СПОСОБ ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ АУТОИММУННОГО ГАСТРИТА Российский патент 2024 года по МПК G01N33/50 A61B5/00 

Область техники

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и гастроэнтерологии. Оно может быть использовано в отделениях патоморфологии при постановке гистологического диагноза аутоиммунного гастрита (АИГ) и проведении дифференциальной диагностики с другими вариантами гастрита в биоптатах слизистой оболочки желудка, полученных в результате эндоскопического исследования.

Уровень техники

Аутоиммунный гастрит считается редким вариантом хронического гастрита и встречается в крайне небольшом проценте случаев по сравнению с другими формами этого заболевания. В последнее время отмечается рост заболеваемости АИГ в популяции, при этом критерии и подходы диагностики до сих пор не разработаны. В повседневной практике врача-патологоанатома распознавание АИГ вызывает определенные сложности, связанные с разнообразием классификационных подходов, неоднозначной интерпретацией морфологических признаков, а также с ограничениями технического характера.

Из уровня техники известен способ диагностики хронического гастрита, в частности способ диагностики атрофии слизистой оболочки желудка, который заключается в использовании схем-шаблонов для оценки атрофии (Мозговой С.И. Атрофия слизистой оболочки желудка при хроническом воспалении как общепатологический процесс и прогностический критерий канцерогенеза // Автореферат дисс.на соискание уч. ст.д.м.н. - Омск. - 2011 г. - 42 с). Однако данный способ является субъективным, не предоставляет информации о содержании и распределении желез и клеток в изучаемых образцах слизистой оболочки желудка.

Известен метод диагностики получивший название Сиднейской системы диагностики гастритов, которая была предложена еще в XX веке, а ее разработка и внедрение были связаны с открытием Helicobacter pylori и новыми подходами в диагностике прежде всего хеликобактер-ассоциированного гастрита (Dixon MF, Genta RM, Yardley JH, Correa P. Classification and grading of gastritis. The updated Sydney System. International Workshop on the Histopathology of Gastritis, Houston 1994. Am J Surg Pathol. 1996 Oct;20(10):l 161-81. doi: 10.1097/00000478-199610000-00001. PMID: 8827022.).

Согласно Сиднейской системе проводят оценку не менее пяти образцов биоптатов по следующим параметрам:

1. выраженность воспаления;

2. активность воспаления;

3. атрофия;

4. кишечная метаплазия;

5. обнаружение Helicobacter pylori.

Каждый параметр оценивается по четырехбалльной шкале, от 0 до 3. При этом необходимо, чтобы образцы были помещены в отдельные флаконы, сгруппированы относительно локализации взятия биоптатов и доставлены в отдельных контейнерах в патологоанатомическую лабораторию.

Однако данный метод не позволяет оценить состав желез и характеристику отдельных клеточных популяций, в частности эндокринных клеток желудка, т.к. не включает иммуногистохимическое исследование биоптатов.

Крайне важным и получившим широкое распространение и наиболее близким к заявляемому является метод, предложенный группой европейских и американских патологов и гастроэнтерологов, объединившихся в ассоциацию Atrophy Club, и получивший название системы OLGA (Rugge М, Correa Р, Di Mario F, El-Omar E, Fiocca R, Geboes K, Genta RM, Graham DY, Hattori T, Malfertheiner P, Nakajima S, Sipponen P, Sung J, Weinstein W, Vieth M. OLGA staging for gastritis: a tutorial. Dig Liver Dis. 2008 Aug;40(8):650-8. doi: 10.1016/j.dld.2008.02.030. PMID: 18424244.). По этой системе определяют интегральные показатели степени и стадии хронического гастрита, где под степенью понимается выраженность инфильтрации собственной пластинки слизистой оболочки желудка клетками воспаления (лимфоцитами, плазматическими клетками, нейтрофильными лейкоцитами), а под стадией - наличие атрофических изменений слизистой оболочки, в том числе появления кишечной метаплазии, оцениваемые в соответствии с визуальными аналоговыми шкалами обновленной Сиднейской системы. Комбинированные баллы антрального отдела и тела желудка суммируются и используются для стадирования гастрита (от 0 до IV) для выявления пациентов с повышенным риском рака желудка.

Важным недостатком системы OLGA является отсутствие критериев, позволяющих проводить этиологическую верификацию гастрита, а именно отсутствует оценкасостояния эндокринных клеток желудка и признаков наличия Helicobacter pylori. То есть система OLGA не может использоваться для обоснования диагноза аутоиммунного заболевания. Низкая воспроизводимость системы OLGA разными врачами-патологоанатомами является еще одним фактором, влияющим на ее диагностическую эффективность, поскольку отсутствие дополнительных методов исследования (в частности иммуногистохимического метода) делает систему субъективной в интерпретации некоторых из критериев. В то же время система OLGA, как и Сиднейская, требует взятия биоптатов из 5 точек и помещение каждого биоптата в отдельный флакон с последующим изготовлением пяти гистологических препаратов, что повышает экономические и трудозатраты.

