMS: (Способ E) 494,1 (M++H), Rt. 2,73 мин, 98,95% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,05 мин, 99,36% (Макс). Хиральная SFC: (Метод L) Rt. 2,97 мин, 98,74% (Макс).
Диастереомеры 3 и 4
Смесь диастереомеров 3 и 4 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, что и выше, исходя из 0,20 г энантиомера 1 промежуточного соединения 11. После очистки хроматографией на колонке Isolera полученный остаток повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Два диастереомера далее не разделяли.
Диастереомеры 3 и 4: Выход: 29% (0,07 г, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (с, 1H), 7,56 (с, 1H), 7,27 (т, J = 8,3 Гц, 2H), 7,08 (д, J = 7,8 Гц, 2H), 6,95 (т, J = 6,6 Гц, 2H), 4,83 (кв, J = 6,2 Гц, 1H), 3,85 (шир. с, 2H), 3,31 (с, 2H), 2,72-2,70 (м, 2H), 1,51-1,47 (м, 1H), 1,48-1,32 (м, 6H), 1,18-0,98 (м, 4H), 0,76-0,70 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 493,1 (M+) Rt. 2,72 мин, 99,30% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,05 мин, 97,83% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Пример 31
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
К перемешиваемому раствору метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 54; 170 мг, 0,33 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (7 н., 1,7 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 3 часов при 65°С. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 8% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 61% (80 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): 7,47 (с, 1H), 7,27-7,24 (м, 2H), 7,02 (д, J = 4,8 Гц, 2H), 6,96-6,92 (м, 1H), 6,74-6,72 (м, 1H), 4,61-4,59 (м, 1H), 4,48-4,45 (м, 2H), 3,95-3,75 (м, 1H), 3,74-3,41 (м, 1H), 3,18-3,13 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,55-1,48 (м, 1H), (1,35-1,22 (м, 5H), 1,14-1,13 (м, 3H), 0,86-0,84 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 494,0 (M++H), Rt. 2,72 мин, 98,87% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,12 мин, 99,06% (Макс).
Пример 32
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота (отдельные диастереомеры)
К перемешиваемому раствору метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 55; 200 мг, 0,39 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (7 н., 1 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 3 часов при 65°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный слой EtOAc промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 8% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 61% (120 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,37 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H)., 4,37-4,34 (м, 1H), 4,06-4,01 (м, 2H), 3,79-3,74 (м, 1H), 3,61-3,45 (м, 1H), 3,30-3,22 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,52-1,46 (м, 1H), 1,36-1,11 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 493,9 (M++H), Rt. 2,40 мин, 93,95% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,08 мин, 93,40% (Макс).
Два диастереомера разделяли с помощью SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2. Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного диастереомера указанного в заголовке соединения.
Диастереомер 1: Выход: 36% (22 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,37 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H), 4,38-4,36 (м, 1H), 4,11-4,08 (м, 2H), 3,79-3,74 (м, 1H), 3,61-3,45 (м, 1H), 3,30-3,19 (м, 2H), 2,21 (с, 3H), 1,56-1,39 (м, 1H), 1,36-1,11 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 493,9 (M++H), Rt. 2,39 мин, 98,39% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,11 мин, 99,74% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,36 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 41% (25 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,37 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 6,4 Гц, 2H), 6,81-6,77 (м, 2H), 4,37-4,35 (м, 1H), 4,11-4,08 (м, 2H), 3,79-3,74 (м, 1H), 3,61-3,45 (м, 1H), 3,30-3,19 (м, 2H), 2,21 (с, 3H), 1,56-1,39 (м, 1H), 1,36-1,11 (м, 5H), 1,01 (с, 3H), 0,80 (т, J = 7,2 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 493,9 (M++H), Rt. 2,39 мин, 97,50% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,08 мин, 98,48% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,39 мин, 98,97% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Пример 33
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановая кислота (индивидуальные диастереомеры)
Диастереомеры 1 и 2
К перемешиваемому раствору диастереомеров 1 и 2 метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 56; 250 мг, 0,48 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 5 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 4 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 50-60% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш). Полученный остаток повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 25% (60 мг, белое твердое вещество).
LCMS: (Способ E) 507,8 (M++H), Rt. 1,44 мин, 99,07% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,18 мин, 99,82% (Макс).
Два диастереомера (60 мг, 0,11 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ F). Первая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует диастереомеру 2. Затем каждую из двух фракций отдельно обрабатывали для дальнейшей очистки. Полученный остаток подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и водный слой экстрагировали EtOAc (3 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом при 40°C с получением очищенного диастереомера указанного в заголовке соединения.
Диастереомер 1: Выход: 27% (16 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,75 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,18 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,79 (с, 2H), 5,65-5,11 (м, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,78 (шир. с, 2H), 3,29-3,24 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,40 (с, 3H), 1,39-1,15 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,81-0,78 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 508,1 (M++H), Rt. 2,44 мин, 98,51% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,23 мин, 97,95% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,12 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 27% (16 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,77 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,19 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,92 (д, J = 6,4 Гц, 2H), 6,79 (с, 2H), 5,65-5,11 (м, 1H), 4,13 (с, 2H), 3,78 (шир. с, 2H), 3,29-3,24 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,40 (с, 3H), 1,39-1,15 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,87-0,80 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 508,1 (M++H), Rt. 2,45 мин, 98,38% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,24 мин, 98,70% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,99 мин, 98,85% (Макс)
Диастереомер 3
К перемешиваемому раствору диастереомера 3, метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 56; 50 мг, 0,09 ммоль), в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 3 мл) и перемешивали реакционную смесь 4 часа при 80 oC. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 50-60% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 54% (26 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,77 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,19 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,91 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 5,40 (с, 1H), 4,13 (с, 2H), 3,37 (шир. с, 2H), 3,33-3,21 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,48 (с, 3H), 1,40-1,20 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,85-0,75 (м, 3H). LCMS: (Способ A) 508,1 (M++H), Rt. 2,50 мин, 96,08% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,19 мин, 97,64% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 1,69 мин., 100% (Макс)
Диастереомер 4
К перемешиваемому раствору диастереомера 4 метил-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 56; 60 мг, 0,11 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 3 мл) и перемешивали реакционную смесь 4 часа при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (5 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 50-60% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 33% (25 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,80 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,19 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,92 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,80 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 5,40 (с, 1H), 4,16-4,11 (м, 2H), 3,79 (шир. с, 2H), 3,34-3,18 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,48 (с, 3H), 1,43-1,25 (м, 6H), 1,01 (с, 3H), 0,86-0,82 (м, 3H). LCMS: (Способ A) 508,1 (M++H), Rt. 2,49 мин, 94,27% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,18 мин, 96,78% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 2,75 мин, 97,3% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Пример 34
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановая кислота
К перемешиваемому раствору метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 59; 40 мг, 0,07 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (7: 3, 10 мл), гидроксид лития (6,5 мг, 0,14 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., PH ~ 4) и разбавляли ледяной водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 9% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш), и полученный остаток повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 13% (5 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,35 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,6 Гц., 1H), 6,70 (с, 1H), 4,48-4,37 (м, 2H), 3,70 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,65-1,54 (м, 3H), 1,50-1,35 (м, 2H), 1,34-1,29 (м, 2H), 1,27-0,98 (м, 4H), 0,81-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 524,2 (M++H), Rt. 2,85 мин, 97,85% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,77 мин, 98,44% (Макс).
Пример 35
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановая кислота (индивидуальные диастереомеры)
Диастереомер 1
К перемешиваемому раствору диастереомера 1, метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 60; 50 мг, 0,09 ммоль), в смеси 1,4-диоксана и воды (7: 3, 10 мл), добавляли гидроксид лития (7,8 мг, 0,18 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 68% (33 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 13,51 (шир. С, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,49-4,37 (м, 2H), 3,69 (шир. с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,61-1,54 (м, 4H), 1,48-1,41 (м, 1H), 1,39-1,28 (м, 2H), 1,23-0,97 (м, 4H), 0,81-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 523,8 (M++H), Rt. 3,02 мин, 99,25% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,80 мин, 99,45% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,84 мин, 99,18% (Макс).
Диастереомер 2
К перемешиваемому раствору диастереомера 2, метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 60; 55 мг, 0,10 ммоль), в смеси 1,4-диоксана и воды (7: 3, 10 мл), гидроксид лития (8,6 мг, 0,18 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 62% (33 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 13,52 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,48-4,34 (м, 2H), 3,71 (шир. с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,62-1,57 (м, 4H), 1,37-1,24 (м, 3H), 1,18-0,95 (м, 4H), 0,79-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 523,8 (M++H), Rt. 3,02 мин, 99,47% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,80 мин, 99,60% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 5,52 мин, 98,89% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Пример 36
O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серин и O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серин
Диастереомер 1
К перемешиваемому раствору диастереомера 1, метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серината (промежуточное соединение 63; 400 мг, 0,77 ммоль), в смеси 1,4-диоксана и воды (7: 3, 10 мл), добавляли гидроксид лития (64 мг, 1,53 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли водой (5 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 24% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш). Полученный остаток повторно очищали препаративной HPLC, используя (Способ A), с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 10% (38 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,89-7,77 (м, 2H), 7,36 (с, 1H), 7,23 (т, J = 7,2 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,2 Гц, 2H)., 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,44-4,41 (м, 1H), 4,27-4,22 (м, 1H), 3,76 (с, 2H), 3,61-3,51 (м, 1H), 3,28 (с, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,64-1,31 (м, 4H), 1,21-0,95 (м, 4H), 0,88-0,68 (м, 6H). LCMS: (Способ F) 507,1 (M++H), Rt. 2,60 мин, 93,95% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,55 мин, 96,16% (Макс).
Диастереомер 2
К перемешиваемому раствору диастереомера 2, метил O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серината (промежуточное соединение 63; 370 мг, 0,71 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (7: 3, 10 мл), добавляли гидроксид лития (59 мг, 1,42 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли водой (5 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2 × 15 мл). Объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 24% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 14% (53 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): 7,35 (с, 1H), 7,22 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 7,00 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц., 1H), 6,71 (с, 1H), 4,44-4,41 (м, 1H), 4,27-4,22 (м, 1H), 3,75 (с, 2H), 3,61-3,48 (м, 1H), 3,28 (с, 2H)), 2,17 (с, 3H), 1,64-1,31 (м, 4H), 1,21-0,95 (м, 4H), 0,88-0,68 (м, 6H). LCMS: (Способ F) 507,2 (M++H), Rt. 2,34 мин, 96,63% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 4,55 мин, 94,35% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Пример 37
3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 70; 100 мг, 0,22 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (25 мг, 0,22 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (15 мг, 0,22 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали с помощью Prep HPLC (Способ A). Очищенные фракции концентрировали под вакуумом и полученный остаток растворяли в EtOAc (10 мл). Слой EtOAc промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 22% (25 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,42 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,08-7,05 (м, 4H), 6,62 (с, 1H), 4,26 (т, J = 5,6 Гц., 2H), 3,73-3,62 (м, 2H), 3,30-3,26 (м, 2H), 2,73-2,60 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,38-1,37 (м, 2H), 1,35-1,33 (м, 2H), 1,24-1,12 (м, 4H), 0,78-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 510,0 (M++H), Rt. 3,00 мин, 98,19% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,66 мин, 98,97% (Макс).
