Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано в диагностике интраэпителиальной неоплазии при цервикальном скрининге.
Заболеваемость раком шейки матки (РШМ) в России остается по-прежнему очень высокой и составляет 5,2 на 100 тыс.женского населения. Несмотря на то, что РШМ относится к заболеваниям «визуальной локализации», смертность от данного заболевания в России в 2021 году составила 4,3%, заняв десятое место среди онкологических заболеваний. В последние годы отмечается «омоложение» РШМ за счет увеличение числа заболевших женщин в репродуктивном возрасте, особенно среди женщин в возрасте до 30 лет.
Эпидемиологические и экспериментальные данные достоверно доказывают ключевую роль вируса папилломы человека (ВПЧ) в патогенезе РШМ. Необходимо отметить, что роль ВПЧ в канцерогенезе отражена в новой классификации ВОЗ опухолей женской репродуктивной системы 2020 года - опухоли шейки матки градируются на «ВПЧ-ассоциированные» и «ВПЧ-независимые» плоскоклеточные карциномы и аденокарциномы.
Наиболее часто при РШМ выявляются 16 и 18 генотипы вируса папилломы человека высококанцерогенного риска (ВПЧ ВКР) (см. Прилепская В.Н. ВПЧ-ассоциированные заболевания шейки матки: скрининг, методы обследования, принципы лечения. Гинекология. 2019;21(3):6-8; см. Короленкова Л.Г. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии и ранние формы рака шейки матки: клинико-морфологическая концепция цервикального канцерогенеза. - М.,2017. - илл. - С. 300.см.; см. Crossley В, Crossley J. A review of the use of human papilloma virus (HPV) in cervical screening. Br J Biomed Sci 2017; 74).
Цервикальные интраэпителиальные неоплазии Intraepithelial Neoplasia -CIN) - это группа заболеваний, характеризующихся нарушением созревания, дифференцировки и стратификации многослойного плоского эпителия шейки матки. CIN трех степеней инициируются персистирующей инфекцией, вызванной вирусами папилломы человека высокого канцерогенного риска (ВПЧ ВКР), которая поддерживает прогрессию повреждений до инвазии.
CIN I характеризуется высокой вероятностью регрессии и не относится к предраку шейки матки, небольшая часть CIN I переходит в CIN П-III -истинные предраковые поражения. Возможно развитие CIN П-III без формирования CIN I. Они предшествуют раку шейки матки (РШМ) на протяжении нескольких лет и даже десятилетий. За столь длительный период CIN могут быть выявлены и излечены до развития инвазивного рака органосохраняющими эксцизиями (см. Серов В. Н. и др. Руководство по амбулаторно-поликлинической помощи в акушерстве и гинекологии //М.: ГЭОТАР-Медиа. - 2016., ГЭОТАР-Мед. Москва; см. Апгар Б.С, Броцман Г.Л., Шпицер М. Клиническая кольпоскопия. Практическое руководство //М.: Практическая медицина. - 2014 - Т. 384., Практическ. Москва; см. Роговская С.И., Липова Е.В. Шейка матки, влагалище, вульва//Физиология, патология, кольпоскопия, эстетическая коррекция: Руководство для практикующих врачей.-2014-С. 52-71).
Одним из путей снижения смертности от РШМ является цервикальный скрининг.В последние годы в программы скрининга было предложено включать совместно цитологическое исследование с выявлением ВПЧ ВКР методом ПНР в реальном времени, что повысит эффективность скрининга РШМ и позволит увеличить временной интервал между исследованиями с трех до пяти лет у женщин после 30 лет.
В настоящее время в клинических рекомендациях «Цервикальная интраэпителиальная неоплазия, эрозия и эктропион шейки матки» 2020-2021-2022 г. г.«…цитологическое исследование мазков с экзо- и эндоцервикса с использованием различных методов окраски является первым и основнымнеинвазивным скрининтовым тестом, который позволяет эффективно и своевременно выявить патологический процесс на ранних стадиях и оценить степень интраэпителиального поражения плоского эпителия (SIL)…» (см. https://base.garant.ru/74922102/).
