Препарат для лечения мастита у коров в период лактации Российский патент 2024 года по МПК A61K31/00 

Изобретение относится к области ветеринарии.

Мастит крупного рогатого скота является одним из основных заболеваний молочного скота, который приводит к большим экономическим потерям из-за снижения производства молока и увеличения себестоимости продукции в молочной промышленности.

В настоящее время для лечения больных маститом коров применяют разные методы и препараты, при которых в качестве этиотропных средств используют антибиотики, сульфаниламиды и другие химиотерапевтические вещества. Однако они недостаточно эффективны из-за наличия в хозяйствах микроорганизмов или их ассоциаций, обладающих различной чувствительностью к антибиотикам, а также из-за появления полирезистентной микрофлоры. В связи с этим возникает необходимость поиска новых способов терапии мастита и разработки комплексных антимикробных препаратов широкого спектра действия, которые эффективны при разных формах мастита.

Известен антибактериальный препарат Марфлоксин^® 10% раствор для инъекций (АО «КРКА, д.д., Ново место», Словения), который в качестве действующего вещества в 1 мл содержит 100 мг марбофлоксацина, а в качестве вспомогательных веществ: метакрезол, динатрия эдетат, моноглицерол, глюконолактон и воду для инъекций. Марфлоксин^® 10% раствор для инъекций применяют крупному рогатому скоту при маститах один раз в сутки подкожно, внутримышечно или внутривенно в дозе 1 мл/50 кг массы животного (2 мг/кг) в течение 3-5 дней. [Инструкция по ветеринарному применению лекарственного препарата Марфлоксина^® 10% раствора для инъекций; номер регистрационного удостоверения 705-3-5.14-3149 № ПВИ-3-5.14/04273].

Недостатком Марфлоксина^® 10% раствора для инъекций является наличие одного химиотерапевтического средства в качестве действующего вещества, что снижает терапевтическую эффективность препарата при длительном применении из-за развития резистентной микрофлоры, а также возможное развитие воспалительной реакции в месте введения.

Известно этиотропное средство Полицефур в форме суспензии для инъекций (ООО «Агробиоснаб», Россия) для лечения мастита, которое в качестве действующего вещества в 1 мл содержит 100 мг цефтиофура гидрохлорида, а в качестве вспомогательных веществ: алюминия моностеарат, сорбитана олеат, бензиловый спирт, триглицериды каприловой и каприновой кислот. Полицефур 10% применяют крупному рогатому скоту при маститах один раз в сутки подкожно или внутримышечно в дозе 1 мл/100 кг массы животного (1 мг/1 кг) в течение 5 дней [Инструкция по ветеринарному применению лекарственного препарата Полицефур; номер регистрационного удостоверения 77-3-19.22-4918 № ПВИ-3-19.22/03757].

Недостатком Полицефура является наличие одного химиотерапевтического средства в качестве действующего вещества, возможное развитие отека в месте инъекции и необходимость введения препарата в разные участки тела животных.

Известен препарат Мастилекс в форме суспензии для интрацистернального введения («Industrial Veterinaria S.A.» (INVESA), Испания), который в качестве действующих веществ в 1 мл содержит 35 мг цефалексина моногидрата и 3,5 мг гентамицина сульфата, а в качестве вспомогательных веществ: кетостеариловый спирт, моностеарат глицирина и фракционированное кокосовое масло. Мастилекс применяют крупному рогатому скоту при маститах бактериальной этиологии в дозе 10 мл (1 шприц-дозатор) в каждую пораженную четверть вымени с интервалом 12-24 часа, но не более 3 раз [Инструкция по ветеринарному применению лекарственного препарата Мастилекс; номер регистрационного удостоверения 724-3-18.12-0959 № ПВИ-3-5.9/00211].

