Способ получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью Российский патент 2022 года по МПК A61K36/41 A61K127/00 A61K133/00 A61K135/00 A61P25/00 A61P37/02 B01D11/02 

Изобретение относится к области фармации, и касается способа получения средства, обладающего иммуномодулирующей, нейропротективной активностью на основе травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.) в виде экстракта сухого.

Флора Восточной Сибири богата перспективными лекарственными растениями народной медицины, проявившие тот или иной фармакологический эффект. Особое внимание заслуживают лекарственные растения, известные в народной медицине, а также обеспеченные природными запасами. К таким лекарственным растениям относится многолетнее суккулентное растение из семейства толстянковых (сем. Crassulaceae) - горноколосник колючий (Orostachys spinosa (L.) Sweet.). Растение применялось в народной медицине в свежем виде, в виде отваров. Из-за мясистости стеблей и листьев известен свежий сок растения. Средства на основе горноколосника колючего применяли при эпилепсии и как успокаивающее при нервных расстройствах. Отвар или свежий сок принимали при лихорадке, золотухе [10]. Свежие листья оказывают стимулирующее ранозаживляющее действие при порезах, ссадинах, мозолях и геморроидальных узлах. Сок горноколосника колючего применяли для лечения ожогов, укусов насекомых, а также применяли при кожных сыпях, опрелостях. Свежие листья первого года жизни применяли как витаминное при цинге. Кроме этого растение применяли в пищу и использовали как кормовую добавку [8]. Известны экспериментальные данные, выявлена выраженная адаптогенная активность извлечений из травы горноколосника колючего [5].

Известны средства на основе эхинацеи пурпурной Echinacea purpurea, обладающие иммуностимулирующим, противовоспалительным действием, в том числе в виде жидкой лекарственной формы Иммунал [4]. Известно средство Танакан, которое предложено в качестве ангиопротекторного, венотонизирующего и антиагрегативного средства [4]. Его применяют при энцефалопатиях, нарушениях мозгового и периферического кровообращения, астенических состояниях. Его получают из растения гинкго билоба в виде стандартизированного экстракта. В природных условиях России гинкго билоба не встречается, но культивируется в Крыму и на Кавказе. В качестве прототипа данного изобретения приняты Танакан и Иммунал. Недостатками Иммунала являются слабо выраженные иммуномодулирующая активность по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу.

Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, за счет использования широко распространенного отечественного растительного сырья травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.), имеющей надежную и обеспеченную сырьевую базу.

При производстве сухих экстрактов первостепенное значение имеет процесс экстрагирования лекарственного растительного сырья. Изучено влияние технологических факторов на процесс экстрагирования растительного материала - природы экстрагента, его соотношение с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности числа экстракций. Опыты выполняли в трехкратной повторности и использовали средние значения полученных данных. Эффективность экстракции оценивали по выходу экстрактивных веществ, полисахаридов, аминокслот.

Определение содержания экстрактивных веществ проводили согласно ОФС.1.5.3.0006.15 «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» [6].

Определение содержания экстрактивных веществ проводят гравиметрическим методом 1. Метод 1 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются процессу однократной экстракции.

25,0 мл извлечений из растительного сырья, полученных в опытах, пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре 100-105°С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7-9 см и выпаривают на водяной бане досуха. Чашку с остатком сушат при температуре 100-105°С до постоянной массы, затем охлаждают в течение 30 минут в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и немедленно взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье (X, %) вычисляют по формуле:

где m - масса сухого остатка, г; m₁ - навеска исходного сырья, г; W - влажность сырья, %.

Для оценки содержания полисахаридов в извлечениях использована методика количественного определения полисахаридов согласно ФС.2.5.0032.15 Подорожника большого листья [9].

К 5 мл извлечений, полученных в опытах, прибавляют 15 мл 95% этанола, перемешивают, подогревают на водяной бане до 30°С в течение 5 минут. Через час осадок количественно переносят на фильтр и последовательно промывают 15 мл раствора 95% спирта в воде (3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивают сначала на воздухе, затем при температуре 100-105°С до постоянной массы.

Содержание полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в % (X) вычисляют по формуле:

где m₁ - масса фильтра, г; m₂ - масса фильтра с осадком, г; m - навеска сырья, г; W - влажность растительного сырья, %.

