Способ получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием Российский патент 2024 года по МПК A61K36/28 A61K36/48 A61K36/53 A61P25/00 A61P39/00 

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием.

В практике народной медицины традиционно применяются многокомпонентные лекарственные препараты, включающие в среднем от 3 до 5 ингредиентов. Считается, что их высокая терапевтическая эффективность обусловлена гармоничным сочетанием содержащихся биологически активных веществ в исходных видах растительного сырья. В Государственный реестр лекарственных средств включены более 40 различных многокомпонентных сборов и количество их постоянно увеличивается [6,15].

Основываясь на данные литературы о химическом составе, фармакологическом действии лекарственных растений нами предлагается способ получения средства, обладающего нейропротективным и метаболическим действием на основе корней шлемника байкальского, астрагала перепончатого и цветков ромашки аптечной в виде экстракта сухого.

С учетом патогенеза цереброваскулярного заболевания выбраны растения, обладающие нейромодулирующим, нейропротективным, вазоактивным свойствами: астрагал перепончатый, шлемник байкальский. Так, экстракты и действующие вещества из астрагала перепончатого оказывают противоглутаматное, нейропротективное действие при глутаматной нейротоксичности [13, 14], тритерпеновый сапонин - астрагалозид IV проявляет защитный эффект при ишемии мозга [19, 25]. Экстракты из корней шлемника байкальского, его флавоноиды (байкалин, байкалеин, вогонин, ороксилин А) оказывают нейропротективное действие благодаря стимуляции ГАМК_А-рецепторов [8, 12, 17, 18, 20, 21, 22, 28, 29]. Цветки ромашки, входящие в государственный реестр лекарственных средств, содержат эфирное масло, в составе которого имеется хамазулен, азулен, терпен, сесквитерпен, кадинен, фарнезен, флавоноиды (апигенин, рутин), органические кислоты (салициловая, изовалериановая, каприловая), полисахариды, витамины С, В3, каротин. Хамазулен и азулен это ароматические вещества, содержащие конденсированную систему из 5 и 7-членных циклов. Хамазулен обладает антиокислительным, успокаивающим действием на центральную нервную систему, мягким спазмолитическим действием. Азулен является антиоксидантом и проявляет противовоспалительное, антиаллергическое действие, усиливает процессы регенерации. Апигенин обладает спазмолитическим действием [4, 10].

В качестве прототипа данного изобретения принят Танакан. Его получают из растения гинкго билоба в виде стандартизированного экстракта. В природных условиях России гинкго билоба не встречается, но культивируется в Крыму и на Кавказе. Танакан применяют при энцефалопатиях, нарушениях мозгового и периферического кровообращения, астенических состояниях [4]. Препараты Гинкго Билоба обладают ноотропной активностью, показанной во многих экспериментальных и клинических наблюдениях, и практически не вызывают побочных эффектов. В основе их действия лежат антитоксические, аитиоксиданткые свойства и способность нормализовать нейромедиаторные, а также энергетические процессы в нейронах головного мозга [1]. Недостатками указанного средства являются слабо выраженная нейропротективная и метаболическая активность по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу.

Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств, обладающих нейропротективным, метаболическим действием за счет использования культивированного растительного сырья, а также доступного экстрагента.

Для этого растительный материал, состоящий из высушенной измельченной растительной смеси следующего состава (мас.части) шлемника байкальского (корень) -30, астрагала перепончатого (корень), - 50, ромашки аптечной (цветки) - 20 -экстрагируют трехкратно при соотношении 1 мас.ч. сырья: 10 об.ч экстрагента. В качестве экстрагента применяют воду горячую (75°±3°С). При первом и втором контакте фаз экстракцию продолжают в течение 20 минут, третий контакт фаз - 15 минут. Экстракцию выполняют при постоянном перемешивании. Водные извлечения после экстракций упаривают до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений сепарируют. Полученный продукт доупаривают приблизительно до 1/5 и высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход готового продукта составляет 32% от массы растительного материала. Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок от коричневого до темно - коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен, комкуется. Данный способ получения достаточно прост, не требует сложной, схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава. Использование в качестве экстрагента горячей воды позволяет исключить дополнительные расходы, связанные с организацией хранения и использования спирта этилового на производстве.

