Соединения бензотиа(ди)азепина и их применение в качестве модуляторов желчных кислот Российский патент 2025 года по МПК C07D281/10 C07D285/36 A61K31/554 A61P1/16 A61P3/06 A61P3/08 A61P5/00 A61P9/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

В данной заявке испрашивается приоритет согласно заявке на патент Индии No. 201911049983, поданной 4 декабря 2019 года, описание которой включено в данное описание ссылкой во всей ее полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к производным 1,5-бензотиазепина и 1,2,5-бензотиадиазепина формулы (I). Эти соединения представляют собой модуляторы желчных кислот, обладающие активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к применению этих соединений в лечении сердечнососудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Желчные кислоты представляют собой физиологические детергенты, которые играют важную роль в кишечной абсорбции и транспорте липидов, питательных веществ и витаминов. Они также являются сигнальными молекулами, которые активируют ядерные рецепторы и сигнальные пути клеток, которые регулируют липидный, глюкозный и энергетический метаболизм. Желчные кислоты являются стероидными кислотами, которые синтезируются из холестерина в печени и хранятся в желчном пузыре в виде смешанных мицелл. Во время пищеварения двенадцатиперстная кишка инициирует выброс гормонов, которые вызывают сокращение желчного пузыря, тем самым высвобождая желчные кислоты в тонком кишечнике, где они обеспечивают всасывание жирорастворимых витаминов и холестерина. Когда желчные кислоты достигают подвздошной кишки, они реадсорбируются из кишечника и секретируются в кровь портальной вены для возвращения в печень через портальное венозное кровообращение. Таким образом, более 90% желчных кислот перерабатываются и возвращаются в печень. Эти желчные кислоты затем транспортируются через синусоидальную мембрану гепатоцитов и повторно секретируются через канальцевую мембрану в желчь. При первом прохождении 75-90% желчных кислот поглощаются гепатоцитами, завершая один цикл энтерогепатической циркуляции. Фракция желчных кислот, которая не выводится печенью, попадает в системный кровоток, где свободные желчные кислоты фильтруются почечными клубочками, эффективно регенерируются в проксимальных канальцах и выводятся обратно в большой круг кровообращения. Интересно, что наибольшая часть желчных кислот, секретируемых через канальцевую мембрану в желчь, поступает из рециркулирующего пула, и менее 10% приходится на новый синтез в печени de novo. Небольшая часть желчных кислот, которая не реабсорбируется в подвздошной кишке, достигает толстой кишки. Внутри просвета кишечника первичные желчные кислоты превращаются во вторичные желчные кислоты под действием кишечных бактерий, главным образом, в результате реакций одинарного или двойного дегидроксилирования стероидного ядра. Желчные кислоты, которые не всасываются в кишечнике, затем выводятся с калом.

В целом, эффективная транспортная система помогает поддерживать постоянный пул желчных кислот, обеспечивая достаточно высокие уровни конъюгированных желчных кислот в тонком кишечнике, чтобы способствовать всасыванию липидов, а также снизить бактериальную нагрузку на тонкий кишечник. Эта система также минимизирует потерю желчных кислот с калом и мочой и защищает кишечные и гепатобилиарные компартменты, устраняя потенциально цитотоксические детергенты (согласно обзорам Kosters and Karpen (Xenobiotica 2008, vol. 38, p.1043-1071); Chiang (J. Lipid Res. 2009, vol. 50, p.1955-1966); и Dawson (Handb. Exp.Pharmacol. 2011, vol. 201, p.169-203)).

Было обнаружено, что регулирование размера пула желчных кислот играет ключевую роль в гомеостазе холестерина за счет преобразования холестерина в желчную кислоту в печени, что является основным путем выведения холестерина из организма. Печень играет важную роль в удалении из организма эндогенных и ксенобиотических соединений. Нормальная гепатобилиарная секреция и энтерогепатическая циркуляция необходимы для выведения из организма эндогенных соединений, таких как холестерин, билирубин и их метаболиты, тем самым поддерживая гомеостаз липидов и желчных кислот (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p.1043-1071).

Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке может подавляться соединениями-ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT). Сообщалось, что ингибирование реабсорбции желчных кислот полезно в лечении нескольких заболеваний, включая дислипидемию, диабет, ожирение, запоры, холестатические заболевания печени, неалкогольный стеатогепатит и другие заболевания печени. Ряд соединений-ингибиторов ASBT был раскрыт за последние десятилетия, см., например, WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, WO 2019/234077, WO 2020/161216, WO 2020/161217, DE 19825804, ЕР 864582, ЕР 489423, ЕР 549967, ЕР 573848, ЕР 624593, ЕР 624594, ЕР 624595, ЕР 624596, ЕР 0864582, ЕР 1173205, ЕР 1535913 и ЕР 3210977.

Несмотря на ряд соединений-ингибиторов ASBT, о которых сообщалось ранее, существует потребность в дополнительных соединениях, модулирующих желчные кислоты, которые имеют оптимизированный профиль в отношении эффективности, селективности и биодоступности.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 показано выделение желчных кислот с мочой у собак после лечения соединением Примера 2.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Было обнаружено, что некоторые производные 1,5-бензотиазепина и 1,2,5-бензотиадиазепина являются мощными ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT) и могут быть полезны для лечения заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот.

В первом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I)

где

М выбран из -CH₂- и -NR⁷-;

R¹ представляет собой С_1-4алкил;

R² независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С_1-4 галогеналкила, С_1-4алкокси, циано, нитро, амино, N-(С_1-4алкил)амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино, N-(арил-С_1-4алкил)амино, С_1-4алкилкарбониламино, С_3-6циклоалкилкарбониламино, N-(С_1-4алкил)аминокарбонила, N,N-ди(C_1-4алкил)аминокарбонила, С_1-4алкилоксикарбониламино, С_3-6циклоалкилокси-карбониламино, С_1-4алкилсульфонамидо и С_3-6циклоалкилсульфонамидо;

n равен целому числу 1, 2 или 3;

R³ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, циано, С_1-4алкила, С_3-6циклоалкила, С_1-4алкокси, С_3-6циклоалкилокси, С_1-4алкилтио, С_3-6циклоалкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино;

один из R⁴ и R⁵ представляет собой карбоксил, а другой из R⁴ и R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, С_1-4алкила и С_1-4галогеналкила;

R⁶ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-4алкила; и

R⁷ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-4алкила;

или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях R¹ представляет собой С_2-4алкил. В предпочтительном воплощении R¹ представляет собой н-пропил. В другом предпочтительном воплощении R¹ представляет собой н-бутил.

В некоторых воплощениях R² независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси, амино, N-(C_1-4алкил)амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино, С_1-6алкилкарбониламино, С_3-6циклоалкилкарбониламино, N-(C_1-4алкил)аминокарбонила, N,N-ди(С_1-4алкил)-аминокарбонила, С_1-4алкилоксикарбониламино, С_1-4алкилсульфонамидо и С_3-6циклоалкилсульфонамидо. В предпочтительном воплощении R² независимо выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, метокси, амино, метиламино, диметиламино, изопропилкарбониламино, трет-бутилкарбониламино, трет-бутиламинокарбонила, трет-бутоксикарбониламино, метилсульфонамидо и циклопропилсульфонамидо. В другом предпочтительном воплощении R² независимо выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси и метокси.

В предпочтительном воплощении n равен 1, т.е. фенильное кольцо замещено только одним заместителем R². В другом предпочтительном воплощении R² находится в пара-положении.

В некоторых воплощениях R³ выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, метила, циклопропила, метокси, этокси, метилтио, этилтио, амино, метиламино и диметиламино.

В некоторых воплощениях R⁴ представляет собой водород или фтор.

В некоторых воплощениях R⁵ представляет собой карбоксил.

В некоторых воплощениях R⁶ представляет собой водород.

В некоторых воплощениях R⁷ представляет собой водород или метил.

В предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-а):

где

М выбран из группы, состоящей из-CH₂-, -NH- и -NCH₃-;

R¹ представляет собой С_2-4алкил;

R² независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси, амино, N-(С_1-4алкил)амино, N,N-ди(C_1-4алкил)амино, C_1-6алкилкарбониламино, С_3-6циклоалкилкарбониламино, N-(C_1-4алкил)аминокарбонила, N,N-ди(С_1-4алкил)аминокарбонила, C_1-4алкилоксикарбониламино, С_1-4алкилсульфонамидо и С_3-6циклоалкилсульфонамидо;

n равен целому числу 1 или 2;

R³ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, С_1-4алкила, С_3-6циклоалкила, С_1-4алкокси, С_1-4алкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(C_1-4алкил)амино;

R⁴ представляет собой водород или фтор;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b):

где

М выбран из группы, состоящей из -CH₂-, -NH- и -NCH₃-;

R¹ представляет собой н-пропил или н-бутил;

R² выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, метокси, амино, метиламино, диметиламино, изопропилкарбониламино, трет-бутилкарбониламино, трет-бутиламинокарбонила, трет-бутоксикарбониламино, метилсульфонамидо и циклопропилсульфонамидо;

R³ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, метила, циклопропила, метокси, этокси, метилтио, этилтио, амино, метиламино и диметиламино;

R⁴ представляет собой водород или фтор;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b), как определено выше, где R² выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси и метокси.

Предпочтительные соединения по изобретению представляют собой соединения формулы (I-b), как определено выше, где М и R¹-R⁴ являются такими, как указано в Таблице 1 ниже, или их фармацевтически приемлемую соль:

В конкретном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из

(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(R)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(S)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(S)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(R)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(R)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(S)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты; и

(Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

или их фармацевтически приемлемой соли.

Используемый в данном документе термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду.

Используемый в данном документе термин «С_1-6алкил» относится к алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, и термин «С_1-4алкил» относится к алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, имеющей от 1 до 4 атомов углерода. Примеры С_1-4алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.

Используемый в данном документе термин «С_1-4галогеналкил» относится к C_1-4алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, как определено в данном документе, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном. Примеры С_1-4 галогеналкила включают хлорметил, фторэтил и трифторметил.

Используемые в данном документе термины «С_1-4алкокси» и «С_1-4алкилтио» относятся к С_1-4алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, присоединенной к остальной части молекулы через атом кислорода или серы, соответственно.

Используемый в данном документе термин «С_3-6циклоалкил» относится к моноциклическому насыщенному углеводородному кольцу, имеющему от 3 до 6 атомов углерода. Примеры С_3-6циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин «арил» означает ароматическое моноциклическое кольцо, состоящее из 6 атомов углерода, или ароматическую бициклическую кольцевую систему, состоящую из 10 атомов углерода. Примеры арила включают фенил, нафтил и азуленил.

Термин «амино» относится к группе -NH₂. Используемые в данном документе термины «N-(С_1-4алкил)амино» и «N,N-ди(С_1-4алкил)амино» относятся к аминогруппе, в которой один или оба атома водорода, соответственно, заменены на С_1-4алкильную группу с прямой или разветвленной цепью. Примеры N-(C_1-4алкил)амино включают метиламино, этиламино и трет-бутиламино, и примеры N,N-ди(C_1-4алкил)амино включают диметиламино и диэтиламино.

Используемый в данном документе термин «N-(арил-С_1-4алкил)амино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен на арил-С_1-4алкильную группу. Примеры N-(арил-С_1-4алкил)амино включают бензиламино и фенилэтиламино. Термин «C_1-6алкилкарбониламино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен на C_1-6алкилкарбонильную группу. Примеры С_1-6алканоиламино включают ацетиламино и трет-бутилкарбониламино. Термин «С_1-4алкилоксикарбониламино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен на С_1-4алкилоксикарбонильную группу. Примером С_1-4алкилоксикарбониламино является трет-бутоксикарбониламино. Термины «С_1-4алкилсульфонамидо» и «С_3-6циклоалкилсульфонамидо» относятся к аминогруппе, в которой атом водорода заменен на С_1-4алкилсульфонильную или С_3-6циклоалкилсульфонильную группу, соответственно.

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый» относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для фармацевтического применения человеком и которые обычно безопасны, нетоксичны и не являются нежелательными ни с биологической, ни с иной точки зрения.

Используемый здесь термин «примерно» относится к значению или параметру в данном документе, который включает (и описывает) воплощения, которые относятся к этому значению или параметру как таковому. Например, описание, относящееся к «примерно 20», включает описание «20». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Вообще говоря, термин «примерно» относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего) или в пределах 10 процентов от указанного значения, в зависимости от того, какое из них больше.

1,5-Бензотиазепиновые и 1,2,5-бензотиадиазепиновые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли являются ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ингибиторы ASBT), переносчика желчных кислот печени (ингибиторы LBAT) или как апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот, так и переносчика желчных кислот печени (двойные ингибиторы ASBT/LBAT). Следовательно, они полезны в лечении или предупреждении состояний, нарушений и заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот, таких как сердечно-сосудистые заболевания, нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.

Сердечно-сосудистые заболевания и нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы включают, без ограничения, гиперхолестеринемию; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, в том числе катаракту, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатию, невропатию, нефропатию и замедленное заживление ран, ишемию тканей, диабетическую стопу, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильную стенокардию, стабильную стенокардию, инсульт, окклюзионную болезнь периферических артерий, кардиомиопатию, сердечную недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемию, гиперинсулинемию, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемию, гиперлипидемию, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензию; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

Заболевания и расстройства желудочно-кишечного тракта включают запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); болезнь Крона; первичную мальабсорбцию желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксную болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

Заболевание печени, как определено в данном документе, представляет собой любое заболевание печени и связанных с ней органов, таких как поджелудочная железа, воротная вена, паренхима печени, внутрипеченочные желчные протоки, внепеченочные желчные протоки и желчный пузырь. В некоторых случаях заболевание печени представляет собой заболевание печени, зависимое от желчных кислот. Заболевания и нарушения печени включают, без ограничения, наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезию желчевыводящих путей; билиарную атрезию после проведения операции по Касаи; посттрансплантационную атрезию желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ВА); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (РВС); фиброз печени; неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальную гипертензию; холестаз; холестаз при синдроме Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременных (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким уровнем фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LSC1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменную болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатию при СПИД; ишемическую холангиопатию; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (BAS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическую протопорфирию (ЕРР); идиопатическую дуктопению в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальную недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле сывороточных желчных кислот, кардиомиопатию, связанную с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; поликистоз печени; вирусный гепатит (включая гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е); гепатоцеллюлярную карциному (гепатому); холангиокарциному; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы. Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли также полезны для усиления терапии кортикостероидами при заболевании печени.

Другие заболевания, которые можно лечить или предупреждать с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, включают синдромы гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоз и остеопетроз; гипертензию; клубочковую гиперфильтрацию; поликистоз почек (PKD), включая аутосомно-доминантный поликистоз почек (ADPKD) и аутосомно-рецессивный поликистоз почек (ARPKD); и кожный зуд при почечной недостаточности. Соединения также полезны для защиты от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.

