Способ прогноза гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса "свежих" эмбрионов в программах ЭКО Российский патент 2020 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, предназначено для врачей акушеров-гинекологов, перинатологов и репродуктологов акушерских стационаров, перинатальных центров. Позволяет прогнозировать гиперкоагуляционные осложнения гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах экстракорпорального оплодотворения.

Экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО), как и другие методы вспомогательных репродуктивных технологий, с каждым годом только совершенствуются. По данным литературы, беременности, наступившие в результате вспомогательных репродуктивных технологий, имеют ряд особенностей по сравнению со спонтанно наступившими беременностями.

Известен высокий риск невынашивания беременности, а также развитие фетоплацентарной недостаточности, влияющей на перинатальное благополучие [Аржанова О.Н., Пайкачева Ю.М., Рулёва А.В., Капустин Р.В., Ничипорук Н.Г. Причины акушерских осложнений у пациенток после вспомогательных репродуктивных технологий. Журнал акушерства и женских болезней. 2017; 3 (66): 25-33. Шумовская В.В., Путилова Н.В. Беременность и роды после переноса эмбрионов в программах экстракорпорального оплодотворения. Лечение и профилактика. 2019; 9 (2): 16-21].

В последние годы активно изучаются вопросы влияния наследственных дефектов гемостаза в виде мутаций/полиморфизмов генов, регулирующих процессы свертывания крови, на реализацию генеративной функции женщин. Описаны межгенные взаимодействия в формировании гемостазиологических расстройств при беременности, влияющие на перинатальное благополучие [Путилова Н.В., Третьякова Т.Б, Пестряева Л.А., Демченко Н.С., Борисова С.В., Рукосуев Н.Е. Межгенные взаимодействия в формировании гемостазиологических расстройств при беременности. Тромбоз, гемостаз и реология. 2015; 3(63): 46-51.]. Учитывая особенности физиологической адаптации системы гемостаза к беременности, абсолютное большинство различных форм тромбофилии клинически манифестирует именно в течение гестационного процесса, приводя к серьезным осложнениям.

Перечисленные факторы приобретают особую значимость у беременных после ЭКО, так как гормональная стимуляция суперовуляции является дополнительным мощным активирующим фактором запуска процессов тромбообразования на фоне уже имеющихся гиперкоагуляционных сдвигов [Шумовская В.В., Путилова Н.В., Третьякова Т.Б., Пестряева Л.А. Состояние системы гемостаза и его генетические аспекты при беременности, наступившей в результате экстракорпорального оплодотворения. Российский вестник акушера-гинеколога. 2019;19(1):60-65. https://doi.org/10.17116/rosakush20191901160].

При обследовании пациенток в I триместре беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО выявлен высокий удельный вес гиперкоагуляционных состояний, а в последующем и осложнений гестации. Таким образом, появилась необходимость прогнозирования гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах экстракорпорального оплодотворения, для своевременной коррекции и предупреждения осложненного течения беременности.

Известны исследования системы гемостаза при помощи клоттинговых (скрининговых) тестов перед процедурой ЭКО. Эти тесты позволяют выявлять нарушения со стороны факторов-субстратов, участвующих во внешнем и внутреннем пути активации коагуляции. Однако, отражая изменения в отдельных звеньях системы гемостаза, предлагаемые тесты не характеризуют общий свертывающий потенциал крови и не могут являться предикторами тромбозов, играющих ключевую роль в развитии тяжелых акушерских осложнений. Кроме того, не учитывается роль генетических факторов в реализации гиперкоагуляционных нарушений в условиях высокой гормональной нагрузки при стимуляции суперовуляции в программах ЭКО.

Таким образом, все вышеизложенное позволяет сделать вывод, что на сегодняшний день отсутствует надежный и доступный для широкого применения способ доклинической диагностики гиперкоагуляционных осложнений беременности, наступившей в результате ЭКО.

Задача изобретения заключается в разработке способа прогнозирования гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО путем вычисления прогностического индекса «H», отражающего суммарные генетически детерминированные коагулопатические изменения в системе гемостаза у этой категории больных, ассоциированных с риском развития эндотелиальной дисфункции.

Технический результат: позволяет прогнозировать риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО путём вычисления прогностического индекса и выделять группу высокого риска по формированию этой патологии.

