Способ получения кормовой композиции с функциональными свойствами для птицеводства Российский патент 2024 года по МПК A23K10/00 A61K35/66 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к обеспечению эффективной защиты молодняка сельскохозяйственной птицы от заболеваний, вызванных нарушениями их кишечной микробиоты и интоксикацией микотоксинами. Способ может быть применен при производстве поливидовых пробиотиков, метапробиотиков, метабиотиков.

Технология получения средств ветеринарного назначения является определяющим фактором их эффективности. Современный подход к разработке добавок с пробиотическими свойствами предполагает, во-первых, использование различных биосовместимых видов бактерий с выраженным колонизационным и антимикробным потенциалом в отношении патогенных микроорганизмов, во-вторых, применение демонстрирующих позитивные эффекты на организм хозяина штаммы и их биологически активные метаболиты, в-третьих, получение последних в форме, имеющей экологическую целесообразность и экономический интерес в условиях промышленного производства. Исследования отечественных и зарубежных биотехнологов и микробиологов показывают, что пробиотические штаммы способны терять до 90% своих функциональных свойств к моменту попадания в кишечник сельскохозяйственных животных по причине воздействия основных стрессоров их пищеварительного тракта - желудочного сока и желчи.

Из проанализированных существующих технологий известна кормовая добавка, включающая молочнокислые микроорганизмы и соединение дицитроборат оксихинолин, для профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы (RU 2136173).

Недостатком данного способа является отсутствие экологически безопасной технологии получения добавки. Известная кормовая добавка содержит химическое вещество, применение которой способно вызывать различные побочные эффекты, включая дисбактериоз, а также не гарантирует получение экологически безопасных продуктов животноводства.

Известен способ получения кормовой добавки на основе штамма Bacillus subtilis В-8130, включающей глубинное культивирование бациллы, твердофазное ее ферментацию с применением облепихового шрота и пшеничных отрубей, сушку с последующим смешением полученного продукта с остальными компонентами рецептуры (RU 2583084).

Недостатком данного способа является многостадийность процесса и отсутствие возможности получения высокого содержания бактериальных клеток в составе добавки. При получении указанным способом кормовой добавки, характеризующейся невысокой или отсутствующей сорбционной способностью по отношению к микотоксинам, используют монокультуру бактерий, что существенно ограничивает спектр позитивного ее воздействия на организм молодняка сельскохозяйственной птицы.

Из проанализированных существующих технологий известен способ получения препарата с пробиотическими свойствами для животноводства, прежде всего для птицеводства. Способ предусматривает раздельное культивирование штаммов Lactobacillus salivarius ВКПМ В-5001, Lactobacillus fermentum ВКПМ В-5006 и Enterococcus faecium ВКПМ В-2575, сепарирование, сушку с последующим смешиванием монокультур, стандартизация цеолитом или кукурузной мукой (RU 2000116).

Известен способ получения препарата с пробиотическими свойствами, предусматривающий культивирование в жидкой среде культур энтеробактерий, охлаждение и концентрирование (сепарирование, микро- или ультрафильтрация) их культуральной жидкости, отмывание биомассы от питательной среды замещающим раствором, высушивание концентрированной суспензии сублимационным подходом RU 2065305).

Из проанализированных существующих технологий известен способ получения лекарственного пробиотического средства для нормализации микробиоценоза кишечника здоровых сельскохозяйственных животных и птицы, сокращения заболеваемости гнойно-воспалительного и диспепсийного характера, снижения падежа и повышения прироста массы их тела. Способ включает раздельное культивирование штаммов Azotobacter chroococcum В-3162, Azotobacter vinelandii В-2587, Azomonas agilisc B-2586, Lactobacillus acidophilus B-3488, Lactobacillus acidophilus B-2585, Propionibacterium freudenreichii B-6561, Bifidum bacterium globosum B-2584, Enterococcus faecium B-2898, Bacillus subtilis B-4828, Bacillus subtilis B-5225, Pseudomonas sp.B-3908, Pseudomonas sp. B-2589, Escherichia coli B-4412 и Saccharomyces cerevisiae Y-365 на питательной среде, оптимальной для каждого штамма, в течение 36 ч при 37°С, смешивание приготовленных в защитной среде бактериальных суспензии в определенных соотношениях (RU 2326692).