Транспорт желчных кислот в организме человека контролируется действием членов семейства белков-переносчиков растворенных веществ SLC10, в частности, полипептида, переносящего Na+-таурохолат (NTCP, также называемого переносчиком желчных кислот печени (LBAT); символ гена SLC10A1), который экспрессируется в синусоидальной мембране гепатоцитов, и апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT, также называемого переносчиком желчных кислот подвздошной кишки (IBAT), ISBT, АВАТ или NTCP2; генный символ SLC10A2), который экспрессируется в апикальной мембране энтероцитов подвздошной кишки, клетках проксимальных почечных канальцев, билиарном эпителии, больших холангиоцитах и эпителиальных клетках желчного пузыря. В печени желчные кислоты эффективно извлекаются из портальной крови переносчиком желчных кислот печени (LBAT) и повторно секретируются через канальцевую мембрану с помощью насоса экспорта солей желчных кислот (BSEP; символ гена АВСВ11). Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке осуществляется апикальным натрий-зависимым переносчиком желчных кислот (ASBT), где его обычно называют переносчиком желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT). Как LBAT, так и ASBT действуют как электрогенные котранспортеры растворенного натрия, которые переносят два или более иона Na⁺ на молекулу растворенного вещества.

Ксенобиотики и эндобиотики, включая желчные кислоты, поглощаются печенью из портальной крови и секретируются в желчь различными транспортными белками с индивидуальной специфичностью к субстрату. Конъюгированные с глицином и таурином желчные кислоты существуют в анионной форме и не могут проникать через мембраны путем диффузии и, таким образом, полностью зависят от мембранных транспортных белков для входа или выхода из гепатоцита (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p.1043-1071). ASBT и LBAT предпочитают конъюгированные с глицином и таурином соли желчных кислот по сравнению с их неконъюгированными аналогами и демонстрируют более высокое сродство к солям дигидрокси-желчных кислот, чем к солям тригидрокси-желчных кислот. Субстратов, не являющихся желчными кислотами, для ASBT пока не обнаружено, однако также было обнаружено, что LBAT переносит различные стероидные сульфаты, гормоны и ксенобиотики.

LBAT не так подробно охарактеризован как ASBT, с точки зрения требований к ингибированию лекартсвенными средствами. Dong et al. идентифицировали одобренные FDA лекарственные средства, которые ингибируют LBAT человека, и сравнили требования к ингибированию LBAT и ASBT. Был проведен ряд исследований ингибирования LBAT с использованием лекарственных средств, одобренных FDA, в сочетании с разработкой итеративной вычислительной модели. Скрининговые исследования позволили идентифицировать 27 лекарственных средств в качестве новых ингибиторов LBAT, включая ирбесартан (Ki равно 11,9 мкМ) и эзетимиб (Ki равно 25,0 мкМ). Общая особенность фармакофора указывает на то, что два гидрофоба и один акцептор водородной связи важны для ингибирования LBAT. Из 72 лекарственных средств, проверенных in vitro, в общей сложности 31 лекарственное средство ингибировало LBAT, в то время как 51 лекарственное средство (то есть более половины) ингибировало ASBT. Следовательно, несмотря на перекрытие ингибиторов, ASBT неожиданно оказался более пермиссивным к ингибированию лекарственного средства, чем LBAT, и это может быть связано с тем, что LBAT обладает меньшим количеством фармакофорных свойств (Dong et al., Mol. Pharm. 2013, vol. 10, p.1008-1019).

Vaz et al. описывают идентификацию дефицита LBAT как новую врожденную ошибку метаболизма с относительно мягким клиническим фенотипом. Идентификация дефицита LBAT подтверждает, что этот переносчик является основной системой импорта конъюгированных солей желчных кислот в печень, но также указывает на то, что вспомогательные переносчики способны поддерживать энтерогепатический цикл в его отсутствие (Vaz et al., Hepatology 2015, vol. 61, p.260-267). Эти данные подтверждают гипотезу о том, что ингибирование LBAT является безопасным механизмом действия, поскольку гепатоциты все еще имеют возможность поглощать необходимое количество желчных кислот.

Liu et al. описывают идентификацию нового типа гиперхоланемии, которая связана с гомозиготностью по мутации p.Ser267Phe в SLC10A1 (LBAT). Частота аллелей этой мутации в гене SLC10A1 варьирует в разных популяциях, при этом наибольшая частота встречается в Южном Китае (8% и 12% у китайских популяций Хань и Дай, соответственно) и во Вьетнаме (11%). Считалось, что эта «скрытая» гиперхоланемия затронула 0,64% китайской популяции Южных Хань, 1,44% популяции Дай и 1,21% населения Вьетнама. Также наблюдалось повышение уровней конъюгированной и неконъюгированной ВА в сыворотке крови у гомозиготных индивидуумов. Liu et al. предполагают, что это обнаружение, скорее всего, связано со снижением транспорта ВА из портального кровотока в гепатоциты. Это подтверждает гипотезу о том, что физиологическая функция энтерогепатической циркуляции заключается не только в рециркуляции желчных кислот, но и в удалении желчных кислот из кровотока для достижения гомеостаза (Karpen and Dawson, Hepatology 2015, vol. 61, p.24-27). Альтернативно, печень может синтезировать повышенные уровни желчных кислот для компенсации пониженной энтерогепатической рециркуляции у гомозиготных носителей. Поскольку LBAT также переносит неконъюгированные желчные кислоты, увеличение количества неконъюгированных желчных кислот в этом исследовании не было неожиданным (Liu et al., Scientific Reports 2017, 7: 9214, p.1-7).

Было обнаружено, что LBAT отрицательно регулируется при нескольких формах холестатического поражения печени и холестаза, тогда как ASBT отрицательно регулируется при различных желудочно-кишечных расстройствах, таких как болезнь Крона, первичная мальабсорбция желчных кислот, воспалительные заболевания кишечника и воспаление подвздошной кишки, но положительно регулируется при холестазе. LBAT также функционирует как клеточный рецептор для проникновения вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита D (HDV), которые, в свою очередь, являются основной причиной заболеваний печени и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ингибирование ASBT было исследовано на предмет снижения уровня холестерина в плазме и улучшения инсулинорезистентности, а также для уменьшения нагрузки желчных кислот в печени при холестатической болезни печени. Кроме того, было обнаружено, что ингибирование ASBT восстанавливает уровни инсулина и нормогликемию, что делает ингибирование ASBT перспективным лечением сахарного диабета 2 типа. Ингибиторы ASBT также используют для лечения функциональных запоров.

Поскольку ASBT преимущественно экспрессируется в подвздошной кишке (где его часто называют IBAT), ингибиторы ASBT не обязательно должны быть доступны системно. С другой стороны, ASBT также экспрессируется в клетках проксимальных канальцев почек. Следовательно, системные ингибиторы ASBT могут также ингибировать обратный захват желчных кислот почками. Полагают, что это приведет к повышению уровня желчных кислот в моче и к усиленному удалению желчных кислот из организма с мочой. Поэтому ожидается, что системно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие не только на подвздошную кишку, но и на почки, приведут к большему снижению уровней желчных кислот, чем несистемно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие только на подвздошную кишку.

Соединения, обладающие высокой активностью ингибирования ASBT, особенно подходят для лечения заболеваний печени, вызывающих холестаз, таких как прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля, атрезия желчных путей и неалкогольный стеатогепатит (NASH).

Атрезия желчевыводящих путей представляет собой редкое заболевание печени у детей, которое включает частичную или полную закупорку (или даже отсутствие) крупных желчных протоков. Эта блокировка или отсутствие вызывает холестаз, который приводит к накоплению желчных кислот, которые повреждают печень. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внепеченочных желчных протоках. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внутрипеченочных желчных протоках. Соверменный стандарт лечения представляет собой процедуру Касаи, являющуюся операцией по удалению закупоренных желчных протоков и прямому соединению части тонкой кишки с печенью. В настоящее время нет одобренных лекарственных препаратов для лечения этого расстройства.

В настоящем документе предложены способы лечения атрезии желчных путей у субъекта, нуждающегося в этом, включающие введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях субъект прошел процедуру Касаи перед введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях субъекту вводят соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль до прохождения процедуры Касаи. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных кислот до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей включает лечение зуда.

PFIC представляет собой редкое генетическое заболевание, которым по оценкам страдает один на каждые 50000-100000 детей, рожденных во всем мире, и которое вызывает прогрессирующее, опасное для жизни заболевание печени.

Одним из проявлений PFIC является зуд, который часто приводит к серьезному ухудшению качества жизни. В некоторых случаях PFIC приводит к циррозу и печеночной недостаточности. Соверменные методы лечения включают частичное внешнее отведение желчных протоков (PEBD) и трансплантацию печени, однако эти варианты могут нести значительный риск послеоперационных осложнений, а также психологических и социальных проблем.

Были идентифицированы три альтернативных генных дефекта, которые коррелируют с тремя отдельными подтипами PFIC, известными как типы 1, 2 и 3:

• PFIC типа 1, который иногда называют «болезнью Байлера», вызывается нарушением секреции желчи из-за мутаций в гене АТР8В1, который кодирует белок, помогающий поддерживать соответствующий баланс жиров, известных как фосфолипиды, в клеточных мембранах в желчных протоках. Дисбаланс этих фосфолипидов связан с холестазом и повышенным содержанием желчных кислот в печени. У субъектов, пораженных PFIC типа 1, холестаз обычно развивается в первые месяцы жизни, а при отсутствии хирургического лечения прогрессирует до цирроза и терминальной стадии заболевания печени до конца первого десятилетия жизни.

• PFIC типа 2, который иногда называют «синдромом Байлера», вызывается нарушением секреции солей желчных кислот из-за мутаций в гене АВСВ11, который кодирует белок, известный как насос экспорта желчной соли, который выводит желчные кислоты из печени. У субъектов с PFIC типа 2 часто развивается печеночная недостаточность в течение первых нескольких лет жизни, и они подвержены повышенному риску развития типа рака печени, известного как гепатоцеллюлярная карцинома.

• PFIC типа 3, который обычно проявляется в первые годы детства прогрессирующим холестазом, вызывается мутациями в гене АВСВ4, который кодирует переносчик, перемещающий фосфолипиды через клеточные мембраны.

Кроме того, предполагается, что причиной PFIC являются мутации гена TJP2, гена NR1H4 или гена Myo5b. Кроме того, у некоторых субъектов с PFIC нет мутации ни в одном из генов АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b. В этих случаях причина данного состояния неизвестна.

Типичные мутации гена АТР8 В1 или полученного белка перечислены в Таблицах 2 и 3 с нумерацией на основе человеческого белка АТР8 В1 дикого типа (например, SEQ ID NO: 1) или гена (например, SEQ ID NO: 2). Типичные мутации гена АВСВ11 или полученного белка перечислены в Таблицах 4 и 5 с нумерацией на основе человеческого белка АВСВ11 дикого типа (например, SEQ ID NO: 3) или гена (например, SEQ ID NO: 4).

Специалистам в данной области техники понятно, что положение аминокислоты в последовательности референсного белка, которое соответствует конкретному положению аминокислоты в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного белка с SEQ ID NO: 1 или 3 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения в этих остатках (называемые в данном документе «мутациями») могут включать одиночные или множественные аминокислотные замены, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. Как может быть понятно специалистам в данной области техники, положение нуклеотида в последовательности референсного гена, которое соответствует определенному положению нуклеотида в SEQ ID NO: 2 или 4, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного гена с SEQ ID NO: 2 или 4 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения этих остатков (называемые в данном документе «мутациями») могут включать замены одного или нескольких нуклеотидов, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. См. также Kooistra, et al., "KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database," Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. Dl, pp.D365-D371, который полностью включен в настоящий документ ссылкой.

Каноническая последовательность белка АТР8 В1 (SEQ ID NO: 1) Uniprot ID O43520

Каноническая последовательность ДНК для АТР8 В1 (SEQ ID NO: 2)

Список литературы для Таблиц 2 и 3

¹ Folmer etal., Hepatology. 2009, vol. 50(5), p.1597-1605.

² Hsu et al., Hepatol Res. 2009, vol. 39(6), p.625-631.

³ Alvarez et al., Hum Mol Genet. 2004, vol. 13(20), p.2451-2460.

⁴ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p.1645-1655.

⁵ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p.945-958.

⁶ Klomp et al., Hepatology 2004, vol. 40(1), p.27-38.

⁷ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

⁸ Dixon et al., Scientific Reports 2017, vol. 7, 11823.

⁹ Painter et al., Eur J Hum Genet. 2005, vol. 13(4), p.435-439.

¹⁰ Deng et al., World J Gastroenterol. 2012, vol. 18(44), p.6504-6509.

¹¹ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

¹² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp.Supplement 1, pp.S180. Abstract Number: OP284.

¹³ Togawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 67, Supp.Supplement 1, pp.S363. Abstract Number: 615.

¹⁴ Miloh et al., Gastroenterology 2006, vol. 130, No. 4, Suppl. 2, pp.A759-A760. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/107th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Los Angeles, CA, USA. May 19.

¹⁵ Droge et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2015, vol. 53, No. 12. Abstract Number: A3-27. Meeting Info: 32. Jahrestagung der Deutschen Arbeitsgemeinschaft zum Studium der Leber. Dusseldorf, Germany. 22 Jan 2016-23 Jan 2016

¹⁶ Mizuochi et al., Clin Chim Acta. 2012, vol. 413(15-16), p.1301-1304.

¹⁷ Liu et al., Hepatology International 2009, vol. 3, No. 1, p.184-185. Abstract Number: PE405. Meeting Info: 19th Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver. Hong Kong, China. 13 Feb 2009-16 Feb 2009

¹⁸ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/fl000research.2-32. v2

¹⁹ Hasegawa et al., Orphanet J Rare Dis. 2014, vol. 9:89.

²⁰ Stone et al., J Biol Chem. 2012, vol. 287(49), p.41139-51.

²¹ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

²² Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p.107.

²³ Uegaki et al., Intern Med. 2008, vol. 47(7), p.599-602.

²⁴ Goldschmidt et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(4), p.306-311.

²⁵ Liu et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 50(2), p.179-183.

²⁶ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p.453-458.

²⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol.75, No. 1С.Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

²⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p.1195-1204.

²⁹ Ivashkin et al., Hepatology International 2016, vol. 10, No. 1, Supp.SUPPL. 1, pp.S461. Abstract Number: LBO-38. Meeting Info: 25th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2016. Tokyo, Japan. 20 Feb 2016-24 Feb 2016

³⁰ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p.159-161.

³¹ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p.488-493.

³² Squires et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2017, vol. 64(3), p.425-430.

³³ Hayshi et al., EBioMedicine. 2018, vol. 27, p.187-199.

³⁴ Nagasaka et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 45(1), p.96-105.

³⁵ Wangetal., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

³⁶ Narchi et al., Saudi J Gastroenterol. 2017, vol. 23(5), p.303-305.

³⁷ Alashkar et al., Blood 2015, vol. 126, No. 23. Meeting Info.: 57th Annual Meeting of the American-Society-of-Hematology. Orlando, FL, USA. December 05 -08, 2015. Amer Soc Hematol.

³⁸ Ferreira et al., Pediatric Transplantation 2013, vol. 17, Supp.SUPPL. 1, pp.99. Abstract Number: 239. Meeting Info: IPTA 7th Congress on Pediatric Transplantation. Warsaw, Poland. 13 Jul 2013-16 Jul 2013.

³⁹ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p.342-357.

⁴⁰ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2015, vol. 60(3), p.368-374.

⁴¹ van derWoerdetal.,PLoS One. 2013, vol. 8(11): e80553.

⁴² Copeland et al., J Gastroenterol Hepatol. 2013, vol. 28(3), p.560-564.