При производстве экстрактов из лекарственный растений используют разные экстрагенты - различные концентрации спирта этилового, хлороформ, ацетон, вода очищенная и другие. Наиболее часто применяемый экстрагент этиловый спирт и его различные концентрации. Однако этиловый спирт имеет ряд существенных недостатков:

значительно труднее, чем вода, проникает через стенки клеток, отнимая воду у белков и слизистых веществ, превращая их в осадки, тем самым закупоривая поры клеток и тем самым ухудшая диффузию биологически активных веществ. Кроме этого, этиловый спирт относится к веществам, находящимся на предметно-количественном учете, лимитированным продуктам, и отпускается фармацевтическим производством в установленном порядке. Существенным недостатком является огнеопасность и горючесть этилового спирта. Существуют особые требования к производству спиртосодержащей продукции, к условиям организации хранения, транспортирования и отпуска спирта этилового, что требует дополнительных капиталовложений [30]. Это может создать дополнительные трудности для малых предприятий и вновь открывающихся предприятий.

В этом плане перспективным экстрагентом является вода, которая обладает следующими преимуществами: хорошо проникает через клеточные стенки, растворяет многие лекарственные вещества, фармакологически и химически индифферентна, соответствует всем требованиям техники безопасности. Для повышения растворимости веществ и интенсификации процесса экстракции можно использовать нагревание.

Отрасль лекарственного растениеводства является новой для Республики Бурятии.

В последние годы предприняты попытки создать площади для выращивания лекарственных растений [11]. В состав нового средства нами включено культивируемое растительное сырье корней шлемника байкальского, астрагала перепончатого и цветков ромашки аптечной. Содержание биологически активных веществ культивируемого растительного сырья соответствовало требованиям нормативной документации.

Изучено влияние технологических факторов на процесс экстрагирования растительного материала: степени измельчения сырья, соотношение экстрагента и растительного сырья, температурного режима экстракции, продолжительности и кратности числа экстракций. Опыты выполняли в трехкратной повторности и использовали средние значения полученных данных. Эффективность экстракции оценивали по выходу экстрактивных веществ и содержанию суммы флавоноидов в пересчете на байкалин.

Определение содержания экстрактивных веществ проводили согласно ОФС.1.5.3.0006.15 «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» [7].

Количественное определение флавоноидов выполняли по методике:

Около 1 г сбора (точная навеска), измельченного и просеянного через сито (размер частиц 2-5 мм) помещают в колбу на 150 мл, прибавляют 100 мл 60% этанола, колбу присоединяют к обратному холодильнику. Экстракцию проводят на водяной бане в течение 60 минут.Извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 100 мл, объем раствора доводят до метки 96% этанолом (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки 96% этанолом (раствор Б). 1 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки 96% этанолом. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 279 нм. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на байкалин рассчитывают по формуле:

D - оптическая плотность испытуемого раствора, m - навеска сбора, i

665,75 - удельный показатель поглощения РСО байкалина, W - влажность сбора В качестве экстрагентов использовали воду холодную и горячую. Полученные данные приведены в таблице 1. С увеличением температуры повышается выход БАВ. Для получения экстракта нами выбрана оптимальная температура 75°С.

Изучено влияние измельчение сбора на процесс экстракции. Растительный сбор измельчали <1,0; 1,0-3,0; 3,0-5,0; 5< мм. Результаты представлены в таблице 2. Экстрагирование выполняли горячей водой 75°С. Наиболее рациональная степень измельчения сырья 1,0-3,0.

Изучена зависимость извлечения экстрактивных веществ при экстракции сбора, обладающего нейропротективным, метаболическим действием, от соотношения сырье - экстрагент. Экстрагирование выполняли (горячей водой 75°С, степень измельчения сырья 1,0-3,0 мм. Результаты представлены в таблице 3. Наиболее оптимальное соотношение сырье-экстрагент 1:10. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нерационально.