Недостатком Мастилекса является наличие в препарате цефалоспорина I поколения (цефалексина) и аминогликозида II поколения (гентамицина), которые обладают недостаточной эффективность в отношении резистентной микрофлоры, а также длительный срок выведения остаточных количеств антибиотиков из организма животных. Кроме того, Мастилекс не содержит в своем составе противовоспалительных компонентов.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является препарат Мастиет Голд («Интервет-Интернешнл Б.В.», Нидерланды). В одном шприце-дозаторе (8 г) Мастиет Голд в качестве действующих веществ содержит цефапирина натрия 300 мг и преднизолона 20 мг, а в качестве вспомогательных - глицерола моностеарат, алюмосиликат кальция и натрия, арахисовое масло. Мастиет Голд назначают коровам больным маститом интрацистернально в каждую пораженную четверть вымени 2-4-кратно с интервалом 12 часов [Инструкция по применению Мастиет Голд для лечения мастита у коров в период лактации; номер регистрационного удостоверения 528-3-12.15-2917 № ПВИ-3-5.0/03209].

Недостатком препарата является наличие в составе одного химиотерапевтического средства в качестве действующего вещества, что обусловливает недостаточную широту антимикробного спектра, а также длительный период браковки молока после последнего применения препарата (132 часа).

Технический результат изобретения - повышение терапевтической эффективности лечения и сокращение сроков браковки молока.

Технический результат достигается тем, что в препарате для лечения мастита у коров в период лактации, содержащем цефалоспорин, преднизолон и основу, согласно изобретению, в качестве цефалоспорина используют цефтиофура гидрохлорид, в качестве основы - эмульгатор, моноглицериды дистиллированные и масло вазелиновое, и дополнительно содержит марбофлоксацин при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Марбофлоксацин 3,20-4,80 Цефтиофура гидрохлорид 1,80-2,70 Преднизолон 0,32-0,48 Моноглицериды дистиллированные 1,00 Эмульгатор 3,00 Масло вазелиновое до 100

Обоснованность комбинации цефалоспорина III поколения (цефтиофура гидрохлорид), фторхинолона (марбофлоксацин) и глюкокортикостероида (преднизолон) связана с тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два антибактериальных агента, которые обладают синергизмом за счет воздействия на разные метаболические пути бактерий, и противовоспалительный компонент (преднизолон), что обеспечивает высокий терапевтический эффект.

Входящий в состав препарата марбофлоксацин, относится к группе фторхинолонов, активен против грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, особенно в отношении Staphylococcus spp., Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Morganella morganii, Proteus spp., Klebsiella spp., Shigella spp., Pasteurella spp., Haemophilus spp., Moraxella spp., Pseudomonas spp., а также против микоплазм (Mycoplasma bovis, M. hyopneumoniae). Механизм действия препарата заключается в подавлении бактериальной ДНК-гиразы (топоизомеразы II), что останавливает процесс репликации и синтеза ДНК.

Цефтиофура гидрохлорид принадлежит к группе цефалоспоринов III поколения. Он активен в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий, включая штаммы, которые продуцируют β-лактамазу, и некоторые анаэробные бактерии: Escherichia coli, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Haemophilus somnus, Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, Salmonella cholerasuis, Streptococcus suis, Streptococcus zooepidemicus, Pasteurella spp, Staphylococcus spp., Actynomyces pyogenes, Salmonella typhimurium, Streptococcus agalactiae, S. dysgalactiae, S. bovis, Klebsiella spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Bacillus spp., Proteus spp., Fusobacterium necrophorum и Porphiromonas assacharolytica (Bacteroides melaninogenicus). Механизм бактерицидного действия заключается в угнетении функциональной активности бактериальных ферментов транспептидаз и карбоксипептидазы, участвующих в синтезе основного компонента клеточной стенки микроорганизмов - пептидогликана, что приводит к нарушению осмотического баланса и разрушению бактериальной клетки.

Основной целью сочетанного применения марбофлоксацина и цефтиофура является расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в спектре каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов, что обусловлено синергизмом и разным механизмом действия на бактериальную клетку антимикробных субстанций.