⁴³ Droge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p.1253-1264.

⁴⁴ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p.119-124.

⁴⁵ Jirsa et al., Hepatol Res. 2004, vol. 30(1), p.1-3.

⁴⁶ van der Woerd et al., Hepatology 2015, vol. 61(4), p.1382-1391.

В некоторых воплощениях мутация в АТР8 В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, 166IT, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R.

Каноническая последовательность белка АВСВ11 (SEQ ID NO: 3) - Uniprot ID O95342

Каноническая последовательность ДНК АВСВ11 (SEQ ID NO: 4)

Список литературы для Таблиц 4 и 5

¹ Noe et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(3), p.536-543.

² Lam et al., Am J Physiol Cell Physiol. 2007, vol. 293(5), p.C1709-16.

³ Stindt et al., Liver Int. 2013, vol. 33(10), p.1527-1735.

⁴ Gao et al., Shandong Yiyao 2012, vol. 52(10), p.14-16.

⁵ Strautnieks et al., Gastroenterology. 2008, vol. 134(4), p.1203-1214.

⁶ Kagawa et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008, vol. 294(1), p.G58-67.

⁷ Byrne et al., Hepatology. 2009, vol. 49(2), p.553-567.

⁸ Chen et al., J Pediatr. 2008, vol. 153(6), p.825-832.

⁹ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p.1645-1655.

¹⁰ Dröge et al., Sci Rep.2016, vol. 6: 24827.

¹¹ Lang et al., Pharmaeogenet Genomics. 2007, vol. 17(1), p.47-60.

¹² Ellinger et al., World J Gastroenterol. 2017, vol. 23(29), p.:5295-5303.

¹³ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p.945-958.

¹⁴ Knisely et al., Hepatology. 2006, vol. 44(2), p.478-86.

¹⁵ Ellis et al., Hepatology. 2018, vol. 67(4), p.1531-1545.

¹⁶ Lam et al., J Hepatol. 2006, vol. 44(1), p.240-242.

¹⁷ Varma et al., Hepatology 2015, vol. 62(1), p.198-206.

¹⁸ Treepongkaruna et al., World J Gastroenterol. 2009, vol. 15(34), p.4339-4342. ¹⁹Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

²⁰ Hayashi et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(2), p.192-200.

²¹ Guorui et al., Linchuang Erke Zazhi 2013, vol. 31(10), 905-909.

²² van Mil et al., Gastroenterology. 2004, vol. 127(2), p.379-384.

²³ Anzivino et al., Dig Liver Dis. 2013, vol. 45(3), p.226-232.

²⁴ Park et al., World J Gastroenterol. 2016, vol. 22(20), p.4901-4907.

²⁵ Imagawa et al., J Hum Genet. 2018, vol. 63(5), p.569-577.

²⁶ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): eO 145021.

²⁷ Hu et al., Mol Med Rep.2014, vol. 10(3), p.1264-1274.

²⁸ Lang et al,. Drug Metab Dispos. 2006, vol. 34(9), p.1582-1599.

²⁹ Masahata et al.. Transplant Proc. 2016, vol. 48(9), p.3156-3162.

³⁰ Holz et al., Hepatol Commun. 2018, vol. 2(2), p.152-154.

³¹ Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp.Supplement 1, pp.S180. Abstract Number: OP284.

³² Francalanci et al., Laboratory Investigation 2011, vol. 91, Supp.SUPPL. 1, pp.360A. Abstract Number: 1526.

³³ Francalanci et al., Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp.SUPPL. 1, pp.S16. Abstract Number: T.N. 5.

³⁴ Shah et al., J Pediatr Genet. 2017, vol. 6(2), p.126-127.

³⁵ Gao et al., Hepatitis Monthly 2017, vol. 17(10), e55087/l-e55087/6.

³⁶ Evason et al., Am J Surg Pathol. 2011, vol. 35(5), p.687-696.

³⁷ Davit-Spraul et al., Mol Genet Metab. 2014, vol. 113(3), p.225-229.

³⁸ Maggiore et al., J Hepatol. 2010, vol. 53(5), p.981-6.

³⁹ McKay et al., Version 2. FlOOORes. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32. v2

⁴⁰ Liu et al., Pediatr Int. 2013, vol. 55(2), p.138-144.

⁴¹ Waisbourd-Zinman et al., Ann Hepatol. 2017, vol. 16(3), p.465-468.

⁴² Griffin, et al., Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology 2016, vol. 2016. Abstract Number: A200. Meeting Info: 2016 Canadian Digestive Diseases Week, CDDW 2016. Montreal, QC, United States. 26 Feb 2016-29 Feb 2016

⁴³ Qiu et al., Hepatology 2017, vol. 65(5), p.1655-1669.

⁴⁴ Imagawa et al., Sci Rep.2017, 7:41806.

⁴⁵ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

⁴⁶ Takahashi et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007, vol. 19(11), p.942-6.

⁴⁷ Shimizu et al., Am J Transplant. 2011, vol. 11(2), p.394-398.

⁴⁸ Krawczyk et al., Ann Hepatol. 2012, vol. 11(5), p.710-744.

⁴⁹ Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p.107.

⁵⁰ Sattler et al., Journal of Hepatology 2017, vol. 66, No. 1, Suppl. S, pp.SI 77. Meeting Info.: International Liver Congress / 52nd Annual Meeting of the European-Association-for-the-Study-of-the-Liver. Amsterdam, NETHERLANDS. April 19-23, 2017. European Assoc Study Liver.

⁵¹ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p.453-458.

⁵² Sciveres. Digestive и Liver Disease 2010, vol. 42, Supp.SUPPL. 5, pp.S329. Abstract Number: C018. Meeting Info: 17th National Congress SIGENP. Pescara, Italy. 07 Oct 2010-09 Oct 2010

⁵³ Sohn et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2019, vol. 22(2), p.201-206.

⁵⁴ Ho et al., Pharmacogenet Genomics. 2010, vol. 20(1), p.45-57.

⁵⁵ Wang et al., Hepatol Res. 2018, vol. 48(7), p.574-584.

⁵⁶ Shaprio et al., J Hum Genet. 2010, vol. 55(5), p.308-313.

⁵⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol.75, No. 1С. Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

⁵⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p.1195-1204.

⁵⁹ Jankowska et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014, vol. 58(1), p.92-95.

⁶⁰ Kim. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 62, Supp.SUPPL. 1, pp.620. Abstract Number: H-P-045. Meeting Info: 49th Annual Meeting of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2016. Азатемз, Greece. 25 May 2016-28 May 2016.

⁶¹ Pauli-Magnus et al., Hepatology 2003, vol. 38, No. 4 Suppl. 1, pp.518A. print. Meeting Info.: 54th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases. Boston, MA, USA. October 24-28, 2003. American Association for the Study of Liver Diseases.

⁶² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp.Supplement 1, pp.S362. Abstract Number: PP0347. Meeting Info: 26th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2017. Shanghai, China. 15 Feb 2017-19 Feb 2017.

⁶³ Rumbo et al., Transplantation 2018, vol. 102, No. 7, Supp.Supplement 1, pp.S848. Abstract Number: P.752. Meeting Info: 27th International Congress of The Transplantation Society, TTS 2018. Madrid, Spain. 30 Jun 2018-05 Jul 2018.

⁶⁴ Lee et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2017, vol. 20(2), p.114-123.

⁶⁵ Sherrif et al., Liver international: official journal of the International Association for the Study of the Liver 2013, vol. 33, No. 8, pp.1266-1270.

⁶⁶Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p.159-161.

⁶⁷ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p.488-493.

⁶⁸ Lin et al., Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2018, vol. 20(9), p.758-764.

⁶⁹ Harmanci et al., Experimental и Clinical Transplantation 2015, vol. 13, Supp.SUPPL. 2, pp.76. Abstract Number: P62. Meeting Info: 1st Congress of the Turkic World Transplantation Society. Astana, Kazakhstan. 20 May 2015-22 May 2015.

⁷⁰ Herbst et al., Mol Cell Probes. 2015, vol. 29(5), p.291-298.

⁷¹ Moghadamrad et al., Hepatology. 2013, vol. 57(6), p.2539-2541.

⁷² Holz et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2016, vol. 54, No. 8. Abstract Number: KV275. Meeting Info: Viszeralmedizin 2016, 71. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Gastroenterologie, Verdauungs- und Stoffwechselkrankheiten mit Sektion Endoskopie - 10. Herbsttagung der Deutschen Gesellschaft fur Allgemein- und Viszeralchirurgie. Hamburr, Germany. 21 Sep 2016-24 Sep 2016.

⁷³ Wangetal., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

⁷⁴ Hao et al., International Journal of Clinical and Experimental Pathology 2017, vol. 10(3), p.3480-3487.

⁷⁵ Arnell et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p.494-499.

⁷⁶ Sharma et al., Indian Journal of Gastroenterology 2017, vol. 36, No. 1, Supp.Supplement 1, pp.A99. Abstract Number: M-20. Meeting Info: 58th Annual Conference of the Indian Society of Gastroenterology, ISGCON 2017. Bhubaneswar, India. 14 Dec 2017-17 Dec 2017.

⁷⁷ Beauséjour et al., Can J Gastroenterol. 2011, vol. 25(6), p.311-314.

⁷⁸ Imagawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 63, Supp.Supplement 2, pp.S51. Abstract Number: 166. Meeting Info: World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology и Nutrition 2016. Montreal, QC, Canada. 05 Oct 2016-08 Oct 2016.

⁷⁹ Peng et al., Zhonghua er ke za zhi (Chinese journal of pediatrics) 2018, vol. 56, No. 6, pp.440-444.

⁸⁰ Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923.

⁸¹ Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 66, Supp.Supplement 2, pp.860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018.

⁸² Wonget al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p.1141-1148.

⁸³ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p.342-357.

⁸⁴ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60, vol. 3, p.368-

374.

⁸⁵ Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp.A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Washington, DC, USA. May 19-24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract.

⁸⁶ Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p.52-54.

⁸⁷ Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp.S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16 -21, 2015.

⁸⁸ Dröge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p.1253-1264.

⁸⁹ Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p.809-815.

⁹⁰ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p.119-124.

⁹¹ патент США No. 9295677

В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N59IS, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

Предложены способы лечения PFIC (например PFIC-1 и PFIC-2) у субъекта, которые включают выполнение анализа образца, полученного от субъекта, чтобы определить, есть ли у субъекта мутация, ассоциированная с PFIC (например, мутация АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b), и введение (например, специфическое или селективное введение) терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, у которого определена мутация, ассоциированная с PFIC. В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию АТР8 В1 или АВСВ11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация в АТР8 В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, 166IT, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N59IS, A865V, G982R, R1153ChR1268Q.

Также предложены способы лечения PFIC (например PFIC-1 и PFIC-2) у субъекта, нуждающегося в этом, включающие: (а) обнаружение мутации, ассоциированной с PFIC (например, мутация АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b) у субъекта; и (б) введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях способы лечения PFIC могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, имеющему мутацию, ассоциированную с PFIC (например, мутацию АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b). В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию АТР8 В1 или АВСВ11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация в АТР8 В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, 166IT, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

В некоторых воплощениях изобретения субъект определен как имеющий мутацию, ассоциированную с PFIC, у субъекта или в образце биопсии из субъекта с помощью любых признанных в данной области тестов, включая секвенирование следующего поколения (NGS). В некоторых воплощениях изобретения субъект определен как имеющий мутацию, ассоциированную с PFIC, с использованием одобренного регулирующим органом, например, одобренного FDA теста или анализа для идентификации мутации, ассоциированной с PFIC, у субъекта или образца биопсии из субъекта, либо путем выполнения любого из неограничивающих примеров анализов, описанных в данном документе. Дополнительные методы диагностики PFIC описаны в Gunaydin, М. et al., Hepat Med. 2018, vol. 10, p.95-104, полностью включенном в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение PFIC (например PFIC-1 или PFIC-2) снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, полностью включенном в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных кислот до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение PFIC включает лечение зуда.

Поскольку LBAT экспрессируется на гепатоцитах, LBAT и вещества с двойным ингибированием ASBT/LBAT должны иметь по меньшей мере некоторую биодоступность и свободную фракцию в крови. Поскольку соединения-ингибиторы LBAT должны переноситься только из кишечника в печень, ожидается, что относительно низкая системная экспозиция таких соединений будет достаточной, тем самым минимизируя потенциальный риск любых побочных эффектов в остальной части тела. Ожидается, что ингибирование LBAT и ASBT будет иметь по меньшей мере аддитивный эффект в снижении концентрации внутрипеченочных желчных кислот. Также ожидается, что двойной ингибитор ASBT/LBAT может снижать уровни желчных кислот, не вызывая диареи, как это иногда наблюдается с ингибиторами ASBT.

Ожидается, что соединения, обладающие высокой эффективностью ингибирования LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения гепатита. Ожидается, что соединения, обладающие активностью двойного ингибирования ASBT/LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH).

NASH представляет собой распространенное и серьезное хроническое заболевание печени, которое имеет сходство с алкогольной болезнью печени, но встречается у людей, которые пьют мало или совсем не употребляют алкоголь. У пациентов с NASH накопление жира в печени, известное как неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) или стеатоз, и другие факторы, такие как высокий уровень холестерина LDL и инсулинорезистентность, вызывают хроническое воспаление в печени и могут привести к прогрессирующему рубцеванию ткани, известному как фиброз, и циррозу, за которыми в конечном итоге следует печеночная недостаточность и смерть. Было обнаружено, что у пациентов с NASH общие концентрации сывороточных желчных кислот значительно выше, чем у здоровых субъектов в условиях голодания (увеличение NASH в 2,2-2,4 раза) и во всех временных точках после приема пищи (увеличение NASH в 1,7-2,2 раза). Они вызваны повышенным содержанием первичных и вторичных желчных кислот, конъюгированных с таурином и глицином. Пациенты с NASH демонстрировали более высокую вариабельность профиля желчных кислот натощак и после приема пищи. Эти результаты показывают, что пациенты с NASH имеют более высокое воздействие желчных кислот натощак и после приема пищи, включая более гидрофобные и цитотоксические вторичные виды. Повышенное воздействие желчных кислот может быть связано с повреждением печени и патогенезом NAFLD и NASH (Ferslew et al., Dig Dis Sci. 2015, vol. 60, p.3318-3328). Следовательно, вероятно, что ингибирование ASBT и/или LBAT будет полезным для лечения NASH.

NAFLD характеризуется стеатозом печени без вторичных причин стеатоза печени, включая чрезмерное употребление алкоголя, другие известные заболевания печени или длительный прием стеатогенных медикаментов (Chalasani et al., Hepatology 2018, vol. 67(1), p.328-357). NAFLD можно разделить на неалкогольную жировую болезнь печени (NAFL) и неалкогольный стеатогепатит (NASH). Согласно Chalasani et al., NAFL определяют как наличие не менее 5% стеатоза печени без признаков гепатоцеллюлярного повреждения в виде баллонирования гепатоцитов. NASH определяют как наличие не менее 5% стеатоза печени и воспаления с повреждением гепатоцитов (например баллонированием), с фиброзом печени или без него. NASH также часто связан с воспалением и фиброзом печени, который может прогрессировать до цирроза, терминальной стадии заболевания печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Хотя фиброз печени не всегда присутствует при NASH, тяжесть фиброза, если она присутствует, может быть связана с долгосрочными последствиями.