Для количественного определения свободных аминокислот в извлечениях использовали спектрофотометрический метод, основанный на измерении оптической плотности окрашенного комплекса аминокислот с нингидрином.

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 мл извлечения, полученного в опытах, прибавляют 4 мл фосфатного буферного раствора с рН=6,4; а также 2 мл 1% раствора нингидрина в 95% спирте этиловом и 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты. Реакционную массу нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут; быстро охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Параллельно проводят аналогичные опыты с 2 мл раствора рабочего стандартного образца (РСО) глутаминовой кислоты и 2 мл воды (контрольный опыт).

Измеряют оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре при длине волны 568 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве сравнения воду.

Содержание суммы свободных аминокислот в пересчете на глутаминовую кислоту и абсолютно сухое сырье (X) вычисляют в % по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D₀ - оптическая плотность раствора РСО глютаминовой кислоты; m - навеска исходного сырья, г; W - влажность растительного сырья, %.

Приготовление раствора РСО глутаминовой кислоты. Около 0,05 г (точная навеска) глютаминовой кислоты (ФС 42-0229-07) помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в 50 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Приготовление фосфатного буферного раствора с рН=6,4 по ОФС 42-0072-47 «Буферные растворы». 1,79 г динатриягидрофосфата, 1,36 г калия дигидрофосфата и 7,02 натрия хлорида растворяют в воде и доводят объем раствора водой до 1000,0 мл.

В качестве экстрагентов использовались вода холодная, вода горячая, спирт этиловый с различной концентрацией 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%. Полученные данные приведены в таблице 1. Как видно из таблицы, наиболее лучший выход экстрактивных веществ наблюдался при экстракции 10% раствором спиртом этиловым и составлял 35,17%.

В продолжении исследований изучено влияние степени измельчения травы на извлечение экстрактивных веществ. Растительное сырье измельчали до 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 мм. Результаты представлены в таблице 2. Экстрагирование выполняли 10% этанолом.

Наибольший выход экстрактивных веществ наблюдается при степени измельчения сырья 1 мм и составляет 36,22%.

Изучена зависимость извлечения экстрактивных веществ при экстракции травы горноколосника колючего от соотношения сырье-экстрагент. Экстрагирование выполняли 10% этанолом, степень измельчения сырья 1 мм. Результаты представлены в таблице 3. Наиболее оптимальное соотношение сырье-экстрагент 1:12. Дальнейшее увеличение объема экстрагента нерационально.

Изучено влияние температурного режима экстракции на выход суммы экстрактивных веществ (табл. 4). С увеличением температуры повышается выход БАВ. Для получение экстракта нами выбрана оптимальная температура 60°С.

Чтобы установить продолжительность и кратность числа экстракций изучали время наступления равновесной концентрации в системе «сырье:экстрагент». Для этого проводили 3-хкратную 2-хчасовую экстракцию измельченного сырья травы горноколосника колючего 10% этанолом на водяной бане при температуре 60°С при соотношении сырья и экстрагента 1:12 при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз 10%-ым этанолом через заданные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ, полисахаридов и суммы свободных аминокислот. Результаты определения экстрактивных веществ, полисахаридов и аминокислот из травы горноколосника колючего при 1 контакте фаз представлены в таблице 5. В продолжении опыта проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-ом и 3-ем контакте фаз 10% этанол в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ, полисахаридов и суммы свободных аминокислот. Результаты определения экстрактивных веществ, полисахаридов и аминокислот из травы горноколосника колючего при 2 и 3 контакте фаз представлены в таблице 5. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что равновесное состояние в системе «сырье:экстрагент» для травы горноколосника колючего в I, II, III контакте фаз наступает через 30 минут каждый. Трехкратная экстракция обеспечивает максимальный выход как действующих, так и экстрактивных веществ.

В результате проведенных испытаний установлены оптимальные условия экстрагирования горноколосника колючего травы: экстрагент - 10% спирт, его соотношение к количеству сырья - 1:12, температурный режим - 60°С, степень измельчения сбора - 1 мм. Трехкратная экстракция. Продолжительность экстракции в системе «сырье:экстрагент» для травы горноколосника колючего составляет 30 минут в I, II, III контакте фаз.