Преднизолон - глюкокортикостероид для системного и местного применения, оказывает иммунодепрессивное, противоаллергическое, противовоспалительное, противошоковое действие.

Моноглицериды дистиллированные - глицериновые эфиры стеариновой и пальмитиновой кислот, в фармацевтической отрасли используются для получения вязкопластичных эмульсий и для стабилизации суспензий.

Вазелиновое масло применяется в фармации в качестве основы для медицинских и косметических мазей, используется в качестве растворителя для ряда инъекционных препаратов, а также для приготовления суспензий, поскольку препятствует контакту вещества с воздухом.

Препарат для лечения мастита у коров применяют в период лактации для лечения всех форм мастита.

Перед введением препарата секрет вымени выдаивают из пораженной доли и утилизируют, сосок дезинфицируют. Содержимое шприца-дозатора подогревают до температуры 37°C, тщательно встряхивают до получения равномерной суспензии, затем в канал соска вводят наконечник шприца-дозатора и выдавливают содержимое.

Для лечения мастита препарат вводят интрацистернально один раз в сутки по 5 мл в каждую пораженную четверть вымени: при субклиническом мастите в течение двух дней, при клинических формах мастита - в течение 3-4 дней.

Молоко коров в пищевых целях разрешается использовать не ранее чем через 72 часа после последнего интрацистернального введения препарата (при условии полного исчезновения признаков мастита, подтвержденного маститными тестами). Молоко, полученное ранее установленного срока из здоровых четвертей вымени, используют после термической обработки в корм животным, из пораженных четвертей вымени - утилизируют.

Препарат для лечения мастита у коров в период лактации изготавливается следующим образом. 3% эмульгатора и 1% моноглицерида дистиллированного расплавляют в вазелиновом масле при температуре 70°С, автоклавируют при температуре 120°С в течение 2 часов затем охлаждают до 30-35°С. В основу вносят по весу марбофлоксацин, цефтиофур и преднизолон, предварительно измельченных на шаровой мельнице. Полученную суспензию перемешивают и фасуют.

По внешнему виду препарат представляет собой маслянистую суспензию светло-желтого цвета, которая при температуре 37°С имеет жидкую консистенцию. Препарат полностью сохраняет исходные свойства (внешний вид, цвет, подлинность и массовая доля марбофлоксацина, цефтиофура гидрохлорида и преднизолона, седиментационная устойчивость, плотность, стерильность) в течение двух лет при соблюдении условий хранения (в закрытой упаковке в защищенном от света месте при температуре от 5°С до 25°С).

Сущность технического решения поясняется примерами.

Пример 1. Определение оптимального соотношения компонентов в препарате для лечения мастита у коров.

Для выявления оптимального соотношения компонентов в препарате было составлено три рецептуры:

Рецептура №1: марбофлоксацин - 3,20%; цефтиофура гидрохлорид - 1,80%; преднизолон - 0,32%; эмульгатор - 3,00%; моноглицериды дистиллированные - 1,00%; масло вазелиновое до 100%.

Рецептура №2: марбофлоксацин - 4,00%; цефтиофура гидрохлорид - 2,25%; преднизолон - 0,40%; эмульгатор - 3,00%; моноглицериды дистиллированные - 1,00%; масло вазелиновое до 100%).

Рецептура №3: марбофлоксацин - 4,80%; цефтиофура гидрохлорид - 2,70%; преднизолон - 0,48%; эмульгатор - 3,0%; моноглицериды дистиллированные - 1,0%; масло вазелиновое до 100%.