Существует множество подходов, используемых для оценки наличия у субъекта NAFLD и, в случае наличия, степени тяжести заболевания, включая дифференциацию NAFLD на NAFL или NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях обработку NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях NAS может быть определен, как описано в Kleiner et al., Hepatology. 2005, 41(6): 1313-1321, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. См., например, Таблицу 6, где представлена упрощенная схема NAS, адаптированная Kleiner.

В некоторых воплощениях NAS определяют неинвазивно, например, как описано в публикации заявки США №2018/0140219, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях NAS определяют для образца от субъекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NAS определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях более низкий балл NAS в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с периодом до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NAFLD (например, NASH). Например, уменьшение NAS на 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 указывает на лечение NAFLD (например, NASH). В некоторых воплощениях NAS после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше.

Дополнительные подходы к определению и оценке NASH у субъекта включают определение одного или более из следующих: стеатоз печени (например, накопление жира в печени); воспаление печени; биомаркеры, указывающие на одно или более из поражения печени, воспаления печени, фиброза печени и/или цирроза печени (например, сывороточные маркеры и панели). Дополнительные примеры физиологических показателей NASH могут включать морфологию печени, эластичность печени и размер или массу печени субъекта. В некоторых воплощениях NASH у субъекта подтверждают накоплением печеночного жира и обнаружением биомаркера, указывающего на повреждение печени. Например, повышенный уровень ферритина в сыворотке и низкие титры аутоантител в сыворотке могут быть общими признаками NASH.

В некоторых воплощениях способы оценки NASH включают магнитно-резонансную томографию либо с помощью спектроскопии, либо с помощью протонной плотности жировой фракции (MRI-PDFF) для количественной оценки стеатоза, транзиентной эластографии (FIBROSCAN®), градиента венозного давления в печени (HPVG), измерения эластичности печени с помощью MRE для диагностики значительного фиброза и/или цирроза печени и оценки гистологических особенностей биопсии печени. В некоторых воплощениях магнитно-резонансную томографию используют для обнаружения одного или более из стеатогепатита (NASH-MRI), фиброза печени (Fibro-MRI) и стеатоза. См., например, публикации заявок США №2016/146715 и 2005/0215882, каждая из которых полностью включена в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение NASH может включать уменьшение одного или более симптомов, связанных с NASH; уменьшение степени стеатоза печени; снижение NAS; уменьшение воспаления печени; снижение уровня биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени; и уменьшение фиброза и/или цирроза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза, или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза у субъекта после введения одной или более доз соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях лечение NASH включает уменьшение одного или более симптомов, связанных с NASH, у субъекта. Типичные симптомы могут включать один или более из следующих симптомов: увеличение печени, усталость, боль в правом подреберье, вздутие живота, увеличение кровеносных сосудов непосредственно под поверхностью кожи, увеличение молочных желез у мужчин, увеличение селезенки, красные ладони, желтуха и зуд. В некоторых воплощениях у субъекта нет симптомов. В некоторых воплощениях общая масса тела субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях общая масса тела субъекта уменьшается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) у субъекта снижается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (Waist То Hip, WTH) субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (WTH) субъекта уменьшается.

В некоторых воплощениях лечение NASH можно оценить путем измерения стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает уменьшение стеатоза печени после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, как описано в данном документе. В некоторых воплощениях стеатоз печени определяют одним или более способами, выбранными из группы, состоящей из ультрасонографии, компьютерной томографии (СТ), магнитно-резонансной томографии, магнитно-резонансной спектроскопии (MRS), магнитно-резонансной эластографии (MRE), транзиентной эластографии (ТЕ) (например, FIBROSCAN®), измерения размера или массы печени или с помощью биопсии печени (см., например, Di Lascio et al., Ultrasound Med Biol. 2018, vol. 44(8), p.1585-1596; Lv et al., J Clin Transl Hepatol. 2018, vol. 6(2), p.217-221; Reeder et al., J Magn Reson Imaging. 2011, vol. 34(4), spcone; и de Lédinghen V, et al., J Gastroenterol Hepatol. 2016, vol. 31(4), p.848-855, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Субъект с диагнозом NASH может иметь стеатоз печени более чем примерно 5%, например, от примерно 5% до примерно 25%, от примерно 25% до примерно 45%, от примерно 45% до примерно 65% или более чем примерно 65% стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения субъект со стеатозом печени от более чем примерно 5% до примерно 33% имеет стеатоз печени 1 стадии, субъект со стеатозом печени от примерно 33% до примерно 66% имеет стеатоз печени 2 стадии, и субъект со стеатозом печени более чем примерно 66% стеатоза печени имеет стеатоз печени 3 стадии.

В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени стеатоза печени в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, уменьшение степени стеатоза печени от примерно 1% до примерно 50%, от примерно 25% до примерно 75% или от примерно 50% до примерно 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение степени стеатоза печени на примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% указывает на лечение NASH.

В некоторых воплощениях наличие воспаления печени определяют одним или более методами, выбранными из группы, состоящей из биомаркеров, указывающих на воспаление печени, и образца(ов) биопсии печени из субъекта. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют по образцу(ам) биопсии печени из субъекта. Например, воспаление печени в образце биопсии печени можно оценить, как описано в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p.1313-1321 и Brunt et al., Am J Gastroenterol 1999, vol. 94, p.2467-2474, каждый из которых включен в данный документ ссылкой полностью. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение тяжести воспаления печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или ее фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, уменьшение тяжести воспаления печени от примерно 1% до примерно 50%, от примерно 25% до примерно 75% или от примерно 50% до примерно 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение тяжести воспаления печени примерно на 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% указывает на лечение NASH.

В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение фиброза и/или цирроза, например, уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза печени или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза. В некоторых воплощениях наличие фиброза и/или цирроза определяют одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), неинвазивных маркеров фиброза печени и гистологических характеристик биопсии печени. В некоторых воплощениях степень тяжести (например, стадию) фиброза определяют одним или более способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), системы оценок фиброза, биомаркеров фиброза печени (например, неинвазивные биомаркеры) и градиента печеночного венозного давления (HVPG). Неограничивающие примеры систем оценок фиброза включают систему оценок фиброза NAFLD (см., например, Angulo et al., Hepatology 2007, vol. 45 (4), p.846-54), систему оценок фиброза в Brant et al., Am. J. Gastroenterol. 1999, vol. 94, p.2467-2474, систему оценок фиброза в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p.1313-1321, и систему оценок фиброза ISHAK (см. Ishak et al., J. Hepatol. 1995, vol. 22, p.696-699), содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени тяжести фиброза в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют с использованием системы оценки, такой как любая из систем оценки фиброза, описанных в данном документе, например, оценка может указывать на стадию фиброза, например, стадию 0 (без фиброза), стадию 1, стадию 2, стадию 3 и стадию 4 (цирроз) (см., например, Kleiner et al). В некоторых воплощениях снижение стадии фиброза представляет собой уменьшение степени тяжести фиброза. Например, уменьшение на 1, 2, 3 или 4 стадии является уменьшением степени тяжести фиброза. В некоторых воплощениях уменьшение стадии, например, от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях присутствие NASH определяют одним или более биомаркерами, указывающими на один или более из следующих признаков: повреждение печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, или системами их оценок. В некоторых воплощениях степень тяжести NASH определяют одним или более биомаркерами, указывающими на один или более из следующих признаков: повреждение печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, или системами их оценок. Уровень биомаркера можно определить, например, путем измерения, количественной оценки и мониторинга уровня экспрессии гена или мРНК, кодирующей биомаркер и/или пептид или белок биомаркера. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на одно или более из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени и/или системы их оценок, включают индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI); соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR); оценка в баллах FIB-4, которая основана на уровнях APRI, аланинаминотрансферазы (ALT) и возрасте субъекта (см., например, McPherson et al., Gut 2010, vol. 59(9), p.1265-9, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой); гиалуроновую кислоту; провоспалительные цитокины; панель биомаркеров, состоящую из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панель биомаркеров, состоящую из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p.1867-1873), и панель биомаркеров, состоящую из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); панель биомаркеров, состоящую из тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТГМР-1), амино-концевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценки генерализованного фиброза печени (ELF), см., например, Lichtinghagen R, et al., J Hepatol. 2013 Aug; 59(2):236-42, который полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях наличие фиброза определяют по одному или более показателям FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p.1867-1873), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)). В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) снижается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) снижается. В некоторых воплощениях «уровень» фермента относится к концентрации фермента, например, в крови. Например, уровень AST или ALT может быть выражен в единицах/л.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют одним или более из оценки FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p.1867-1873, который полностью включен в настоящий документ ссылкой), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (ТГМР-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).

В некоторых воплощениях воспаление печени определяют по уровню биомаркеров воспаления печени, например, провоспалительных цитокинов. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на воспаление печени, включают интерлейкин(IL)-6, интерлейкин(IL)-1β, фактор некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующий фактор роста (TGF)-β, хемотаксический белок моноцитов (МСР)-1, С-реактивный белок (CRP), PAI-1 и изоформы коллагена, такие как Collal, Colla2 и Col4a1 (см., например, Neuman, et al., Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, vol. 28(11), p.607-618 и патент США№9872844, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Воспаление печени также можно оценить по изменению инфильтрации макрофагами, например, по изменению уровня экспрессии CD68. В некоторых воплощениях воспаление печени может быть определено путем измерения или мониторинга сывороточных уровней или циркулирующих уровней одного или более из интерлейкина(IL)-6, интерлейкина(IL)-1β, фактора некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующего фактора роста (TGF)-β, хемотаксического белка моноцитов (МСР)-1 и С-реактивного белка (CRP).

В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяют для образца от субъекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяют в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере, примерно 45%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 55%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 65%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 75%, по меньшей мере, примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%.

В некоторых воплощениях лечение NASH снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NASH представляет собой NASH с сопутствующим холестазом. При холестазе выделение желчи, в том числе желчных кислот, из печени блокируется. Желчные кислоты могут вызывать повреждение гепатоцитов (см., например, Perez MJ, Briz О. World J. Gastroenterol. 2009, vol. 15(14), p.1677-1689), вероятно, вызывая или увеличивая прогрессирование фиброза (например, цирроза) и увеличивая риск гепатоцеллюлярной карциномы (см., например, Sorrentino Р et al., Dig. Dis. Sci. 2005, vol. 50(6), p.1130-1135 и Satapathy SK and Sanyal AJ. Semin. Liver Dis. 2015, vol. 35(3), p.221-235, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение зуда. В некоторых воплощениях лечение NASH с сопутствующим холестазом включает лечение зуда. В некоторых воплощениях у субъекта с NASH с сопутствующим холестазом наблюдается зуд.

Типичные биомаркеры NASH представлены в Таблице 7.

Таблица 7. Типичные биомаркеры NASH

Биомаркеры фиброза печени

Индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI)

Соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR)

Балл FIB-4¹

Тиалуроновая кислота

Провоспалительные цитокины

Панель, включающая α2-макроглобулин, гаптоглобин, аполипопротеин А1, билирубин, гамма-глутамилтранспептидазу (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для определения показателя фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®)

Панель, включающая билирубин, гамма-глутамилтрансферазу, гиалуроновую кислоту, α2-макроглобулин во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®2)

Панель, включающая тканевой ингибитор металлопротеиназ-1, гиалуроновую кислоту и α2-макроглобулин (например, FIBROSPECT®)

Панель, включающая тканевой ингибитор металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевой пропептид проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновую кислоту (НА) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)³)

Биомаркеры воспаления печени^4,5

Интерлейкин-(IL)6

Интерлейкин-(IL)1β

Фактор некроза опухоли (TNF)-α

Трансформирующий фактор роста (TGF)-β

Хемотаксический белок моноцитов (МСР)-1

С-реактивный белок (CRP)

PAI-1

Изоформы коллагена (например, Colla1, Colla2 и Со14а1)

Изменение инфильтрации макрофагов (например, изменение уровня экспрессии CD68)

Список литературы для Таблицы 7

¹ McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p.1265-1269.

² Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p.1867-1873.

³ Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p.236-242.

⁴ Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p.607-618.

⁵ патент США No. 9872844

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь более высокую свободную фракцию в плазме. В некоторых воплощениях свободная фракция составляет более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,4%, например, более чем примерно 0,6%, например, более чем примерно 0,8%, например, более чем примерно 1,0%, например, больше чем примерно 1,25%, например, более чем примерно 1,5%, например, более чем примерно 1,75%, например, более чем примерно 2,0%, например, более чем примерно 2,5%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 4%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7,5%, например, более чем примерно 10%, или, например, более чем примерно 20%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут выделяться с мочой. В некоторых воплощениях доля соединения, которая выводится с мочой, составляет более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,4%, например, более чем примерно 0,6%, например, более чем примерно 0,8%, например, более чем примерно 1,0%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7,5%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30% или, например, более чем примерно 50%.

После абсорбции из кишечника некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут циркулировать через энтерогепатическую циркуляцию. В некоторых воплощениях доля соединения, которая циркулирует через энтерогепатическую циркуляцию, составляет более чем примерно 0,1%, например, более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,3%, например, более чем примерно 0,5%, например, более чем примерно 1,0%, например, более чем примерно 1,5%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30% или, например, более чем примерно 50%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать почечную экскрецию солей желчных кислот. В некоторых воплощениях доля циркулирующих желчных кислот, которая выводится почечным путем, составляет более чем примерно 1%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20% или, например, более чем примерно 25%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную проницаемость. Проницаемость может быть измерена в клетках Сасо2, и значения даны как значения Рарр (кажущаяся проницаемость) в см/с. В некоторых воплощениях проницаемость составляет более чем по меньшей мере примерно 0,1×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,2×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,4×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,7×10^-6 см/с, например, более чем примерно 1,0×10^-6 см/с, например, более чем примерно 2×10^-6 см/с, например, более чем примерно 3×10^-6 см/с, например, более чем примерно 5×10^-6 см/с, например, более чем примерно 7×10^-6 см/с, например, более чем примерно 10×10^-6 см/с, например, более чем примерно 15×10^-6 см/с.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную биодоступность. В некоторых воплощениях пероральная биодоступность составляет более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30%, например, более чем примерно 40%, например, более чем примерно 50%, например, более чем примерно 60%, например, более чем примерно 70% или например, более чем примерно 80%. В других воплощениях пероральная биодоступность составляет от примерно 10 до примерно 90%, например, от примерно 20 до примерно 80%, например, от примерно 30 до примерно 70% или, например, от примерно 40 до примерно 60%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть субстратом для соответствующих переносчиков в почках.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать повышение концентраций желчных кислот в кишечнике, печени и сыворотке, которые не вызывают неблагоприятных желудочно-кишечных эффектов.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут снижать концентрацию желчных кислот в печени, не вызывая желудочно-кишечных расстройств, таких как диарея.

Используемые в данном документе термины «лечение», «проводить лечение» и «лечить» относятся к регрессированию, облегчению, отсрочке начала или ингибированию развития заболевания или расстройства или одного или более их симптомов, описанных в данном документе. В некоторых воплощениях лечение можно проводить после развития одного или более симптомов. В других воплощениях лечение можно проводить в отсутствие симптомов. Например, лечение может быть назначено восприимчивому индивидууму до появления симптомов (например, в свете симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов восприимчивости). Лечение также может быть продолжено после исчезновения симптомов, например, для предупреждения или отсрочки их повторного появления.