Недостатками указанных способов получения пробиотических препаратов являются сложность и многостадийность, что влияет на себестоимость конечной продукции. Технологические процессы обезвоживания при получении сухих препаратов для ветеринарии способны существенно снижать биологическую активность микроорганизмов. Кроме того, известные кормовые добавки не содержат биологически активных метаболитов, что ограничивает спектр позитивного ее действия на организм молодняка сельскохозяйственной птицы.

Из проанализированных существующих технологий известен способ получения кормовой добавки на основе штамма гриба Fusarium sambucinum MKF 2001-3. Способ включает выращивание грибного штамма в подходящей для роста питательной среде с последующим отделением культуральной среды на биомассу и культуральную жидкость и их концентрированием, а также предусматривающий 6 различных вариантов получения кормовой добавки: в виде культуральной жидкости, биомассы гриба, смеси культуральной жидкости и биомассы, комбинации последних с пробиотиком Авилакт-1К (RU 2286066).

Недостатками указанного способа является длительность и сложность изготовления препарата. Технологические процессы высушивания при получении средств для ветеринарии способны снижать биологическую активность их компонентов. Недостатком получаемой данным способом жидкого средства является отсутствие видового разнообразия входящих в его состав пробиотических бактерий, недостаточная биологическая активность последних по отношению к влиянию основных стрессоров желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных, а также низкая питательная ценность препарата в случае его применения в качестве кормовой добавки. Отсутствие информации о скорости к восстановлению микробиоты кишечника на фоне применения препарата не может гарантировать его эффективность для лечения кишечных инфекций птицы.

Из проанализированных существующих технологий известен способ получения комплекса, который содержит в качестве метапробиотического компонента смесь стерильных культуральных жидкостей штаммов Bacillus subtilis М-8 и Lactobacillus plantarum 8 РАЗ, пребиотического компонента - жидкий стерильный мицелиальный автолизат Fusarium sambucinum MKF-2001-3 и биологически активного компонента - сухую биомассу вышеуказанного грибного штамма, для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных, включая птицы. Способ включает раздельное глубинное культивирования штаммов бациллы и лактобактерий на питательных средах с последующим их отделением двухстадийной фильтрацией для получения метапробиотического компонента, выращивание штамма фузариума на среде с молочной сывороткой с последующим водным автолизом ее культуральной жидкости, отделением биомассы и стерилизацией полученного фильтрата для получения пребиотического компонента, а также отделение автолизата гриба с последующим его высушиванием для получения биологически активного компонента (RU 2538116).

Недостатками данного способа является раздельное получение компонентов биологически активного комплекса, требующих применение существенного количества различных материалов (реактивов, компонентов питательных сред и т.д.) и оборудования, длительность приготовления, что усложняет технологический процесс получения препарата, и, следовательно, негативно влияет на его себестоимость. Кроме того, технологические процессы высушивания при получении средств для ветеринарии способны снижать биологическую активность их компонентов. Отсутствие информации об антимикробном и колонизационном потенциалах бактериальных штаммов, скорости к восстановлению микробиоты кишечника на фоне применения препарата не может гарантировать его эффективность для лечения кишечных инфекций птицы.

Известен способ получения продукта, включающий культивирование штамма Bifidumbacterium sieccum №791 в молоке с последующим внесением в него культуры Lactobacterium plantarum. Скармливание полученного данным способом продукта обеспечивает оптимальную кислотность среды для роста и развития индигенной кишечной микробиоты цыплят (RU 2156062).

Недостатком известного продукта является недостаточная эффективность в связи со способностью одного из его компонентов, бифидобактерий, быстро терять жизнеспособность, а также ограниченная область использования. В описании изобретения присутствует упоминание о том, что продукт «…обеспечивает оптимальную рН среды для развития нормальной кишечной микрофлоры», однако отсутствует информация по данному параметру, характеризующему его эффективность при выращивании сельскохозяйственной птицы.