Пример способа получения экстракта сухого: 1 кг травы горноколосника колючего измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 12 л 10%-ным спиртом этиловым в соотношении сырье : экстрагент 1:12. Первую экстракцию выполняют при температуре 60°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую и третью экстракцию выполняют в течение 30 мин при температуре 60°С, подавая в экстрактор 10%-ный спирт этиловый в количестве, равном слитому от предыдущей экстракций. Объединенное водно-спиртовое извлечение после экстракций последовательно порциями упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°С 8 ч. Получают 260,0 г экстракта сухого. Сухой экстракт представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен.

Оценка нейропротекторных свойств сухого экстракта горноколосника колючего.

Содержание животных, участвующих в экспериментах, соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ №199Н от 01.04.2016 г. «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики». Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных» (Страсбург, 1986 г.).

Исследования выполнены на белых крысах линии Wistar с исходной массой 160-180 г. В первой серии экспериментов животным I-III опытных групп внутрижелудочно вводили в течение 10 дней экстракт сухой горноколосника колючего в дозах 50, 100 и 200 мг/кг соответственно. Животные IV опытной группы получали в аналогичном режиме препарат сравнения - Танакан в дозе 100 мг/кг, контрольной группы - воду очищенную в эквивалентном объеме На 10 сутки, через 30 минут после последнего введения исследуемых средств, у животных вырабатывали условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ). После выработки УРПИ животных помещали в герметическую емкость (объем 1 л) до атонального дыхания. О влиянии экстракта сухого горноколосника колючего на процессы памяти судили по количеству животных с сохранившимся рефлексом и латентному периоду (время захождения в темный отсек установки) через 1, 24 и 72 часа после гипоксического воздействия [7].

Во второй серии эксперимента животным I и II опытных групп внутрижелудочно вводили в течение 10 дней соответственно экстракт сухой горноколосника колючего и Танакан в дозе 100 мг/кг. Последнее введение осуществляли за 30 минут до воспроизведения гипобарической гипоксии. Острую гипобарическую гипоксию моделировали путем подъема лабораторных животных в барокамерной установке на «высоту» 9000 м со средней скоростью 50 м/с и нахождения их в этих условиях в течение 30 мин [7]. Через 3 ч после восстановления исходного режима кислородного обеспечения крыс декапитировали под эфирным наркозом. В сыворотке крови определяли содержание нейрон-специфической енолазы (NSE) с помощью набора «Can Ag NSE» на иммуноанализаторе «Multiskan Ascent». Интенсивность процессов свободнорадикального окисления, в гомогенате головного мозга, оценивали по содержанию вторичного продукта перекисного окисления липидов - малоновому диальдегиду (МДА) [2]. Состояние антиоксидантной системы характеризовали по каталитической активности каталазы [1] и содержанию восстановленного глутатиона [12] в ткани мозга. На гистологических срезах, окрашенных крезилвиолетом по Нисслю, проводили морфометрические исследования коры больших полушарий с помощью микроскопа «Axio LAB.A1» с программным обеспечением для анализа изображений Axio Vision SE64 Rel.4.8.3 и ZEN 2012. Во II-V слоях коры больших полушарий определяли процентное содержание нормохромных, резко гипохромных, резко гиперхромных (пикнотические) нейронов и «клеток-теней».

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с помощью пакета программ Statistica for Windows 6.0. Достоверность различий между контрольной и опытными группами оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Для сравнения процента животных с сохранившемся рефлексом применяли критерий Фишера. Различия считали достоверными при р≤0,05.

Результаты исследований показали, что помещение животных в герметический сосуд до появления атонального дыхания способствует снижению у них процессов консолидации и воспроизведение памятного следа (таблица 6).

На фоне введения экстракта горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг и Танакана в аналогичной дозе УРПИ сохранился у всех животных во II и IV опытных группах через 1 час и 24 часа, тогда как в контрольной и I опытной группе только у 10 из 14 животных. Латентный период у животных данных опытных групп был в среднем выше на 20 и 25% (р≤0,05) контрольных показателей соответственно срокам наблюдения. На 3 сутки эксперимента условный рефлекс отмечался у 71% животных в III и IV опытных группах; латентный период у них был выше в 1,5 раза такового у контрольных животных. Наиболее значимое влияние на сохранность УРПИ в отдаленные сроки проявлял экстракт горноколочника колючего в дозе 100 мг/кг. Так, через 72 часа УРПИ сохранился у 86% (р≤0,05) животных во II опытной группе, и латентный период у них был в 1,8 раза выше такового в контроле.