Подходящая фармацевтически приемлемая соль соединения по изобретению представляет собой, например, соль присоединения основания соединения по изобретению, которая является достаточно кислой, такой как соль щелочного металла (например, соль натрия или калия), соль щелочно-земельного металла (например, соль кальция или магния), соль аммония или соль с органическим основанием, которое дает физиологически приемлемый катион, например, соль с метиламином, диметиламином, триметиламином, пиперидином, морфолином или трис-(2-гидроксиэтил)амином.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь хиральные центры и/или геометрические изомерные центры (Е- и Z-изомеры). Следует понимать, что изобретение охватывает все такие оптические изомеры, диастереоизомеры и геометрические изомеры, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Изобретение также охватывает любые и все таутомерные формы соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах, таких как, например, гидратированные формы. Следует понимать, что изобретение охватывает все такие сольватированные формы, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT.

В другом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов. Эксципиенты могут, например, включать наполнители, связывающие вещества, разрыхлители, скользящие вещества и смазывающие вещества. Как правило, фармацевтические композиции могут быть приготовлены обычным способом с использованием общепринятых эксципиентов.

Примеры подходящих наполнителей включают, без ограничения, дигидрат фосфата дикальция, сульфат кальция, лактозу (например, моногидрат лактозы), сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, сухой крахмал, гидролизованный крахмал и прежелатинизированный крахмал. В некоторых воплощениях наполнитель представляет собой маннит и/или микрокристаллическую целлюлозу.

Примеры подходящих связывающих веществ включают, без ограничения, крахмал, прежелатинизированный крахмал, желатин, сахара (такие как сахароза, глюкоза, декстроза, лактоза и сорбит), полиэтиленгликоль, воски, натуральные и синтетические камеди (такие как камедь акации и трагакантовая камедь), альгинат натрия, производные целлюлозы (такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза и этилцеллюлоза) и синтетические полимеры (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты и поливинилпирролидон (повидон)). В некоторых воплощениях связывающее вещество представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу (гипромеллозу).

Примеры подходящих разрыхлителей включают, без ограничения, сухой крахмал, модифицированный крахмал (такой как (частично) прежелатинизированный крахмал, крахмалгликолят натрия и карбоксиметилкрахмал натрия), альгиновую кислоту, производные целлюлозы (такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилцеллюлоза и низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза (L-HPC)) и перекрестно-сшитые полимеры (такие как кармеллоза, кроскармеллоза натрия, кармеллоза кальция и перекрестно-сшитый PVP (кросповидон)). В некоторых воплощениях разрыхлитель представляет собой кроскармеллозу натрия.

Примеры подходящих скользящих веществ и смазывающих веществ включают, без ограничения, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, глицерилбегенат, коллоидный диоксид кремния, водный диоксид кремния, синтетический силикат магния, тонкодисперсный оксид кремния, крахмал, лаурилсульфат натрия, борную кислоту, оксид магния, воски (такие как карнаубский воск), гидрогенизированное масло, полиэтиленгликоль, бензоат натрия, полиэтиленгликоль и минеральное масло. В некоторых воплощениях скользящее вещество или смазывающее вещество представляет собой стеарат магния или коллоидный диоксид кремния.

Фармацевтическая композиция может быть обычно покрыта одним или более слоями покрытия. Также предусмотрены слои энтеросолюбильного покрытия или слои покрытия для замедленного или целевого высвобождения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Слои покрытия могут содержать один или более агентов покрытия и возможно могут содержать пластификаторы и/или пигменты (или красители).

Примеры подходящих агентов покрытия включают, без ограничения, полимеры на основе целлюлозы (такие как этилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза, фталат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы и фталат гидроксипропилметилцеллюлозы), полимеры на основе винила (например, поливиниловый спирт) и полимеры на основе акриловой кислоты и ее производных (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты). В некоторых воплощениях агент покрытия представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу. В других воплощениях агент покрытия представляет собой поливиниловый спирт.

Примеры подходящих пластификаторов включают, без ограничения, триэтилцитрат, глицерилтриацетат, трибутилцитрат, диэтилфталат,

ацетилтрибутилцитрат, дибутилфталат, дибутилсебацинат и полиэтиленгликоль. В некоторых воплощениях пластификатор представляет собой полиэтиленгликоль.

Примеры подходящих пигментов включают, без ограничения, диоксид титана, оксиды железа (такие как желтые, коричневые, красные или черные оксиды железа) и сульфат бария.

Фармацевтическая композиция может быть в форме, подходящей для перорального введения, для парентеральной инъекции (включая внутривенную, подкожную, внутримышечную и внутрисосудистую инъекцию), для местного введения или для ректального введения. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетка или капсула.

Дозировка, необходимая для терапевтического или профилактического лечения, будет зависеть от пути введения, тяжести заболевания, возраста и массы тела пациента и других факторов, обычно рассматриваемых лечащим врачом при определении подходящей схемы лечения и уровня дозировки для конкретного пациента.

Количество вводимого соединения будет варьировать для пациента, которого лечат, и может варьировать от примерно 1 мкг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела в сутки. Стандартная лекарственная форма, такая как таблетка или капсула, обычно будет содержать от примерно 1 до примерно 250 мг активного ингредиента, например, от примерно 1 до примерно 100 мг, или от примерно 1 до примерно 50 мг, или от примерно 1 до примерно 20 мг, например, примерно 2,5 мг, или примерно 5 мг, или примерно 10 мг или примерно 15 мг. Суточная доза может быть введена как разовая доза или разделена на одну, две, три или более стандартных доз. Суточная доза модулятора желчной кислоты, вводимая перорально, предпочтительно составляет от примерно 0,1 до примерно 250 мг, более предпочтительно от примерно 1 до примерно 100 мг, например, от примерно 1 до примерно 5 мг, например, от примерно 1 до примерно 10 мг, например, от примерно 1 до примерно 15 мг или от примерно 1 до примерно 20 мг.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении или предупреждении любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к способу лечения или предупреждения любого из перечисленных в данном документе заболеваний у субъекта, такого как человек, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении или предупреждении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Комбинированная терапия

В одном аспекте изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с по меньшей мере одним другим терапевтически активным агентом, например, с одним, двумя, тремя или более другими терапевтически активными агентами. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере один другой терапевтически активный агент можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Терапевтически активные агенты, которые подходят для комбинации с соединениями формулы (I), включают, без ограничения, известные активные агенты, которые полезны в лечении любого из вышеупомянутых состояний, расстройств и заболеваний.

В одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с другим ингибитором ASBT. Подходящие ингибиторы ASBT описаны в WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, WO 2019/234077, WO 2020/161216, WO 2020/161217, DE 19825804, EP 864582, EP 489423, EP 549967, EP 573848, EP 624593, EP 624594, EP 624595, EP 624596, EP 0864582, EP 1173205, EP 1535913 и EP 3210977, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации со связующим желчные кислоты (также называемым секвестрантом желчных кислот или смолой), таким как колесевелам, холестирамин или холестипол. В предпочтительном воплощении такой комбинации связующее желчных кислот изготовлено в виде препарата для высвобождения в толстой кишке. Примеры таких препаратов раскрыты, например, в WO 2017/138877, WO 2017/138878, WO 2019/032026 и WO 2019/032027, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором DPP-IV, включая глиптины, такие как ситаглиптин, вилдаглиптин, саксаглиптин, линаглиптин, гемиглиптин, анаглиптин, тенелиглиптин, трелаглиптин, аллоглиптин, омариглиптин, эвоглиптин, гозоглиптин и дутоглиптин или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором HMG СоА редуктазы, таким как флувастатин, ловастатин, правастатин, симвастатин, аторвастатин, питавастатин, церивастатин, мевастатин, розувастатин, бервастатин или далвастатин или их фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором абсорбции холестерина, таким как эзетимиб или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом PPAR-альфа, включая фибраты, такие как клофибрат, безафибрат, ципрофибрат, клинофрибрат, клофибрид, фенофибрат, гемфиброзил, ронифибрат и симфрибрат или их фармацевтически приемлемую соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с гамма-агонистом PPAR, включая тиазолидиндионы, такие как пиоглитазон, розиглитазон и лобеглитазон или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/гамма, включая глитазары, такие как сароглитазар, алеглитазар, мураглитазар или тесаглитазар или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/дельта, таким как элафибранор.

В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с пан-агонистом PPAR (т.е. агонистом PPAR, который обладает активностью во всех подтипах: α, γ и δ), таким как IVA337.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модуляторами рецептора фарнезоида X (FXR), включая агонисты FXR, такие как кафестол, хенодезоксихолевая кислота, 6α-этилхенодезоксихолевая кислота (обетихолевая кислота; INT-747), фексарамин, тропифексор, цилофексор и МЕТ409.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модулятором рецептора TGR5, включая агонисты TGR5, такие как 6α-этил-23(S)-метилхолевая кислота (INT-777).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом FXR/TGR5, таким как INT-767.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с урсодезоксихолевой кислотой (UDCA). В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с нор-урсодезоксихолевой кислотой (нор-UDCA).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модулятором FGF19, таким как NGM282.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом FGF21, таким как BMS-986036.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором интегрина, таким как PLN-74809 hPLN-1474.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором CCR2/CCR5, таким как ценикривирок.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором протеазы каспазы, таким как эмриказан.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором галектина-3, таким как GR-MD-02.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором стеароил-СоА десатуразы (SCD), таким как арамхол (арахидиламидохолановая кислота).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором киназы 1 (ASK1), регулирующим сигнал апоптоза, таким как селонсертиб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором LOXL2, таким как симтузумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором АСС, таким как GS-0976.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора тиреоидного гормона-р, таким как MGL3196.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом GLP-1, таким как лираглутид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойными агонистами глюкагоноподобного пептида и рецептора глюкагона, такими как SAR425899.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором митохондриального переносчика пирувата, таким как MSDC-0602K.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антиоксидантным агентом, таким как витамин Е.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором SGLT1, ингибитором SGLT2 или двойным ингибитором SGLT1 и SGLT2. Примерами таких соединений являются дапаглифлозин, сотаглифлозин, канаглифлозин, эмпаглифлозин, LIK066 и SGL5213.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором диацилглицерин-О-ацилтрансферазы 2 (DGAT2), таким как DGAT2RX и PF-06865571.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором синтазы жирных кислот (FASN), таким как TVB-2640.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с активатором АМР-активируемой протеинкиназы (АМРК), таким как PXL-770.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора глюкокортикоидов (GR), антагонистом рецептора минералокортикоидов (MR) или двойным антагонистом GR/MR. Примерами таких соединений являются МТ-3995 и CORT-118335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом каннабиноидного рецептора 1 (СВ1), таким как IM102.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с Klothop (KLB) и активатором рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), таким как МК-3655 (ранее известный как NGM-313).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором хемокинового (с-с-мотив) лиганда 24 (CCL24), таким как СМ101.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом A3, таким как PBF-1650.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора Р2х7, таким как SGM 1019.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистами рецептора P2Y13, такими как CER-209.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с сульфатированным оксистеролом, таким как Dur-928.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора лейкотриена D4 (LTD4), таким как MN-001.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором Т-клеток-естественных киллеров 1 типа (NKT1), таким как GRI-0621.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с анти-липополисахаридным (LPS) соединением, таким как IMM-124E.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором VAP1, таким как BI1467335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом аденозинового рецептора A3, таким как CF-102.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с активатором SIRT-1, таким как NS-20.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора 1 никотиновой кислоты, таким как ARI-3037MO.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом TLR4, таким как JKB-121.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором кетогексокиназы, таким как PF-06835919.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора адипонектина, таким как ADP-335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором аутотаксина, таким как РАТ-505 и PF8380.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом хемокинового (с-с-мотив) рецептора 3 (CCR3), таким как бертилимумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации со стимулятором хлоридных каналов, таким как кобипростон и любипростон.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором белка теплового шока 47 (HSP47), таким как ND-L02-s0201.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором фактора транскрипции белка, связывающегося с регуляторным элементом стерола (SREBP), таким как САТ-2003 и MDV-4463.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с бигуанидином, таким как метформин.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с инсулином.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором гликогенфосфорилазы и/или ингибитором глюкозо-6-фосфатазы.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с сульфонилмочевиной, такой как глипизид, глибенкламид и глимепирид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с меглитинидом, таким как репаглинид, натеглинид и ормиглитинид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором глюкозидазы, таким как акарбоза или миглитол.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором скваленсинтазы, таким как ТАК-475.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором РТРВ1, таким как тродускемин, эртипротафиб, JTT-551 и кларамин.

Получение соединений

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены в виде свободной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли способами, описанными ниже. В последующем описании таких процессов понятно, что, где это уместно, подходящие защитные группы будут добавлены и впоследствии удалены из различных реагентов и промежуточных продуктов способом, который будет легко понятен специалистам в области органического синтеза. Обычные методики использования таких защитных групп, а также примеры подходящих защитных групп описаны, например, в руководстве Greene's Protective Groups in Organic Synthesis P.G.M Wutz and T.W. Greene, 4th Edition, John Wiley & Sons, Hoboken, 2006.

Общие способы

Все использованные растворители были аналитической чистоты. Для реакций обычно использовали коммерчески доступные безводные растворители. Исходные материалы были доступны из коммерческих источников или были получены в соответствии с описанными в литературе методиками. Комнатная температура относится к 20-25°С. Составы смеси растворителей даны в объемных процентах или объемных соотношениях.

ЖХ-МС:

Название прибора: Agilent 1290 infinity II.

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде: ACN (95:5), В: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ZORBAX XDB С-18 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄HCO₃ в воде, В: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде: ACN (95:5), В: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (50x4,6 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄OAC в воде, В: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: Zorbax Extend CI8 (50x4,6 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде: ACN (95:5), В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

УЭЖХ:

Название прибора: waters Acquity I Class

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде, В: 0,1% НСООН в ACN; скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: Acquity UPLC HSS Т3 (2,1x50 мм); 1,8 мкм. ВЭЖХ:

Название прибора: приборы серии Agilent 1260 Infinity II с использованием % с УФ-детектированием (maxplot).

Метод А: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄HCO₃ в воде, В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде, В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄OAC в воде Milli-q, В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: Phenomenex Gemini С18 (150x4,6 мм, 3,0 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде, В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (250x4,6 мм, 5,0 мкм).

Хиральная ВЭЖХ:

Название прибора: Agilent 1260 Infinity II

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в н-гексане; В: этанол, скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: CHIRALPAK IA (250x4,6 мм, 5,0 мкм).

Хиральная СФХ:

Название прибора: PIC СФХ 10 (аналитический)

Соотношение между СО₂ и сорастворителем находится в диапазоне между 60:40 и 80:20

Метод А: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IP А; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux Al (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Lux С4.

Метод F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC.

Метод G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux Al.

Метод Н: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux Al (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод I: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод J: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC AD-H (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод К: Подвижная фаза: IP А; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод L: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 4 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250x4,6 мм, 5 мкм).

Метод М: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC AD-H (250x4,6 мм, 5 мкм).

