Способ диагностики хронического псевдотуморозного панкреатита Российский патент 2024 года по МПК G01N33/68 G01N33/574 

Изобретение относится к медицине, в частности, к хирургии, онкологии, патоморфологии и может применяться в дифференциальной диагностике рака поджелудочной железы и хронического псевдотуморозного панкреатита перед выбором оптимальной тактики лечения больных с объемным образованием в поджелудочной железе.

Известны способы дифференциальной диагностики хронического псевдотуморозного панкреатита и рака поджелудочной железы с использованием клинико-инструментальных и лабораторных методов исследования, таких как определение уровня онкомаркера СА 19-9, выполнение компьютерной томографии органов брюшной полости, магнитно-резонансной томографии органов брюшной полости, эндоскопической ультрасонографии (ЭУС) с тонкоигольной аспирационной биопсией (ТИАБ) и последующим комплексным иммунногистохимическим исследованием гистологических препаратов. При этом следует отметить, что маркера хронического панкреатита на сегодняшний день не существует.[Le Cosquer G, Maulat С, Bournet В, Cordelier P, Buscail E, Buscail L. Pancreatic Cancer in Chronic Pancreatitis: Pathogenesis and Diagnostic Approach. Cancers (Basel). 2023 Jan 26;15(3):761.; Кубышкин B.A. Рак поджелудочной железы / B.A. Кубышкин, B.A. Вишневский. M.: ИД Медпрактика. М., 2003. 386 с.].

Недостатками этих способов являются недостаточная чувствительность и специфичность современных методов визуализации. Результаты визуализации, клиническая картина, факторы риска и лабораторные данные совпадают у пациентов с воспалительными процессами поджелудочной железы и у пациентов с новообразованиями поджелудочной железы. Частота ложноотрицательного результата даже при сочетании лабораторных и инструментальных методов исследования достигает 60%. На точность известных способов отрицательно влияет наличие субъективного фактора: квалификация и опыт врача, наличие осложнений заболевания, аномалий строения органов и т.д.

Ближайшим к заявляемому является способ определения углеводного антигена СА19-9 в сыворотке крови пациента с объемным образованием в поджелудочной железе для дифференциальной диагностики воспалительного и неопластического процесса. Референсное значение для данного показателя можно считать 0-37 ЕД/мл. Подозрение на злокачественный процесс в поджелудочной железе устанавливается если измеренное значение превышает заданное референсное значение. [Robert S O'Neill, Alina Stoita Biomarkers in the diagnosis of pancreatic cancer: Are we closer to finding the golden ticket? World J Gastroenterol. 2021 Jul 14; 27(26): 4045-4087].

Недостатком способа, выбранного в качестве прототипа, является то, что углеводный антиген СА19-9 недостаточно чувствителен для раннего диагностического скрининга и неспецифичен, поскольку уровень СА19-9 повышен при ряде доброкачественных заболеваний поджелудочной железы и желчевыводящих путей. У больных с механической желтухой после дренирования желчевыводящих путей уровень СА 19-9 снижается в сыворотке крови не только при доброкачественных образованиях, но и у 50% пациентов со злокачественной обструкцией желчевыводящих путей. Используя пороговый уровень СА 19-9 в сыворотке >1000 ЕД/мл при наличии гипербилирубинемии его специфичность почти 100%, но чувствительность менее 50%.

Задачей настоящего изобретения является повышение точности диагностики пациентов с объемными образованиями поджелудочной железы для выбора оптимальной тактики лечения.

Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в способе дифференциальной диагностики хронического псевдотуморозного панкреатита и рака поджелудочной железы, заключающемся в заборе тканей и прижизненном патоморфологическом исследовании, проводят иммунофенотипирование с антителом Zinc-alpha-2-glycoprotein и при положительной реакции на ткань поджелудочной железы диагностируют псевдотумарозный панкреатит.