Во второй серии экспериментов было установлено, что на фоне гипоксии развиваются структурные изменения в коре больших полушарий, характеризующиеся увеличением количества регрессивных форм нейронов - гиперхромных (в 2,8 раза), гипохромных (в 1,6 раза) и «клеток-теней» (в 2,5 раза) по сравнению с показателями у животных интактной группы (таблица 7).

На фоне введения животным экстракта сухого горноколосника колючего и Танакана наблюдались менее выраженные структурные изменения в коре больших полушарий (таблица 7): количество гипохромных нейронов снижалось на 23 и 31%, гиперхромных нейронов - на 49 и 42% и «клеток-теней» - на 37 и 33% соответственно по сравнению с показателями у контрольных животных.

Данные, представленные в таблице 8, показывают, что на фоне гипоксии/реокисгенации наблюдалось повышение содержания в сыворотке крови белых крыс маркера повреждения нервной ткани - NSE на 34% по сравнению с данными у интактных животных. Курсовое введение животным экстракта сухого горноколосника колючего и Танакана снижало уровень NSE в среднем на 20% относительно такового показателя у контрольных животных.

Экстракт сухой горноколосника колючего проявляет антиоксидантное действие, снижает интенсивность реакций перекисного окисления липидов, оказывая протективное влияние на эндогенную антиоксидантную систему клеток головного мозга при гипоксии/реоксигенации (таблица 9).

Так, отмечается снижение содержания МДА на 26%, при этом каталитическая активность каталазы повысилась на 28%, а содержание восстановленного глутатиона на 39% по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы животных.

Таким образом, экстракт сухой горноколосника колючего оказывает нейропротективное действие на фоне гипоксических состояний различного генеза, улучшая когнитивные функции, ограничивая образование регрессивных форм нейронов в коре больших полушарий, снижая уровень NSE в сыворотке крови. Исследуемый экстракт способствует корригированию липид-липидных и белково-липидных взаимодействий в клетках головного мозга, посредством снижения интенсивности перекисного окисления липидов и повышения активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы. Нейропротективное действие экстракта сухого горноколосника колючего соответствует таковому препарата сравнения - Танакана.

Оценка иммуномодулирующего свойства сухого экстракта горноколосника колючего выполнена на животных на модели иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном.

Определены иммуномодулирующие свойства сухого экстракта горноколосника колючего в отношении показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. Эксперименты проведены на мышах-самцах линии F₁ (СВАхС57 В1/6) массой 18-20 г, полученных из питомника РАМН «Столбовая». Иммунодепрессию вызвали цитостатиком азатиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [3].

Сухой экстракт горноколосника колючего вводили 1-ой опытной группе мышей на фоне азатиоприна в дозе 100 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. В качестве препарата сравнения использовали Иммунал, который вводили 2-ой опытной группе мышей на фоне азатиоприна в изоэффективной дозе 5 мл/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная и контрольная группы животных получали воду очищенную по аналогичной схеме. Исследования проводили на 20 день эксперимента.

Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике [7]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1% взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4 сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена - 50 мкл 50% взвеси ЭБ. В контрлатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции ГЗТ проводили спустя 24 часа по разнице масс опытной и контрольной лап. Индекс реакции ГЗТ (И_р) рассчитывали по формуле: И_р=[(М_оп-М_к)/М_к]×100%, где М_оп - масса опытной лапы, М_к - масса контрольной лапы.

Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J.Cunningham (1965). Мышей иммунизировали внутрибрюшинно ЭБ в дозе 2×10⁸ клеток на мышь. Реакцию ставили на 5-е сутки после иммунизации [11].

Состояние макрофагального звена иммунного ответа оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов в отношении частиц коллоидной туши. Оптическую плотность лизата клеток перитонеального экссудата, отражающую количество туши, поглощенной перитонеальными макрофагами, определяли на спектрофотометре «CECIL-2011» при длине волны 620 нм [7].

Результаты обработаны статистическим методом с помощью критерия t-Стьюдента.