Чтобы установить продолжительность и кратность числа экстракций изучали время наступления равновесной концентрации в системе «сырье:экстрагент». Для этого проводили 3-кратную экстракцию измельченного сбора на водяной бане водой горячей при температуре 75°С при соотношении сырья и экстрагента 1:10 при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз через заданные промежутки времени (10, 15, 20, 30, 40 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ, флавоноидов. В продолжении опыта проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-м и 3-м контакте фаз водой горячей 75°С в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ и суммы флавоноидов. Результаты определения экстрактивных веществ, флавоноидов из сбора, обладающего нейропротективным, метаболическим действием представлены в таблице 4. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что равновесное состояние в системе «сырье:экстрагент» для сбора при I, II контакте фаз наступает через 20 минут, при III контакте фаз через 15 минут. Трехкратная экстракция обеспечивает максимальный выход биологически активных веществ.

Пример способа получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием: 50,0 г астрагала перепончатого корней, 30,0 г шлемника байкальского корней, 20,0 г ромашки аптечной цветков измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0-3,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой. Заливают 1,0 л горячей водой с температурой 75°С в соотношении сырье:экстрагент 1:10. Экстракцию выполняют в течение 20 мин при постоянном перемешивании при температуре 75±5°С. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую экстракцию выполняют в течение 20 мин, подавая в экстрактор горячую воду 75°С в количестве, равном слитому от первой экстракций, третью экстракцию выполняют в течение 15 мин, подавая в экстрактор горячую воду 75°С в количестве, равном слитому от второй экстракций. Объединенное водное извлечение упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°С 8 ч. Получают 32,0 г экстракта сухого. Средство, обладающее нейропротективной, метаболической активностью, представляет собой аморфный порошок от коричневого до темно - коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен, комкуется.

Оценка нейропротективного и метаболического действия средства, обладающего нейропротективной, метаболической активностью.

Исследования выполнены на 82 белых крысах Wistar обоего пола массой 220-240 г. Животные содержались в одинаковых условиях по 10 особей в клетке со свободным доступом к воде и пище в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики (GLP) и Постановлению Правительства РФ N 855 от 13 июня 2020 г. Экспериментальную работу осуществляли согласно правилам, принятым в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986 т.).

В первой серии экспериментов исследовали влияние средства на когнитивные функции у белых крыс при гипоксическом состоянии. Животные были разделены на 5 групп: контрольная и четыре опытных. Животным I-III опытных групп внутрижелудочно вводили водный раствор нового средства в дозах 100, 200 и 500 мг/кг, IV опытной группы - препарат сравнения танакан (IIN011709/01, «Бофур Ипсен Индастри», Франция) в дозе 100 мг/кг. Животные контрольной группы получали воду дистиллированную в эквивалентном объеме. Введение животным исследуемых средств осуществляли в течение 7 дней, последнее - за час до выработки у них условной реакции пассивного избегания (УРПИ) [9]. После обучения животных помещали в герметичный сосуд (1 л) до атонального дыхания с целью выработки гипоксического состояния [9]. Сохранность УРПИ проверяли через 1, 24 и 72 часа после гипоксического воздействия по количеству животных с выработанным условным рефлексом, а также по длительности латентного периода (первоначальное время захода животных в темный («безопасный») отсек установки).

Во второй серии экспериментов животных с учетом принципа рандомизации распределяли на 4 группы: интактная, контрольная и две опытных. В каждую группу входило по 8 животных. Животным I опытной группы внутрижелудочно вводили средство, обладающее нейропротективной, метаболической активностью в дозе 100 мг/кг, животным II опытной группы - танакан в аналогичной дозе 1 раз в сутки в течение 7 дней. Крысы интактной и контрольной групп получали воду дистиллированную в эквивалентном объеме по аналогичной схеме. На 7 сутки у животных контрольной и опытных групп моделировали гипобарическую гипоксию, «поднимая» их в барокамерной установке со скоростью 50 м/с на «высоту» 9000 м, с 30-минутной экспозицией в этих условиях и последующей трехчасовой реоксигенацией [9]. После трехчасовой реоксигенации животных декапитировали под эфирным наркозом для проведения биохимических исследований сыворотки крови и головного мозга.