В проведенных крупномасштабных исследованиях, было установлено, что чувствительность, специфичность и точность метода жидкостной цитологии (ЖЦ) составляет 78,3%, 95,9% и 85% соответственно. На долю неинформативного материала приходится не более 0,55%.
ЖЦ позволяет длительно хранить, что позволяет транспортировать биологический материал из отдаленных медицинских организаций. При работе с клеточным образцом можно проводить дополнительные исследования (ВПЧ-тест, иммуноцитохимическое и молекулярно-генетические исследования) без повторного взятия материала у женщины.
Крайне важным при проведении скрининга является использование единой терминологии и системы интерпретации клеточных изменений.
Сегодня в большинстве стран мира, в том числе и в России, цитологические заключения принято описывать согласно унифицированной терминологии классификации Бетесда, 2014 г.: LSIL - интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности (HPV, CIN I и койлоцитарную атипию), HSIL - интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности (CIN2, CIN III, CIS). В настоящее время гинекологи применяют алгоритмы ведения пациенток с патологическими изменениями шейки матки, разработанные с учетом данной классификации.
Для повышения специфичности и точности цитологического метода рекомендуется использовать иммуноцитохимический метод определения коэкспрессии p16ink4a и Ki-67, которое позволяет врачу выбрать консервативную или агрессивную тактику лечения, помогает определиться с тактикой ведения женщин, у которых обнаружен ВПЧ ВКР и отсутствуют отклонения в цитологическом исследовании. Но цитологическое заключениеи клинические данные пациентки не всегда являются абсолютными критериями, поэтому поиск новых неинвазивных маркеров, позволяющих повысить эффективность цервикального скрининга, очень актуален.
В исследованиях последнего десятилетия показано, что ВПЧ индуцирует специфические изменения профиля миРНК инфицированной клетки и играют главную роль в запуске канцерогенеза и развитии РШМ. Пока нет однозначного ответа на вопрос - могут ли определенные сигнатуры микроРНК быть ассоциированы с риском развития LSIL и HSIL. Поэтому дополнительные исследование уровней экспрессии микроРНК в клетках шейки матки с использованием цитологических препаратов, безусловно, позволит определить истинные перспективы применения молекулярных маркеров в программах скрининга.
МикроРНК - это короткие некодирующие РНК, которые регулируют экспрессию генов, катализируя разрушение мРНК либо ингибируя трансляцию мРНК в белок.
По литературным данным, диагностическую ценность и перспективность применения в клинической практике для повышения эффективности цервикального скрининга большую играют роль молекулярно-генетические профили mir-21 и mir-20a. В основном изучение влияния изменений уровня экспрессии этих микроРНК при различных интраэпителиальных повреждениях выполняются в образцах ткани.
Технический результат изобретения - разработка способа, позволяющего оценить тяжесть интраэпителиальной цервикальной неоплазии за счет определения уровня экспрессии микроРНКmir-21 и mir-20а.
Технический результат достигается тем, что до проведения эксцизионной биопсии осуществляют забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроРНК и проводят молекулярно-генетическое исследование с определением экспрессии маркеров микроРНКmir-21 и mir-20a, затем на основе полученных в результате анализа линейных дискриминантных функций Фишера определяют степень цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN):
f1=2.54x1+5.74x2-2.94,
f2=2.65x1+1.65x2-2.37,
f3=3.34х1-2.14х2-2.94,
где f1 - CIN1, f2 - CIN2, f3 - CIN3, х1 - показатель экспрессии микроРНК mir20a, х2 - показатель экспрессии микроРНК mir21,
при f1>f2>f3 определяют CIN1 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности,
при f2>f3>f1 определяют CIN2 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности,
при f3>f2>f1 определяют CIN3 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности.