Заявляется способ прогнозирования гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО, заключающийся в том, что определяют значения параметров клоттингового теста (АЧТВ) и тромбоэластографии (ANGLE, К), а также полиморфизм гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A) с последующим вычислением прогностического индекса H по формуле:

Н=VEGF-А2578СС*К1+АЧТВ*К2+К*К3+ANGLE*К4+const

где:

Н – прогностический индекс гиперкоагуляционных осложнений гестации,

VEGF-А 2578СC - если есть - 1, если нет – 0,

АЧТВ – уровень активированнго частичного (парциального) тромбопластинового времени в крови женщины, в сек.,

К - время образования сгустка по данным ТЭГ, в мин.,

ANGLE - скорость роста фибриновой сети по данным ТЭГ, в град.

К1, К2, К3, К4, К5 – коэффициенты,

К1 = -0,53, К2 = -1,03, К3 = -18,23, К4 = 1,00,

4,65 – const,

при значении Н ≥1 прогнозируют высокий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО,

при значении Н<1 прогнозируют низкий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

Способ осуществляют следующим образом:

Для достижения поставленной задачи проводят исследование состояния плазменного звена гемостаза и тромбоэластографию с определением активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), времени образования сгустка (К) и скорости нарастания фибриновой сети (ANGLE). Исследование проводят утром натощак. Пунктируют локтевую вену пациентки иглой одноразового пользования и забирают 4,5 мл крови в 2 пластиковые или силиконированные пробирки, содержащие 0,5 мл 3,8% раствора натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия). Кровь центрифугируют при 3000 – 4000 об/мин в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку и помещают в анализатор для проведения исследования.

Молекулярно-генетическое типирование женщин по полиморфным вариантам гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A), проводится методом полимеразноцепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с использованием детектирующего амплификатора ДТ-96 с автоматическим программным обеспечением. Образцы ДНК получают из венозной крови, используя наборы реагентов и протоколы для выделения ДНК. На полученных образцах проводят полимеразноцепную реакцию в режиме «реального времени» с использованием комплектов реагентов и протокола для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития эндотелиальной дисфункции.

При математической обработке данных (логистический регрессионный анализ), было сформировано решающее правило прогноза гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО, на основании вычисления интегрального показателя H, имеющего следующий вид:

Н=VEGF-А2578СС*К1+АЧТВ*К2+К*К3+ANGLE*К4+const

где:

Н – Прогностический индекс гиперкоагуляционных осложнений гестации,

VEGF-А 2578СC - если есть - 1, если нет – 0,

АЧТВ – уровень активированнго частичного (парциального) тромбопластинового времени в сек. в крови женщины,

К - время образования сгустка в мин. по данным ТЭГ,

ANGLE - скорость роста фибриновой сети в град. по данным ТЭГ,

К1, К2, К3, К4, К5 – коэффициенты,

при К1 = -0,53, К2 = -1,03, К3 = -18,23, К4 = 1,00

4,65 – const.

При значении Н ≥1, прогнозируют высокий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

При Н<1, прогнозируют низкий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

Чувствительность правила составила 96,67%, специфичность 100%, рассчитанные на основании ROC-анализа в рамках программы MedCalc.

Клинический пример 1.

Пациентка И., 37 лет. Акушерско-гинекологический анамнез отягощен самопроизвольным выкидышем в сроке беременности 8-9 недель, вторичным бесплодием (трубно-перитонеальный фактор) в течение 6 лет. Данная беременность наступила в результате переноса «свежих» эмбрионов с 1 попытки. В сроке 9 недель беременности пациентке проведено исследование плазменного звена гемостаза, с определением уровня активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) и ТЭГ с определением времени образования сгустка (К) и скорости нарастания фибриновой сети (ANGLE), а также молекулярно-генетическое типирование женщин по полиморфным вариантам гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A). Выявлено: уровень АЧТВ 28,2 сек., К 1,6 мин., ANGLE – 65,0 град., наличие патологической гетерозиготы -2578СА гена VEGF-A.

По формуле прогноза определен индекс H:

H= 0*(-0,53)+28,2*(-1,03)+1,6*(-18,23)+65,0*1,00+4,65=11,43

H>1, т.е. у данной пациентки высокий риск развития гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

С I триместра беременности на основании полученных данных, пациентке была начата терапия профилактическими дозами низкомолекулярных гепаринов. В сроке 38-39 недель самостоятельно родоразрешилась живой доношенной девочкой, весом 3450г., длиной 52 см. с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Ребенок переведен на мать и дитя. Выписана с ребенком на 3 сутки.

Клинический пример 2.