Zinc-alpha-2-glycoprotein известен как адипокин, мобилизующий липиды. У людей уровень Zinc-alpha-2-glycoprotein в сыворотке положительно связан с уровнями сывороточных триглицеридов и белков, связывающих жирные кислоты адипоцитов, и отрицательно связан с уровнями липопротеинов высокой плотности и холестерина. Zinc-alpha-2-glycoprotein обеспечивает богатый источник триглицеридов, которые расщепляются липазами, выделяемыми из поврежденных ацинарных клеток поджелудочной железы в ненасыщенные свободные жирные кислоты, которые ингибируют митохондриальную функцию и усиливают высвобождение цитокинов, тем самым усугубляя повреждение ацинарных клеток.

Повреждение ацинарных клеток поджелудочной железы вызывают преждевременное высвобождение и внутриклеточную активацию мощных протеаз и липаз, что вызывает каскад обширного повреждения внутрипанкреатической ткани с активацией стрессового белка (NUPR1), который, в свою очередь, способствует развитию фиброза в ткани поджелудочной железы. Повреждение ацинарных клеток поджелудочной железы увеличивает экспрессию молекулярного паттерна TNFα, который может ингибировать экспрессию Zinc-alpha-2-glycoprotein, ингибируя PPARγ, поскольку активация PPARγ увеличивает экспрессию Zinc-alpha-2-glycoprotein. Потенциальная цепь между Zinc-alpha-2-glycoprotein и TNFα указывает на возможное взаимодействие между воспалением и метаболической дисфункцией поджелудочной железы. Это свидетельствует о том, что положительная реакция на Zinc-alpha-2-glycoprotein имеет место при наличии хронического псевдотуморозного панкреатита, что повышает точность дифференциальной диагностики.

Способ осуществляется следующим образом. Пациентам с объемным образованием поджелудочной железы выполняется чрескожная биопсия образования поджелудочной железы под контролем ультразвукового исследования, либо тонкоигольная аспирационная биопсия под контролем эндоскопической ультрасонографии. После забора трех столбиков ткани материал направляют в патоморфологическое отделение, где проводят прижизненное патоморфологическое исследование с иммунногистохимическим исследованием на антитело Zinc-alpha-2-glycoprotein.

Из парафинового блока изготавливаются срезы толщиной 1 микрон, далее материал проходит этап депарафинизации раствором ксилола и изопропанола (затем срезы промываются буфером рН 7,2), следующим этапом срезы варятся в демаскировочном буфере (СС2) рН 6,0 в течение 30 минут при 95 градусов (промывка срезов буфером рН 7,2). После этого материал погружается в перекись на 15 минут (промывка срезов буфером рН 7,2), затем срезы инкубируются последовательно в первичном антителе Zinc-alpha-2-glycoprotein (ARC0673) в течение 24 минут при 37 градусов в соотношении 1:200 (промывка срезов в буфере рН 7,2), а затем во вторичном антителе 30 минут при комнатной температуре (промывка срезов буфером рН 7,2). Далее материал обрабатывается DAB в течение 3 минут при комнатной температуре, промывается проточной водой, погружается в гематоксилин на 5 минут и снова промывается проточной водой, затем последовательно погружается в 2 порции спиртов по 2 минуты и 2 порции ксилола по 2 минуты и заключается под покровное стекло.

При наличии положительной реакции на Zinc-alpha-2-glycoprotein устанавливается диагноз хронического псевдотуморозного панкреатита.