Таким образом, ни один из способов, известных на сегодняшний день, не обладает достаточной эффективностью в отношении верификации аутоиммунного гастрита, что значительно усложняет диагностический процесс.

Раскрытие изобретения

При создании изобретения решается проблема расширения арсенала технических средств при патологоанатомической диагностике аутоиммунного гастрита посредством включения в алгоритм результатов иммуногистохимического исследования.

Технический результат состоит в реализации этого назначения.

Технический результат достигается за счет того, что способ гистологической диагностики аутоиммунного гастрита характеризуется тем, что проводят исследование биопсийного материала слизистой оболочки желудка по следующим гистологическим критериям: состояние главных желез тела желудка и наличие псевдопилорической и кишечной метаплазии / атрофии; наличие фовеолярной гиперплазии; наличие гиперплазии нейроэндокринных клеток; наличие гистологических признаков инфекции Helicobacter pylori; наличие воспалительных изменений в антральном отделе желудка, где каждому гистологическому параметру присваивают оценку от 0 до 3, далее полученные баллы суммируют, и высчитывают индекс АИГ, при индексе равном 6-8 баллов устанавливают отсутствие у пациента диагноза АИГ, при значении индекса АИГ 9-10 баллов указывают повышенную вероятность наличия у пациента диагноза АИГ, а при значении индекса АИГ более 11 баллов диагностируют АИГ.

Краткое описание чертежей

Изобретение поясняется чертежом, где на фиг.1 представлен гистологический препарат с расположенными на нем четырьмя биоптатами, окрашенный гематоксилином иэозином, на фиг.2 представлены результаты иммуногистохимического окрашивания биптатов в реакции с антителом к хромогранину А, на фиг. 3 показана линейная и узелковая гиперплазия НЭК. Позициями на рисунках обозначены: 1 - биоптаты тела желудка, 2 - биоптаты антрального отдела желудка. Кроме того, изобретение поясняется таблицами: Таблица 1 - Диагностическая таблица для гистологической оценки АИГ; Таблица 2 - Пример 1; Таблица 3 - Пример 2; Таблица 4 - Пример 3.

Осуществление изобретения.

Были изучены гистологические особенности слизистой оболочки желудка 150 пациентов. Выделены 2 группы: первую группу (основная группа) составили пациенты с подтвержденным диагнозом АИГ (120, 80%), во вторую группу (контрольная группа) вошли пациенты с исключенным диагнозом АИГ (30, 20%).

На основании многофакторного корреляционно-регрессионного анализа в группе пациентов с АИГ были определены наиболее значимые гистологические критерии: состояние главных желез тела желудка и наличие псевдопилорической и кишечной метаплазии / атрофии; наличие фовеолярной гиперплазии; наличие гиперплазии нейроэндокринных клеток. Данные гистологические признаки обнаруживались у 95% пациентов из первой группы и у 5% пациентов из контрольной группы.

Каждому выявленному гистологическому признаку на основании степени выраженности были присвоены баллы от 0 до 3.

Помимо вышеуказанных критериев обнаружение в биоптатах морфологических признаков хеликобактерного гастрита демонстрировало отрицательную обратную связь с обнаружением АИГ. В связи с чем такие параметры как наличие в биоптатах Н. pylori и хронический хеликобактерный гастрит в антральном отделе желудка получили отрицательное значение равное -3.

Вышеперечисленные факторы, отраженные в формуле изобретения, показали статистически значимую корреляцию с наличием АИГ (р<0,05) (Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. - М.: Медиа Сфера, 2003. - 110 с).

Количество баллов, согласно присвоенным критериям значений, оказалось значимой независимой переменной для АИГ, уравнение простой логистической регрессии показало, что сумма баллов 6-8 свидетельствует об отсутствии диагноза АИГ, 9-10 баллов указывает на повышенную вероятность наличия у пациента диагноза АИГ, а сумма баллов более 11 свидетельствует о наличии у пациента диагноза АИГ.

Способ был разработан в результате проведенных исследований ретроспективной выборки данных материалов от пациентов Института клинической медицины и цифровой патологии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), полученных в ходе гистологического и иммуногистохимического исследования биопсийного материала слизистой оболочки желудка.

Способ осуществляется в несколько этапов.