Из проанализированных существующих технологий известен способ получения пробиотического препарата для лечения маститов, эндометритов и кишечных инфекций сельскохозяйственных животных. Способ предусматривает раздельное глубинное культивирование изолятов Bacillus subtilis, Lactobacillus plantarum и Rumenococcus albus на питательной среде, смешивание содержащих бактериальную биомассу культуральных жидкостей в определенных соотношениях (RU 2084233).

Недостатком данного способа является раздельное культивирование пробиотических микроорганизмов, требующей применение дополнительного количества различных материалов и оборудования, длительность приготовления, что усложняет технологический процесс получения препарата, и, следовательно, негативно влияет на его себестоимость. В указанном способе в качестве компонента препарата с пробиотическими свойствами используется представитель вида Lactobacillus plantarum, который в большинстве случаев применяют для эффективного силосования растительных кормов и в исключительных - для нормализации кишечной микробиоты сельскохозяйственных животных. Отсутствие информации о биосовместимости, колонизационных возможностях, скорости к восстановлению микробиоты кишечника компонентов препарата не может гарантировать его эффективность для лечения кишечных инфекций животных.

Наиболее близким из аналогов к предложенному изобретению является способ получения жидкого пробиотика ветеринарного назначения, предусматривающий раздельное глубинное выращивание штаммов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. B-4625 и Bacillus subtilis B-8130. При этом Lactobacillus acidophilus Scav. B-4625 и Rhuminococcus albus Кг культивируют на среде, состоящей из рубцовой жидкости, подсолнечникового шрота, мясопептонного бульона, карбоната кальция, сульфата магния, хлористого натрия, двузамещенного фосфорнокислого калия и сульфата аммония, в течение 4-6 суток при 37-40°С до достижения титра каждого штамма 1⋅10⁸-3⋅10⁸ кл/мл. Штамм Bacillus subtilis В-8130 культивируют на среде, включающей подсолнечниковый шрот, дрожжи, мелассу, глютен, хлористый кальций, сульфат магния и двузамещенный фосфорнокислый калий, в течение 4-6 суток при 37-45°С до достижения бактериального титра 1⋅10⁸-2⋅10⁸ кл/мл. Полученные после роста бактериальных штаммов на жидких питательных средах их культуральные жидкости объединяют в определенных соотношениях. Способ обеспечивает резистентность организма сельскохозяйственных животных и птиц к действию патогенных факторов и может быть использован для профилактики и лечения различных их заболеваний (RU 2266126).

Недостатком данного способа является раздельное культивирование пробиотических штаммов, требующей применение дополнительного количества различных материалов (реактивов, компонентов питательных сред и т.д.) и оборудования, а также длительность их выращивания (более 4 суток). Использование в качестве компонента питательной среды рубцовой жидкости требует квалифицированного персонала для его получения. Все вышеуказанные факторы усложняют технологический процесс изготовления препарата, и, следовательно, существенно ограничивают его широкое применение в животноводстве, включая птицеводство. В описании изобретения присутствует упоминание о том, что «способ повышает эффективность профилактики и лечения животных и птицы…», тем не менее, отсутствие информации об применении полученной данным способом пробиотика при лечении заболеваний животных, включая птицы, не может гарантировать эффективность, а также ограничивает область его использования. Кроме того, отсутствует информация о биосовместимости используемых в указанном способе штаммов, что может свидетельствовать о наличие ингибирующего их воздействия по отношению друг к другу в получаемом продукте. В описании изобретения также присутствует упоминание о том, что «…можно отметить, что предлагаемый препарат ускорял формирование микрофлоры рубца…», однако, отсутствует информация по данному показателю, характеризующий эффективность указанного препарата.

Задачей заявленного изобретения является разработка простой, энерго- и ресурсосберегающей технологии производства эффективной биологически активной добавки на основе новых биосовместимых штаммов бактерий и их метаболитов с функциональными свойствами.

Технический результат, который достигается при реализации предложенного способа, состоит в получении кормовой добавки с выраженными антимикробными свойствами по отношению к возбудителям кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы и микотоксикозов, а также высокими колонизационными возможностями, скоростью к восстановлению кишечной микробиоты макроорганизма ее пробиотического и метабиотического компонентов.