Пример. Больная X., 61 л. госпитализирована в Мариинскую больницу Санкт-Петербурга в 2022 г. с болями в верхних отделах живота, потерей массы тела до 20 кг за последние полгода. Месяц назад больной было выполнено чрескожное-чреспеченочное дренирование желчных протоков в связи с механической желтухой. При поступлении выполнено дообследование. УЗИ органов брюшной полости: в области крючковидного отростка гипоэпохогенное образование неправильной формы с нечеткими контурами 28*18 мм. При компьютерной томографии органов брюшной полости: в головке железы отмечается изоденсное, с минимально сниженной перфузией в артериальную фазу участок размером около 14×12×16 мм, на его фоне Вирсунгов проток не дифференцируется, дистальнее расширен до 3-5,5 мм на всем протяжении. Дополнительно выполнено МРТ органов брюшной полости с внутривенным контрастированием для уточнения характера поражения в головке поджелудочной железы: в крючковидном отростке с распространением в головку определяется зона 34*25 мм, с ограничением диффузии, с накоплением контрастного вещества. На уровне данной зоны определяется обрыв панкреатический протока, расширенного в проксимальных отделах до 9 мм. Паренхима тела и хвоста атрофирована, представлена стенками расширенного протока. Данная зона интимно прилежит к верхней брыжеечной вене и первой еюнальной вене. Выполнена эндоскопическая ультрасонография: в области головки поджелудочной железы визуализируется гипоэхогенное образование с неровным, но четким контуром размерами 17×16 мм. Образование прилежит к верхней брыжеечной вены без явных эхо-признаков врастания, выполнена ТИАБ иглой 22G. При проведении прижизненного патоморфологического исследования: паренхима поджелудочной железы с ростом структур из атипичных клеток. Проведена диагностика заявляемым способом, получен положительный результат. Установлен клинический диагноз хронический псевдотуморозный панкреатит. Больной выполнено хирургическое вмешательство в объеме операция Фрея (резекция головки поджелудочной железы, рассечение главного панкреатического протока и наложение позадиободочного панкреатопанкреатикоэнтероанастомоза на петле кишки, выключенной по Ру). При окончательном гистологическом исследовании удаленного препарата достоверных признаков злокачественного опухолевого роста в поджелудочной железы не выявлено. Морфологическая картина наиболее соответствует хроническому панкреатиту с атрофией ацинарных структур и очаговой гиперплазией протоков. Учитывая данные клинико-лабораторных данных, данные инструментального методов исследования нельзя было исключить злокачественный рост в головке поджелудочной железы. Благодаря проведению иммунногистохимического исследования с использованием Zinc-alpha-2-glycoprotein удалось избежать расширение объема хирургического вмешательство до панкреатодуоденальной резекции. При контрольном исследовании через 6 месяцев после операции по данным компьютерной томографии очаговых образований в ложе резецированной ткани поджелудочной железы не выявлено.

Предлагаемый способ дифференциальной диагностики рака поджелудочной железы и хронического псевдотумоозного панкреатита отличается высокой точностью, позволяет улучшить результаты постановки диагноза, а следовательно, и лечения данного контингента больных. Диагностические возможности предлагаемого способа проверены при анализе операционного материала, полученного от 20 больных при выполнении резекционно-дренирующих операций по поводу хронического псевдотуморозного панкреатита, находившихся на лечении в Мариинской больнице в 2020-2023 гг. Все диагнозы были верифицированы при плановом иммуногистохимическом исследовании препаратов с использованием Zinc-alpha-2-glycoprotein.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, онкологии, патоморфологии, и может быть использовано для диагностики хронического псевдотуморозного панкреатита. Осуществляют забор тканей поджелудочной железы и прижизненное патоморфологическое исследование. Проводят иммунофенотипирование с антителом Zinc-alpha-2-glycoprotein. При положительной реакции ткани поджелудочной железы на Zinc-alpha-2-glycoprotein диагностируют псевдотумарозный панкреатит. Способ обеспечивает возможность повышения точности диагностики пациентов с хроническим псевдотуморозным панкреатитом для выбора оптимальной тактики лечения, за счет анализа операционного материала пациентов, полученного при выполнении резекционно-дренирующих операций, путем иммунофенотипирования ткани поджелудочной железы с антителом адипокина Zinc-alpha-2-glycoprotein. 1 пр.

Способ диагностики хронического псевдотуморозного панкреатита, включающий забор тканей поджелудочной железы и прижизненное патоморфологическое исследование, характеризующийся тем, что проводят иммунофенотипирование с антителом Zinc-alpha-2-glycoprotein и при положительной реакции ткани поджелудочной железы на Zinc-alpha-2-glycoprotein диагностируют псевдотумарозный панкреатит.