Содержание нейронспецифической енолазы (NSE) в сыворотке крови определяли с помощью тест-системы «Elecsys NSE» («Roche Diagnostics)) (Швейцария)) на автоматическом иммуноферментном анализаторе Cobas е411 (Германия). Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) [3]; состояние антиоксидантной системы - по активности каталазы (КАТ) [2], супероксиддисмутазы (СОД) [16], глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР) [23], а также по содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) [26] в гомогенате головного мозга. Количественное содержание белка определяли по методу М. Bradford. Влияние средства, обладающего нейропротективной, метаболической активностью на энергетические процессы в головном мозге оценивали по содержанию АТФ [5], на функционирование электрон-транспортной сети - по активности NADH-дегидрогеназы (комплекс I) и сукцинатдегидрогеназы (комплекс II) [24, 27]. Интенсивность и направленность гликолиза определяли по содержанию лактата и пирувата в гомогенате головного мозга, а также по их соотношению [5].

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ Statistica for Windows 6.0. Достоверность различий между контрольной и опытными группами оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Для сравнения процента животных с сохранившимся условным рефлексом применяли критерий Фишера. Различия считали достоверными при р<0,05.

Данные, представленные в таблице 5, показывают, что через час после гипоксического воздействия УРПИ сохранилась у 90% животных, получавших средство, обладающее нейропротективной, метаболической активностью в дозах 100 и 500 мг/кг, а также танакан в дозе 100 мг/кг, тогда как в контрольной группе - у 60% животных. Латентный период в эти сроки наблюдения у животных данных опытных групп был выше в среднем на 42% такового в контроле. В опытной группе животных, получавших новое средство в дозе 200 мг/кг, УРПИ выработалась у 100% животных, а латентный период был выше на 54% контрольного показателя.

На 3 сутки эксперимента количество животных с выработанной УРПИ в опытных группах было в 2,5 раза выше, чем в контроле. Латентный период у животных, получавших новое средство и танакан, был выше в среднем в 2,3 раза данного показателя у контрольных животных.

Результаты исследований во второй серии экспериментов показали, что на фоне курсового введения средства, обладающего нейропротективной, метаболической активностью и препарата сравнения уровень маркера повреждения нейронов - NSE в сыворотке крови снизился соответственно на 31 и 24% относительно контрольного показателя (таблица 6).

Данные, представленные в таблице 7, показывают, что на фоне гипоксии/реоксигенации у животных отмечалось усиление прооксидантных процессов, стимуляция выработки активных форм кислорода, угнетающих активность эндогенной антиоксидантной системы. Применение исследуемого средства на фоне данного патологического состояния способствовало подавлению процессов перекисного окисления липидов и усилению активности эндогенной антиоксидантной системы.

На фоне введения нового средства и препарата сравнения уровень МДА в гомогенате головного мозга был ниже на 24% такового у контрольных животных. Применение нового средства и танакана повышало активность СОД (на 39 и 50%) и КАТ (на 34 и 24% соответственно) по сравнению с контрольными показателями. При оценке состояния глутатионового звена антиоксидантной системы была выявлено, что у животных I и II опытных групп активность ГПО в гомогенате головного мозга была на 20 и 29% выше, чем в контроле. При этом новое средство оказывало более значимое влияние на ГР, стимулируя ее активность на 56% относительно контрольного значения, тогда как препарат сравнения повышал данный показатель лишь на 29%. Вследствие этого содержание ВГ в гомогенате головного мозга у животных опытных групп было в среднем на 45% выше такового у контрольных животных.

В ходе биохимических исследований выявлено, что на фоне гипоксии/реоксигенации у животных контрольной группы наблюдается нарушение функций дыхательной цепи митохондрий, угнетение цикла Кребса и активация анаэробного гликолиза, вследствие чего в гомогенате головного мозга снижается содержание АТФ относительно интактного значения (таблица 8).

Установлено, что средство, обладающее нейропротективной, метаболической активностью, и танакан оказывали равнозначное влияние на процессы гликолиза, стимулируя аэробные процессы. Так у животных опытных групп содержание лактата в гомогенате головного мозга было ниже в среднем на 40%, соотношение лактата/пирувата - на 32% показателей у контрольных животных. При этом новое средство оказывало более значимое влияние на активность митохондриальных комплексов I и II, повышая их в 2,4 и 1,4 раза соответственно по сравнению с контрольными значениями. Вследствие этого содержание АТФ в гомогенате головного мозга у животных I опытной группы было выше контрольного значения в 2,0 раза, на фоне препарата сравнения - в 1,8 раза.