Поставленная задача и указанный технический результат достигаются благодаря тому, что способ получения кормовой композиции включает совместное глубинное культивирование биосовместимых между собой штаммов Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 в аэробных условиях на мелассно-соевой питательной среде, содержащей компоненты в следующих соотношениях, мас. %: меласса - 1,3; соевая мука - 3,0; кукурузный экстракт - 1,5; пшеничные отруби - 0,5; ацетат натрия - 0,5; сульфат аммония - 0,2; фосфат калия - 0,15; сульфат магния - 0,02; сульфат марганца - 0,005; вода – остальное, рН среды (требуется доведение) - 6,7.

с добавлением 1,5 и 0,5% соответственно кукурузного экстракта и пшеничных отрубей при температуре (37-39)°С и постоянном перемешивании с интенсивностью 50 об/мин в течение 16 ч. При этом для совместного выращивания используют штаммы бацилл и молочнокислых бактерий, не проявляющих по отношению друг к другу антагонистические (несимбиотические) взаимоотношения. В качестве кормовой композиции для лечения кишечных инфекций и микотоксикозов цыплят-бройлеров используют культуральную жидкость, полученную после роста биосовместимых штаммов Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 на указанной выше жидкой среде.

Способ получения кормовой композиции для использования ее в птицеводстве осуществляется ниже приведенным примером, иллюстрируется представленными таблицами 1, 2 и 3.

Пример.

Для совместного выращивания используют штаммы бацилл и молочнокислых бактерий, проявляющих по отношению друг к другу такие типы взаимоотношения, как нейтрализм или симбиоз. Характер межштаммовых и межвидовых взаимоотношений бактериальных культур устанавливают способом прямого совместного их выращивания (капельная методика). [Бегунова, А.В. Молочнокислые и пропионовокислые бактерии: формирование сообщества для получения функциональных продуктов с бифидогенными и гипотензивными свойствами / А.В. Бегунова, И.В. Рожкова, Е.А. Зверева, О.А. Глазунова, Т.В. Федорова // Прикладная биохимия и микробиология. - 2019. - Том 55. - №6. - С.566-577 - DOI: 10.1134/S0555109919060047].

Совместное глубинное культивирование биосовместимых штаммов Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 проводят на мелассно-соевой среде, содержащей, г/л:

в течение 16 ч на инкубаторе-качалке при температуре плюс (37-39)°С и постоянном перемешивании с интенсивностью 50 об/мин. Продолжительность выращивания зависит от рН питательной среды, температуры и интенсивности перемешивания. При этом отклонение от оптимального значения рН среды (рН 6,7), температуры (+(37-39)°С) и интенсивности аэрации перемешиванием (50 об/мин) способно приводить к повышению продолжительности времени культивирования отдельных бактериальных штаммов. Для получения оптимальных результатов в отношении накопления биомассы бактерий в качестве посевного материала используют стационарные культуры с титром Lactobacillus acidophilus IV8 не менее 2,2×10⁶ КОЕ/мл, Pediococcus acidilactici PA-12 - 1,1×10⁶ КОЕ/мл и Bacillus subtilis GA27 - 5,5×10⁵ КОЕ/мл. При совместном выращивании бактерий на жидкой среде общий титр их жизнеспособных клеток к 16 ч роста достигает в среднем 2,4×10⁹ КОЕ/мл, при этом данный показатель для Lactobacillus acidophilus IV8 составляет 2,4×10⁸ КОЕ/мл, для Pediococcus acidilactici PA-12 - 6,3×10⁸ КОЕ/мл, для Bacillus subtilis GA27 - 1,5×10⁹ КОЕ/мл. Готовую к применению культуральную жидкость (продукт), включающей биомассу вегетативных клеток бактерий, продукты их метаболизма и остатки питательной среды, разливают в стерильные емкости, например - в бутыли объемом 1 л. Условия хранения продукта: темное прохладное помещение, температуре не выше +6°С; срок хранения: не более 14 суток. Для увеличения срока хранения продукта до 28 суток в полученную культуральную жидкость бактерий можно вносить метил-4-гидроксибензоат в концентрации 0,5 г/л. Перед использованием емкости с готовым продуктом встряхивают, например - в течение 20-30 сек. Для лечения кишечных инфекций и профилактики микотоксикозов полученный продукт выпаивают цыплятам в дозе соответственно 0,5 и 1,0 мл на одно животное 1 раза в день до их выздоровления.