Пример 38
(S)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Энантиомер 1
К перемешиваемому раствору энантиомера 1, 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 70; 100 мг, 0,22 ммоль), в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (25 мг, 0,22 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (15 мг, 0,22 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 26% (30 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 7,08-7,06 (м, 4H), 6,62 (с, 1H), 4,27 (т, J = 6,0 Гц., 2H), 3,82-3,67 (м, 2H), 3,26-3,29 (м, 2H), 2,72 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,60-1,50 (м, 2H), 1,38-1,31 (м, 2H), 1,16-1,16 (м, 4H), 0,78-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 510,0 (M++H), Rt. 3,01 мин, 95,68% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,02 мин, 97,25% (Макс). Хиральная HPLC: (Способ H) Rt. 2,98 мин, 99,49% (Макс).
Энантиомер 2
К перемешиваемому раствору энантиомера 2, 3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 70; 100 мг, 0,22 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (25 мг, 0,22 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (15 мг, 0,22 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 9% (10 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,45 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,08-7,06 (м, 4H), 6,62 (с, 1H), 4,26 (т, J = 5,6 Гц., 2H), 3,82-3,67 (м, 2H), 3,26-3,29 (м, 2H), 2,72 (т, J = 7,6 Гц, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,52-1,51 (м, 2H), 1,38-1,31 (м, 2H), 1,24-1,11 (м, 4H), 0,78-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 510,0 (M++H), Rt. 3,01 мин, 91,43% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,02 мин, 93,54% (Макс). Хиральная HPLC: (Способ H) Rt. 3,32 мин, 98,84% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Пример 39
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
К раствору метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 71; 300 мг, 0,57 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл), по каплям добавляли разбавленную HCl (6 н., 9 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 4 часов при 80°С. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 10 мл), и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-10% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш), и полученный материал повторно очищали с помощью Prep HPLC (Способ A). Очищенные фракции концентрировали под вакуумом и полученный остаток растворяли в EtOAc (10 мл). Органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 37% (110 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,21 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,97 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,31 (с, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,95-3,55 (м, 2H), 3,26 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,65-1,45 (м, 1H), 1,50-1,35 (м, 1H), 1,40-1,30 (м, 2H), 1,22-1,03 (м, 4H), 0,79-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ F) 508,2 (M++H), Rt. 2,57 мин, 98,77% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,28 мин, 98,17% (Макс).
Пример 40
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота (отдельные диастереомеры)
Диастереомер 1
К раствору диастереомера 1, метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 72; 100 мг, 0,19 ммоль), в 1,4-диоксане (1 мл), по каплям добавляли разбавленную HCl (6 н., 2 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 5-10% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения.
Диастереомеры 2, 3 и 4 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, исходя из 100 мг диастереомеров 2, 3 и 4 промежуточного соединения 72, соответственно.
Диастереомер 1: Выход: 56% (55 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,36 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,31 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 4,22-4,14 (м, 2H), 3,68 (с, 2H), 3,26 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,62-1,50 (м, 2H), 1,40-1,25 (м, 2H), 1,18-1,03 (м, 4H), 0,85-0,65 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 508,0 (M++H), Rt. 2,89 мин, 97,46% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,34 мин, 99,12% (Макс). Хиральная SFC: (Способ I) Rt. 1,67 мин, 97,58% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 61% (60 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,35 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,33 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,20-4,10 (м, 2H), 3,70 (с, 2H), 3,26 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,65-1,40 (м, 2H), 1,40-1,28 (м, 2H), 1,20-0,97 (м, 4H), 0,80-0,65 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 508,0 (M++H), Rt. 2,89 мин, 97,42% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,34 мин, 99,94% (Макс). Хиральная SFC: (Способ I) Rt. 2,49 мин, 99,18% (Макс).
Диастереомер 3: Выход: 56% (55 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,36 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,31 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 4,21-4,13 (м, 2H), 3,68 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,65-1,40 (м, 2H), 1,39-1,28 (м, 2H), 1,20-1,03 (м, 4H), 0,79-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 508,1 (M++H), Rt. 2,88 мин, 99,97% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,34 мин, 98,37% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,05 мин, 99,25% (Макс).
Диастереомер 4: Выход: 56% (55 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,36 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,31 (кв, J = 2,4 Гц, 1H), 4,24-4,14 (м, 2H), 3,70 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,62-1,40 (м, 2H), 1,40-1,28 (м, 2H), 1,20-0,95 (м, 4H), 0,79-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 508,0 (M++H), Rt. 2,87 мин, 96,68% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,29 мин, 98,11% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,10 мин, 99,51% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Пример 41
3-((3-Бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
К раствору метил-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 73; 60 мг, 0,11 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 2 мл) и нагревали реакционную смесь 2 часа при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл), и объединенный органический слой промывали водой (4 мл) и рассолом (4 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал растирали с гексаном, получая указанное в заголовке соединение. Выход: 86% (30 мг, коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,87 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,08-7,06 (м, 4H), 5,60 (с, 1H), 4,36-4,27 (м, 1H)., 4,24 (т, J = 3,6 Гц, 2H), 3,75-3,68 (м, 2H), 3,33-3,29 (м, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,58-1,51 (м, 2H), 1,36-1,35 (м, 2H), 1,10-1,08 (м, 4H), 0,78-0,76 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 526,0 (M++H), Rt. 2,88 мин, 94,37% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,31 мин, 92,62% (Макс).
Пример 42
3-((3-Бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота (индивидуальные диастереомеры)
К раствору диастереомера 1, метил-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 74; 30 мг, 0,05 ммоль), в 1,4-диоксане (1 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 2 мл) и нагревали реакционную смесь 2 часа при 60°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 4 мл). Объединенный органический слой промывали водой (4 мл) и рассолом (4 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал растирали с гексаном, фильтровали и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения.
Диастереомеры 2, 3 и 4 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, исходя из 30, 10 и 10 мг диастереомеров 2, 3 и 4 промежуточного соединения 74, соответственно.
Диастереомер 1: Выход: 10% (3 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,45 (с, 1H), 7,30-7,27 (м, 4H), 6,55 (с, 1H), 4,69-4,58 (м, 1H), 4,51-4,40 (м, 2H)., 3,70-3,65 (м, 2H), 3,21-3,17 (м, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,61-1,44 (м, 4H), 1,36-1,31 (м, 2H), 1,30-1,21 (м, 2H), 0,85-0,79 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 526,0 (M++H), Rt. 2,88 мин, 92,83% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,37 мин, 96,85% (Макс), Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 11,85 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 17% (5 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,08-7,06 (м, 4H), 6,62 (с, 1H), 4,28-4,27 (м, 3H), 3,68-3,50 (м, 2H), 3,33-3,28 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,50-1,38 (м, 2H), 1,36-1,31 (м, 2H), 1,23-1,02 (м, 4H), 0,77-0,74 (м, 6Н). LCMS: (Способ E) 526,0 (M++H), Rt. 2,87 мин, 88,49% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,37 мин, 90,21% (Макс), Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 14,73 мин, 93,17% (Макс).
Диастереомер 3: Выход: 56% (4 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,44 (с, 1H), 7,08-6,98 (м, 4H), 6,55 (с, 1H), 4,62-4,60 (м, 1H), 4,46-4,43 (м, 2H)., 3,78-3,68 (м, 2H), 3,18-3,10 (м, 2H), 2,17 (с, 3H), 1,88-1,61 (м, 2H), 1,50-1,42 (м, 2H), 1,22-1,11 (м, 4H), 0,84-0,83 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 526,0 (M++H), Rt. 2,88 мин, 95,50% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,29 мин, 93,24% (Макс). Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 4,02 мин, 76,11% (Макс).
Диастереомер 4: Выход: 40% (5 мг, белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,08-7,06 (м, 4H), 6,62 (с, 1H), 4,34-4,30 (м, 1H), 4,28-4,21 (м, 2H), 3,68-3,50 (м, 2H), 3,33-3,31 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,60-1,51 (м, 2H), 1,38-1,32 (м, 2H), 1,14-1,01 (м, 4H), 0,77-0,72 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 526,2 (M++H), Rt. 5,05 мин, 90,29% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,37 мин, 91,88% (Макс), Хиральная SFC: (Способ G) Rt. 5,31 мин, 94,4% (Макс).
Абсолютная конфигурация четырех диастереомеров неизвестна.
Пример 43
3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 75; 200 мг, 0,49 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (62 мг, 0,54 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (35 мг, 0,49 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 70% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 8% (12 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,21 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,84 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,54 (с, 1H), 4,17 (т, J = 6,4 Гц, 2H), 3,72-3,61 (м, 5H), 3,23 (с, 2H), 2,60 (с, 2H), 1,54-1,30 (м, 4H), 1,24-1,14 (м, 4H), 1,10-1,03 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 476,0 (M++H), Rt. 2,91 мин, 95,24% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,32 мин, 94,80% (Макс).
Пример 44
(S)-3-((3-Бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (Пример 43; 75 мг, 0,55 ммоль) разделяли с помощью прибора для хиральной SFC (Способ I). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 6% (4 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 6,99 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,85 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,54 (с, 1H), 4,28-4,20 (м, 2H), 3,89-3,58 (м, 5H), 3,22 (с, 2H), 2,52-2,51 (м, 2H), 1,55-1,41 (м, 3H), 1,36-1,24 (м, 2H), 1,15-1,14 (м, 3H), 0,79-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 476,0 (M++H), Rt. 2,89 мин, 97,91% (Макс). HPLC: (Способ D) Rt. 5,15 мин, 98,48% (Макс). Хиральная SFC: (Способ I) Rt. 3,85 мин, 96,61% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 4% (3 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,21 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,2 Гц, 2H), 6,84 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,54 (с, 1H), 4,13-4,16 (м, 2H), 3,84-3,61 (м, 5H), 3,23 (с, 2H), 2,61-2,59 (м, 2H), 1,54-1,42 (м, 3H), 1,36-1,31 (м, 2H), 1,14-1,01 (м, 3H), 0,79-0,74 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 476,1 (M++H), Rt. 2,89 мин, 93,86% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,33 мин, 99,15% (Макс). Хиральная SFC: (Способ I) Rt. 4,64 мин, 92,11% (Макс).
