Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий Российский патент 2024 года по МПК G01N33/58 C12Q1/6806 C12Q1/6827 C12Q1/686 C12Q1/6883 A61B5/107 A61B17/435 

Изобретение относится к медицине, а именно к области акушерства и гинекологии. Предназначено для снижения частоты неблагоприятных акушерских и перинатальных исходов беременности, наступившей в результате применения вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) и осложнившейся развитием гестационного сахарного диабета (ГСД), за счет прогнозирования риска развития на этом фоне преэклампсии для принятия оптимальной акушерской тактики ведения пациенток группы высокого риска.

За последние десятилетия число беременностей, наступивших в результате ВРТ, во всем мире постоянно растет. В настоящее время установлен более высокий риск акушерских и перинатальных осложнений беременности, наступившей в результате применения программ ВРТ (He, M., Sun, X., Wang, C. et al. Analysis of the risk of complications during pregnancy in pregnant women with assisted reproductive technology: a retrospective study using registry linkage from 2013 to 2018 in Shanghai, China. BMC Pregnancy Childbirth. 2022;22(1):526-540. https://doi.org/10.1186/s12884-022-04846-1).

По данным мета-анализа, проведенного Saman Maroufizadeh и соавт., 2019, после применения программ ВРТ пациентки имели повышенный риск развития преэклампсии (ОR 3,65, 95% ДИ 2,02 –6,59), гестационной артериальной гипертензии (ОR 1,60, 95% ДИ 0,69–3,69), низкой для гестационного срока массы тела новорожденного (ОR 1,36, 95% ДИ 1,19–1,55), преждевременных родов (ОR 2,80, 95% ДИ 1,63–4,81), врожденных пороков развития (ОR 1,3, 95% ДИ 1,1–1,5), предлежания плаценты (ОR 1,15, 95% ДИ 0,93–1,43) и гестационного сахарного диабета (ОR 1,53, 95% ДИ 1,39–1,69) [Maroufizadeh S., Navid B., Alizadeh A. et al. Risk of gestational diabetes mellitus following assisted reproductive technology: systematic review and meta-analysis of 59 cohort studies. Journal of maternal-fetal & neonatal medicine. 2021; 34(16): 2731-2740. doi: 10.1080/14767058.2019.1670790].

Кроме того, беременность, наступившая в результате применения ВРТ значимо чаще сопровождается развитием ГСД. Так по данным метаанализа, проведенного Julia K. Bosdou и соавт., 2020, было показано, что женщины с одноплодной беременностью, наступившей с помощью ВРТ, имели более высокий риск развития ГСД по сравнению с женщинами с одноплодной беременностью, наступившей спонтанно (ОR 1,53, 95% ДИ 1,39–1,69) [Bosdou J.K., Anagnostis P., Goulis D.G. et al. Risk of gestational diabetes mellitus in women achieving singleton pregnancy spontaneously or after ART: a systematic review and meta-analysis. Human reproduction update. 2020; 26(4): 514-544. doi: 10.1093/humupd/dmaa011].

Для разработки персонализированного подхода к оценке риска инициации и прогрессирования преэклампсии у беременных женщин с ГСД необходимо применять молекулярно-генетические маркеры, которые позволяют своевременно, с ранних сроков беременности, выбрать оптимальную стратегию профилактики осложнений и избрать верную акушерскую тактику, включая оптимальные сроки родоразрешения для пациенток группы высокого риска [Zhang Y., Lan X., Cai C. et al. Associations between Maternal Lipid Profiles and Pregnancy Complications: A Prospective Population-Based Study. American Journal of Perinatology. 2021; 38(8): 834–840. doi: 10.1055/s-0039-3402724].

Использование результатов исследования молекулярно-генетических механизмов регуляции метаболизма липидов, в комплексе с клиническими, и биохимическими данными позволит установить риск развития преэклампсии, а также ляжет в основу предиктивной медицины и поможет реализовать дифференциальные профилактические подходы, осуществить целенаправленную диагностику, профилактику осложнений у женщин с ГСД после применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Аналогами изобретения являются:

1. Исследование Чурносова М.И. и соавторов, 2018 г., в котором осуществляется забор венозной крови, выделение геномной ДНК, проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и исследование гена ММР-1 (rs1799750), что прогнозирует риск развития преэклампсии по результатам уравнения. Данный способ способствует более эффективному осуществлению лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению преэклампсии при беременности. Метод не учитывает контингент пациенток с ГСД после применения программ ВРТ, не учитывает данные о молекулярно-генетических механизмах регуляции метаболизма липидов, которым в настоящее время отводят значимую роль в патогенезе развития преэклампсии.