Полученная вышеуказанным способом культуральная жидкость Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27, используемая в качестве средства лечения кишечных инфекций и микотоксикозов цыплят-бройлеров, обладает следующими свойствами:

1. Экспериментально показано, что культуральная жидкость, содержащая биомассу вегетативных клеток Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12, Bacillus subtilis GA27 и продукты их метаболизма, обладает выраженным антимикробным потенциалом в отношении возбудителей кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы. Антагонистическая активность культуральной жидкости изучена против следующих условно-патогенных и патогенных бактерий: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Enterococcus sp.и Salmonella sp.

Исследование проведена известным методом лунок [Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии [Текст] / Нетрусов, А.И. // Москва: Академия, 2005. - 608 с. - ISBN: 5-7695-1809-Х].

Как видно из Табл. 1, важным свойством получаемой заявленным способом композиции является выраженный антагонистический эффект в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий - возбудителей кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы, причем - при отсутствии информации об антагонистической активности в отношении возбудителей кишечных инфекций животных у получаемого наиболее близким из аналогов способом препарата на основе штаммов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. B-4625 и Bacillus subtilis B-8130, их биологически активных метаболитов. Так, получаемая предложенным способом композиция проявляет высокий антимикробный потенциал, например - в отношении возбудителей кишечных инфекций бройлеров - бактериальных штаммов Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Enterococcus sp. и Salmonella sp.

Антагонистический эффект получаемой заявленным способом композиции не ограничивается вышеприведенными примерами условно-патогенных и патогенных бактерий, так как авторы и заявитель ограничились перечнем наиболее распространенных возбудителей кишечных инфекций молодняка птицы в Российской Федерации.

2. Полученная указанным способом культуральная жидкость Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 характеризуется антагонистическим эффектом в отношении возбудителей микотоксикозов птицы. Антагонистическая активность культуральной жидкости изучена против следующих токсинпродуцирующих грибов: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Alternaria alternata, Alternaria solani, Fusarium sp. и Penicillium sp.

Исследование проводят известным методом лунок [Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии [Текст] / Нетрусов, А.И. // Москва: Академия, 2005. - 608 с. - ISBN: 5-7695-1809-Х].

Как видно из Табл. 2, в отличие от получаемого наиболее близким из аналогов способом препарата на основе штаммов Rhuminococcus albus Kr, Lactobacillus acidophilus Scav. B-4625 и Bacillus subtilis

Антимикробный потенциал получаемой указанным способом композиции не ограничивается вышеприведенными примерами грибов, так как авторы и заявитель ограничились перечнем наиболее распространенных возбудителей микотоксикозов молодняка птицы в Российской Федерации.

3. Пробиотические компоненты, а именно Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27, в составе получаемой предложенным способом культуральной жидкости проявляют выраженные колонизационные возможности, а именно, устойчивость к условиям воздействия пониженной кислотности пищеварительного тракта и присутствию желчи цыплят-бройлеров.

Устойчивость пробиотических компонентов получаемой заявленным способом композиции к стресс-факторам пищеварительного тракта сельскохозяйственной птицы установлена по выживаемости бактериальных культур после последовательной инкубации их в разработанной нами мелассно-соевой среде с рН 3.0 (подкисляют соляной кислотой) в течение 1,5 ч (соответствует желудку) и 3% желчью цыплят-бройлеров в течение 6 ч (соответствует кишечнику). Начальный титр жизнеспособных клеток для Lactobacillus acidophilus IV8 составил 2,4×10⁸ КОЕ/мл, для Pediococcus acidilactici PA-12 - 6,3×10⁸ КОЕ/мл, для Bacillus subtilis GA27 - 1,5×10⁹ КОЕ/мл (контроль). Количество бактериальных клеток штаммов установлена стандартным чашечным способом или способом десятикратных разведений [Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии [Текст] / Нетрусов, А.И. // Москва: Академия, 2005. - 608 с. - ISBN: 5-7695-1809-Х] с использованием модифицированных сред MRS. Сравнение результатов проведено также относительно монокультур Lactobacillus acidophilus, Pediococcus acidilactici и Bacillus subtilis, которые являются основой бактериального консорциума, входящего в состав получаемой заявленным способом композиции.