Преп-ВЭЖХ:

Название прибора: Agilent 1290 Infinity II

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде; подвижная фаза; В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: X-Bridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄OAc в воде; В: ACN; скорость потока: 35 мл/мин; колонка: X select С18 (30x150 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄HCO₃ в воде; В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50x4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде; В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: X-select С18 (30x150 мм, 5 мкм).

Хиральная препаративная СФХ:

Название прибора: PIC СФХ 100 и PSC СФХ 400

Соотношение между СО₂ и сорастворителем находится в диапазоне между 60:40 и 80:20

Метод А: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPА; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250x30 мм, 5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250x30 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250x30 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250x30 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux Al (250x30 мм, 5 мкм).

Метод F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IP А; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux Al (250x30 мм, 5 мкм).

Метод G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250x30 мм, 5 мкм).

Метод Н: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IP А, скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SC (250x30 мм, 5 мкм).

Хиральная препаративная ВЭЖХ:

Название прибора: Agilent 1260 Infinity II

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в н-гексане; В: этанол; скорость потока: 15 мл/мин; колонка: CHIRALPAK IA (250x19 мм, 5,0 мкм).

Сокращения

Изобретение далее будет описано с помощью следующих примеров, которые не ограничивают изобретение ни в каком аспекте. Все цитированные документы и источники информации включены посредством ссылки.

ПРИМЕРЫ

Промежуточное соединение 1

2-(((2-Амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилгексановая кислота

К перемешиваемому раствору 5-бром-6-метоксибензо[с1]тиазол-2-амина (63 г, 0,243 моль) в воде (630 мл) добавляли КОН (218,2 г, 3,89 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при 120°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли по каплям раствор 2-(бромметил)-2-метилгексановой кислоты (70,5 г, 6,31 моль) в THF (210 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь охлаждали до 0°С и подкисляли конц. НСl (рН примерно 2). Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2x350 мл) и объединенный органический слой промывали водой (150 мл) и рассолом (150 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 75 г (неочищенное, коричневая смола).

ЖХ-МС: (Метод А) 376,1 (М⁺), 378,0 (М⁺+2), Rt: 2,44 мин, 92,97% (макс).

Промежуточное соединение 2

7-Бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилгексановой кислоты (Промежуточное соединение 1; 75,0 г, 0,199 моль) в EtOAc (750 мл) при 0°С добавляли по каплям триэтиламин (60,4 г, 0,59 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc, 95,1 г, 0,29 моль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством УЭЖХ) реакционную смесь гасили водой (150 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (150 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 63% (45 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 9.62 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.13 (s, 1Н), 3.83 (s, 3Н), 3.17 (s, 2Н), 1.46-1.44 (m, 2Н), 1.22 (s, 3Н), 1.17-1.14 (m, 4Н), 0.79 (t, J=6,8 Гц, 3Н). ЖХ-МС: (Метод А) 360,0 (М⁺+2), Rt: 2,64 мин, 97,14% (макс).

Промежуточное соединение 3

7-Бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиаз епин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 2; 45 г, 0,12 моль) в йодбензоле (225 мл) добавляли йодид меди(I) (2,4 г, 0,012 моль) и К₂СО₃ (34,6 г, 0,251 моль) и смесь продували азотом в течение 20 минут для дегазирования. Затем добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (8,11 г, 0,025 моль) в атмосфере азота и полученную реакционную смесь нагревали в течение 40 часов при 135°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством УЭЖХ) реакционную смесь фильтровали через целит и набивку целита промывали EtOAc (200 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством перекристаллизации с МеОН с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 88% (47,5 г, не совсем белое твердое вещество).

ЖХ-МС: (Метод Е) 434,1 (М⁺) для 7-бромзамещенного соединения и 482,1 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,23 мин, 99,31% (суммарный для бром- и йод-замещенных соединений) (макс).

Промежуточное соединение 4

7-Бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 3; 47,5 г, 0,109 моль) в THF (475 мл) при 0°С добавляли по каплям диметилсульфид борана (1М в THF, 82 мл, 0,16 моль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 40 часов при 75°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством УЭЖХ) реакционную смесь охлаждали до 0°С и гасили метанолом (475 мл). Полученный раствор нагревали в течение 2 часов при 65°С и затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 8-10% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 46 г (неочищенное, бесцветная жидкость).

ЖХ-МС: (Метод Е) 421,8 (М⁺+2Н), 467,8 (М⁺+Н) Rt: 3,62 мин, 54,71% (макс).

Промежуточное соединение 5

1,1-Диоксид 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксид 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 4; 23 г, 0,05 моль) в уксусной кислоте (230 мл) добавляли вольфрамат натрия (2,3 г, 10% масс./масс.) и Н₂О₂ (30% в воде, 18,6 мл, 0,16 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили водой (200 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (150 мл) и рассолом (150 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 72% (18 г, желтоватое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.47 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.27-7.20 (m, 2Н), 6.99-6.94 (m, 2Н), 6.89-6.85 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.40-3.33 (m, 2Н), 2.53 (s, 2Н), 1.46-1.30 (m, 2Н), 1.27-1.20 (m, 4Н), 1.10-1.06 (m, 3H), 0.78 (t, J=6,80 Гц, 3Н). ЖХ-МС: (Метод Е) 454,1 (М⁺+2Н) для 7-бромзамещенного соединения и 500,1 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,25 мин, 92,56% (макс).

Промежуточное соединение 6

1,1-Диоксид 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 1,1-диоксида 7-бром-3-бутил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксида 3-бутил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 5; 31 г, 0,07 моль) в DMF (310 мл) добавляли тиометоксид натрия (24,01 г, 0,34 моль) при комнатной температуре и полученную смесь перемешивали в течение ночи при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили водой (150 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x300 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (150 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством перекристаллизации с МеОН с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (23 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 10.60 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.18-7.14 (m, 2Н), 6.86 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.77 (s, 1H), 6.76-6.73 (m, 1H), 3.27-3.15 (m, 2Н), 2.54 (s, 2Н), 2.26 (s, 3H), 1.47-1.29 (m, 2Н), 1.27-1.20 (m, 4Н), 1.18-1.12 (m, 3Н), 0.81 (t, J=7,2 Гц, 3Н). ЖХ-МС: (Метод Е) 406,2 (М⁺+Н), Rt: 2,98 мин, 95,07% (макс).

Промежуточное соединение 7

1,1-Диоксид (S)-3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксид (R)-3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

Эти два энантиомера рацемического 1,1-диоксида 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 6; 2,9 г, 0,01 моль) разделяли посредством хиральной СФХ (метод М). Это вещество концентрировали в вакууме при 40°С. Первая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 1, и вторая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 41% (1,2 г, белое твердое вещество). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 10.51 (s, 1Н),7.31 (s, 1H), 7.18-7.14 (m, 2Н), 6.85 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6.77-6.73 (m, 2Н), 3.27-3.15 (m, 2Н), 2.53 (s, 2Н), 2.21 (s, 3H), 1.46-1.31 (m, 2Н), 1.29-1.12 (m, 4Н), 1.06-1.01 (m, 3H), 0.81 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод А) 406,1 (М⁺+Н), Rt: 2,72 мин, 97,0% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,61 мин, 97,78% (макс). Хиральная СФХ: (Метод М) Rt: 2,36 мин, 98,75% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 38% (1,1 г, белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 10.57 (s, 1Н), 7.31 (s, 1Н), 7.18-7.14 (m, 2Н), 6.85 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.77-6.73 (m, 2Н), 3.27-3.15 (m, 2Н), 2.53 (s, 2Н), 2.21 (s, 3H), 1.48-1.31 (m, 2Н), 1.29-1.18 (m, 4Н), 1.12-1.01 (m, 3H), 0.81 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод А) 406,2 (М⁺+Н), Rt: 2,85 мин, 99,57% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,61 мин, 99,83% (макс). Хиральная СФХ: (Метод М) Rt: 3,58 мин, 100% (макс).

Промежуточное соединение 8

Этил-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилат

К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 6; 0,3 г, 0,74 ммоль) в DMA (3 мл) при 0°С добавляли порциями 60% NaH (57 мг, 2,40 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Затем добавляли раствор этил-3-бром-2,2-дифторпропаноата (0,401 г, 1,84 ммоль) в DMA (1 мл) и реакционную смесь нагревали в течение 3 часов при 70°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°С, гасили разбавленной HCl (1,5 н., рН примерно 4) и разбавляли водой (20 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2×15 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 15-20% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 39% (0,15 г, белое твердое вещество).

ЖХ-МС: (Метод А) 522,0 (М⁺+Н), Rt: 3,32 мин, 97,84% (макс).

Промежуточное соединение 9

Этил-(R)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилат и этил-(S)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиаз епин-8-ил)окси)-2-фторакрилат

К перемешиваемому раствору энантиомера 1 1,1-диоксида 3-бутил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 7; 9 г, 22,2 ммоль) в DMA (75 мл) при 0°С добавляли порциями 60% NaH (2,88 г, 72,17 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Затем добавляли раствор этил-3-бром-2,2-дифторпропаноата (11,26 г, 55,5 ммоль) в DMA (15 мл) и реакционную смесь нагревали в течение 3 часов при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную массу охлаждали до 0°С, гасили 1,5 н. HCl (рН примерно 4) и разбавляли водой (100 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x75 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 15-20% EtOAc РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением энантиомера 1 указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 2 указанного в заголовке соединения получали согласно той же методике, начиная с 1,10 г энантиомера 2 Промежуточного соединения 7. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 73% (8,4 г, белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.68-7.62 (m, 2Н), 7.26 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.06 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.91 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.27 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 3.61 (bs, 2Н), 3.49 (s, 2Н), 2.24 (s, 3H), 1.47-1.35 (m, 2Н), 1.32-1.27 (m, 3H), 1.26-1.12 (m, 4Н), 1.10-1.02 (m, 3H), 0.80-0.77 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 522,2 (М⁺+Н), Rt: 3,26 мин, 97,33% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 46% (0,65 г, белое твердое вещество). ЖХ-МС: (Метод Е) 522,2 (М⁺+Н), Rt: 3,27 мин, 97,63% (макс).

Промежуточное соединение 10

2-(((2-Амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилпентановая кислота

К перемешиваемому раствору 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-амина (19,0 г, 0,07 моль) в воде (190 мл) добавляли КОН (65,81 г, 1,173 моль) и реакционную смесь затем перемешивали в течение 16 часов при 120°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли по каплям при 0°С раствор 2-(бромметил)-2-метилпентановой кислоты (19,93 г, 0,09 моль) в THF (60 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали в течение 16 ч при 65°С. После израсходования исходного вещества (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь вливали в охлажденную на льду воду (50 мл) и подкисляли конц. HCl (рН примерно 2). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (100 мл) и рассолом (100 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 25 г (неочищенное, коричневая смола).

ЖХ-МС: (Метод Е) 361,8 (М⁺+Н), Rt: 2,36 мин, 97,93% (макс).

Промежуточное соединение 11

7-Бром-8-метокси-3-метил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензо-1,5-тиазепин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилпентановой кислоты (Промежуточное соединение 10; 25 г, 0,069 моль) в EtOAc (250 мл) при 0°С добавляли по каплям триэтиламин (28,8 мл, 0,207 моль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc; 32,91 г, 0,103 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь гасили водой (100 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 13%-100% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 49,6% (11,8 г, коричневое твердое вещество).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 9.63 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.99-2.95 (m, 2Н), 1.50-1.40 (m, 2Н), 1.24-1.16 (m, 5Н), 0.77 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 344,1 (М⁺), Rt: 2,71 мин, 99,73% (макс).

Промежуточное соединение 12

7-Бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он и 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бенз отиазепин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 7-бром-8-метокси-3-метил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензо-1,5-тиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 11; 11,8 г, 34,27 ммоль) в йодбензоле (118 мл) добавляли йодид меди(Г) (0,65 г, 3,40 ммоль) и К₂СО₃ (9,47 г, 68,5 ммоль) и реакционную смесь продували азотом в течение 20 минут для дегазирования. Затем добавляли трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (2,21 г, 6,85 ммоль) в атмосфере азота и полученную реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 135°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь фильтровали через целит и набивку целита промывали EtOAc (100 мл). Фильтрат промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10-12% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанных в заголовке соединений. Выход: 92% (13,2 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.42-7.38 (m, 3H), 7.28-7.25 (m, 2Н), 7.13-7.10 (m, 2Н), 3.82 (s, 3H), 3.29-3.25 (m, 1Н), 3.16-3.13 (m, 1H), 1.34-1.26 (m, 2H), 1.20-1.13 (m, 5H), 0.73-0.72 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 420,1 (М⁺+Н) для 7-бромзамещенного соединения и 468,1 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,13 мин, 97,05% (макс).

Промежуточное соединение 13

7-Бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она и 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 12; 13,2 г, 31,4 ммоль) в THF (132 мл) при 0°С добавляли по каплям диметилсульфид борана (2М в THF; 47,1 мл, 94,2 ммоль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 часов при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством УЭЖХ) реакционную смесь охлаждали до 0°С, гасили метанолом (15 мл) и нагревали в течение 2 часов при 65°С. Полученную реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой (100 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (100 мл) и рассолом (100 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 12,4 г (97%, белая смола).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.25-7.13 (m, 3H), 7.06-7.02 (m, 1H), 6.83-6.77 (m, 2Н), 6.75-6.72 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.81-2.70 (m, 2Н), 2.64-2.60 (m, 2Н), 1.23-1.16 (m, 4Н), 0.89 (s, 3H), 0.74 (s, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 406,1 (М⁺+Н) для 7-бромзамещенного соединения и 454,1 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения; Rt: 3,55 мин, 97,03% (макс).

Промежуточное соединение 14

1,1-Диоксид 7-бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксид 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 13; 12,4 г, 30,51 ммоль) в смеси THF (87 мл) и воды (37 мл) добавляли оксон (93,79 г, 30,5 ммоль) при 0°С. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством УЭЖХ) реакционную смесь фильтровали через воронку Бюхнера и фильтрат экстрагировали EtOAc (2x200 мл). Объединенный органический слой промывали водой (100 мл) и рассолом (100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Это неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 7% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанных в заголовке соединений. Выход: 90% (7,0 г, не совсем белая смола).

¹Н ЯМР (400 400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.47 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.28-7.20 (m, 2Н), 6.98-6.94 (m, 2Н), 6.89-6.85 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.52-3.48 (m, 2Н), 3.39-3.36 (m, 2Н),1.52-1.41(m, 1H), 1.29-1.25 (m, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.74-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 438,0 (М⁺+Н) для 7-бромсоединения и 485,7 (М⁺+Н) для 7-йодсоединения, Rt: 3,13 мин, 95,69% (макс).

Промежуточное соединение 15

1,1-Диоксид 8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 1,1-диоксида 7-бром-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксида 7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 14; 5,0 г, 11,4 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли при комнатной температуре тиометоксид натрия (3,99 г, 57 ммоль) и реакционную смесь затем перемешивали в течение 16 часов при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (100 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 20% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 89% (4,0 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 10.60 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.18-7.14 (m, 2Н), 6.86-6.84 (m, 2Н), 6.78-6.73 (m, 2Н), 3.23-3.16 (m, 4Н), 2.21 (s, 3H), 1.52-1.48 (m, 1H), 1.27-1.26 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.77-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 392,2 (М⁺+Н), Rt: 2,83 мин, 97,89% (макс).