2. Исследование Решетникова Е.А. и соавт., 2021 г. (патент RU 2775434C1_20220630, 17.12.2021г.), в котором авторы с помощью генетического тестирования и выделение ДНК из периферической венозной крови пациенток прогнозируют риск развития преэклампсии у неродственных русских индивидуумов, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ. При исследовании проводят анализ полиморфизмов гена PPP1R12C, дифференциально экспрессирующегося в плаценте. Выявление гаплотипа СA гаплоблока rs2532058-rs66707428 гена PPP1R12C прогнозирует высокий риск развития преэклампсии. Использование способа позволяет на доклиническом этапе формировать среди пациенток группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития преэклампсии. Недостаток метода – возможность его применения только у беременных русской национальности, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ. Данный метод не учитывает наличие ГСД и ВРТ у исследуемых пациенток.

3. Исследование Тимофеевой А.В., Федорова И.С., Суховой Ю.В. и соавт., 2023 г. - Прогнозирование преэклампсии с ранним и поздним началом на доклинической стадии с помощью плацентарно-специфического внеклеточного профилирования микро-РНК является высокоинформативным метоом, но имеет недостатки, связанные с высокой стоимостью исследования микроРНК и отсутствием условий для его широкого внедрения в практическом здравоохранении в данный момент, малое число наблюдений (67 пациентов), не завершена валидизация метода, контингент обследованных не включал пациенток после применения программ ВРТ и пациенток с гестационным сахарным диабетом. Объектом наблюдения были пациентки со спонтанно наступившей беременностью и ранней преэклампсией, а также пациентки с истончением рубца на матке от предыдущих операций кесарево сечение менее 3 мм и начале родовой деятельности.

Прототипом данного изобретения является программа Astraia, в которой расчет рисков происходит с помощью программного обеспечения на основе полученных в I триместре результатов биохимического исследования показателей sFlt-1, PLGF и показателя КТР плода, полученного по данным УЗИ в 1 триместре беременности.

Путем определения уровней циркулирующего в крови плацентарного фактора роста (PLGF) и растворимой fms-подобной тирозинкиназы-1 (sFlt-1) можно отличить нормальное течение беременности от риска преэклампсии еще до появления клинических симптомов. При нормальной беременности уровень проангиогенного фактора PLGF растет в течение первых двух триместров и снижается с приближением родов. В случае риска формирования преэкламсии наблюдается снижение концентрации PLGF и увеличение уровня растворимой fms-подобной тирозинкиназы-1.

Недостатком метода является низкая чувствительность и специфичность метода. Так, по данным литературы частота ложноположительных результатов программы Astraia составляет 62,1%, частота ложноотрицательных результатов 33,3% (Timofeeva AV, Fedorov IS, Sukhova YV, Ivanets TY, Sukhikh GT. Prediction of Early- and Late-Onset Pre-Eclampsia in the Preclinical Stage via Placenta-Specific Extracellular miRNA Profiling. Int J Mol Sci. 2023 Apr 28;24(9):8006. doi: 10.3390/ijms24098006). Кроме того, программа не учитывает способ наступления беременности, тогда как эпигенетическое влияние гормональной стимуляции суперовуляции при проведении программ ВРТ на процессы дифференцировки, миграции и инвазии клеток трофобласта определяет патогенез преэклампсии у пациенток с индуцированной беременностью, а также не учитывается и наличие осложнения беременности в виде гестационного сахарного диабета, который определяет дополнительные риски в отношении влияния на процессы ангиогенеза и сосудистого ремоделирования в плаценте.

Раскрытие сущности изобретения

Задача изобретения заключается в разработке способа прогнозирования риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий путем вычисления прогностического индекса D, отражающего суммарные особенности риска развития преэклампсии у беременных.

Технический результат: позволяет прогнозировать риск развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий путём вычисления прогностического индекса, что будет способствовать улучшению акушерских и перинатальных исходов за счет своевременного выбора верной акушерской тактики и сроков родоразрешения.

Заявляется способ прогнозирования риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий, отличающийся тем, что определяют индекс массы тела (ИМТ) женщины в первом триместре беременности, вид программы вспомогательных репродуктивных технологий: перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, наличие заболеваний сердечно-сосудистой системы и генотип полиморфного варианта гена ApoB Pro2739leu G > A, вычисляют прогностический индекс D по формуле:

D=-0,287×x1+1,166×x2+3,460×x3+5,860×x4 -31,912, где

D – прогностический индекс развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий;

х1 – вид программы вспомогательных репродуктивных технологий: перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле

криопереноса: если выполнен перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции, то х1=0, если выполнен перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, то х1=1;

x2 - ИМТ пациентки в первом триместре беременности, кг/м2;

x3 – заболевания сердечно-сосудистой системы у пациентки: если присутствовали, то x3=1, если отсутствовали, то x3=0;

х4 – генотип ApoB Pro2739leu G > A: если доминантный GG генотип, то x4=0, если гетерозиготный генотип, то х4=1, если рецессивный генотип, то х4=2;

–31,912 - постоянная величина,

при значении индекса D ˃ 0 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии,

при значении D < 0 делают заключение об отсутствии риска развития преэклампсии.