Таким образом, средство, обладающее нейропротективной, метаболической активностью, оказывает нейропротективное и метаболическое действие на фоне гипоксических состояний различного генеза, улучшая когнитивные функции, снижая уровень NSE, интенсивность перекисного окисления липидов, повышая активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы и способствуя мобилизации энергетических процессов.

Литература

1. Арушанян Э.Б. Ноотропные свойства препаратов гинкго билоба // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2008. - Т. 71, №4. - С. 37-63.

2. Гирин СВ. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах. //Лабораторная диагностика. - 1999. - №4. - С 45-46.

3. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - М., 2009; - 890 с.

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М: Новая волна, 2012. - С.457.

5. Методы биохимических исследований / под ред. М.И. Прохорова. - Л., 1982. - 271 с.

6. Муравьев И.А. Технология лекарств. Том 1. - М.: Медицина, 1980. - 704 с.

7. ОФС.1.5.3.0006.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.

8. Першина О.В., Суслов Н.И., Пашинский В.Г. и др. Некоторые фармакологические свойства препаратов из надземной части Scutellaria baicalensis //Растительные ресурсы. - 1998. - Т. 34, Вып. 3. - С. 83-87.

9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / Под ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

10. Сизова Н.В. Состав и антиоксидантная активность эфирных масел, содержащих производные азулена //Хим. фарм. журнал. - Т. 46, №6. - 2012. - С. 42-44.

11. Шишмарев В.М., Шишмарева Т.М., Асеева Т.А. Культивирование некоторых лекарственных растений в Республике Бурятия // В сб.: Разнообразие почв и биоты Северной и Центральной Азии. Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием, посвященной году науки и технологий в Российской Федерации и 40-летию Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. - Улан-Удэ, 2021. - С. 568-570.

12. Шурыгин А.Я., Беззубов Н.В., Игнатова Е.А. и др. Экстракт шлемника байкальского стимулирует рост нейритов в культуре спинномозговых ганглиев крысы // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - Т. 134, №7. - С. 56-57.

13. Шурыгин А.Я., Николаев С.М., Крайцов А.А. и др. Нейропротекторный эффект экстрактов из надземной части Astragalus membranaceus и A. mongolicus (Fabaceae) в условиях токсического действия глутамата // Растительные ресурсы. - 2012. - Т. 48, Вып. 2. - С. 273-277.

14. Шурыгин А.Я., Кравцов А.А., Батсурен Д. и др. Сравнительное изучение защитного действия экстрактов корней Astragalus mongolicus Bunge и Astragalus membranaceus (Fischer) Bunge на зернистые нейроны мозжечка крыс в условиях глутаматной интоксикации // Наука Кубани. - 2009. - №3. - С. 46-49.

15. Яковлев Г.П. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия: учебное пособие / под ред. Г.П. Яковлева. - СПб.: СпецЛит, 2006. - 845 с.

16. Boriskin P., GulenKo О., Deviatkin A., Pavlova О., Toropovskiy A. Correlation of superoxide dismutase activity distribution in serum and tissues of small experimental animals. IOP Conf Ser: Earth Environ. Sci. 2019. - 403 p.

17. Mu X., He G., Cheng Y. et al. Baicalein exerts neuroprotective effects in 6-hydroxydopamine-induced experimental parkinsonism in vivo and in vitro II Pharmacol. Biochem. Behav. - 2009. - Vol.92, №4. - P. 642-648.

18. Cao Y., Мао X., Sun С et al. Baicalin attenuates global cerebral ischemia/reperfusion injury in gerbils via anti-oxidative and anti-apoptotic pathways // Brain Res. Bull. - 2011. - Vol. 85, №6. - P. 396-402.

19. Chan W.S., Durairajan S.S., Lu ^T.H., Wang Y. et al. Neuroprotective effects of Astragaloside IV in 6-hydroxydopamine-treated primary nigral cell culture // Neurochem. Int. - 2009. - Vol.55, №6. - P. 414-422.