Пример 45
3-((3,3-Дибутил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3,3-дибутил-8-гидрокси-7-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 77; 230 мг, 0,53 ммоль) в THF (3 мл) при 0°C, добавляли трет-бутоксид калия (65 мг, 0,58 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (38 мг, 0,53 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл), а затем разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 40% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 2% (5 мг, грязно-белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,34 (с, 1H), 7,23 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,52 (с, 1H), 4,20 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,81-3,60 (м, 5H), 3,24 (с, 2H), 2,72 (т, J = 5,6 Гц, 2H), 1,42-1,30 (м, 4H), 1,14-1,03 (м, 8H), 0,79-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 504,3 (M++H), Rt. 2,92 мин, 96,63% (Макс). HPLC: (Способ D) Rt. 5,66 мин, 96,82% (Макс).
Пример 46
3-((3,3-Дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановая кислота
К перемешиваемому раствору метил-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропаноата (промежуточное соединение 78; 30 мг, 0,053 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (1:1, 2 мл), добавляли гидроксид лития (3 мг, 0,08 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 1 мл) и разбавляли водой (1 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Затем органический слой сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 69% (20 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,90 (с, 1H), 7,34-7,29 (м, 1H), 7,23 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,88 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,37-4,35 (м, 1H), 4,30-4,26 (м, 1H), 4,18-4,16 (м, 1H), 3,78-3,60 (м, 2H), 3,41 (с, 3H), 3,33-3,27 (м, 2H), 2,15 (с, 3H), 1,50-1,43 (м, 2H), 1,35-1,32 (м, 2H), 1,17-1,02 (м, 8H), 0,78-0,75 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 550,1 (M++H), Rt. 3,17 мин, 91,21% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,13 мин, 92,03% (Макс).
Пример 47
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановая кислота и (S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ила)окси)-2-метоксипропановой кислоты (Пример 46; 40 мг, 0,072 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 7,5% (3 мг, серое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,54 (с, 1H), 7,41 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,07-6,98 (м, 3H), 6,63 (с, 1H), 4,53 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,38 (с, 1H), 4,26 (с, 1H), 3,68 (с, 1H), 3,61 (с, 3H), 3,59 (с, 1H), 3,18 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,54-1,40 (м, 4H), 1,35-1,30 (м, 2H), 1,27-1,15 (м, 4H), 1,12-1,11 (м, 2H), 0,83-0,81 (м, 6H). LCMS: (Способ G) 550,3 (M++H), Rt. 2,55 мин, 96,05% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,21 мин, 93,44% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,0 мин, 98,66% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 20% (8 мг, светло-коричневое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,33 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,4 Гц, 2H), 7,01 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,87 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 6,67 (с, 1H), 4,35 (с, 1H), 4,17 (д, J = 6,4 Гц, 1H), 3,94 (с, 1H), 3,67-3,64 (м, 2H), 3,45-3,41 (м, 2H), 3,29-3,25 (м, 3H), 2,19-2,13 (м, 3H), 1,42-1,30 (м, 4H), 1,14-1,04 (м, 8H), 0,79-0,75 (м, 6H) . LCMS: (Способ E) 550,3 (M++H), Rt. 3,21 мин, 93,47% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 6,21 мин, 93,11% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,95 мин, 98,08% (Макс).
Пример 48
3-((3-Бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановая кислота (индивидуальные диастереомеры)
К раствору диастереомера 1, метил-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропаноата (промежуточное соединение 79; 50 мг, 0,09 ммоль), в 1,4-диоксане (3 мл), добавляли разбавленную HCl (6 н., 3 мл) и нагревали реакционную смесь 3 часа при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь разбавляли ледяной водой (2 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш). Полученный материал повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения.
Диастереомеры 2 указанного в заголовке соединения получали по той же процедуре, исходя из 50 мг диастереомеров 2 промежуточного соединения 79.
Диастереомер 1: Выход: 30% (15 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 7,32 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,78 (с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,62-1,54 (м, 1H), 1,42-1,38 (м, 3H), 1,35-1,32 (м, 3H), 1,16-0,93 (м, 4H), 0,81-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 2,84 мин, 99,07% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,45 мин, 99,39% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 2,08 мин, 100% (Макс).
Диастереомер 2: Выход: 30% (13 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,70 (шир. С, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,22 (т, J = 8,0 Гц, 2H), 6,98 (д, J = 7,6 Гц, 2H), 6,86 (т, J = 7,6 Гц, 1H), 6,70 (с, 1H), 5,39 (шир. с, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,78 (шир. с, 2H), 3,27 (с, 2H), 2,16 (с, 3H), 1,62-1,54 (м, 1H), 1,39 (с, 3H), 1,36-1,31 (м, 3H), 1,18-1,03 (м, 4H), 0,81-0,71 (м, 6H). LCMS: (Способ E) 522,2 (M++H), Rt. 2,84 мин, 99,52% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,45 мин, 99,03% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 3,47 мин, 99,81% (Макс).
Абсолютная конфигурация двух диастереомеров неизвестна.
Пример 49
3-((3-Бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-5-(4-фторфенил)-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 83; 150 мг, 0,35 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли K2CO3 (219 мг, 1,5 ммоль), 3-хлорпропионовую кислоту (80 мг, 0,74 ммоль) и йодид калия (23 мг, 0,14 ммоль). Реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 80°C, и за ходом реакции следили с помощью ТСХ. После завершения реакции реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 100% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш). Полученное соединение очищали препаративной HPLC (Способ B) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 51% (90 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,45 (с, 1H), 7,00-6,97 (м, 4H), 6,65 (с, 1H), 4,40 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,75-3,72 (м, 1H), 3,55-3,51 (м, 1H), 3,18-3,09 (м, 2H), 2,94 (с, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,59-1,47 (м, 1H), 1,35-1,28 (м, 5H), 1,12 (с, 3H), 0,86 (т, J = 6,8 Гц, 3H). LCMS: (Способ E) 496,2 (M++H), Rt. 2,74 мин, 98,94% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,48 мин, 99,70% (Макс).
Пример 50
(S)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота и (R)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
Два энантиомера рацемической 3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановой кислоты (пример 49; 78 мг, 0,15 ммоль) разделяли с помощью хиральной SFC (Способ H). Материал концентрировали под вакуумом при 40°C. Первая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 1, а вторая элюируемая фракция соответствует энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация двух энантиомеров неизвестна.
Энантиомер 1: Выход: 25% (20 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,45 (с, 1H), 6,99-6,97 (м, 4H), 6,65 (с, 1H), 4,40 (т, J = 6,4 Гц, 2H), 3,81-3,69 (м, 1H), 3,55-3,51 (м, 1H), 3,18-3,09 (м, 2H), 2,93 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,60-1,45 (м, 1H), 1,36-1,22 (м, 5H), 1,12 (с, 3H), 0,9-0,84 (м, 3H). LCMS: (Способ G) 496,2 (M++H), Rt. 2,30 мин, 99,12% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,45 мин, 97,07% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 4,85 мин, 99,04% (Макс).
Энантиомер 2: Выход: 25% (20 мг, грязно-белое твердое вещество). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,45 (с, 1H), 7,03-6,95 (м, 4H), 6,65 (с, 1H), 4,40 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,81-3,68 (м, 1H), 3,59-3,53 (м, 1H), 3,22-3,05 (м, 2H), 2,93 (т, J = 6,4 Гц, 2H), 2,20 (с, 3H), 1,60-1,45 (м, 1H), 1,33-1,20 (м, 5H), 1,12 (с, 3H), 0,87-0,84 (м, 3H). LCMS: (Способ G) 496,2 (M++H), Rt. 2,30 мин, 96,29% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,44 мин, 93,92% (Макс). Хиральная SFC: (Способ H) Rt. 6,01 мин, 98,11% (Макс).
Пример 51
3-((3-Бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановая кислота
К раствору метил-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропаноата (промежуточное соединение 84; 160 мг, 0,3 ммоль) в 1,4-диоксане (1 мл), добавляли водн. HCl (6 н., 2 мл) и нагревали реакционную смесь в течение 16 часов при 80°C. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл). Объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл) и сушили над безводным Na2SO4. Органическую часть фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на Isolera (элюент: 4% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 32% (50 мг, белое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,46 (с, 1H), 7,00-6,96 (м, 4H), 6,63 (с, 1H), 4,63 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 3,76-3,73 (м, 1H), 3,60-3,41 (м, 1H), 3,16 (с, 2H), 2,19 (с, 3H), 1,61-1,45 (м, 1H), 1,35-1,25 (м, 5H), 1,11 (с, 3H), 0,88-0,82 (м, 3H). LCMS: (Способ E) 512,0 (M++H), Rt. 2,80 мин, 95,41% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,09 мин, 95,85% (Макс).
Пример 52
3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси) пропановая кислота
К перемешиваемому раствору 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-7-(метиламино)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин 1,1-диоксида (промежуточное соединение 87; 100 мг, 0,24 ммоль) в THF (3 мл), добавляли трет-бутоксид калия (22,3 мг, 0,19 ммоль) при 0°C и перемешивали реакционную смесь в течение 15 минут. Затем по каплям добавляли раствор β-пропиолактона (10,6 мг, 0,15 ммоль) в THF (1 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 8 часов при комнатной температуре. После завершения реакции (под контролем ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл) и разбавляли водой (2 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2 × 5 мл), и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией Isolera (элюент: 8-15% MeOH/DCM; силикагель: 230-400 меш), и полученный материал повторно очищали препаративной HPLC (Способ A) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 5% (6 мг, бледно-коричневое твердое вещество).
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6): δ 12,43 (с, 1H), 7,20-7,16 (м, 3H), 6,95 (д, J = 8,0 Гц, 2H), 6,79 (т, J = 7,2 Гц, 1H), 5,98 (с, 1H), 5,86 (кв, J = 5,2 Гц, 1H), 4,18 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 3,75 (шир. с, 2H), 3,13 (с, 2H), 2,77 (т, J = 6,0 Гц, 2H), 2,55 (с, 3H), 1,62-1,49 (м, 2H), 1,48-1,26 (м, 2H), 1,25-0,95 (м, 4H), 0,79-0,73 (м, 6H)). LCMS: (Способ A) 475,0 (M++H), Rt. 2,95 мин, 98,63% (Макс). HPLC: (Способ B) Rt. 5,47 мин, 97,83% (Макс).
БИОЛОГИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ
Протокол анализа IBAT (ч/м)
10000 клеток (клетки со сверхэкспрессией IBAT человека или мыши) высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 200 мкл среды MEM-alpha (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего пуромицин (Gibco A1113803) (10 мкг/мл) и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 48 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации базальной среды МЕМ-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы гарантировать максимальное удаление остаточной среды.
Разведения тестируемого ингибитора (максимальная тестовая концентрация - 10 мкМ, 3-кратное серийное разведение, 10 точек), приготовленные в ДМСО (Sigma D2650), добавляли в инкубационную смесь (поддерживая конечную концентрацию ДМСО 0,2%), содержащую 0,25 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009). Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей ингибиторы теста (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-буферированном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.
100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре перед считыванием показаний планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку установлено 120 секунд).
Протокол анализа LBAT (ч/м)
20000 клеток (клетки со сверхэкспрессией LBAT человека или мыши) засевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды MEM-alpha (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего Генетицин (Gibco 10131-027) (1 мг/мл) и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 24 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации базальной среды МЕМ-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы гарантировать максимальное удаление остаточной среды.
Для человеческого LBAT инкубационная смесь была приготовлена путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО (Sigma D2650), 10 точек) в MEM-alpha (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368). и 7,5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009) (поддерживая конечную концентрацию ДМСО 0,2%). Для LBAT мышей инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО, 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты и 25 мкМ холодной таурохолевой кислоты с сохранением конечной 0,2% концентрации ДМСО).
Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей ингибиторы теста (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-буферированном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.
100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре перед снятием показаний с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку установлено 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).
Двунаправленный анализ проницаемости (клетки Caco-2)
Клетки Caco-2 (Evotec) высевали при плотности 70000 клеток/лунку в 24-луночные планшеты для культивирования клеток Millicell® и выдерживали в инкубаторе (37°C, 5% CO2, 95% RH) в течение 21 дня с заменой среды через день.
Исходные растворы (10 мМ) тестируемых соединений, атенолола (маркер низкой проницаемости), пропранолола (маркер высокой проницаемости) и дигоксина (субстрат для пути транспорта P-gp) были приготовлены в диметилсульфоксиде (ДМСО). Промежуточный основной раствор (1 мМ) получали разбавлением 10 мкл 10 мМ основного раствора 90 мкл чистого ДМСО. Рабочий исходный раствор (10 мкМ) готовили разбавлением 50 мкл 1 мМ 4950 мкл буфера FaSSIF. После добавления соединений к FaSSIF образцы подвергали обработке ультразвуком в течение 2 часов и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 минут при 37°C. 4 мл полученной надосадочной жидкости использовали непосредственно в анализе. Конечная концентрация ДМСО в экспериментах переноса составляла 1%.
В день анализа монослои Caco-2 дважды промывали буфером для переноса (HBSS, pH 7,4) и предварительно инкубировали в течение 30 минут (37°C, 5% CO2, 95% RH) в инкубаторе. Электрическое сопротивление монослоев измеряли с помощью системы Millicell® - ERS. Для анализа были выбраны монослои со значениями трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) более 350 Ом · см2.
Анализ проводили в направлении абсорбции (A2B) и направлении секреции (B2A). Эксперименты по переносу инициировали добавлением буфера для анализа переноса (буфер FaSSIF, приготовленный в HBSS), состоящего из соединений, в донорный компартмент (апикальная камера A-B; базолатеральная камера B-A) в дублированных (n = 2) лунках. Не содержащий лекарственное средство буфер HBSS (pH 7,4), содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), вводили в компартменты получателя (A-B-базолатеральный; B-A-апикальный). Объемы апикального и базолатерального компартментов составляли 0,4 и 0,8 мл, соответственно. После добавления дозируемого раствора планшеты инкубировали в инкубаторе в течение 120 минут при 37°C. Через 120 минут образцы донора и получателя собирали и сопоставляли матрицу (1:1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Матрица дозируемых образцов приводилась в соответствие (1:1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Образцы обрабатывали, добавляя ацетонитрил, содержащий внутренний стандарт (60 мкл исследуемого образца + 200 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт-толбутамид, 500 нг/мл). Образцы встряхивали и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Полученную надосадочную жидкость (100 мкл) разбавляли 100 мкл воды и переносили в свежие 96-луночные планшеты. Концентрацию соединений в образцах анализировали методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией (ЖХ-МС/МС) с использованием биоаналитического метода исследовательского уровня, если применимо.
Средняя кажущаяся проницаемость (Papp, x 10-6 см/сек) тестируемых соединений, атенолола, пропранолола и дигоксина рассчитывалась следующим образом:
где dq/dt = скорость переноса (скорость переноса соединения в компартменте получателя), C0 = начальная концентрация в компартменте донора, A = площадь поверхности эффективной мембраны фильтра.
Протокол анализа на основе HepaRG
Криоконсервированный флакон с дифференцированными клетками HepaRG (Biopredic International HPR116080) размораживали в среде HepaRG Thawing/Plating/General Purpose Medium (Biopredic International ADD670C) с добавлением 200 мМ глутамакса (Gibco 35050061) в соответствии с протоколом, предоставленным Biopredic International. 70 000 клеток на лунку высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды HepaRG для размораживания/посева/общего назначения с добавлением 200 мМ глутамакса и инкубировали при 37°C в 5% CO2 в течение 24 часов. После инкубации посевную среду заменяли средой для поддержания/метаболизма HepaRG (Biopredic International ADD620C) и инкубировали в течение 6 дней со свежей средой для поддержания/метаболизма HepaRG каждые 48 часов. Через 7 дней инкубации после посева инкубационную среду сливали из лунок и клетки промывали два раза 250 мкл базальной среды William's E (Gibco 12551032). Каждый раз после декантации базальной среды William's E планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды.
Инкубационную смесь готовят путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в ДМСО (Sigma D2650)) в среду William's E (базальную), содержащую 0,3 мкМ 3H-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ холодной таурохолевой кислоты (Sigma T4009) (поддерживая конечную концентрацию 0,2% ДМСО). Затем в лунки (в двух экземплярах) добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тестируемые ингибиторы, и планшеты инкубировали в течение 30 минут в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты в смеси со смесью ледяной воды в течение 2-3 минут, а затем смесь для инкубации полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-буферированном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (pH 7,4). После каждой промывки планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.
100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре перед снятием показаний с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT ™ от PerkinElmer по протоколу 3H Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).
Приготовление разведений тестируемого соединения
Все тестируемые соединения были предоставлены в форме порошка при комнатной температуре. Готовили 10 мМ исходных тестируемых соединений в ДМСО, разделяли на аликвоты и хранили при -20°C. Из исходного 10 мМ ДМСО соединений готовили 3-кратное серийное разведение в ДМСО, чтобы получить в общей сложности 10 разведений тестируемых соединений. 0,5 мкл этого разведения в ДМСО добавляли к 250 мкл базальной среды без FBS, содержащей 3H-таурохолевую кислоту и холодную таурохолевую кислоту, для приготовления инкубационной смеси.
Исследования биодоступности
Использовали мышей-самцов (C57BL/6 или CD1) или крыс Wistar в возрасте 8-9 недель. Для каждого тестируемого соединения использовали две группы по 3 животных в каждой. Одной группе вводили однократную внутривенную дозу 1 мг/кг (носитель 100% ДМСО) через хвостовую вену, а другой группе вводили однократную пероральную дозу 10 мг/кг через желудочную иглу. Группа, которой вводили пероральную дозу, не кормили в течение ночи. Образцы крови собирали через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после внутривенного введения и через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после перорального введения. Кровь брали из подкожной вены. В качестве антикоагулянта использовали 0,2% EDTA. Образцы были проанализированы с помощью биоаналитического метода исследовательской категории, разработанного для оценки тестируемого соединения в плазме с использованием системы ЖХ-МС/МС.
Результаты
Биологические данные для соединений примеров показаны в Таблице 8 ниже.
Таблица 8
(x 10-6 см/с)
Модель ФД: оценка тестируемого соединения на уровни общих желчных кислот у самцов мышей C57BL/6.
Мышей C57BL/6N Tac в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на x экспериментальных групп: (i) контрольная, носитель, и (ii) тестируемое соединение y мг/кг перорально один раз в день. Животных обрабатывали тестируемым соединением в течение 7 дней. На 5 день исследования животных по отдельности помещали в свежие клетки. На 7 день из каждой клетки собирали фекалии с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать печень и терминальную часть подвздошной кишки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела и потребление пищи измеряли два раза в неделю. Липидные профили сыворотки анализировали в образцах сыворотки на 7 день. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряется в образцах сыворотки на 7 день. Фекальное выделение желчи измеряется в образце кала на 7 день. Экспрессию CYP7A1 и SHP в печени количественно оценивали в образцах печени на 7 день. Триглицериды печени и общий холестерин анализировали в образцах печени на 7 день.
Модель желчных кислот в моче: оценка тестируемых соединений на уровни желчных кислот в моче у самцов мышей C57BL/6.