Осуществление изобретения

Способ осуществляют следующим образом:

Для достижения поставленной задачи исследуют антропометрические показатели пациентки в первом триместре беременности, собирают анамнестические данные о виде программы вспомогательных репродуктивных технологий, проводят исследование соматического статуса и течения настоящей беременности. Далее проводят молекулярно-генетическое типирование полиморфных вариантов генов с использованием метода аллель-специфичной ПЦР в режиме реального времени. Определяют индекс массы тела женщины в первом триместре беременности, вид программы вспомогательных репродуктивных технологий (перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса), наличие заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Для анализа полиморфизма вариантов гена ApoBPro2739leuGgtA у обследуемых пациенток проводят забор венозной крови в объеме 0,5мл в пробирки с этилендиаминтетраацетатом (ЭДТА) в качестве антикоагулянта. Геномную ДНК (не менее 1,0 нг на реакцию) выделяют набором реагентов для выделения нуклеиновых кислот из крови (ДНК-Кровь-М) (ООО» ТестГен», Россия). Генотипирование образцов проводят методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени» с использованием комплектов реагентов и протокола для определения генетических полиморфизмов. Регистрация и учет результатов проводился автоматическим программным обеспечением для детектирующего амплификатора ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-технология», Россия). В последующем вычисляют прогностический индекс D.

При математической обработке данных (логистический регрессионный анализ), было сформировано решающее правило прогноза риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий на основании вычисления интегрального показателя D, имеющего следующий вид:

D =

где:

D – прогностический индекс развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий;

– вид программы вспомогательных репродуктивных технологий (перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса):

если выполнен перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции, то =0,

если выполнен перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, то =1;

– ИМТ пациентки в первом триместре беременности, кг/м²;

– заболевания сердечно-сосудистой системы у пациентки: если присутствовали, то =1, если отсутствовали, то =0;

– ген ApoBPro2739leuGgtA: если доминантный вариант, то =0, если гетерозиготный вариант, то =1, если рецессивный вариант, то =2;

константа = –31,912, постоянная величина.

При значении полученного индекса D ˃ 0 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий.

При значении D < 0 делают заключение об отсутствии риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Чувствительность правила составила 89,67%, специфичность 96,42%, рассчитанные на основании ROC-анализа в рамках программы MedCalc.

Клинический пример 1.

Пациентка А., 38 лет. В анамнезе один самопроизвольный выкидыш и один медицинский аборт в сроках 6–7 недель, затем период длительного (5лет) вторичного бесплодия маточного происхождения. Данная беременность третья, наступила в результате применения программ вспомогательных репродуктивных технологий: переноса эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции в протоколе с агонистами ГнРГ.

Соматический анамнез отягощен заболеваниями сердечно-сосудистой системы (Артериальная гипертензия 1 степени, риск 3). ИМТ по Кетле в первом триместре беременности = 37,6 кг/м2, что соответствует ожирению II степени.

Течение настоящей беременности осложнилось формированием ГСД, диагностированного в 13 недель беременности по данным биохимического анализа крови (уровень глюкозы 6,2 ммоль/л). По углеводному обмену пациентка была компенсирована в течение всей беременности на гипогликемической диете. Инсулинотерапию не получала. При исследовании вариантных аллелей и распределения генотипов по исследуемым локусам генов выявлен гомозиготный вариант гена ApoBPro2739leuGgtA в локусе GG (доминантный тип).

По формуле прогноза определен индекс D:

-0,287×0+1,166×37,6+3,460×1+5,860×0–31,912 = 15,3896,

где:

=0, так как вид программы вспомогательных репродуктивных технологий:

перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции;

кг/м²: ИМТ в I триместре;

в связи с наличием заболеваний сердечно-сосудистой системы у пациентки;

так как выявлен вариантный генотип GG гена ApoBPro2739leuGgtA доминантная гомозигота).

Учитывая, что D ˃ 0 (D=15,396), у пациентки прогнозировалcя высокий риск развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета после применения вспомогательных репродуктивных технологий.

Пациентка в сроке гестации 32 недели поступила в приемный покой родильного дома в сопровождении бригады скорой медицинской помощи с жалобами на повышение артериального давления до 150/100 мм рт.ст без субъективной симптоматики. На момент поступления в приемном отделении артериальное давления на правой руке 149/98 мм рт.ст, на левой руке 151/99 мм рт.ст, появились жалобы на тяжесть в височных областях. Взяты анализы cito. В общем анализе мочи – протеинурия =1 г/л, в биохимическом анализе крови снижение общего белка =55 г/л, АЛТ = 20 ЕД, АСТ = 25 ЕД. Проведен совместный осмотр врача акушера-гинеколога и врача анестезиолога, выставлен диагноз: Беременность 32 недели. Отягощенный акушерско-гинекологический анамнез (регрессирующие беременности, самопроизвольный выкидыш, женское бесплодие). Беременность в результате ВРТ. Артериальная гипертензия 1 степени, риск 3. Ожирение II степени ГСД без инсулинопотребности. Умеренная преэклампсия.