При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг на процессы антителообразования установлено, что средство восстанавливает показатели гуморального иммунного ответа в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и числа АОК на 10⁶ спленоцитов на 37% и 40%, соответственно, по сравнению с теми же показателями в интактной группе. При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 10⁶ спленоцитов в среднем в 1,5 раза. При введении препарата сравнения Иммунал достоверно возросло абсолютное и относительное числа АОК в 1,4 и 1,5 раза соответственно по сравнению с данными в контрольной группе (Табл. 10).

При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего на клеточно-опосредованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемое средство восстанавливает индекс данной реакции (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносупрессии. Введение азатиоприна приводило к снижению ИР ГЗТ на 38% по сравнению с тем же показателем в интактной группе. При введении испытуемого средства на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 1,4 раза по сравнению с контролем, тогда как использование препарата сравнения «Иммунал» приводило к увеличению данного показателя в 1,3 раза (Таблица 11).

При исследовании влияния сухого экстракта горноколосника колючего на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов на фоне азатиоприна установлено, что данное средство восстанавливает фагоцитарный индекс. Введение азатиоприна приводило к снижению фагоцитарного индекса на 51% по сравнению с тем же показателем в интактной группе. При введении исследуемого средства животным с иммунодефицитом наблюдали увеличение фагоцитарного индекса в 1,9 раза по сравнению с данными в контрольной группе; препарат сравнения «Иммунал» увеличивал данный показатель в 1,7 раза (Таблица 12).

Таким образом, исследование иммуномодулирующих свойств сухого экстракта горноколосника колючего выявило его эффективность по отношению к реакциям клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа при экспериментальном иммунодефиците, вызванном цитостатиком азатиоприном. Сухой экстракт горноколосника колючего в дозе 100 мг/кг способен ослаблять супрессивное действие азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию, антителогенез и фагоцитоз макрофагов. Эффективность исследуемого средства выражена в большей степени, чем действие препарата сравнения «Иммунала».

Литература

1. Гирин С.В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах. Лабораторная диагностика. 1999; 4: 45-46.

2. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. М., 2009: 890.

3. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М.,1985.- 256 с

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: Новая волна, 2012. - 1216 с.

5. Одинец А.Д. Фармакологическое исследование экстракта Горноколосника колючего, произрастающего в Восточной Сибири: Автореф.дисс…к-та фарм.наук. Томск, 2012. - 21 с

6. ОФС.1.5.3.0006.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах.

7. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятяна - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

8. Телятьев, В.В. Полезные растения Центральной Сибири. - Иркутск: Восточно-Сибирское книжное издательство, 1985. - 384 с.

9. ФС.2.5.0032.15 Подорожника большого листья.

10. Шретер, А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. - М.: Медицина, 1975. - 328 с.

11. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells //Nature. - 1965. - Vol. 207. - №5001. - P. 1106-1107.

12. Shaik I.H., Mehvar R. Rapid determination of reduced and oxidized glutathione levels using a new thiol-masking reagent and the enzymatic recycling method: Application to the rat liver and bile samples. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2006; 385 (1): 105-113.

Изобретение относится к области фармации, а именно к способу получения средства, обладающего нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, на основе травы горноколосника колючего Orostachys spinosa (L.) в виде экстракта сухого. Способ получения средства, обладающего выраженной нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, для этого растительный материал, состоящий из измельченных до размера частиц диаметром 1,0 мм травы горноколосника колючего, экстрагируют трехкратно при температуре 60°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 12 об.ч. экстрагента 10% этиловым спиртом в течение 30 мин каждый контакт фаз, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате. Вышеописанный способ позволяет получить сухой экстракт с повышенным содержанием экстрактивных веществ, а также расширить ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, обладающих нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, за счет использования широко распространенного отечественного растительного сырья травы горноколосника колючего. 12 табл.

Способ получения средства, обладающего выраженной нейропротективной, иммуномодулирующей активностью, для этого растительный материал, состоящий из измельченных до размера частиц диаметром 1,0 мм травы горноколосника колючего, экстрагируют трехкратно при температуре 60°С при отношении 1 мас.ч. растительного материала : 12 об.ч. экстрагента 10% этиловым спиртом в течение 30 мин каждый контакт фаз, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.