Исследования были проведены на коровах больных разными формами мастита. Животные по принципу аналогов были разделены на четыре группы. Коровам первой группы интрацистернально вводили в дозе 5,0 мл один раз в сутки в течение 2-4 дней препарат с рецептурой №1, второй - препарат с рецептурой №2, третьей - препарат с рецептурой №3, а животным четвертой группы применяли Мастиет Голд согласно инструкции. Через 5 дней после последнего введения препаратов коров обследовали клинически, а молоко с 2% раствором Масттеста и путем подсчета содержания соматических клеток. Как следует из данных, представленных в таблицах 1-3, наибольшим терапевтическим эффектом обладает предлагаемый препарат (рецептура 1, 2, 3) по сравнению с Мастиет Голдом.

Несмотря на то, что все три рецептуры показали высокую эффективность при лечении мастита у коров в период лактации по сравнению с прототипом препаратом Мастиет Голд, однако наибольшей активностью обладали рецептуры №2 и №3. Эффективность рецептуры №2 при субклиническом мастите составила 100,0%, при катаральном - 91,7%, при гнойно-катаральном - 90,0%, что на 10,0%, 10,0% и 10,4% выше, чем при лечении препаратом Мастиет Голд. Эффективность рецептуры №3 при субклиническом мастите составила 100,0%, при катаральном - 92,3%, при гнойно-катаральном - 90,9%, что на 10,0%, 10,8% и 11,1% выше, чем при лечении препаратом Мастиет Голд.

В связи с тем, что предлагаемый препарат с рецептурой №2 и рецептурой №3 обладает практически одинаковой терапевтической эффективностью по сравнению с прототипом, при этом в рецептуре №3 содержание действующих веществ больше, что снижает экономическую рентабельность производства препарата с данной рецептурой, для дальнейших исследований был выбран препарат (рецептура №2) при следующем соотношении компонентов, мас. %:

марбофлоксацин 4,00 цефтиофура гидрохлорид 2,25 преднизолон 0,40 эмульгатор 3,00 моноглицериды дистиллированные 1,00 масло вазелиновое до 100.

Пример 2. Антимикробная активность препарата для лечения мастита у коров в период лактации.

Изучение антимикробной активности препарата для лечения мастита у коров проводили in vitro методом серийных разведений, с последующим посевом на плотные питательные среды. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов -возбудителей маститов у коров, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Результаты опыта представлены в таблице 4.

Установлено, что заявленный препарат обладает широким спектром и выраженными антимикробными свойствами. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составила 0,04-0,30 мкг/мл. Активность комплексного препарата в отношении эшерихий была достаточно высокой - 0,08-0,15 мкг/мл. Более устойчивым к препарату оказался Proteus vulgaris: МБсК препарата составила 0,60 мкг/мл, при МБцК - 1,20 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

Таким образом, исследования показали, что заявленный препарат для лечения мастита у коров в период лактации обладает широким спектром антимикробного действия и высокой активностью в отношении испытанных культур микроорганизмов, являющихся потенциальными возбудителями воспалительных процессов в молочной железе.

Пример 3. Влияние препарата для лечения мастита у коров в период лактации (рецептура №2) на молочную железу и организм коров.

Для лечения мастита у коров в ЗАО «Родина» Павловского района Воронежской области было подобрано 6 клинически здоровых коров на 3-4 месяце лактации. Заявленный препарат при следующем соотношении компонентов, мас. %:

марбофлоксацин 4,0 цефтиофура гидрохлорид 2,5 преднизолон 0,40 эмульгатор 3,0 моноглицериды дистиллированные 1,0 масло вазелиновое до 100%,

подогретый до 38°С вводили коровам в левую переднюю долю вымени в дозе 5 мл после предварительного сдаивания молока и обработки сосков 70% этиловым спиртом, при этом правая передняя доля служила контролем. До введения препарата и через 3 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч проводили клиническое обследование животных (визуальный осмотр и пальпацию молочной железы, измерение температуры, пульса, дыхания, сокращения рубца), молоко исследовали с 2% раствором Масттеста и подсчитывали количество соматических клеток на анализаторе соматических клеток «DeLaval DDC».

Результаты исследований представлены в таблицах 5-7.