Пациентка была переведена в палату интенсивной терапии для стабилизации общего состояния. В сроке беременности 34 недели в связи с ухудшением гемодинамики и нарастанием клиники преэклапсии был выставлен диагноз тяжелой преэклампсии. Пациентка была родоразрешена в сроке 34 недели. Родился живой недоношенный новорожденный весом 1130 г, длиной 36 см с оценкой по шкале Апгар 6/7 баллов. Ребенок переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных. Новорожденный был осмотрен врачом неврологом, выставлен диагноз гипоксические нарушения центральной нервной системы 1 степени. В последующем ребенок наблюдался и лечился в отделении ранней реабилитации новорожденных. Ребенок выписан домой на 19-е сутки В удовлетворительном состоянии.

Клинический пример 2.

Пациентка С. 39 лет. В анамнезе две внематочные беременности. Данная беременность третья, наступила в результате вспомогательных репродуктивных технологий: экстракорпоральное оплодотворение со второй попытки, криоперенос 1 эмбриона. У пациентки выявлено женское бесплодие трубного генеза. Соматический анамнез не отягощен. ИМТ по Кетле в первом триместре беременности = 26 кг/м², что соответствует нормальному весу. Течение настоящей беременности осложнилось развитием ГСД, выявленного в 24 недели беременности. В течение беременности пациентка соблюдала гипогликемическую диету, по углеводному обмену была компенсирована, инсулинотерапия не требовалась.

При исследовании вариантных аллелей и распределения генотипов по исследуемым локусам генов выявлен гомозиготный вариант гена ApoBPro2739leuGgtA в локусе GG (доминантный тип).

По формуле прогноза определен индекс D:

-0,287×1+1,166×26,0+3,460×0+5,860×0–31,912 = -1,883

где:

=1, так как вид программы вспомогательных репродуктивных технологий:

перенос размороженного эмбриона в цикле криопротокола;

кг/м²: ИМТ в I триместре;

в связи с отсутствием указаний на наличие заболеваний сердечно-сосудистой системы у пациентки;

так как выявлен вариантный генотип GG гена ApoBPro2739leuGgtA доминантная гомозигота).

Учитывая, что D < 0 (D= -1.883) – риск развития преэклампсии у данной пациентки низкий.

Пациентка родоразрилась в сроке беременности 39 недель через естественные родовые пути. Родился живой доношенный новорожденный весом 3110 г, длиной 50 см с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Ребенок с мамой выписан домой на 4-е сутки после родов в удовлетворительном состоянии.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий. Определяют индекс массы тела женщины в первом триместре беременности, вид программы вспомогательных репродуктивных технологий: перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, наличие заболеваний сердечно-сосудистой системы и генотип полиморфного варианта гена ApoB Pro2739leu G > A. Полученные значения подставляют в формулу расчета прогностического индекса D. При значении индекса D > 0 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии, при D < 0 делают заключение об отсутствии риска развития преэклампсии. Способ позволяет прогнозировать риск развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий за счет вычисления прогностического индекса. 2 пр.

Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий, отличающийся тем, что определяют индекс массы тела (ИМТ) женщины в первом триместре беременности, вид программы вспомогательных репродуктивных технологий: перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, наличие заболеваний сердечно-сосудистой системы и генотип полиморфного варианта гена ApoB Pro2739leu G > A, вычисляют прогностический индекс D по формуле:

D=-0,287×x1+1,166×x2+3,460×x3+5,860×x4 -31,912,

где D – прогностический индекс развития преэклампсии на фоне гестационного сахарного диабета у пациенток после применения вспомогательных репродуктивных технологий;

х1 – вид программы вспомогательных репродуктивных технологий: перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции или перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса: если выполнен перенос эмбриона в цикле стимуляции суперовуляции, то х1=0, если выполнен перенос размороженного эмбриона в цикле криопереноса, то х1=1;

x2 - ИМТ пациентки в первом триместре беременности, кг/м²;

x3 – заболевания сердечно-сосудистой системы у пациентки: если присутствовали, то x3=1, если отсутствовали, то x3=0;

х4 – генотип ApoB Pro2739leu G > A: если доминантный GG генотип, то x4=0, если гетерозиготный генотип, то х4=1, если рецессивный генотип, то х4=2;

–31,912 - постоянная величина,

при значении индекса D > 0 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии,

при значении D < 0 делают заключение об отсутствии риска развития преэклампсии.