Пациентка М., 29 лет. Акушерско-гинекологический анамнез отягощен первичным бесплодием (трубно-перитонеальный фактор) в течение 3 лет. Данная беременность наступила в результате переноса «свежих» эмбрионов с 1 попытки. В сроке 11 недель беременности пациентке проведено исследование плазменного звена гемостаза, ТЭГ с определением уровня активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ), времени образования сгустка (К) и ANGLE и молекулярно-генетическое типирование женщин по полиморфным вариантам гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A), при котором выявлено: у женщины – уровень АЧТВ 34,4 сек., К составило 2,4 мин., ANGLE – 45,0 град., наличие нормальной гомозиготы -2578СС гена VEGF-A.

По формуле прогноза определен индекс H:

H= 1*(-0,53)+34,4*(-1,03)+2,4*(-18,23)+45,0*1,00+4,65= -30,06

H1, т.е. у данной пациентки низкий риск развития гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

Пациентка самостоятельно родоразрешилась живым доношенным мальчиком 3600 г, длиной 53 см, с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Выписана с ребенком домой на 3-е сутки.

Клинический пример 3.

Пациентка Т., 30 лет. Акушерско-гинекологический анамнез отягощен первичным бесплодием (трубно-перитонеальный фактор) в течение 2 лет. Данная беременность наступила в результате переноса «свежих» эмбрионов с 1 попытки. В сроке 9 недель беременности пациентке проведено исследование плазменного звена гемостаза, с определением уровня активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) и ТЭГ с определением времени образования сгустка (К) и скорости нарастания фибриновой сети (ANGLE), а также молекулярно-генетическое типирование женщин по полиморфным вариантам гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A). Выявлено: уровень АЧТВ 29,1 сек., К 1,9 мин., ANGLE – 61,0 град., наличие патологической гетерозиготы -2578СА гена VEGF-A.

По формуле прогноза определен индекс H:

H= 0*(-0,53)+29,1*(-1,03)+1,9*(-18,23)+61,0*1,00+4,65=1,0

H=1, т.е. у данной пациентки высокий риск развития гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.

С I триместра беременности на основании полученных данных, пациентке была начата терапия профилактическими дозами низкомолекулярных гепаринов. В сроке 40 недель самостоятельно родоразрешилась живым донешенным мальчиком, весом 3380г., длиной 53 см. с оценкой по шкале Апгар 7/8 баллов. Ребенок переведен на мать и дитя. Выписана с ребенком на 3 сутки.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО. Способ заключается в том, что определяют значения параметров клоттингового теста (АЧТВ) и тромбоэластографии (ANGLE, К), а также полиморфизм гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A), с последующим вычислением прогностического индекса H по формуле: Н=VEGF-А2578СС*К1+АЧТВ*К2+К*К3+ANGLE*К4+const, где: Н – прогностический индекс гиперкоагуляционных осложнений гестации, VEGF-А 2578СC - если есть - 1, если нет – 0, АЧТВ – уровень активированного частичного (парциального) тромбопластинового времени в крови женщины, с, К - время образования сгустка по данным ТЭГ, мин, ANGLE - скорость роста фибриновой сети по данным ТЭГ, град, К1, К2, К3, К4, К5 – коэффициенты (К1 = -0,53, К2 = -1,03, К3 = -18,23, К4 = 1,00), 4,65 – const. При значении Н ≥1 прогнозируют высокий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО. При значении Н<1 прогнозируют низкий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО. Использование данного способа позволяет выделять группу высокого риска по формированию гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО и проводить своевременную терапию данной патологии у данных пациентов. 3 пр.

Способ прогнозирования гиперкоагуляционных осложнений гестации после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО, заключающийся в том, что определяют значения параметров клоттингового теста (АЧТВ) и тромбоэластографии (ANGLE, К), а также полиморфизм гена, ассоциированного с риском развития эндотелиальной дисфункции (VEGF-A: -2578C>A), с последующим вычислением прогностического индекса H по формуле:

Н=VEGF-А2578СС*К1+АЧТВ*К2+К*К3+ANGLE*К4+const,

где:

Н – прогностический индекс гиперкоагуляционных осложнений гестации,

VEGF-А 2578СC - если есть - 1, если нет – 0,

АЧТВ – уровень активированного частичного (парциального) тромбопластинового времени в крови женщины, с,

К - время образования сгустка по данным ТЭГ, мин,

ANGLE - скорость роста фибриновой сети по данным ТЭГ, град,

К1, К2, К3, К4, К5 – коэффициенты,

К1 = -0,53, К2 = -1,03, К3 = -18,23, К4 = 1,00,

4,65 – const,

при значении Н≥1 прогнозируют высокий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО,

при значении Н<1 прогнозируют низкий риск гиперкоагуляционных осложнений гестации во время беременности после переноса «свежих» эмбрионов в программах ЭКО.