Определение уровня экспрессии микроРНК mir-21 и mir-20a позволяет обьективно оценить умеренную или тяжелую интраэпителиальную неоплазию цервикального эпителия методом жидкостной цитологии.
Для лучшего понимания способа приводим фигуры.
Фиг. 1. Экспрессия микроРНК mir20a в NILM, CIN1, CIN2, CIN3.
Фиг. 2. Экспрессия микроРНК mir21 в NILM, CIN1, CIN2, CIN3.
Авторами, был исследован уровень экспрессии микроРНК в биоматериале, полученном методом жидкостной цитологии у пациенток без патологических изменений и при биопсии с различной степенью интраэпителиаль-ных повреждений эпителия шейки матки.
Для выделения микроРНК в 100 мкл плазмы добавляли 500 мкл лизи-рующего гуанидинового буфера и оставляли в термошейкере при 65°С на 10 мин. Далее в пробирки добавляли равный объем изопропанола, перемешивали и оставляли при комнатной температуре на 5 мин. Центрифугировали 10 мин. при 10 000 об/мин., супернатант сливали, осадок промывали сначала500 мкл 70% этанола, а затем 300 мкл ацетона. РНК растворяли в 200 мкл де-ионизованной воды.
Для обратной транскрипции использовали выделенный тотальный препарат. Реакция обратной транскрипции содержала выделенную РНК, 16,2 мкл 40% раствора трегалозы, 3 мкл 10х буфера для ревертирования, 3 мкл 4 мМ раствора дезоксинуклеозидтрифосфатов, 3 мкл 10% раствора BSA, 0,32 мкл ревертазы, 1,5 мкл 10 мкМ раствора, соответствующего праймера для ревертирования (RT). Реакция проходила в течение 30 мин. при 420, после чего ревертаза инактивировалась 2 мин. при 95°С.
Изменение относительной экспрессии микроРНК оценивали методом ПНР в режиме реального времени (RT-qPCR). Амплификацию 3 мкл смеси использовали для ПНР. Объем реакционной смеси для каждой реакции составлял 30 мкл.
Полученные смеси инкубировали в амплификаторе CFX 96 (Bio-Rad Laboratories, США) по следующей программе: предварительный прогрев при 94°С - 2 мин, 50 основных циклов: денатурация при 94°С - 10 сек, отжиг и элонгация: б0°С - 20 сек.
В результате вышеописанных методов, были получены значения таких молекулярных маркеров, как mir-20a и mir-21. После чего был проведен метод нормализации экспрессии генов, который основан на сравнении циклов пороговой амплификации (Ct) между целевым микроРНК (mir20aa, mir21) и нормализующим геном (U6m2) по формуле:
где CtmRNA - miR-20a (miR-21), Ctnorm - U6m2.
Таким образом, проведя нормировку для группы из 194 пациентов по этой формуле было установлено, что экспрессия микроРНК mir20a-a не имеет явной зависимости от класса (NILM, CIN1, CIN2, CIN3), что в свою очередь отвергает применение базовых статистических методов (см. Фиг. 1). Тем не менее, при анализе mir21 (см. Фиг. 2), явно прослеживается корреляция между значением экспрессии микроРНК и классом.
Таким образом, для более точного анализа, необходимо использовать более сложные статистические методы, одним из которых является линейный дискриминантный анализ Фишера. Данный метод полезен для классификации независимых микроРНК на основе их экспрессий. Помимо того, использование линейного дискриминантного анализа позволяет определить комбинацию значений экспрессии микроРНК для потенциального диагностирования или прогнозирования различных заболеваний у пациента.
На основе данных, полученных после первичного анализа (нормализация данных и удаление выбросов) были получены классифицирующие функции для трех классов (CIN1, CIN2, CIN3).