Существенным свойством пробиотических компонентов в составе получаемой указанным способом композиции является устойчивость к условиям воздействия пониженной кислотности пищеварительного тракта (рН 3,0) и присутствию желчи цыплят-бройлеров (3,0%). Следует отметить об отсутствие данных о выживаемости получаемого наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению способом препарата в условиях воздействия вышеуказанных факторов агрессии, которые могут значительно снижать его эффективность.

4. Полученная указанным способом культуральная жидкость Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 характеризуется выраженной способностью к коррекции микроэкологических нарушений кишечной микробиоты макроорганизма.

Способность получаемой предложенным способом композиции к коррекции микроэкологических нарушений кишечной микробиоты оценена по скорости ее восстановления отдельных представителей микробиоценоза кишечника животных с антибиотико-ассоциированным дисбиозом [Чичерин, И.Ю. Сравнительная экспериментальная оценка эффективности современных пробиотиков, пребиотиков, синбиотиков и метабиотиков при коррекции нарушений микробиоценоза кишечника у животных с антибиотико-ассоциированным дисбиозом / И.Ю. Чичерин, И.П. Погорельский, И.Г. Лундовских и др. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. -2016. - №7 (131). - С. 106-120]. В исследовании применены прошедшие акклиматизацию белые мыши линии BALB/c, обоего пола, живой массой 19-21 г. Антибиотико-ассоциированный дисбиоз у животных вызван путем перорального введения антибиотика гентамицина в дозе 2,9 мг 2 раза в сутки в течение недели. После прекращения применения антимикробного препарата животным опытной группы введена per os полученная указанным способом культуральная жидкость Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27, содержащая биомассу вегетативных клеток бактерий с титром 2,4×10⁹ КОЕ/мл и продукты их метаболизма, в дозе 0,1 мл на одно животное 1 раза в день в течение 8 суток. В начале и конце экспериментального исследования у животных контрольной и опытной групп проведен отбор фекалий для бактериологического их анализа.

Существенным свойством пробиотических и метабиотических компонентов в составе получаемой предложенным способом композиции является высокая скорость к восстановлению (далее по тексту - СВ) кишечной микробиоты животных: СВ количества Lactobacillus spp. в кишечнике составила 4,31×10⁷ КОЕ/г×сут, Bifidobacterium spp. - 5,53×10⁷ КОЕ/г×сут и Е. coli - 4,09×10⁶ КОЕ/г×сут, что соответственно выше в 15908, 5472 и 1311 раза по сравнению со СВ содержания данных кишечных представителей у животных контрольной группы. Необходимо отметить об отсутствие данных об указанном выше свойстве получаемого наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению способом препарата, свидетельствующей о возможном низком или отсутствие его эффективности.

Далее приведены примеры использования полученной указанным способом композиции, содержащей штаммы Lactobacillus acidophilus IV138, Pediococcus acidilactici PA-12, Bacillus subtilis GA24 и продукты их метаболизма, для лечения кишечных инфекций и профилактики микотоксикозов цыплят-бройлеров.

Пример 1. По вышеуказанному примеру готовят культуральную жидкость бактериальных штаммов Lactobacillus acidophilus IV138, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA24. Полученную культуральную жидкость выпаивают цыплятам с клиническими признаками кишечного расстройства в дозе 1,0 мл на одно животное 1 раза в день в течение 10 суток.

Испытания заявленного технического решения осуществлены на 20 цыплятах-бройлерах кросса Кобб-500 20-суточного возраста в условиях действующего личного подсобного хозяйства. Молодняк сельскохозяйственной птицы с клиническими признаками кишечного расстройства были разделены на 2 равные группы. Цыплят первой группы, служившие контролем, выпаивали в течение испытания физиологическим раствором, животных второй группы, служившие опытом, - получаемой указанным способом композицию.