Установлено, что в течение опыта изменений в состоянии организма опытных животных выявлено не было: поведение, аппетит, показатели температуры, пульса, дыхания, находились в пределах нормы (таблица 5).

Как следует из представленных в таблице 6 данных, после интрацистернального введения заявленного препарата для лечения мастита у коров в период лактации реакция секрета вымени из 66,7% долей через 24 ч была сомнительной (+), а из 33,3% - слабо положительной (++). Однако уже через 48 ч в пробах молока из 33,3% долей регистрировали сомнительную реакцию с диагностикумом, а через 72 ч во всех опытных и контрольных долях вымени - отрицательную реакцию.

При определении количества соматических клеток в молоке опытных и контрольных долей было выявлено незначительное их повышение в течение 24 часов после введения препарата, а затем снижение до первоначального уровня через 48-72 часа (таблица 7).

Таким образом, препарат для лечения мастита у коров в период лактации оказывает незначительное раздражающее действие на молочную железу при интрацистернальном введении, которое выражается в появлении сомнительной (+) и слабоположительной (++) реакции молока с 2% раствором Масттеста и увеличении содержания соматических клеток в секрете вымени через 24 часа в 2,7 раза. Через 48 часов количество соматических клеток нормализуется и достоверно не отличается от исходного уровня. Из этого следует, что новый препарат, обладая незначительным раздражающим действием на молочную железу, пригоден для интрацистернального введения с целью лечения мастита у коров в период лактации.

Терапевтическая эффективность заявленного препарата подтверждена для разных форм мастита.

Пример 4. Изучение эффективности лечения субклинического мастита у коров.

Научно-производственный опыт был проведен на базе ЗАО «Родина» Павловского района Воронежской области. Испытания проведены на коровах больных субклиническим маститом (n=79). Диагноз на мастит ставили на основании реакции секрета вымени с раствором Масттеста и пробы отстаивания.

Животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровы первой группы (контроль) были подвергнуты лечению препаратом Мастиет Голд согласно инструкции по применению, а второй - заявленным препаратом для лечения мастита у коров при следующем соотношении компонентов, мас. %:

марбофлоксацин 4,00 цефтиофура гидрохлорид 2,25 преднизолон 0,40 эмульгатор 3,00 моноглицериды дистиллированные 1,00 масло вазелиновое до 100,

путем интрацистернального введения в пораженные доли вымени один раз в сутки в течение 2 дней в дозе 5 мл. Через 5-7 дней животных обследовали клинически, а секрет вымени - с раствором Масттеста и пробой отстаивания. Результаты исследований представлены в таблице 8.

Как следует из представленных в таблице данных, терапевтическая эффективность заявленного препарата при субклиническом мастите составила 100,0%, а в эффективность лечения препаратом Мастиет Голд была ниже на 5,0% и составила 95,0%.

Установлено, что заявленный препарат не уступает по терапевтической эффективности прототипу и может быть широко использован в производственных условиях животноводческих хозяйств.

Пример 5. Изучение эффективности лечения катарального мастита у лактирующих коров.

Научно-производственный опыт был проведен на базе ЗАО «Родина» Павловского района Воронежской области. Испытания проведены на коровах больных катаральным маститом (n=90). Диагноз на мастит ставили на основании клинического исследования молочной железы, а также секрета вымени с раствором Масттеста и пробы отстаивания.

Животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровы первой группы (контроль) были подвергнуты лечению препаратом Мастиет Голд согласно инструкции по применению, а второй - заявленным препаратом для лечения мастита у коров при следующем соотношении компонентов, мас. %:

марбофлоксацин 4,00 цефтиофура гидрохлорид 2,25 преднизолон 0,40 эмульгатор 3,00 моноглицериды дистиллированные 1,00 масло вазелиновое до 100,

путем интрацистернального введения в пораженные доли вымени один раз в сутки в течение 3-4 дней в дозе 5 мл. Через 5-7 дней животных обследовали клинически, а секрет вымени - с раствором Масттеста и пробой отстаивания.