На первом (диагностическом) этапе производят оценку гистологических препаратов при стандартной окраске гематоксилин-эозином путем световой микроскопии и/или компьютерной морфометрии. Все биоптаты слизистой оболочки желудка оценивают в соответствии со следующими морфологическими критериями:

1. состояние главных желез (атрофию слизистой оболочки тела желудка);

a. главные железы слизистой оболочки тела желудка сохранны/не изменены;

b. наличие гипертрофии париетальных клеток и расширение просвета главных желез слизистой оболочки тела желудка;

c. наличие очаговой псевдопилорической и/или кишечной метаплазии (менее 50% главных желез слизистой оболочки тела желудка);

d. наличие диффузной псевдопилорической и/или кишечной метаплазии (более 50%) главных желез слизистой оболочки тела желудка);

2. наличие и выраженность фовеолярной гиперплазии слизистой оболочки тела желудка;

a. фовеолярная гиперплазия не обнаружена (валики занимают 1/5-1/4 толщины слизистой оболочки тела желудка)

b. фовеолярная гиперплазия обнаружена (валики занимают более 1/3 толщины слизистой оболочки тела желудка)

c. фовеолярная гиперплазия выраженная (валики занимают более 1/2 толщины слизистой оболочки тела желудка)

d. отмечается формирование гиперпластических полипов в слизистой оболочке тела желудка

3. наличие/отсутствие хронических воспалительных изменений в антральном отделе желудка.

Далее производят иммуногистохимическое исследование по стандартным протоколам, рекомендованным фирмой-производителем, используются антитела к хромогранину А и антитела к Helicobacter pylori.

В биоптатах выявляют следующие морфологические критерии:

1. гиперплазию нейроэндокринных клеток слизистой оболочки тела желудка

a. гиперплазия нейроэндокринных клеток отсутствует

b. наличие простой диффузной гиперплазии (более чем двукратное увеличение популяции) нейроэндокринных клеток,

c. наличие линейной гиперплазии (в одном поле зрения не менее двух групп линейно расположенных нейроэндокринных клеток, состоящих из пяти и более клеток),

d. наличие узелковой гиперплазии нейроэндокринных клеток (скопление клеток, контактирующих с базальной мембраной, но не превышающих диаметра железы, диаметром до 150 мкм, или аналогичного скопления, свободно расположенного в собственной пластинке слизистой оболочки).

2. наличие/отсутствие признаков Helicobacter pylori

На втором (заключительном) этапе выявленным гистологическим признакам присваивают баллы от 0 до 3 в соответствии с таблицей 1. Далее высчитывают индекс АИГ путем суммирования полученных баллов. При индексе равном 6-8 баллов устанавливают отсутствие у пациента диагноза АИГ, при значении индекса АИГ 9-10 баллов указывают повышенную вероятность наличия у пациента диагноза АИГ, а при значении индекса АИГ более 11 баллов диагностируют у пациента АИГ.

Изобретение поясняется клиническими примерами.

Пример 1. Пациентка А., 46 лет. Проведено эндоскопическое исследование, взяты биоптаты тела и антрального отдела желудка. После получения гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, было обнаружено, что два биоптата слизистой оболочки антрального отдела сохраняют нормальные структурные характеристики желез, отмечается незначительная гиперплазия валиков и слабовыраженная лимфоплазмоцитарная инфильтрация собственной пластинки слизистой. В биоптатах слизистой оболочки тела желудка был обнаружен хронический активный атрофический гастрит с очагами полной кишечной метаплазии (до 5% площади биоптатов), выраженной неметапластической атрофией желез, относительной гиперплазией фовеолярного слоя и крупными лимфоидными фолликулами. Преобладающим вариантом атрофии явилась псевдопилорическая метаплазия.

Проведено иммуногистохимическое исследования с антителом к хромогранину А. Обнаружена диффузная гиперплазия НЭК желез. Одновременно с выраженнымповышением количества позитивно-окрашенных клеток и нарушением структуры желез отмечались очаги линейной и узелковая гиперплазии.

Выполнена диагностика заявленным способом. Результат оценки гистологических критериев представлен в табл. 2.

Индекс АИГ=3+3+3+3+3=15

У данной пациентки был диагностирован аутоиммунный атрофический гастрит, который был дополнительно подтвержден клинико-лабораторными данными. В крови больной были обнаружены высокие титры антител к париетальным клеткам и внутреннему фактору Кастла.

Пример 2. Больной Б., 52 года. Проведено эндоскопическое исследование, взяты биоптаты тела и антрального отдела желудка. После получения гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, было обнаружено, что два биоптата слизистой оболочки антрального отдела желудка содержат незначительный клеточный инфильтрат в зоне валиков. В биоптатах слизистой оболочки тела желудка был обнаружен участок гиперплазированных эндокринных клеток представленный очаговым скоплением клеток с округлыми мелкими ядрами и хорошо выраженной цитоплазмой. В окружающей слизистой оболочке обнаруживались слизистые железы.

При проведении иммуногистохимического исследования с антителом к хромогранину А была диагностирована дисплазия НЭК тела желудка.