После апробации полученного заявленным способом кормовой композиции на основе Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12, Bacillus subtilis GA27 и их метаболитов, установлена высокая терапевтическая ее эффективность при кишечных инфекциях молодняка сельскохозяйственной птицы. Выздоровление цыплят, получавших культуральную жидкость Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27, наступает в среднем на 5-ые сутки. Выздоровление цыплят, получавших физиологический раствор, не происходило. СВ количества Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. и E.coli в кишечнике цыплят-бройлеров, получавших культуральную жидкость, составила соответственно 1,17×10⁷, 1,99×10⁷ и 2,25×10⁶ КОЕ/г×сут. Статистически значимых изменений численности кишечных представителей у птиц контрольной группы до уровней, которые соответствуют физиологическим параметрам, не отмечено. Выпаивание цыплятам культуральной жидкости Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 способствовало нормализации биохимических (повышение общего белка) и гематологических (снижение количества лейкоцитов, повышение содержания эритроцитов и гемоглобина) показателей их крови. По сравнению с контролем, использование полученной указанным способом культуральной жидкости обеспечивает 100% сохранность цыплят-бройлеров (выше на 30,0%), повышение продуктивности (на 26,1%) и уровня естественной резистентности их организма (В- и Т-лимфоцитов, фагоцитарной и лизоцимной активностей - соответственно на 8,9, 42,3, 24,0 и 21,5%), что свидетельствует об эффективности разработанной кормовой композиции для лечения кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы.

Пример 2. По вышеуказанному примеру готовят культуральную жидкость бактериальных штаммов Lactobacillus acidophilus IV138, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA24. Полученную культуральную жидкость выпаивают цыплятам с признаками микотоксикоза в дозе 1,0 мл на одно животное 1 раза в день в течение 10 суток. В случае более длительного действия данного патогенного фактора на животных выпаивание животных культуральной жидкостью осуществляют до их выздоровления.

Испытания заявленного технического решения осуществлены на 20 цыплятах-бройлерах кросса Кобб-500 20-суточного возраста в условиях действующего личного подсобного хозяйства. Птицы были разделены на 2 равные группы. Цыплята первой группы, служившие контролем, получали в течение испытания стандартный корм, контаминированный метаболитами микроскопического токсигенного гриба Fusarium sp., животные второй группы - токсичный корм и получаемую заявленным способом композицию.

Выпаивание цыплятам культуральной жидкости Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 способствовало нормализации биохимических (повышение общего белка и глюкозы) гематологических (повышение содержания эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина) показателей крови, оказывало позитивное воздействие на их показатели неспецифической резистентности (повышение уровня Т- и В-лимфоцитов, фагоцитарной и лизоцимной активностей). При этом среднесуточный привес живой массы птиц и их сохранность были выше контроля на 28,6 и 18,9% и составили соответственно 94,2 г и 100%.

Приведенные примеры применения заявленного технического решения свидетельствуют об достижении поставленной задачи, а именно - разработки простого, энерго- и ресурсосберегающей, экологически безопасной технологии получения эффективной биологически активной добавки на основе новых штаммов бактерий и их метаболитов, обладающих выраженными антимикробными свойствами по отношению к возбудителям кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы и микотоксикозов, а также высокими колонизационными возможностями, СВ кишечной микробиоты макроорганизма.

Заявленное изобретение удовлетворяет критерию новизны в связи с тем, что оно отличается от прототипа подходом культивирования (в аналоге применяют раздельное культивирование, в предлагаемом техническом решении - совместное), количественным и качественным составом питательной среды (в аналоге используют 12 различных компонентов, получение одного из них требует квалифицированного персонала, в предлагаемом техническом решении - 9), длительностью изготовления препарата (в аналоге выращивание микроорганизмов осуществляют 4-6 суток, в предлагаемом техническом решении - 16 ч, что в 6-9 раза быстрее), отсутствием применения существенного количества различных материалов (посуды для культивирования и измерения культуральной среды, и т.д.) и оборудования (термостаты, и т.д.), что значительно снижает себестоимость получаемого продукта. Кроме того, при получении добавки с функциональными свойствами применяют совместимые между собой отличные от прототипа виды бактерий, что гарантирует ее эффективность. Вышеуказанные отличия позволяют сделать заключение о соответствии предложенного технического решения критерию «новизна».