Результаты исследований представлены в таблице 9.

Как следует из представленных в таблице данных, терапевтическая эффективность заявленного препарата при катаральном мастите составила 95,6%, а в эффективность лечения препаратом Мастиет Голд была ниже на 8,9% и составила 86,7%.

Установлено, что заявленный препарат не уступает по терапевтической эффективности прототипу и может быть широко использован в производственных условиях животноводческих хозяйств.

Пример 6. Изучение эффективности лечения гнойно-катарального мастита у коров.

Научно-производственный опыт был проведен на базе ЗАО «Родина» Павловского района Воронежской области. Испытания проведены на коровах больных гнойно-катаральным маститом (n=54). Диагноз на мастит ставили на основании клинического исследования молочной железы, а также секрета вымени с раствором Масттеста и пробы отстаивания.

Животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровы первой группы (контроль) были подвергнуты лечению препаратом Мастиет Голд согласно инструкции по применению, а второй - заявленным препаратом для лечения мастита у коров при следующем соотношении компонентов, мас. %:

марбофлоксацин 4,00 цефтиофура гидрохлорид 2,25 преднизолон 0,40 эмульгатор 3,00 моноглицериды дистиллированные 1,00 масло вазелиновое до 100,

путем интрацистернального введения в пораженные доли вымени один раз в сутки в течение 3-4 дней в дозе 5 мл. Через 5-7 дней животных обследовали клинически, а секрет вымени - с раствором Масттеста и пробой отстаивания.

Результаты исследований представлены в таблице 10.

Как следует из представленных в таблице данных, терапевтическая эффективность заявленного препарата при гнойно-катаральном мастите составила 89,3%, а в эффективность лечения препаратом Мастиет Голд была ниже на 10,7% и составила 78,6%.

Установлено, что заявленный препарат не уступает по терапевтической эффективности прототипу и может быть широко использован в производственных условиях животноводческих хозяйств.

Таким образом, заявленный препарат для лечения мастита у коров в период лактации, содержащий марбофлоксацин, цефтиофур и преднизолон, а также вспомогательные компоненты, обладает более высокой терапевтической эффективностью по сравнению с препаратом-прототипом. Во всех клинических опытах выздоровление животных наступало быстрее, чем в контрольной группе, при сокращении сроков браковки молока. Заявленный препарат может быть широко использован в производственных условиях животноводческих хозяйств для лечения мастита у коров в период лактации.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой препарат для лечения мастита у коров в период лактации, содержащий цефалоспорин, фторхинолон, преднизолон и основу. В качестве цефалоспорина используют цефтиофура гидрохлорид, в качестве фторхинолона - марбофлоксацин, в качестве основы - эмульгатор, моноглицериды дистиллированные и масло вазелиновое при следующем соотношении компонентов, мас. %: марбофлоксацин - 3,20-4,80; цефтиофура гидрохлорид - 1,80-2,70; преднизолон - 0,32-0,48; моноглицериды дистиллированные - 1,00; эмульгатор - 3,00; масло вазелиновое - до 100. Изобретение позволяет повысить терапевтическую эффективность лечения и сократить сроки браковки молока. 10 табл., 6 пр.

Препарат для лечения мастита у коров в период лактации, содержащий цефалоспорин, преднизолон и основу, отличающийся тем, что в качестве цефалоспорина используют цефтиофура гидрохлорид, в качестве основы - эмульгатор, моноглицериды дистиллированные и масло вазелиновое, и дополнительно содержит марбофлоксацин при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Марбофлоксацин 3,20-4,80 Цефтиофура гидрохлорид 1,80-2,70 Преднизолон 0,32-0,48 Моноглицериды дистиллированные 1,00 Эмульгатор 3,00 Масло вазелиновое до 100