Промежуточное соединение 16

трет-Бутил-(Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилат

К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 15; 300 мг, 0,76 ммоль) в THF (5 мл) при комнатной температуре добавляли DABCO (0,008 г, 0,076 ммоль) и трет-бутилпропиолат (0,144 г, 1,149 ммоль) и реакционную смесь затем перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2x10 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и органическую часть концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 16% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (0,33 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.67 (d, J=12,0 Гц, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.27 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.09 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6.93 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.81 (s, 1H), 5.39 (d,.J=12,4 Гц, 1H), 3.70 (s, 2Н), 3.41 (s, 1Н), 3.36-3.33 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.44 (s, 9Н), 1.26-1.16 (m, 4Н), 1.02 (s, 3H), 0.73 (t, J=6,8 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 462,1 (М⁺-^tBu+Н), Rt: 3,34 мин, 97,13% (макс).

Промежуточное соединение 17

Этил-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилат

К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 15; 0,3 г, 0,76 ммоль) в DMA (4 мл) при 0°С добавляли порциями 60% NaH (0,1 г, 2,49 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°С. Затем добавляли раствор этил-3-бром-2,2-дифторпропаноата (0,42 г, 1,91 ммоль) в DMA (1 мл) и реакционную смесь нагревали в течение 3 часов при 70°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную массу охлаждали до 0°С, гасили разбавленной HCl (1,5 н., рН примерно 4) и разбавляли водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x10 мл) и объединенный органический слой промывали рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 15-20% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 36% (0,14 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.69 (s, 1H), 7.63 (d, J=9,6 Гц, 1Н), 7.25 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.05 (d, J=7,2 Гц, 2Н), 6.91 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.26 (q, J=6,8 Гц, 2Н), 3.74 (s, 2Н), 3.35 (s, 2Н), 2.24 (s, 3H), 1.45-1.29 (m, 4Н), 1.27-1.16 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.75-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 508,2 (М⁺+Н), Rt: 3,16 мин, 96,26% (макс).

Промежуточное соединение 18

2-(((2-Амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилбутановая кислота

К перемешиваемому раствору 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-амина (9 г, 34,7 ммоль) в воде (90 мл) добавляли КОН (31,2 г, 555,9 ммоль) и Na₂SO₃ (4,3 г, 34,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при 120°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Раствор 2-(бромметил)-2-метилбутановой кислоты (11,6 г, 52,0 ммоль) в THF (20 мл) добавляли по каплям при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали в течение 16 часов при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь вливали в охлажденную на льду воду и подкисляли конц. HCl (рН примерно 2). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 10,5 г (неочищенное, черная жидкость).

ЖХ-МС: (Метод Е) 348,1 (М⁺+Н), Rt: 2,21 мин, 97,14% (макс).

Промежуточное соединение 19

7-Бром-3-этил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 2-(((2-амино-4-бром-5-метоксифенил)тио)метил)-2-метилбутановой кислоты (Промежуточное соединение 18; 10,1 г, 29 ммоль) в DCM (100 мл) при 0°С добавляли по каплям триэтиламин (7,81 мл, 58 ммоль) и раствор 1-пропанфосфонового ангидрида (50% в EtOAc, 18,4 г, 58 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили водой (50 мл) и водный слой экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество растирали с охлажденным метанолом с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 54% (12 г, коричневое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 9.64 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.13 (s, 1Н), 3.83 (s, 3H), 3.06-2.94 (m, 2H), 1.57-1.46 (m, 2H), 1.21 (s, 3H), 0.76 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 332,1 (М⁺+2), Rt: 2,56 мин, 90,58% (макс).

Промежуточное соединение 20

7-Бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он и 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-он

К перемешиваемому раствору 7-бром-3-этил-8-метокси-3-метил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 19; 5,8 г, 17,5 ммоль) в йодбензоле (58 мл) добавляли йодид меди(I) (0,33 г, 1,75 ммоль) и К₂СО₃ (4,83 г, 35 ммоль) и реакционную смесь продували азотом 20 минут для дегазирования. Затем добавляли в атмосфере азота трис[2-(2-метоксиэтокси)этил]амин (1,13 г, 3,50 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 135°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит и набивку целита промывали EtOAc (50 мл). Фильтрат промывали водой (25 мл) и рассолом (25 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество растирали с петролейным эфиром с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 98% (7 г, серое твердое вещество).

ЖХ-МС: (Метод Е) 406,1 (М⁺) для 7-бромзамещенного соединения и 454,0 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,00 мин, 95,16% (макс).

Промежуточное соединение 21

7-Бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин и 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она и 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3-дигидро-1,5-бензотиазепин-4(5Н)-она (Промежуточное соединение 20; 7 г, 17,2 ммоль) в THF (70 мл) при 0°С добавляли по каплям диметилсульфид борана (2М в THF; 26 мл, 51,6 ммоль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 часов при 65°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь охлаждали до 0°С, гасили метанолом (15 мл) и затем нагревали в течение 2 часов при 65°С. Полученную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Полученный остаток разбавляли водой (50 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 6,5 г (неочищенное, бесцветное масло).

ЖХ-МС: (Метод Е) 391,8 (М⁺+Н) для 7-бромзамещенного соединения и 439,7 (М⁺+Н) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,52 мин, 95,99% (макс).

Промежуточное соединение 22

1,1-Диоксид 7-бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксид 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 7-бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 21; 6,5 г, 16,5 ммоль) в THF (46 мл) и воде (20 мл) добавляли при 0°С оксон (50,9 г, 16,56 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь фильтровали через воронку Бюхнера. Фильтрат экстрагировали EtOAc (2x100 мл) и объединенный органический слой промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 13% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 79% (5,5 г, белое твердое вещество).

ЖХ-МС: ((Метод Е) 424,1 (М⁺+Н) для 7-бромзамещенного соединения и 473,1 (М⁺+2) для 7-йодзамещенного соединения, Rt: 3,03 мин, 96,73% (макс).

Промежуточное соединение 23

1,1-Диоксид 3-этил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина

К перемешиваемому раствору смеси 1,1-диоксида 7-бром-3-этил-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина и 1,1-диоксида 3-этил-7-йод-8-метокси-3-метил-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 22; 5,5 г, 12,9 ммоль) в DMF (55 мл) добавляли при комнатной температуре тиометоксид натрия (4,54 г, 64,8 ммоль) и реакционную смесь затем перемешивали в течение 16 часов при 65°С.После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили водой (15 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x50 мл) и объединенный органический слой промывали рассолом (15 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 30% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (4 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6: δ 10.60 (d,J=4,8 Гц, 1H), 7.32 (d, J=4,8 Гц, 1H), 7.15-7.14 (m, 2Н), 6.84-6.71 (m, 4Н), 3.83-3.72 (m, 2Н), 3.18-3.13 (m, 2Н), 2.22 (s, 3H), 1.56-1.49 (m, 1H), 1.31-1.28 (m, 1H), 0.99 (s, 3H), 0.81-0.80 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 378,2 (М⁺+Н), Rt: 2,71 мин, 97,90% (макс).

Промежуточное соединение 24

Этил-(Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилат

К суспензии 60% NaH (69 мг, 1,72 ммоль) в DMF (1 мл) при 0°С добавляли раствор 1,1-диоксида 3-этил-8-гидрокси-3-метил-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепина (Промежуточное соединение 23; 200 мг, 0,52 ммоль) в DMF (2 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут. Затем добавляли 3-хлор-2,2-фторэтилпропионат (228 мг, 1,32 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 3 часов при 60°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили разбавленной HCl (1,5 н., 3 мл) и концентрировали в вакууме. Полученный остаток распределяли между охлажденной на льду водой (5 мл) и EtOAc (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x8 мл) и объединенный органический слой промывали охлажденной на льду водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 16% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 76% (220 мг, бледно-желтое твердое вещество).

ЖХ-МС: (Метод А) 494,0 (М⁺+Н), Rt: 2,84 мин, 53,89% (макс).

Пример 1

(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловая кислота

К перемешиваемому раствору этил-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилата (Промежуточное соединение 8; 0,15 г, 0,29 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (4:1, 5 мл) добавляли гидроксид лития (20 мг, 0,86 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., рН примерно 4) и разбавляли охлажденной на льду водой (10 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x10 мл) и объединенный органический слой промывали водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 50% (70 мг, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.51 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.57 (d, J=4,8 Гц, 1H), 7.25 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.05 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 6.90 (t, J=8,8 Гц, 1Н), 6.83 (s, 1Н), 3.40-3.36 (m, 4Н), 2.24 (s, 3H), 1.47 (bs, 1H), 1.34-1.06 (m, 6Н), 1.02 (s, 3H), 0.78 (t, J=6,8 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 494,0 (М⁺+Н), Rt: 3,01 мин, 99,84% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,71 мин, 98,85% (макс).

Примеры 2 и 3

(R)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловая кислота и (S)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловая кислота

К перемешиваемому раствору энантиомера 1 этил-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилата (Промежуточное соединение 9; 8,4 г, 16,1 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (7:3, 84 мл) добавляли гидроксид лития (1,15 г, 48,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., рН примерно 4) и разбавляли охлажденной на льду водой (25 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x30 мл) и объединенный органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 2 указанного в заголовке соединения получали согласно той же методике, начиная с 0,65 г энантиомера 2 Промежуточного соединения 9. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 96% (7,6 г, не совсем белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.56(s, 1H), 7.61-7.57(m, 2Н), 7.25 (1,J=8,4 Гц, 2Н), 7.05 (d, J=7,2 Гц, 2Н), 6.90 (t, J=7,6 Гц, 1H), 6.82 (s, 1Н), 3.62 (bs, 2Н), 3.40 (s, 2Н), 2.24 (s, 3H), 2.24 (bs, 1H), 1.32 (t, J=11,2 Гц, 1H), 1.28-1.05 (m, 4Н), 1.01 (s, 3H), 0.78 (t, J=6,8 Гц, 3H). Аналитические данные: ЖХ-МС: (Метод Е) 493,8 (М⁺+Н), Rt: 3,23 мин, 98,22% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,69 мин, 99,32% (макс). Аналитические данные: СФХ: (Метод Н) Rt: 3,76 мин, 100% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 88% (0,54 г, не совсем белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.56 (s, 1H), 7.54-7.50 (m, 2Н), 7.18 (t,J=7,6 Гц, 2Н), 6.97 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.83 (t, J=7,2 Гц, 1Н), 6.75 (s, 1H), 3.63 (bs, 2Н), 3.33 (s, 2Н), 2.17 (s, 3H), 1.39 (m, 1Н), 1.24 (m, 1H), 1.16-1.02 (m, 4Н), 0.94 (s, 3H), 0.70 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 493,8 (М⁺+Н), Rt: 2,96 мин, 95,48% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,70 мин, 98,38% (макс). СФХ: (Метод Н) Rt: 3,02 мин, 98,36% (макс).

Пример 4

(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота

К перемешиваемому раствору трет-бутил-(Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилата (Промежуточное соединение 16; 0,33 г, 0,63 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (2 мл) при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь вливали в охлажденную на льду воду (15 мл) и водный слой экстрагировали DCM (2x20 мл). Объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 50% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш). Полученное соединение подвергали поторной очистке посредством преп-ВЭЖХ (Метод А) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 47% (140 мг, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 7.78 (d, J=12,4 Гц, 1Н), 7.68 (s, 1H), 7.36-7.32 (m, 2Н), 7.13-7.05 (m, 3H), 6.67 (s, 1Н), 5.55 (d, J=12,0 Гц, 1H), 3.90 (d, J=15,2 Гц, 1H), 3.67 (d, J=14,4 Гц, 1H), 3.29-3.16 (m, 2Н), 2.18 (s, 3H), 1.55-1.50 (m, 1H), 1.34-1.22 (m, 3H), 1.14 (s, 3H), 0.83 (t, J=7,2 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод А) 462,1 (М⁺+Н), Rt: 2,56 мин, 98,79% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,307 мин, 98,20% (макс).

Примеры 5 и 6

(S)-(Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота и (R)-(Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота

Эти два энантиомера рацемической (Е)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акр иловой кислоты (Пример 4; 0,1 г, 0,21 ммоль) разделяли посредством хиральной СФХ (метод Н). Это вещество концентрировали в вакууме при 40°С. Первая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 1, и вторая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 2. Каждое из полученных соединений растворяли в EtOAc (20 мл) и EtOAc слой промывали 1,5 н. HCl (2x10 мл), водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанных в заголовке соединений. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Аналитические данные для AS0616: Выход: 45% (45 мг, белое твердое вещество). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 12.26 (s, 1Н), 7.71 (d, J=12,4 Гц, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (t, J=8,4 Гц, 2H), 7.08 (d, J=7,6 Гц, 2H), 6.92 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.46 (d, J=12,0 Гц, 1H), 3.85-3.60 (m, 2H), 3.45-3.35 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.54-1.48 (m, 1H), 1.33-1.16 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.75-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод A) 462,0 (M⁺+H), Rt: 2,59 мин, 96,53% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,30 мин, 97,11% (макс). Хиральная СФХ: (Метод Н) Rt: 3,69 мин, 99,03% (макс).

Аналитические данные для AS0617: Выход: 43% (43 мг, белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 12.25 (s, 1H), 7.71 (d, J=12,0 Гц, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.26 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.08 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.92 (t, J=7,2 Гц, 1Н), 6.83 (s, 1Н), 5.46 (d, J=12,4 Гц, 1Н), 4.11-3.65 (m, 2Н), 3.50-3.35 (m, 2Н), 2.23 (s, 3H), 1.55-1.45 (m, 1H), 1.33-1.21 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.75-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 461,8 (М⁺+Н), Rt: 2,50 мин, 97,16% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,30 мин, 97,07% (макс). Хиральная СФХ: (Метод Н) Rt: 4,83 мин, 99,67% (макс).

Пример 7

(Z)-2-Фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота

К перемешиваемому раствору этил-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акрилата (Промежуточное соединение 17; 0,14 г, 0,27 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (4:1, 3 мл) добавляли гидроксид лития (0,023 г, 0,55 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь подкисляли разбавленной HCl (1,5 н., рН примерно 4) и разбавляли охлажденной на льду водой (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x10 мл) и объединенный органический слой промывали водой (10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 84% (0,11 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.59 (s, 1Н), 7.58-7.56 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.25 (t, J=8,4 Гц, 2H), 7.04 (d, J=7,6 Гц, 2H), 6.90 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.83 (s, 1H), 3.69 (bs, 2H), 3.40 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.45 (bs, 1H), 1.31-1.24 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.75-0.73 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод E) 480,2 (M⁺+H), Rt: 2,85 мин, 97,16% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,43 мин, 95,69% (макс).