Полученная заявленным способом кормовая композиция на основе новых бактериальных штаммов в отличие от получаемого наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению способом препарата проявляет выраженные антимикробные свойства в отношении широкого спектра возбудителей кишечных инфекций бройлеров, например: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Enterococcus sp., Salmonella sp.и Citrobacter sp., а также микотоксикозов, например: Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Alternaria alternata, Alternaria solani, Fusarium sp. и Penicillium sp., что расширяет область ее использования. Разработанная питательная среда может быть применена для установления характера и механизмов взаимодействия между различными видами пробиотических микроорганизмов, например, бацилл и молочнокислых бактерий, возможности создания многоцелевых и эффективных с точки зрения функциональных свойств бактериальных препаратов для ветеринарной и биомедицины. Способ получения добавки с функциональными свойствами предусматривает применение биосовместимых между собой различных видов бактерий, обладающих пробиотическим потенциалом, что гарантирует ее эффективность для профилактики и лечения заболеваний молодняка сельскохозяйственной птицы.

Таким образом, предлагаемое техническое решение доказывает целесообразность его использования для получения кормовой композиции ветеринарного назначения. Примеры применения полученной указанным способом композиции, содержащей штаммы Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12, Bacillus subtilis GA27 и продукты их метаболизма, в качестве средства лечения кишечных инфекций и профилактики микотоксикозов цыплят-бройлеров свидетельствуют, что технология его получения может быть воспроизведена в промышленных масштабах с применением стандартного оборудования, дешевых реактивов и материалов. Предложенная технология позволяет повышать эффективность профилактики и лечения заболеваний молодняка сельскохозяйственной птицы, получать композицию с выраженными антимикробными эффектами в отношении условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, а также колонизационными возможностями, способностью к восстановлению кишечной микробиоты макроорганизма ее пробиотического и метабиотического компонентов.

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности к обеспечению эффективной защиты молодняка сельскохозяйственной птицы от заболеваний, вызванных нарушениями их кишечной микробиоты и интоксикацией микотоксинами. Предложен способ получения кормовой композиции с антимикробными свойствами для птицеводства, включающий в себя выращивание лактобактерий и бацилл на жидкой питательной среде, характеризующийся тем, что осуществляют совместное глубинное культивирование биосовместимых между собой штаммов Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 в аэробных условиях на мелассно-соевой питательной среде, содержащей компоненты в следующих соотношениях, мас. %: меласса - 13,0, соевая мука - 30,0, кукурузный экстракт - 15,0, пшеничные отруби - 5,0, ацетат натрия - 5,0, сульфат аммония - 2,0, фосфат калия - 1,5, сульфат магния - 0,2, сульфат марганца - 0,05, а вода - остальное, доводя до рН - 6,7 при температуре (37-39)°С и постоянном перемешивании с интенсивностью 50 об/мин в течение 16 ч. Изобретение позволяет получить кормовую добавку с выраженными антимикробными свойствами по отношению к возбудителям кишечных инфекций молодняка сельскохозяйственной птицы и микотоксикозов, а также высокими колонизационными возможностями, скоростью к восстановлению кишечной микробиоты микроорганизма. 2 табл., 2 пр.

Способ получения кормовой композиции с антимикробными свойствами для птицеводства, включающий в себя выращивание лактобактерий и бацилл на жидкой питательной среде, отличающийся тем, что осуществляют совместное глубинное культивирование биосовместимых между собой штаммов Lactobacillus acidophilus IV8, Pediococcus acidilactici PA-12 и Bacillus subtilis GA27 в аэробных условиях на мелассно-соевой питательной среде, содержащей компоненты в следующих соотношениях, мас. %:

меласса 13,0 соевая мука 30,0 кукурузный экстракт 15,0 пшеничные отруби 5,0 ацетат натрия 5,0 сульфат аммония 2,0 фосфат калия 1,5 сульфат магния 0,2 сульфат марганца 0,05 вода остальное,

доводя до рН - 6,7 при температуре (37-39)°С и постоянном перемешивании с интенсивностью 50 об/мин в течение 16 ч.