20. Hwang Y. K., Jinhua M., Choi B.R. et al. Effects of Scutellaria baicalensis on chronic cerebral hypoperfusion-induced memory impairments and chronic lipopolysaccharide infusion-induced memory impairments // J. Ethnopharmacol. - 2011. - Vol. 137, №1. - P. 68 -689.

21. Нео Н., Shin Y., Cho W. et al. Memory improvement in ibotenic acid induced model rats by extracts of Scutellaria baicalensis // J. Ethnopharmacol. - 2009. - Vol.122, №1. - P. 20-27.

22. Kim Y.O., Leem K., Park J. et al. Cytoprotective effect of Scutellaria baicalensis in CA1 hippocampal neurons of rats after global cerebral ischemia // J. Ethnopharmacol. - 2001. - Vol. 77, №2-3. - P. 183-188.

23. Pinto R.E., Bartley W. The effect of age and sex on glutathione reductase and glutation peroxidase activities and aerobic glutathione oxidation in rat liver homogenates // Biochemical Journal. - 1969. - Vol.112. - №1. - P. 109-115.

24. Pollard A.K., Craig E.L., Chacrabarti L. Mitochondrial Complex I activity measured by spectrophotometry is reduced across all brain regions in ageing and more specifically in neurodegeneration // PLOS One. - 2016. - P. 1-13.

25. Qu Y.Z., Li M., Zhao Y.L., Zhao Z.W. et al. Astragaloside IV attenuates cerebral ischemia-reperfusion-induced increase in permeability of the blood-brain barrier in rats // Eur. J. Pharmacol. - 2009. - Vol.606, №1- 3. - P. 137-141.

26. Shaik I.H., Mehvar R. Rapid determination of reduced and oxidized glutathione levels using a new thiol-masking reagent and the enzymatic recycling method: Application to the rat liver and bile samples // Analytical and Bioanalytical Chemistry. - 2006. - Vol. 385, №1. - P. 105-113.

27. Spinazzi M., Casarin A., Pertegato V. et al. Assesment of mitochondrial respiratory chain enzymatic activities on tissues and cultured cells // Nat Protoc. - 2012. - №7. - P. 1235-1246.

28. Tang W., Sun X., Fang J. -S. et al. Flavonoids from Radix Scutellariae as potential stroke therapeutic agents by targeting the second postsynaptic density 95 (PSD-95)/disc large/zonula occludens-1 (PDZ) domain of PSD-95 // Phytomedicine. - 2004. - Vol. 11, №4. - P. 277-284.

29. Wang H.-H. Anticonvulsant effect of water extract of Scutellariae radix in mice / H.-H. Wang, J -F. Liao, C.-F. Chen // J. Ethnopharmacol. - 2000. - Vol.73, №1- 2. - P. 185-190.

30. https://base.garant.ru/403592562/ Приказ Минфин РФ №196н от 29.11.2021.

Изобретение относится к области фармации, а именно к способу получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием. Способ получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием, для этого растительный материал, состоящий из астрагала перепончатого корней, шлемника байкальского корней, ромашки аптечной цветков в соотношении компонентов в мас.ч. (5:3:2), измельченный до размеров частиц диаметром 1,0-3,0 мм, экстрагируют водой горячей 75°С трехкратно при перемешивании при температуре 75°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 10 об.ч экстрагента, первый и второй контакт фаз в течение 20 мин, третий контакт фаз в течение 15 мин, далее объединенные извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате. Указанное изобретение позволяет получить лекарственное средство с повышенной нейропротективной, метаболической активностью. 8 табл.

Способ получения средства, обладающего нейропротективным, метаболическим действием, для этого растительный материал, состоящий из астрагала перепончатого корней, шлемника байкальского корней, ромашки аптечной цветков в соотношении компонентов в мас.ч. (5:3:2), измельченный до размеров частиц диаметром 1,0-3,0 мм, экстрагируют водой горячей 75°С трехкратно при перемешивании при температуре 75°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 10 об.ч экстрагента, первый и второй контакт фаз в течение 20 мин, третий контакт фаз в течение 15 мин, далее объединенные извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.