Примеры 8 и 9

(R)-(2)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота и (S)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловая кислота

Эти два энантиомера рацемической (Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты (Пример 7; 100 мг, 0,11 ммоль) разделяли посредством хиральной СФХ (метод Н). Это вещество концентрировали в вакууме при 40°С. Первая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 1, и вторая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 38% (38 мг, белое твердое вещество). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.55 (s, 1H), 7.61-7.57 (m, 2Н), 7.25 (t, J=8,0 Гц, 2Н), 7.05 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.90 (t, J=7,6 Гц, 1Н), 6.84 (s, 1Н), 3.99-3.71 (m, 2Н), 3.45-3.35 (m, 2Н), 2.25 (s, 3H), 1.55-1.43 (m, 1H), 1.35-1.24 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.77-0.65 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 479,8 (М⁺), Rt: 2,45 мин, 98,61% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,43 мин, 97,96% (макс). Хиральная СФХ: (Метод Е) Rt: 5,08 мин, 100% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 30% (30 мг, белое твердое вещество). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.57 (s, 1H), 7.62 (m, 2Н), 7.25 (t, J=8,0 Гц, 2Н), 7.05 (d, J=7,2 Гц, 2Н), 6.90 (t, J=7,6 Гц, 1H), 6.84 (s, 1H), 4.01-3.72 (m, 2Н), 3.45-3.35 (m, 2Н), 2.25 (s, 3H), 1.54-1.44 (m, 1H), 1.31-1.23 (m, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.76-0.69 (m, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 479,8 (М⁺), Rt: 2,45 мин, 98,49% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,43 мин, 96,61% (макс). Хиральная СФХ: (Метод Е) Rt: 6,66 мин, 100% (макс).

Пример 10

(Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловая кислота

К перемешиваемому раствору этил-(Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакрилата (Промежуточное соединение 24; 220 мг, 0,58 ммоль) в смеси 1,4-диоксана и воды (4:1, 5 мл) добавляли гидроксид лития (50 мг, 1,17 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (1,5 н., 2 мл, рН примерно 4) и концентрировали в вакууме. Полученный остаток распределяли между охлажденной на льду водой (5 мл) и EtOAc (5 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (2x5 мл) и объединенный органический слой промывали охлажденной на льду водой (5 мл) и рассолом (5 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество растирали с гексаном с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 22% (60 мг, бледно-желтое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.59 (s, 1H), 7.63-7.58 (m, 2Н), 7.24 (t, J=8,4 Гц, 2Н), 7.02 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6.90-6.86 (m, 2Н), 3.75 (s, 2Н), 3.17 (s, 2Н), 2.26 (s, 3H), 1.65-1.48 (m, 1H), 1.34-1.29 (m, 1Н), 1.00 (s, 3H), 0.79 (t, J=7,6 Гц, 3H). ЖХ-МС: (Метод Е) 466,1 (М⁺+Н), Rt: 2,36 мин, 99,05% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,15 мин, 96,39% (макс).

БИОЛОГИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ

Протокол анализа IBAT (ч/м)

10000 клеток (клетки со сверхэкспрессией IBAT человека или мыши) высевали в 96-луночные планшеты (Corning CLS3809) в 200 мкл среды MEM-альфа (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего пуромицин (Gibco Al 113803) (10 мкг/мл) и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 48 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации основной среды MEM-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце для обеспечения максимального удаления остаточной среды. Разведения тестируемого ингибитора (максимальная тестовая концентрация 10 мкМ, 3-кратное серийное разведение, 10 точек), приготовленные в DMSO (Sigma D2650), добавляли в инкубационную смесь (поддерживая конечную концентрацию DMSO 0,2%), содержащую 0,25 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma Т4009). Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тестируемые ингибиторы (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре, а затем считывали показания планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку установлено 120 секунд).

Протокол LBAT (ч/м)

20000 клеток (клетки со сверхэкспрессией LBAT человека или мыши) засевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды MEM-альфа (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего генетицин (Gibco 10131-027) (1 мг/мл) и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 24 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации основной среды MEM-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды. Для человеческого LBAT инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO (Sigma D2650), 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma Т4009) (поддерживая конечную концентрацию DMSO 0,2%). Для мышиного LBAT инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO, 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты и 25 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты, поддерживая конечную 0,2% концентрацию DMSO).

Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тестируемые ингибиторы (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре, затем считывали показания с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Двунаправленный анализ проницаемости (клетки Сасо-2)

Клетки Сасо-2 (Evotec) высевали при плотности 70000 клеток/лунку в 24-луночные планшеты для культивирования клеток Millicell® со вставками и выдерживали в инкубаторе (37°С, 5% СС% 95% RH) в течение 21 суток со сменой среды через день.

Исходные растворы (10 мМ) тестируемых соединений, атенолола (маркер низкой проницаемости), пропранолола (маркер высокой проницаемости) и дигоксина (субстрат для пути транспорта P-gp) готовили в диметилсульфоксиде (DMSO). Промежуточный основной раствор (1 мМ) получали разбавлением 10 мкл 10 мМ основного раствора 90 мкл чистого DMSO. Рабочий исходный раствор (10 мкМ) готовили разбавлением 50 мкл 1 мМ 4950 мкл буфера FaSSIF. После добавления соединений к FaSSIF образцы подвергали обработке ультразвуком в течение 2 часов и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 минут при 37°С. 4 мл полученной надосадочной жидкости использовали непосредственно в анализе. Конечная концентрация DMSO в экспериментах переноса составляла 1%.

В день анализа монослои Сасо-2 дважды промывали буфером для переноса (HBSS, рН 7,4) и предварительно инкубировали в течение 30 минут (37°С, 5% СО₂, 95% RH) в инкубаторе. Электрическое сопротивление монослоев измеряли с помощью системы Millicell® - ERS. Для анализа были выбраны монослои со значениями трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) более 350 Ом⋅см².

Анализ проводили в направлении абсорбции (А2 В) и в направлении секреции (В2А). Эксперименты по переносу инициировали добавлением транспортного буфера для анализа (буфер FaSSIF, приготовленного в HBSS), состоящего из соединений, в донорный отсек (апикальная камера А-В; базолатеральная камера В-А) в дублируемых (n=2) лунках. Не содержащий лекарственное средство буфер HBSS (рН 7,4), содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), вводили в приемные отсеки (А-В-базолатеральный; В-А-апикальный). Объемы апикального и базолатерального отделов составляли 0,4 и 0,8 мл, соответственно. После добавления дозируемого раствора планшеты инкубировали в инкубаторе в течение 120 минут при 37°С. Через 120 минут образцы донора и получателя собирали и сопоставляли матрицу (1:1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Матрицу дозируемых образцов приводили в соответствие (1: 1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Образцы обрабатывали, добавляя ацетонитрил, содержащий внутренний стандарт (60 мкл исследуемого образца + 200 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт толбутамид, 500 нг/мл). Образцы встряхивали и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Полученную надосадочную жидкость (100 мкл) разбавляли 100 мкл воды и переносили в свежие 96-луночные планшеты. Концентрацию соединений в образцах анализировали методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией (ЖХ-МС/МС) с использованием биоаналитического метода исследовательского уровня, если применимо.

Среднюю кажущуюся проницаемость (Рарр,х10^-6 см/сек) тестируемых соединений, атенолола, пропранолола и дигоксина рассчитывали следующим образом:

где dq/dt представляет собой скорость переноса (скорость переноса соединения в приемном отсеке), СО представляет собой начальную концентрацию в донорном отсеке, А представляет собой площадь поверхности эффективной мембраны фильтра.

Протокол анализа на основе HepaRG

Криоконсервированный флакон с дифференцированными клетками HepaRG (Biopredic International HPR116080) размораживали в среде HepaRG для размораживания/посева/общего назначения (Biopredic International ADD670C) с добавлением 200 мМ глутамакса (Gibco 35050061) в соответствии с протоколом, предоставленным Biopredic International. 70000 клеток на лунку высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды HepaRG для размораживания/посева/общего назначения с добавлением 200 мМ глутамакса и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 24 часов. После инкубации посевную среду заменяли средой для поддержания/метаболизма HepaRG (Biopredic International ADD620C) и инкубировали в течение 6 суток со свежей средой для поддержания/метаболизма HepaRG каждые 48 часов. Через 7 суток инкубации после посева инкубационную среду сливали из лунок и клетки промывали два раза 250 мкл базальной среды William's Е (Gibco 12551032). Каждый раз после декантации базальной среды William's Е планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды. Инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO (Sigma D2650)) в среду William's Е (базальную), содержащую 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma T4009) (поддерживая конечную концентрацию 0,2% DMSO). Затем в лунки (в двух экземплярах) добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тетсируемые ингибиторы, и планшеты инкубировали в течение 30 минут в инкубаторе с 5% СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). После каждой промывки планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре, затем считывали показания с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Приготовление разведений тестируемых соединений

Все тестируемые соединения были предоставлены в форме порошка при комнатной температуре. Готовили 10 мМ исходных тестируемых соединений в DMSO, разделяли на аликвоты и хранили при -20°С. Из исходного 10 мМ DMSO соединений готовили 3-кратное серийное разведение в DMSO, чтобы получить в общей сложности 10 разведений тестируемых соединений. 0,5 мкл этого разведения в DMSO добавляли к 250 мкл базальной среды без FBS, содержащей 3Н-таурохолевую кислоту и охлажденную таурохолевую кислоту, для приготовления инкубационной смеси.

Исследования биодоступности

Использовали мышей-самцов (C57BL/6 или CD1) или крыс Wistar в возрасте 8-9 недель. Для каждого тестируемого соединения использовали две группы по 3 животных в каждой. Одной группе вводили однократную внутривенную дозу 1 мг/кг (носитель 100% DMSO) через хвостовую вену, а другой группе вводили однократную пероральную дозу 10 мг/кг через желудочную иглу. Группу, которой вводили пероральную дозу, не кормили в течение ночи. Образцы крови собирали через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после внутривенного введения и через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после перорального введения. Кровь брали из подкожной вены. В качестве антикоагулянта использовали 0,2% EDTA. Образцы анализировали с помощью биоаналитического метода исследовательской степени, разработанного для оценки тестируемого соединения в плазме с использованием системы ЖХ-МС/МС.

Результаты

Биологические данные для соединений Примеров показаны в Таблице 8 ниже.

Выделение желчных кислот с мочой у собак

В данном исследовании использовали самцов собак породы бигль. Животным вводили соединение Примера 2 один раз в сутки в течение трех суток в дозах 10 и 50 мг/кг, соответственно. Образцы исходной мочи собирали до начала исследования путем цистоцентеза. Затем образцы мочи собирали через 2 ч и 8 ч после введения дозы на 1 сутки и 3 сутки. Анализ мочи на желчные кислоты и креатинин выполняли в лаборатории клинической химии.

Результаты показаны на Фиг. 1. Было обнаружено, что общее количество желчных кислот в моче увеличилось примерно в 5-10 раз по сравнению с исходным уровнем после лечения соединением Примера 2.

Модель PD: Оценка влияния тестируемого соединения на общие уровни желчных кислот у самцов мышей C57BL6

Мышей C57BL/6N Тас в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на х экспериментальных групп: (1) контрольная, носитель, и (2) тестируемое соединение у мг/кг перорально один раз в день. Животным вводили тестируемое соединение в течение 7 суток. На 5 сутки исследования животных по отдельности помещали в свежие клетки. На 7 сутки из каждой клетки собирали фекалии с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать печень и терминальную часть подвздошной кишки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела и потребление пищи измеряли два раза в неделю. Липидные профили сыворотки анализировали в образцах сыворотки на 7 сутки. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряют в образцах сыворотки на 7 сутки. Фекальное выделение желчи измеряют в образце кала на 7 сутки. Экспрессию CYP7A1 и SHP в печени количественно оценивают в образцах печени на 7 сутки. Триглицериды печени и общий холестерин анализируют в образцах печени на 7 сутки.

Модель желчных кислот в моче: оценка тестируемых соединений на уровни желчных кислот в моче у самцов мышей C57BL/6.

Мышей C57BL/6N Тас в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на х экспериментальных групп: (1) контрольная, носитель, и (2) тестируемое соединение у мг/кг перорально один раз в день. Животным вводили тестируемое соединение в течение 7 суток. На 6 сутки исследования животных переводили в метаболическую клетку. На 7 сутки из каждой метаболической клетки собирали фекалии и мочу с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать почки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела измеряют два раза в неделю. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряют в образцах сыворотки на 7 сутки. Экскрецию желчных кислот с калом измеряют в образце кала на 7 сутки. Выведение желчных кислот с мочой измеряют в образце на 7 сутки. Почечную экспрессию ASBT, OSTa, OSTAb и MRP2 количественно определяют в образцах на 7 сутки.

Группа изобретений относится к области органической химии и включает соединения: (Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты, (R)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты, (S)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты, (E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (S)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (R)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (R)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (S)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты, (Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическую композицию на их основе и применение. Технический результат: производные 1,5-бензотиазепина, обладающие активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT). 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 8 табл., 10 пр.

1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из:

(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(R)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(S)-(Z)-3-((3-бутил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(S)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(R)-(E)-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(R)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты;

(S)-(Z)-2-фтор-3-((3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-3-пропил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)акриловой кислоты; и

(Z)-3-((3-этил-3-метил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,5-бензотиазепин-8-ил)окси)-2-фторакриловой кислоты;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот в печени (LBAT), содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п. 1 и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

3. Применение соединения по п. 1 в качестве лекарственного средства, обладающего активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот в печени (LBAT).

4. Применение по п. 3, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения сердечно-сосудистого заболевания или нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, такого как гиперхолестеринемия; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, предпочтительно катаракта, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатия, невропатия, нефропатия и замедленное заживление ран, ишемия тканей, диабетическая стопа, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильная стенокардия, стабильная стенокардия, инсульт, окклюзионная болезнь периферических артерий, кардиомиопатия, сердечная недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемия, гиперинсулинемия, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемия, гиперлипидемия, предпочтительно гипертриглицеридемия, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензия; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

5. Применение по п. 3, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения заболевания или расстройства желудочно-кишечного тракта, такого как запор, предпочтительно хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами; болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки и рефлюксная болезнь и ее осложнения, предпочтительно пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

6. Применение по п. 3, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения заболевания или нарушения печени, такого как наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчных кислот; врожденные аномалии желчных протоков; атрезия желчевыводящих путей; атрезия желчевыводящих путей после проведения операции по Касаи; посттрансплантационная атрезия желчевыводящих путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), предпочтительно PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), предпочтительно BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (PBC); фиброз печени; неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальная гипертензия; холестаз; холестаз при синдроме Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LCS1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатия при СПИД; ишемическая холангиопатия; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1 типа (BAS дефект 1 типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (EPP); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, предпочтительно нарушения сердечного ритма, более предпочтительно фибрилляция предсердий, при аномальном профиле сывороточных желчных кислот, кардиомиопатия, связанная с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; поликистоз печени; вирусный гепатит, предпочтительно гепатит A, гепатит B, гепатит C, гепатит D и гепатит E; гепатоцеллюлярная карцинома (гепатома); холангиокарцинома; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы; или в усилении терапии кортикостероидами при заболевании печени.

7. Применение по п. 3, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения синдромов гиперабсорбции, предпочтительно абеталипопротеинемии, семейной гипобеталипопротеинемии (FHBL), болезни задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемии; гипервитаминоза и остеопетроза; гипертензии; клубочковой гиперфильтрации; поликистоза почек (PKD), предпочтительно аутосомно-доминантного поликистоза почек (ADPKD) и аутосомно-рецессивного поликистоза почек (ARPKD); и кожного зуда при почечной недостаточности; или в защите от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.