Мышей C57BL/6N Tac в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на x экспериментальных групп: (i) контрольная, носитель, и (ii) тестируемое соединение y мг/кг перорально один раз в день. Животных обрабатывали тестируемым соединением в течение 7 дней. На 6 день исследования животных переводили в метаболическую клетку. На 7 день из каждой метаболической клетки собирают фекалии и мочу с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать почки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела измеряется два раза в неделю. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряется в образцах сыворотки на 7 день. Экскрецию желчных кислот с калом измеряли в образце кала на 7 день. Выведение желчных кислот с мочой измеряли в образце на 7 день. Почечную экспрессию ASBT, OSTa, OSTAb и MRP2 количественно определяли в образцах на 7 день.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ALBIREO AB
<120> BENZOTHIAZEPINE COMPOUNDS AND THEIR USE AS BILE ACID
MODULATORS
<130> NP0414WO
<150> IN 201911004690
<151> 2019-02-06
<150> SE 1950463-8
<151> 2019-04-12
<150> IN 201911049986
<151> 2019-12-04
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1251
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Ser Thr Glu Arg Asp Ser Glu Thr Thr Phe Asp Glu Asp Ser Gln
1 5 10 15
Pro Asn Asp Glu Val Val Pro Tyr Ser Asp Asp Glu Thr Glu Asp Glu
20 25 30
Leu Asp Asp Gln Gly Ser Ala Val Glu Pro Glu Gln Asn Arg Val Asn
35 40 45
Arg Glu Ala Glu Glu Asn Arg Glu Pro Phe Arg Lys Glu Cys Thr Trp
50 55 60
Gln Val Lys Ala Asn Asp Arg Lys Tyr His Glu Gln Pro His Phe Met
65 70 75 80
Asn Thr Lys Phe Leu Cys Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Ala Asn Asn Ala
85 90 95
Ile Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Ala Phe Thr Phe Ile Pro Met Asn Leu
100 105 110
Phe Glu Gln Phe Lys Arg Ala Ala Asn Leu Tyr Phe Leu Ala Leu Leu
115 120 125
Ile Leu Gln Ala Val Pro Gln Ile Ser Thr Leu Ala Trp Tyr Thr Thr
130 135 140
Leu Val Pro Leu Leu Val Val Leu Gly Val Thr Ala Ile Lys Asp Leu
145 150 155 160
Val Asp Asp Val Ala Arg His Lys Met Asp Lys Glu Ile Asn Asn Arg
165 170 175
Thr Cys Glu Val Ile Lys Asp Gly Arg Phe Lys Val Ala Lys Trp Lys
180 185 190
Glu Ile Gln Val Gly Asp Val Ile Arg Leu Lys Lys Asn Asp Phe Val
195 200 205
Pro Ala Asp Ile Leu Leu Leu Ser Ser Ser Glu Pro Asn Ser Leu Cys
210 215 220
Tyr Val Glu Thr Ala Glu Leu Asp Gly Glu Thr Asn Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Met Ser Leu Glu Ile Thr Asp Gln Tyr Leu Gln Arg Glu Asp Thr Leu
245 250 255
Ala Thr Phe Asp Gly Phe Ile Glu Cys Glu Glu Pro Asn Asn Arg Leu
260 265 270
Asp Lys Phe Thr Gly Thr Leu Phe Trp Arg Asn Thr Ser Phe Pro Leu
275 280 285
Asp Ala Asp Lys Ile Leu Leu Arg Gly Cys Val Ile Arg Asn Thr Asp
290 295 300
Phe Cys His Gly Leu Val Ile Phe Ala Gly Ala Asp Thr Lys Ile Met
305 310 315 320
Lys Asn Ser Gly Lys Thr Arg Phe Lys Arg Thr Lys Ile Asp Tyr Leu
325 330 335
Met Asn Tyr Met Val Tyr Thr Ile Phe Val Val Leu Ile Leu Leu Ser
340 345 350
Ala Gly Leu Ala Ile Gly His Ala Tyr Trp Glu Ala Gln Val Gly Asn
355 360 365
Ser Ser Trp Tyr Leu Tyr Asp Gly Glu Asp Asp Thr Pro Ser Tyr Arg
370 375 380
Gly Phe Leu Ile Phe Trp Gly Tyr Ile Ile Val Leu Asn Thr Met Val
385 390 395 400
Pro Ile Ser Leu Tyr Val Ser Val Glu Val Ile Arg Leu Gly Gln Ser
405 410 415
His Phe Ile Asn Trp Asp Leu Gln Met Tyr Tyr Ala Glu Lys Asp Thr
420 425 430
Pro Ala Lys Ala Arg Thr Thr Thr Leu Asn Glu Gln Leu Gly Gln Ile
435 440 445
His Tyr Ile Phe Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Ile Met
450 455 460
Thr Phe Lys Lys Cys Cys Ile Asn Gly Gln Ile Tyr Gly Asp His Arg
465 470 475 480
Asp Ala Ser Gln His Asn His Asn Lys Ile Glu Gln Val Asp Phe Ser
485 490 495
Trp Asn Thr Tyr Ala Asp Gly Lys Leu Ala Phe Tyr Asp His Tyr Leu
500 505 510
Ile Glu Gln Ile Gln Ser Gly Lys Glu Pro Glu Val Arg Gln Phe Phe
515 520 525
Phe Leu Leu Ala Val Cys His Thr Val Met Val Asp Arg Thr Asp Gly
530 535 540
Gln Leu Asn Tyr Gln Ala Ala Ser Pro Asp Glu Gly Ala Leu Val Asn
545 550 555 560
Ala Ala Arg Asn Phe Gly Phe Ala Phe Leu Ala Arg Thr Gln Asn Thr
565 570 575
Ile Thr Ile Ser Glu Leu Gly Thr Glu Arg Thr Tyr Asn Val Leu Ala
580 585 590
Ile Leu Asp Phe Asn Ser Asp Arg Lys Arg Met Ser Ile Ile Val Arg
595 600 605
Thr Pro Glu Gly Asn Ile Lys Leu Tyr Cys Lys Gly Ala Asp Thr Val
610 615 620
Ile Tyr Glu Arg Leu His Arg Met Asn Pro Thr Lys Gln Glu Thr Gln
625 630 635 640
Asp Ala Leu Asp Ile Phe Ala Asn Glu Thr Leu Arg Thr Leu Cys Leu
645 650 655
Cys Tyr Lys Glu Ile Glu Glu Lys Glu Phe Thr Glu Trp Asn Lys Lys
660 665 670
Phe Met Ala Ala Ser Val Ala Ser Thr Asn Arg Asp Glu Ala Leu Asp
675 680 685
Lys Val Tyr Glu Glu Ile Glu Lys Asp Leu Ile Leu Leu Gly Ala Thr
690 695 700
Ala Ile Glu Asp Lys Leu Gln Asp Gly Val Pro Glu Thr Ile Ser Lys
705 710 715 720
Leu Ala Lys Ala Asp Ile Lys Ile Trp Val Leu Thr Gly Asp Lys Lys
725 730 735
Glu Thr Ala Glu Asn Ile Gly Phe Ala Cys Glu Leu Leu Thr Glu Asp
740 745 750
Thr Thr Ile Cys Tyr Gly Glu Asp Ile Asn Ser Leu Leu His Ala Arg
755 760 765
Met Glu Asn Gln Arg Asn Arg Gly Gly Val Tyr Ala Lys Phe Ala Pro
770 775 780
Pro Val Gln Glu Ser Phe Phe Pro Pro Gly Gly Asn Arg Ala Leu Ile
785 790 795 800
Ile Thr Gly Ser Trp Leu Asn Glu Ile Leu Leu Glu Lys Lys Thr Lys
805 810 815
Arg Asn Lys Ile Leu Lys Leu Lys Phe Pro Arg Thr Glu Glu Glu Arg
820 825 830
Arg Met Arg Thr Gln Ser Lys Arg Arg Leu Glu Ala Lys Lys Glu Gln
835 840 845
Arg Gln Lys Asn Phe Val Asp Leu Ala Cys Glu Cys Ser Ala Val Ile
850 855 860
Cys Cys Arg Val Thr Pro Lys Gln Lys Ala Met Val Val Asp Leu Val
865 870 875 880
Lys Arg Tyr Lys Lys Ala Ile Thr Leu Ala Ile Gly Asp Gly Ala Asn
885 890 895
Asp Val Asn Met Ile Lys Thr Ala His Ile Gly Val Gly Ile Ser Gly
900 905 910
Gln Glu Gly Met Gln Ala Val Met Ser Ser Asp Tyr Ser Phe Ala Gln
915 920 925
Phe Arg Tyr Leu Gln Arg Leu Leu Leu Val His Gly Arg Trp Ser Tyr
930 935 940
Ile Arg Met Cys Lys Phe Leu Arg Tyr Phe Phe Tyr Lys Asn Phe Ala
945 950 955 960
Phe Thr Leu Val His Phe Trp Tyr Ser Phe Phe Asn Gly Tyr Ser Ala
965 970 975
Gln Thr Ala Tyr Glu Asp Trp Phe Ile Thr Leu Tyr Asn Val Leu Tyr
980 985 990
Thr Ser Leu Pro Val Leu Leu Met Gly Leu Leu Asp Gln Asp Val Ser
995 1000 1005
Asp Lys Leu Ser Leu Arg Phe Pro Gly Leu Tyr Ile Val Gly Gln
1010 1015 1020
Arg Asp Leu Leu Phe Asn Tyr Lys Arg Phe Phe Val Ser Leu Leu
1025 1030 1035
His Gly Val Leu Thr Ser Met Ile Leu Phe Phe Ile Pro Leu Gly
1040 1045 1050
Ala Tyr Leu Gln Thr Val Gly Gln Asp Gly Glu Ala Pro Ser Asp
1055 1060 1065
Tyr Gln Ser Phe Ala Val Thr Ile Ala Ser Ala Leu Val Ile Thr
1070 1075 1080
Val Asn Phe Gln Ile Gly Leu Asp Thr Ser Tyr Trp Thr Phe Val
1085 1090 1095
Asn Ala Phe Ser Ile Phe Gly Ser Ile Ala Leu Tyr Phe Gly Ile
1100 1105 1110
Met Phe Asp Phe His Ser Ala Gly Ile His Val Leu Phe Pro Ser
1115 1120 1125
Ala Phe Gln Phe Thr Gly Thr Ala Ser Asn Ala Leu Arg Gln Pro
1130 1135 1140
Tyr Ile Trp Leu Thr Ile Ile Leu Ala Val Ala Val Cys Leu Leu
1145 1150 1155
Pro Val Val Ala Ile Arg Phe Leu Ser Met Thr Ile Trp Pro Ser
1160 1165 1170
Glu Ser Asp Lys Ile Gln Lys His Arg Lys Arg Leu Lys Ala Glu
1175 1180 1185
Glu Gln Trp Gln Arg Arg Gln Gln Val Phe Arg Arg Gly Val Ser
1190 1195 1200
Thr Arg Arg Ser Ala Tyr Ala Phe Ser His Gln Arg Gly Tyr Ala
1205 1210 1215
Asp Leu Ile Ser Ser Gly Arg Ser Ile Arg Lys Lys Arg Ser Pro
1220 1225 1230
Leu Asp Ala Ile Val Ala Asp Gly Thr Ala Glu Tyr Arg Arg Thr
1235 1240 1245
Gly Asp Ser
1250
<210> 2
<211> 3756
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
atgagtacag aaagagactc agaaacgaca tttgacgagg attctcagcc taatgacgaa 60
gtggttccct acagtgatga tgaaacagaa gatgaacttg atgaccaggg gtctgctgtt 120
gaaccagaac aaaaccgagt caacagggaa gcagaggaga accgggagcc attcagaaaa 180
gaatgtacat ggcaagtcaa agcaaacgat cgcaagtacc acgaacaacc tcactttatg 240
aacacaaaat tcttgtgtat taaggagagt aaatatgcga ataatgcaat taaaacatac 300
aagtacaacg catttacctt tataccaatg aatctgtttg agcagtttaa gagagcagcc 360
aatttatatt tcctggctct tcttatctta caggcagttc ctcaaatctc taccctggct 420
tggtacacca cactagtgcc cctgcttgtg gtgctgggcg tcactgcaat caaagacctg 480
gtggacgatg tggctcgcca taaaatggat aaggaaatca acaataggac gtgtgaagtc 540
attaaggatg gcaggttcaa agttgctaag tggaaagaaa ttcaagttgg agacgtcatt 600
cgtctgaaaa aaaatgattt tgttccagct gacattctcc tgctgtctag ctctgagcct 660
aacagcctct gctatgtgga aacagcagaa ctggatggag aaaccaattt aaaatttaag 720
atgtcacttg aaatcacaga ccagtacctc caaagagaag atacattggc tacatttgat 780
ggttttattg aatgtgaaga acccaataac agactagata agtttacagg aacactattt 840
tggagaaaca caagttttcc tttggatgct gataaaattt tgttacgtgg ctgtgtaatt 900
aggaacaccg atttctgcca cggcttagtc atttttgcag gtgctgacac taaaataatg 960
aagaatagtg ggaaaaccag atttaaaaga actaaaattg attacttgat gaactacatg 1020
gtttacacga tctttgttgt tcttattctg ctttctgctg gtcttgccat cggccatgct 1080
tattgggaag cacaggtggg caattcctct tggtacctct atgatggaga agacgataca 1140
ccctcctacc gtggattcct cattttctgg ggctatatca ttgttctcaa caccatggta 1200