Полученные функции классификации имеют следующий вид:
f1=2.54х1+5.74х2-2.94
f2=2.65x1+1.65x2-2.37 (2)
f3=3.34х1-2.14х2-2.94
где f1 - CIN1, f2 - CIN2, f3 - CIN3, х1 - показатель экспрессии микроРНК mir20a, х2 - показатель экспрессии микроРНК mir21,
при f1>f2>f3 определяют CIN1 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности,
при f2>f3>f1 определяют CIN2 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности,
при f3>f2>f1 определяют CIN3 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности.
Способ выполняется следующим образом.
Пациенткам без патологических изменений и с различной степенью ин-траэпителиальных повреждений эпителия шейки матки до проведения эксцизионной биопсии осуществляют забор биоматериала методом жидкостной цитологии.
Для выделения микроРНК в 100 мкл плазмы добавляют 500 мкл лизирующего гуанидинового буфера и оставляют в термошейкере при 65°С на 10 мин. Далее в пробирки добавляют равный объем изопропанола, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин. Центрифугируют 10 мин. при 10000 об/мин., супернатант сливают, осадок промывают сначала 500 мкл 70% этанола, а затем 300 мкл ацетона. РНК растворяют в 200 мкл де-ионизованной воды.
Для обратной транскрипции используют выделенный тотальный препарат. Реакция обратной транскрипции содержит выделенную РНК, 16,2 мкл 40% раствора трегалозы, 3 мкл 10х буфера для ревертирования, 3 мкл 4 мМ раствора дезоксинуклеозидтрифосфатов, 3 мкл 10% раствора BSA, 0,32 мкл ревертазы, 1,5 мкл 10 мкМ раствора, соответствующего праймера для ревертирования (RT). Реакция проходит в течение 30 мин. при 420, после чего ревертаза инактивируется 2 мин. при 95°С.
Изменение относительной экспрессии микроРНК оценивают методом ПЦР в режиме реального времени (RT-qPCR). Амплификацию 3 мкл смеси используют для ПЦР. Объем реакционной смеси для каждой реакции составлят 30 мкл.
Полученные смеси инкубируют в амплификаторе CFX 96 (Bio-Rad Laboratories, США) по следующей программе: предварительный прогрев при 94°С - 2 мин, 50 основных циклов: денатурация при 94°С - 10 сек, отжиг и элонгация: 60°С - 20 сек.
В результате получают значения mir-20a и mir-21. Подставляя полученные значения в формулы:
f1=2.54х1+5.74х2-2.94
f2=2.65x1+1.65x2-2.37
f3=3.34 хх-2.14 х2-2.94,
где f1 - CIN1, f2 - CIN2, f3 - CIN3, х1 - показатель экспрессии микроРНК mir20a, х2 - показатель экспрессии микроРНК mir21,
при f1>f2>f3 определяют CIN1 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности,
при f2>f3>f1 определяют CIN2 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности,
при f3>f2>f1 определяют CIN3 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности.
Приводим клинические примеры применения способа.
Пример №1.
Пациентка Ж., 39 лет. Обратилась к акушер-гинекологу по поводу периодических выделений из половых путей. При кольпоскопии выявлена аномальная кольпоскопическая картина 2 степени (зона трансформации III типа).
До проведения эксцизионной биопсии осуществили забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроРНК mir20a и mir21.
Показатели микроРНК следующие: х1=1.13 (mir20a), х2=0.90 (mir21).
Подставим известные нам х1,х2 (т.е. значения микроРНК mir20a и mir21 соответственно) в функции f1,f2,f3.
f1=2.54x1+5.74x2-2.94=2.54*l. 13+5.74*0.90-2.94=5.09
f2=2.65x1+1.65x2-2.37=2.65*1.13+1.65*0.90-2.37=2.10
f3=3.34х1-2.14х2-2.94=3.34*1.13-2.14*0.90-2.94=-1.09
Таким образом, f1>f2>f3 следовательно, пациентку относят к группе CIN1.