Выполнена диагностика заявленным способом. Результат оценки гистологических критериев представлен в табл. 3.

Индекс АИГ=3+3+2+3+3=14

У пациента диагностирован аутоиммунный гастрит.

Пример 3. Больной 3., 72 года. Направлен на проведение эндоскопического исследования для исключения диагноза аутоиммунного гастрита. Взяты биоптаты тела и антрального отдела желудка. После получения гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, было обнаружено, что два биоптата слизистой оболочки антрального отдела содержат воспалительный инфильтрат, представленный плазматическими клетками и лимфоцитами, а также сегментоядерными лейкоцитами. Обнаруживаются крупные лимфоидные фолликулы с реактивными центрами, отмечается проникновение лейкоцитов в эпителий. Обнаруживаются очаги полной кишечной метаплазии. В биоптатах слизистой оболочки тела желудка был обнаружен менеевыраженный по плотности и аналогичный по составу клеточный инфильтрат, локализующийся в зоне валиков. Главные железы сохранны и тесно расположены. Обнаруживаются очаги полной кишечной метаплазии.

При проведении иммуногистохимического исследования с антителом к хромогранину А было обнаружено диффузное распределение позитивно окрашенных клеток по ходу сохранившихся главных желез и в очагах кишечной метаплазии, очагов линейной и гнездной гиперплазии обнаружено не было. Также проведено иммуногистохимическое исследование с антителом к хеликобактеру, по результатам которого были обнаружены немногочисленные позитивно окрашенные бактерии, расположенные на поверхности эпителия валиков и в просвете ямок.

Выполнена диагностика заявленным способом. Результат оценки гистологических критериев представлен в табл. 4.

Индекс АИГ=1-3-3=-5

У пациента был диагностирован хронический активный мультифокальный атрофический хеликобактерный гастрит, а диагноз аутоиммунного гастрита был исключен.

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для патологоанатомической диагностики аутоиммунного гастрита. Проводят исследование биопсийного материала слизистой оболочки желудка по следующим гистологическим критериям, которым присваиваются соответствующие баллы: состояние главных желез тела желудка и наличие псевдопилорической и кишечной метаплазии/атрофии; наличие фовеолярной гиперплазии; наличие гиперплазии нейроэндокринных клеток; наличие гистологических признаков инфекции Helicobacter pylori; наличие воспалительных изменений в антральном отделе желудка. Далее путем суммирования полученных баллов высчитывают индекс аутоиммунного гастрита (АИГ). При индексе, равном 6-8 баллов, устанавливают отсутствие у пациента диагноза АИГ. При значении индекса АИГ 9-10 баллов указывают повышенную вероятность наличия у пациента диагноза АИГ. При значении индекса АИГ более 11 баллов диагностируют АИГ. Изобретение обеспечивает расширение арсенала технических средств при патологоанатомической диагностике аутоиммунного гастрита посредством включения в алгоритм результатов иммуногистохимического исследования. 4 табл., 3 ил., 3 пр.

Способ патологоанатомической диагностики аутоиммунного гастрита, характеризующийся тем, что проводят исследование биопсийного материала слизистой оболочки желудка по следующим гистологическим критериям, которым присваиваются соответствующие баллы: состояние главных желез тела желудка и наличие псевдопилорической и кишечной метаплазии/атрофии - сохранены/не изменены - о баллов; гипертрофия париетальных клеток и расширение просвета - 1 балл; очаговая псевдопилорическая и/или кишечная метаплазия - менее 50% желез - 2 балла; диффузная псевдопилорическая и/или кишечная метаплазия - более 50% желез - 3 балла; наличие фовеолярной гиперплазии - не обнаружена, валики занимают 1/5-1/4 толщины слизистой оболочки - 0 баллов; обнаружена, валики занимают более 1/3 толщины слизистой оболочки - 1 балл; выраженная, валики занимают более 1/2 толщины слизистой оболочки - 2 балла; формирование гиперпластических полипов - 3 балла; наличие гиперплазии нейроэндокринных клеток - не обнаружена - 0 баллов; диффузная гиперплазия - 1 балл; линейная гиперплазия - 2 балла; узелковая и сливающаяся узелковая гиперплазия - 3 балла; наличие гистологических признаков инфекции Helicobacter pylori - есть - (-3) балла; нет - 3 балла; наличие воспалительных изменений в антральном отделе желудка - есть - (-3) балла; нет - 3 балла, далее путем суммирования полученных баллов высчитывают индекс аутоиммунного гастрита (АИГ), при индексе, равном 6-8 баллов, устанавливают отсутствие у пациента диагноза АИГ, при значении индекса АИГ 9-10 баллов указывают повышенную вероятность наличия у пациента диагноза АИГ, а при значении индекса АИГ более 11 баллов диагностируют АИГ.