cccatctctc tctatgtcag cgtggaagtg attcgtcttg gacagagtca cttcatcaac 1260
tgggacctgc aaatgtacta tgctgagaag gacacacccg caaaagctag aaccaccaca 1320
ctcaatgaac agctcgggca gatccattat atcttctctg ataagacggg gacactcaca 1380
caaaatatca tgacctttaa aaagtgctgt atcaacgggc agatatatgg ggaccatcgg 1440
gatgcctctc aacacaacca caacaaaata gagcaagttg attttagctg gaatacatat 1500
gctgatggga agcttgcatt ttatgaccac tatcttattg agcaaatcca gtcagggaaa 1560
gagccagaag tacgacagtt cttcttcttg ctcgcagttt gccacacagt catggtggat 1620
aggactgatg gtcagctcaa ctaccaggca gcctctcccg atgaaggtgc cctggtaaac 1680
gctgccagga actttggctt tgccttcctc gccaggaccc agaacaccat caccatcagt 1740
gaactgggca ctgaaaggac ttacaatgtt cttgccattt tggacttcaa cagtgaccgg 1800
aagcgaatgt ctatcattgt aagaacccca gaaggcaata tcaagcttta ctgtaaaggt 1860
gctgacactg ttatttatga acggttacat cgaatgaatc ctactaagca agaaacacag 1920
gatgccctgg atatctttgc aaatgaaact cttagaaccc tatgcctttg ctacaaggaa 1980
attgaagaaa aagaatttac agaatggaat aaaaagttta tggctgccag tgtggcctcc 2040
accaaccggg acgaagctct ggataaagta tatgaggaga ttgaaaaaga cttaattctc 2100
ctgggagcta cagctattga agacaagcta caggatggag ttccagaaac catttcaaaa 2160
cttgcaaaag ctgacattaa gatctgggtg cttactggag acaaaaagga aactgctgaa 2220
aatataggat ttgcttgtga acttctgact gaagacacca ccatctgcta tggggaggat 2280
attaattctc ttcttcatgc aaggatggaa aaccagagga atagaggtgg cgtctacgca 2340
aagtttgcac ctcctgtgca ggaatctttt tttccacccg gtggaaaccg tgccttaatc 2400
atcactggtt cttggttgaa tgaaattctt ctcgagaaaa agaccaagag aaataagatt 2460
ctgaagctga agttcccaag aacagaagaa gaaagacgga tgcggaccca aagtaaaagg 2520
aggctagaag ctaagaaaga gcagcggcag aaaaactttg tggacctggc ctgcgagtgc 2580
agcgcagtca tctgctgccg cgtcaccccc aagcagaagg ccatggtggt ggacctggtg 2640
aagaggtaca agaaagccat cacgctggcc atcggagatg gggccaatga cgtgaacatg 2700
atcaaaactg cccacattgg cgttggaata agtggacaag aaggaatgca agctgtcatg 2760
tcgagtgact attcctttgc tcagttccga tatctgcaga ggctactgct ggtgcatggc 2820
cgatggtctt acataaggat gtgcaagttc ctacgatact tcttttacaa aaactttgcc 2880
tttactttgg ttcatttctg gtactccttc ttcaatggct actctgcgca gactgcatac 2940
gaggattggt tcatcaccct ctacaacgtg ctgtacacca gcctgcccgt gctcctcatg 3000
gggctgctcg accaggatgt gagtgacaaa ctgagcctcc gattccctgg gttatacata 3060
gtgggacaaa gagacttact attcaactat aagagattct ttgtaagctt gttgcatggg 3120
gtcctaacat cgatgatcct cttcttcata cctcttggag cttatctgca aaccgtaggg 3180
caggatggag aggcaccttc cgactaccag tcttttgccg tcaccattgc ctctgctctt 3240
gtaataacag tcaatttcca gattggcttg gatacttctt attggacttt tgtgaatgct 3300
ttttcaattt ttggaagcat tgcactttat tttggcatca tgtttgactt tcatagtgct 3360
ggaatacatg ttctctttcc atctgcattt caatttacag gcacagcttc aaacgctctg 3420
agacagccat acatttggtt aactatcatc ctggctgttg ctgtgtgctt actacccgtc 3480
gttgccattc gattcctgtc aatgaccatc tggccatcag aaagtgataa gatccagaag 3540
catcgcaagc ggttgaaggc ggaggagcag tggcagcgac ggcagcaggt gttccgccgg 3600
ggcgtgtcaa cgcggcgctc ggcctacgcc ttctcgcacc agcggggcta cgcggacctc 3660
atctcctccg ggcgcagcat ccgcaagaag cgctcgccgc ttgatgccat cgtggcggat 3720
ggcaccgcgg agtacaggcg caccggggac agctga 3756
<210> 3
<211> 1321
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Ser Asp Ser Val Ile Leu Arg Ser Ile Lys Lys Phe Gly Glu Glu
1 5 10 15
Asn Asp Gly Phe Glu Ser Asp Lys Ser Tyr Asn Asn Asp Lys Lys Ser
20 25 30
Arg Leu Gln Asp Glu Lys Lys Gly Asp Gly Val Arg Val Gly Phe Phe
35 40 45
Gln Leu Phe Arg Phe Ser Ser Ser Thr Asp Ile Trp Leu Met Phe Val
50 55 60
Gly Ser Leu Cys Ala Phe Leu His Gly Ile Ala Gln Pro Gly Val Leu
65 70 75 80
Leu Ile Phe Gly Thr Met Thr Asp Val Phe Ile Asp Tyr Asp Val Glu
85 90 95
Leu Gln Glu Leu Gln Ile Pro Gly Lys Ala Cys Val Asn Asn Thr Ile
100 105 110
Val Trp Thr Asn Ser Ser Leu Asn Gln Asn Met Thr Asn Gly Thr Arg
115 120 125
Cys Gly Leu Leu Asn Ile Glu Ser Glu Met Ile Lys Phe Ala Ser Tyr
130 135 140
Tyr Ala Gly Ile Ala Val Ala Val Leu Ile Thr Gly Tyr Ile Gln Ile
145 150 155 160
Cys Phe Trp Val Ile Ala Ala Ala Arg Gln Ile Gln Lys Met Arg Lys
165 170 175
Phe Tyr Phe Arg Arg Ile Met Arg Met Glu Ile Gly Trp Phe Asp Cys
180 185 190
Asn Ser Val Gly Glu Leu Asn Thr Arg Phe Ser Asp Asp Ile Asn Lys
195 200 205
Ile Asn Asp Ala Ile Ala Asp Gln Met Ala Leu Phe Ile Gln Arg Met
210 215 220
Thr Ser Thr Ile Cys Gly Phe Leu Leu Gly Phe Phe Arg Gly Trp Lys
225 230 235 240
Leu Thr Leu Val Ile Ile Ser Val Ser Pro Leu Ile Gly Ile Gly Ala
245 250 255
Ala Thr Ile Gly Leu Ser Val Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Glu Leu Lys
260 265 270
Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Val Val Ala Asp Glu Val Ile Ser Ser Met
275 280 285
Arg Thr Val Ala Ala Phe Gly Gly Glu Lys Arg Glu Val Glu Arg Tyr
290 295 300
Glu Lys Asn Leu Val Phe Ala Gln Arg Trp Gly Ile Arg Lys Gly Ile
305 310 315 320
Val Met Gly Phe Phe Thr Gly Phe Val Trp Cys Leu Ile Phe Leu Cys
325 330 335
Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Ser Thr Leu Val Leu Asp Glu Gly
340 345 350
Glu Tyr Thr Pro Gly Thr Leu Val Gln Ile Phe Leu Ser Val Ile Val
355 360 365
Gly Ala Leu Asn Leu Gly Asn Ala Ser Pro Cys Leu Glu Ala Phe Ala
370 375 380
Thr Gly Arg Ala Ala Ala Thr Ser Ile Phe Glu Thr Ile Asp Arg Lys
385 390 395 400
Pro Ile Ile Asp Cys Met Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Leu Asp Arg Ile
405 410 415
Lys Gly Glu Ile Glu Phe His Asn Val Thr Phe His Tyr Pro Ser Arg
420 425 430
Pro Glu Val Lys Ile Leu Asn Asp Leu Asn Met Val Ile Lys Pro Gly
435 440 445
Glu Met Thr Ala Leu Val Gly Pro Ser Gly Ala Gly Lys Ser Thr Ala
450 455 460
Leu Gln Leu Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Pro Cys Glu Gly Met Val Thr
465 470 475 480
Val Asp Gly His Asp Ile Arg Ser Leu Asn Ile Gln Trp Leu Arg Asp
485 490 495
Gln Ile Gly Ile Val Glu Gln Glu Pro Val Leu Phe Ser Thr Thr Ile
500 505 510
Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu Asp Ala Thr Met Glu Asp Ile
515 520 525
Val Gln Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ala Tyr Asn Phe Ile Met Asp Leu
530 535 540
Pro Gln Gln Phe Asp Thr Leu Val Gly Glu Gly Gly Gly Gln Met Ser
545 550 555 560
Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Leu Ile Arg Asn
565 570 575
Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Met Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Glu
580 585 590
Ser Glu Ala Met Val Gln Glu Val Leu Ser Lys Ile Gln His Gly His
595 600 605
Thr Ile Ile Ser Val Ala His Arg Leu Ser Thr Val Arg Ala Ala Asp
610 615 620
Thr Ile Ile Gly Phe Glu His Gly Thr Ala Val Glu Arg Gly Thr His
625 630 635 640
Glu Glu Leu Leu Glu Arg Lys Gly Val Tyr Phe Thr Leu Val Thr Leu
645 650 655
Gln Ser Gln Gly Asn Gln Ala Leu Asn Glu Glu Asp Ile Lys Asp Ala
660 665 670
Thr Glu Asp Asp Met Leu Ala Arg Thr Phe Ser Arg Gly Ser Tyr Gln
675 680 685
Asp Ser Leu Arg Ala Ser Ile Arg Gln Arg Ser Lys Ser Gln Leu Ser
690 695 700
Tyr Leu Val His Glu Pro Pro Leu Ala Val Val Asp His Lys Ser Thr
705 710 715 720
Tyr Glu Glu Asp Arg Lys Asp Lys Asp Ile Pro Val Gln Glu Glu Val
725 730 735
Glu Pro Ala Pro Val Arg Arg Ile Leu Lys Phe Ser Ala Pro Glu Trp
740 745 750
Pro Tyr Met Leu Val Gly Ser Val Gly Ala Ala Val Asn Gly Thr Val
755 760 765
Thr Pro Leu Tyr Ala Phe Leu Phe Ser Gln Ile Leu Gly Thr Phe Ser
770 775 780
Ile Pro Asp Lys Glu Glu Gln Arg Ser Gln Ile Asn Gly Val Cys Leu
785 790 795 800
Leu Phe Val Ala Met Gly Cys Val Ser Leu Phe Thr Gln Phe Leu Gln
805 810 815
Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Ser Gly Glu Leu Leu Thr Lys Arg Leu Arg
820 825 830
Lys Phe Gly Phe Arg Ala Met Leu Gly Gln Asp Ile Ala Trp Phe Asp
835 840 845
Asp Leu Arg Asn Ser Pro Gly Ala Leu Thr Thr Arg Leu Ala Thr Asp
850 855 860
Ala Ser Gln Val Gln Gly Ala Ala Gly Ser Gln Ile Gly Met Ile Val
865 870 875 880
Asn Ser Phe Thr Asn Val Thr Val Ala Met Ile Ile Ala Phe Ser Phe
885 890 895
Ser Trp Lys Leu Ser Leu Val Ile Leu Cys Phe Phe Pro Phe Leu Ala
900 905 910
Leu Ser Gly Ala Thr Gln Thr Arg Met Leu Thr Gly Phe Ala Ser Arg
915 920 925
Asp Lys Gln Ala Leu Glu Met Val Gly Gln Ile Thr Asn Glu Ala Leu
930 935 940
Ser Asn Ile Arg Thr Val Ala Gly Ile Gly Lys Glu Arg Arg Phe Ile
945 950 955 960
Glu Ala Leu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Pro Phe Lys Thr Ala Ile Gln
965 970 975
Lys Ala Asn Ile Tyr Gly Phe Cys Phe Ala Phe Ala Gln Cys Ile Met
980 985 990
Phe Ile Ala Asn Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Gly Gly Tyr Leu Ile Ser
995 1000 1005
Asn Glu Gly Leu His Phe Ser Tyr Val Phe Arg Val Ile Ser Ala
1010 1015 1020
Val Val Leu Ser Ala Thr Ala Leu Gly Arg Ala Phe Ser Tyr Thr
1025 1030 1035
Pro Ser Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Ser Ala Ala Arg Phe Phe Gln
1040 1045 1050
Leu Leu Asp Arg Gln Pro Pro Ile Ser Val Tyr Asn Thr Ala Gly
1055 1060 1065
Glu Lys Trp Asp Asn Phe Gln Gly Lys Ile Asp Phe Val Asp Cys
1070 1075 1080
Lys Phe Thr Tyr Pro Ser Arg Pro Asp Ser Gln Val Leu Asn Gly
1085 1090 1095
Leu Ser Val Ser Ile Ser Pro Gly Gln Thr Leu Ala Phe Val Gly
1100 1105 1110
Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Ser Ile Gln Leu Leu Glu Arg
1115 1120 1125
Phe Tyr Asp Pro Asp Gln Gly Lys Val Met Ile Asp Gly His Asp
1130 1135 1140
Ser Lys Lys Val Asn Val Gln Phe Leu Arg Ser Asn Ile Gly Ile
1145 1150 1155
Val Ser Gln Glu Pro Val Leu Phe Ala Cys Ser Ile Met Asp Asn
1160 1165 1170
Ile Lys Tyr Gly Asp Asn Thr Lys Glu Ile Pro Met Glu Arg Val
1175 1180 1185
Ile Ala Ala Ala Lys Gln Ala Gln Leu His Asp Phe Val Met Ser
1190 1195 1200
Leu Pro Glu Lys Tyr Glu Thr Asn Val Gly Ser Gln Gly Ser Gln
1205 1210 1215
Leu Ser Arg Gly Glu Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile
1220 1225 1230
Val Arg Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala
1235 1240 1245
Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Thr Val Gln Val Ala Leu Asp Lys
1250 1255 1260
Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile Ala His Arg Leu Ser
1265 1270 1275
Thr Ile Gln Asn Ala Asp Ile Ile Ala Val Met Ala Gln Gly Val
1280 1285 1290
Val Ile Glu Lys Gly Thr His Glu Glu Leu Met Ala Gln Lys Gly
1295 1300 1305
Ala Tyr Tyr Lys Leu Val Thr Thr Gly Ser Pro Ile Ser
1310 1315 1320
<210> 4
<211> 3966
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
atgtctgact cagtaattct tcgaagtata aagaaatttg gagaggagaa tgatggtttt 60
gagtcagata aatcatataa taatgataag aaatcaaggt tacaagatga gaagaaaggt 120
gatggcgtta gagttggctt ctttcaattg tttcggtttt cttcatcaac tgacatttgg 180
ctgatgtttg tgggaagttt gtgtgcattt ctccatggaa tagcccagcc aggcgtgcta 240
ctcatttttg gcacaatgac agatgttttt attgactacg acgttgagtt acaagaactc 300
cagattccag gaaaagcatg tgtgaataac accattgtat ggactaacag ttccctcaac 360
cagaacatga caaatggaac acgttgtggg ttgctgaaca tcgagagcga aatgatcaaa 420
tttgccagtt actatgctgg aattgctgtc gcagtactta tcacaggata tattcaaata 480
tgcttttggg tcattgccgc agctcgtcag atacagaaaa tgagaaaatt ttactttagg 540
agaataatga gaatggaaat agggtggttt gactgcaatt cagtggggga gctgaataca 600
agattctctg atgatattaa taaaatcaat gatgccatag ctgaccaaat ggcccttttc 660
attcagcgca tgacctcgac catctgtggt ttcctgttgg gatttttcag gggttggaaa 720
ctgaccttgg ttattatttc tgtcagccct ctcattggga ttggagcagc caccattggt 780
ctgagtgtgt ccaagtttac ggactatgag ctgaaggcct atgccaaagc aggggtggtg 840
gctgatgaag tcatttcatc aatgagaaca gtggctgctt ttggtggtga gaaaagagag 900
gttgaaaggt atgagaaaaa tcttgtgttc gcccagcgtt ggggaattag aaaaggaata 960
gtgatgggat tctttactgg attcgtgtgg tgtctcatct ttttgtgtta tgcactggcc 1020
ttctggtacg gctccacact tgtcctggat gaaggagaat atacaccagg aacccttgtc 1080
cagattttcc tcagtgtcat agtaggagct ttaaatcttg gcaatgcctc tccttgtttg 1140
gaagcctttg caactggacg tgcagcagcc accagcattt ttgagacaat agacaggaaa 1200
cccatcattg actgcatgtc agaagatggt tacaagttgg atcgaatcaa gggtgaaatt 1260
gaattccata atgtgacctt ccattatcct tccagaccag aggtgaagat tctaaatgac 1320
ctcaacatgg tcattaaacc aggggaaatg acagctctgg taggacccag tggagctgga 1380
aaaagtacag cactgcaact cattcagcga ttctatgacc cctgtgaagg aatggtgacc 1440
gtggatggcc atgacattcg ctctcttaac attcagtggc ttagagatca gattgggata 1500
gtggagcaag agccagttct gttctctacc accattgcag aaaatattcg ctatggcaga 1560
gaagatgcaa caatggaaga catagtccaa gctgccaagg aggccaatgc ctacaacttc 1620
atcatggacc tgccacagca atttgacacc cttgttggag aaggaggagg ccagatgagt 1680
ggtggccaga aacaaagggt agctatcgcc agagccctca tccgaaatcc caagattctg 1740
cttttggaca tggccacctc agctctggac aatgagagtg aagccatggt gcaagaagtg 1800
ctgagtaaga ttcagcatgg gcacacaatc atttcagttg ctcatcgctt gtctacggtc 1860
agagctgcag ataccatcat tggttttgaa catggcactg cagtggaaag agggacccat 1920
gaagaattac tggaaaggaa aggtgtttac ttcactctag tgactttgca aagccaggga 1980
aatcaagctc ttaatgaaga ggacataaag gatgcaactg aagatgacat gcttgcgagg 2040
acctttagca gagggagcta ccaggatagt ttaagggctt ccatccggca acgctccaag 2100
tctcagcttt cttacctggt gcacgaacct ccattagctg ttgtagatca taagtctacc 2160
tatgaagaag atagaaagga caaggacatt cctgtgcagg aagaagttga acctgcccca 2220
gttaggagga ttctgaaatt cagtgctcca gaatggccct acatgctggt agggtctgtg 2280
ggtgcagctg tgaacgggac agtcacaccc ttgtatgcct ttttattcag ccagattctt 2340
gggacttttt caattcctga taaagaggaa caaaggtcac agatcaatgg tgtgtgccta 2400
ctttttgtag caatgggctg tgtatctctt ttcacccaat ttctacaggg atatgccttt 2460
gctaaatctg gggagctcct aacaaaaagg ctacgtaaat ttggtttcag ggcaatgctg 2520
gggcaagata ttgcctggtt tgatgacctc agaaatagcc ctggagcatt gacaacaaga 2580
cttgctacag atgcttccca agttcaaggg gctgccggct ctcagatcgg gatgatagtc 2640
aattccttca ctaacgtcac tgtggccatg atcattgcct tctcctttag ctggaagctg 2700
agcctggtca tcttgtgctt cttccccttc ttggctttat caggagccac acagaccagg 2760
atgttgacag gatttgcctc tcgagataag caggccctgg agatggtggg acagattaca 2820
aatgaagccc tcagtaacat ccgcactgtt gctggaattg gaaaggagag gcggttcatt 2880
gaagcacttg agactgagct ggagaagccc ttcaagacag ccattcagaa agccaatatt 2940
tacggattct gctttgcctt tgcccagtgc atcatgttta ttgcgaattc tgcttcctac 3000
agatatggag gttacttaat ctccaatgag gggctccatt tcagctatgt gttcagggtg 3060
atctctgcag ttgtactgag tgcaacagct cttggaagag ccttctctta caccccaagt 3120
tatgcaaaag ctaaaatatc agctgcacgc ttttttcaac tgctggaccg acaaccccca 3180
atcagtgtat acaatactgc aggtgaaaaa tgggacaact tccaggggaa gattgatttt 3240
gttgattgta aatttacata tccttctcga cctgactcgc aagttctgaa tggtctctca 3300
gtgtcgatta gtccagggca gacactggcg tttgttggga gcagtggatg tggcaaaagc 3360
actagcattc agctgttgga acgtttctat gatcctgatc aagggaaggt gatgatagat 3420
ggtcatgaca gcaaaaaagt aaatgtccag ttcctccgct caaacattgg aattgtttcc 3480
caggaaccag tgttgtttgc ctgtagcata atggacaata tcaagtatgg agacaacacc 3540
aaagaaattc ccatggaaag agtcatagca gctgcaaaac aggctcagct gcatgatttt 3600
gtcatgtcac tcccagagaa atatgaaact aacgttgggt cccaggggtc tcaactctct 3660
agaggggaga aacaacgcat tgctattgct cgggccattg tacgagatcc taaaatcttg 3720
ctactagatg aagccacttc tgccttagac acagaaagtg aaaagacggt gcaggttgct 3780
ctagacaaag ccagagaggg tcggacctgc attgtcattg cccatcgctt gtccaccatc 3840
cagaacgcgg atatcattgc tgtcatggca cagggggtgg tgattgaaaa ggggacccat 3900
gaagaactga tggcccaaaa aggagcctac tacaaactag tcaccactgg atcccccatc 3960
agttga 3966
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| БЕНЗОТИА(ДИ)АЗЕПИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ | 2019 |
|
RU2785867C2 |
| СОЕДИНЕНИЯ БЕНЗОТИАДИАЗЕПИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ | 2020 |
|
RU2814570C2 |
| БИЦИКЛИЧЕСКИЕ ТЕТРАГИДРОТИАЗЕПИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, ПОЛЕЗНЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ И/ИЛИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ | 2016 |
|
RU2730524C2 |
| 1,5-БЕНЗОТИАЗЕПИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ АНТИГИПЕРЛИПИДЕМИЧЕСКИХ СРЕДСТВ | 2001 |
|
RU2302414C2 |
| ОРТОЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ И ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2003 |
|
RU2288912C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ КАК МОДУЛЯТОРЫ PPARα И PPARλ | 2003 |
|
RU2339613C2 |
| 1,4-БЕНЗОТИАЗЕПИН-1,1-ДИОКСИД, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ПОНИЖАЮЩАЯ УРОВЕНЬ ЛИПИДОВ В КРОВИ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЯ | 1995 |
|
RU2156245C2 |
| ИНГИБИТОРЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МЕНИН-MLL | 2017 |
|
RU2799820C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ 5-ОКСА-2-АЗАСПИРО[3.4]ОКТАНА В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ M4 | 2020 |
|
RU2820477C1 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ЗАМЕЩЕННОЙ ФЕНИЛПРОПИОНОВОЙ КИСЛОТЫ КАК АГОНИСТЫ АКТИВИРУЕМОГО ПРОЛИФЕРАТОРОМ ПЕРОКСИСОМ АЛЬФА- РЕЦЕПТОРА ЧЕЛОВЕКА (PRARα) СПОСОБ И ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ДИСЛИПИДЕМИИ ДИАБЕТА 2 ТИПА | 2002 |
|
RU2303031C2 |
Изобретение относится к производным 1,5-бензотиазепина формулы (I). В формуле (I): каждый из R1 и R2 независимо представляет собой С1-4 алкил; R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C1-4 алкила, С1-4 галогеналкила, С1-4 алкокси, С1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C1-4 алкил)амино, N,N-ди(C1-4 алкил)амино и N-(арил-С1-4 алкил)амино; n представляет собой целое число 1, 2 или 3; R4 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, С3-6 циклоалкила, C1-4 алкокси, С3-6 циклоалкилокси, C1-4 алкилтио, С3-6 циклоалкилтио, амино, N-(С1-4 алкил)амино и N,N-ди(С1-4 алкил)амино; и каждый из R5A, R5B, R5C и R5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, С1-4 алкила и С1-4 алкокси; или его фармацевтически приемлемая соль, при условии, что соединение не является рацемической 3-((7-бромо-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислотой. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей указанные соединения, и к применению указанных соединений в качестве лекарственного средства. Предложенные соединения представляют собой модуляторы желчных кислот, обладающие активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT), и могут применяться при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 8 табл., 52 пр.
1. Соединение формулы (I)
где