В цитологическом мазке методом жидкостной цитологии с окраской по Папаниколау: LSIL, гиперкератоз, признаки HPV - инфекции в клетках многослойного плоского эпителия. Встречаются клетки плоского эпителия с атипией неясного значения (ASC-US). Признаки хронического воспаления.
Пример №2.
Пациентка К., 42 года. Обратилась к акушер-гинекологу по поводу жалоб на периодические тянущие боли внизу живота, в пояснице, болезненные и обильные месячные, обильные выделения из половых путей, нагрубание и боли в молочных железах перед месячными, повышенная сонливость, усталость. Генотипирование ВПЧ ВКР показало наличие клинически значимой вирусной нагрузки 16 и 33 типов. Кольпоскопия -неудовлетворительная (зона трансформации III типа).
До проведения эксцизионной биопсии осуществили забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроPHKmir20a и mir21.
Показатели микроРНК следующие: х1=1.02 (mir20a), х2=0.07 (mir21).
Подставим известные нам х1,х2 (т.е. значения микроРНК mir20a и mir21 соответственно) в функции f1,f2,f3:
f1=2.54x1+5.74x2-2.94=2.54* 1.02+5.74*0.07-2.94=0.05
f2=2.65x1+1.65x2-2.37=2.65* 1.02+1.65*0.07-2.37=0.44
f3=3.34x1-2.14x2-2.94=3.34*1.02-2.14*0.07-2.94=0.31
Таким образом, f1>f2>f3 следовательно, пациентку относят к группе CIN2.
В цитологическом мазке методом жидкостной цитологии с окраской по Папаниколау: LSIL (HPV, CINI), гиперкератоз, признаки HPV - инфекции в клетках многослойного плоского эпителия. Признаки хронического воспаления.
Пример №3.
Пациентка Б., 35 лет. Обратилась к акушер-гинекологу по поводу динамического наблюдении по поводу диспалазии шейки матки. Ранее проведена конизация шейки матки, при контрольной цитологии вновь выявлена дисплазия шейки матки. Генотипирование ВПЧ ВКР показало наличие клинически значимой вирусной нагрузки 18 типа. Кольпоскопия -неудовлетворительная (зона трансформации II типа). Иоднегативное, неоднородное окрашивание раствором Люголя (проба Шиллера).
До проведения эксцизионной биопсии осуществили забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроРНК.
Показатели микроРНК х1=1.63 (mir20a), х2=0.13 (mir21). Подставим известные нам х1,х2(т.е. значения микроРНК mir20a и mir21 соответственно) в функции f1,f2,f3:
f1=2.54х1+5.74х2-2.94=2.54*1.63+5.74*0.13-2.94=1.94
f2=2.65x1+1.65x2-2.37=2.65*1.63+1.65*0.13-2.37=2.16
f3=3.34х1-2.14х2-2.94=3.34*1.63-2.14*0.13-2.94=2.22
Таким образом, f1>f2>f3 следовательно, пациентку относят к группе CIN3
В цитологическом мазке методом жидкостной цитологии с окраской по Папаниколау: HSIL (CIN3), гиперкератоз, признаки HPV - инфекции в клетках многослойного плоского эпителия.
Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что его применение позволяет эффективнее оценить тяжесть интраэпителиальной цервикальной неоплазии при цитологическом исследовании методом жидкостной цитологии и определить наиболее оптимальную тактику ведения пациенток с умеренными и тяжелыми диспластическими изменениями шейки матки.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения степени дисплазии шейки матки | 2020 |
|
RU2758330C1 |
| МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НЕОПЛАЗИЙ | 2010 |
|
RU2464570C2 |
| Способ комбинированной терапии дисплазии шейки матки, ассоциированной с вирусами папилломы человека | 2019 |
|
RU2701525C1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ РИСКА ПРОГРЕССИРОВАНИЯ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНОЙ ЦЕРВИКАЛЬНОЙ НЕОПЛАЗИИ И РАЗВИТИЯ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЕЙ мРНК ГЕНОВ ЧЕЛОВЕКА | 2015 |
|
RU2660360C2 |
| Способ определения тактики ведения пациенток с умеренными диспластическими изменениями шейки матки | 2019 |
|
RU2704798C1 |
| Способ прогнозирования прогрессии цервикального плоскоклеточного интраэпителиального поражения низкой степени на фоне папилломавирусной инфекции | 2021 |
|
RU2766719C1 |
| СПОСОБ ЛЕЧЕБНО-ДИАГНОСТИЧЕСКОГО РАДИОХИРУРГИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ШЕЙКЕ МАТКИ ПРИ ПОДОЗРЕНИИ НА ЕЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЕ ПОРАЖЕНИЕ И ВЫБОР ТАКТИКИ ЛЕЧЕНИЯ | 2016 |
|
RU2631411C1 |
| СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВЕРОЯТНОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ НА ОСНОВЕ РУТИННЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ | 2023 |
|
RU2802395C2 |
| СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ДИСПЛАЗИЙ | 2021 |
|
RU2788860C1 |
| СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ДИСПЛАЗИЙ И РАКА ШЕЙКИ МАТКИ | 2012 |
|
RU2538618C2 |
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для оценки степени злокачественности интраэпителиального поражения плоского эпителия шейки матки. До проведения эксцизионной биопсии осуществляют забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроРНК и проводят молекулярно-генетическое исследование с определением экспрессии маркеров микроРНК mir-21 (х2) и mir-20a (х1). Определяют степень цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN) на основе полученных в результате анализа линейных дискриминантных функций Фишера: f1=2,54х1+5,74х2-2,94, f2=2,65x1+1,65x2-2,37, f3=3,34x1-2,14x2-2,94, где f1 - CIN1, f2 - CIN2, f3 - CIN3. При f1>f2>f3 определяют CIN1 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности. При f2>f3>f1 определяют CIN2 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности. При f3>f2>f1 определяют CIN3 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности. Способ позволяет оценить тяжесть интраэпителиальной цервикальной неоплазии за счет определения уровня экспрессии микроРНК mir-21 и mir-20а. 2 ил., 3 пр.
Способ оценки степени злокачественности интраэпителиального поражения плоского эпителия шейки матки, заключающийся в том, что до проведения эксцизионной биопсии осуществляют забор биоматериала методом жидкостной цитологии для выделения микроРНК и проводят молекулярно-генетическое исследование с определением экспрессии маркеров микроРНК mir-21 и mir-20a, затем на основе полученных в результате анализа линейных дискриминантных функций Фишера определяют степень цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN):
f1=2,54х1+5,74х2-2,94,
f2=2,65x1+1,65x2-2,37,
f3=3,34x1-2,14x2-2,94,
где f1 - CIN1, f2 - CIN2, f3 - CIN3, х1 - показатель экспрессии микроРНК mir20a, х2 - показатель экспрессии микроРНК mir21,
при f1>f2>f3 определяют CIN1 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия низкой степени злокачественности,
при f2>f3>f1 определяют CIN2 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности,
при f3>f2>f1 определяют CIN3 и оценивают интраэпителиальные поражения плоского эпителия высокой степени злокачественности.
| СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ДИСПЛАЗИЙ | 2021 |
|
RU2788860C1 |
| US 10011884 B2, 03.07.2018 | |||
| ДИМИТРИАДИ Т.А | |||
| и др | |||
| Дифференциальная экспрессия микроРНК и их генов-мишеней при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях разной степени тяжести | |||
| Успехи молекулярной онкологии | |||
| Способ восстановления спиралей из вольфрамовой проволоки для электрических ламп накаливания, наполненных газом | 1924 |
|
SU2020A1 |
| JIANG Y | |||
| et al | |||
| Identification of Circulating MicroRNAs as a Promising Diagnostic Biomarker | |||