каждый из R1 и R2 независимо представляет собой С1-4 алкил;
R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C1-4 алкила, С1-4 галогеналкила, С1-4 алкокси, С1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C1-4 алкил)амино, N,N-ди(C1-4 алкил)амино и N-(арил-С1-4 алкил)амино;
n представляет собой целое число 1, 2 или 3;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, С3-6 циклоалкила, C1-4 алкокси, С3-6 циклоалкилокси, C1-4 алкилтио, С3-6 циклоалкилтио, амино, N-(С1-4 алкил)амино и N,N-ди(С1-4 алкил)амино; и
каждый из R5A, R5B, R5C и R5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, С1-4 алкила и С1-4 алкокси;
или его фармацевтически приемлемая соль;
при условии, что соединение не является рацемической 3-((7-бромо-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислотой.
2. Соединение по п. 1, где R1 представляет собой н-бутил.
3. Соединение по п. 1 или 2, где R2 представляет собой н-бутил.
4. Соединение по п. 1 или 2, где R2 представляет собой этил.
5. Соединение по любому из пп. 1-4, где R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, циано, С1-4 галогеналкила, С1-4 алкокси и С1-4 галогеналкокси.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, где R4 выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, С1-4 алкила, С1-4 алкокси, С1-4 алкилтио, амино, N-(C1-4 алкил)амино и N,N-ди(C1-4 алкил)амино.
7. Соединение по любому из пп. 1-6, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена и гидрокси, амино, метила и метокси.
8. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из:
(S)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((7-бром-3-бутил-3-этил-l,l-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((7-бром-3,3-дибутил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-l,l-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-хлор-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2 -гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-5-(3,4-дифторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
O-(3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)серина;
3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-7-(диметиламино)-3-метил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)бутановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)бутановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)бутановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)бутановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-7-хлор-3-этил-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)бутановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5- бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5- бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5- бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5- бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фтор-2-метилпропановой кислоты;
O-((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серин;
O-((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)-D-серин;
3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-5-(4-фторфенил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-метокси-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
(R)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
(S)-3-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-метоксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидрокси-2-метилпропановой кислоты;
3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(R)-3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5- бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
3-((3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((R)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((R)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(S)-3-(((S)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
(R)-3-(((S)-3-бутил-5-(4-фторфенил)-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-гидроксипропановой кислоты;
3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
(S)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты; и
(R)-3-((3-бутил-3-этил-7-(метиламино)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)пропановой кислоты;
или его фармацевтически приемлемая соль.
9. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT), где указанная композиция содержит в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-8 в сочетании с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым наполнителем, носителем или разбавителем.
10. Применение соединения формулы (I)
где
каждый из R1 и R2 независимо представляет собой C1-4 алкил;
R3 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C1-4 алкила, C1-4 галогеналкила, C1-4 алкокси, C1-4 галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C1-4 алкил)амино, N,N-ди(С1-4 алкил)амино и N-(арил-С1-4 алкил)амино;
n - целое число 1, 2 или 3;
R4 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C1-4 алкила, С3-6 циклоалкила, C1-4 алкокси, С3-6 циклоалкилокси, C1-4 алкилтио, С3-6 циклоалкилтио, амино, N-(С1-4 алкил)амино и N,N-ди(С1-4 алкил)амино; и
каждый из R5A, R5B, R5C и R5D независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, амино, C1-4 алкила и C1-4 алкокси;
или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства, обладающего активностью ингибирования апикального натрийзависимого транспортера желчных кислот (ASBT) и/или транспорта желчных кислот в печени (LBAT).
11. Применение по п. 10, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики сердечно-сосудистого заболевания или нарушения метаболизма жирных кислот или нарушения утилизации глюкозы, такого как гиперхолестеринемия; нарушения обмена жирных кислот; сахарного диабета 1 и 2 типа; осложнения диабета, в том числе катаракты, микро- и макрососудистых заболеваний, ретинопатии, нейропатии, нефропатии и замедленного заживление ран, ишемии тканей, диабетической стопы, артериосклероза, инфаркта миокарда, острого коронарного синдрома, нестабильной стенокардии, стабильной стенокардии, инсульта, окклюзионного заболевания периферических артерий, кардиомиопатии, сердечной недостаточности, нарушения сердечного ритма и рестеноза сосудов; заболеваний, связанных с диабетом, таких как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемия, гиперинсулинемия, повышенный уровень жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемия, гиперлипидемия, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензия; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.
12. Применение по п. 10, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики желудочно-кишечного заболевания или расстройства, такого как запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); Болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксная болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.
13. Применение по п. 10, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики заболевания или нарушения печени, такого как наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезия желчевыводящих путей; билиарная атрезия после проведения операции по Касаи; посттрансплантационная атрезия желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза ЖК; синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); Синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ЖК); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (РВС); фиброз печени; неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальная гипертензия; холестаз; холестаз синдрома Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LCS1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; Болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатия при СПИДе; ишемическая холангиопатия; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (дефект BAS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (ЕРР); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле желчных кислот сыворотки, кардиомиопатия, связанная с циррозом печени («холекардия»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; вирусный гепатит (включая гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е); гепатоцеллюлярная карцинома (гепатома); холангиокарцинома; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы; или для применения в усилении терапии кортикостероидами при заболевании печени.
14. Применение по п. 10, где лекарственное средство предназначено для лечения или профилактики синдромов гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоз и остеопетроз; гипертонии; клубочковой гиперфильтрации; и кожного зуда при почечной недостаточности; или для применения для защиты от поражения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.
| WO 1996016051 A1, 30.05.1996 | |||
| WO 2002050051 A1, 27.06.2002 | |||
| WO 2001066533 A1, 13.09.2001 | |||
| WO 2003020710 A1, 13.03.2003 | |||
| ИНГИБИТОРЫ IBAT ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ | 2011 |
|
RU2591188C2 |
| EA 200000623 А1, 23.04.2001. | |||
